專利名稱：Mdm2的新型小分子抑制劑和其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將患有癌癥的動物暴露于治療有效量的藥物(例如小分子)將抑制癌細(xì)胞或支持細(xì)胞的完全(outright)生長和/或使所述細(xì)胞變?yōu)閷Π┌Y治療藥物或放射治療的細(xì)胞死亡誘導(dǎo)活性更加敏感的群體，其中所述治療有效量的藥物通過抑制p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)(例如MDMX)之間的相互作用增加p53和p53相關(guān)蛋白質(zhì)(例如p63、p73)的功能。特別地，本發(fā)明的抑制劑通過干擾通?？纱龠M(jìn)p53降解的p53-MDM2相互作用可延長p53的半衰期。本發(fā)明包括p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2和MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間相互作用的抑制劑，當(dāng)作為單一治療施用以誘導(dǎo)癌細(xì)胞中的細(xì)胞生長抑制、凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯時，或當(dāng)與其它藥劑(例如其他細(xì)胞死亡誘導(dǎo)或細(xì)胞周期中斷癌癥治療藥物或放射治療)按時間關(guān)系施用(組合治療)時，滿足多種癌癥類型的治療中未滿足的需要，從而與僅用單獨(dú)的癌癥治療藥物或放射治療來治療的動物中相應(yīng)比例的細(xì)胞相比較，使更大比例的所述癌癥細(xì)胞或支持細(xì)胞變得對執(zhí)行凋亡程序更加敏感。
在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，與單獨(dú)用本發(fā)明的化合物或抗癌藥物/放射治療的動物相比，用治療有效量的所述化合物和一個療程的抗癌劑或放射組合治療動物在所述動物中產(chǎn)生更大的腫瘤響應(yīng)(tumorresponse)和臨床效益。換言之，因?yàn)樗龌衔飳⒔档退屑?xì)胞的凋亡閾值，因此增加了將成功執(zhí)行響應(yīng)抗癌藥物/放射的凋亡誘導(dǎo)活性的凋亡程序的細(xì)胞的比例?？蛇x地，本發(fā)明的化合物將用于允許施用較低(并且因此低毒和更加耐受)劑量的抗癌劑和/或放射以產(chǎn)生與單獨(dú)的常規(guī)劑量的抗癌劑/放射同樣的腫瘤響應(yīng)/臨床效益。因?yàn)橐阎信鷾?zhǔn)的抗癌藥物和放射治療的劑量，因此本發(fā)明包括它們與本化合物的多種組合。同樣，由于本發(fā)明的化合物可至少部分地通過刺激p53和p53相關(guān)蛋白質(zhì)的促凋亡和/或細(xì)胞周期抑制活性起作用，癌癥細(xì)胞和支持細(xì)胞對治療有效量的化合物的暴露應(yīng)該被以時間關(guān)系地連接以符合細(xì)胞執(zhí)行響應(yīng)抗癌劑或放射治療的凋亡程序的嘗試。因此，在一些實(shí)施方案中，結(jié)合某些時間關(guān)系施用本發(fā)明的組合物提供了特別有效的治療實(shí)踐。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2和MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間相互作用的抑制劑可能通過抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯的能力可保護(hù)正常(例如非過度增殖的)細(xì)胞免受某些化療劑和放射的毒性效應(yīng)。特別地，本發(fā)明的抑制劑可在含有野生型p53的細(xì)胞中引起細(xì)胞周期阻滯，而對含有突變的p53或缺失p53的癌細(xì)胞沒有效應(yīng)。這種不同的保護(hù)效應(yīng)可通過允許使用更大劑量或更長時間的化療劑或化療治療來允許更加有效的癌癥治療而不增加所述治療的毒副作用。
本發(fā)明涉及用于抑制p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間的相互作用和增加細(xì)胞對凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯的誘導(dǎo)物的敏感性的化合物。在一個特定的實(shí)施方案中，所述化合物具有式I
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中 X是CH、O、N或S，其中如果X是O或S，則R8不存在； Y是O、S或NR′； R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、NR″COR′、NR′SO2R″、SO2NR′R″、(C＝NR′)NR″R′″或NR′R″；或 R7與R5或R6中之一形成芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基； R8是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、SO2NR′R″或(C＝NR′)NR″R′″； R9代表6-氯和5-氟基團(tuán)；并且 每個R′、R″和R′″獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基或雜環(huán)；或 R′和R″、或R″和R′″形成環(huán)； 其中R3和R4之一是CONRR′，并且R和R′之一是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基。
本發(fā)明涉及式I代表的化合物，其是p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間相互作用的抑制劑。本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物在含有功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和/或凋亡中的用途。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物使細(xì)胞對其它藥劑(例如凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯的誘導(dǎo)物)敏感和通過在用化療劑治療前誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯來化學(xué)保護(hù)正常細(xì)胞的用途。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使正常細(xì)胞變得對化療劑或化療治療耐受的方法，包括用本發(fā)明的化合物接觸細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及保護(hù)具有過度增殖疾病的動物的正常細(xì)胞免受化療劑或化療治療的毒副作用的方法，包括向所述動物施用本發(fā)明的化合物。在一個特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明是指通過向經(jīng)受化學(xué)治療的動物施用本發(fā)明的化合物，治療、改善或預(yù)防由向正常的非癌性細(xì)胞施用化療劑引起的病癥、副反應(yīng)或疾患。由化學(xué)治療引起的所述病癥和疾患的例子包括但不限于粘膜炎、口腔炎、口腔干燥、腸胃病癥和脫發(fā)。
本發(fā)明的化合物用于治療、改善或預(yù)防病癥，諸如響應(yīng)于凋亡性細(xì)胞死亡的誘導(dǎo)的那些病癥，例如以凋亡的失調(diào)(dysregulation)為特征的病癥，包括諸如癌癥的過度增殖疾病。在某些實(shí)施方案中，所述化合物可用于治療、改善或預(yù)防以耐受癌癥治療(例如化學(xué)耐受、放射耐受、激素耐受以及相似耐受的那些癌細(xì)胞)為特征的癌癥。在其他的實(shí)施方案中，所述化合物可用于治療以功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)為特征的過度增殖疾病。在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物通過在正常(例如非過度增殖的)細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯來保護(hù)那些細(xì)胞免受化療劑和化療治療的毒副作用的用途。
本發(fā)明提供含有以治療有效量誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡或使細(xì)胞對凋亡誘導(dǎo)物敏感的式I化合物的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供含有式I的化合物和向動物施用所述化合物的說明書的藥盒。所述藥盒可任選地含有其他治療劑，例如抗癌劑或凋亡調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明還提供制備式I的化合物的方法。
發(fā)明詳述 本發(fā)明涉及式I表示的化合物，其具有p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間相互作用的抑制劑的功能。通過抑制MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)對p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的負(fù)效應(yīng)，這些化合物使細(xì)胞對凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯的誘導(dǎo)物敏感，并且在一些例子中它們自身誘導(dǎo)凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯。因此，本發(fā)明涉及使細(xì)胞對凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯的誘導(dǎo)物敏感的方法并且涉及在細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡和/或細(xì)胞周期阻滯的方法，包括用式I的化合物單獨(dú)地或與其它藥劑(例如凋亡的誘導(dǎo)物或細(xì)胞周期干擾物(disrupter))組合地接觸細(xì)胞。本發(fā)明進(jìn)一步涉及治療、改善或預(yù)防動物的病癥(例如響應(yīng)凋亡的誘導(dǎo)的那些病癥)的方法，包括向動物施用式I的化合物和例如凋亡誘導(dǎo)物的其它藥劑。所述病癥包括以凋亡的失調(diào)為特征的那些病癥和以表達(dá)功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的細(xì)胞的增殖為特征的那些病癥。在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及保護(hù)動物的正常(例如非過度增殖的)細(xì)胞免受化療劑和化療治療的毒副作用的方法，包括向動物施用式I的化合物。
如本文所用，術(shù)語“抗癌劑”和“抗癌藥物”指用于治療諸如癌癥(例如在哺乳動物中)等過度增殖疾病的任何治療劑(例如化療化合物和/或分子治療化合物)、反義治療、放射治療或手術(shù)介入。
如本文所用，術(shù)語“前藥”指母體“藥物”分子的藥理學(xué)無活性衍生物，其需要在靶生理系統(tǒng)中生物轉(zhuǎn)化(例如自發(fā)的或酶促的)以釋放或?qū)⑶八庌D(zhuǎn)化(例如酶促地、生理地、機(jī)械地、電磁地)為活性藥物。設(shè)計前藥用于克服與穩(wěn)定性、毒性、特異性缺失或生物利用度有限相關(guān)的問題。示例性的前藥包括活性藥物分子自身和化學(xué)掩蔽基團(tuán)(例如可逆地抑制藥物活性的基團(tuán))。一些前藥是具有在代謝條件下可裂解的基團(tuán)的化合物的變體或衍生物。當(dāng)示例性的前藥在生理條件下經(jīng)歷溶劑分解或經(jīng)歷酶促降解或其他生物化學(xué)轉(zhuǎn)化(例如磷酸化、氫化、脫氫、糖基化)時，它們變?yōu)橛畜w內(nèi)或體外藥學(xué)活性。前藥通常提供在哺乳動物生物體中的溶解性、組織相容性或緩釋的優(yōu)勢。(參見例如Bundgard，Design of Prodrugs(前藥設(shè)計)，第7-9，21-24頁，Elsevier，Amsterdam(1985)；和Silverman，The Organic Chemistry of DrugDesign and Drug Action(藥物設(shè)計和藥物作用的有機(jī)化學(xué))，第352-401頁，Academic Press，San Diego，CA(1992))。普通的前藥包括酸衍生物，例如由母體酸與適當(dāng)?shù)拇?例如，低級烷醇)反應(yīng)制備的酯、由母體酸化合物與胺或堿性基團(tuán)反應(yīng)制備的酰胺，所述堿性基團(tuán)被反應(yīng)以形成?；瘔A性衍生物(例如低級烷基酰氨)。
如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指本發(fā)明化合物的任何鹽(例如通過與酸或堿反應(yīng)獲得的)，其在目標(biāo)動物(例如哺乳動物)中是生理學(xué)耐受的。本發(fā)明化合物的鹽可衍生自無機(jī)或有機(jī)的酸和堿。酸的例子包括但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、蟻酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸以及類似物。其他的酸，例如草酸，雖然它們自身不是藥學(xué)上可接受的，但是可被用來制備在獲得本發(fā)明的化合物和它們的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽中用作中間體的鹽。
堿的例子包括但不限于堿金屬(例如鈉)氫氧化物、堿土金屬(例如鎂)氫氧化物、氨和式NW4+且其中W是C1-4烷基的化合物以及類似物。
鹽的例子包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(flucoheptonate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate)、甲烷磺酸鹽(methanesulfonate)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽(palmoate)、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽以及類似物。鹽的其他例子包括本發(fā)明化合物的陰離子與合適的陽離子化合，所述陽離子如Na+、NH4+和NW4+(其中W是C1-4烷基)以及類似物。為了治療應(yīng)用，預(yù)期本發(fā)明化合物的鹽為藥學(xué)上可接受的。然而，非藥學(xué)上可接受的酸和堿的鹽也可得到應(yīng)用，例如在藥學(xué)上可接受的化合物的制備或純化中。
如本文所用，術(shù)語“治療有效量”指足以引起病癥的一種或多種癥狀的改善或預(yù)防病癥的發(fā)展或引起病癥消退的治療劑的量。例如關(guān)于癌癥治療，在一個實(shí)施方案中，治療有效量將指治療劑降低腫瘤生長率、減少腫瘤質(zhì)量、減少轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量、增加腫瘤發(fā)展時間或增加生存時間至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％的量。
如本文所用，術(shù)語“變敏感”和“敏化”指通過施用第一藥劑(例如式I的化合物)使動物或動物內(nèi)的細(xì)胞對第二藥劑的生物效應(yīng)(例如促進(jìn)或延遲細(xì)胞功能的一個方面，包括但不限于細(xì)胞分化、細(xì)胞生長、增殖、侵襲、血管生成、壞死或凋亡)更加敏感或更具有響應(yīng)性。第一藥劑對靶細(xì)胞的敏化效應(yīng)可測量為當(dāng)與施用第一藥劑一起施用第二藥劑時和施用第二藥劑而不施用第一藥劑時，所觀察到的預(yù)期生物效應(yīng)(例如促進(jìn)或延遲細(xì)胞功能的一個方面，包括但不限于細(xì)胞生長、增殖、侵襲、血管生成或凋亡)的差異。敏化細(xì)胞的響應(yīng)超過沒有第一藥劑時的響應(yīng)可增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少150％、至少200％、至少350％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％或至少500％。
如本文所用，術(shù)語“凋亡的失調(diào)”指細(xì)胞經(jīng)由凋亡經(jīng)歷細(xì)胞死亡的能力的任何畸變(例如易感性(predisposition))。凋亡的失調(diào)與多種疾患有關(guān)或由多種疾患引起，所述疾患的非限制性例子包括自身免疫病癥(例如全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植物抗宿主疾病、重癥肌無力或

綜合征)、慢性炎性病癥(例如牛皮癬、哮喘或Crohn病)、過度增殖病癥(例如腫瘤、B細(xì)胞淋巴瘤或T細(xì)胞淋巴瘤)、病毒感染(例如皰疹、乳頭狀瘤或HIV)和例如骨關(guān)節(jié)炎和動脈粥樣硬化的其他疾患。應(yīng)注意，當(dāng)失調(diào)由病毒感染引起或與病毒感染有關(guān)時，在發(fā)生失調(diào)或觀察到失調(diào)時，病毒感染可以是可檢測的或是不可檢測的。即病毒引起的失調(diào)甚至可以在病毒感染的癥狀消失后發(fā)生。
如本文所用，術(shù)語“功能性p53”指以正常、高或低水平表達(dá)的野生型p53和保留至少5％的野生型p53活性的突變p53，例如保留至少10％、20％、30％、40％、50％或更多的野生型活性。
如本文所用，術(shù)語“p53相關(guān)蛋白質(zhì)”指與p53具有至少25％序列同一性、具有腫瘤阻抑子活性和被與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用所抑制的蛋白質(zhì)。p53相關(guān)蛋白質(zhì)的例子包括但不限于p63和p73。
如本文所用，術(shù)語“MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)”指與MDM2具有至少25％序列同一性、并且與p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)相互作用和抑制p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)。MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)的例子包括但不限于MDMX和HDM2。
如本文所用，術(shù)語“過度增殖疾病”指動物的增殖細(xì)胞的局部群體不由正常生長的通常限制所控制的任何疾患。過度增殖病癥的例子包括腫瘤、新生物、淋巴瘤以及類似疾病。如果新生物不經(jīng)歷侵襲或轉(zhuǎn)移，那么新生物被稱為是良性的，如果其經(jīng)歷這些中的任何一個就被稱為是惡性的。“轉(zhuǎn)移的”細(xì)胞指細(xì)胞可以侵入并破壞相鄰的身體結(jié)構(gòu)。增生是涉及組織或器官中細(xì)胞數(shù)量增加而沒有結(jié)構(gòu)或功能的顯著變化的細(xì)胞增殖的形式。組織轉(zhuǎn)化是受控制的細(xì)胞生長形式，其中一種類型的完全分化細(xì)胞取代另一種類型的分化細(xì)胞。
活化的淋巴樣細(xì)胞的病理學(xué)生長通常導(dǎo)致自身免疫病癥或慢性炎性疾患。如本文所用，術(shù)語“自身免疫病癥”指生物體產(chǎn)生識別生物體自身分子、細(xì)胞或組織的抗體或免疫細(xì)胞的任何疾患。自身免疫病癥的非限制性例子包括自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、Berger病或IgA腎病、乳糜瀉、慢性疲勞綜合征、Crohn病、皮肌炎、纖維肌痛、移植物抗宿主病、Grave病、橋本甲狀腺炎、先天性血小板減少性紫癜、扁平苔蘚、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、牛皮癬、風(fēng)濕熱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、

綜合征、全身性紅斑狼瘡、1型糖尿病、潰瘍性結(jié)腸炎、白癜風(fēng)以及類似疾病。
如本文所用，術(shù)語“腫瘤病”指良性(非癌性的)或惡性(癌性的)細(xì)胞的任何異常生長。
如本文所用，術(shù)語“正常細(xì)胞”指沒有經(jīng)歷異常生長或分裂的細(xì)胞。正常細(xì)胞是非癌性的并且不是任何過度增殖疾病或病癥的部分。
如本文所用，術(shù)語“抗腫瘤劑”指延遲目標(biāo)(例如惡性的)新生物的增殖、生長或擴(kuò)散的任何化合物。
如本文所用，術(shù)語“預(yù)防(prevent)”、“預(yù)防(preventing)”和“預(yù)防(prevention)”指減少動物中病理細(xì)胞(例如過度增殖的或腫瘤細(xì)胞)的出現(xiàn)。預(yù)防可是完全的，例如受治療者完全沒有病理細(xì)胞。預(yù)防還可是部分的，以使受治療者中病理細(xì)胞的出現(xiàn)少于未用本發(fā)明時將出現(xiàn)的病理細(xì)胞。
如本文所用，術(shù)語“凋亡調(diào)節(jié)劑”指參與調(diào)節(jié)(例如抑制、減少、增加、促進(jìn))凋亡的藥劑。凋亡調(diào)節(jié)劑的例子包括含有死亡結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)例如但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD和RIP。凋亡調(diào)節(jié)劑的其他例子包括但不限于TNFα、Fas配體、Fas/CD95的抗體和其他TNF家族受體、TRAIL(也稱為Apo2配體或Apo2L/TRAIL)、TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗體、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白質(zhì)。調(diào)節(jié)劑廣泛地包括TNF家族受體和TNF家族配體的激動劑和拮抗物。凋亡調(diào)節(jié)劑可是可溶的或膜結(jié)合的(例如配體或受體)。凋亡調(diào)節(jié)劑包括是凋亡的誘導(dǎo)物的那些，例如TNF或TNF相關(guān)配體，特別是TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體或TRAIL。
在本發(fā)明的一個方面，p53與MDM2之間相互作用的抑制劑是式I的化合物
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中 X是CH、O、N或S，其中如果X是O或S，則R8不存在； Y是O、S或NR′； R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、NR″COR′、NR′SO2R″、SO2NR′R″、(C＝NR′)NR″R′″或NR′R″；或 R7與R5或R6之一形成芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基； R8是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、SO2NR′R″或(C＝NR′)NR″R′″； R9代表6-氯和5-氟基團(tuán)；并且 每個R′、R″和R′″獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基或雜環(huán)；或 R′和R″、或R″和R′″形成環(huán)； 其中R3和R4之一是CONRR′，并且R和R′之一是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基。
在一個更加特別的實(shí)施方案中，式I的R1和R2之一是取代或未取代芳基(例如苯基)、取代或未取代雜芳基、環(huán)烷基、直鏈或支鏈烷基、酰胺或酯。
在另一個實(shí)施方案中，R5和R6之一是C3-18的烷基(例如丙基、異丙基、仲丁基、叔丁基、異戊基、環(huán)戊基、冰片基或金剛烷基)或5元或6元芳基或雜芳基。
在另一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有如式II或式III所示的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
在一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有式IV
其中R1-R9和Y如上文定義。
在另一個實(shí)施方案中，式IV的化合物具有如式V或式VI所示的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
在一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有式VII
其中R1-R9如上文定義。
在另一個實(shí)施方案中，式VII的化合物具有如式VIII或式IX所示的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
在一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有式X
其中 R1、R5、R7和R9如上文定義； R10是H；并且 R11是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基； 或R10和R11一起形成任選取代的單環(huán)-雜環(huán)烷基。
取代的環(huán)烷基-烷基的例子包括由下文描述的環(huán)烷基取代的C1-6烷基，所述環(huán)烷基進(jìn)一步由一個或多個羥基取代。雜環(huán)烷基的例子包括由下文描述的單環(huán)-雜環(huán)烷基取代的C1-6烷基。
環(huán)烷基-烷基的特別例子包括2-(3-羥基環(huán)戊基)乙氨基和3-(3-羥基環(huán)戊基)丙氨基。各個羥基可具有R或S構(gòu)型。
取代的雜環(huán)烷基的特別例子包括2-(1-嗎啉基)乙氨基和3-(1-嗎啉基)丙氨基。
二羥基烷基氨基的特別例子包括R和S的4，5-二羥基戊氨基和4-羥基-3-(甲基羥基)丁氨基。
預(yù)期當(dāng)羥基不存在于烷基的3位時，所述化合物在其制備期間可表現(xiàn)出提高的穩(wěn)定性。不限于任何特定的理論，提高的穩(wěn)定性可能是由于沒有親核性3-羥基，親核性3-羥基可能置換酰胺的氨基從而形成含6元酯的環(huán)。認(rèn)為不含有3-羥基的二羥基烷基將不會參與這一反應(yīng)并且將更加穩(wěn)定以及能夠以更高產(chǎn)量被制備。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式I的化合物具有式XI-XXVI之一
其中R1、R5、R7、R9、R10和R11如上文定義。
在另一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有式XXVII和式XXVIII之一
其中R1、R5、R7、R9、R10和R11如上文定義。
在另一個實(shí)施方案中，式I的化合物具有式XLVIII
其中 R1、R3、R4、R5和R9如上文定義。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式I的化合物具有式XLIX-LXIV之一
其中 R1、R3、R4、R5和R9如上文定義。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式I的化合物具有式LXV
其中 R1、R4、R5、R9、R10和R11如上文定義。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，式I的化合物具有式LXVI和LXVII之一
其中 R1、R4、R5、R9、R10和R11如上文定義。
本發(fā)明特別的實(shí)施方案包括但不限于以下化合物中的任何一個















本發(fā)明的另一個特別的實(shí)施方案包括但不限于以下化合物中的任何一個




有用的烷基包括直鏈或支鏈C1-18烷基，特別地甲基、乙基、丙基、異丙基、叔丁基、仲丁基、3-戊基、金剛烷基、冰片基和3-己基。
有用的烯基包括直鏈或支鏈C2-18烴基(alkyl groups)，特別地乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基和己烯基。
有用的炔基是C2-18炔基，特別地乙炔基、丙炔基、丁炔基和2-丁炔基。
有用的環(huán)烷基是C3-8環(huán)烷基。典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基。
有用的芳基包括C6-14芳基，特別地苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、甘菊環(huán)基、聯(lián)苯基、亞聯(lián)苯基(biphenylenyl)和芴基。
有用的雜芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、異苯并呋喃基、色烯基、呫噸基、吩呫噸基(phenoxanthenyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、酞嗪基(phthalzinyl)、萘啶基、喹喔啉基(quinozalinyl)、噌啉基、蝶啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、萘嵌間二氮雜苯基、菲咯啉基、吩嗪基、異噻唑基、吩噻嗪基、異噁唑基、呋咱基(furazanyl)、吩噁嗪基、1，4-二氫喹喔啉-2，3-二酮、7-氨基異香豆素、吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮、1，2-苯并異噁唑-3-基、苯并咪唑基、2-羥吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。在雜芳基的環(huán)上含有氮原子時，所述氮原子可是N-氧化物的形式，例如吡啶基N-氧化物、吡嗪基N-氧化物、嘧啶基N-氧化物以及類似物。
有用的雜環(huán)基包括單環(huán)雜環(huán)基，例如四氫呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基(piperizinyl)、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、嗎啉基、吡唑烷基、吡唑啉基以及類似物。多環(huán)雜環(huán)基包括二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、苯并二氫吡喃基、異苯并二氫吡喃基、tetronoyl、四氫異喹啉基以及與雜芳環(huán)稠合的雜環(huán)基，例如任選取代的5，6-二氫-8H-[1，2，4]三唑[4，3-A]吡嗪基。
任選的取代基包括一種或多種烷基；鹵素；鹵代烷基；環(huán)烷基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的芳基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；?、芳基或雜芳基任選地取代的芳氧基；芳烷基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；?、芳基或雜芳基任選地取代的雜芳基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的雜芳氧基；烷氧基；烷硫基(alkylthio)；芳硫基(arylthio)；酰氨基；氨基；氨基烷基、烷基氨基、酰氧基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的芳基酰氧基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；?、芳基或雜芳基任選地取代的二苯基氧膦基氧基(diphenylphosphinyloxy)；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺酰基、芳基、雜芳基、氨基酸取代的磺?；虬被嵫苌锶〈幕酋；芜x地取代的雜環(huán)；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的雜環(huán)?；挥靡环N或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺酰基、芳基或雜芳基任選地取代的雜環(huán)烷氧基；用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的部分未飽和的雜環(huán)烷基；或用一種或多種低級烷基、低級烷氧基、亞甲二氧基、鹵素、鹵代烷基、氨基磺?；⒎蓟螂s芳基任選地取代的部分未飽和的雜環(huán)烷氧基。
本發(fā)明的某些化合物可以立體異構(gòu)體存在，包括光學(xué)異構(gòu)體。本發(fā)明包括所有的立體異構(gòu)體，純的單獨(dú)立體異構(gòu)體制備物和每種富集的制備物，以及所述立體異構(gòu)體的外消旋混合物和單獨(dú)對映體，其可根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法分離。
結(jié)合下面的合成路線將更好地理解本發(fā)明的化合物和方法，所述路線闡明可制備本發(fā)明化合物的方法。起始原料可從商業(yè)來源獲得或通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的公認(rèn)的文獻(xiàn)方法制備。以下對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是十分明顯的以上定義的化合物可通過以下所示的合成中的合適試劑和藥劑的取代來合成。
具有式X的一般結(jié)構(gòu)的化合物可通過使用不對稱1，3-偶極環(huán)加成作為關(guān)鍵步驟來合成(路線1)。
路線1
試劑和條件a)CH2Cl2-CH3CN，KF-Al2O3，微波或甲醇、哌啶回流；b)

分子篩，甲苯，70℃；c)胺，室溫；d)Pb(OAc)4，CH2Cl2-MeOH(1∶1)，0℃，或硝酸鈰(IV)銨(CAN)，CH3CN，K2CO3，室溫。
具有式LXV的化合物通過與制備式X相似的方法制備(路線5)。
路線5
試劑和條件a)CH2Cl2-CH3CN，KF-Al2O3，微波或甲醇、哌啶回流；b)

分子篩，甲苯，70℃；c)胺，室溫；d)Pb(OAc)4，CH2Cl2-MeOH(1∶1)，0℃，或硝酸鈰(IV)銨(CAN)，CH3CN，K2CO3，室溫。
本發(fā)明的一個方面涉及制備MDM2抑制劑化合物的方法。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備具有式X的化合物的方法，包括 a)縮合式1的化合物和式2的化合物，例如在微波下，在存在催化劑(例如KF-Al2O3)或存在合適溶劑中的堿時，在溶劑或溶劑混合物(例如CH2Cl2和CH3CN)中縮合，以形成式3的化合物；
b)縮合式3的化合物和式4的化合物以及式5的化合物，例如在高溫下(例如約70℃)，在存在脫水劑(例如

分子篩)時，在非極性溶劑(例如甲苯)中縮合，以形成式6的化合物；以及
c)在合適溫度(例如約0℃或室溫)，在溶劑或溶劑混合物(例如CH2Cl2和MeOH、CH3CN)中，用氧化劑(例如Pb(OAc)4、硝酸鈰銨)處理式6的化合物以形成式X的化合物。

在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備具有式LXV的化合物的方法，包括 a)縮合式16的化合物和式2的化合物，例如在微波下，在存在催化劑(例如KF-Al2O3)或存在合適溶劑中的堿時，在溶劑或溶劑混合物(例如CH2Cl2和CH3CN)中縮合，以形成式17的化合物；
b)縮合式17的化合物和式4的化合物以及式5的化合物，例如在高溫下(例如約70℃)，在存在脫水劑(例如

分子篩)時，在非極性溶劑(例如甲苯)中縮合，以形成式18的化合物；以及
c)在合適溫度(例如約0℃或室溫)，在溶劑或溶劑混合物(例如CH2Cl2和MeOH、CH3CN)中，用氧化劑(例如Pb(OAc)4、硝酸鈰銨)處理式18的化合物以形成式LXV的化合物；
其中 R1、R5、R9、R10和R11如上文定義。
本發(fā)明的一個重要方面是式I的化合物誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和/或凋亡并且還單獨(dú)地或響應(yīng)其它凋亡誘導(dǎo)信號地加強(qiáng)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和/或凋亡。因此，預(yù)期這些化合物使細(xì)胞對細(xì)胞周期阻滯和/或凋亡的誘導(dǎo)敏感，包括對所述誘導(dǎo)刺激耐受的細(xì)胞。本發(fā)明的p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間相互作用的抑制劑可用于在可通過誘導(dǎo)凋亡被治療、改善或預(yù)防的任何病癥中誘導(dǎo)凋亡。在一個實(shí)施方案中，所述抑制劑可用于在含有功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)與凋亡相關(guān)的狀態(tài)，其與一種或多種凋亡調(diào)節(jié)劑相關(guān)。凋亡調(diào)節(jié)劑的例子包括但不限于Fas/CD95、TRAMP、TNF RI、DR1、DR2、DR3、DR4、DR5、DR6、FADD、RIP、TNFα、Fas配體、TRAIL、TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗體、Bcl-2、p53、BAX、BAD、Akt、CAD、PI3激酶、PP1和半胱天冬酶蛋白質(zhì)。還包括牽涉在凋亡的開始、決定性(decision)和降解階段中的其他藥劑。凋亡調(diào)節(jié)劑的例子包括其活性、存在或濃度的變化可在受治療者中調(diào)節(jié)凋亡的藥劑。凋亡調(diào)節(jié)劑包括是凋亡的誘導(dǎo)物的那些藥劑，例如TNF或TNF相關(guān)配體，特別是TRAMP配體、Fas/CD95配體、TNFR-1配體或TRAIL。
在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法用于治療動物(例如哺乳動物受治療者，包括但不限于人和脊椎動物)的患病的細(xì)胞、組織、器官或病理學(xué)疾患和/或疾病狀態(tài)。在這方面，多種疾病和病狀順從于使用本方法和組合物的治療或預(yù)防。這些疾病或疾患的非限制性示例列表包括但不限于乳腺癌癥(breast cancer)、前列腺癌癥(prostatecancer)、淋巴瘤、皮膚癌、胰腺癌癥(pancreatic cancer)、結(jié)腸癌癥(colon cancer)、黑素瘤、惡性黑素瘤、卵巢癌癥(ovarian cancer)、腦癌、原發(fā)性腦癌、頭頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、肝癌、膀胱癌、非小細(xì)胞肺癌、頭或頸癌、乳腺癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、肺癌、小細(xì)胞肺癌、維爾姆斯瘤、宮頸癌、睪丸癌、膀胱癌、胰腺癌(pancreatic carcinoma)、胃癌、結(jié)腸癌(coloncarcinoma)、前列腺癌(prostatic carcinoma)、泌尿系統(tǒng)腫瘤(genitourinary carcinoma)、甲狀腺癌、食道癌、骨髓瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎上腺癌、腎細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌、腎上腺皮質(zhì)癌、惡性胰腺胰島瘤、惡性類癌癌癥(malignant carcinoid carcinoma)、絨毛膜癌、蕈樣肉芽腫、惡性高鈣血癥、宮頸增生、白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病、急性粒細(xì)胞性白血病、毛細(xì)胞白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、卡波西肉瘤、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、軟組織肉瘤、骨原性肉瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥和眼癌以及類似疾病，T細(xì)胞和B細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾?。谎仔约膊?；感染；過度增殖疾?。籄IDS；退行性疾患(degenerative condition)、血管病以及類似疾病。在一些實(shí)施方案中，被治療的癌細(xì)胞是轉(zhuǎn)移性的。在其他的實(shí)施方案中，被治療的癌細(xì)胞是對抗癌劑耐受的。
在一些實(shí)施方案中，適于用本發(fā)明的組合物和方法治療的感染包括但不限于由病毒、細(xì)菌、真菌、支原體、朊蛋白以及類似物引起的感染。
本發(fā)明的一些實(shí)施方案提供施用有效量的式I的化合物和至少一種其它治療劑(包括但不限于化學(xué)治療抗腫瘤劑、凋亡調(diào)節(jié)劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗炎劑)和/或治療技術(shù)(例如手術(shù)介入和/或放射治療)的方法。
許多合適的抗癌劑可考慮用于本發(fā)明的方法中。事實(shí)上，本發(fā)明涉及但不限于施用多種抗癌劑，例如誘導(dǎo)凋亡的藥劑；多核苷酸(例如反義、核酶、siRNA)；多肽(例如酶和抗體)；生物學(xué)模擬物(biological mimetics)(例如棉子酚或BH3模擬物)；與諸如Bax等Bcl-2家族蛋白質(zhì)結(jié)合(例如寡聚或復(fù)合)的藥劑；生物堿；烷化劑；抗腫瘤抗生素；抗代謝物；激素；鉑化合物；單克隆抗體或多克隆抗體(例如與抗癌藥、毒素、防衛(wèi)素結(jié)合的抗體)，毒素；放射性核素；生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(例如干擾素(例如IFN-α)和白介素(例如IL-2))；過繼性免疫治療劑；造血生長因子；誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化的藥劑(例如全反式維甲酸)；基因治療劑(例如反義治療劑和核苷酸)；腫瘤疫苗；血管生成抑制劑；蛋白體抑制劑；NF-κB調(diào)質(zhì)；抗-CDK化合物；HDAC抑制劑；以及類似物。適于與所公開的化合物共同施用的化學(xué)治療化合物和抗癌治療的許多其他例子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。
在某些實(shí)施方案中，抗癌劑包括誘導(dǎo)或刺激凋亡的藥劑。誘導(dǎo)凋亡的藥劑包括但不限于放射(例如X射線、γ射線、UV)；腫瘤壞死因子(TNF)相關(guān)因子(例如TNF家族受體蛋白質(zhì)、TNF家族配體、TRAIL、TRAIL-R1或TRAIL-R2的抗體)；激酶抑制劑(例如表皮生長因子受體(EGFR)激酶抑制劑、血管生長因子受體(VGFR)激酶抑制劑、成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR)激酶抑制劑、血小板源性生長因子受體(PDGFR)激酶抑制劑和Bcr-Ab1激酶抑制劑(例如GLEEVEC))；反義分子；抗體(例如赫賽汀(HERCEPTIN)、RITUXAN、ZEVALIN和AVASTIN)；抗雌激素(例如雷洛昔芬和它莫西芬)；抗雄激素(例如氟他胺、比卡魯胺、非那司提、氨魯米特、酮康唑和皮質(zhì)類固醇)；環(huán)氧合酶2(COX-2)抑制劑(例如塞來昔布、美洛昔康、NS-398和非類固醇抗炎藥(NSAID))；抗炎藥(例如保泰松、地卡特隆(DECADRON)、DELTASONE、地塞米松、dexamethasone intensol、DEXONE、HEXADROL、羥化氯喹、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、羥基保泰松、PEDIAPRED、保泰松、PLAQUENIL、潑尼松龍、潑尼松、PRELONE和坦特利爾(TANDEARIL))；以及癌癥化療劑(例如依立替康(CAMPTOSAR)、CPT-11、氟達(dá)拉濱(福達(dá)華(FLUDARA))、達(dá)卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、MYLOTARG、VP-16、順鉑、碳鉑、奧沙利鉑、5-FU、多柔比星、吉西他濱、硼替佐米、吉非替尼、貝伐單抗、泰索帝(TAXOTERE)或泰素(TAXOL))；細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子；神經(jīng)酰胺和細(xì)胞因子；星形孢菌素(staurosporine)以及類似物。
在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供式I的化合物和選自烷化劑、抗代謝物和天然產(chǎn)物(例如源自草本和其他植物和/或動物的化合物)的至少一種抗過度增殖劑或抗腫瘤劑。
適用于本組合物和方法的烷化劑包括但不限于1)氮芥(例如二氯甲基二乙胺、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖(L-溶肉瘤素)和苯丁酸氮芥)；2)氮丙啶和甲基蜜胺(例如六甲蜜胺和噻替派)；3)磺酸烷基酯(例如白消安)；4)亞硝基脲(例如卡莫司汀(BCNU)；洛莫司汀(CCNU)；司莫司汀(甲基-CCNU)；和鏈佐星(鏈脲霉素))；和5)三氮烯(例如，達(dá)卡巴嗪(DTIC；三嗪咪唑胺)。
在一些實(shí)施方案中，適用于本組合物和方法的抗代謝物包括但不限于1)葉酸類似物(例如甲氨蝶呤(氨甲蝶呤))；2)嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶；5-FU)、氟尿苷(氟脫氧尿苷；FudR)和阿糖胞苷(胞嘧啶阿拉伯糖苷))；以及3)嘌呤類似物(例如巰嘌呤(6-巰嘌呤；6-MP)、硫鳥嘌呤(6-硫鳥嘌呤；TG)和噴司他丁(2’-脫氧助間型霉素(Deoxycoformycin)))。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，適用于本發(fā)明的組合物和方法的化療劑包括但不限于1)長春花生物堿(例如長春堿(VLB)、長春新堿)；2)表鬼臼毒素(例如依托泊苷和替尼泊苷)；3)抗生素(例如更生霉素(放線菌素D)、正定霉素(道諾霉素；紅比霉素)、多柔比星、博來霉素、光輝霉素(光神霉素)和絲裂霉素(絲裂霉素C))；4)酶(例如左旋天冬酰胺酶)；5)生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑(例如干擾素α)；6)鉑配位復(fù)合體(例如順鉑(順DDP)和碳鉑)；7)蒽二酮(例如米托蒽醌)；8)取代的脲(例如羥基脲)；9)甲基肼衍生物(例如甲基芐肼(N-甲基肼；MIH))；10)腎上腺皮質(zhì)抑制劑(例如米托坦(o，p′-DDD)和氨魯米特)；11)腎上腺皮質(zhì)類固醇(例如強(qiáng)的松)；12)孕激素(例如羥孕酮己酸酯、醋酸甲羥孕酮和醋酸甲地孕酮)；13)雌激素(例如己烯雌酚和乙炔雌二醇)；14)抗雌激素(例如它莫西芬)；15)雄激素(例如丙酸睪酮和氟甲睪酮)；16)抗雄激素(例如氟他胺)；和17)促性腺激素釋放激素類似物(例如亮丙瑞林)。
在癌癥治療背景中例行使用的任何溶瘤劑可用于本發(fā)明的組合物和方法。例如，美國食品和藥品管理局提供了批準(zhǔn)在美國使用的溶瘤劑的處方集。與U.S.F.D.A.相應(yīng)的國際機(jī)構(gòu)提供了相似的處方集。表1提供了批準(zhǔn)在美國使用的示例性的抗腫瘤劑的列表。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解所有美國批準(zhǔn)的化學(xué)治療劑所需的“產(chǎn)品標(biāo)簽”描述所述示例性的藥劑的批準(zhǔn)的適應(yīng)癥、劑量信息、毒性資料以及類似資料。
表1 抗癌劑進(jìn)一步包括已經(jīng)被鑒別為具有抗癌活性但目前沒有被美國食品和藥品管理局或其他相應(yīng)機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或正在經(jīng)受新用途的評估的化合物。例子包括但不限于3-AP、12-O-四癸酰佛波醇-13-乙酸酯、17AAG、852A、ABI-007、ABR-217620、ABT-751、AD I-PEG 20、AE-941、AG-013736、AGRO 100、阿拉諾新、AMG 706、抗體G 250、抗瘤酮、AP23573、apaziquone、APC 8015、阿替莫德、ATN-161、阿曲生坦(atrasenten)、氮雜胞苷、BB-10901、BCX-1777、貝伐單抗、BG00001、比卡魯胺、BMS247550、硼替佐米、苔蘚抑素1、布舍瑞林、骨化三醇、CCI-779、CDB-2914、頭孢克肟、西妥昔單抗、CG0070、西侖吉肽、克羅拉濱、考布他汀A4磷酸酯、CP-675，206、CP-724，714、CpG 7909、姜黃色素、地西他濱、DENSPM、度骨化醇、E7070、E7389、海鞘素743、乙丙昔羅、依洛尼塞、EKB-569、enzastaurin、厄洛替尼、依昔舒林、芬維A胺、夫拉平度、氟達(dá)拉濱、氟他胺、福莫司汀、FR901228、G17DT、加利昔單抗、吉非替尼、染料木素、葡磷酰胺、GTI-2040、組氨瑞林、HKI-272、高三尖杉酯堿、HSPPC-96，hu14.18-白介素-2融合蛋白、HuMax-CD4、伊洛前列素、咪喹莫特、英夫利昔單抗、白介素-12、IPI-504、伊羅夫文、伊沙匹隆、拉帕替尼、來那度胺、來妥替尼、亮丙瑞林、LMB-9免疫毒素、洛那法尼、魯昔單抗(luniliximab)、馬磷酰胺、MB07133、MDX-010、MLN2704、單克隆抗體3F8、單克隆抗體J591、莫特沙芬、MS-275、MVA-MUC1-IL2、尼魯特米、硝基喜樹堿、諾拉曲塞二氫氯化物、諾瓦得士(nolvadex)、NS-9、O6-苯甲基鳥嘌呤、奧利默森鈉、ONYX-015、奧戈伏單抗、OSI-774、帕尼單抗、鉑爾定、PD-0325901、培美曲塞、PHY 906、匹格列酮、吡非尼酮、匹杉瓊、PS-341、PSC 833、PXD101、吡唑啉吖啶、R115777、RAD001、豹蛙酶、蝴蝶霉素類似物、rhuAngiostatin蛋白、rhuMab 2C4、羅格列酮、盧比替康、S-1、S-8184、沙鉑、SB-，15992、SGN-0010、SGN-40、索拉非尼、SR31747A、ST1571、SU011248、辛二酰苯胺異羥肟酸、蘇拉明、talabostat、他侖帕奈、tariquidar、坦西莫司、TGFα-PE38免疫毒素、沙利度胺、胸腺法新、tipifarnib、替拉扎明、TLK286、trabectedin、葡醛酸三甲曲沙、TroVax、UCN-1、丙戊酸、長春氟寧、VNP40101M、volociximab、vorinostat、VX-680、ZD1839、ZD6474、齊留通和zosuquidar三鹽酸鹽。
對于抗癌劑和其他治療劑的更加詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考許多說明手冊，包括但不限于Physician′s Desk Reference(醫(yī)師案頭參考)以及Goodman和Gilman的“Pharmaceutical Basis ofTherapeutics(治療的藥物基礎(chǔ))”第10版，Hardman等人編，2002。
本發(fā)明提供伴隨放射治療施用式I的化合物的方法。本發(fā)明不受用于向動物傳遞治療劑量的放射的類型、量或傳遞和施用系統(tǒng)的限制。例如，所述動物可接受光子放射治療、粒子束放射治療、其他類型的放射治療和其組合。在一些實(shí)施方案中，放射通過使用線性加速器傳遞到動物。在其他的實(shí)施方案中，放射使用γ刀傳遞。
對動物來說放射源可是外部的或內(nèi)部的。外部放射治療是最普通的并且包括通過使用例如線性加速器指引一束高能射線穿過皮膚到達(dá)腫瘤位點(diǎn)。盡管所述一束射線定位于腫瘤位點(diǎn)，但避免正常健康組織的暴露幾乎是不可能的。然而，外部放射通常被動物很好地忍受。內(nèi)部放射治療包括植入放射發(fā)射源，例如微珠(bead)、金屬線、小丸、膠囊、顆粒以及類似物，其在身體內(nèi)處在腫瘤位點(diǎn)或其附近，包括使用特異性靶向癌細(xì)胞的傳遞系統(tǒng)(例如使用連接到癌細(xì)胞結(jié)合配體的顆粒)。所述植入物可在治療后移除，或無活性的留在體內(nèi)。內(nèi)部放射治療的類型包括但不限于短距離放射治療、間質(zhì)內(nèi)照射、腔內(nèi)照射、放射免疫療法以及類似方法。
所述動物可任選地接受放射敏化劑(例如甲硝噠唑、米索硝唑、動脈內(nèi)溴尿苷、靜脈內(nèi)碘脫氧尿苷(IudR)、硝基咪唑、5-取代-4-硝基咪唑、2H-異吲哚二酮、[[(2-溴乙基)-氨基]甲基]-硝基)-1H-咪唑-1-乙醇、硝基苯胺衍生物、DNA-親緣性缺氧選擇細(xì)胞毒素(DNA-affinichypoxia selective cytotoxins)、鹵化DNA配體、1，2，4苯并三嗪氧化物、2-硝基咪唑衍生物、含氟硝基唑衍生物、苯甲酰胺、煙酰胺、吖啶-嵌入劑、5-硫四唑衍生物(5-thiotretrazole derivative)、3-硝基-1，2，4-三唑、4，5-二硝基咪唑衍生物、羥化得克薩卟啉(texaphrins)、順鉑、絲裂霉素、替拉扎明(tiripazamine)、亞硝基脲、巰嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、博來霉素、長春新堿、碳鉑、表柔比星、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長春地辛、依托泊苷、紫杉醇、熱(體溫過高)以及類似物)、輻射防護(hù)劑(例如巰乙胺、氨基烷基二氫硫代磷酸酯、氨磷汀(WR 2721)、IL-1、IL-6以及類似物)。放射敏化劑加強(qiáng)殺死腫瘤細(xì)胞。輻射防護(hù)劑保護(hù)健康組織免受放射的有害作用。
任何類型的放射可施用于動物，只要動物耐受放射的劑量且沒有不可接受的負(fù)面的副作用。合適類型的放射治療包括，例如離子化(電磁)放射治療(例如X射線和γ射線)或粒子束放射治療(例如高能線性射線)。將離子化放射定義為含有具有足夠能量以產(chǎn)生離子化(即獲得或失去電子)的顆?；蚬庾拥姆派?例如，如美國5,770,581所述，其在此通過引用整體被并入)。放射的效應(yīng)可由臨床醫(yī)生至少部分地控制。在一個實(shí)施方案中，為了最大的靶細(xì)胞暴露和減少毒性，將放射的劑量分為幾個部分。
在一個實(shí)施方案中，施用于動物的放射的總劑量為約.01格雷(Gy)至約100Gy。在另一個實(shí)施方案中，在整個治療療程中施用約10Gy至約65Gy(例如約15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy或60Gy)。盡管在一些實(shí)施方案中在一天的療程中可施用放射的全部劑量，但是理想地將總劑量分為幾部分并在幾天施用。期望地，放射治療在至少約3天的療程中施用，例如至少5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52或56天(約1-8周)。因此，每日的放射劑量將包括大約1-5Gy(例如，約1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy或4.5Gy)或1-2Gy(例如1.5-2Gy)。每日的放射劑量應(yīng)該足以誘導(dǎo)靶細(xì)胞的破壞。在一個實(shí)施方案中，如果延伸一段時間，放射不每天施用，從而使動物休息并實(shí)現(xiàn)治療的效應(yīng)。例如，期望的放射是在每星期的治療中連續(xù)施用5天并停止施用2天，從而允許每星期休息2天。然而，放射可以1天/星期、2天/星期、3天/星期、4天/星期、5天/星期、6天/星期或全部7天/星期施用，其取決于動物的響應(yīng)性和任何可能的副作用。放射治療可在治療期間的任何時間開始。在一個實(shí)施方案中，放射在第1星期或第2星期開始，并且在治療周期的剩余時間施用。例如，放射在含有6個星期用于治療例如實(shí)體腫瘤的治療周期的第1-6星期或第2-6星期內(nèi)施用?？蛇x地，放射在含有5個星期的治療周期的第1-5星期或第2-5星期內(nèi)施用。然而，這些示例的放射治療施用方案無意限制本發(fā)明。
在本發(fā)明中，抗菌治療劑也可作為治療劑使用?？蓺⑺?、抑制或以其它方式削弱微生物有機(jī)體的功能的任何藥劑以及預(yù)期具有這樣的活性的任何藥劑可被使用?？咕鷦┌ǖ幌抻?，單獨(dú)或組合使用的天然的和合成的抗生素、抗體、抑制蛋白(例如防衛(wèi)素)、反義核酸、膜破壞劑以及類似物。事實(shí)上，可使用任何類型的抗生素，包括但不限于抗細(xì)菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑以及類似物。
在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，式I的化合物和一種或多種治療劑或抗癌劑按一種或多種以下條件施用于動物以不同的周期、以不同的持續(xù)時間、以不同的濃度，通過不同的施用途徑等。在一些實(shí)施方案中，所述化合物在治療劑或抗癌劑之前施用，例如在施用治療劑或抗癌劑前0.5、1、2、3、4、5、10、12或18個小時，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4星期施用。在一些實(shí)施方案中，所述化合物在治療劑或抗癌劑之后施用，例如在施用抗癌劑后0.5、1、2、3、4、5、10、12或18個小時，1、2、3、4、5或6天，或1、2、3或4星期施用。在一些實(shí)施方案中，所述化合物和治療劑或抗癌劑同時施用，但是按照不同的給藥方案，例如所述化合物每天施用而治療劑或抗癌劑按每周一次、每兩周一次、每三周一次或每四周一次施用。在其他的實(shí)施方案中，所述化合物按每周一次施用而治療劑或抗癌劑按每天、每周一次、每兩周一次、每三周一次或每四周一次施用。
屬于本發(fā)明的范圍的組合物包括含有有效實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的量的本發(fā)明化合物的所有藥物組合物。盡管個體的需求不同，確定每種組分的有效量的最優(yōu)范圍屬于本領(lǐng)域的技術(shù)。通常，可以以被治療響應(yīng)凋亡的誘導(dǎo)的病癥的哺乳動物體重的每天0.0025mg/kg至50mg/kg的劑量或等價量的其藥學(xué)上可接受的鹽將所述化合物口服施用于所述哺乳動物，例如人。在一個實(shí)施方案中，口服施用約0.01mg/kg至約25mg/kg以治療、改善或預(yù)防所述病癥。對于肌內(nèi)注射，所述劑量通常是約口服劑量的一半。例如，合適的肌內(nèi)劑量可是約0.0025mg/kg至約25mg/kg或約0.01mg/kg至約5mg/kg。
單位口服劑量可包括約0.01mg至約1000mg，例如約0.1mg至約100mg的化合物。所述單位劑量可以各含有約0.1mg至約10mg、適宜地約0.25mg至50mg的化合物或其溶劑化物的一個或多個片劑或膠囊每天一次或多次施用。
在局部制劑中，所述化合物可以約0.01mg至100mg每克載體的濃度存在。在一個實(shí)施方案中，所述化合物以約0.07-1.0mg/ml，例如約0.1-0.5mg/ml的濃度存在，并且在一個實(shí)施方案中，為約0.4mg/ml。
除了將所述化合物作為粗化學(xué)品施用外，本發(fā)明的化合物還可作為含有合適藥學(xué)上可接受載體的藥物制劑的部分來施用，所述藥學(xué)上可接受載體包括促進(jìn)所述化合物加工成可在藥學(xué)上使用的制劑的賦形劑和輔料。所述制劑，特別是可口服或局部施用的和可用于一種施用類型(例如片劑、糖衣丸、緩釋錠劑和膠囊、口腔沖洗劑和漱口劑、凝膠、液體懸浮液、護(hù)發(fā)液、發(fā)膠、洗發(fā)劑)的那些制劑和可直腸施用的制劑(例如栓劑)以及用于靜脈內(nèi)輸注、注射、局部或口服施用的合適溶液，含有約0.01％至99％的活性化合物，在一個實(shí)施方案中為約0.25％至75％的活性化合物，以及賦形劑。
本發(fā)明的藥物組合物可向可體驗(yàn)本發(fā)明化合物的有益效應(yīng)的任何動物施用。所述動物中最好的是哺乳動物，例如人，盡管本發(fā)明無意如此限制。其他的動物包括脊椎動物(牛、羊、豬、馬、狗、貓以及類似動物)。
所述化合物和其藥物組合物可以通過實(shí)現(xiàn)其預(yù)期目的的任何方式施用。例如，可通過腸胃外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、透皮、含服、鞘內(nèi)、顱內(nèi)、鼻內(nèi)或局部途徑施用?？蛇x地或同時地，可通過口服途徑施用。施用的劑量將取決于接受者的年齡、健康狀況和體重、同時治療的種類(如果有)、治療的頻率以及預(yù)期效應(yīng)的性質(zhì)。
本發(fā)明的藥物制劑以本身已知的方式來制備，例如通過常規(guī)的混合、?；?、糖衣丸制備、溶解或凍干工藝。因此，口服使用的藥物制劑可通過以下來獲得結(jié)合活性化合物和固體賦形劑，加入合適的輔料后(如果是期望的或必須的)任選地研磨獲得的混合物并加工顆粒的混合物，以獲得片劑或糖衣丸核。
特別地，合適的賦形劑是諸如糖類(例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇、纖維素制劑)和/或磷酸鈣(例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣)等填充劑以及諸如淀粉糊等粘合劑，其使用例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可加入崩解劑，例如以上提到的淀粉以及還有羧甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。輔料首先是流體調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其鹽(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)和/或聚乙二醇。如果需要，向糖衣丸核提供耐受胃液的合適的包衣。為這一目的，可使用濃的糖溶液，其可任選地含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。為制備耐受胃液的包衣，使用合適的纖維素制劑(例如鄰苯二甲酸乙酰纖維素或鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素)的溶液。例如為了鑒別或?yàn)榱吮碚骰钚曰衔飫┝康慕M合，可將染料或色素加入到片劑或糖衣丸包衣。
可口服使用的其他藥物制劑包括由明膠制備的推入配合式膠囊以及由明膠和諸如甘油或山梨醇等增塑劑制備的密封的軟膠囊。推入配合式膠囊可含有顆粒形式的活性化合物，所述顆?？膳c諸如乳糖等填充劑、諸如淀粉等粘合劑和/或諸如滑石或硬脂酸鎂等潤滑劑混合，以及任選地與穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，在一個實(shí)施方案中，所述活性化合物溶解或懸浮于合適的液體，例如脂肪油或液體石蠟。此外，可加入穩(wěn)定劑。
可直腸使用的可能的藥物制劑包括，例如栓劑，其由一種或多種活性化合物和栓劑基質(zhì)的組合物組成。合適的栓劑基質(zhì)是，例如天然的或合成的甘油三酯或烷屬烴。此外，使用由活性化合物和基質(zhì)的組合物組成的明膠直腸膠囊也是可能的。可能的基質(zhì)材料包括，例如液態(tài)甘油三酯、聚乙二醇或烷屬烴。
用于腸胃外施用的合適的制劑包括水溶形式(例如水溶性鹽和堿性溶液)的活性化合物的水溶液。此外，可施用作為合適的油性注射懸浮液的活性化合物的懸浮液。合適的親脂性溶劑或媒介物包括例如芝麻油的脂肪油或例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400的合成的脂肪酸酯。含水注射懸浮液可包括增加懸浮液粘性的物質(zhì)，包括，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖。任選地，所述懸浮液還可包括穩(wěn)定劑。
在一個實(shí)施方案中，通過選擇合適的載體將本發(fā)明的局部組合物配制為油狀物、乳膏、洗液、軟膏以及類似物。合適的載體包括植物油或礦物油、白凡士林(白軟石蠟)、支鏈脂肪或油、動物脂肪和高分子量的醇(大于C12)。所述載體可是活性成分在其中可溶的那些載體。如果需要，還可包括乳化劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑和抗氧化劑以及給予顏色或香味的藥劑。此外，在這些局部制劑中可使用透皮滲透增強(qiáng)劑。所述增強(qiáng)劑的例子可參見美國專利第3,989,816和4,444,762號。
乳膏可由礦物油、自乳化蜂蠟和水的混合物配制，在所述混合物中混合溶解于少量油(例如杏仁油)的活性成分。所述乳膏的典型例子是含有約40份水、約20份蜂蠟、約40份礦物油和約1份杏仁油的乳膏。
軟膏可通過混合活性成分的植物油(例如杏仁油)溶液和熱的軟石蠟并使混合物冷卻來配制。所述軟膏的典型例子是含有按重量計約30％杏仁油和約70％白軟石蠟的軟膏。
洗液可通過將活性成分溶解于例如丙二醇或聚乙二醇的合適的高分子量的醇來方便地制備。
以下的實(shí)施例示例本發(fā)明的方法和組合物但不限制本發(fā)明的方法和組合物。在臨床治療中通常遇到的多種條件和參數(shù)的其他合適的修改和調(diào)整以及對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說明顯的修改和調(diào)整在本發(fā)明的主旨和范圍內(nèi)。
實(shí)施例1 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.70(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.09(m，1H)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.22(d，1H，J＝11.4Hz)，4.39(m，1H)，4.11(d，1H，J＝11.1Hz)，3.65-3.32(m，9H)，1.85(m，1H)，1.60(m，1H)，1.41(m，1H)，1.19(m，1H)，0.84(s，9H)。
實(shí)施例2 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2，3-二羥基-丙基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.74(d，1H，J＝7.5Hz)，7.35-7.15(m，3H)，7.11(m，1H)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.22(d，1H，J＝11.4Hz)，4.33(m，1H)，4.28(d，1H，J＝10.5Hz)，3.67(m，2H)，3.65-3.32(m，4H)，2.05(m，1H)，1.90(m，1H)，1.56(m，1H)，0.87(s，9H)。
實(shí)施例3 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，5-二羥基-戊基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.35-7.15(m，3H)，7.10(m，1H)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.23(d，1H，J＝11.1Hz)，4.65(m，1H)，4.13(d，1H，J＝11.4Hz)，3.61(m，2H)，3.65-3.32(m，5H)，2.02(m，1H)，1.93(m，1H)，1.56(m，3H)，1.15(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例4 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸[2-(3-羥基-環(huán)戊基)-乙基]-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.10(m，1H)，6.86(m，1H)，5.24(d，1H，J＝11.1Hz)，4.35(d，1H，J＝8.4Hz)，4.09(m，1H)，3.61-3.32(m，2H)，2.96(m，1H)，2.21-1.12(m，11H)，0.85(s，9H)。
實(shí)施例5 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸[2-(3-羥基-環(huán)戊基)-乙基]-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.10(m，1H)，6.86(m，1H)，5.24(d，1H，J＝11.1Hz)，4.48(d，1H，J＝8.4Hz)，4.12(m，1H)，3.64-3.32(m，2H)，2.96(m，1H)，2.20-1.10(m，11H)，0.85(s，9H)。
實(shí)施例6 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸[2-(3-羥基-環(huán)戊基)-乙基]-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.10(m，1H)，6.86(m，1H)，5.24(d，1H，J＝11.1Hz)，4.47(d，1H，J＝8.4Hz)，4.11(m，1H)，3.65-3.32(m，2H)，2.96(m，1H)，2.20-1.10(m，11H)，0.91(s，9H)。
實(shí)施例7 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸[2-(3-羥基-環(huán)戊基)-乙基]-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.38-7.22(m，3H)，7.10(m，1H)，6.87(m，1H)，5.23(d，1H，J＝11.1Hz)，4.48(d，1H，J＝8.4Hz)，4.12(m，1H)，3.56-3.25(m，2H)，2.98(m，1H)，2.20-1.10(m，11H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例8 6-氯-4′-(3-氯-4-氟-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(4，5-二羥基-戊基)-酰胺
1H NMR(CD3OD，300MHz)，δ7.73(d，J＝8.4Hz，1H)，7.41(d，J＝7.0Hz，1H)，7.14(d，J＝6.7Hz，2H)，5.25(d，J＝11.3Hz，1H)，4.49(d，J＝6.6Hz，1H)，4.15(d，J＝6.4Hz，1H)，3.48-3.10(m，5H)，1.94(dd，J＝8.1，15.4Hz，1H)，1.70-1.10(m，5H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例9 6-氯-4′-(3-氯-4-氟-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3-嗎啉-4-基-丙基)-酰胺
1H NMR(CD3OD，300MHz)，δ7.82-7.19(m，4H)，6.90(d，J＝5.56，1H)，5.39(d，J＝9.9Hz，1H)，4.55(d，J＝6.9Hz，1H)，4.28(d，J＝9.3Hz，1H)，4.20-3.85(m，4H)，3.70-3.40(m，2H)，3.25-3.00(m，4H)，2.20-1.85(m，3H)，1.69(d，J＝15.3Hz，2H)，0.934(s，9H)，0.70(t，J＝11.3Hz，1H)。
實(shí)施例10 6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(4-羥基-3-羥甲基-丁基)-酰胺
H1(300MHz CD3OD)，δ8.56(s br，1H)，7.68(t，J＝6.6Hz，1H)，7.42(t，J ＝7.2Hz，1H)，7.25(t，J＝7.8Hz，1H)，7.05(d，J＝8.7Hz，1H)，6.95(d，J＝6.0Hz，1H)，5.22(d，J＝10.5Hz，1H)，4.54(d，J＝10.5Hz，1H)，4.34-4.31(m，1H)，3.51-3.49(m，4H)，3.36-3.32(m，2H)，2.08(dd，J＝15.3，7.5Hz，1H)，1.53-1.49(m，2H)，1.33(dd，J＝15.3，2.7Hz，1H)，0.93-0.89(m，1H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例11
H1(300MHz CD3OD)，δ8.56(s br，1H)，7.65(t，J＝6.6Hz，1H)，7.45(t，J＝7.2Hz，1H)，7.26(t，J＝7.8Hz，1H)，7.01(d，J＝8.7Hz，1H)，6.95(d，J＝6.0Hz，1H)，5.14(d，J＝10.5Hz，1H)，4.51(d，J＝10.5Hz，1H)，4.26(m，1H)，3.55-3.50(m，2H)，3.37-3.31(m，3H)，2.08-2.02(m，1H)，1.71-1.45(m，2H)，1.35-1.23(m，3H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例12 6-氯-4′-(3-氯-2-氟-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MI-419)
H1(300MHz CD3OD)，δ8.55(s br，1H)，7.66(t，J＝6.6Hz，1H)，7.42(t，J＝7.8Hz，1H)，7.28-7.23(m，2H)，7.01(d，J＝8.7Hz，1H)，6.95(d，J＝6.0Hz，1H)，5.20(d，J＝10.5Hz，1H)，4.53(d，J＝10.5Hz，1H)，4.26(m，1H)，3.52(m，1H)，3.40-3.33(m，4H)，2.03(m，1H)，1.71-1.45(m，2H)，1.35-1.28(m，1H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例13 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2-嗎啉-4-基-乙基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.74(d，1H，J＝7.5Hz)，7.35-7.15(m，3H)，7.11(m，1H)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.22(d，1H，J＝11.4Hz)，4.55(d，1H，J＝9.6Hz)，4.24(d，1H，J＝6.3Hz)，4.20-3.85(m，4H)，3.70-3.40(m，4H)，3.25-3.00(m，4H)，2.09(m，1H)，1.27(m，1H)，0.934(s，9H)。
實(shí)施例14 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3-嗎啉-4-基-丙基)-酰胺
1H NMR(CD3OD，300MHz)，δ7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.38-7.22(m，3H)，7.10(m，1H)，6.87(m，1H)，5.23(d，1H，J＝11.1Hz)，4.55(d，J＝6.9Hz，1H)，4.28(d，J＝9.3Hz，1H)，4.20-3.85(m，4H)，3.70-3.40(m，2H)，3.25-3.00(m，4H)，2.20-1.85(m，4H)，1.69(d，J＝15.3Hz，2H)，0.934(s，9H)。
實(shí)施例15 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(4，5-二羥基-戊基)-酰胺
1H NMR(CD3OD，300MHz)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.10(m，1H)，6.86(m，1H)，5.24(d，1H，J＝11.1Hz)，4.51(d，J＝10.5Hz，1H)，4.26(m，1H)，3.55-3.50(m，2H)，3.37-3.31(m，3H)，2.08-2.02(m，2H)，1.71-1.45(m，2H)，1.35-1.23(m，3H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例16 6-氯-4′-(3-氯-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(4-羥基-3-羥甲基-丁基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OH)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40-7.20(m，3H)，7.10(m，1H)，6.86(m，1H)，5.24(d，1H，J＝11.1Hz)，4.54(d，J＝10.5Hz，1H)，4.34-4.31(m，1H)，3.51-3.49(m，4H)，3.36-3.32(m，2H)，2.08(dd，J＝15.3，7.5Hz，1H)，1.53-1.49(m，2H)，1.33(dd，J＝15.3，2.7Hz，1H)，0.93-0.89(m，1H)，0.86(s，9H)。
實(shí)施例17 (2′R，3S，3″S，4′R，5′R)6-氯-4′-(3-氯-4-氟-苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺(MI-319)
分子式C27H31Cl2F2N3O4.HCl(鹽酸鹽)1H NMR(300MHz，MeOD)，δ8.44(m，1H)，7.70(d，1H，J＝8.4Hz)，7.41(m，1H)，7.14(m，2H)，6.90(d，1H，J＝6.0Hz)，5.20(d，1H，J＝11.1Hz)，4.47(d，1H，J＝8.1Hz)，4.14(d，1H，J＝10.8Hz)，3.47(m，4H)，1.91(dd，1H，J＝15.6，8.4Hz)，1.57(m，1H)，1.43(m，1H)，1.21(dd，1H，J＝15.6，1.8Hz)，0.92(s，9H)；13C NMR(75MHz，MeOD)，δ176.28，166.52，157.03，153.19，139.65，130.67，129.58，129.48，128.46，128.40，124.54，124.44，122.58，122.33，121.41，121.17，117.21，116.93，113.37，113.03，112.41，69.69，66.05，64.36，62.93，61.91，55.48，42.25，36.99，32.59，29.84，28.40。
實(shí)施例18 (MI-219)
實(shí)施例19 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-環(huán)戊基甲基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MDM2-319-1)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.72(d，1H，J＝8.5Hz)，7.46-7.40(m，1H)，7.23-7.12(m，2H)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.12(d，1H，J＝11.3Hz)，4.39-4.35(m，1H)，4.14(d，1H，J＝11.3Hz)，3.41-3.28(m，5H)，1.92-1.78(m，2H)，1.62-1.42(m，8H)，1.28(d，1H，J＝15.8Hz)，1.10-0.90(m，2H)。
實(shí)施例20 (MDM2-319-2)
實(shí)施例21 (MDM2-319-3)
實(shí)施例22 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-環(huán)己基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MDM2-319-4)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.54-8.40(m，2H)，7.56(d，1H，J＝8.4Hz)，7.31-7.29(m，1H)，7.16-7.11(m，2H)，6.82(d，1H，J＝6.1Hz)，4.99-4.95(m，1H)，4.21-4.01(m，2H)，3.39-3.19(m，5H)，2.50-2.40(m，1H)，2.00-1.83(m，2H)，1.63-1.54(m，4H)，1.44-1.09(m，6H)。
實(shí)施例23 (MDM2-319-5)
實(shí)施例24 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸[2-(3-羥基-環(huán)戊基)-乙基]-酰胺 (MDM2-319-6)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.52-8.49(m，1H)，7.72(d，1H，J＝8.5Hz)，7.40(d，1H，J＝10.0Hz)，7.16-7.15(m，2H)，6.90(d，1H，J＝6.0Hz)，5.27-5.23(m，1H)，4.49(d，1H，J＝8.2Hz)，4.14-4.07(m，2H)，3.24-3.22(m，1H)，3.10-3.02(m，1H)，1.93-1.83(m，2H)，1.75-1.18(m，7H)，1.05-0.93(m，1H)，0.92(s，9H)，0.85-0.81(m，1H)。
實(shí)施例25 (MI-319-7)
實(shí)施例26 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-環(huán)戊基-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MI-319-8)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.68(d，1H，J＝8.5Hz)，7.40-7.37(m，1H)，7.16-7.11(m，2H)，6.86(d，1H，J＝6.0Hz)，5.15(d，1H，J＝11.6Hz)，4.27(d，1H，J＝11.0Hz)，4.15(d，1H，J＝11.6Hz)，3.39-3.24(m，5H)，2.30-2.28(m，1H)，2.10-2.05(m，1H)，1.62-1.31(m，7H)，1.15-1.12(m，1H)，0.78-0.75(m，1H)。
實(shí)施例27 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-5′-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-1H-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-2-酮 (MI-319-9)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.73-7.70(m，1H)，7.58-7.51(m，1H)，7.29-7.19(m，2H)，6.93-6.89(m，1H)，5.83-5.80(m，1H)，4.70-4.68(m，1H)，4.44-4.25(m，2H)，3.98-3.52(m，3H)，3.36-3.22(m，2H)，2.92-2.85(m，3H)，2.40-1.89(m，2H)，1.20(d，1H，J＝15.3Hz)，0.95-0.90(m，9H)。
實(shí)施例28 (MI-319-10)
實(shí)施例29 (MI-319-11)
實(shí)施例30 (MI-319-11-A)
實(shí)施例31 (MI-319-12)
實(shí)施例32 1′-乙?；?6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MI-319-13)
1H NMR(300MHz，CD3Cl)，δ8.08(s，1H)，7.19-7.12(m，1H)，6.93-6.77(m，4H)，4.93(d，1H，J＝10.2Hz)，4.75(d，1H，10.2Hz)，4.00-3.98(m，1H)，3.78-3.30(m，5H)，2.80-2.77(m，1H)，2.23(s，3H)，1.76-1.64(m，1H)，1.56-1.52(m，2H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例33 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1′-氧-1，2，4′，5′-四氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺 (MI-319-14)
1H NMR(300MHz，CD3Cl)，δ7.35-7.27(m，1H)，7.09-7.07(m，1H)，6.92-6.89(m，1H)，6.79-6.75(m，2H)，5.55(d，1H，J＝11.0Hz)，4.20(d，1H，J＝11.0Hz)，3.67-3.65(m，2H)，3.44-3.32(m，3H)，2.80(d，1H，J＝13.1Hz)，1.80(d，1H，J＝13.1Hz)，1.70-1.60(m，2H)，0.84(s，9H)。
實(shí)施例34 {[6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羰基]-氨基}-乙酸 (MI-319-15)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.64(d，1H，J＝8.4Hz)，7.38(d，1H，J＝6.2Hz)，7.27-7.21(m，1H)，7.10-7.07(m，1H)，6.90-6.84(m，1H)，5.08(d，1H，J＝9.9Hz)，4.22-3.88(m，4H)，1.76-1.68(m，1H)，1.12-1.06(m，1H)，0.84(s，9H)。
實(shí)施例35 (MI-319-16)
實(shí)施例36 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2-咪唑-1-基-乙基)-酰胺 (MI-319-17)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.99(s，1H)，7.78(d，1H，J＝8.4Hz)，7.50-7.45(m，2H)，7.37-7.35(m，1H)，7.19-7.11(m，2H)，6.89(d，1H，J＝6.0Hz)，5.32(d，1H，J＝11.4Hz)，4.52(d，1H，J＝6.8Hz)，4.41-4.36(m，2H)，4.19(d，1H，J＝11.4Hz)，3.73-3.31(m，2H)，1.99-1.91(m，1H)，1.21-1.16(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例37 7-{[6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羰基]-氨基}-3，5-二羥基-庚酸 (MI-319-18)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.60(d，1H，J＝8.4Hz)，7.37(d，1H，J＝7.5Hz)，7.08-7.06(m，2H)，6.87-6.84(m，1H)，4.84(d，1H，J＝10.2Hz)，4.15-4.08(m，1H)，4.00-3.96(m，2H)，3.80-3.75(m，1H)，3.36-3.32(m，2H)，2.49-2.43(m，2H)，1.65-1.55(m，6H)，1.04(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例38 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2，3，4-三羥基-丁基)-酰胺 (MI-319-19)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.83-7.66(m，1H)，7.30-7.10(m，3H)，6.92-6.88(m，1H)，5.30-5.11(m，1H)，4.48-4.21(m，1H)，4.15-3.95(m，1H)，3.64-3.60(m，2H)，3.51-3.47(m，2H)，3.32-3.24(m，2H)，1.95-1.88(m，1H)，1.23-1.13(m，1H)，0.92-0.82(m，9H)。
實(shí)施例39 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2-胍基-乙基)-酰胺 (MI-319-20)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.39(d，1H，J＝6.7Hz)，7.14-7.04(m，2H)，6.89(d，1H，J＝5.8Hz)，5.24(d，1H，J＝11.3Hz)，4.44(d，1H，J＝8.0Hz)，3.80-3.65(m，2H)，3.08-3.00(m，2H)，1.89-1.87(m，1H)，1.71-1.64(m，2H)，1.40-1.33(m，1H)，0.91(s，9H)。
實(shí)施例40 (MI-319-21)
實(shí)施例41 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-5-氟-2′-(2-甲基-丙烯基)-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(3，4-二羥基-丁基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3Cl)，δ8.19-8.11(m，1H)，7.28-7.19(m，3H)，6.96-6.85(m，2H)，6.68(d，1H，J＝5.9Hz)，4.97(d，1H，J＝8.9Hz)，4.60-4.55(m，1H)，4.30-4.27(m，1H)，3.82(d，1H，J＝9.2Hz)，3.71-3.23(m，4H)，1.58-1.54(m，5H)，1.46(s，3H)。
實(shí)施例42 6-氯-4′-(3-氯-4-氟苯基)-2′-(2，2-二甲基-丙基)-5-氟-2-氧代-1，2-二氫-螺環(huán)[吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酸(2-脲基-乙基)-酰胺
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ7.71(d，1H，J＝8.4Hz)，7.43(d，1H，J＝6.0Hz)，7.15-7.12(m，2H)，6.93-6.89(m，1H)，5.19(d，1H，J＝11.2Hz)，4.48(d，1H，J＝11.2Hz)，4.16-4.13(m，1H)，3.32-3.23(m，2H)，2.97-2.89(m，2H)，1.95-1.90(m，1H)，1.57-1.53(m，2H)，1.23-1.18(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例43 (2′R，3S，4′R，5′R)-6-氯-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-4′-(3-氟苯基)-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-1)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.43(m，1H)，7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.30-7.15(m，1H)，7.06(d，2H，J＝8.88Hz)，6.95(d，1H，J＝7.8Hz)，6.88(d，1H，J＝6.0Hz)，5.28(d，1H，J＝11.3Hz)，4.51-4.40(m，1H)，4.16(d，J＝11.3Hz)，3.50-3.20(m，5H)，1.93(dd，1H，J＝8.3，15.5Hz)，1.62-1.36(m，2H)，1.23-1.13(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例44 (2′R，3S，4′S，5′R)-6-氯-4′-(2，3-二氟苯基)-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-2)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.47(m，1H)，7.73(d，1H，J＝7.2Hz)，7.43-7.30(m，1H)，7.23-7.15(m，2H)，6.89(d，1H，J＝6.0Hz)，5.29(d，1H，J＝11.1Hz)，4.64(d，1H，J＝11.4Hz)，4.58-4.50(m，1H)，3.50-3.20(m，5H)，1.93(dd，1H，J＝8.3，15.5Hz)，1.67-1.36(m，2H)，1.23-1.13(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例45 (2′R，3S，4′R，5′R)-6-氯-4′-(3，4-二氟苯基)-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-3)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.43(m，1H)，7.73-7.69(m，1H)，7.27-1.10(m，2H)，6.97-6.94(m，1H)，6.90(d，1H，J＝6.0Hz)，5.26-5.23(m，1H)，4.49(d，1H，J＝7.5Hz)，4.16-4.13(m，1H)，3.50-3.15(m，5H)，1.96-1.88(m，1H)，1.62-1.40(m，2H)，1.23-1.13(m，1H)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例46 (2′R，3S，4′S，5′R)-6-氯-4′-(2，5-二氟苯基)-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-5)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.49(m，1H)，7.71(d，1H，J＝7.2Hz)，7.45-7.40(m，1H)，7.15-7.00(m，2H)，6.89(d，1H，J＝6.0Hz)，5.23(d，1H，J＝11.1Hz)，4.63(d，1H，J＝11.4Hz)，4.58-4.50(m，1H)，3.50-3.20(m，5H)，1.93(dd，1H，J＝8.3，15.5Hz)，1.67-1.36(m，2H)，1.18(dd，1H，J＝1.9，15.5Hz)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例47 (2′R，3S，4′S，5′R)-6-氯-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-4′-(2-氟苯基)-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-6)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.43(m，1H)，7.70-7.64(m，2H)，7.40-7.18(m，2H)，7.01-6.94(m，1H)，6.85(d，1H，J＝6.0Hz)，5.25(d，1H，J＝11.3Hz)，4.62(d，1H，J＝12Hz)，4.55-4.52(m，1H)，3.50-3.20(m，5H)，1.91(dd，1H，J＝8.3，15.5Hz)，1.62-1.32(m，2H)，1.18(dd，1H，J＝1.8，15.3Hz)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例48 (2′R，3S，4′R，5′R)-6-氯-N-((S)-3，4-二羥基丁基)-5-氟-4′-(4-氟苯基)-2′-新戊基-2-氧代螺環(huán)[二氫吲哚-3，3′-吡咯烷]-5′-羧酰胺 (MI-519-7)
1H NMR(300MHz，CD3OD)，δ8.39(m，1H)，7.70(d，1H，J＝8.5Hz)，7.25-7.21(m，2H)，7.03-6.96(m，2H)，6.87(d，1H，J＝6.0Hz)，5.26(d，1H，J＝11.3Hz)，4.48(m，1H，)，4.12(d，J＝11.4Hz)，3.50-3.20(m，5H)，1.92(dd，1H，J＝8.3，15.5Hz)，1.62-1.32(m，2H)，1.20(dd，1H，J＝2.0，15.3Hz)，0.92(s，9H)。
實(shí)施例49 細(xì)胞生長的抑制 非肽小分子抑制劑優(yōu)于基于肽的抑制劑的一個主要優(yōu)點(diǎn)是其較高的細(xì)胞滲透性。預(yù)期p53-MDM2相互作用的有效的非肽抑制劑通過刺激p53的活性將有效抑制具有野生型形式的p53的癌細(xì)胞的細(xì)胞生長和分裂。此外，預(yù)期它們對具有p53缺失或突變的非功能性形式的p53的癌細(xì)胞具有選擇性。為了檢驗(yàn)這些預(yù)測，使用人前列腺癌LNCaP(p53野生型)和PC-3(無p53)細(xì)胞系進(jìn)行了細(xì)胞生長測定。檢測了本發(fā)明化合物的毒性效應(yīng)。
將細(xì)胞以3-4×103個細(xì)胞/孔的密度接種于96孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板并在存在化合物的情況下培養(yǎng)4天。使用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4二磺基苯基)-2H-四唑鎓一鈉鹽)(Dojindo Molecular Technologies Inc.，Gaithersburg，Maryland)測定用遞增濃度的化合物處理后的細(xì)胞生長抑制率。WST-8以10％的最終濃度加至每個孔并且所述板在37℃下培養(yǎng)2-3小時。在450nm下，在平板讀取器(Molecular Device-TECAN ULTRA)中測量樣品的吸光度。通過對比未處理細(xì)胞和用化合物處理的細(xì)胞的吸光度計算抑制50％細(xì)胞生長的化合物的濃度(IC50)。如表2所示，與p53-陰性PC3(p53-negative PC3)細(xì)胞相比，本發(fā)明的化合物約5倍至約50倍更加有效地抑制p53-陽性LNCaP(p53-positive LNCaP)細(xì)胞的細(xì)胞生長。
針對HCT116(野生型p53)和HT-29(突變p53)結(jié)腸癌細(xì)胞系，相似地檢測了本發(fā)明的化合物。如表2所示，與p53-陰性HCT116細(xì)胞相比，大多數(shù)所檢測的化合物表現(xiàn)出較高的抑制p53-陽性HCT116細(xì)胞的細(xì)胞生長的效力，效力的最大差異為約25倍。
由于正常細(xì)胞也具有野生型p53，發(fā)展p53-MDM2相互作用的抑制劑作為新的抗癌藥物的潛在擔(dān)憂是它們可能是非選擇性的并且它們殺死癌細(xì)胞與殺死正常細(xì)胞時具有相等的活性。將在具有野生型p53的正常人前列腺上皮細(xì)胞(PrEC)中評估化合物以確定它們是否表現(xiàn)出對癌細(xì)胞的良好選擇性。
表2 計算KiMDM2[10nM]；F-6[1nM]；新樣品MDM2蛋白質(zhì) Kd0.88±0.41nM(雙曲線方程；使用1nM 6F) Kd2.22±0.93nM(Klotz圖；使用1nM 6F) 實(shí)施例50 MDM2抑制劑對p53和它的靶基因產(chǎn)物MDM2和p21的表達(dá)的效應(yīng) 用檢測化合物或0.1％DMSO處理癌細(xì)胞24小時。通過胰蛋白酶消化收獲細(xì)胞，并以pH 7.5的冷磷酸鹽緩沖鹽溶液(Invitrogen，Carlsbad，CA)洗滌細(xì)胞。細(xì)胞在冰冷的裂解緩沖液(50mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1mM EDTA(pH 8.0)，25mM氟化鈉，1％NP-40和0.1％SDS)中裂解30分鐘，所述裂解緩沖液含有2mM正釩酸鈉、1mM苯甲基磺酰氟和蛋白酶抑制劑混合物(protease inhibitorcocktail)(Roche Applied Science，Indianapolis，IN)。然后，在4℃下細(xì)胞提取物以12,000×g離心10分鐘以獲得澄清的裂解產(chǎn)物。通過Bio-Rad染色評估蛋白質(zhì)。在4-20％的tris-甘氨酸凝膠(Invitrogen，Carlsbad，CA)上分辨含有35μg蛋白質(zhì)的細(xì)胞裂解產(chǎn)物并且轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯膜上。通過使用抗p53(Ab-6，OncogeneResearch Products，Boston，MA)、抗MDM2(SMP 14，Santa CruzBiotechnology，Santa Cruz，CA)和抗p21(BD Biosciences，SanDiego，CA)的小鼠單克隆抗體進(jìn)行轉(zhuǎn)移膜上的蛋白質(zhì)的免疫檢測。使用β-肌動蛋白的抗體(Sigma，St Louis，MO)評估蛋白質(zhì)負(fù)載(protein loading)。當(dāng)RKO(野生型p53)和HT-29(突變p53)結(jié)腸癌細(xì)胞系用本發(fā)明的化合物處理24小時時，預(yù)期所述化合物將僅在表達(dá)野生型p53的RKO細(xì)胞中誘導(dǎo)p53和它的靶基因產(chǎn)物的積累。
實(shí)施例51 由MDM2抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡和凋亡 在6孔皮氏培養(yǎng)皿中，將RKO(野生型p53)和HT-29(突變p53)結(jié)腸癌細(xì)胞系和CCD-18Co正常結(jié)腸成纖維細(xì)胞用遞增劑量的本發(fā)明化合物處理4天。進(jìn)行臺盼藍(lán)染色排除試驗(yàn)以測定所述抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力。處理4天后，收獲漂浮細(xì)胞和粘附細(xì)胞并且用0.2％的臺盼藍(lán)溶液(Sigma，St Louis，MO)染色。每個處理進(jìn)行3次，并且計數(shù)至少100個細(xì)胞。染成藍(lán)色的細(xì)胞或形態(tài)學(xué)不健康的細(xì)胞被記為死細(xì)胞。為了評估凋亡，通過碘化丙錠(PI)染色來分析用或沒用測試抑制劑處理的細(xì)胞中的亞二倍體DNA含量。用冷PBS洗滌一次后，細(xì)胞在-20℃下用70％的乙醇固定1天。然后，乙醇固定的細(xì)胞用PBS洗滌兩次，并在暗處在室溫下用含有50μg/ml碘化丙錠(PI)和100μg/ml核糖核酸酶A的PBS染色液染色20分鐘。通過使用CellQuest軟件的流式細(xì)胞計進(jìn)行細(xì)胞的獲得和亞二倍體DNA含量的分析。預(yù)期只有表達(dá)野生型p53的癌細(xì)胞將經(jīng)歷響應(yīng)施用所述化合物的凋亡。
實(shí)施例52 MDM2抑制劑對結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程的效應(yīng) 在RKO(野生型p53)和HT-29(突變p53)結(jié)腸癌細(xì)胞系和CCD-18Co正常結(jié)腸成纖維細(xì)胞中，通過確定S-階段細(xì)胞和總DNA含量評估細(xì)胞周期進(jìn)程，其中通過并入溴脫氧尿苷(BrdU)然后用FITC標(biāo)記的抗BrdU抗體染色確定S-階段細(xì)胞，并且根據(jù)生產(chǎn)商的說明書(BDBiosciences，San Jose，CA)通過用7-氨基放線菌素D(7-AAD)染色確定總DNA的含量。簡單地說，癌細(xì)胞和正常細(xì)胞在過夜培養(yǎng)后，用或不用測試化合物處理22小時，然后用10μM BrdU培養(yǎng)額外2個小時。收獲細(xì)胞，固定并用FITC標(biāo)記的抗BrdU和7-AAD染色。通過流式細(xì)胞計分析細(xì)胞周期分布。獲得細(xì)胞并使用CellQuest軟件(BDBiosciences)分析數(shù)據(jù)。預(yù)期，在均表達(dá)野生型p53的RKO癌細(xì)胞和CCD-18Co正常結(jié)腸成纖維細(xì)胞中，本發(fā)明的化合物將誘導(dǎo)劑量依賴性的S階段的缺失。還預(yù)期，本化合物對表達(dá)突變p53的HT-29細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程將不具有可評估的效應(yīng)。
實(shí)施例53 使用MDM2抑制劑保護(hù)正常細(xì)胞不受化學(xué)治療影響 將PrEC正常前列腺上皮細(xì)胞接種于6孔板中并且用本發(fā)明的化合物培養(yǎng)24小時，然后加入1μM TAXOL(紫杉醇)持續(xù)2天。使用臺盼藍(lán)測定細(xì)胞的存活率。預(yù)期數(shù)據(jù)表示當(dāng)正常前列腺上皮細(xì)胞用本發(fā)明的化合物預(yù)處理時，細(xì)胞被保護(hù)免受TAXOL的影響。
盡管現(xiàn)在已經(jīng)完全描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，在條件、制劑和其他參數(shù)的廣泛的和等效的范圍內(nèi)，可以進(jìn)行相同的內(nèi)容而不影響本發(fā)明或其任何實(shí)施方案的范圍。本文引用的所有的專利、專利申請和出版物的全部內(nèi)容在此通過引用整體被并入。
權(quán)利要求
1.一種化合物，其具有式I
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中
X是CH、O、N或S，其中如果X是O或S，則R8不存在；
Y是O、S或NR′；
R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、NR″COR′、NR′SO2R″、SO2NR′R″、(C＝NR′)NR″R′″或NR′R″；或
R7與R5或R6中之一形成芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基；
R8是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基、雜環(huán)、CO2R′、OCOR′、CONR′R″、SO2NR′R″或(C＝NR′)NR″R′″；
R9代表6-氯和5-氟基團(tuán)；并且
每個R′、R″和R′″獨(dú)立地是H或任選取代的烷基、環(huán)烷基、烯基、環(huán)烯基、炔基、芳基或雜環(huán)；或
R′和R″、或R″和R′″形成環(huán)；
其中R3和R4之一是CONRR′，并且R和R′之一是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式II或式III
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式IV
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
4.如權(quán)利要求3所述的化合物，其具有式V或式VI
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
5.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式VII
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
6.如權(quán)利要求5所述的化合物，其具有式VIII或式IX
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
7.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2之一是任選取代的芳基或雜芳基。
8.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1和R2之一是環(huán)烷基、直鏈或支鏈烷基、酰胺或酯。
9.如權(quán)利要求1所述的化合物，其中R5和R6之一是C3-18烷基、芳基或雜芳基。
10.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式X
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中
R10是氫；并且
R11是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基；
或R10和R11一起形成任選取代的單環(huán)-雜環(huán)烷基。
11.如權(quán)利要求10所述的化合物，其具有式XI-XXVI之一
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
12.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式XXVII或式XXVIII
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中
R10是氫；并且
R11是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基；
或R10和R11一起形成任選取代的單環(huán)-雜環(huán)烷基。
13.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式XLVIII
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
14.如權(quán)利要求13所述的化合物，其具有式XLIX-LXIV之一
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
15.如權(quán)利要求1所述的化合物，其具有式LXV
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其中
R10是氫；并且
R11是任選取代的環(huán)烷基-烷基或單環(huán)-雜環(huán)烷基或在烷基3-位上不包含羥基的二羥基烷基氨基；
或R10和R11一起形成任選取代的單環(huán)-雜環(huán)烷基。
16.如權(quán)利要求15所述的化合物，其具有式LXVI和LXVII之一
或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
17.如權(quán)利要求1所述的化合物，其選自由以下組成的組
18.一種化合物，其選自由以下組成的組
19.如權(quán)利要求1所述的化合物，其是
20.一種藥物組合物，其包括如權(quán)利要求1或18所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
21.一種在細(xì)胞中抑制細(xì)胞生長和/或分裂，誘導(dǎo)凋亡和/或誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯的方法，其包括用權(quán)利要求1或18所述的化合物接觸所述細(xì)胞。
22.一種使細(xì)胞對其它藥劑敏感的方法，其包括用權(quán)利要求1或18所述的化合物接觸所述細(xì)胞。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其進(jìn)一步包括用其它藥劑接觸所述細(xì)胞。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述其它藥劑是化療劑。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述其它藥劑是放射。
26.一種治療、改善或預(yù)防動物的病癥的方法，其包括向所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求1或18所述的化合物。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其進(jìn)一步包括施用其它藥劑。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述其它藥劑是化療劑。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述其它藥劑是放射。
30.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述病癥是過度增殖疾病。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述過度增殖疾病是癌癥。
32.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述權(quán)利要求1所述的化合物在所述其它藥劑之前施用。
33.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述權(quán)利要求1所述的化合物在所述其它藥劑之后施用。
34.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述權(quán)利要求1所述的化合物與所述其它藥劑同時施用。
35.一種在細(xì)胞中抑制p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)與MDM2或MDM2相關(guān)蛋白質(zhì)之間的相互作用的方法，其包括將所述細(xì)胞暴露于權(quán)利要求1或18所述的化合物。
36.一種抑制含有功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的過度增殖細(xì)胞的生長的方法，其包括將所述細(xì)胞暴露于權(quán)利要求1或18所述的化合物。
37.一種在動物中治療、改善或預(yù)防以功能性p53或p53相關(guān)蛋白質(zhì)的表達(dá)為特征的過度增殖疾病的方法，其包括向所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求1或18所述的化合物。
38.一種使正常細(xì)胞對化療劑或化療治療耐受的方法，其包括用權(quán)利要求1或18所述的化合物接觸所述細(xì)胞。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述正常細(xì)胞包含野生型p53。
40.一種保護(hù)患有過度增殖疾病的動物中正常細(xì)胞免受化療劑或化療治療的毒副作用的方法，其包括向所述動物施用權(quán)利要求1或18所述的化合物。
41.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述正常細(xì)胞包含野生型p53。
42.如權(quán)利要求40所述的方法，其中所述過度增殖疾病是癌癥。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述癌癥包括p53的突變或缺失。
44.一種治療、改善或預(yù)防由施用化療劑或化療治療引起的病癥或疾患的方法，其包括向經(jīng)受用化療劑或化療治療來治療的動物共施用權(quán)利要求1或18所述的化合物。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述病癥或疾患是粘膜炎、口腔炎、口腔干燥、腸胃病癥或脫發(fā)。
46.如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述權(quán)利要求1或18所述的化合物在施用所述化療劑或化療治療前施用于所述動物。
47.一種藥盒，其包括權(quán)利要求1或18所述的化合物。
48.如權(quán)利要求47所述的藥盒，其進(jìn)一步包括向動物施用所述化合物的說明書。
49.如權(quán)利要求47所述的藥盒，其進(jìn)一步包括其它藥劑。
50.如權(quán)利要求49所述的藥盒，其中所述其它藥劑是化療劑。
51.如權(quán)利要求48所述的藥盒，其中所述說明書是為了向患有過度增殖疾病的動物施用所述化合物。
52.如權(quán)利要求51所述的藥盒，其中所述過度增殖疾病是癌癥。
53.如權(quán)利要求1所述的化合物，其選自由以下組成的組
54.一種化合物，其選自由以下組成的組
全文摘要
本發(fā)明涉及功能為p53與MDM2之間相互作用的抑制劑的小分子。本發(fā)明還涉及這些化合物抑制細(xì)胞生長、誘導(dǎo)細(xì)胞死亡、誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和/或使細(xì)胞對其它藥劑敏感的用途。
文檔編號A61K31/407GK101528223SQ200780039211
公開日2009年9月9日 申請日期2007年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月30日
發(fā)明者王少萌, 秦東光, 陳建勇, 余尚海 申請人:密執(zhí)安州立大學(xué)董事會