專利名稱：：有益微生物組合物、含有該組合物的顆粒、及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明的主題是一種包含活體或再生的有益微生物的益生菌組合物或預混合物，其包含活體或再生有益微生物、酵母壁和/或失活酵母。酵母壁和/或失活酵母的存在特別用于穩(wěn)定該有益微生物。這種組合物或預混合物可以用于制備作為動物詞料的顆粒。
背景技術(shù)：
：術(shù)語"益生菌"(或有益微生物)指活體微生物，當它們被足量攝取后，通過增強腸內(nèi)菌叢的特性對宿主有機體發(fā)揮積極作用，遠超過傳統(tǒng)的營養(yǎng)作用。它們成為動物飼料中使用的抗生素的替換物。目前最常見的是食品或食品補充劑中的細菌或酵母。益生菌主要分為四種類型-乳酸菌(乳酸桿菌和球菌)；-來源于人和動物體的雙歧桿菌；-各種酵母，包括酵母屬(^"cc/wrawF&y)型酵母；-其他產(chǎn)芽孢桿菌，包括枯草芽孢桿菌和蠟樣芽胞桿菌?？杉訜釟绲奈⑸锊环仙鲜鲆嫔亩x，即使一些治療作用可能歸因于它們。廣義上講，術(shù)語"益生菌"也指含有上述微生物的食品。益生菌逐漸地被用于人類消費和作為動物飼料，尤其作為抗生素替代物成為一種更健康、更自然和更環(huán)保的食物。在動物營養(yǎng)學中，這些微生物通常以預混合物的形式添加到顆粒飼料中，該預混合物還包含維生素、微量元素和氨基酸。然而將有益微生物引入顆粒中并非易事，實際上，有益微生物在形成顆粒的過程中經(jīng)常被滅活。顆粒生產(chǎn)中這一步是在蒸汽溫度6(TC到IO(TC之間，壓力0.5到3.5bar范圍內(nèi)進行的，而在這種溫度和濕度條件下，微生物通常都被滅活。專利申請EP0694610中，紅發(fā)夫酵母(尸/w^ar/w&zjwa)可以制造染料、蝦青素以及用于使飼養(yǎng)鱒魚和鮭魚的魚飼料顯示紅色。通過在糖(例如葡萄糖)存在下進行干燥已經(jīng)使紅發(fā)夫酵母難以制成顆粒的情況有所改善。然而，這種情況并不包括動物消化過程中為發(fā)揮其作用必須保持活性的益生酵母。出人意料地，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，有益微生物與酵母壁和/或失活酵母進行混合，取代其它傳統(tǒng)使用的預混合物載體例如小麥粉或碳酸鈣，隨時間過去，有益微生物顯示其在預混合物中穩(wěn)定性增強。酵母壁在藥理學和農(nóng)業(yè)-食品部門的應(yīng)用已有描述。這些酵母壁在藥用片劑的制備中用作賦形劑，尤其是其具有崩解的性質(zhì)用作粘合劑(Ozekietal.AAPSPharmSciTech,2003;4(3):E41)或者作為包衣制品的組分(EP1159882:Yuasaetal.IntJ.Pharm.,2002，Apr26;237(1-2):15-22)。然而針對申請人公司的知識，用它們來增強活體或再生微生物穩(wěn)定性的可能性至今沒有人意識到。因此，對于微生物來說，隨著時間過去能保持穩(wěn)定是現(xiàn)實需要，對攝取它們的動物健康的預期影響也是現(xiàn)實的。
發(fā)明內(nèi)容為此，本發(fā)明的主題是提供一種益生菌組合物或預混合物，包括-活體或再生益生菌微生物(a)0.5-7%，選自益生酵母、含乳酸菌類型的有益菌；及其混合物，所述乳酸菌選自乳酸桿菌和除芽孢桿菌(^d///)以外的雙歧桿菌。-化合物(b)10-95%,選自酵母壁和失活酵母，和-營養(yǎng)補充劑(C)0-95%，尤其包括維生素、和/或微量元素、和/或氨基酸、和/或其它可用于動物飼料中的添加劑。上述百分比是以干重比組合物的總重量來表示的。在本發(fā)明中，表述"再生"或"能成活的"微生物應(yīng)理解為表示一類微生物，它們可在營養(yǎng)介質(zhì)存在下，可恢復其分裂和形成群體的能力。5由益生酵母的例子，可提到選自下述組的益生酵母，包括酵母屬(Sacc/zaraw少ces)酵母，克魯維酵母屬(K/"yveramycey)酵母例如馬克斯克魯維酵母(《/"yveram少CMmarx/aww)，及其混合物。優(yōu)選的釀酒酵母(Sacc/2aTOmycacwev&ae)菌株實施例為保藏在(英國)國立酵母菌培養(yǎng)保藏中心(NCYC)的釀酒酵母Sc47菌株，編號47;保藏在巴斯德保藏中心(CNCM)的釀酒酵母菌株，編號1-1007;保藏在巴斯德保藏中心(CNCM)釀酒酵母菌株，編號1-1009;保藏在MUCL保藏中心的釀酒酵母菌株，編號39885;保藏在CBS保藏中心的釀酒酵母菌株，編號39493.94;保藏在MUCL保藏中心的馬克斯克魯維酵母，編號39434;及其混合物。最優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的組合物包括的酵母，其對應(yīng)保藏在國立酵母菌培養(yǎng)保藏中心(NCYC)，編號為47的釀酒酵母Sc47菌株。因此，根據(jù)一最具體實施例，所述益生菌組合物或預混合物包括-活體或再生酵母0.5-75%，優(yōu)選5-30%;-酵母壁和/或失活酵母10-80%，優(yōu)選25-50%;-營養(yǎng)補充劑0-90%，優(yōu)選5-80%;上述百分比是以干重比組合物的總重量來表示的。該組合物作為單胃動物飼料特別穩(wěn)定。所述酵母壁，可以選自各種食品等級的酵母，例如釀酒酵母。更具體地說，酵母壁為市售的商標為PRONARDY,SAFMANNAN⑧或者BIOMOS的酵母，分別來自Prodessa，Biospringer和Alltech公司。所述酵母壁可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員知悉的方法獲得，更具體地說，酵母壁自溶后，用物理方法將不溶部分與溶解部分分離，其中不溶部分含有酵母壁。在本發(fā)明上下文中，失活酵母理解為沒有任何發(fā)酵能力的酵母。只要屬于食品等級，任何類型的失活酵母都可使用，例如酵母(&cc^raw少c")。它們可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員知悉的方法獲得，更具體地，通過加熱處理得到。根據(jù)本發(fā)明的最優(yōu)實施例，失活酵母干物質(zhì)含量高于95%。當使用失活酵母和酵母壁混合物時，酵母的來源可以相同或不同。本發(fā)明的益生菌組合物具有令人非常滿意的均勻性。不希望被任何理論所束縛，根據(jù)本發(fā)明所述的組合物或預混合物中的酵母壁和/或失活酵母，通過減少有益微生物的水含量并使水含量隨時間保持穩(wěn)定，使得有益微生物保持穩(wěn)定性成為可能。另一方面，當使用現(xiàn)有技術(shù)中記述的尤其是包括面粉和碳酸鈣的傳統(tǒng)預混合物載體時，水含量大大增加。而且使用碳酸鈣會引起磨損和分離的問題。因此，根據(jù)一種具體的實施方式，根據(jù)下述試驗A測定的有益微生物中的干物質(zhì)含量的變化值VA是正的。試驗A:在時間TQ，即有益微生物和酵母壁和/或失活酵母混合之前，利用ISO1741方法測定有益微生物的干物質(zhì)含量，得到值DMo。在時間T44天，即有益微生物和酵母壁和/或失活酵母混合14天后，測定有益微生物的干物質(zhì)含量，得到但DMt。然后進行計算V=[(DMT-DMo)/DM()]x100。優(yōu)選地，有益微生物的干物質(zhì)含量變化值V大于0.5。/。，優(yōu)選大于1%。根據(jù)一種具體的實施方式，本發(fā)明所述的組合物或預混合物還可以包括營養(yǎng)補充劑，特別包括維生素和/或微量元素和/或氨基酸和/或其它可用于動物飼料的添加劑。組合物中加入的維生素選自維生素A、維生素B、維生素D3、維生素E、維生素B1、B2、B5、B6、B12、C、PP、維生素H、葉酸、膽堿、維生素K3、泛酸，及其混合物。組合物中加入的微量元素可以是食品等級的礦物鹽，選自銅、鋅、鐵、錳、碘、硒，及其混合物。組合物中加入的氨基酸選自蛋氨酸、賴氨酸、L-蘇氨酸、色氨酸，及其混合物。上述益生菌組合物或預混合物可以直接加入動物飼料中。一般來說，根據(jù)本發(fā)明的組合物，總重每千克動物飼料中加入5xl07到5xl01QCFU(菌落形成單位)有益微生物，優(yōu)選總重每千克動物詞料中加入5xl08到5xl(TCFU有益微生物。例如，本發(fā)明所述組合物的有益微生物是Lesaffre公司提供的商標為BIOSAF⑧的釀酒酵母Sc47時，加入到動物飼料中的本發(fā)明組合物，每一千克動物飼料總量中含有釀酒酵母Sc472.5到8xl09CFU。上述益生菌組合物也可用于益生菌顆粒，尤其適用于動物伺料。因此，根據(jù)另一項實施方式，本發(fā)明涉及的益生菌顆粒包括-上述益生菌組合物或者預混合物，和-一種適用于欲給予的動物種類的營養(yǎng)混合物。一般來說，本發(fā)明所述的顆粒包含質(zhì)量分數(shù)為千分之一的有益微生物。所述營養(yǎng)混合物是一種由制備用于動物物種顆粒的本領(lǐng)域的技術(shù)人員常規(guī)使用的混合物，其組成取決于欲給予的動物種類，但是通常含有植物纖維粉，例如小麥粉或/和大豆油或油菜籽油渣餅和/或甜菜漿和/或糖漿和/或尿素，以本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的比例配制。然后預混合物摻到原料(飼料)中，原料種類及量取決于動物物種。該營養(yǎng)混合物選自富含維生素和/或微量元素和/或氨基酸和/其它可用于動物飼料的添加劑。與本發(fā)明益生菌組合物相關(guān)的動物飼料如下所述。制備本發(fā)明所述顆粒的方法，包括下述歩驟-制備根據(jù)本發(fā)明的益生菌組合物或預混合物；-將所述的組合物或預混合物加入到適于欲給予的動物種類的營養(yǎng)混合物中，優(yōu)選在潛伏期至少14天之后；-在溫度60°C-100°C，壓力介于0.5-3.5bar條件下將蒸汽注入事先得到的混合物，并沖壓。有利的，包含有益微生物的組合物或預混合物在加入到營養(yǎng)物混合物之前可以存活至少15天，優(yōu)選至少l個月。根據(jù)本發(fā)明的方法獲得的顆粒具有令人非常滿意的有益微生物存活率。根據(jù)一種具體實施方式，有益微生物形成顆粒過程中的存活率可以通過系數(shù)S來測定，系數(shù)S相當于制粒后CFU值(CFUaf)與制粒前CFU值(CFUbe)的比例乘以100。根據(jù)本發(fā)明的顆粒中微生物的存活率大于或等于20%，優(yōu)選大于或等于50%，更有選大于或等于70%。本發(fā)明還涉及一種改善含益生菌組合物或者預混合物的益生菌顆粒的穩(wěn)定性的方法。所述組合物或預混合物包括有益微生物和酵母壁和/或失活酵8母，還可選擇包括營養(yǎng)補充物，該補充物尤其含有適合于動物的維生素和/或微量元素和/或氨基酸和/其他添加劑。在蒸汽注入形成顆粒以及沖壓之前，將該組合物加入到營養(yǎng)混合物中。如上所述，可發(fā)現(xiàn)對制粒溫度的耐受性尤其是由于根據(jù)本發(fā)明的組合物中存在的有益微生物的干物質(zhì)含量增加或保持。本發(fā)明所述的顆粒，或者通過本發(fā)明方法所獲得的顆粒，可被用作動物飼料。本發(fā)明提供一種供應(yīng)量可控的有益微生物，其最終飼料中活體有益微生物的含量占根據(jù)本發(fā)明的組合物或顆粒的生產(chǎn)用量的至少20%。具體實施例方式本發(fā)明可以通過如下實施例以及圖表更加準確的描述和說明，當然這些實施例僅用于解釋本發(fā)明的主題，不以任何方式構(gòu)成對本發(fā)明的限制。實施例實施例l.-使用材料本發(fā)明的實施例采用如下材料益生酵母是商標為BIOSAF⑧的市售產(chǎn)品(其余實施例只用BIOSAF⑧表示)，BIOSAF⑧是釀酒酵母菌株Sc47活體細胞的濃縮物，lxl01QCFU/g(NCYC-47)。此產(chǎn)品僅限于動物飼料，以顆粒形式提供，溫度達8(TC顯示熱穩(wěn)定性。酵母壁由釀酒酵母壁組成，自溶后通過離心分離制得。失活酵母由釀酒酵母壁組成，通過熱處理制得。物理性質(zhì)如下表1所<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>預混合物1-3中BIOSAF⑧的干物質(zhì)含量通過官方IOS1741標準進行測定，測定時間T為1天，2天，7天和14天。結(jié)果如圖l所示:根據(jù)試驗A的干物質(zhì)變化按如下公式計算V二[(DMT-DMo)/DM。]x100預混合物/接觸時間l天2天7天14天預混合物1+0.1%+0.5%+0.6%+0.7%預混合物2+0.4%+0.5%+0.8%+1.2%預混合物3-0.9%-0.9%-1.0%-1.2%需要注意的是BIOSAF⑧和預混合物的其他混合物接觸的時間起到關(guān)鍵性作用，因為接觸時間與被帶入以達到均衡的產(chǎn)品的濕度相關(guān)。如果時間因素不利于BIOSAF⑧-小麥粉混合物，在以酵母壁和/或失活酵母作為載體的情況下，接觸時間最少為14天。實施例3:以前的研究己經(jīng)表明混合方法會損害BIOSAF⑧產(chǎn)品，使其更容易吸潮。因此，有必要在工業(yè)條件下生產(chǎn)酵母壁-BIOSAF預混合物，以便確認所述酵母壁的積極作用。3.1按工業(yè)方法制備預混合物BIOSAF貯存于5-6米高的貯窖。生產(chǎn)過程中，通過直徑為10cm的垂直氣動傳送帶(濃相輸送)將酵母運送到50米外的混合器中?？諝馊肟?預先處理、干燥、冷卻)通過連續(xù)通入空氣和產(chǎn)品，可以推動產(chǎn)品通過傳送帶。在傳送帶出口，有一稱重筐在產(chǎn)品進入犁鏵混合器前檢測產(chǎn)品重量，混合物同時進入犁鏵混合器。混合器采用犁鏵混合器，轉(zhuǎn)速120圈/分鐘，混合持續(xù)時間為60秒。最終的預混合物袋裝或散裝打包。工業(yè)制備預混合物的組成如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>3.2干物質(zhì)含量變化BIOSAF⑧干物質(zhì)含量變化與這些不同預混合物的時間有關(guān)，測定結(jié)果如實施例2所示。同樣地因為預混合物由手工制備，含有小麥粉的預混合物中BIOSAF⑧的干物質(zhì)含量有所下降，從93%降低至91.7%。根據(jù)本發(fā)明的預混合物中干物質(zhì)含量在預混合物la中保持穩(wěn)定(含14%酵母壁)，但在預混合物5中，接觸時間一個月后干物質(zhì)含量增加0.3%(酵母壁含量44%)。當混合物在工業(yè)條件下制備時，酵母壁對于BIOSAF⑧水分的影響更加不明顯，然而通過對常規(guī)預混合物載體(例如，基于小麥)的觀察，BIOSAF的干物質(zhì)含量沒有下降。實施例4:4.1顆粒的制備制粒試驗使用一個固定的平底盤形模具(印有KAHL.14-175of3kW,直徑4mm，厚度20mm(即壓縮率為5)，以實驗室程序進行。打包機(國家農(nóng)業(yè)科學研究院(INRA)，法國南特)長544mm，有32個旋轉(zhuǎn)葉片，有一個3.751的容積。發(fā)動機2.2kw由調(diào)速器控制，可控制輸出。溫度設(shè)置在打包機的水平(80和90。C)。在上述條件下制備兩批顆粒。其中第一批顆粒在注入蒸汽溫度8(TC制備，第二批在注入蒸汽溫度9(TC制備。制備好后，預混合物立即使用。顆粒組合物的組成如下:顆粒l顆粒2小麥粉29.3%29.3%大豆油渣餅25%25%油菜籽油渣餅20%20%甜菜漿20%20%糖漿3%3%尿素2%2%預混合物3a0.7%-預混合物5-0.7%2顆粒的耐受性研究對每一批次顆粒，測量BIOSAF⑧存活率。結(jié)果如下所示顆粒80°C90°C顆粒19.4%2.6%顆粒223.9%5.4%計算方法:。/。耐受性或存活率二顆粒中再生細胞量(CFU/g)X100/制成顆粒前顆粒組合物再生細胞量(CFU/g)結(jié)果顯示存活率低，證明本發(fā)明所提供的加入到預混合物3a中的BIOSAF,與加入到預混合物5中的BIOSAF⑧相比，制粒的耐受性非常低。實施例5:13與實施例4的同樣的方法，以預混合物3a和5制備顆粒，其組成見實施例3。不同的是，制粒是在預混合物制備一個月后進行。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>4.2制粒耐受性研究針對每一批次顆粒，測量BIOSAF⑧存活率來評估制粒耐受性。結(jié)果如下所示<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>顯而易見，根據(jù)本發(fā)明研制的顆粒對制粒具有耐受性，因此，存活率比對照組高6倍。權(quán)利要求1.一種益生菌組合物或預混合物，包括-活體或再生有益微生物(a)0.5-75％，選自益生酵母、含乳酸菌類型的有益菌，及其混合物；所述乳酸菌選自乳酸桿菌和除芽孢桿菌以外的雙歧桿菌；-化合物(b)10-95％，選自酵母壁和失活酵母；和-營養(yǎng)補充劑(C)0-95％，特別包括維生素、和/或微量元素、和/或氨基酸、和/或其它可用于動物飼料中的添加劑；百分數(shù)以干重比組合物的總重量表示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌組合物，優(yōu)選包括-活體或再生微生物5-30%;-酵母壁和/或失活酵母15-80%，更優(yōu)選25-75%;-營養(yǎng)補充劑5-80%;上述百分比是以干重比組合物的總重量來表示的。3.根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的組合物，其特征在于，所述益生酵母選自酵母屬酵母，優(yōu)選釀酒酵母，或克魯維酵母屬酵母，優(yōu)選馬克斯克魯維酵母，及其混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于，對應(yīng)于菌株的酵母選自保藏在國立酵母菌保藏中心(NCYC)的編號47的釀酒酵母Sc47菌株，保藏在巴斯德保藏中心(CNCM)的編號1-1007的釀酒酵母株，保藏在巴斯德保藏中心(CNCM)的編號1-1009的釀酒酵母株，保藏在MUCL保藏中心的編號39885的釀酒酵母株，保藏在CBS保藏中心的編號39493.94的釀酒酵母株，保藏在MUCL保藏中心的編號39434的馬克斯克魯維酵母，及其混合物。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項所述的益生菌組合物，包括-活體或再生酵母0.5-75%,優(yōu)選5-30%;-酵母壁和/或失活酵母10-80%，優(yōu)選25-50%;-營養(yǎng)補充劑0-95%，優(yōu)選5-80%;上述百分比是以干重比組合物的總重量來表示的。6.根據(jù)權(quán)利要求l-5任一項所述的組合物，其特征在于，所述酵母壁和/或失活酵母選自酵母屬。7.根據(jù)權(quán)利要求l-6任一項所述的組合物，其中根據(jù)試驗A測得有益微生物的干物質(zhì)含量的變化是正數(shù)的；根據(jù)試驗A，在時間TQ，即有益微生物和酵母壁和/或失活酵母混合之前，利用ISO1741方法測定有益微生物的干物質(zhì)含量，得到值DMo;在時間T=14天，即有益微生物和酵母壁和/或失活酵母混合14天后，測定有益微生物的干物質(zhì)含量，得到值DMT;然后進行計算V=[(DMT-DM0)/DM0]x亂8.—種益生菌顆粒，包括-權(quán)利要求l-7任一項所述的益生菌組合物或預混合物；-適于欲給予的動物詞料中的營養(yǎng)混合物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的顆粒，其中有益微生物的存活率S大于或等于20%，優(yōu)選大于或等于50%，更有選大于或等于70%。10.—種制備顆粒的方法，包括下述步驟-制備權(quán)利要求l-7任一項所述的益生菌組合物或預混合物；-將該益生菌組合物或預混合物加到適于欲給予的動物詞料的營養(yǎng)混合物中，優(yōu)選潛伏期至少14天以后；-在溫度60-100°C，壓力0.5-3.5bar下將蒸汽注入上述步驟得到的混合物中并加壓。11.一種提高益生菌顆粒穩(wěn)定性的方法，包括制備權(quán)利要求l-7任一項所述的益生菌組合物，所述組合物包括有益微生物和酵母壁和/或失活酵母，和可選擇的營養(yǎng)補充劑，所述營養(yǎng)補充劑尤其包括維生素、和/或微量元素、和/或氨基酸、和/或其它動物飼料附加劑，在蒸汽注入形成顆粒步驟之前將所述組合物加到欲給予的動物種類的營養(yǎng)混合物中并加壓。12.根據(jù)權(quán)利要求l-7任一項所述的益生菌組合物和預混合物作為動物飼料的應(yīng)用。13.根據(jù)權(quán)利要求8或9的顆?；驒?quán)利要求10的方法制備的顆粒作為動物飼料的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種益生菌組合物或預混合物，該組合物或混合物包括活體或再生有益微生物、酵母壁、和/或失活酵母、和可選的營養(yǎng)補充物，該營養(yǎng)補充物尤其包含的維生素和/或微量元素和/或氨基酸和/或其它適宜動物營養(yǎng)物。本發(fā)明還涉及一種包含所述組合物和適宜動物營養(yǎng)物的顆粒，以及該顆粒的制備方法。文檔編號A61K36/064GK101448510SQ200780018329公開日2009年6月3日申請日期2007年5月16日優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日發(fā)明者埃里克·奧克萊爾,塞西勒·桑普索尼斯申請人:樂斯福公司