專利名稱：人源重建鼠模型及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組織工程移植物或其材料的免疫原性，尤其涉及一種人源重建 鼠模型及其在檢測(cè)組織工程移植物或其材料的免疫原性中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
干細(xì)胞具有自我更新和多向分化性，再生醫(yī)學(xué)與組織工程也嘗試運(yùn)用干細(xì) 胞來(lái)構(gòu)建修復(fù)缺損病變的組織與器官，因此需要充沛、穩(wěn)定、安全的種子細(xì)胞 來(lái)源。
胚胎千細(xì)胞具有的全能分化特性給再生醫(yī)學(xué)帶來(lái)了曙光，但是胚胎干細(xì)胞 由于倫理學(xué)的限制使得來(lái)源有限，而且由于潛在致瘤性以及調(diào)控機(jī)制的尚未明 了，使得應(yīng)用也受到很大的限制。成體干細(xì)胞作為一種新的干細(xì)胞來(lái)源，也具 有多向分化的特性并且來(lái)源廣泛，文獻(xiàn)報(bào)道在人體的幾乎所有器官都發(fā)現(xiàn)并分 離了干細(xì)胞。無(wú)疑成體干細(xì)胞是具有巨大臨床應(yīng)用潛能的種子細(xì)胞。
目前異體成體干細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞已經(jīng)成為世界各國(guó)的研究 熱點(diǎn)。但是對(duì)于人的異體千細(xì)胞的免疫原性研究多停留在體外實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)研究 較少。原因在于動(dòng)物模型不完善，而對(duì)于臨床應(yīng)用，確定人體來(lái)源細(xì)胞或者組
織在體內(nèi)是否激發(fā)免疫應(yīng)答，更為重要的依賴于基于動(dòng)物模型的體內(nèi)6'" 實(shí)驗(yàn)。
因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種可以檢測(cè)來(lái)自異體的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞 構(gòu)建的組織工程移植物的免疫原性的動(dòng)物模型，以及相應(yīng)的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種建立人源重建鼠的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)組織工程移植物的免疫原性的方法。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種建立人源重建鼠的方法，所述的方法包括步 驟..給免疫缺失的鼠施用人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。在另一優(yōu)選例中，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型糖尿病鼠與重癥聯(lián)合免疫
缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。
在另一優(yōu)選例中，施用40 —200"06個(gè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞。 在另一優(yōu)選例中，施用60—150xl()6個(gè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞。 在另一優(yōu)選例中，通過(guò)腹腔注射施用人外周血單個(gè)核細(xì)胞。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種檢測(cè)組織工程移植物的免疫原性的方法， 所述的方法包括步驟-
(a) 將人外周血單個(gè)核細(xì)胞施用于免疫缺失的鼠，得到人源重建鼠；
(b) 給予該人源重建鼠組織工程移植物；和
(c) 檢測(cè)該人源重建鼠的體液和/或細(xì)胞免疫水平。
在另一優(yōu)選例中，所述的組織工程移植物的種子細(xì)胞為人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和/ 或人成體干細(xì)胞；更佳地，來(lái)自于異體的人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和/或人成體干細(xì)胞。
在另一優(yōu)選例中，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型糖尿病鼠與重癥聯(lián)合免疫 缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。
在另一優(yōu)選例中，施用40 — 200><106個(gè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞；更佳地，施用 60—150xl(T個(gè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞。
在另一優(yōu)選例中，通過(guò)腹腔注射施用人外周血單個(gè)核細(xì)胞。
據(jù)此，本發(fā)明提供了一種可以檢測(cè)來(lái)自異體的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞構(gòu)建的 組織工程移植物的免疫原性的動(dòng)物模型，以及相應(yīng)的檢測(cè)方法。


圖l顯示了 NOD-SCID鼠體液及細(xì)胞免疫水平檢測(cè)的結(jié)果；其中，
A為NOD-SCID鼠血清IgG水平，B為NOD-SCID鼠脾臟細(xì)胞CD3+CD4+/CD3+CD8+
數(shù)量比與C57的比較。
圖2顯示了人源化NOD-SCID鼠體內(nèi)觀察人-CD4+、人-CD8+的變化情況；
其中，
A為人源化鼠外周血及脾臟CD4/CD8數(shù)量比例，B為人源化鼠外周血及脾 臟流式。
圖3顯示了人源鼠植入皮膚局部炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)的情況；其中，A為1周取材的情況，B為4周取材的情況。
圖4顯示了利用人源化N0D-SCID小鼠體內(nèi)植入各種材料后的的病理檢查 結(jié)果；其中
A中的箭頭所示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的情況，Al是細(xì)胞加材料植入一周的情況， A2是細(xì)胞加材料植入四周的情況；B、 C中箭頭是細(xì)胞與材料骨架，B是材料植 入一周的情況，C是硅膠(材料)植入四周的情況。
具體實(shí)施例方式
發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)將PBMC施用于NOD-SCID鼠可以建立 人源化N0D-SCID小鼠，通過(guò)該人源化NOD-SCID小鼠可以檢測(cè)組織工程移植物 的免疫原性，尤其是可以對(duì)將來(lái)自于異體的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞的移植物進(jìn)行 其免疫原性的體內(nèi)評(píng)估，從而為其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)"PBMC"是人外周血單個(gè)核細(xì)胞，即Peripheral Blood Mononuclear Cell。外周血單核細(xì)胞包括單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，一般外周血單 個(gè)核細(xì)胞分離出來(lái)貼壁幾個(gè)小時(shí)后，貼壁的就是單核細(xì)胞，非貼壁的就是淋巴 細(xì)胞。可以使用本領(lǐng)域熟知的方法分離、保存PBMC，也可以通過(guò)商業(yè)渠道獲得。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)"NOD-SCID" 、 "NOD-SCID鼠"或"NOD-SCID小鼠" 可以互換使用，都是指非肥胖型糖尿病鼠與重癥聯(lián)合免疫缺陷鼠反交鼠?？梢?通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù) 人員熟知的商業(yè)渠道獲得。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)"人源重建鼠"或"人源化NOD-SCID小鼠"可以互換 使用，都是指NOD-SCID在施用PBMC后形成的體內(nèi)帶有PBMC并重新獲得免疫 能力的小鼠。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)"組織工程移植物"是指將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的正常組織細(xì) 胞(即種子細(xì)胞)吸附于一種具有優(yōu)良細(xì)胞相容性并可被機(jī)體降解吸收的生物 材料上形成的復(fù)合物。所述的種子細(xì)胞是干細(xì)胞和/或體細(xì)胞，優(yōu)選干細(xì)胞。所 述的干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和/或成體干細(xì)胞，優(yōu)選成體干細(xì)胞，更優(yōu)選人成 體干細(xì)胞。所述的人成體干細(xì)胞來(lái)自于自體或異體，優(yōu)選自于異體。
如本文所用，術(shù)語(yǔ)"組織工程材料"、"生物可降解材料"或"具有細(xì)胞 相容性并可被機(jī)體降解吸收的生物材料"可互換使用，都是指醫(yī)學(xué)上可接受的 生物可降解材料，包括(但并不限于)(a) 可降解性合成高分子材料，例如聚a-羥基酸(如聚乳酸PLA、聚羥基 乙酸PGA、聚羥基丁酸PHB等)、聚酸酐(polyanhydrides)、聚偶磷氮 (polyphosphazenes)、 聚氨基酸(polyamino acid)、 假聚氨基酸 (pesudo—polyamino acid)、 聚原酸酉旨(polyorthoesters)、 聚酉旨尿院 (polyesterurethane)、聚碳酸酯(polycarbonate)、聚乙二醇、聚對(duì)二氧六 環(huán)酮(polydioxanone)等；
(b) 天然可降解材料，例如膠原(collagen)、明膠(gelatin)、糖氨聚糖 (glycosaminoglycan， GAGs)、殼聚糖(chitosan)、 甲殼素(chitin)、海藻酸
鹽、藻酸鈣凝膠等；各種脫細(xì)胞基質(zhì)；
(c) 可注射性材料，如Pluronic(—種市售的聚環(huán)氧乙丙烯商品)、藻酸鈣 凝膠等；
(d) 上述材料的混合物或復(fù)合材料，尤其是高分子材料與天然材料的復(fù)合 材料，以及固體材料與可注射性材料的復(fù)合材料。
在本發(fā)明的方法中，首先是制備人源化N0D-SCID小鼠的動(dòng)物模型，即將 PBMC施用于N0D-SCID。施用方法沒(méi)有特別限制，優(yōu)選的方法包括(但不限于) 腹腔注射、靜脈注射、肌肉注射等，更優(yōu)選腹腔注射。
在本發(fā)明的方法中，其次是檢測(cè)組織工程移植物的免疫原性的方法，所述 的方法包括步驟(a)將人外周血單個(gè)核細(xì)胞施用于鼠，得到人源重建鼠； (b)給予該人源重建鼠組織工程移植物；和(C)檢測(cè)該人源重建鼠的體液和
/或細(xì)胞免疫水平。為了更好地進(jìn)行比較，宜設(shè)置用于比較的對(duì)照組，包括陽(yáng) 性對(duì)照和陰性對(duì)照。通常，陽(yáng)性對(duì)照是給予人源重建鼠哺乳動(dòng)物的皮膚，優(yōu)選
人的皮膚；陰性對(duì)照是給予單純組織工程材料，優(yōu)選硅膠。
本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說(shuō)明書(shū)所 揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說(shuō)明書(shū)中所揭示的各個(gè)特征，可以任何 可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說(shuō)明，所揭示的特 征僅為均等或相似特征的一般性例子。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于
1、首次建立了人源化NOD-SCID小鼠的動(dòng)物模型。
62、首次通過(guò)所建立的人源化N0D-SCID小鼠動(dòng)物模型檢測(cè)組織工程移植物 的免疫原性，具有優(yōu)良的體內(nèi)評(píng)估價(jià)值。
下面將結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于 說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn) 方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠 商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計(jì)。
除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟 悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于 本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
實(shí)施例1
建立人源化NOD-SCID小鼠
材料和方法 1、材料
1. 1動(dòng)物、細(xì)胞
NOD-SCID鼠購(gòu)自中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心 PBMC購(gòu)自上海市血液中心 干細(xì)胞購(gòu)自上海市組織工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 1.2試劑和儀器
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液RPMI1640(美國(guó)Hyclone公司) Cellquest software 96孔培養(yǎng)板(美國(guó)BD公司) 離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司) 淋巴細(xì)胞分離液(挪威Lymphopr印)。
2、 方法
2. 1人PBMC的分離
首先血站成分血1: 5生理鹽水(N.S)稀釋；然后用淋巴細(xì)胞分離液Ficoll (密度1.077，上海試劑二廠)稀釋血液(2: 1) ， 2000r/m離心20分鐘，溫
7度控制在18 — 20'C，吸出分離層交界處的白毛層，N.S洗滌2次，計(jì)數(shù)，待用。 2.2 NOD-SCID鼠腹腔注射(ip) 80—100X 106PBMC。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
本發(fā)明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件分析。兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)， 代O. 05差異有顯著性。
結(jié)果
NOD-SCID鼠體液免疫、細(xì)胞免疫的缺失
為了保證人源重建鼠模型的成功構(gòu)建，我們首先檢測(cè)了所采用NOD-SCID 小鼠本身的免疫系統(tǒng)狀況。我們對(duì)NOD-SCID鼠血清IgG水平以及脾臟淋巴細(xì) 胞進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)野生型(wild type, wt)與NOD-SCID IgG水平的吸光度值 (0. D)白色柱、黑色柱分別代表wt與NOD-SCID血清的O. D值，NOD-SCID鼠 外周IgG ELISA吸光度的值在0.25左右而野生型C57BL/6J鼠血清吸光度在 1.00左右，兩者有顯著性差異(; =0.0036)(圖1A) 。 C57 CD3+CD8+所占比 例為19% (圖IB上左)CD3+CD4+所占比例為45% (圖IB上右)，NOD-SCID鼠 CD3+CD4+所占比例為0. 48%(圖IB下左)，CD3+CD8+所占比例為0. 57% (圖IB 下右)，以上結(jié)果證明該鼠免疫系統(tǒng)是完全缺失的。
實(shí)施例2
組織工程移植物免疫原性檢測(cè)
材料和方法 1、材料
1.1動(dòng)物、細(xì)胞
NOD-SCID鼠購(gòu)自中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心
PBMC購(gòu)自上海市血液中心
干細(xì)胞購(gòu)自上海市組織工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
1.2試劑和儀器
細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液RPMI1640(美國(guó)Hyclone公司) Cellquest software96孔培養(yǎng)板(美國(guó)BD公司) 離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司) 淋巴細(xì)胞分離液(挪威Lymphopr印)。 2、方法
2. 1人PBMC的分離
首先血站成分血1: 5生理鹽水(N. S)稀釋；然后用淋巴細(xì)胞分離液Ficoll (密度1.077，上海試劑二廠)稀釋血液(2: 1) , 2000r/m離心20分鐘，溫 度控制在1 一2(TC，吸出分離層交界處的白毛層，N.S洗滌2次，計(jì)數(shù)，待用。 2.2 NOD-SCID鼠腹腔注射(ip) 80—100X 106PBMC。
2.3于接種人PBMC的次日，接種人皮膚于各種材料無(wú)菌手術(shù)小鼠背部皮 膚鈍性分離皮膚，接種人皮膚以及各種材料。
2.4分別在1周、2周、3周、4周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)取出植入的材料，進(jìn)行組織 化學(xué)染色；每周取材的同時(shí)小鼠剪尾取血，F(xiàn)ACS (BD Calibur美國(guó))流式細(xì) 胞儀檢測(cè)人和小鼠CD4/CD8 (CD3-APC(畫(huà)se)/CD3-PE (human) 、 CD4-FITC、 CD8-PE (mouse) /CD8-PE-Cy5 (美國(guó)BD Pharmingen公司)，最后一次取材的 時(shí)候，處死人源化N0D-SCID小鼠，取脾臟細(xì)胞進(jìn)行FACS檢測(cè)人CD4/CD8。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
本發(fā)明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件分析。兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)， 代0.05差異有顯著性。
結(jié)果
1、 材料植入后重建鼠體內(nèi)人PBMC的動(dòng)態(tài)變化
植入各種材料后，留取外周血檢測(cè)不到人CD4/8 (1、 2、 3、 4周)(圖2A: 標(biāo)注為PBL，圖2B:上左與上右所示)，4周時(shí)，檢測(cè)外周血的同時(shí)處死小鼠， 取脾臟并分離單個(gè)核細(xì)胞檢測(cè)。
結(jié)果表明，脾臟細(xì)胞中可以檢測(cè)到人CD4/CD8細(xì)胞，但是所占比例有較明 顯的個(gè)體差異(圖2A: SP所示；圖2B:下左及下右所示)。
2、 異體人皮膚移植局部見(jiàn)明顯免疫細(xì)胞浸潤(rùn)
植入人源鼠的異體皮膚在1周、4周經(jīng)取材，病理H&E染色，見(jiàn)真皮下層 有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3A、 B箭頭所示)3、異體干細(xì)胞的組織工程材料植入局部無(wú)明顯的免疫細(xì)胞浸潤(rùn) 在人源鼠體內(nèi)，對(duì)于覆有干細(xì)胞的組織材料，病理結(jié)果未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)
(圖4A， Al、 A2箭頭所示)，而對(duì)于單純材料和硅膠在植入后的病理檢查也 未見(jiàn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)(圖4B和圖4C箭頭所示)。
結(jié)果表明，利用N0D-SCID構(gòu)建的人源鼠是一種很好的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ陀脕?lái) 研究移植物在體內(nèi)的免疫原性的變化。
本發(fā)明的初步結(jié)果，說(shuō)明異體來(lái)源的成體干細(xì)胞可以作為組織工程的種子 細(xì)胞。
討論
免疫原性是限制異體移植和種子庫(kù)的關(guān)鍵，利用構(gòu)建的人源化鼠可以在體 內(nèi)觀察研究移植物包括目前干細(xì)胞構(gòu)建的組織工程材料的免疫原性的動(dòng)態(tài)變 化過(guò)程。
人源鼠模型的構(gòu)建，能夠在體內(nèi)觀察更為真實(shí)的移植物與宿主的免疫應(yīng)答 反應(yīng)，本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明在4周的觀察周期內(nèi)重建鼠體內(nèi)仍舊存在人的PBMC。 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明利用NOD-SCID重建的人源化鼠在脾臟存在人的PBMC，并 且具有一定時(shí)相(4周)。表明本方法建立的人源鼠可以模擬體內(nèi)細(xì)胞免疫， 觀察移植物的免疫原性。
在不同的時(shí)間點(diǎn)取回植入的組織工程材料，進(jìn)行病理組織化學(xué)檢測(cè)，同時(shí) 留取血液樣品(第4周同時(shí)取脾臟)流式檢測(cè)。因?yàn)椴±黻?yáng)性對(duì)照植入皮膚局 部發(fā)現(xiàn)了炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，干細(xì)胞加材料和單獨(dú)材料未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以上 結(jié)果首先說(shuō)明輸入N0D-SCID體內(nèi)的人PBMC仍舊可以識(shí)別異己抗原并行使免疫 清除的功能，植入的異體皮膚真皮下層有殘留的白細(xì)胞，也稱為過(guò)路細(xì)胞。其 中的樹(shù)突細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，兩者均高表達(dá)MHC-II分子和包括B7在內(nèi)的多種分 子。異體皮膚植入人源鼠后，其表面的MHC-II類分子以及MHC-II類分子復(fù)合 物可以不經(jīng)受者的APC處理直接為受者的CD4細(xì)胞識(shí)別，繼而發(fā)生免疫細(xì)胞的 活化和炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，最終導(dǎo)致移植物的排斥。而對(duì)于不同組織材料組的結(jié) 果說(shuō)明實(shí)驗(yàn)中所采用的空材料支架，免疫原性低下，人源鼠對(duì)其不識(shí)別；用成 體干細(xì)胞構(gòu)建的細(xì)胞加材料人源鼠同樣也無(wú)法識(shí)別，說(shuō)明成體干細(xì)胞作為種子 細(xì)胞的組織工程材料保持了成體干細(xì)胞的低免疫原性，人源鼠對(duì)其不識(shí)別。
10以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容范圍，本發(fā)明的實(shí)質(zhì)技術(shù)內(nèi)容是廣義地定義于申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍中，任何他人完成的技術(shù)實(shí)體或方法，若是與申請(qǐng)的權(quán)利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權(quán)利要求范圍之中。
權(quán)利要求
1.一種建立人源重建鼠的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟給免疫缺失的鼠施用人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型 糖尿病鼠與重癥聯(lián)合免疫缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，施用40—200xl(/個(gè)人外周血單個(gè) 核細(xì)胞。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，施用60—150xK)6個(gè)人外周血單個(gè) 核細(xì)胞。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過(guò)腹腔注射施用人外周血單個(gè) 核細(xì)胞。
6. —種檢測(cè)組織工程移植物的免疫原性的方法，其特征在于，所述的方法包 括步驟(a) 將人外周血單個(gè)核細(xì)胞施用于免疫缺失的鼠，得到人源重建鼠；(b) 給予該人源重建鼠組織工程移植物；和(c) 檢測(cè)該人源重建鼠的體液和/或細(xì)胞免疫水平。
7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的組織工程移植物的種子細(xì) 胞為人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和/或人成體干細(xì)胞；優(yōu)選來(lái)自于異體的人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和/或人成體干細(xì)胞。
8. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的免疫缺失的鼠是非肥胖型 糖尿病鼠與重癥聯(lián)合免疫缺陷鼠反交鼠(NOD-SCID)。
9. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，施用40—200><106個(gè)人外周血單個(gè) 核細(xì)胞；優(yōu)選施用60—150><106個(gè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞。
10. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，通過(guò)腹腔注射施用人外周血單個(gè) 核細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了人源重建鼠模型及其應(yīng)用。本發(fā)明公開(kāi)了一種建立人源重建鼠的方法，所述的方法包括步驟給免疫缺失的鼠施用人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。本發(fā)明還公開(kāi)了一種檢測(cè)組織工程移植物的免疫原性的方法，所述的方法包括步驟(a)將人外周血單個(gè)核細(xì)胞施用于免疫缺失的鼠，得到人源重建鼠；(b)給予該人源重建鼠組織工程移植物；和(c)檢測(cè)該人源重建鼠的體液和/或細(xì)胞免疫水平。
文檔編號(hào)A61B19/00GK101653377SQ20081004184
公開(kāi)日2010年2月24日 申請(qǐng)日期2008年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月19日
發(fā)明者劉枚華, 焱 王 申請(qǐng)人:杭州萬(wàn)明生物科技有限公司