專利名稱：：生物學(xué)液體處理用基材的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于從以血液等為代表的生物學(xué)液體特異地吸附或除去分離對象物的生物學(xué)液體處理用基材及其利用。
背景技術(shù)：
：所謂血液凈化療法是指，為了治療特定疾病而通過從血液中除去被認為是與其發(fā)病、誘發(fā)、惡化(増悪)相關(guān)的物質(zhì)成分，以謀求維持生物體內(nèi)的恒常性為目的的治療，又被稱為血漿分離置換法(77工l/、乂7)治療?，F(xiàn)在進行的血液凈化療法可根據(jù)除去對象成分及除去機制分為4大類。(1)血液透析.血液濾過'血液濾過透析療法急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭等適用。是將作為尿應(yīng)排出到體外的成分(尿素，氮等的低分子量成分)從血液中直接凈化的療法，主要對象為血液中的低分子成分。(2)血漿交換療法重型肝炎、急性肝功能衰竭、閉塞性動脈硬化癥、重癥肌無力、格林巴利綜合癥、多發(fā)性硬化癥、骨髓瘤、藥物中毒、天皰瘡等適用。從血液中分離除去在體內(nèi)積蓄或產(chǎn)生的成分的療法，主要對象為膽固醇、免疫球蛋白等的血液中稍大的成分?？梢岳斫鉃檠和肝?血液濾過.血液濾過透析與血漿交換的區(qū)別在于從血液中除去的物質(zhì)的大小。即，血液透析中除去分子量至數(shù)千Da的小分子量物質(zhì)，又，血液濾過中除去分子量23萬Da以下的中分子量，而血漿交換中除去比其分子量更大的蛋白質(zhì)或與蛋白結(jié)合而存在于血中的有害物質(zhì)(抗體、炎癥性細胞因子、免疫復(fù)合物或中毒物質(zhì)等的液性因子)。(3)吸附式血液凈化療法內(nèi)毒素或革蘭氏陰性菌感染癥引起的敗血癥性休克、家族性高血脂癥、閉塞性動脈硬化癥、局灶性腎小球硬化癥、透析淀粉樣蛋白癥等適用。該療法是使血液或血漿接觸吸附劑，利用物理化學(xué)現(xiàn)象除去病因(相關(guān))物質(zhì)的療法，除去對象為內(nèi)毒素、LDL、(32微球蛋白等的血漿成分。這里使用的吸附劑的代表性例子是活性炭。此外，巳知一種吸附劑，其與作為內(nèi)毒素的活性中心的脂質(zhì)A結(jié)合，將具有中和其活性的作用的多粘菌素B固定而吸附內(nèi)毒素。(4)血細胞成分(白細胞)除去療法是吸附式血液凈化療法的一種，但因除去對象物質(zhì)為血細胞成分，所以另進行分類。潰瘍性結(jié)腸炎、慢性關(guān)節(jié)風濕病、多發(fā)性硬化癥、皮膚疾病、免疫疾病等適用。是接觸血液，利用物理化學(xué)現(xiàn)象或免疫反應(yīng)除去作為病因(相關(guān))物質(zhì)的細胞、尤其是除去白細胞的療法。現(xiàn)在使用的療法是利用依靠醋酸纖維素有孔玻璃珠等的粒性白細胞或單核細胞的選擇性吸附、或選擇性吸附活性化白細胞或血小板的表面狀態(tài)的基材等，利用基材的物理化學(xué)性質(zhì)而實現(xiàn)選擇性。近年來，正進行用于提高安全性和治療效果的研究，在上述的血細胞成分除去療法中，利用免疫反應(yīng)等的生物學(xué)相互作用，通過特異地捕捉理論上被推定為病因的作為靶物質(zhì)的細胞而減少副作用。還有，由于這樣的血液細胞處理技術(shù)也可以應(yīng)用于再生醫(yī)療中的干細胞采集'輸注領(lǐng)域中，因此認為會普及至分理、處理血細胞成分的整個醫(yī)療技術(shù)中。雖然出于更加選擇性地特異性地捕捉作為耙物質(zhì)的細胞的目的，專利文獻l中報告有將對T淋巴細胞有親和性的肽或脂質(zhì)進行固定的分離材料，但至少由于固定例示的胸腺激素時對T淋巴細胞的結(jié)合親和性不充分，因此實用上存在問題。此外，專利文獻2專利文獻5中分別公開了使對CD4陽性細胞有親和性的肽固定于無紡布的CD4陽性細胞捕集材料，但在如例示的抗體的重鏈或輕鏈可變區(qū)的相輔的決定區(qū)部分肽的固定化中，對CD4陽性細胞的結(jié)合親和性實用上不充分而不能利用。再有，專利文獻6中公開了使用與CD4分子結(jié)合的嵌合體抗體、單鏈抗體、或它們的組合抗體的CD4陽性細胞分離裝置，但不是單核細胞懸浮液，未記載用于從全血中再現(xiàn)良好地除去CD4陽性細胞的方法，實用上用于治療是極其困難的。專利文獻7中公開了使與腫瘤細胞的表面上顯現(xiàn)的物質(zhì)有親和性的配體以化學(xué)鍵固定于高分子化合物的吸附材料，但例示的配體對腫瘤細胞的特異性并不充分，因此從全血中選擇性地特異性地捕捉目的細胞用的要件既未被公開也未被實施。專利文獻8中公開了一種免疫系細胞吸附材料，是與輔助性T細胞2型的表面抗原有親和性的物質(zhì)被水不溶性載體固定而成，但吸附率不充分，此外從全血中選擇性地特異性地捕捉目的細胞用的要件既未被公開也未被實施。然而，非專利文獻l中公開了從血液以外的生物學(xué)液體分離靶物質(zhì)的例子。首先，作為識別分子在與菌的孢子相對的單鏈抗體的末端上制作好具有鏈霉親和素的融合蛋白質(zhì)。之后，作為蛋白質(zhì)預(yù)先準備結(jié)合有抗鼠抗體的磁珠，籌集對該抗體的氨基化學(xué)結(jié)合有生物素的基材。通過使作為識別分子的該單鏈抗體-鏈霉親和素融合蛋白質(zhì)與按照先前方法制作的在表面具有生物素的基材接觸，制作在基材表面固定有該單鏈抗體的磁珠。示例有使用已如此制作的磁珠從生物學(xué)液體分離菌的孢子的例子。已知鏈霉親和素具有與叫做生物素的低分子結(jié)合的性質(zhì)，且一般具有易形成四聚體的傾向。然而，生物素和鏈霉親和素的鍵樣式徹底為非共價鍵，要想作為實際的分離材料使用，令人擔心的是識別分子的洗脫。進而，若不預(yù)先介由具有適當?shù)淖杂啥鹊拈g隔區(qū)(spacer)使生物素固定于基材表面上，則在形成四聚體以上的多聚物的該單鏈抗體-鏈霉親和素融合蛋白質(zhì)中的、生物素結(jié)合部位和導(dǎo)入至基材表面的生物素之間的鍵不會成立，不僅需要繁雜的工序，而且從使靶物質(zhì)穩(wěn)定地固定在基材表面的觀點，實用上并不充分。非專利文獻l中，作為介由生物素使識別分子固定的基材，使用結(jié)合有羊抗鼠抗體的磁珠的市售品，使羧基被N-羥基琥珀酰亞胺基活性化的生物素與該磁珠表面的羊抗鼠抗體的氨基進行化學(xué)結(jié)合而使用。在該文獻中，也公開了不使生物素進行化學(xué)結(jié)合而使識別分子僅靠物理性吸附就固定時的實驗數(shù)據(jù)，記載了菌的孢子的分離能比介由生物素的固定格外差的情況。此外，顯示了此時通過清洗容易解吸。上述所用的磁珠已經(jīng)有羊抗鼠抗體固定于表面上。因此，為了與本說明書一樣地以共價鍵使識別分子固定，必須將用于固定化的活性基再導(dǎo)入至該珠子表面。如，這是將來自已經(jīng)存在于表面的羊抗鼠抗體的羧基用N-羥基琥珀酰亞胺基進行活性化、或?qū)碜栽摽贵w的羥基用表氯醇(氯甲基環(huán)氧乙垸)進行活性化，但這被認為極其困難且效率低，假設(shè)可以導(dǎo)入少量活性基，之后的識別分子的固定化，物理的吸附也會占很大比例。預(yù)料其結(jié)果與上述相同，菌的孢子的分離能比介由生物素的固定格外差。還有，也可以將已被固定的該識別分子側(cè)的羧基用N-羥基琥珀酰亞胺基進行活性化、或也可以用碳化二亞胺等將該識別分子與已經(jīng)有羊抗鼠抗體固定于表面的磁珠上的來自羊抗鼠抗體的氨基形成共價鍵，但由于此時會引起識別分子的分子內(nèi)的交聯(lián)、或識別分子的分子之間的交聯(lián)，因此效率并不高。另外，只要是本領(lǐng)域技術(shù)人員就會想在固定化狀態(tài)下有效使用識別分子中的配體部位，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員會預(yù)料到4分子以上的識別分子通過該締合結(jié)構(gòu)域(會合K乂,y)之間進行締合而形成締合體結(jié)構(gòu)的分子用共價鍵部位非特異性地固定的情況，配體部位的共價鍵引起的活性失活令人擔憂，效率不高。即，用共價鍵將例示于本說明書中的識別分子的分子形態(tài)固定于基材表面而提高細胞或物質(zhì)的分離性能，本領(lǐng)域技術(shù)人員有這一想法是極其困難的。此外，在如上所述的單鏈抗體的末端具有鏈霉親和素的融合蛋白質(zhì)已作為放射線癌治療的靶向分子而公知(專利文獻9、10及非專利文獻2、3)。這些使用方法基本上是通過將該融合蛋白質(zhì)向體內(nèi)投與，積聚于癌部位之后，投與用放射性物質(zhì)標記好的生物素衍生物，以癌的有效治療為目標的方法，未發(fā)現(xiàn)顯示或暗示使該融合蛋白質(zhì)固定于基材表面而分離靶物質(zhì)的例子的記載，其技術(shù)思想與本發(fā)明不同。此外，報告有在如上所述的單鏈抗體的末端具有鏈霉親和素的融合蛋白質(zhì)由于形成4價或多價的多聚物，因此對于靶向分子的結(jié)合親和性(affinity)與單體的單鏈抗體相比增高(非專利文獻4、5)。然而，無論哪個報告中，都僅討論了在該單鏈抗體的末端具有鏈霉親和素的融合蛋白質(zhì)在未被固定的狀態(tài)下的親和性，未發(fā)現(xiàn)顯示或暗示使該融合蛋白質(zhì)固定于基材表面而分離耙物質(zhì)的例子的記載，其技術(shù)思想與本發(fā)明不同。此外，專利文獻11中記載了與本說明書中公開的4分子以上的識別分子形成締合體結(jié)構(gòu)的情況類似的結(jié)構(gòu)的分子，但它是用于投與人體時的疾病的治療或診斷的分子，而不是如本發(fā)明那樣目的在于使識別分子在固定的狀態(tài)下的耙物質(zhì)的分離，這些的技術(shù)思想也不同。非專利文獻6中公開了一種方法，使對李斯特氏菌的單鏈抗體的末端導(dǎo)入生物素的抗體固定于結(jié)合有鏈霉親和素的磁珠，利用該磁珠分離李斯特氏菌。這些是本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易想到的將配體部位定向固定于基材表面的方法之一，雖然是不含夾雜物的實驗體系，但李斯特氏菌的分離效率、即靶物質(zhì)的分離效率不充分，存在實用困難的問題。作為對耙物質(zhì)具有特異地結(jié)合親和性的識別分子，已知有抗體、嵌合體抗體、單鏈抗體、F(ab')2、Fab、Fab，、肽、核酸、糖鏈、低分子化合物等。一般，抗體結(jié)合親和性高，即使固定于基材上，也易保持結(jié)合活性，但另一方面制造成本高、實用上存在問題。另一方面，在基因工程學(xué)上將抗體進行低分子化的、以單鏈抗體為代表的抗體的衍生物具有制造成本與抗體相比廉價的優(yōu)點。這些難以在固定于基材表面的狀態(tài)下保持實用上的充分的結(jié)合活性。雖然人們期待從如此以血液為代表的生物化學(xué)液體中的靶物質(zhì)、尤其從全血中直接特異地捕捉細胞，但尚未被確立為實用上可利用的技術(shù)。[專利文獻l]日本專利特開平3-32680號公報[專利文獻2]日本專利特開平6-154316號公報[專利文獻3]日本專利特開平6-154317號公報[專利文獻4]日本專利特開平6-218051號公報[專利文獻5]日本專利特開平6-269663號公報[專利文獻6]日本專利特開平11-332594號公報[專利文獻7]日本專利特開2000-217卯9號公報[專利文獻8]日本專利特開2003-52817號公報8[專利文獻9]日本專利特表2003-501096號公報[專利文獻IO]國際專利公開號WO00075333號公報[專利文獻ll]國際專利公開號WO2006107617號公報AppliedandEnvironmentalMicrobiologyJuly1998,P2497-2502Blood2004104P227-236CIinicalCancerResearch2000vol.6P406-414ProteinEngineering1996vol.9(2)P203-211HumanAntibodiesHybridomas19956(3)P93-101FoodbornePathogensandDisease20074(1)P74-8
發(fā)明內(nèi)容盡管不僅在血細胞成分除去療法中，而且在分離并處理血細胞成分的整個醫(yī)療技術(shù)中，也期待通過利用免疫反應(yīng)等的生物學(xué)性相互作用，更選擇性特異地捕捉理論上推定為病因的靶物質(zhì)的細胞，以此減少副作用、提高安全性和治療效果，但存在這樣一種問題，將作為血液中的靶物質(zhì)的細胞尤其從全血中直接地特異地捕捉的技術(shù)尚未確立為實用上可利用的技術(shù)。此外，即使從血液以外的生物學(xué)液體分離靶物質(zhì)方面，也存在這樣的問題，一個問題是需要在基材表面上預(yù)先固定好生物素之后，用生物素-鏈霉親和素的親和性依靠非共價鍵使靶分子固定這樣的繁雜且花費成本的操作，一個問題是難以使配體部分以有效的形態(tài)固定，以便可以識別耙物質(zhì)。本發(fā)明所要解決的問題是，提供一種血液處理用基材及一種生物學(xué)液體處理用基材，該血液處理擁基材可以用于將作為靶物質(zhì)的細胞等從全血中直接、特異地捕捉，實用上可以利用，該生物學(xué)液體處理用基材可以從生物學(xué)液體直接分離靶物質(zhì)、成本上廉價、產(chǎn)業(yè)上可以利用。本發(fā)明所要解決的其他問題是提供使用這些基材的裝置及分離方法。本發(fā)明人為解決上述課題而反復(fù)專心研究。首先，深入考察本領(lǐng)域研究人容易想得到的結(jié)果，g卩，該結(jié)果是作為將使抗體在基因工程學(xué)上進行低分子化的衍生物作為識別分子，大量裝入基材表面而進行固定時，即使在固定化狀態(tài)下也可以發(fā)揮結(jié)合活性。上述結(jié)果啟示著固定于基材表面的識別分子的大部分在固定化狀態(tài)下以不保持有結(jié)合活性的形態(tài)被固定。為此，本發(fā)明人嘗試了定向固定化，即該定向固定化是在與識別分子中的靶物質(zhì)進行選擇性結(jié)合的配體部位添加用于固定在基材表面的結(jié)構(gòu)域(K乂O)，介由該締合結(jié)構(gòu)域使靶分子固定于基材表面。結(jié)果發(fā)現(xiàn)從當初的定向固定化的假說中完全不能預(yù)測到的驚人的結(jié)果，即與實際上使締合結(jié)構(gòu)域定向在基材側(cè)而進行固定相比，該結(jié)構(gòu)域具有自我締合的性質(zhì)，使識別分子形成締合體的狀態(tài)的分子以盡量不含生物素-鏈霉親和素等的非共價鍵的形態(tài)，依靠共價鍵固定于基材表面時，對靶分子的結(jié)合活性被顯著地維持。艮P，根據(jù)本發(fā)明，提供以下發(fā)明(1)一種生物學(xué)液體處理用基材，其是對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種的靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子通過共價鍵固定于基材表面，其特征在于，該識別分子是含有與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合配體部分及締合結(jié)構(gòu)域的直鏈上的分子，至少4分子以上的識別分子通過該締合結(jié)構(gòu)域之間進行締合而形成締合體結(jié)構(gòu)。(2)如(1)所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，該識別分子為單鏈的多肽，該多肽是通過使編碼配體部分的核酸與編碼締合結(jié)構(gòu)域的核酸連接的核酸表達而得到的多肽，所述配體部分構(gòu)成該識別分子。(3)如(2)所述的基材，其特征在于，該識別分子為通過使編碼配體部分的核酸與編碼締合結(jié)構(gòu)域的核酸介由編碼間隔區(qū)的核酸連接的核酸表達而得到的多肽，所述配體部分構(gòu)成該識別分子，該間隔區(qū)是由0100個氨基酸構(gòu)成的肽性間隔區(qū)。(4)如(2)或(3)所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該配體部分的核酸翻譯的多肽的分子量在100kD以下。(5)如(2)至(4)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該締合結(jié)構(gòu)域的核酸翻譯的多肽的分子量在50kD以下。(6)如(2)至(5)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該配體部分的核酸翻譯的多肽是單鏈抗體。(7)如(2)至(6)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，該締合結(jié)構(gòu)域是從編碼各個鏈霉親和素或親和素的全部或一部分的核酸翻譯的多肽區(qū)，4個該多肽區(qū)自發(fā)地締合，l個締合體中含有4個配體部分。(8)如(2)至(7)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，構(gòu)成該配體部分的多肽的分子量和構(gòu)成該締合結(jié)構(gòu)域的多肽的分子量之比為1:10~20:1的范圍。(9)如(2)至(8)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，將編碼對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子的核酸翻譯為多肽，將在上述翻譯過程中不溶化的該識別分子多肽用含有鹽酸胍或尿素的水溶液進行變性可溶化，然后通過除去鹽酸胍或尿素使該識別分子多肽的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性而被制造。(10)如(2)至(9)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，在水不溶性基材的表面導(dǎo)入用于與對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子形成共價鍵的活性基，然后通過在0-5(TC中使水不溶性基材與含有識別分子的水溶液接觸10秒以上，由此使該識別分子憑借共價鍵固定于基材表面而被制造。(11)如(2)至(10)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的制造方法，含有(i)將編碼對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子的核酸翻譯為多肽的工序，所述耙物質(zhì)選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種，(ii)將在上述翻譯過程中不溶化的該識別分子多肽用含有鹽酸胍或尿素的水溶液進行變性可溶化的工序，及(iii)在上述工序(ii)之后通過除去鹽酸胍或尿素使該識別分子多肽的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性的工序。(12)如(2)至(10)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的制造方法，含有(i)在水不溶性基材的表面導(dǎo)入用于與識別分子形成共價鍵的活性基的工序，該識別分子對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種的靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性，及(ii)通過在05(TC中使水不溶性基材與含有識別分子的水溶液接觸10秒以上，使該識別分子憑借共價鍵固定于基材表面的工序。(13)—種生物學(xué)液體處理用裝置，在具有入口和出口的容器中填充(1)至(10)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材。(14)如(13)所述的生物學(xué)液體處理用裝置，用于疾病的治療。(15)如(13)或(14)所述的生物學(xué)液體處理用裝置的制造方法，含有在具有入口和出口的容器中填充(1)至(10)的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的工序。(16)—種生物學(xué)液體處理方法，含有使含有靶物質(zhì)的水溶液通過(13)或(14)所述的生物學(xué)液體處理用裝置的工序。(17)—種血液處理方法，包括使含有靶物質(zhì)的血液通過(13)或(14)所述的生物學(xué)液體處理用裝置的工序。圖1顯示Leu3ascFv-SA-guanidine(實施例2)的SDS-PAGE分析的結(jié)果。圖2顯示識別分子的締合體結(jié)構(gòu)(4聚體)的模式圖。圖3顯示本發(fā)明的基材表面中的識別分子的固定化狀態(tài)及配體部位的定向狀態(tài)的模式圖。具體實施例方式本發(fā)明中使用的"靶物質(zhì)"是指來自以血液為代表的生物學(xué)液體中含有的生物的物質(zhì)、細胞、組織等中的成為除去對象的特定的生物來源物質(zhì)，是選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種物質(zhì)。靶物質(zhì)除了在血液本身所含之外，有時也包含在含有很多來自血液的夾雜物的液體中。靶物質(zhì)中所謂有機體相關(guān)物質(zhì)是指，有機體所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)、糖質(zhì)或低分子化學(xué)物質(zhì)等。甚至即使是人工物質(zhì)，對有機體帶來顯著影響的內(nèi)分泌干擾物質(zhì)等也包含在本發(fā)明所指的有機體相關(guān)物質(zhì)中。有機體相關(guān)物質(zhì)中也包含有害物質(zhì)。所謂有害物質(zhì)是例如LDL、P2微球蛋白、藥物、膽紅素、膽汁酸、氨基酸、肌酸酐、內(nèi)毒素、抗A抗體、抗B抗體、抗乙酰膽堿受體抗體、IgG、抗心磷脂抗體、抗DNA抗體、免疫復(fù)合物、昏睡物質(zhì)、風濕病因子等的血漿成分。異常蛋白質(zhì)感染因子等包含在內(nèi)。此外，以炎癥性細胞因子為首的各種介質(zhì)也根據(jù)病態(tài)而成為有害物質(zhì)。作為炎癥性細胞因子，己知有IL-1、IL-6、IL-8、IL-18、TNF-a、GM-CSF、RANTES/SIS細胞因子家族等。此夕卜，作為與炎癥相關(guān)的介質(zhì)有前列腺素、血栓烷、白三烯等在有機體內(nèi)由花生四烯酸生成的物質(zhì)或血小板活化因子、組織胺、血管舒緩激肽或補體因子C5a等。作為細菌，其種類不特別限定，可以舉出任意細菌。如大多數(shù)細菌的大小為0.5~4pm左右，形狀有球菌、桿菌、螺旋狀。細菌的細胞的最外層有堅固的細胞壁，其內(nèi)側(cè)有薄的細胞膜。此外，有具有莢膜、鞭毛、線毛等的細菌或根據(jù)環(huán)境的變化而形成芽孢的細菌。細菌根據(jù)其染色性的不同可以分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，但不限定于任一種。此外，細菌也有獨立營養(yǎng)細菌和從屬營養(yǎng)細菌的分類、需氧菌和厭氧菌的分類等，但不限定于這些。古細菌在生物學(xué)上是與細菌完全不同種的微生物，但在本說明書作為細菌例示。古細菌中有嗜熱菌、高度嗜鹽菌、產(chǎn)甲烷菌等。作為細菌，其種類不特別限定，可以舉出任意細菌。如可以舉出病因細胞。病因細胞是指腫瘤細胞、細菌或白細胞(中性粒細胞、嗜酸粒細胞、嗜堿粒細胞、淋巴細胞或單核細胞)、血小板等的血細胞中的被推定為特定疾病的病因的物質(zhì)。如，在自身免疫疾病中擔心細胞性免疫亢進時，最好以出現(xiàn)在白細胞表面上的免疫球蛋白超家族分子為指標區(qū)別病因細胞。具體地有CD2陽性細胞、CD4陽性細胞、CD8陽性細胞、CD28陽性細胞、CTLA-412(CD152)陽性細胞、PECAM-1(CD31)陽性細胞、ICAM-1(CD54)陽性細胞、ICAM-2(CD102)陽性細胞等。此外，用粘合素家族分子區(qū)別也是有效的。例如有VLA-1(CD49a7CD29)陽性細胞、VLA-2(CD49b/CD29)陽性細胞、VLA-3(CD49c/CD29)陽性細胞、VLA-4(CD49d/CD29)陽性細胞、VLA-5(CD49e/CD29)陽性細胞、VLA-6(CD49f/CD29)陽性細胞、LFA-1(CDlla/CD18)陽性細胞、Mac-l(CDllb/CD18)陽性細胞、p150,95(CDllc/CD18)陽性細胞、gpIIb/IIIa(CD41/CD61)陽性細胞、LPAM-1陽性細胞等，但不限定于這些。細胞塊是多個細胞集合的狀態(tài)的物質(zhì)，可以例示胰島等，但不限定于這些。作為病毒，其種類不特別限定，可以舉出任意的病毒。如，多數(shù)病毒的大小為20250rrni(納米lmm的100萬分之一)。不同于細菌之處是，病毒若不寄生(感染)于活細胞就無法增殖。為說明例示感染動物的主要的病毒，但不限定于這些。細小病毒、乳頭狀瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、嗜肝DNA病毒、皰疹病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、細胞巨化病毒、EB病毒、痘病毒、天然痘病毒、牛痘病毒、呼腸孤病毒、輪狀病毒、萼狀病毒、諾瓦克病毒(norovirus)、細小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)類病毒、腸道病毒71、考克賽基病毒、?？刹《?、鼻病毒、A型肝炎病毒、星狀病毒、披膜病毒(togavirus)、風疹病毒、黃病毒、日本腦炎病毒、西尼羅病毒、森林腦炎病毒、登革熱病毒、C型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、日冕形病毒、絲狀病毒、埃博拉病毒、彈狀病毒(，7"K々^》7)、狂犬病病毒、布尼安病毒、漢坦病毒、正粘病毒、流感病毒、副粘病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、沙粒病毒、拉沙病毒等。此外，感染植物或細菌的病毒也包含于此。作為病毒感染細胞是指前述或任意的病毒所感染的細胞或細菌等。也包括感染前任意的病毒與細胞表面的受體結(jié)合的狀態(tài)的細胞或細菌。病毒感染細胞的內(nèi)部經(jīng)過該病毒的基因的復(fù)制及蛋白質(zhì)的合成等，產(chǎn)生新的病毒。此外，來自任意的病毒的核酸被裝入到宿主細胞的基因組中，即便不產(chǎn)生病毒粒子自身時，其宿主細胞也可以視作病毒感染細胞。本發(fā)明中所稱的生物學(xué)液體指汗、血液、淋巴液、腦脊液、尿、組織液、唾液、粘液、精液、分泌液、消化液等的有機體所產(chǎn)生的液體是自不必說，還指細胞、細菌、病毒的培養(yǎng)液或其破碎液、提取液、機械地使臟器破碎之物或用酶處理的臟器的消化液等。不僅包括它們的原液，還包括用緩沖液或有機溶劑等稀釋的情況。本發(fā)明中使用的"基材"是指在常溫的水溶液中呈固體狀態(tài)之物，作為形狀無特別限定，為了提高與液相中的目的細胞的接觸頻率最好是表面積大者。若例示形狀，則可以舉出球狀、立方形、平面形、平膜形、片形、纖維形、棉絮形、布形、線形、束形、紡布形或無紡布形等的纖維結(jié)構(gòu)體、海綿等的高分子多孔質(zhì)體、珠形、凝膠形、或中空絲等。這其中，從細致填充的難易度、將識別分子均質(zhì)的保持在表面的難易度、可較多確保實際有效面積、及以血液為代表的生物學(xué)液體的流通方面來看，最好是球形、粒形及纖維形之物。尤其分離或吸附血液中的細胞時，從吸附效率看，紡布形或無紡布形最好，進而從容易控制載體的結(jié)構(gòu)的觀點來看，無紡布最好。識別分子和基材表面之間作用著各種各樣的分子間力，認為包括由于物理的吸附力或引力而固定于基材表面的力。本發(fā)明中使用的"通過共價鍵"是指在識別分子和基材表面的結(jié)合中，構(gòu)成識別分子的大部分直接或通過官能團等與基材表面形成共價鍵的狀態(tài)。由此，固定得即使用表面活性劑等頻繁清洗也不容易剝離。作為確認"構(gòu)成識別分子的大部分通過共價鍵與基材表面結(jié)合"的方法，可以利用既有強勁的蛋白質(zhì)變性作用、又使蛋白質(zhì)可溶化的6M胍-HC1水溶液或8M尿素水溶液。艮卩，通過使固定化，清洗后的基材表面的識別分子利用上述強勁的該變性劑使之變性，可溶化，由此可以解吸大部分的用物理性吸附等的共價鍵以外的分子間力結(jié)合于基材表面的識別分子。鏈霉親和素與生物素的結(jié)合以非共價結(jié)合型的生物化學(xué)結(jié)合最強為kd=10e-15M，但若用上述方法的話，鏈霉親和素蛋白質(zhì)會變性而失去結(jié)合能，因此有效。然后，通過對解吸出來的識別分子進行檢測定量(如SDS-PAGE分析)、或用水仔細清洗上述的變性劑處理后的基材之后，對殘留于基材自身的該識別分子進行檢測定量(如總蛋白質(zhì)定量或元素分析)，由此可以確認該識別分子通過共價鍵導(dǎo)入至基材表面。此時，該變性劑溶液的pH最好是中性附近pH-4-9左右，不應(yīng)該是極端酸性或堿性。這是因為，存在引起該識別分子的水解反應(yīng)的危險，如該識別分子即便由共價鍵被固定，也會分解并解吸。此外，也可以在處理該變性劑時進行加熱，但此時也有該識別分子分解的危險，因此解釋結(jié)果時需要注意。此外，可以用苯酚等的有機溶劑使該識別分子變性，但可能該識別分子不溶于水而顯示假陽性，因此，此時對結(jié)果的解釋也需要注意?；牡牟馁|(zhì)只要是至少能夠穩(wěn)定固定規(guī)定量的識別分子的，則不論無機化合物、有機化合物都可以，最好是這樣的材質(zhì)可以加工為各種形狀，使識別分子直接或間接地進行化學(xué)結(jié)合，且與以血液為代表的生物學(xué)液體接觸時溶出物少等，可作為醫(yī)療材料安全地使用的材質(zhì)。例如，可以舉例如，玻璃、高嶺土或膨潤土等的無機材料、纖維素等的來自植物的多糖類系化合物、葡聚糖、殼多糖、脫乙酰殼多糖、淀粉、瓊脂糖、蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)或天然橡膠等的天然聚合物、聚丙烯、聚苯乙烯、聚酰胺、聚乙烯、聚氨酯、聚乙烯醇、乙烯乙烯醇共聚物、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚丙烯酸、聚乙烯醇等的乙烯基系化合物或其衍生物的聚合物及共聚物、尼龍6或66等的聚酰胺系化合物、聚對苯二甲酸乙二醇酯等的聚酯系化合物、或聚氨基酸等的合成聚合物或活性炭等。選擇無紡布形基材時，從強度、加工性或安全性的觀點來看，構(gòu)成無紡布形基材的纖維最好是纖維素、聚酯或聚丙烯。此外，可以通過適當選擇構(gòu)成纖維的平均纖維直徑來控制無紡布基材的結(jié)構(gòu)。該構(gòu)成基材的纖維的平均纖維直徑最好是2.5pm以上、不足50pm。因為，平均纖維直徑若不足2.5nm，則存在成為無紡布時網(wǎng)眼變細的傾向，會產(chǎn)生物理捕捉目的細胞以外的細胞的非特異性細胞吸附，因而不理想。另一方面，50pm以上時，則存在成為無紡布時網(wǎng)眼變粗的傾向，與目的細胞的接觸頻率顯著降低，所以除去效率降低，因而不理想。本發(fā)明中使用的"識別分子"是采用蛋白工程學(xué)及/或分子生物學(xué)及基因工程學(xué)方法而制作的人工分子，更詳細地是由與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的配體部分、該配體部分和締合結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的直鏈上分子。此外，該配體部分和締合結(jié)構(gòu)域直接也可以隔有間隔區(qū)。本發(fā)明中使用的"配體部分"是具有與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的性質(zhì)的部分。選自抗體的F(ab')2部分、Fab部分、Fab'部分、肽、基因重組蛋白質(zhì)、核酸、糖鏈、低分子化合物等，但最好是基因重組蛋白質(zhì)或核酸。由于是人工分子，因此具有可以通過大量生產(chǎn)以低價格供給熱穩(wěn)定性優(yōu)異的物質(zhì)的優(yōu)點。這樣的配體因與對象特異地結(jié)合，因此有時也被稱為人工抗體。人工抗體通常利用與抗體V區(qū)的三級結(jié)構(gòu)類似的結(jié)構(gòu)分子，通過使其形成環(huán)形部分隨機化或加入抗體V基因的CDR3而制造。有將蛋白質(zhì)A抗體化的親合體(Affibody)(K.Nord,O.Nord,M.Uhlen,etal.,Eur.J.Biochem,268,4269(2001))、將GFP抗體化的熒光抗體Fluorobody(I.S.Kim,J,H.Shim,Y.T.Suh,etal.,Biosci.Biotechnol.Biochem.，66,1148(2002))、將纖連蛋白的結(jié)構(gòu)域10抗體化的微型抗體(V.Batori，A.Koide,S.Koide,ProteinEng.,15,1015(2002))、模擬肽分子和抗體的融合分子pepbody(E.Lunde,V.Lauvrak,I.B.Rasmussen,etal.,Biochem.Soc.Trans,,30,500(2002))、利用駱馬它(，夕夕、')抗體的結(jié)構(gòu)的單鏈抗體納米抗體(A.Muruganandam，J.Tanha，S.narang,D.Stanimirovic,TheFASEBJ.16,240(2002))等。此外，具有核酸結(jié)構(gòu)的適配體(Aptamer)或利用了RNA的旋光異構(gòu)體enatio-RNA的鏡像異構(gòu)(Spiegelmer)(B.Wlotzka,S.Leva,B.Eschgfaller,etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,99,8898(2002))等。本發(fā)明中所指的單鏈抗體是對抗體分子的抗原結(jié)合重要的(重鏈V區(qū))VH部位(重鏈V區(qū))及VL部位(輕鏈V區(qū))用被稱作linker的肽連接而作為單鏈多肽的抗體。本說明書中表示為單鏈Fv及scFv也作為和單鏈抗體相同的意思來使用。為了不妨礙后述的"締合結(jié)構(gòu)域"的自我締合，配體部分的大小最好是lOOkD以下的分子量的多肽。本發(fā)明中使用的"締合結(jié)構(gòu)域"是指，在該識別分子中形成總的立體結(jié)構(gòu)的部分中除"配體部分"以外的部分，締合結(jié)構(gòu)域之間具有2個以上形成締合體的性質(zhì)。為說明而例示的話，可以在本發(fā)明中良好地使用親和素或鏈霉親和素，以及以螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)形成雙聚體的人工肽序列(JWilludaetal,TheJournalofBiologicalChemistry,276,14385，(2001))或來自p53蛋白質(zhì)的形成四聚體的結(jié)構(gòu)域序列(MRheinneckeretal,TheJournalofImmunology157,2989,(1996))等，但不限定于這些。從四聚體以上的締合體的形成力的觀點來看，更好的是親和素、鏈霉親和素。為了發(fā)揮該締合結(jié)構(gòu)域之間的締合體的形成力，該"締合結(jié)構(gòu)域"的大小最好是lkD以上，從整個識別分子的締合體的穩(wěn)定性的觀點來看，最好是50kD以下的多肽。本發(fā)明中使用的間隔區(qū)是用共價鍵將該識別分子中的"締合結(jié)構(gòu)域"和"配體部分"進行連接的直鏈上的分子，最好是肽性的物質(zhì)。它是彈性的、是即使進行結(jié)晶的X線結(jié)構(gòu)分析或NMR結(jié)構(gòu)分析，也不能判定明確的立體結(jié)構(gòu)的部分。為不妨礙"締合結(jié)構(gòu)域"和"配體部分"各自的立體結(jié)構(gòu)的形成，該間隔區(qū)的長度最好是l個氨基酸以上。另一方面，作為間隔區(qū)過長時，由于會導(dǎo)致作為蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性的降低，最好是ioo個氨基酸以下。更好地是適宜地使用3至50個氨基酸左右。此外，在該部分中插入作為蛋白質(zhì)的精制用的tag序歹U，也能作為間隔區(qū)發(fā)揮作用。如可以舉出FLAGtag序列(DYKDDDDK)、Histag序列(HHHHHH)等，但不限定于這些。本發(fā)明中的識別分子要形成由"締合結(jié)構(gòu)域"自我締合的締合體結(jié)構(gòu)，構(gòu)成上述的各個部分的多肽的分子量或間隔區(qū)的長度很重要。此外，要有效地形成締合體，希望構(gòu)成"配體部分"的多肽的分子量和形成"締合結(jié)構(gòu)域"的多肽的分子量之比是1:1020:1，更好的是h510:1。本發(fā)明中所說的"具有對靶物質(zhì)的選擇結(jié)合性的識別分子"中的"選擇結(jié)合性"是指，通過以抗原抗體結(jié)合為代表的生物學(xué)的相互作用，僅對靶物質(zhì)用高結(jié)合親和性進行結(jié)合，被固定的識別分子和靶物質(zhì)的離解常數(shù)最好是l^M以下、更好的是10nM以下、進一步好的是InM以下。本發(fā)明中所說的"離解常數(shù)"一般用Kd表示，表示離解的程度。數(shù)字越小，結(jié)合的強度越強，意味著結(jié)合親和性(affinity)越強，是本領(lǐng)域技術(shù)人員通常采用的指標。可以使各種濃度的靶蛋白分子充分與識別分子結(jié)合之后，通過定量測定處于游離的蛋白分子16的量而計算出。定量方法有利用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)的方法、分光學(xué)方法、使用水晶振蕩子的方法、用前沿親和色譜(M.Nishikata,K.kasai，S.Ishii,J.Biochem.82,1475(1977))的方法、使用RI標記的耙蛋白分子的方法、利用表面等離子共鳴現(xiàn)象的方法等。其中，例如，利用表面等離子共鳴現(xiàn)象的生物傳感器中，對蒸鍍金薄膜的玻璃表面進行處理而作成傳感器片，其中固定識別分子之后，使靶蛋白分子溶液流過，使識別分子和靶蛋白分子接觸。在接觸的前后將一定波長的光照射到金薄膜，觀測反射光的時間變化。反射光由于因表面等離子共鳴現(xiàn)象而受到金薄膜附近的物質(zhì)密度的影響，所以從表面密度的變化可知實時的結(jié)合量變化，從求得結(jié)合速度常數(shù)、離解速度常數(shù)可以容易地得知離解常數(shù)。本發(fā)明中的識別分子從變性可溶化狀態(tài)的重折疊方法不特別限定，作為將識別分子進行可溶化的變性劑，可以使用胍鹽酸鹽、尿素等。使蛋白質(zhì)或核酸分子的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性(再生)一般叫做重折疊(refolding),為了該重折疊可以適宜地使用以不含變性劑的緩沖液將變性可溶化了的識別分子劇烈稀釋的方法、或用透析將變性劑濃度階段性地下降的方法等。此外，在日本專利特開2000-93172號中公開了在某個一定的胍鹽酸鹽濃度中，為促進蛋白質(zhì)中的二硫鍵的形成而投入氧化劑、或為了抑制立體結(jié)構(gòu)復(fù)性中的蛋白質(zhì)中的凝集而添加以L-精氨酸為代表的凝集抑制劑的方法，這些方法也可以非常適宜地用于本發(fā)明中。在識別分子向基材表面的固定中，可以使識別分子直接結(jié)合于基材表面，或也可以通過活性基結(jié)合。可以使用公知的任一反應(yīng)，例如可以舉出取代反應(yīng)、加成反應(yīng)、縮合反應(yīng)、聚合反應(yīng)或開環(huán)反應(yīng)等。通過活性基使識別分子共價結(jié)合到基材表面時，只要是可以使識別分子與基材共結(jié)結(jié)合的結(jié)構(gòu)，該活性基可以是公知的任一個官能團。作為活性基，可以舉出，通過用N-羥甲基鹵代乙酰胺或N-羥甲基二鹵代乙酰胺等將基材表面活性化而得到的a-乙酰胺基鹵基、通過用N-羥甲基二鹵代丙酰胺等將基材表面活性化而得到的a,(3-丙酰胺基鹵基、通過用N-羥甲基二鹵代乙酰胺等將基材表面活性化而得到的a,a-乙酰胺基二鹵基、或通過用N-羥甲基三卣代乙酰胺等將基材表面活性化而得到的a,a，a-乙酰胺基三鹵基等的用鹵代乙酰胺基鏈狀烷烴化劑將基材表面活性化而得到的活性基；或通過用表氯醇等將基材表面的氫氧基或氨基等的官能基活性化而得到的環(huán)氧基等。此外，作為其他適宜的活性基，可以舉出如利用以N-羥基琥珀酰亞胺基將羧基活性化的N-羥基琥珀酰亞胺基酯基、異氰酸酯基、異硫氰酸酯基、氨基、羧基、氫氧基、乙烯基、馬來酸酐縮亞胺基、對甲苯磺?；?、三氟代乙烷磺?；?tresyl基)或溴代氰基的活性基等，但不限定于這些。從可以以維持識別17分子的功能的狀態(tài)在平穩(wěn)的條件下反應(yīng)的觀點來看，最好是使用鹵代乙酰胺基鏈狀烷烴化劑將基材表面活性化而得到的活性基、環(huán)氧基、N-羥基琥珀酰亞胺基酯基、馬來酸酐縮亞胺基。還有，作為將活性基導(dǎo)入基材表面的方法，接枝聚合法、等離子體處理、電暈處理、化學(xué)處理或通過暴露于氣體而將官能團或活性基導(dǎo)入至基材表面的方法也很適合。若主動例示的話，可以制作一種導(dǎo)入有以下活性基或官能團的基材，gP，該活性基或官能團通過在聚苯乙烯、聚丙烯、聚對苯二甲酸乙二醇酯等上照射Y線、阻斷氧的狀態(tài)下浸漬于甲基丙烯酸縮水甘油酯等的乙烯基系的單體溶液中，從而可以容易地用于固定化。這些接枝鏈可以使用單獨的單體，也可以是由多個單體混合的共聚物。當然，也可以通過接枝聚合，將氫氧基或羧基、氨基等導(dǎo)入，甚至由如上所述的方法進行活性化而作為活性基。已知在等離子體或電暈處理中，可以將各種類型的官能團導(dǎo)入基材表面，若主動例示的話，可以在氧的存在下將羥基或羧基導(dǎo)入聚對苯二甲酸乙二醇酯基材表面，這些表面改質(zhì)也可以應(yīng)用于本發(fā)明中。此外，也可以將光反應(yīng)性的偶氮基或重氮基導(dǎo)入基材表面，在識別分子存在下通過照射光或放射線來固定識別分子。此外，使含有如上所述的活性基的聚合物預(yù)聚合，用適當?shù)娜軇┩坑诨谋砻?，進行干燥，從而也可以將活性基導(dǎo)入基材表面。如上所述，本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材可以通過(i)將編碼一種識別分子的核酸翻譯為多肽的工序，該識別分子對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性、(ii)將在上述翻譯過程中不溶化的該識別分子多肽用含有鹽酸胍或尿素的水溶液進行變性可溶化的工序、及(iii)在上述工序(ii)之后通過除去鹽酸胍或尿素使該識別分子多肽的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性的工序，調(diào)制識別分子，通過將此分子結(jié)合于基材表面而制造。此外，本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材可以通過以下的工序進行制造(i)在水不溶性基材的表面導(dǎo)入用于與識別分子形成共價鍵的活性基的工序，該識別分子對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種的耙物質(zhì)具有選擇結(jié)合性，及(ii)通過在溫度050'C中使水不溶性基材與含有識別分子的水溶液接觸IO秒以上，由此使該識別分子憑借共價鍵固定于基材表面的工序。這樣的本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材的制造方法也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？梢匀缟线M行制作的根據(jù)本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材，通過填充于具有入口和出口的容器中，可以構(gòu)筑生物學(xué)液體處理用裝置。這里使用的具有入口和出口的容器，只要是能夠收納生物學(xué)液體處理用基材的，則無特別限定，例如可以使用柱或管道等。上述的生物學(xué)液體處理用裝置也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。上述的生物學(xué)液體處理用裝置可用于耙物質(zhì)參與的疾病的治療，該耙物質(zhì)是選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種。作為耙物質(zhì)參與的疾病，可以舉出(1)急性腎功能衰竭、慢性腎功能衰竭等、(2)重型肝炎、急性肝功能衰竭、閉塞性動脈硬化癥、重癥肌無力、格林巴利綜合癥、多發(fā)性硬化癥、骨髓瘤、藥物中毒、天皰瘡等、(3)敗血癥性休克、家族性高血脂癥、閉塞性動脈硬化癥、局灶性腎小球硬化癥、透析淀粉樣蛋白癥等、及(4)潰瘍性結(jié)腸炎、慢性關(guān)節(jié)風濕病、多發(fā)性硬化癥、皮膚疾病、免疫疾病等，但不限定于這些。通過在上述的生物學(xué)液體處理用裝置中通上含有靶物質(zhì)的水溶液或含有靶物質(zhì)的血液，處理上述水溶液或血液，可以吸附或除去上述水溶液或血液中的靶物質(zhì)。這樣的生物學(xué)液體的處理方法及血液的處理方法也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。以下，依據(jù)實施例更詳細地說明，但本發(fā)明不限定于這些。[實施例]作為一個例子，將耙物質(zhì)作為人末梢血中的CD4陽性細胞，將識別分子中的配體部位作為根據(jù)已知的單克隆抗體Leu3a的序列而制作的單鏈抗體，用使用鏈霉親和素的情況作為締合結(jié)構(gòu)域例示。實施例1:Leu3ascFv-SA體的制作(Leu3a單鏈抗體的基因的制作)鼠抗人CD4單克隆抗體Leu3a的核酸序列的VH部位GenbankAccesionNo.M97867.1被公開，VL部位GenbankAccesionNo.M61046.1被公開。為了使這些序列單鏈抗體化，設(shè)計用作為Linker的編碼15個氨基酸序列(序列表的序列編號O的核酸進行連接之物，通過完全合成使其成為VL-linker-VH的順序，而進行制作。此時，在VL部位的正前方使之含起始密碼子(開始〕K乂)地加成NcoI位點，在VH部位的末端加成NotI位點。這些核酸亞克隆到PUC57載體中。上述核酸序列的完全合成及亞克隆利用了美國GenScript公司提供的合成受托服務(wù)。該核酸的序列與氨基酸3文字表示一起顯示在序列表的序列編號2上，在序列表的序列編號3只顯示氨基酸序列。(鏈霉親和素核基因的制作)鏈霉親和素的核酸序列作為GenbankAccesionNo.X03591而被公開。該序列中，提取出相當于自成熟型鏈霉親和素蛋白質(zhì)的N末端從13氨基酸殘基至139氨基酸殘基的鏈霉親和素核基因的序列，進行密碼子的最適化以便不改變氨基酸序列而大量在大腸桿菌表達。然后，設(shè)計成以下的形式，在5'末端加成XhoI位點，在3'末端進行sall位點、Histag(序列表的序列編號4)終止密碼子和HindIII位點的加成，利用完全合成進行制作。這些核酸亞克隆到pUC57載體。上述核酸序列的完全合成及大腸菌表達中的密碼子的最適化、亞克隆利用了美國GenScript公司提供的合成受托服務(wù)。該核酸的序列與氨基酸3文字表示一起顯示在序列表的序列編號5中，在序列表的序列編號6只顯示氨基酸序列。還有，在本說明書中，將來自該序列的鏈霉親和素蛋白質(zhì)簡稱為SA。(間隔區(qū)部位的制作)依靠來自Notl位點的3個氨基酸(AAA:氨基酸一文字表示)及來自FLAGtag(序列表的序列編號7)的8個氨基酸、來自XhoI位點的2個氨基酸(SS:氨基酸一文字表示)，間隔區(qū)由13個氨基酸構(gòu)成。間隔區(qū)也同樣合成進行亞克隆。該核酸的序列與氨基酸3文字表示一起顯示在序列表的序列編號8中，在序列表的序列編號6中僅顯示氨基酸序列。(大腸桿菌表達載體的改變)pET24d(+)質(zhì)粒(NOVAGEN公司)預(yù)先已進行從多克隆位點中的限制酶NotI位點至限制酶Bpull02I位點之間的去除。用限制酶NotI及限制酶Bpu11021(TAKARA公司)消化pET24d(+)質(zhì)粒，用Klenow片斷(NewEnglandBiolabs公司)和dNTP混合物(TAKARA公司)，按照附加的說明書(協(xié)議)進行平滑末端化。將此進行1%的瓊脂糖凝膠電泳、E氾r染色之后，切割、提取該DNA片斷之后，進行自我環(huán)化，然后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5株(TOYOBO)中而取得。自瓊脂糖凝膠電泳提取DNA片斷使用QIAGEN公司的試劑盒，連接使用TAKARA公司的連接試劑盒Ver.2。(表達載體的構(gòu)建)用限制酶NcoI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將上述已改變的pET24d(+)質(zhì)粒消化，進行同樣操作精制載體一側(cè)的DNA片斷。用限制酶NcoI及限制酶NotI(TAKARA公司)將亞克隆有編碼Leu3a單鏈抗體的核酸的載體消化，進行同樣操作精制編碼Leu3a單鏈抗體的核酸片斷。用限制酶NotI及限制酶XhoI(TAKARA公司)將亞克隆有編碼間隔區(qū)部位的核酸的載體消化，進行同樣操作精制編碼間隔區(qū)部位的核酸片斷。用限制酶XhoI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將亞克隆有編碼鏈霉親和素核基因的核酸的載體進行消化，進行同樣操作精制編碼鏈霉親和素核基因的核酸片斷。通過將如上精制的各個DNA片斷用TAKARA公司的連接試劑盒Ver.2連接成環(huán)狀，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5株(TOYOBO)，取得表達Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的表達載體。使用上述的表達載體而產(chǎn)生的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)作為"配體部位"含有Leu3ascFv(約30kD)，作為間隔區(qū)部位由13個氨基酸(約2kD)構(gòu)成、作為具有自我締合的性質(zhì)的"締合結(jié)構(gòu)域"由SA(約16kD)構(gòu)成。構(gòu)成"配體部分"的多肽的分子量和形成"締合結(jié)構(gòu)域"的多肽的分子量之比此時為1.9:1。實施例2:表達、胍鹽酸鹽變性條件下的回收將實施例1中構(gòu)建的表達載體按照說明書轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL2KDE3)株(NOVAGEN公司)。將其在放入34pg/ml的卡那霉素和1%的甘油的2xYT培養(yǎng)基(1.6%Bacto胰蛋白胨、1%Bacto酵母乳酸(，夕卜)、0.5%NaCl)中37。C下培養(yǎng)，600nm中的吸光度OD達到0.7-0.8時停止培養(yǎng)，用終濃度(final)15。/。的甘油作成甘油儲備(stock),保存于-8(TC。將該經(jīng)過保存的lml甘油儲備和放入34pg/ml的卡那霉素和1%的甘油的2xYT培養(yǎng)基300ml混合，在37'C下培養(yǎng)。600nm中的吸光度OD達到0.7~0.8時添加終濃度lmM的IPTG(TAKARA公司)，37'C下再培養(yǎng)4小時。將該大腸桿菌培養(yǎng)懸濁液移到500ml的離心管中，4,000rpm離心分離15分鐘，回收菌體粉末。將該菌體懸濁于30ml的超聲波裂解緩沖液(20mMTris-HClpH=8,0，300rnMNaCl)中,用超聲波破碎儀UltrasonicprocessorVP-60(TAITEC公司)冰冷卻下，經(jīng)過輸出5,50%工作循環(huán)，5分鐘超聲波破碎菌體。將此移到30ml的離心管中，10,OOOrpm離心分離15分鐘，舍棄上清液，得到形成有包涵體的不溶性的蛋白質(zhì)成分。將其用30ml的溶解緩沖液(A)(50inMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，6M胍-HC1)邊沖擊邊懸濁，就這樣在室溫中放置一晚。次日10，000rpm離心分離15分鐘回收上清，得到在胍鹽酸鹽變性下可溶化的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的粗精制物。將其用先前的70ml的溶解緩沖液稀釋，使之與預(yù)先用溶解緩沖液(A)平衡的TALON凝膠(BectonDickinson公司以下記載為BD公司)體積5ml在室溫下接觸2小時，使之吸附Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)。移到一次性柱(BD公司)作為TALON凝膠的柱，用25ml的溶解緩沖液(A)清洗。將該柱用25ml的洗脫緩沖液(B)(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，6M胍-HCl，150mM咪唑)洗脫。這里添加終濃度15mM的2巰基乙醇在室溫放置1小時后，通過0.22pm的過濾器，得到在胍鹽酸鹽變性下可溶化的Len3ascFv-SA蛋白質(zhì)的精制物。(胍鹽酸鹽階段稀釋透析下的重折疊精制)用Slide-A-Lyzer(截留分子量lOkD:PIERCE公司)將上述胍鹽酸鹽變性下可溶化的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的精制物液約30ml，用第1段的胍鹽酸鹽階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，2M胍-HCl)1L在4。C下透析一晚。然后，用第2段的胍鹽酸鹽階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300rnMNaCl，1M胍-HC1，400mML-精氨酸，375pM氧化型谷胱甘肽)1L在4。C下透析24小時。然后，為防止Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性后的沉淀形成，取出上述的階段稀釋透析中的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的精制物5ml，用第3段的胍鹽酸鹽階段稀釋透析外液(50mMTris-HC1pH=8.0，300rnMNaCl,0.5M胍-HC1，400mML-精氨酸)25ml進行稀釋。將該總計30ml的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)溶液再次放入Slide-A-Lyzer(截留分子量10kD:PIERCE公司)的透析盒內(nèi)，用第3段的胍鹽酸鹽階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，0.5M胍-HCl，400mML-精氨酸)1L、4。C下透析一晚。之后，重復(fù)磷酸緩沖生理鹽水(DulbeccoPBS(-)溶液二;y7吖公司以下僅記載為PBS(-))1L、4。C下透析812小時的操作。途中勉強形成的再沉淀物用離心分離及過濾器過濾去除，得到Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的重折疊精制品(以下，將此記載為Leu3ascFv-SA-guanidine)。用上述方法精制的Leu3ascFv-SA-guanidine的生產(chǎn)量每1L大腸桿菌培養(yǎng)液為99mg。實施例3:尿素階段稀釋透析下的重折疊精制用Slide-A-Lyzer(截留分子量10kD:PIERCE公司)將與實施例2的前半部分一樣精制的、胍鹽酸鹽變性下可溶化的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的精制物液約30ml用尿素階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300rnMNaCl，4M尿素)1L在室溫下透析一晚。然后，用第2段的尿素階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，2M尿素，400mML-精氨酸，375pM氧化型谷胱甘肽)1L在室溫下透析24小時。然后，為防止Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性后的沉淀形成，取出上述的階段稀釋透析中的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的精制物5ml，用第3段的尿素階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，1M尿素，400mML-精氨酸)25ml進行稀釋。將該總計30ml的Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)溶液再次放入Slide-A-Lyzer(截留分子量10kD:PIERCE公司)的透析盒內(nèi)，用第3段的Urea階段稀釋透析外液(50mMTris-HClpH=8.0，300mMNaCl，1M尿素，400mML-精氨酸)1L、室溫下透析一晚。之后，重復(fù)磷酸緩沖生理鹽水(DulbeccoPBS(-)溶液二y只^公司以下僅記載為PBS(-))1L、4'C下透析812小時的操作。途中少量形成的再沉淀物用離心分離及過濾器過濾去除，得到Leu3ascFv-SA蛋白質(zhì)的重折疊精制品(以下，將此記載為Leu3ascFv-SA-Urea)。用上述方法精制的Leu3ascFv-SA-Urea的生產(chǎn)量每1L大腸桿菌培養(yǎng)液為102mg。比較例1:22為比較對照，如下構(gòu)建去除實施例1及2的Leu3ascFv-SA的SA部分而未自發(fā)形成締合體的單鏈抗體基因。以下，記載為Leu3ascFv-Normal基因，將由此表達的蛋白質(zhì)表記載為Leu3ascFv-Normal。(含間隔區(qū)部位的C末端部位的改變)設(shè)計以下的人工基因，該人工基因含有NotI位點及來自FLAGtag(序列表的序列編號7)的8個氨基酸、來自c-mycepitopetag(序列表的序列編號10)的10個氨基酸，已導(dǎo)入Histag(序列表的序列編號4)、XhoI、SalI終止密碼子和HindIII位點等，與實施例1一樣進行合成、亞克隆。該核酸的序列與氨基酸3文字表示一起顯示在序列表的序列編號11中，在序列表的序列編號12只顯示氨基酸序列。(表達載體的構(gòu)建)用限制酶NcoI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將實施例1的已改變的pET24d(+)質(zhì)粒消化，進行同樣操作精制載體一側(cè)的DNA片斷。用限制酶NcoI及限制酶NotI(TAKARA公司)將亞克隆有和實施例1一樣編碼Leu3a單鏈抗體的核酸(Leu3ascFv-Nomial)的載體消化，進行同樣操作精制編碼Leu3a單鏈抗體的核酸片斷。用限制酶NotI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將亞克隆有對含有上述所示的間隔區(qū)部位的C末端部位進行改變的核酸的載體消化，進行同樣操作精制對含有間隔區(qū)部位的C末端部位進行改變的核酸片斷。通過將如上精制的各個DNA片斷用TAKARA公司的連接試劑盒Ver.2連接成環(huán)狀，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5株(TOYOBO)，取得表達Leu3ascFv-Normal蛋白質(zhì)的表達載體。使用上述的表達載體而產(chǎn)生的Leu3ascFv-Normal蛋白質(zhì)作為"配體部位"含有Leu3ascFv(約30kD)，含有間隔區(qū)部位的C末端改變部位由39個氨基酸(約5kD)，不含"締合結(jié)構(gòu)域"。對由上述制作的表達載體和實施例2—樣地進行(表達、胍鹽酸鹽變性條件下的回收)及(胍鹽酸鹽階段稀釋透析下的重折疊精制)。如此取得的1^113&30^Normal的生產(chǎn)量為每1L大腸桿菌培養(yǎng)液83mg。實施例4:(GPC分析)為了把握在實施例2、3及比較例1中制作的Leu3ascFv-SA-guanidine、Leu3ascFv-SA-Urea、及Leu3ascFv-Normal的締合體形成情況，進行了凝膠過濾分析(GPC分析)。艮卩，將各樣品作成lOOpg/ml的PBS(-)溶液，將其在凝膠過濾柱(TOSOH公司G4000PWXL)應(yīng)用(7:/，,)30|al。電泳緩沖液為PBS(-)、根據(jù)流速0.8ml/min、225nm的吸收進行鑒定。標準品使用凝膠過濾標準品(BIPRAD公司制造)。以峰值的洗脫時間為基礎(chǔ)，計算締合體的分子量。結(jié)果在表1顯示。[表l]表h各種識別分子的GPC分析<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>與比較例1的Leu3acFv-Normal比較，Leu3ascFv-SA-guanidine(實施例2)及Leu3ascFv-SA-Urea(實施例3)分子尺寸大，認為至少締合有4分子以上(4~8分子)。(SDS-PAGE分析)進行了Leu3ascFv-SA-guanidine(實施例2)的SDS-PAGE分析。即，對規(guī)定量2-3嗎(0.04-0.07nmo1)的Leu3ascFv-SA-guanidine添加過量(5nmo1)的D-生物素(+)(SIGMA公司)，與SDS-PAGE(含有2巰基乙醇)用的樣品緩沖液混合之后，99'C下熱處理5分鐘。和上述同樣操作，準備未添加生物素的樣品和未進行熱處理放置在室溫中的樣品。將這些用4-20%的聚丙烯酰胺凝膠(第一化學(xué)公司)進行SDS-PAGE、固定之后，用CBBR-250色素進行染色。該結(jié)果在圖1顯示。已知，鏈霉親和素(SA)易形成4聚體，在生物素存在下其締合變得更牢固，即便進行熱處理也維持4聚體的締合體(Proc.Natl.Acad.Sci.USAvo1.92，p3180-3184,1995)，在上述這樣的條件下進行SDS-PAGE分析時，可以分析在SA部分中是否形成有4聚體。如圖1的結(jié)果所示，Leu3ascFv-SA-guanidine中的一部分締合體即便在生物素存在下進行熱處理，也形成牢固的4聚體。因此，可知，在4個以上的識別分子即使在該締合結(jié)構(gòu)域(本實施例時SA)進行自我締合的締合體結(jié)構(gòu)之內(nèi)，4聚體結(jié)構(gòu)也特別穩(wěn)定。此夕卜，可知即便在不存在生物素、未進行熱處理時，盡管存在SDS這樣的強有力的表面活性劑，一部分也形成4聚體結(jié)構(gòu)，即使不存在生物素，4聚體結(jié)構(gòu)也穩(wěn)定。在和上述一樣地分析Leu3ascFv-SA-Urea(實施例3)及Leu3acFv-Normal(比較例1)時，存在SDS這樣的強有力的表面活性劑時，僅觀察到單體的帶。將如上從GPC分析和SDS-PAGE分析的結(jié)果所示的各識別分子的締合形成情況在表2中顯示。[表2]表2:各識別分子的締合體形成情況<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>實施例5:(GMA的接枝無紡布的制作)切斷由聚丙烯(以下記載為PP)構(gòu)成的無紡布P080HW-00F(東燃TAPYRUS公司制造、平均纖維直徑3.5pm)為19cmxl2cm，脫氣后進行氮置換、密封。通過對此照射200kGy的伽瑪射線，得到在基材表面產(chǎn)生自由基的PP無紡布。將4張該無紡布重疊，移到已進行充分氮置換、除去氧的容器內(nèi)，4(TC下浸漬于甲基丙烯酸縮水甘油酯(以下記載為GMA和GMA)的10v/v。/。甲醇溶液400ml中。通過25分鐘接枝反應(yīng)后取出無紡布，用大量的甲醇清洗，由此除去未反應(yīng)的GMA之后，減壓干燥，得到GMA接枝PP無紡布。通過下式定義進行接枝率的算出。(接枝后無紡布重量-接枝前無紡布重量)/接枝前無紡布重量此時的接枝率為89.1%。GMA接枝無紡布含有大量的作為活性基的縮水甘油基(環(huán)氧基)，可以與蛋白質(zhì)中的氨基反應(yīng)，通過共價鍵固定識別物質(zhì)。將4張該GMA接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，室溫(約23'C)下，在溶解于含有0.2%聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯(以下記載為Tween20)的PBS(-)(下面表述為PBS-T)的各識別分子溶液400nl(16昭識別分子/400ial)中邊輕輕攪拌19小時，邊浸漬。之后，將該無紡布轉(zhuǎn)移到含有160pM的D-生物素(+)的PBS(-)溶液40(^1中，封閉SA部的生物素結(jié)合部位。此時使用的各識別分子是在實施例2、3及比較例1中制作的Leu3ascFv-SA-guanidine、Leu3ascFv-SA-Urea、及Leu3ascFv-Normal。作為進一步的比較例，準備了市售的、同樣固定抗人CD4單克隆抗體(clone4H5、醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所)的無紡布，將此作為比較例2。此外，將未固定任何一個識別分子而進行同樣操作的GMA接枝無紡布作為比較例3。各種識別分子固定后，重復(fù)3次邊用20mlPBS-T溶液激烈攪拌邊清洗的操作，再用PBS(-)溶液20ml同樣進行2次清洗，對利用吸附結(jié)合在表面的識別分子進行沖洗，得到作為目的的、各識別分子通過共價鍵固定于基材表面的生物學(xué)液體處理用基材。依靠上述操作，實施例1、比較例1及比較例2的各識別分子經(jīng)由各識別分子中的氨基共價結(jié)合于上述活性化無紡布表面上。具有入口和出口的容量lml的容器(MoBi〕一小力，厶7于〕、乂制造)中填充4張上述各細胞吸附材料和PBS(-)溶液，制作了生物學(xué)液體處理用裝置。(細胞吸附性的評價)實驗即將開始之前，通過使上述柱的空氣通過，中斷PBS(-)溶液，將添加ACD-A(川澄化學(xué)株式會社)的正常人新鮮血液5.0ml(血液ACD-A=6.7:1)用注射器泵從細胞吸附器的入口以l.Oml/分鐘的流速進行送液，丟棄最初的5滴之后，由柱出口回收處理后的血液。從采用庫爾特計數(shù)儀(CoulterCounter)的白細胞數(shù)的變化及采用流式細胞儀(FACSCalibur:BectonDickinson公司)的流式細胞術(shù)法測定的回收細胞中的CD4陽性細胞的比例變化算出此時的CD4陽性細胞的除去率。細胞染色使用以下的溶液對回收的100pl血液中添加anti-CD4-PE液(cloneSK3、BectonDickinson公司制造)10^1、anti-CD8-FITC液(cloneRPA-T8、BectonDickinson公司制造)10^1及anti-CD45-PerCP液(BectonDickinson公司制造)lOpl,室溫下染色30分鐘后，添加FACS溶血素(BectonDickinson公司制造)lml、進行溶血。將CD45陽性的細胞作為白細胞控制(y—卜^力4t)，分析其中的CD4陽性細胞的比例。此外，為評價對靶物質(zhì)的特異性，同時顯示具有與CD4陽性細胞很相似的性質(zhì)但表面不具有CD4分子的CD8陽性細胞的回收率。將這些結(jié)果在表3中，實施例2、3及比較例1以3次實驗的平均值士SD表示，比較例2及3以1次實驗數(shù)值表示。[表3]表3:各識別分子中的CD4陽性細胞的除去率及CD8細胞的回收率固定于表面的識別分子CD4陽性細胞的除去率(%)CD8陽性細胞的回收率(%)Leu3ascFv-SA-guanidine(實施例2)91.4±2.576.1±3.4Leu3ascFv-SA-Urea(實施例3)62.8±4.177.9±6.1Leu3acFv-Normal(比較例1)29.6±4.478.9±1.14H5抗體(比較例2)32.772.2無識別分子(比較例3)21.381.6該結(jié)果顯示，在如實施例5這樣的固定條件下將識別分子用共價鍵固定于基材表面時，本發(fā)明的"至少有4個以上的識別分子在該締合結(jié)構(gòu)域具有自我締合的結(jié)構(gòu)"時，在靶物質(zhì)即CD4陽性細胞的吸附去除中顯著地發(fā)揮效果，CD8陽性細胞的非特異吸附除去也不顯示。這是一個超過相同條件下固定的市售的抗人CD4抗體的效果。此外，可知，在將締合體的分子數(shù)之內(nèi)、主要的為4聚體(根據(jù)實施例4)的Leu3ascFv-SA-guanidine(實施例2)作為識別分子時，效果特別高。實施例6:(生物素PEO-胺向GMA接枝無紡布表面的導(dǎo)入)和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。此時的GMA接枝率為81.4%。將該GMA的接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布4張，浸漬于10mM(10E-5mol/ml)生物素PEO-胺(PIECE公司)的甲醇溶液400^1中，37。C使之反應(yīng)48小時。通過將其用甲醇清洗2次、用PBS-T清洗2次、再用蒸餾水清洗2次之后，進行真空干燥，制作了生物素介由PEO鏈和氨基結(jié)合于表面的基材。(以下將此記載為氨基生物素化GMA-g-無紡布)(生物素肼向GMA接枝無紡布表面的導(dǎo)入)和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。此時的GMA接枝率為81.4%。將該GMA的接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布4張，浸漬于lmM(10E-6mol/ml)生物素肼(SIGMA公司)的甲醇溶液400^1中，37'C使之反應(yīng)48小時。通過將其用甲醇清洗2次、用PBS-T清洗2次、再用蒸餾水清洗2次之后，進行真空干燥，制作了生物素介由酰肼基結(jié)合于表面的基材。(以下將此記載為酰肼生物素化GMA-g-無紡布)將上述制作的GMA接枝無紡布、氨基生物素化GMA-g-無紡布及酰肼生物素化27GMA-g-無紡布浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，室溫(約23°C)下，浸漬于作為識別分子含有16pgLeu3ascFv-SA-guanidine的PBS-T溶液400^1(16嗎/400^1)中，邊輕輕攪拌19小時，邊浸漬。之后，將該無紡布轉(zhuǎn)移到含有160pM的D-生物素(+)的PBS(-)溶液400^1中，封閉SA部的生物素結(jié)合部位。根據(jù)上述，作為識別分子得到Leu3ascFv-SA-guanidine利用共價鍵導(dǎo)入到基材表面的基材(GMA接枝無紡布)及、Leu3ascFv-SA-guanidine主要介由表面的生物素依靠生物素-鏈霉親和素(biotin-SA)的非共價鍵被導(dǎo)入的基材(氨基生物素化GMA-g-無紡布及酰肼生物素化GMA-g-無紡布)。具有入口和出口的容量lml的容器(MoBi〕一少力，厶7于3、乂制造)中填充4張上述各細胞吸附材料和PBS(-)溶液，制作了生物學(xué)液體處理用裝置。(細胞吸附性的評價)細胞吸附性的評價與實施例5同樣地進行。結(jié)果在表4中以CD4陽性細胞(靶物質(zhì))除去能力來顯示。[表4]表4:各基材中的CD4陽性細胞的除去率結(jié)合有Leu3ascFv-SA-guanidine的基材CD4陽性細胞的除去率(％)GMA接枝無紡布(以共價鍵為主)72.8氨基生物素化GMA-g-無紡布(主要以生物素-SA非共價鍵)55.7酰胼生物素化GMA-g-無紡布(主要以生物素-SA非共價鍵)19.0該結(jié)果令人驚訝的是，在實施例2中制作的識別分子Leu3ascFv-SA-guanidine固定于基材表面來使用時，與如在非專利文獻l中例示的基材表面上導(dǎo)入生物素，與主要為識別分子中的締合結(jié)構(gòu)域SA之間以生物素-SA鍵固定，將配體部位有效定向固定相比，可以簡便制作的、依靠共價鍵將識別分子固定在基材表面一方，在靶物質(zhì)的選擇除去上效果高。Leu3ascFv-SA-guanidine與生物素牢固地結(jié)合，形成穩(wěn)定的4聚體的情況、及4分子以上締合的締合狀態(tài)的情況例示在實施例4中。因此，可知該識別分子為含有與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的配體部分及締合結(jié)構(gòu)域的直鏈上的分子，在至少4分子以上的識別分子通過該締合結(jié)構(gòu)域之間締合形成締合體結(jié)構(gòu)時，通過共價鍵固定于基材表面而成的生物學(xué)液體處理用基材優(yōu)異。此外，結(jié)果是，在酰肼生物素化GMA-g-無紡布中，靶物質(zhì)CD4陽性細胞的選擇除去性能差。認為用生物素肼制作的酰胼生物素化GMA-g-無紡布中，無紡布表面的電荷狀態(tài)或親疏水性的程度等，與氨基生物素化GMA-g-無紡布相比不同。其結(jié)果認為是，由于識別分子固定于該基材表面時，除了生物素-SA鍵之外，還依靠物理的吸附，識別分子的定向性進一步變化。如此，在主要靠生物素-SA的非共價鍵中，憑借生物素向基材表面的導(dǎo)入方法等，存在不能保持識別分子的結(jié)合活性的情況。實施例7:和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。此時的GMA接枝率為81.4%。將該GMA的接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布4張浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，室溫(約23。C)下，浸漬于作為識別分子含有16嗎Leu3ascFv-SA-guanidine的PBS-T溶液400|alU6ng/400nl)中，邊輕輕攪拌19小時，邊浸漬。之后，制作了以下2種生物學(xué)液體處理用基材，一種是將該無紡布轉(zhuǎn)移到含有160pM的D-生物素(+)的PBS(-)溶液40(^1中，封閉SA部的生物素結(jié)合部位時的生物學(xué)液體處理用基材(以下記載為"生物素封閉有")，另一種是移到不含D-生物素(+)的普通的PBS(-)溶液400^1中進行同樣的操作時的生物學(xué)液體處理用基材(以下記載為"生物素封閉無")。具有入口和出口的容量lml的容器(MoBi〕一少力，厶7于〕V制造)中填充4張上述各細胞吸附材料和PBS(-)溶液，制作了生物學(xué)液體處理用裝置。(細胞吸附性的評價)細胞吸附性的評價與實施例5同樣地進行。這些結(jié)果在表5中以3次實驗的平均值土SD表示。表5:有無生物素封閉的CD4陽性細胞的除去率及CD8細胞的回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>結(jié)果顯示，在將識別分子通過共價鍵固定于基材表面之后，無論生物素結(jié)合到作為該締合結(jié)構(gòu)域的SA的生物素結(jié)合部位，還是沒有結(jié)合，全部發(fā)揮同等的靶物質(zhì)除去性能。這表示在本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材中，即使在該結(jié)構(gòu)域部中使用SA，生物素對靶物質(zhì)除去性能的發(fā)揮完全不需要。實施例8:和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。只是此時，使反應(yīng)的GMA的甲醇溶液濃度在10-20。/。v/v。/。的范圍內(nèi)變化，準備接枝率不同的無紡布。此時的GMA接枝率從低者依次為53.8%、81.4%、121.6%及186.4%。將該GMA的接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布4張浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，浸漬于作為識別分子含有16嗎Leu3ascFv-SA-guanidine的PBS-T溶液400W(16ng/400W)中，室溫(約23。C)下邊輕輕攪拌19小時，邊浸漬。之后，將該無紡布轉(zhuǎn)移到含有160^M的D-生物素(+)的PBS(-)溶液400pl中，封閉SA部的生物素結(jié)合部位，制作了接枝率不同的4個種類的生物學(xué)液體處理用基材。具有入口和出口的容量lml的容器(MoBi〕一少力5厶7于〕少制造)中填充4張上述各細胞吸附材料和PBS(-)溶液，制作了生物學(xué)液體處理用裝置。(細胞吸附性的評價)細胞吸附性的評價與實施例5同樣地進行。這些結(jié)果在表6中以3次實驗的平均值土SD表示。[表6]表6:基于GMA接枝量的不同的CD4陽性細胞的除去率及CD8細胞的回收率<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>該結(jié)果顯示，將識別分子通過共價鍵固定于基材表面時的活性基(GMA的環(huán)氧基)若以某種程度以上存在于基材表面上，就對靶物質(zhì)除去性能發(fā)揮完全無影響，可以良好地使用本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材。以下，作為本發(fā)明的其他一例子，在將靶物質(zhì)作為人末梢血中的CD19陽性細胞，將識別分子中的配體部位作為根據(jù)已知單克隆抗體4G7的序列制作的單鏈抗體，將鏈霉親和素作為締合結(jié)構(gòu)域使用時的情況下例示。實施例9:4G7ScFv-SA體的制作(4G71單鏈抗體的基因的制作)作為鼠抗人CD19單克隆抗體4G7的核酸序列，VH部位GenbankAccesionNo.AJ555622及VL部位GenbankAccesionNo.AJ555479被公開。為使這些序列單鏈抗體化，設(shè)計了由作為linker的編碼15個氨基酸的序列(序列表的序列編號1)的核酸連接的序列，通過完全合成成為VL-linker-VH的順序，進行制作。此時，在VL部位的正前方添加NcoI位點以便含有起始密碼子，在VH部位加成NotI位點。將這些核酸亞克隆到pUC57載體中。上述核酸序列的完全合成及亞克隆利用了美國GenScript公司提供的合成受托服務(wù)。該核酸的序列與氨基酸3文字表示一起顯示在序列表的序列編號13上，在序列表的序列編號14只顯示氨基酸序列。和實施例1一樣地進行鏈霉親和素核基因的制作、間隔區(qū)部位的制作及大腸桿菌載體的改變，如下進行表達載體的構(gòu)建。用限制酶NcoI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將實施例1中已被改變的pET24d(+)質(zhì)粒消化，進行同樣操作精制載體一側(cè)的DNA片斷。用限制酶NcoI及限制酶NotI(TAKARA公司)將亞克隆有編碼4G7單鏈抗體的核酸的載體消化，進行同樣操作精制編碼4G7單鏈抗體的核酸片斷。用限制酶NotI及限制酶XhoI(TAKARA公司)將亞克隆有編碼間隔區(qū)部位的核酸的載體消化，進行同樣操作精制編碼間隔區(qū)部位的核酸片斷。用限制酶XhoI及限制酶HindIII(TAKARA公司)將亞克隆有編碼鏈霉親和素核基因的核酸的載體消化，進行同樣操作精制編碼鏈霉親和素核基因的核酸片斷。通過將如上精制的各個DNA片斷用TAKARA公司的連接試劑盒Ver.2連接成環(huán)狀，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5株(TOYOBO)，取得表達4G7scFv-SA蛋白質(zhì)的表達載體。使用上述的表達載體而產(chǎn)生的4G7scFv-SA蛋白質(zhì)作為"配體部位"含有4G7scFv(約29kD)，作為間隔區(qū)部位由13個氨基酸(約2kD)，作為具有自我締合的性質(zhì)的"締合結(jié)構(gòu)域"由SA(約16kD)構(gòu)成。構(gòu)成"配體部分"的多肽的分子量和形成"締合結(jié)構(gòu)域"的多肽的分子量之比此時為1.8:1。(表達、胍鹽酸鹽變性條件下的回收)使用如上所述制作的表達載體，和實施例2同樣地進行表達，變性可溶化、胍鹽酸鹽階段稀釋透析下的重折疊精制。如此，得到4G7scFv-SA蛋白質(zhì)的重折疊精制品(以下將此僅記載為4G7scFv-SA)。用上述方法精制的4G7scFv-SA的生產(chǎn)量為每1L大腸桿菌培養(yǎng)液有148mg。和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。此時的GMA接枝率為89.1%。將該GMA的接枝無紡布切斷為直徑7mm的圓的無紡布4張浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，浸漬于作為識別分子含有80嗎4G7scFv-SA的PBS-T溶液400W(80嗎/400pl)中，室溫(約23。C)下邊輕輕攪拌19小時邊浸漬。之后，制作了以下2種生物學(xué)液體處理用基材，一種是將該無紡布轉(zhuǎn)移到含有16(^M的D-生物素(+)的PBS(-)溶液400pl中，封閉SA部的生物素結(jié)合部位時的生物學(xué)液體處理用基材(以下記載為"生物素封閉有")，一種是移到不含D-生物素(+)的普通的PBS(-)溶液400^1中進行同樣的操作時的生物學(xué)液體處理用基材(以下記載為"生物素封閉無")。此外，將未固定任何一個識別分子而進行同樣操作的GMA接枝無紡布作為比較例4。具有入口和出口的容量lml的容器(MoBi〕一少力，厶7于^、乂制造)中填充4張上述各細胞吸附材料和PBS(-)溶液，制作了生物學(xué)液體處理用裝置。(細胞吸附性的評價)實驗即將開始之前，通過使上述柱的空氣通過，中斷PBS(-)溶液，將添加ACD-A的正常人新鮮血液5.0ml(血液ACD-A=6.7:1)用注射器泵自細胞吸附器的入口以1,0ml/分鐘的流速進行送液，丟棄最初的5滴之后，由柱出口回收處理后的血液。從采用庫爾特計數(shù)儀(CoulterCounter)的白細胞數(shù)的變化及采用流式細胞儀(FACSCalibur:BectonDickinson公司)的流式細胞術(shù)法測定的回收細胞中的CD19陽性細胞的比例變化算出此時的CD19陽性細胞的除去率。細胞染色使用這樣的溶液對回收的100(^1血液中添加Cyto-stat/coulterclone液(BectonDickinson公司制造；anti-CD19-FITC和anti-CD2-RD1的混合液)10|11及anti-CD45-PerCP液(BectonDickinson公司制造)10pl，室溫下染色30分鐘后，添加FACS溶血素(BectonDickinson公司制造)1ml進行溶血的物質(zhì)。將CD45陽性的細胞作為白細胞控制(《'一卜Sr力、it)，分析其中的CD19陽性細胞的比例。此外，為評價對靶物質(zhì)的特異性，同時顯示具有與CD19陽性細胞很相似的性質(zhì)但表面不具有CD19分子的CD2陽性細胞的回收率。將這些結(jié)果在表7中以3次實驗的平均值土SD表示，只是僅比較例4的無識別分子的結(jié)果為1次實驗結(jié)果。[表7]表7:將4G7scFv-SA作為識別分子時的CD19陽性細胞的除去率及CD2細胞的回收率固定化識別分子(biotinblock)CD19陽性細胞的除去率(%)CD2細胞的回收率(%)4G7scFv-SA固定(有)67.1±2.078.7±2.44G7scFv-SA固定(無)68,7±1.976.4±1.3無識別分子(比較例4)28.486.4該結(jié)果顯示，若識別分子中的與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的配體部位不同，則本發(fā)明的生物學(xué)液體處理用基材就可以選擇去除不同的耙物質(zhì)。此外，顯示和實施例7—樣，即便在該結(jié)構(gòu)域部使用SA，在靶物質(zhì)除去性能的發(fā)揮中完全不需要生物素。實施例10:和實施例5—樣地制作了GMA的接枝無紡布。此時的GMA接枝率為81.4%。將該GMA的接枝無紡布切斷為10cmx10cm的無紡布10張浸漬于乙醇后，機械擰擠，盡量除去乙醇后，邊在溶解于PBS-T的Leu3ascFv-SA-guanidine溶液240ml(9.6mg識別分子/240ml)中室溫(約23。C)下邊輕輕攪拌19小時，邊浸漬。各種識別分子固定后，重復(fù)3次邊用4LPBS-T溶液激烈攪拌邊清洗的操作，再用PBS(-)溶液4L同樣進行2次清洗，對利用吸附結(jié)合在表面的識別分子進行沖洗，得到作為33目的的、各識別分子通過共價鍵固定于基材表面的生物學(xué)液體處理用基材。具有入口和出口的容器中填充IO張上述生物學(xué)液體處理用基材和PBS(-)溶液及抗壞血酸之后，用25kGy的放射線滅菌。由此，制作了以CD4陽性細胞為靶物質(zhì)的、依靠血液體外循環(huán)的自身免疫疾病治療用的裝置。參考例為明確與已知技術(shù)之間的差異，詳細分析記載于非專利文獻1中的生物學(xué)液體處理用基材的制作方法和實驗結(jié)果，與本發(fā)明進行理論上的比較。這里，非專利文獻l中使用的磁珠的物理特性記載于Dynal公司(挪威)DynabeadsM-280Sheepanti-mouseIgG的數(shù)據(jù)單(Prod.No.l12.01和112.02，Rev.No.004)上，可以算出用于實驗的磁珠的量或表面積。非專利文獻l中，介由生物素將固定識別分子的基材進行調(diào)整時，作為生物素與磁珠表面的羊抗鼠抗體的氨基化學(xué)結(jié)合的條件，使用400nl，這相當于2.4xl0e8珠。由于是直徑2.8pm的磁珠，由球的表面積公式(4:tr2)為2.46><10e-7cm7珠，用于反應(yīng)的磁珠的總表面積約為59.1cm2。使N-羥基琥珀酰亞胺基生物素與其反應(yīng)、進行清洗，將清洗之后的反應(yīng)物與0.1mg/ml的作為識別分子的單鏈抗體-鏈霉親和素融合蛋白質(zhì)的溶液接觸，介由磁珠表面的生物素固定識別分子。此時使用的識別分子的量如下估計。若由用于反應(yīng)的微量離心管的容積考慮最大是lml，要想使識別分子溶液均一地接觸400W的珠最小也需要10(^1左右，則為了介由生物素固定于該磁珠表面所使用的該識別分子的物質(zhì)量為10-lOOpg左右。所以，用于介由生物素將識別分子表面固定化而使用的每單位面積的使用量算出約為0.17陽1.7ng/cm2。之后，非專利文獻1中公開了清洗上述磁珠之后再懸濁以便成為6xl0e5珠/Vi1(lOpg/pl),將其中50pl(最初用于生物素及介由生物素的識別分子固定化反應(yīng)的量的8分之1量，即3xl0e7珠、作為除去對象物質(zhì)可以結(jié)合的表面積約7.4cm2)與作為含有靶物質(zhì)的生物學(xué)液體的lml的5xl0e4CFU/ml濃度的菌的孢子(作為孢子絕對量5xl0e4CFU)在室溫或4。C接觸1小時，可以將作為靶物質(zhì)的菌的孢子90。/。以上吸附分離至該磁珠表面。該結(jié)果是以下的一種情況作為生物學(xué)液體在含有0.1%的牛血清白蛋白(BSA)的磷酸生理鹽水、PBS中混入作為對象的菌的孢子(蠟質(zhì)芽孢桿菌孢子)的液體、不含除去對象物以外的夾雜物的情況。非專利文獻1中還記載牛奶中混入作為對象的菌的孢子而進行同樣的研究的情況，此時的吸附除去性能達到37%，含有牛奶這樣的夾雜物時性能顯著降低。另一方面，如多個實施例所記載，本說明書中記載的生物學(xué)液體處理用基材使用僅添加抗凝劑的人全血，其對象為多種多樣的夾雜物的物質(zhì)，除了含有液狀的蛋白質(zhì)或鹽、脂質(zhì)的物質(zhì)之外，還將含有紅細胞或血小板這樣的與實施例中作為靶的白細胞相比極大量存在的顆粒狀的血細胞、或含有與靶物質(zhì)的白細胞物理性狀極其相似的其他的淋巴細胞等。作為本說明書中的實施例的標準條件，使16叱的物質(zhì)量的識別分子固定于切斷成直徑7mm的圓的4張無紡布(作為靶物質(zhì)可以結(jié)合的表面積為140-190cm2)上，因此由共價鍵將識別分子進行表面固定化所用的每單位面積的使用量算出約為0.084-0.114pg/cm2。這與非專利文獻l比較，顯示用于固定在表面的識別分子的固定化反應(yīng)投入的物質(zhì)量或每單位面積的使用量無大變化或、1位數(shù)很少的程度的量。本說明書中的無紡布表面的理論有效表面積的算出方法是，假定構(gòu)成無紡布的纖維為圓柱時的表面積，根據(jù)下式算出。有效表面積(mVg)=4/無紡布素材的比重(d)x無紡布平均纖維徑(pm)然而，假設(shè)末梢血中的白細胞數(shù)為6,000個細胞4d(6xl0e6個細胞/ml)、末梢血中的淋巴細胞的比例為40%、其中CD4陽性細胞為40%則變成960個細胞/>1，因此實施例顯示的靶物質(zhì)之一的CD4陽性細胞在血液中的數(shù)估計約為lxl0e6個細胞/ml。將此填充到具有入口和出口的柱中，將含有大量除去耙物質(zhì)以外的夾雜物的生物學(xué)液體即只添加抗凝劑的人全血5ml以lml/分鐘的流速進行通液(與基材的接觸時間全部為5分鐘)。盡管如此短暫的接觸時間，也可以吸附除去60-90%以上的除去靶物質(zhì)，與除去對象物質(zhì)物理性狀非常相似的其他淋巴細胞更可以回收70%以上。這與上述的非專利文獻l相比，顯示盡管對表面的固定化反應(yīng)所用的識別分子的物質(zhì)量同等或低1位數(shù)，但可以在12分之1的處理時間(相對于60分為5分)處理IOO倍量的除去靶物質(zhì)(相對于非專利文獻1:5xl0e4CFU/mlxlml的孢子，本發(fā)明lxl0e6個細胞/mlx5ml的細胞)，顯示著記載于本說明書的基材在活性或性能上比已知技術(shù)優(yōu)異。這在啟發(fā)使非專利文獻l中記載的形成4聚體以上的多聚體的識別分子即單鏈抗體-鏈霉親和素融合蛋白質(zhì)中的位于中心的鏈霉親和素的生物素結(jié)合部位與、導(dǎo)入至基材表面的生物素結(jié)合這一情況，由于伴隨有立體障礙因而效率低是原因之一。此外，識別分子要將鏈霉親和素作為締合結(jié)構(gòu)域形成4聚體，推測將配體部分配置在頂點的正4面體結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定。圖2中顯示識別分子的締合體結(jié)構(gòu)(4聚體)的模式圖。即，認為原因是，為了使該識別分子介由生物素固定至基材表面，該識別分子締合體的正4面體結(jié)構(gòu)產(chǎn)生形變的概率較高，結(jié)果配體部位以不能識別靶物質(zhì)的形態(tài)非效率地被固定的比例較大。或者認為因為在非專利文獻1的固定化方法中，用于投入固定化的識別分子中僅有一部分實際介由生物素被固定。另一方面，在用本說明書中記載的方法，利用共價鍵固定識別分子時，可以以維持正四面體結(jié)構(gòu)的狀態(tài)固定于表面。此時，配置配體部位的4個頂點之內(nèi)至少一個頂點以從基材表面向外側(cè)的形態(tài)被固定。此外，由于用于形成共價鍵的活性基大量存在于表面，所以可以將更多的識別分子固定。認為該結(jié)果是，發(fā)揮了非常多的識別分子將至少1個頂點的配體部位朝向外側(cè)被定向固定這樣的當初完全沒有預(yù)想到的效果。這顯示配體部位的4個頂點中3個頂點即使因與基材表面之間的共價鍵而失活，作為生物學(xué)液體處理用基材也具有超群的效果，本領(lǐng)域技術(shù)人員極難預(yù)測該效果。圖3顯示本發(fā)明的基材表面中的識別分子的固定化狀態(tài)及配體部位的定向狀態(tài)的模式圖。此外，可知將可以吸附除去耙物質(zhì)的表面積同樣假設(shè)為100cn)2而算出時，除去靶物質(zhì)的處理量幾乎相等，(非專利文獻l:約6.75xl0e5CFU/cm2，本發(fā)明實施例5.3-7.1xl0e5個細胞/cm2)可以在12分之1的處理時間(相對于60分為5分)中進行分離。進而考慮到大量存在夾雜物的情況，可知即使本發(fā)明將可以吸附除去靶物質(zhì)的表面積設(shè)為相同進行比較，與非專利文獻1相比在性能面上格外優(yōu)異。還有，非專利文獻1中使用的芽孢桿菌(Bacillus)種的孢子的直徑根據(jù)文獻報告為0.9-1.7pm左右(JournalofAppliedMicrobiologyFebruary2007，102,P203-312)，小于本說明書的實施例中作為目的的白細胞直徑10-20nm。因此，對于非專利文獻l的基材，作為靶的孢子比起本實施例中的白細胞每單位面積可以吸附數(shù)量更多。B口，這些不同并不是起因于物理上基材表面的面積不足。不僅血細胞成分除去療法，在分離、處理血細胞成分的整個醫(yī)療技術(shù)中，盡管期待著利用免疫反應(yīng)等的生物學(xué)相互作用，將理論上推定為病因的靶物質(zhì)病因細胞進行更選擇特異地捕捉，以此減少副作用，提高安全性和治療效果，但將作為血液中的靶物質(zhì)的細胞、尤其從全血中直接、特異地捕捉的技術(shù)并未作為可以實用上利用的技術(shù)而確立。根據(jù)本發(fā)明，可以提供將作為靶物質(zhì)的細胞從全血中直接、特異地捕捉用的、可以實用上利用的血液處理用基材、裝置及分離方法，在可以僅處理目的靶物質(zhì)的意義上，對EBM(EvidenceBasedMedicine)時代的醫(yī)療的質(zhì)量、效率的提高作出貢獻。此外，在自血液以外的生物學(xué)液體的靶物質(zhì)的分離的方面，根據(jù)本發(fā)明，可以提供成本上廉價、產(chǎn)業(yè)上可以利用的生物學(xué)液體處理用基材、裝置及分離方法，該基材無需預(yù)先在基材表面固定生物素之后，用生物素-鏈霉親和素的親和性，依靠非共價鍵將靶分子進行固定這一繁雜且花費成本的操作，因此可以對食品檢查環(huán)境等廣泛領(lǐng)域的分離和檢測36方法的普及做出貢獻。權(quán)利要求1.一種生物學(xué)液體處理用基材，其是對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種的靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子通過共價鍵固定于基材表面，其特征在于，該識別分子是含有與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的配體部分及締合結(jié)構(gòu)域的直鏈上的分子，至少4分子以上的識別分子通過該締合結(jié)構(gòu)域之間進行締合而形成締合體結(jié)構(gòu)。2.如權(quán)利要求1所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，該識別分子為單鏈的多肽，該多肽是通過使編碼配體部分的核酸與編碼締合結(jié)構(gòu)域的核酸連接的核酸表達而得到的多肽，所述配體部分構(gòu)成該識別分子。3.如權(quán)利要求2所述的基材，其特征在于，該識別分子為通過使編碼配體部分的核酸與編碼締合結(jié)構(gòu)域的核酸介由編碼間隔區(qū)的核酸連接的核酸表達而得到的多肽，所述配體部分構(gòu)成該識別分子，該間隔區(qū)是由0100個氨基酸構(gòu)成的肽性間隔區(qū)。4.如權(quán)利要求2或3所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該配體部分的核酸翻譯的多肽的分子量在100kD以下。5.如權(quán)利要求2至4的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該締合結(jié)構(gòu)域的核酸翻譯的多肽的分子量在50kD以下。6.如權(quán)利要求2至5的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，自編碼該配體部分的核酸翻譯的多肽是單鏈抗體。7.如權(quán)利要求2至6的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，該締合結(jié)構(gòu)域是從編碼各個鏈霉親和素或親和素的全部或一部分的核酸翻譯的多肽區(qū)，4個該多肽區(qū)自發(fā)地締合，l個締合體中含有4個配體部分。8.如權(quán)利要求2至7的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，其特征在于，構(gòu)成該配體部分的多肽的分子量和構(gòu)成該締合結(jié)構(gòu)域的多肽的分子量之比為1:10-20:1的范圍。9.如權(quán)利要求2至8的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，將編碼對耙物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子的核酸翻譯為多肽，將在上述翻譯過程中不溶化的該識別分子多肽用含有鹽酸胍或尿素的水溶液進行變性可溶化，然后通過除去鹽酸胍或尿素使該識別分子多肽的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性而被制造。10.如權(quán)利要求2至9的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材，在水不溶性基材的表面導(dǎo)入用于與對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子形成共價鍵的活性基，然后通過在05(TC中使水不溶性基材與含有識別分子的水溶液接觸10秒以上，由此使該識別分子憑借共價鍵固定于基材表面而被制造。11.如權(quán)利要求2至IO的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的制造方法，含有(i)將編碼對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子的核酸翻譯為多肽的工序，所述靶物質(zhì)選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種，(ii)將在上述翻譯過程中不溶化的該識別分子多肽用含有鹽酸胍或尿素的水溶液進行變性可溶化的工序，及(iii)在上述工序(ii)之后通過除去鹽酸胍或尿素使該識別分子多肽的立體結(jié)構(gòu)復(fù)性的工序。12.如權(quán)利要求2至10的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的制造方法，含有(i)在水不溶性基材的表面導(dǎo)入用于與識別分子形成共價鍵的活性基的工序，該識別分子對選自有機體相關(guān)物質(zhì)、細菌、細胞、細胞塊、病毒或病毒感染細胞的至少一種的靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性，及(ii)通過在05(TC中使水不溶性基材與含有識別分子的水溶液接觸10秒以上，使該識別分子憑借共價鍵固定于基材表面的工序。13.—種生物學(xué)液體處理用裝置，在具有入口和出口的容器中填充權(quán)利要求1至10的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材。14.如權(quán)利要求13所述的生物學(xué)液體處理用裝置，用于疾病的治療。15.如權(quán)利要求13或14所述的生物學(xué)液體處理用裝置的制造方法，含有在具有入口和出口的容器中填充權(quán)利要求1至10的任一項所述的生物學(xué)液體處理用基材的工序。16.—種生物學(xué)液體處理方法，含有使含有靶物質(zhì)的水溶液通過權(quán)利要求13或14所述的生物學(xué)液體處理用裝置的工序。17.—種血液處理方法，包括使含有靶物質(zhì)的血液通過權(quán)利要求13或14所述的生物學(xué)液體處理用裝置的工序。全文摘要本發(fā)明的目的在于提供一種用于將作為靶物質(zhì)的細胞等從全血中直接、特異地捕捉的、實用上可以利用的血液處理用基材，及可以從生物學(xué)液體直接分離靶物質(zhì)、成本上廉價、產(chǎn)業(yè)上可以利用的生物學(xué)液體處理用基材。根據(jù)本發(fā)明，可以提供一種生物學(xué)液體處理用基材，對靶物質(zhì)具有選擇結(jié)合性的識別分子通過共價鍵固定于基材表面，其特征在于，該識別分子是含有與靶物質(zhì)選擇性結(jié)合的配體部分及締合結(jié)構(gòu)域的直鏈上的分子，至少4分子以上的識別分子形成締合體結(jié)構(gòu)。文檔編號A61M1/36GK101478998SQ20078002404公開日2009年7月8日申請日期2007年6月27日優(yōu)先權(quán)日2006年6月27日發(fā)明者前田拓郎,杉山雄也,草加孝之,野村昌行申請人:旭化成株式會社