專利名稱：：多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥劑學(xué)領(lǐng)域，具體涉及含有抗腫瘤活性成分多西他賽的長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：多西他賽(DOCETAXEL)商品名為泰素帝，為紫杉類藥物，通過促進微管雙聚體裝配成微管，同時通過防止去多聚化過程而使微管穩(wěn)定，阻滯細(xì)胞于G2和M期，從而抑制癌細(xì)胞的有絲分裂和增殖。多西他賽的藥理作用比紫杉醇強，在細(xì)胞內(nèi)濃度比紫杉醇高3倍，并在細(xì)胞內(nèi)滯留時間長，其對微管親和力是紫杉醇的2倍；作為微管穩(wěn)定劑和裝配促進劑，活性比紫杉醇大2倍；作為微管解聚抑制劑，活性比紫杉醇大2倍。在體外抗瘤活性試驗中，已證實多西他賽的抗瘤活性是紫杉醇的1.3-12倍。對晚期乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、頭頸部癌、胃癌等均有效。由于多西他賽水溶性差，目前市售的多西他賽注射劑(40g七")是采用吐溫-80(tween-80)作溶劑，同時配有含13。/o(cp)乙醇的稀釋液。由于吐溫-80具有溶血性，用于靜脈內(nèi)注射，會引起過敏反應(yīng)，包括休克、呼吸困難、4氐血壓、血管性水腫、風(fēng)瘆等過敏樣反應(yīng)癥狀，這些不良反應(yīng)在人的臨床實驗可以十分嚴(yán)重，且有死亡報道。故臨床用藥常規(guī)實施預(yù)處理從多西他賽治療前l(fā)天開始口服地塞米松8mg,每天2次，連服3~5天，用多西他賽前30~60分鐘肌注苯海拉明40mg、靜注西咪替丁300mg。一些病人(2.2%)盡管在藥物預(yù)防之后，仍然會過敏。5%的病人會因為過敏而不得不停止使用泰素帝，6.5%的病人會產(chǎn)生過敏水腫。為了提醒醫(yī)生和病人該藥的毒副反應(yīng)的嚴(yán)重性，在美國泰素帝的藥物產(chǎn)品說明書中有對該產(chǎn)品的過敏休克副反應(yīng)加有嚴(yán)重警告術(shù)語。另外，吐溫-80粘性大，給臨床用藥帶來不便。另外，多西他賽自身有骨髓抑制、白血球減少、血小板減少等毒性，因此，迫切需要改變多西他賽的劑型，以增加多西他賽的水溶性，避免由于溶媒吐溫-80引起的過敏反應(yīng)和多西他賽自身的毒副作用。為避免因吐溫-80及多西他賽自身帶來的不良反應(yīng)，提高多西他賽的抗腫瘤效果，國內(nèi)外學(xué)者現(xiàn)已對之做了多種嘗試，其中包括對多西他賽的衍生物及制劑進行廣泛研究。中國專利文獻CN1283643將聚乙二醇與多西他賽鍵接起來構(gòu)成多西他賽的前藥，增加了多西他賽的水溶性；中國專利文獻CN1421201公開了采用透明質(zhì)酸、葡萄糖或甘露醇、乙醇、丙二醇、非離子表面活性劑制備了多西他賽的注射劑；中國專利文獻CN101019832將多西他賽包裹于脂肪乳粒中，該制劑安全性高、穩(wěn)定性和療效均較好；中國專利文獻CN10106629公開了多西他賽固體脂質(zhì)納米粒，該制劑有效抑制了藥物的降解，增加了藥物的穩(wěn)定性，提高療效；中國專利文獻CN101011376將多西他賽溶于油中，再加入乳化劑、助乳化劑制成多西他賽自乳化膠嚢，該制劑穩(wěn)定性好、口服生物利用度高；中國專利文獻CN1965820公開了一種高栽藥量的多西他賽脂微球制劑，具有高包封率、穩(wěn)定性好、毒性小等特點，保證了臨床用藥的安全性；中國專利文獻CN1868459利用乙醇、吐溫-80、甘油、聚乙二醇400、丙二醇等輔料制備了多西他賽凍干粉針，增加了穩(wěn)定性；中國專利文獻CN101002761通過在處方中加入抗氧劑改善了多西他賽注射液的穩(wěn)定性；中國專利文獻CN1660073利用生物可降解聚合物制備多西他賽納米粒，具有療效好、毒副作用低等優(yōu)點；中國專利文獻CN1823732公開了一種多西他賽自組裝前體脂質(zhì)體，該制劑臨用前加入水合介質(zhì)可形成粒7徑均勻、包封率高的脂質(zhì)體制劑；中國專利文獻CN1846692以磷脂、膽固醇為膜材，用長循環(huán)輔料進行表面修飾制備多西他賽長循環(huán)脂質(zhì)體，顯著提高了多西他賽在體內(nèi)循環(huán)時間及藥效；中國專利文獻CN1931369利用環(huán)糊精對多西他賽進行包合，提高了多西他賽的溶解度；MariaLauraImmordino等人采用卵磷脂、磷脂甘油、膽固醇作膜材將多西他賽制備成穩(wěn)定而毒性低的脂質(zhì)體，既保持了多西他賽的抗腫瘤效果，又降低了毒性(控制釋放雜志(J.Control.Release)91(3).417-429.2003);據(jù)報道，以橄欖油作載體攜帶的多西他賽微滴經(jīng)纖維蛋白原包裹后，提高了多西他賽的抗肺瘤活性(cancerresearch.2003.63(21).7314-7320)。LeGarrecD等利用兩親性聚合物如PVP-PLA在水中可自發(fā)行成聚合物膠束的原理，制備了多西他賽-聚合物膠束，此膠束對多西他賽具有極好的增溶效果，體外抗肺瘤效果與市售制劑均等，但不良反應(yīng)少于市售制劑(控制釋放雜志(J.Control.Release.2004.99(1)83-101)。盡管對多西他賽的衍生物及制劑的研究取得了明顯的進展。但大都尚不符合用藥的安全性和工業(yè)化生產(chǎn)的要求，至今未見上臨床、上市的報道。本專利申請在目前條件下成功地解決了這方面地問題。固體脂質(zhì)納米粒是近年來實驗研究的一種新型納米級給藥系統(tǒng)，以天然或合成的類脂如磷脂等為栽體，將疏水性藥物包裹于類脂核中制成粒徑約10-1000nm的膠體給藥體系。由于其納米級的特性，因此它不同于普通的混懸性注射劑，兼具下述脂質(zhì)體、乳劑以及高分子聚合物納米粒的優(yōu)點(l)使用的脂質(zhì)毒性低，生物相容性高，在體內(nèi)可降解，不會產(chǎn)生蓄積；(2)藥物包裹于類脂核中使固體脂質(zhì)納米粒具有控釋、避免藥物降解及泄漏、良好的靶向性等優(yōu)點；另外，固體脂質(zhì)納米?？刹捎酶邏壕|(zhì)法或微乳法進行工業(yè)化生產(chǎn)；其水分散系統(tǒng)可以經(jīng)高壓滅菌或輻射滅菌，具有長期的物理化學(xué)穩(wěn)定性，也可通過凍干或噴霧干燥制成固體制劑。目前，已有喜樹堿、齊多夫定脂化物等藥物作模型藥物被研制成固體脂質(zhì)納米粒，研究表明，這些藥物的固體脂質(zhì)納米粒制劑具有控釋、長效、靶向等特性。傳統(tǒng)固體脂質(zhì)納米粒在血液中蛋白、調(diào)理素的作用下，易發(fā)生破裂及藥物滲漏，易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞吞噔而迅速在血液循環(huán)中清除，藥物在體內(nèi)滯留時間短。在傳統(tǒng)固體脂質(zhì)納米粒的基礎(chǔ)上，加入聚乙二醇衍生化的材料進行修飾制得長循環(huán)或隱形固體脂質(zhì)納米粒。長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒表面暴露的親水基團所產(chǎn)生的空間位阻，可以減少與血漿中調(diào)理成分的結(jié)合，避免了被巨噬細(xì)胞攝取，顯著延長了其在血液中的循環(huán)時間，從而增加了被包裹藥物向病變部位的蓄積，提高了藥物的療效。因此，將長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒作為藥物載體，結(jié)合多西他賽研制一種含有多西他賽的長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，具有重要的意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的在于提供一種性質(zhì)穩(wěn)定且可采用現(xiàn)有技術(shù)工業(yè)化生產(chǎn)的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，該制劑增加了多西他賽的水溶性和穩(wěn)定性，消除現(xiàn)有制劑的過敏反應(yīng)，并可避免網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞喧，從而達到對腫瘤部位被動靶向、提高生物利用度及治療指數(shù)、降低毒性的目的；本發(fā)明的另一目的是提供上述多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，而且制備方法靈活多樣，均采用常規(guī)的工藝設(shè)備，可工業(yè)規(guī)模、高效率生產(chǎn)，產(chǎn)品質(zhì)量保持穩(wěn)定，可直接或二次加工制備注射或口服制劑。本發(fā)明的又一目的是提供一種多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的固體制劑，該固體制劑是上述多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒加入支架劑并采用冷凍干燥或噴霧干燥的工藝制成的。本發(fā)明的再一目的是提供一種多西他賽注射劑或口服制劑，其是由上述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒制備而成的。本發(fā)明的特點在于運用PEG化的輔料來修飾固體脂質(zhì)納米粒，一方面可以解決普通固體脂質(zhì)納米粒穩(wěn)定性差、藥物易泄漏等問題，另一方面可以使納米粒表面被PEG修飾，形成一種立體穩(wěn)定的構(gòu)象云，阻止血液中血漿蛋白的吸附和調(diào)理素的識別，減少納米粒被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)吞噬，從而減慢納米粒的清除速度，延長其在血液中的駐留時間，有利于其進入腫瘤組織，增強對腫瘤部位的滲透和滯留作用(EPR效應(yīng))，從而達到胂瘤耙向和增效減毒作用。本發(fā)明的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒由包含以下重量份的原料制備而成多西他賽1份脂質(zhì)材料4-80份長循環(huán)輔料0.1-40份乳化劑0.1-60份。優(yōu)選地，本發(fā)明的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒由包含以下重量份的原料制備而成多西他賽1份脂質(zhì)材料10-50份長循環(huán)輔料0.5-20份乳化劑l-30f分。所述的脂質(zhì)材料為十八醇、甘油脂、磷脂、脂肪酸、類固醇、蠟脂或其混合物，其中所述的甘油脂為單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、雙棕櫚酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、單山崳酸甘油酯、雙山崳酸甘油酯、三山崳酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油脂、三辛酸/癸酸甘油酯或其混合物；所述的磷脂為磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、卯磷脂、氳化卵磷脂或其混合物；所述的脂肪酸為硬脂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、山崳酸、辛酸、癸酸或其混合物；所述的類固醇為膽固醇；所述的蠟脂為鯨蠟醇棕櫚酸酯、鯨蠟醇十六酸酯、微晶石蠟或其混合物。所述的長循環(huán)輔料為聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-磷脂酰甘油、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚己內(nèi)酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯或其混合物，其中，聚乙二醇分子量為200-20000,優(yōu)選分子量為1000-5000。上述長循環(huán)輔料共同特征是一端為親水性的聚乙二醇，由于PEG具有較好的親水性和柔韌性，目前被證實是最佳的表面修飾材料；另一端則為親油的疏水端，可以很好的與脂質(zhì)材料將藥物包裹形成長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。所述的乳化劑為膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、短鏈醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯脂肪酸酯或其混合物。其中膽酸鹽為膽酸鈉、甘膽酸鈉、牛磺膽酸鈉或其混合物；脫氧膽酸鹽為脫氧膽酸鈉、脫氧?；悄懰徕c或其混合物；短鏈醇為甘油、丙二醇或其混合物；泊洛沙姆為Poloxamer-108、Poloxamer-188或其混合物；聚山梨醇酯為吐溫-80;聚氧乙烯脂肪醇醚為Brij78，Brij35、Brij30或其混合物；聚氧乙烯脂肪酸酯為Myrj53、Myrj59或其混合物。所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的粒徑小于1000nm，優(yōu)選粒徑小于500nm,包封率大于80%。本發(fā)明提供多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的制備方法。該制備方法可以使用以下幾種方法中的任意一種方法一乳化-沉淀法制備，稱取配方量的多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑溶于有機溶劑得有機相；稱取水溶性乳化劑溶于水中得水相；有機相和水相分別加熱至相同溫度，攪拌下將有機相和水相混合，然后減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，然后進行超聲或高壓均質(zhì)處理，即可得到長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒?；蚍椒ǘ榛瘬]發(fā)-低溫固化法制備，即將多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑按比例溶于有機溶劑得有機相；稱取水溶性乳化劑溶于水中得水相；有機相和水相分別加熱至相同溫度，攪拌下將有機相和水相混合，減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，并使體系濃縮，將濃縮液迅速混于2-50倍體積的0-4。C低溫水中，攪拌降溫，然后可進行超聲或高壓均質(zhì)處理得到多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。或方法三薄膜-分散法制備，稱取配方量的多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑溶于一定量的有機溶劑中，在20-6(TC水浴中減壓蒸干成膜，加入一定量含水溶性乳化劑的水溶液，超聲或高壓均質(zhì)處理即得到多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。或方法四熱熔分散法制備，稱取配方量多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑在60-卯。C下加熱至熔融，作為油相。將水溶性乳化劑溶于水中加熱至相同溫度作為水相。在攪拌下將油相、水相混合，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，即可制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。上述制備方法中，方法一和方法二中所述的有機相和水相的相同溫度在20-80。C之間，優(yōu)選相同溫度在30-60。C之間；所述的有機溶劑為氯仿、乙醚、乙醇、曱醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或其混合溶劑；為減小長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的粒徑，可采用超聲或高壓均質(zhì)工藝。其中，超聲功率為100-1000W,超聲時間為10-40min;高壓均質(zhì)壓力為10000-25000psi，高壓均質(zhì)次數(shù)為3次-10次。為延長多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的存放時間，便于運輸，可將本發(fā)明的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒通過噴霧干燥或冷凍干燥工藝制成固體制劑；為防止干燥工藝中長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的聚集需加入支架劑，可以選擇的支架劑為氨基酸、麥芽糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖或其混合物，其用量為1-40%(w/v)。本發(fā)明以脂質(zhì)材料為載體材料，并以長循環(huán)輔料進行表面修飾，采用多種制備方法，使多西他賽包載于長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒中。所得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒粒徑小(<1000nm),包封率高(〉80%),穩(wěn)定性佳，且可以以注射或口服方式給藥，其中注射方式可以為靜脈輸注、靜脈注射，優(yōu)選靜脈輸注方式給予患者。本發(fā)明的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒以及由其制備成的固體制劑具有以下優(yōu)點1、與多西他賽注射液相比，該長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒消除了過敏反應(yīng)，提高了多西他賽的水溶性和穩(wěn)定性，降低了毒性，保證了用藥的安全性，提高了機體耐受性。2、與多西他賽乳劑、脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米粒相比，本發(fā)明的制劑通過PEG對固體脂質(zhì)納米粒進行表面修飾，有助于避免體內(nèi)內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)的吞噬，延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間，使藥物更有效地靶向于腫瘤部位，從而提高藥物的生物利用度及其治療指數(shù)。3、該長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?？山?jīng)冷凍干燥和噴霧干燥制成固體產(chǎn)品，保證制品在貯藏及運輸過程中的穩(wěn)定性，延長了產(chǎn)品的有效期，提13高了藥品的質(zhì)量。4、該長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒制備工藝成熟，方法簡便易行，材料來源廣，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，便于工業(yè)化生產(chǎn)。圖1為本發(fā)明多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的體外釋藥曲線圖。具體實施例方式下面再以實施例對本發(fā)明作進一步說明，給出本發(fā)明的實施細(xì)節(jié)。實施例1:稱取100mg多西他賽、800mg硬脂酸、400mg卵褲脂、100mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2(K)(rDSPE)溶于20ml的二氯曱烷中，在50。C下減壓蒸干，形成脂質(zhì)膜，加入25ml的吐溫-80(0.5%)，超聲分散30min(超聲功率600W),即得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?，2°C保存?zhèn)溆谩Ｆ淦骄綖?45nm，90。/。粒子均在500nm以下，粒徑分布狹窄，表明長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒大小較為均一。實施例2:稱取100mg多西他賽、2000mg大豆磷脂、200mg氫化卵磷脂、400mg聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEGsooo-DPPE)加入50ml具塞錐形瓶中，加1Oml乙醇:丙酮(1:10)混合溶劑，超聲使其充分溶解并加熱至75。C,構(gòu)成有機相。另取150mgPoloxamer-188溶于30ml重蒸水中，構(gòu)成水相。用注射器將有機相緩慢注入1000r/min攪拌的75。C水相中，繼續(xù)攪拌至形成半透明體系。40。C下減壓蒸發(fā)除去有機溶劑并使體系濃縮至25ml，降至室溫，得到長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例3:取100mg多西他賽、1000mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿、100mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、100mg聚乙二醇(分子量為3350)-聚己內(nèi)酯溶解于氯仿14曱醇(v/v，1:1)10ml，超聲溶解并加熱至(50±2)。C構(gòu)成有機相。另取200mgMyrj53加入30ml雙蒸水中，超聲使其充分溶解，構(gòu)成水相。將有機相緩慢注入1000r/min攪拌的(50±2)°(:的恒溫水相中形成初乳，繼續(xù)攪拌約23h，使有機溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮至約5ml。將所得的半透明乳劑快速混于另一0~2。C的1000r/mm攪拌的20ml冰水中，繼續(xù)攪拌2小時，然后于高壓均質(zhì)機中乳勻5次(均質(zhì)壓力為15000psi)，即得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例4取100mg多西他賽、1000mg二月桂酰磷脂酰膽石成、120mg二硬脂酰磷脂酰甘油、500mg聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG2oo(rPE)置于25ml梨形瓶中，于(60±2)。C的恒溫水浴上加熱使其充分熔融，構(gòu)成油相；另取100mg膽酸鈉溶于10ml水中，水浴加熱至與有機相相同的溫度，構(gòu)成水相。將油相在1000r/min攪拌下注入7lc相中，攪拌4h,溫度保持在(60±2)。C,形成0/W型初乳。將所得乳劑在攪拌(1000r/min)下快速混于0-2。C15ml水中，繼續(xù)攪拌2h,然后于800W功率下超聲處理30min，即得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液。實施例5稱取100mg多西他賽、2000mg二油酰磷脂酰膽堿、100mg二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、1000mg聚乙二醇(分子量為5000)-聚乙交酯丙交酯混合均勻，85。C加熱使熔融，作為油相。將250mg脫氧膽酸鈉、500mg甘油加注射用水25ml，攪拌溶解，迅速加熱到85。C作為水相。在攪拌下將水相趁熱滴加到同溫度油相中，20000ipm下高速攪拌30min后改用超聲分散，室溫，功率600W，超聲對間10min，即制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液。實施例615稱取100mg多西他賽、200mg二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、1000mg二月桂酰磷脂酰膽堿、200mg聚乙二醇(分子量為4000)-聚乳酸混合均勻，85。C加熱使熔融，作為油相。將500mg脫氧?；悄懰徕c、100mg丙二醇加注射用水25ml，攪拌溶解，迅速加熱到85。C作為水相。在攪拌下將水相趁熱滴加到同溫度油相中，繼續(xù)攪拌lh后，轉(zhuǎn)至高壓均質(zhì)機中，經(jīng)20000psi壓力乳勻IO次，即可制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例7精密稱取多西他賽100mg、二硬脂酰磷脂酰膽堿1300mg、磷脂酰甘油300mg、聚乙二醇-磷脂酰甘油(PEG2000-PG)300mg于1000ml圓底燒瓶中，加入50ml氯仿溶解，40。C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，在燒瓶壁上形成一層薄膜。加入0.5。/。甘膽酸鈉溶液25ml，600W功率下水浴超聲20min，即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。實施例8稱取多西他賽100mg、磷脂酰膽堿2000mg、磷脂酸200mg、聚乙二醇(分子量為2000)-聚十六烷基氰基丙烯酸酯400mg,在通氮氣條件下加熱至(80±5)。C熔融，然后在攪拌條件下加入相同溫度含2.5%甘油和0.5。/。?；悄懰徕c的水溶液25ml，制成粗乳；在(80±5)。C通氮氣條件下在高壓乳勾^L上25000psi壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。在4。C密封保存，供試驗用。實施例9稱取二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿lg、二油酰磷脂酰乙醇胺0.2g、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG4ooo-PE)0.5g和多西他賽0.1g加入10ml乙醚超聲使之溶解完全，然后在磁力攪拌下用6號針頭注入30ml2.5%Brij78溶液中。2000rpm攪拌30min后，轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，40。C旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，加入山梨醇3g、甘氨酸3g經(jīng)超聲處理(超聲功率600W)20min,藥液于噴霧干燥^U中干燥，噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度12(TC,進料速度50ml/min，旋風(fēng)分離器壓差50mm水，霧化盤轉(zhuǎn)速2500r/min,收集得到多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒噴霧干燥制劑。實施例IO精密稱取Poloxamer-1080.25g、甘油0.5g，在高速》茲力攪拌條件下，加入到已加熱至(60±5)。C的25ml蒸餾水中，待完全溶解作為水相；另稱磷脂酰絲氨酸0.1g、大豆磷脂5g、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG柳q-DSPE)0.2g、多西他賽0.1g加熱熔融作為油相；將油相緩'f曼滴加至水相中，高速剪切(Fluko,12000rpm)5min，制成0/W型乳劑后，改用水浴式超聲儀超聲分散(室溫，功率600W，超聲時間20min)，即得乳光明顯的澄明的長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液。加入2.5g甘露醇、1.25g葡萄糖、1.25g海藻糖超聲溶解，于-40。C預(yù)凍6h后，以腸40。C，8h;-30°C,8h;-20°C，8h;-10°C,6h;10°C,8h的程序冷凍干燥，即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒凍千制劑。實施例ll精密稱取蛋黃卵磷脂1000mg、二棕櫚酰磷脂酰甘油100mg、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEGsooo-DSPE)300mg、多西他賽60mg，加入乙酸乙脂10ml，超聲使完全溶解。將所得的混合物溶液加入到含1%Brij35溶液15ml中，高速攪拌(20000rpm)5min，得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。加入1500mg乳糖、750mg甘露醇、750mg海藻糖超聲溶解后，于微型噴霧干燥器中噴霧干燥(進口溫度130-140。C，出口溫度50-60°C,空氣壓力1.2Atm，加料速度60ml/min),即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒噴霧干燥制劑。實施例12取多西他賽100mg、氫化卵磷脂4000mg、二棕櫚酰璘脂酸200mg和曱醇:丙酮(1:1)20ml加入25ml梨形瓶中，超聲使其充分溶解，加入200mg聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEG2oocrDPPE)，微熱使溶成有機相。另取500mgMrij59溶于水25ml中構(gòu)成水相。將有機相在(1000r/min)攪拌下注入(75±2)i:的水相中，繼續(xù)攪拌4h,使有機溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮至約5ml。將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速混于另一0~2。C的20ml水中，繼續(xù)攪拌2h，即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。該混懸液加入2500mg阿拉伯膠、1250mg麥芽糖、1250mg甘露醇、2500mg蔗糖超聲溶解后，于-40。C預(yù)凍6小時，于冷凍干燥4兒中凍千，凍干程序為-40。C，8小時；-30°C，6小時；-20°C,6小時；-l(TC,5小時；0°C，5小時；15°C，5小時。實施例13稱取多西他賽100mg、大豆磷脂3000mg、磷脂酰肌醇100mg、聚乙二醇—磷脂酰乙醇胺(PEG2QG(rPE)200mg,在通氮氣條件下加熱至(80±5)。C，然后在攪拌條件下加入相同溫度含2.5%甘油和0.5°/。吐溫-80的水溶液25ml,制成粗乳；在(80±5)。C通氮氣條件下在高壓乳勻沖幾(Avestin，C5)上15000psi壓力下乳勻5次，形成長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。該混懸液加入1250mg木糖醇、1250mg果糖、2500mg甘露醇于-40。C預(yù)凍IO小時，于冷凍千燥機(labconco)中凍干(凍干程序為-40。C，IO小時;-20°C,8小時；0°C，8小時；20°C，5小時)，即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒凍干制劑。實施例14稱取100mg多西他賽、800mg單硬脂酸甘油酯、400mg大豆磷脂、200mg聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG2,-PE)加入50ml具塞錐形瓶中，18加10ml乙醇:丙酮(1:1)混合溶劑，超聲使其充分溶解并加熱至75。C，構(gòu)成有機相。另取150mgPoloxamer-188溶于30ml重蒸水中，構(gòu)成水相。用注射器將有機相緩慢注入1000r/min攪拌的75。C水相中，繼續(xù)攪拌至形成半透明體系。40。C下減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，降至室溫，得到長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例15取100mg多西他賽、2000mg三棕櫚酸甘油酯、600mg十八醇、800mg卯磷脂、200mg聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(PEG2,-DPPE)溶解于乙醇10ml，超聲溶解并加熱至(80士2)。C構(gòu)成有機相。另取120mgMyrj53加入30ml雙蒸水中，超聲使其充分溶解，構(gòu)成水相。將有機相緩慢注入1000r/min攪拌的(80±2)。C的恒溫水相中形成初乳，繼續(xù)攪拌約23h，使有機溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮至約5ml。將所得的半透明乳劑快速混于另一0-2。C的1000r/min攪拌的20ml冰水中，繼續(xù)攪拌2小時，然后于高壓均質(zhì)機中乳勻5次(均質(zhì)壓力為15000psi)，即得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例16取100mg多西他賽、1000mg山脊酸、200mg膽固醇、200mg氫化磷脂、200mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEGsooo-DSPE)置于25ml梨形瓶中，于(75±2)。C的恒溫水浴上加熱使其充分熔融，構(gòu)成油相；另取400mg膽酸鈉溶于10ml水中，水浴加熱至與有機相相同的溫度，構(gòu)成水相。將油相在1000r/min攪拌下注入水相中，攪拌4h,溫度保持在(75±2)。C,形成0/W型初乳。將所得乳劑在攪拌(1000r/min)下快速混于O~2°C15ml水中，繼續(xù)攪拌2h,然后于800W功率下超聲處理30min,即得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙骸?9實施例17稱取100mg多西他賽、1000mg三月桂酸甘油酯、500mg大豆磷脂、200mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG4,-DSPE)混合均勻，85。C加熱使熔融，作為油相。將300mg脫氧膽酸鈉、500mg甘油加注射用水25ml，攪拌溶解，迅速加熱到85。C作為水相。在攪拌下將水相趁熱滴加到同溫度油相中，20000rpm下高速攪拌30min后改用超聲分散，室溫，功率600W,超聲時間10min，即制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?。實施例18稱取100mg多西他賽、2000mg三肉豆蔻酸甘油酯、200mg二油酰磷脂酰膽堿、100mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2,-DSPE)混合均勻，85。C加熱〗吏熔融，作為油相。將500mg脫氧牛石黃膽酸鈉、1000mg丙二醇加注射用水25ml，攪拌溶解，迅速加熱到85。C作為水相。在攪拌下將水相趁熱滴加到同溫度油相中，繼續(xù)攪拌lh后，轉(zhuǎn)至高壓均質(zhì)機中，經(jīng)20000psi壓力乳勻IO次，即可制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙骸嵤├?9精密稱取多西他賽100mg、雙山崳酸甘油酯1200mg、200mg氫化卵磷脂、200mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG柳(rDSPE)于1000ml圓底燒瓶中，加入50ml氯仿溶解，40。C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，在燒瓶壁上形成一層薄膜。加入0.5。/。甘膽酸鈉溶液25m1,600W功率下水浴超聲20min,即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒。實施例20稱取多西他賽100mg、三油酸甘油酯2000mg、鯨蠟醇十六酸酯500mg、200mg氫化卵磷脂、200mg聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2,-DSPE),在通氮氣條件下加熱至(80±5)。C熔融，然后在攪拌條件下加入相同溫度含2.5%甘油和0.5%牛磺膽酸鈉的水溶液25ml，制成粗乳；在(80±5)。C通氮氣條件下在高壓乳勻機上25000psi壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液。在4。C密封保存，供試驗用。實施例21稱取聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)200mg、二油酰磷脂酰乙醇胺500mg、棕櫚酸1000mg和多西他賽100mg加入10ml乙醚超聲使之溶解完全，然后在磁力攪拌下用6號針頭注入25ml2.5%Brij78溶液中。2000rpm攪拌30min后，轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，40。C旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，直至形成乳白色懸濁液，加入山梨醇2g、甘氨酸2g經(jīng)超聲處理(超聲功率600W)20min，藥液于噴霧干燥機中千燥，噴霧干燥條件為進風(fēng)溫度120。C，進料速度50ml/min,旋風(fēng)分離器壓差50mm水，霧化盤轉(zhuǎn)速2500r/min，收集得到長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒噴霧干燥制劑。實施例22取實施例l中的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒測定包封率及載藥量。將多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙翰捎肧S-5中空纖維超濾器(截留平均分子量為10000)進行超濾，棄去初濾液5ml，將超濾液和長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙河脮醮既芙獠⑾♂屩翜y定濃度，采用高效液相色鐠測定包封率及載藥量。色譜條件色譜柱ODS-C18(4.6mmx250mm,5pm);流動相曱醇:水(體積比為76:24);流速1.0mL'min";檢測波長230nm;柱溫室溫；進樣量20|iL。結(jié)果見表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實施例23實施例2中多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒包封率測定包封率通過葡聚糖凝膠柱層析法測定。層析條件為Sephadex-G50柱(18cmx2cm),洗脫液為蒸餾水，流速lml/min，室溫下層析。移取長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙?.5ml上柱，以柱層析條件洗脫，每2ml收集l管，被包封藥物量采用高效液相色譜測定，采用下式計算包封率。包封率-(M包/M總)xl00%式中，M包表示被長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒包封的藥物量，M總表示長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒中的總含藥量。結(jié)果測得長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液的包封率為90.36%。實施例24實施例3中多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒理化性質(zhì)研究。1)形態(tài)學(xué)研究取少量長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙旱渭釉诟采w碳膜的銅網(wǎng)上，用2.0%磷鵠酸鈉溶液染色，在透射電鏡下觀察粒徑大小和形態(tài)并拍攝照片，可見其外觀為圓整的球形。2)粒徑和Zeta電位測定取長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙哼m量加水稀釋，用多功能Zeta電位粒度分析儀在632.8nm下測定粒徑、粒度分布及Zeta電位。結(jié)果測得樣品的平均粒徑為105.0nm;平均Zeta電位-26.91mV。3)包封率考察取長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙哼m量進行低溫超速離心(4°C,20000g，30min)，精密量取上清液lml，曱醇稀釋定容至10ml，用高效液相色譜法測定得多西他賽的峰面積為^游，同法將長循環(huán)固體脂質(zhì)納米?；鞈乙合♂尯鬁y得多西他賽的峰面積為爿總。包封率(％)=(1"游M總)xi00%結(jié)果測得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的包封率為91.20%。實施例25精密移取實施例4中多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒混懸液0.5ml，放入處理過的透析袋(截留分子量為12000)中，透析袋兩端夾緊至不滲漏；精密量取蒸餾水50ml，放入100ml燒杯中；將含藥液透析袋移入裝有釋放介質(zhì)的燒杯中，保持漏槽狀態(tài)，密封杯口；將燒杯置于恒溫振蕩器內(nèi)，設(shè)置溫度為37士0.5。C，水平振蕩頻率為100次/min，于0.5、1、2、4、6、8、12、24h取樣，分別將燒杯內(nèi)的釋放介質(zhì)全部取出，再加入50ml新的同種介質(zhì)繼續(xù)恒溫振蕩。將取出的釋放介質(zhì)溶液用高效液相測定多西他賽的濃度，計算藥物的釋放率，以累計釋放率和時間做出體外釋藥曲線。結(jié)果見圖l。從圖l中可觀察到多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒在24小時的累計釋放百分率僅31%，說明多西他賽在長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的包裹下藥劑學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，保證了納米粒在體內(nèi)循環(huán)時將所載藥物轉(zhuǎn)運至輩巴部位，故可以認(rèn)為多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒具有緩慢釋放效果，達到了設(shè)計要求。實施例26取實施例10中的凍干品適量，密封，于冰箱4。C放置，于0、1、3、6、9、12月對粒徑、包封率、含量等指標(biāo)進行測定，評價多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒凍干品的穩(wěn)定性。結(jié)果見表2。表2編號測定項目o個月l個月3個月6個月9個月12個月外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定平均粒徑(nm)1361381401431481521多分散指數(shù)0.0920.1280.1230.1330.1370.131包封率(％)89.5689.3488.8288.5688.3787.91含量(％)100.88100.84100.78100.74跳64100.50外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定平均粒徑(nm)1421451481521571602多分散指數(shù)0.0950.1210.1280.1270.1300.135包封率(％)89.6189.4188.9488.8688.6988.10含量(％)101.02100.88100.78100.65100.61100.54外觀色澤符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定平均粒徑(nm)1311351361381451503多分散指數(shù)0扁0.1200.1330.1220.1320.135包封率(％)88.6688.5787.5487.4087.2586.49含量(％)100.74100.65100.60100.41100.2199.04表2說明，多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒凍千品在水箱4。C放置12個月，其粒徑、包封率、含量等質(zhì)量指標(biāo)基本不變，表明多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒凍干制劑穩(wěn)定性良好。實施例27取上述實施例中的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒制劑進行刺激性實驗。(1)對家兔耳緣靜脈血管刺激試驗將多西他賽注射液的兩種不同劑型按臨床用藥量進行體表面積換算得出實驗兔用劑量。實驗前按lml/kg的給藥量用無菌生理鹽水注射液新鮮配制。選用體重2.5-3.0kg的健康新西蘭白兔6只，雌雄兼有。注射部位用碟酊和乙醇消毒后，3只白兔于右耳耳緣靜脈注射多西他賽注射液，左耳注射相同體積無菌生理鹽水注射液作對照；另3只白兔于右耳耳緣靜脈注射多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，左耳注射相同體積無菌生理鹽水注射液作對照。每日一次，連續(xù)3天，末次給藥24小時后，由耳緣靜脈注入空氣處死白兔，肉眼觀察注射部位的反應(yīng)情況，并解剖兔耳血管及周圍組織作石蠟切片(注射部位下向心段lcm及5cm處)，染色，光鏡檢查。肉眼觀察注射部位反應(yīng)情況。結(jié)果見表3。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>結(jié)果，如表3所示，多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒血管刺激性明顯弱于多西他賽注射液。(2)肌肉刺激性試驗多西他賽注射液的劑量換算、藥物配制、新西蘭白兔的選擇同上(共4只，每種劑型2只)。剪去白兔兩側(cè)股四頭肌部位的兔毛，用石與酊和乙醇消毒后，分別在右側(cè)股四頭肌注射多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒和多西他賽注射液lml,左側(cè)股四頭肌注射等量無菌生理鹽水注射液作對照，注射48小時后，由耳緣靜脈注入空氣處死白兔，解剖股四頭肌，縱向切開，》見察注射部位肌肉組織的反應(yīng)情況，確定反應(yīng)級凄t。0級無變化l級輕度充血，其范圍在0.5cmxl.0cm以下2級中度充血，其范圍在0.5cmxl.0cm以上3級重度充血，伴有肌肉變性4級出現(xiàn)壞死，有褐色變性5級出現(xiàn)廣泛性壞死然后算出4塊股四頭肌反應(yīng)級數(shù)總和，如果股四頭肌反應(yīng)級數(shù)的最高值與最低值之差大于2，則應(yīng)另取2只白兔重新實驗。得到結(jié)果后，若四塊股四頭肌反應(yīng)級數(shù)總和小于IO,則認(rèn)為供試品的局部刺激性實驗符合規(guī)定。表4劑型序號右側(cè)股四頭肌左側(cè)股四頭肌長循環(huán)固體100脂質(zhì)納米粒200120多西他賽注射液220結(jié)果(見表4)表明，多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的肌肉刺激性明顯弱于多西他賽注射液。實施例28過敏試馬全給藥方法取適量多西他賽注射液用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，為樣品A;取自制多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒用生理鹽水稀釋一定倍數(shù)，為樣品B。取豚鼠12只，分成A、B兩組，分別供樣品A和B進行過敏性試驗用。每組豚鼠6只，體重250350g。隔天ip供試品0.5ml，連續(xù)3次。然后將A、B組豚鼠再分別平均分成A1、A2及B1、B2組，其中A1、Bl組于首次注射后的第14天由后腳掌外側(cè)靜脈注入供試品lml進行攻擊，觀察注射后動物有無用爪搔鼻、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、休克、死亡等反應(yīng)，A2、B2組于首次注射后的第21天同樣由后腳掌外側(cè)靜脈注入供試品并進行觀察。結(jié)果多西他賽注射液多次抓鼻、多次顫抖、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難，兩例動物出現(xiàn)大小便失禁；多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒豎毛、少數(shù)動物顫抖。根據(jù)豚鼠過敏反應(yīng)級數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表，對本試驗進行評定，反應(yīng)級數(shù)達2級以上(包括2級)時，可認(rèn)為該供試品過敏反應(yīng)試驗陽性。結(jié)果A組為3級，B組為l級。即A組(市售多西他賽注射液)可導(dǎo)致明顯的過敏反應(yīng)，為陽性，而B組(自制多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒)過敏試驗為陰性。實施例29溶血性實驗自新西蘭白兔的頸總動脈取血20ml，置于燒〗f瓦內(nèi)，用玻璃棒輕輕攪動數(shù)分鐘后，除去纖維蛋白，取出血液，加等量生理鹽水注射液，離心(1500rpm,10min)，除去上清液；沉淀的紅細(xì);!包再加生理鹽水注射液清洗。如此反復(fù)直到上清液透明，按紅細(xì)胞的容量用生理鹽水配成2%的混懸液。取干凈試管7支，分別編號，依次加入下表內(nèi)各液，第6管不加供試品作空白對照管，第7管用蒸餾水代替生理鹽水，搖勻，置于37。C水浴中，分別于0.5、1、2、3小時觀察是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生。結(jié)果見表5和表6。27表5<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>結(jié)果表明，多西他賽注射液和多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒都未見溶血發(fā)生，兩種劑型的溶血性實驗均合格。實施例30毒性實驗實驗方法取實施例11的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒噴霧千燥制劑，加水分散并稀釋成適當(dāng)濃度。將體重18-22g性別一致的昆明小鼠60只，隨機分成6組，每組10只，動物實驗前禁食4小時，自由飲水，分別尾靜脈注射多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒和多西他賽注射液，組間劑量按等比級數(shù)排列，比值1:0.8，給藥后連續(xù)觀察動物反應(yīng)并記錄IO天時間內(nèi)動物死亡數(shù)。將各劑量組動物死亡數(shù)按簡化幾率單位法計算出LD5q(95%置信限)值。多西他賽注射液LD50=105±31mg/kg多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒LD5o=240±28mg/kgLD5o的實驗結(jié)果表明，多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒與多西他賽注射液相比，毒性明顯降低。實施例31取實施例12的長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒固體制劑進行體外抑瘤活性實驗。采用瘞唑藍(lán)體外試驗法(MTT法)檢測多西他賽注射液、多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒和空白固體脂質(zhì)納米粒對膀胱癌細(xì)胞抹的生長抑制作用。采用EJ細(xì)胞，用含10o/。小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，以2.5xl0V孔的濃度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加10(Hil細(xì)胞懸液。培養(yǎng)24小時細(xì)胞貼壁生長后，分別加入不同濃度的多西他賽注射液、多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒、空白固體脂質(zhì)納米粒及空白和單培養(yǎng)液對照(藥物濃度分別為20、40、80|ig/ml)，每個樣品設(shè)4復(fù)孔。將培養(yǎng)板置37。C、含5。/。C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后，加MTT2(Hi1,繼續(xù)培養(yǎng)4h,棄去上清液，每孔加入100plDMSO,待結(jié)晶溶解后置入酶標(biāo)儀，于570nm處測每孔OD值，計算抑制率。抑制率=(l-試驗組OD值/對照組OD值)xi00%<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>由表7可見，多西他賽注射液和多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒隨著濃度的增加，對腫瘤細(xì)胞活性的抑制率相應(yīng)增加。當(dāng)多西他賽注射液濃度為20、40、80昭/ml時,抑制率分別為74.33%、80.36%、89.12%;當(dāng)多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒濃度為20、40、80i!g/ml時，抑制率分別為78.12%、84.96%、93.32%。兩組細(xì)胞抑制率均大于74。/。，隨著藥物濃度的升高，抑制率升高。多西他賽注射液的抑制率略低于多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，但兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。實施例32藥物動力學(xué)實驗昆明小鼠(20土2g)150只，隨機分為3組，每組50只小鼠，3組小鼠以10mg/kg的劑量分別iv多西他賽注射液、長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒、普通固體脂質(zhì)納米粒。每組小鼠分8個時間點，每個時間點5只小鼠。分別于0、0.5、1、2、4、8、14和24h眼眶取血，3000r/min離心取血清于國20。C冰箱中保存。血清藥物濃度測定方法取血清100^L，加入叔丁基曱醚2.0mL渦旋振蕩90s，離心，將上層有機相于40。C水浴中氮氣吹千，再用流動相溶解，用高效液相法測定藥物濃度。流動相為曱醇:乙腈:水(45:30:25);30檢測波長為230nm;進樣量為50pL。將實驗所得血濃經(jīng)時數(shù)據(jù)用kinetita軟件包處理，判斷房室模型，同時進行統(tǒng)計矩分析，并將所得藥動學(xué)參數(shù)經(jīng)spss統(tǒng)計軟件進行t檢驗。其中AUCo，24和AUCo.oo均為梯形法計算結(jié)果。表8參數(shù)多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒多西他賽普通固體脂質(zhì)納米粒TKa/h1.16±0.10.08±0.004**T鄰/h9.34±1.352.46±0.40"CL/L七"0.03±0.0040.11±0.04**AUC0.24/mg'h-I/1110.12±10.6020.50±2.38**AUCo-o/mg.h'I/1112.96±10.6722.78±2.68**MRT/h9.78±0.183.57±0.23***P<0.05;**P<0.01。結(jié)果多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的MRT、AUC^24和AUCo.00分別是多西他賽普通固體脂質(zhì)納米粒的2.74、5.37、4.96倍，具有極顯著差異(P〈0.01)，CL是普通納米粒的0.27倍，具有極顯著差異(P〈0.01)，說明在同樣劑量條件下，長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒在體內(nèi)能夠維持較長的循環(huán)時間，使其有更多的機會達到靶部位，實現(xiàn)靶向作用。因為長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒表面柔順的PEG長鏈可以吸附大量水分子，在納米粒表面形成一層水分子的空間位阻，減少體內(nèi)巨噬細(xì)胞的吞噬，從而延長固體脂質(zhì)納米粒在血液中的循環(huán)時間。權(quán)利要求1、一種多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，由包含以下重量份的原料制備而成多西他賽1份脂質(zhì)材料4-80份長循環(huán)輔料0.1-40份乳化劑0.1-60份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，由包含以下重量份的原料制備而成多西他賽14分脂質(zhì)材料10-50份長循環(huán)輔料0.5-20份乳化劑1-30份。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，所述的脂質(zhì)材料為十八醇、甘油脂、磷脂、脂肪酸、類固醇、蠟脂或其混合物，其中所述的甘油脂為單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、雙棕櫚酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、單山脊酸甘油酯、雙山崳酸甘油酯、三山崳酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油脂、三辛酸/務(wù)》酸甘油酯或其混合物；所述的磷脂為磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二椋櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酸、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰乙醇胺、大豆磷脂、卵磷脂、氫化卵磷脂或其混合物；所述的脂肪酸為硬脂酸、豆蔻酸、棕櫚酸、山崳酸、辛酸、癸酸或其混合物；所述的類固醇為膽固醇；所述的蠟脂為鯨蠟醇棕櫚酸酯、鯨蠟醇十六酸酯、微晶石蠟或其混合物。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，所述的長循環(huán)輔料為聚乙二醇-磷脂酰甘油、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚己內(nèi)酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-聚十六烷基氰基丙烯酸酯或其混合物；其中，所述的聚乙二醇的分子量為200-20000。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于所述的聚乙二醇的分子量為1000-5000。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，所述的乳化劑為膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、短鏈醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯脂肪酸酯或其混合物；其中，所述的膽酸鹽為膽酸鈉、甘膽酸鈉、?；悄懰徕c或其混合物；所述的脫氧膽酸鹽為脫氧膽酸鈉、脫氧?；悄懰徕c或其混合物；所述的短鏈醇為甘油、丙二醇或其混合物；所述的泊洛沙姆為Poloxamer-108、Poloxamer-188或其混合物；所述的聚山梨醇酯為吐溫-80;所述的聚氧乙烯脂肪醇醚為Brij78、Brij35、Brij30或其混合物；所述的聚氧乙烯脂肪酸酯為Myrj53、Myrj59或其混合物。7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，其粒徑小于1000nm，包封率大于80%。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒，其特征在于，其粒徑小于500nm。9、權(quán)利要求1或2所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于，采用以下不同方法中的任意一種1)乳化-沉淀法稱取配方量的多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑溶于有機溶劑得有機相，稱取水溶性乳化劑溶于水中得水相；有機相和水相分別加熱至相同溫度，攪拌下將有機相和水相混合，然后減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，然后進行超聲或高壓均質(zhì)處理，即可得到長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒；或2)乳化揮發(fā)-低溫固化法將多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑按比例溶于有機溶劑得有機相；稱取水溶性乳化劑溶于水中得水相；有機相和水相分別加熱至相同溫度，攪拌下將有機相和水相混合，減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，并使體系濃縮，將濃縮液迅速混于2-50倍體積的0-4。C低溫水中，攪拌降溫，然后進行超聲或高壓均質(zhì)處理得到多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒；或3)薄膜-分散法稱取配方量的多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑溶于有機溶劑中，在20-60。C下水浴中減壓蒸干成膜，加入含水溶性乳化劑的水溶液，超聲或高壓均質(zhì)處理即得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒；或4)熱熔分散法稱取多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料、脂溶性乳化劑在60-90。C下加熱至熔融，作為油相；將水溶性乳化劑溶于水中加熱至相同溫度作為水相；在攪拌下將油相、水相混合，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，即制得多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒；所述有機溶劑為氯仿、乙醚、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、二氯曱烷、丙酮或其混合溶劑；方法1)和2)中所述有機相和水相的相同溫度在20-80。C之間；高壓均質(zhì)時壓力為10000-25000psi，高壓均質(zhì)的次數(shù)為3次-10次；超聲功率為100-1000W，超聲時間為10-40min。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的制備方法，其特征在于，方法1)和2)中所述有機相和水相的相同溫度在30-6(TC之間。11、一種多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的固體制劑，其特征在于，所述固體制劑是權(quán)利要求1或2中的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒加入支架劑并釆用冷凍干燥或噴霧干燥的工藝制成的。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒的固體制劑，其特征在于，所述的支架劑為氨基酸、麥芽糖、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯膠、木糖醇、山梨醇、果糖或其混合物；并且其用量為1-40(w/v)%。13、一種多西他賽注射劑或口服制劑，其特征在于，是由權(quán)利要求1或2中的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒制備而成的。全文摘要本發(fā)明公開了一種多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒及其制備方法。其包括治療有效量的多西他賽、脂質(zhì)材料、長循環(huán)輔料和乳化劑。本發(fā)明的多西他賽長循環(huán)固體脂質(zhì)納米粒粒徑較小、包封率高、穩(wěn)定性好；不僅提高多西他賽溶解度及穩(wěn)定性，降低其毒性，而且延長藥物在血液中的循環(huán)時間，提高藥物的治療指數(shù)，使本制劑在臨床應(yīng)用上具有低毒性、低過敏性、高效性、靶向性的特點。文檔編號A61K9/127GK101653414SQ20081004186公開日2010年2月24日申請日期2008年8月19日優(yōu)先權(quán)日2008年8月19日發(fā)明者李亞平,陳伶俐,顧王文申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所