專利名稱：補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及補(bǔ)骨脂中有效成分補(bǔ)骨脂 素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法。
背景技術(shù)：
補(bǔ)骨脂是常用中藥，在《本草圖經(jīng)》、《本草綱目》中都有收載。補(bǔ)骨脂
為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的果實(shí)，性味辛，苦，溫，歸 腎、脾經(jīng)。具有溫腎助陽(yáng)、納氣、止瀉的功效。歷代中醫(yī)常用于治腎虛，冷 灣，遺尿，滑精，小便頻數(shù)，陽(yáng)痿，腰膝冷痛，虛寒喘嗽，外治用于皮膚病、 白癲風(fēng)、禿發(fā)等?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2005年版一部對(duì)補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素 和異補(bǔ)骨脂素的總量限度作出明確規(guī)定，補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的 總量不得少0. 70%。
補(bǔ)骨脂具有多重藥理活性。體外實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)骨脂對(duì)分離破骨細(xì)胞有抑 制作用。它能抑制分離破故細(xì)胞在骨片上形成的吸收陷窩的增加與擴(kuò)張。補(bǔ) 骨脂對(duì)新生大鼠成骨細(xì)胞的增殖有顯著促進(jìn)作用，補(bǔ)骨脂抗骨質(zhì)疏松的作用 與其增加成骨細(xì)胞的數(shù)量和促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖能力有關(guān)。補(bǔ)骨脂還具有增強(qiáng) 免疫功能和擴(kuò)冠作用
補(bǔ)骨脂的藥理活性己被認(rèn)識(shí)?，F(xiàn)在臨床中以補(bǔ)骨脂為原料制成制劑的使 用已經(jīng)很普遍如益腎康脈膠囊，宮炎平片等。根據(jù)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的 理化性質(zhì)，采甩化學(xué)的提取純化技術(shù)對(duì)上述兩種成分進(jìn)行有效的提取和純化， 制備具有一定純度的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素為制藥提供原料。
劉志林等2005年在《第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》中介紹了補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂 素的提純方法。將補(bǔ)骨脂種子(未炮制過(guò))碾碎，過(guò)100目篩，取該粉末300g用 50X乙醇室溫浸漬泡4次(lx900ml、 3X450 ml各浸泡2 h)，過(guò)濾合并得到濾液2200ml濾液在水浴加熱中減壓濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味，得到840 ml混懸
液。將其置于冰箱過(guò)夜，待其分層，得補(bǔ)骨脂水溶部位和黑色粘稠部位；用
濾布吊濾.得呈棕色樹脂狀浸膏8. 5 g。將浸膏置于100ml圓底燒瓶中，用浸
膏85ml甲醇熱溶，再加浸膏重1%活性炭回流15 min;趁熱抽濾，濾液在IOO
'C油浴中蒸去甲醇后，放置過(guò)夜等待析出沉淀。加入IO ml冰箱預(yù)冷甲醇稀釋
并迅速抽濾，沉淀用少許甲醇洗滌，得淡黃白色片狀晶體粗品，8(TC干燥，
得粗品O. 44 g。加甲醇15 ml，加熱回流使粗品溶解，然后加入O. 05 g活性
炭脫色，回流10min;趁熱抽濾，放置冷卻析晶，再過(guò)濾，得白色針狀晶體；
8(TC干燥后重0. 36 g。母液在通風(fēng)櫥揮發(fā)至5 ml，冰箱放置析晶，又得結(jié)晶
0. 05 g，總計(jì)O. 41g。
上述方法雖然得到較純的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，但該方法需要用甲醇
作為溶劑進(jìn)行洗滌。甲醇是一種有毒溶劑，可造成對(duì)視神經(jīng)的損害，上述提
純工藝中幾次用到甲醇，在工業(yè)大生產(chǎn)中不能實(shí)際操作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方 法。該方法無(wú)需使用甲醇等有毒溶劑，且能獲得高純度的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨 脂素。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方 法是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:將補(bǔ)骨脂藥液通過(guò)大孔吸附樹脂柱吸附后，先 用濃度為20%-40%的乙醇洗脫雜質(zhì)，再用濃度為50%-70%的乙醇洗脫，收集乙 醇洗脫液，回收乙醇，將殘留物真空干燥，粉碎，制得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂 素富積物。
本發(fā)明所述補(bǔ)骨脂藥液為符合中國(guó)藥典質(zhì)量要求的補(bǔ)骨脂經(jīng)50%乙醇提 取三次，每次1小時(shí)，提取液減壓回收乙醇后，在20。C下濃縮至相對(duì)密度為 0.80-0. 98的藥液。本發(fā)明所述的大孔吸附樹脂為市售的大孔吸附樹脂。補(bǔ)骨脂藥液通過(guò)前
最好先用10-15倍量、pH為5-6的蒸餾水再生，攪拌洗滌時(shí)間為30-60分鐘。 本發(fā)明所使用的大孔吸附樹脂柱的徑柱比最好為1: 1.卜3.5，其中，層
析柱所使用的材料可以是玻璃、不銹鋼或玻璃鋼。 本發(fā)明所述的乙醇為藥用乙醇。
本發(fā)明中，補(bǔ)骨脂藥液通過(guò)樹脂柱，利用大孔樹脂的吸附作用將補(bǔ)骨脂 素和異補(bǔ)骨脂素提取吸附，再利用不同濃度乙醇對(duì)被吸附的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ) 骨脂素有不同的洗脫性能，將其洗脫下來(lái)，先利用低濃度的乙醇將其他與吸 附劑吸附性弱的雜質(zhì)洗脫下來(lái)；再用高濃度的乙醇將補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素 洗脫并富集。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的大孔吸附樹脂用后可以再生后反復(fù)使用；乙 醇溶液亦無(wú)污染和毒性，可以回收后再使用。用本發(fā)明純化方法獲得的補(bǔ)骨 脂素和異補(bǔ)骨脂素經(jīng)高效液相測(cè)試，按2005版中國(guó)藥典一部中129頁(yè)補(bǔ)骨脂 素和異補(bǔ)骨脂素的檢測(cè)方法，采用外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ) 骨脂素的總純度達(dá)到50%以上。另外，本發(fā)明的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素純化方 法，方便簡(jiǎn)便，純度達(dá)到藥用要求，無(wú)污染，對(duì)環(huán)境保護(hù)起到積極的作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
本發(fā)明下述實(shí)施例中所使用的補(bǔ)骨脂藥液為符合中國(guó)藥典質(zhì)量要求的補(bǔ) 骨脂經(jīng)50%乙醇提取三次，每次1小時(shí)，提取液采用減壓回收乙醇后，在20 。C下濃縮至相對(duì)密度為0. 80-0. 98的藥液。
另外，本發(fā)明下述實(shí)施例中，補(bǔ)骨脂藥液通過(guò)大孔吸附樹脂先用10-15 倍量、pH為5-6的蒸餾水再生，攪拌洗滌時(shí)間為30-60分鐘。
實(shí)施例1
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 20°C)，通過(guò)市售HPD600大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為1:丄.丄，J^h^i^ o勺、M、j，/力L還乂、j UUU/111丄I1. 川乙U—。(j 'i百/1可月曰J頁(yè)里的」U%— 30%乙@早
先洗脫雜質(zhì)。再用6-8倍樹脂質(zhì)量的50%-60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集50%-60% 洗脫液?；厥找掖己鬂饪s，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。 經(jīng)高效液相測(cè)試，通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為 56. 5%。
實(shí)施例2
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 20°C)，通過(guò)市售AB-8大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為l: 2，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用30-40倍樹脂質(zhì)量的30%乙醇先洗脫 雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液。回收乙醇 后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試， 通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為57. 8%。
實(shí)施例3
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 2(TC)，通過(guò)市售D-101大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為l: 1.5，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用30倍樹脂質(zhì)量的40%乙醇先洗脫 雜質(zhì)。再用8倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥找掖?后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試， 通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為52. 1%。
實(shí)施例4
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 2(TC)，通過(guò)市售ADK-17大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為1: 3，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用30倍樹脂質(zhì)量的40%乙醇先洗脫雜 質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的70%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥找掖己?濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試，通 過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為58. 1%。實(shí)施例5
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 2CTC)，通過(guò)市售HPD-100 大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比 為l: 3.5，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用40倍樹脂質(zhì)量的40%乙醇先 洗脫雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥?乙醇后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè) 試，通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為52. 1%。
實(shí)施例6
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 20°C)，通過(guò)市售HPD-100 大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比 為l: 2.8，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用25倍樹脂質(zhì)量的40%乙醇先 洗脫雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥?乙醇后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè) 試，通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為60. 1%。
實(shí)施例7
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 2CTC)，通過(guò)市售HPD-600 大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比 為l: 3.2，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用30倍樹脂質(zhì)量的25%乙醇先 洗脫雜質(zhì)。再用8倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥?乙醇后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè) 試，通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為56. 1%。
實(shí)施例8
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 20°C)，通過(guò)市售AB-8大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為l: 1.8，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用30倍樹脂質(zhì)量的40%乙醇先洗脫 雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的60%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集60%洗脫液?；厥找掖己鬂饪s，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試， 通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量大于50%。 實(shí)施例9
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g， 2CTC)，通過(guò)市售D-101大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為l: 3. 5，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用35倍樹脂質(zhì)量的45%乙醇先洗脫 雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的50%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集50%洗脫液?；厥找掖?后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試， 通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為54. 4%。
實(shí)施例10
取上述相對(duì)密度為0.80-0.98的藥液用蒸餾水稀釋(每毫升藥液含生藥 量為0.01g, 2CTC)，通過(guò)市售ADK-17大孔吸附樹脂，裝入樹脂后徑柱比為1: 3，預(yù)吸附3小時(shí)，流速為6ml/min.用40-50倍樹脂質(zhì)量的30%乙醇先洗脫 雜質(zhì)。再用7倍樹脂質(zhì)量的65%乙醇洗脫雜質(zhì)。收集65%洗脫液?；厥找掖?后濃縮，真空干燥即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的富積物。經(jīng)高效液相測(cè)試， 通過(guò)外標(biāo)一點(diǎn)法測(cè)試，補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量為55. 6%。
權(quán)利要求
1、一種補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法，其特征是，將補(bǔ)骨脂藥液通過(guò)大孔吸附樹脂柱吸附后，先用濃度為20％-40％的乙醇洗脫雜質(zhì)，再用濃度為50％-70％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，將殘留物真空干燥，粉碎，制得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素富積物。
2、 如權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法，其特征在于， 補(bǔ)骨脂藥液為符合中國(guó)藥典質(zhì)量要求的補(bǔ)骨脂經(jīng)50%乙醇提取三次，每次1小 時(shí)，提取液減壓回收乙醇后，在2CTC下濃縮至相對(duì)密度為0. 80-0. 98的藥液。
3、 如權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素純化方法，其特征在于， 大孑L吸附樹月旨為HPD國(guó)600、 AB—8、 HPDIOO、 D101或ADK—17。
4、 如權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法，其特征在于， 大孔吸附樹脂用10-15倍量、pH為5-6的蒸餾水再生，攪拌洗滌時(shí)間為30-60 分鐘。
5、 如權(quán)利要求1所述的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法，其特征在于， 大孔吸附樹脂柱的徑高比為1: 1. 1-3. 5。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥提取純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及補(bǔ)骨脂中有效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的純化方法。該方法將補(bǔ)骨脂提取物通過(guò)大孔吸附樹脂吸附后，先用低濃度乙醇洗脫雜質(zhì)，再用的高濃度乙醇洗脫，收集高濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，粉碎即得補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素富積物。采用本發(fā)明純化獲得的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的總純度達(dá)到50％以上，可適用于工業(yè)大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/487GK101531665SQ200810043168
公開日2009年9月16日 申請(qǐng)日期2008年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月11日
發(fā)明者劉新華, 寧 張, 江雪芹, 王擁軍, 楊 韓 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)