專利名稱：：抗微生物劑以及抗微生物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及抗微生物劑以及抗微生物組合物。
背景技術(shù)：
：自古就已知赤竹提取物具有抗菌性。例如，已報道了其具有對作為創(chuàng)傷感染的致病菌的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌等細菌(專利文獻1、專利文獻2)或作為胃潰瘍的致病菌的幽門螺旋桿菌(7/e//coZ>Gfc^*/y/on〕的抗菌效果。滾邊山白竹(隈笹)是禾本科赤竹屬(Gram&eaeSosa)的植物，雖然一般將生長在山里的赤竹稱為山白竹(熊笹)，但是用滾邊山白竹總稱葉緣在冬天變白枯萎出現(xiàn)白色滾邊的赤竹。有許多赤竹叫做山白竹，其中有一些的學(xué)名是Soyaa/6owarg/"atoM"h'"o"572/6cfto(維奇氏箬竹)，另外一些具有其它的學(xué)名。現(xiàn)在，由于人為的散播，維奇氏箬竹在全日本都有栽種。已知自古山白竹就作為日本醫(yī)學(xué)的"漢方藥，，，其效能非常廣泛，可與印度的匙羹藤((7ym"ema矽/veW^)、中國的番石榴(guava)和韓國的枸杞(Z^dwmc/^e"")相媲美。在日本也將其作為治療胃病、糖尿病、高血壓等的傳統(tǒng)民間藥(非專利文獻l-3)而加以利用。而且，可以作為竹葉飯團或竹葉粽子等的食品包裝材料或保健強壯劑加以利用。戰(zhàn)后，通過動物實驗發(fā)現(xiàn)了山白竹對小鼠的肝癌具有抑制活性，從此開始了若干從制癌活性的角度出發(fā)的藥理學(xué)研究(非專利文獻4)。而且，還針對山白竹具有優(yōu)良的防腐效果(非專利文獻5)、抗菌效果(非專利文獻6)進行了研究。然而，其中多數(shù)研究僅僅采用氣相色鐠法對有機酸進行了分析，少有針對具有抗菌效果的物質(zhì)本身進行分離純化的報告。已知香豆酸及其衍生物具有對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抗菌活性(專利文獻3)。而，山白竹提取物中含有香豆酸、阿魏酸、咖啡酸和香草醛等苯丙醇素類，3-羥基吡啶及其類似物等，已知這些物質(zhì)的混合物具有對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抗菌活性(專利文獻4)。專利文獻l:WO00/067707專利文獻2:日本特開2003-201247專利文獻3:日本特開2004-359626專利文獻4:日本特開2006-36731非專利文獻1:柴田丸，久保恭子，小野田真日本藥學(xué)會會刊，98，1436(1978)非專利文獻2:S.Okabe,K.Takeuchi，K.Takagi,M.Shibata,Jpn.J.Pha認o1.，25，608(1975)非專利文獻3:柴田丸，佐藤冬惠，竹下一夫，大谷孝吉生藥學(xué)雜志，34,274(1980)非專利文獻4:M.Shibata，K.Kubo,M.Onoda，F(xiàn)oliaPharmacol.Jpn，72，531-541(1976)非專利文獻5:N,V.Chuyen，T.Kurata，H.Kato,J.Antibact.Antiftmg.Agents,11，69-75(1983)非專利文獻6:N.V.Chuyen，H.Kato,Agric.Biol.Chem.,46,2795-2801(1982)3-1128(2004)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的目的在于提供抗微生物劑。本發(fā)明的另一個目的在于提供含有該抗微生物劑的抗微生物組合物。解決課題的手段本發(fā)明提供如下所述的抗微生物劑以及含有該抗微生物劑的抗微生物組合物。(1)抗微生物劑，其有效成分選自對羥基苯曱醛、5,7，4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮、3-羥基吡啶和香草醛中的至少l種。(2)上述(l)記載的抗微生物劑，其中所述微生物選自鏈球菌(5Yreptococc—、腸球菌(j&2ferococc—、葡萄球菌(iSV"http://i^/ococcwj)、埃希菌CEsc/2en'c/z/a)、沙門菌(5Wmo"e〃a)、耶爾森菌(y"eraz'mV3)、弧菌(7z7Wo)、假單胞菌(尸化W(iowo"ay)、芽胞桿菌以及念珠菌(3)抗微生物劑，其有效成分選自對羥基苯曱醛以及5，7,4，-三羥基-3',5，-二曱氧基黃酮中的至少l種。(4)上述(3)記載的抗微生物劑，其中所述微生物選自鏈球菌、腸球菌、葡萄球菌、埃希菌、沙門菌、耶爾森菌、弧菌、假單胞菌、芽胞桿菌以及念珠菌。(5)上述(l)記載的抗微生物劑，該抗微生物劑包含3-羥基吡啶作為有效成分，其中所述孩i生物選自肺炎鏈球菌(Sreptococcws/"ewmom'ae)、化膿性鏈J求菌(5Vre/tococcw^/少oge"e力、金黃色葡萄3求菌(iStop/z少/ococcwsawrew力、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(7era/"/aewteroco/Wca)、4同纟錄j叚單月包菌(尸sei^o附o"os(3en/g7'"osa)以及念珠菌(Ca"i/cas/.)。(6)上述(l)記載的抗微生物劑，該抗微生物劑包含對羥基苯曱醛作為有效成分，其中所述微生物選自肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌(^Eyc/zen'c/2/aco//)、沙門菌0Sa/mowe〃a)、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌(7仏n'o;7ara/2(3eAno(y"cw力、銅綠假單胞菌、蠟狀芽孑包桿菌(5a"'〃M"er簡)、枯草芽孑包桿菌(g"cz'腸sw6"刷以及念珠菌。(7)上述(l)記載的抗微生物劑，該抗微生物劑包含香草醛作為有效成分，其中所述微生物選自肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌以及念珠菌。(8)上述(l)記載的抗微生物劑，該抗微生物劑包含5，7,4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮作為有效成分，其中所述微生物選自沙門菌以及銅綠假單胞菌。(9)抗微生物組合物，其包含上述(1)(8)中任一項記載的抗微生物劑。本發(fā)明中的"微生物，，是指細菌、分歧桿菌、藍細菌、古細菌、真菌、酵母、藻類、病毒等，還特別意味對包含人在內(nèi)的動植物具有不良影響的微生物。發(fā)明效果本發(fā)明的抗微生物劑對各種微生物，特別對鏈球菌、腸球菌、葡萄球菌、埃希菌、沙門菌、耶爾森菌、弧菌、假單胞菌、芽胞桿菌以及念珠菌等，具體而言對肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、糞腸球菌(五meracoccw/aecafe)、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌以及念珠菌具有高抗微生物活性。實施發(fā)明的最佳方式本發(fā)明人等為了明確山白竹的抗菌效果的本質(zhì)并詳細說明其抗菌有效成分，將山白竹葉的熱水提取物在各種溶劑中分離。接下來，在使用硅膠色譜法分離后，通過TLC以及高效液相色譜儀的制備用ODS柱進行分離純化，并且在使用各種光譜方法對分離的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定的同時進行對13種細菌的抗菌試驗。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)上述對羥基苯曱醛、5，7,4，-三羥基-3，，5，-二曱氧基黃酮(下文中稱為"麥黃酮(tricin)")以及3-羥基吡啶、反式-對香豆酸(反式-對羥基桂皮酸)、香草醛對各種微生物顯示出特異的抗微生物活性，從而完成了本發(fā)明。以下具體說明本發(fā)明。實驗材料使用得自鳳凰堂抹式會社的山白竹葉的熱水提取物CS，osaa/6o-mwgz>7flto)(商品名TWEBS)。使用蒸發(fā)器將10g所述熱水提取物(下文中稱為"Sa")中的溶劑餾去，得到6.2g固體成分。由此確認作為原料的山白竹葉的熱水提取物含有38°/。的水分。在各種溶劑中分餾所述熱水提取物。即，通過乙酸乙酯提取熱水提取物(Sa)得到的乙酸乙酯層，餾去該層中的溶劑得到乙酸乙酯可溶組分(下文中稱為Sa-l)。進一步通過正丁醇提取水層并進行同樣的處理，分別得到正丁醇可溶組分和水層。使用通過上述處理得到的乙酸乙酯可溶組分(Sa-l)、正丁醇可溶組分、水層以及作為原料的熱水提取物(Sa)對金黃色葡萄球菌進行抗菌試驗?？咕囼炇褂帽ā１ㄊ侵甘紫仍诩毦囵B(yǎng)基中心放置直徑7.32mm的圓筒，向其中滴加樣品溶液，使樣品溶液以圓筒為中心擴散成同心圓狀。若具有抗菌作用，則會形成顯示對細菌繁殖的抑制的抑菌圓。即，由于抗菌作用與抑菌圓的大小成正比，可通過所述抑菌圓的大小判定抗菌效果的強弱的方法。各分餾成分對金黃色葡萄球菌的抗菌試驗的結(jié)果顯示于表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>判定的標記"++++"抗菌效果極強，"++"具有抗菌效果，"+"稍具抗菌效果，"-"無抗菌效果。此處，空白7.32mm是圓筒的直徑。抗菌試驗的結(jié)果顯示乙酸乙酯可溶組分與山白竹熱水提取物原液具有幾乎一樣的抗菌活性。另一方面，正丁醇可溶組分、水層組分稍具抗菌活性。通過所述抗菌試驗的結(jié)果確認了抗菌活性僅分布在乙酸乙酯可溶組分，因此對2.3kg山白竹葉的熱水提取物(Sa)進行乙酸乙酯提取操作。餾去所得乙酸乙酯層中的溶劑得到78g乙酸乙酯可溶組分(Sa-1)。確認所得Sa-l對金黃色葡萄球菌的抗菌活性，其結(jié)果顯示Sa-l具有活性。對金黃色葡萄球菌的抗菌活性具有抗菌活性的成分的分餾純化乙酸乙酯可溶組分(Sa-l)的分餾使用中性硅膠色譜法分餾顯示抗菌活性的52g乙酸乙酯可溶組分(Sa-l)。采用逐漸變化色譜柱洗脫溶劑配比的梯度洗脫方式，使用2.5L正己烷/乙酸乙酯-5:5，4:6、3:7、2:8各1L，純曱醇2.5L。基于TLC的結(jié)果在UV254nm波長下對所得斑點進行;險測以分辨洗脫成分。將所得的7種組分分別稱為Sa-1-A(90mg)、Sa-1-B(250mg)、Sa-l-C(3.36g)、Sa-1-D(3.00g)、Sa-1-E(110mg)、Sa-1-F(1.56g)、Sa畫l-G(30.0g)。首先，將Sa-1-C(3.36g)溶解于5mL氯仿，加入與氯仿同樣量的正己烷后靜置一晚。靜置后所述溶液分成兩層，因此將其分離為上層(下文中稱為Sa-l-C(l))和下層(下文中稱為Sa-1-C(2))。所述餾去溶劑后的Sa-l-C(l)重2.22g，餾去溶劑后的Sa-1-C(2)重1.14g。Sa-l-C(n的分析將2.22gSa-l-C(l)吸附于3.50g硅膠，使用硅膠色i普分餾。色譜柱的洗脫溶劑采用梯度洗脫方式，溶劑的組成使用2L氯仿/丙酮=20:1，7:3、6:4各100mL，純丙酮500mL。使用110個50mL玻璃小瓶回收溶劑?；赥LC將110個50mL玻璃小瓶中在相同位置具有斑點的第21、22號玻璃小瓶混合濃縮，得到濃縮物(下文中稱為Sa-l-C(l)-a)。將所述濃縮物溶于曱醇(0.5mL),嘗試使用高效液相色譜儀(HPLC)的制備用ODS色語柱進行分餾。第21、22號玻璃小瓶濃縮物Sa-l-C(l)-a的HPLC制備洗脫條件色語柱Wakosil-II5C18HGprep，^20.0mmx250mm，流動相20%乙腈水溶液，流速5mL/min,柱溫30°C,檢測UV260nm分離第34.5分鐘的主峰，得到60mg白色固體(下文中稱為Sa-l-C(l)-aa)。將所述白色固體(Sa-l-C(l)-aa)溶解于氘代曱醇中進行&、"CNMR光語測定。白色固體(Sa-l-C(l)-aa)的&、"CNMR光譜'HNMR(500MHz,CDOD):S3.91(s,3H),6.94(d,J=8.6Hz,1H),7.42(d,J=38.6Hz,1H),7.43(s,1H),9.74(s，1H)13CNMR(125MHz,CDOD):S56.3,111.2,116.3,127.9,130.6，149.6,154.6,1932.8IR(KBr):3179，1668cm—1mp:114-115t觀測到]HNMR光語中59.74處的1個氫的信號和13CNMR光鐠中5192.8處的信號，表明存在醛基。觀測到&NMR光譜中S3.91處的信號和13CNMR光譜中556.3處的信號，表明存在曱氧基。而且，觀測到NMR光譜中56.94(d，J=8.6Hz,1H)和S7.42(d,J=8.6Hz，1H)、S7.43(s,1H)處的3個氫的信號以及13CNMR光譜中5111.2-154.6處的源于芳族環(huán)的6個信號。而且確認了IR光譜中3179cm"處的羥基特征吸收。根據(jù)以上結(jié)果推斷白色固體(Sa-l-C(l)-aa)的結(jié)構(gòu)是3-羥基-4-曱氧基苯曱醛(香草醛)。由于香草醛是已知物質(zhì)，與文獻數(shù)據(jù)(TheAldrichLibraryof13Cand&NMRFTNMRSpectraEDITION1Volume2,AldrichChemicalCompany,Inc.)進行比較，而且還可能是作為異構(gòu)體的異香草醛，因此使用高效液相色語儀(HPLC)的分析用ODS色譜柱將所述白色固體(Sa-l-C(l)-aa)與作為試劑購入的香草醛、異香草醛進行比較，確定了所述白色固體(Sa-l-C(l)-aa)為香草醛。此后，基于TLC將110個50mL玻璃小瓶中在相同位置具有斑點的第48-55號玻璃小瓶混合濃縮，得到152mg濃縮物(下文中稱為Sa-l-C(l)-b)。再次使用硅膠色譜分餾所述濃縮物。色語柱的洗脫溶劑采用梯度洗脫方式，溶劑的組成使用200mL純氯仿，200mL氯仿/丙酮=9.5:0.5，9:1、8:2、7:3、純丙酮各100mL，最后使用200mL純曱醇。使用42個50mL玻璃小瓶回收溶劑?；赥LC將42個50mL玻璃小瓶中在相同位置具有斑點的第23-33號玻璃小瓶混合濃縮，得到102mg濃縮物(下文中稱為Sa-1-C(l)-ba)。使用制備用TLC純化所述濃縮物。使用氯仿/丙酮=7/3作為展開溶劑。使用UV254nm檢測，使用丙酮洗脫刮離的硅膠并抽濾，然后餾去溶劑得到86mg淡黃色固體(下文中稱為Sa-l-C(l)-baa)。將所述淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)溶解于氘代甲醇中進行〖H、。CNMR光i普測定。淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)的&、"CNMR光譜NMR(500MHz,CDOD):S6.92(d,J=8.4Hz,2H)，7.77(d，J=8.4Hz,2H)，39.76(s,1H)13CNMR(125MHz,CDOD):S116.8,130.2,133.4,165.1,192.83IR(KBr):3168,1670cm—1mp:118-119t:觀測到]HNMR光譜中S9.76處的1個氫的信號和13CNMR光譜中S192.8處的信號，表明存在醛基。而且，確i人iHNMR光譜中裂分為8.6Hz的雙峰的S6.92、7.77處的2個氫的信號，，見測到13CNMR光語中5116.8-165.1處的源于芳族環(huán)的4個信號，因此了解到存在具有對位取代的芳族環(huán)。而且確認了IR光i普中3168cm"處的羥基特征吸收。根據(jù)以上結(jié)果認為淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)是醛基和羥基分別在對位取代的對羥基苯曱醛。與文獻數(shù)據(jù)(TheAldrichLibraryof13Cand&NMRFTNMRSpectraEDITION1Volume2，AldrichChemicalCompany,Inc.)進行比較，確定了所述淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)為對羥基苯曱醛。Sa-1-C(2)的分析將1.14gSa-1-C(2)進行2次重結(jié)晶(丙酮/己烷)，得到478mg淡黃綠色固體(下文中稱為Sa-l-C(2)-a)。將所述淡黃綠色固體(Sa-l-C(2)-a)溶解于氘代曱醇中進行&、13CNMR光譜測定。淡黃綠色固體(Sa-l-C(2)-a)的&、"CNMR光譜'HNMR(500MHz'CDOD):S6.28(d，J=16.0Hz,1H),6.81(d,J=8.6Hz，2H)3,7.45(d,J=8.6Hz,2H),7.61(d,J=16.0Hz，1H)13CNMR(125MHz,CDOD):5115.6,116.8,127.2,131.1,146.7,161.1,171.03IR(KBr):3168,2830,975cm—1mp:213-214X:觀測到&NMR光譜中2個裂分為雙峰的56.81(d，J=8.6Hz，2H)以及7.45(d,J=8.6Hz,2H)處的4個氫的信號和13CNMR光譜中S115.6和131.1處的2個碳的2個強信號，因此判斷所述化合物具有對位取代的芳族環(huán)。而且，觀測到！HNMR光譜中的2個分別在S6.28(d,J=16.0Hz，IH)和7.61(d，J=16.0Hz，IH)處的偶合常數(shù)為16.0Hz的氫，因此了解到存在1對反式取代的烯烴。而且13CNMR光譜中5171.0處的信號確認了存在羰基。而且確認了IR光譜中3168cm-1處的羥基特征吸收。根據(jù)以上結(jié)果認為淡黃綠色固體(Sa-l-C(2)-a)的結(jié)構(gòu)是反式-對香豆酸。與文獻數(shù)據(jù)(TheAldrichLibraryof13Cand&NMRFTNMRSpectraEDITION1Volume2，AldrichChemicalCompany,Inc.)進行比較，確定了所述淡黃綠色固體(Sa-l-C(2)-a)為反式-對香豆酸。Sa-l-F的分析在硅膠色語法分餾乙酸乙酯可溶組分得到的組分中的Sa-l-F(1.56g)中加入氯仿，攪拌、溶解，除去液體層。此后，在未被氯仿溶解的殘余物中加入丙酮，分為可溶于丙酮的液體層(下文中稱為Sa-l-F(l))和不溶于丙酮的固體層(下文中稱為Sa-1-F(2))。將Sa-l-F(l))餾去溶劑得到162mg，將Sa-l-F(2)餾去溶劑得到1.40g。Sa-l-F(l)的分析再次向162mgSa-l-F(l)中加入丙酮，溶解、靜置。此后，僅回收不渾濁的上清液。餾去丙酮溶劑得到10mg黃色固體(下文中稱為Sa-l-F(l)-a)。使用高效液相色譜儀(HPLC)的分析用ODS色譜柱確認所述化合物的純度，其純度非常高。而且，了解到所述化合物在UV260nm處具有強吸收。將所述黃色固體(Sa-l-F(l)-a)溶解于氖代丙酮中進行&、13CNMR光i普測定。黃色固體(Sa-l-F(l)-a)的！H、UCNMR光譜NMR(500MHz，(CD^CO):S3.97(s,6H),6.26(d,J=2.3Hz,1H)，6.56(d,J=2.3Hz,1H),6.74(s，1H),7.39(s'2H)13CNMR(125MHz,(CC^CO):S56.9,94.9,99.7，104.7，105.2,105.4,122.4,140.9,149.1,158.8,163.4,164.9,165.1,183.1IR(KBr):3357,1615cnf1mp:276-277^MS(FAB):m/z=331[M十+l]通過13CNMR光譜確認存在17個碳原子，通過DEPT確認存在2個1級碳原子、5個3級碳原子、10個4級碳原子。在&NMR光譜中觀測到在S3.97(s,6H)處的含有6個氫的單峰，在13CNMR光諳中觀測到在556.9處的信號，因此了解到存在2個等價的曱氧基。而且在IR光語中確認了3357cm"處的羥基的存在，在1615cm"處的可能有氫鍵的羰基吸收。而且，質(zhì)量分析的結(jié)果是分子量為330，可能是(:17111407。根據(jù)以上結(jié)果認為所述黃色固體(Sa-l-F(l)-a)是下述的式5,7,4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮。與文獻數(shù)據(jù)(C.Kong,X.Xu，B.Zhou，F(xiàn).Hu,C.Zhang,M.Zhang，Phytochemistry,65,1123-1128(2004))進行比較，由于與文獻數(shù)據(jù)接近，因此確定所述黃色固體(Sa-l-F(l)-a)為5，7,4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮。Sa-1-F(2)的分才斤將1.40gSa-1-F(2))吸附于3.00g硅膠，使用硅膠色譜分餾。色i普柱的洗脫溶劑采用梯度洗脫方式，溶劑的組成使用氯仿/丙酮=10:1、8:2各200mL，5:5、3:7、純丙酮各300mL，純曱醇200mL。使用53個50mL玻璃小弁瓦回收溶劑?；赥LC的結(jié)果，將53個50mL玻璃小瓶中在相同位置具有斑點的第42-48號玻璃小瓶混合濃縮，得到46mg淡黃色固體(下文中稱為Sa-l-F(2)-a)。將所述淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)溶解于氘代曱醇中進行'H、"CNMR光譜測定。淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)的iH、"CNMR光譜NMR(500MHz，CD^D):S7.21-7.28(m,2H),7.99(dd,J=4.1.0.7Hz,1H),8.09(d,J=2.3Hz,1H)13CNMR(125MHz,CD3〇D):8124.4，125.9，138.3,140.8,155.9IR(KBr):3449cm—1mp:127-128^觀測到'HNMR光語中S7.21-7.28(m，2H)和S7.99(dd，J=4.1.0.7Hz,IH)、58.09(d,J=2.3Hz,1H)處的4個氫的信號和13CNMR光譜中5124.4-155.9處源自芳族環(huán)的5個信號。而且確認了IR光譜中3168cm"處的羥基特征吸收。根據(jù)以上結(jié)果認為淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)是3-羥基吡咬。與文獻數(shù)據(jù)(TheAldrichLibraryof13CandNMRFT畫RSpectraEDITION1Volume2，AldrichChemicalCompany,Inc.)進行比較，與文獻數(shù)據(jù)接近且根據(jù)熔點(文獻數(shù)據(jù)126-129°C),因此確定所述淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)為3-羥基吡啶。14抗菌試一驗瓊脂稀釋法(Agardilution法)對反式-對香豆酸、3-羥基吡啶、對羥基苯甲醛、香草醛使用瓊脂稀釋法的抗菌試驗法。瓊脂稀釋法是指首先將溶解了樣品的溶液逐級稀釋，與瓊脂培養(yǎng)基混合，制作樣品濃度不同的瓊脂平板。在所述瓊脂平板上接種細菌，若樣品具有抗菌活性則可抑制細菌的繁殖，以可抑制細菌繁殖的最低濃度作為最小抑菌濃度(MIC:MinimumInhibitoryConcentration)來判斷樣品抗菌效果的強弱的方法。首先，將400mg樣品溶于lmLDMSO,配制400mg/mL的樣品溶液。將0.5mL所述400mg/mL的樣品溶液稀釋2倍，制備200mg/mL的樣品溶液，同法制備lOOmg/mL、50.0mg/mL、25.0mg/mL的樣品溶液。并且，還準備300mg/mL的樣品溶液。將這些樣品溶液各0.2mL與19.8mLBffl(腦心浸液瓊脂，BectonDickinson公司，MD)培養(yǎng)基混合，在平皿中制備樣品濃度為4.0mg/mL、3.0mg/mL、2.0mg/mL、l.Omg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL的瓊脂平板。還制備作為樣品的抗菌效果的比較對照的同濃度的兒茶素的瓊脂平板。由于兒茶素難溶于DMSO,使用滅菌水使用肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌MB-32、枯草芽孢桿菌ATCC6633以及念珠菌共13種細菌作為受驗菌。將所述細菌與2mL滅菌MHBR液體培養(yǎng)基(MullerHintonBrothR，BectonDickinson公司，MD)混合，制備濁度1(菌濃度108/mL)的菌液。預(yù)先將小試管放入在試管架(granting)的各個槽內(nèi)(cell)內(nèi)并滅菌。在試管架的各個小試管中分別注入13種菌液各lmL。使用多點接種儀(microplanter)(SAKUMA，型號MIT-P)從試管架的各個小試管中吸取10nL移入其它試管，將菌液稀釋100倍(菌濃度106/mL)。使用多點接種儀將IO^iL所述菌液(細菌數(shù)14.0)接種于已混入各濃度樣品溶液的瓊脂平板上，在37。C的恒溫箱中培養(yǎng)18小時，評價化合物的抗菌活性。結(jié)果示于表2-6。反式-對香豆酸的抗菌試驗結(jié)果+:繁殖-:不繁殖<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>根據(jù)上述結(jié)果，反式-對香豆酸對肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌ATCC6633、念珠菌具有活性。最小抑菌濃度(MIC)是對于肺炎鏈球菌為2.0mg/mL,對于化膿性鏈球菌、副溶血弧菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌ATCC6633以及念珠菌為3.0mg/mL，對于金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌為4.0mg/mL。3-羥基吡啶對肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、銅綠假單胞菌、念珠菌具有活性。MIC是對于肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、銅綠假單胞菌、念珠菌為4.0mg/mL。對羥基苯甲醛對肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、銅綠假單胞菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌MB-32、枯草芽孢桿菌ATCC6633、念珠菌等多數(shù)細菌具有活性。特別是對小腸結(jié)腸炎耶爾森菌具有強活性，MIC為0.5mg/mL。確認了香草醛對肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌MB-32、枯草芽孢桿菌ATCC6633、念珠菌等多數(shù)細菌具有活性。香草醛同樣對多數(shù)細菌具有活性，其中特別是對小腸結(jié)腸炎耶爾森菌具有強活性，MIC為0.5mg/mL。紙片法(PaperDiskMethod)5，7，4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮的抗菌試驗使用即使溶劑會產(chǎn)生影響也能判斷有無抗菌活性的紙片法。紙片法是指首先配制不同濃度的樣品溶液，將所述樣品溶液吸附于專用的紙片并干燥。將配制的菌液和瓊脂培養(yǎng)基混合制備的平板上擺放吸附了樣品溶液的紙片。若樣品具有抗菌活性，則會以紙片為中心形成顯示對細菌繁殖的抑制的抑菌圓?？赏ㄟ^所述抑菌圓的大小判定抗菌效果的強弱。首先，將4mg作為樣品的5，7，4，-三羥基-3，，5，-二曱氧基黃酮溶解于200pL溶劑制備20mg/mL的樣品溶液。向lOO^L所述20mg/mL的樣品溶液中加入lOOpL滅菌水，制備10mg/mL的樣品溶液200pL。向10mg/mL的樣品溶液中加入60^LDMSO和140jxL滅菌水，制備5.0mg/mL的樣品溶液400(oL。由于含有30%的DMSO時樣品會析出，因此設(shè)定為含有40%的DMSO。向5.0mg/mL的樣品溶液350)iL中加入140(iLDMSO和210^L滅菌水，制備2.5mg/mL的樣品溶液700pL。同法制備1.25mg/mL和0.625mg/mL的樣品溶液。準備作為空白的含有40°/。的DMSO和60°/。的滅菌水的溶液。準備作為比較對照的同濃度的兒茶素的水溶液。將這些溶液各70nL吸附于紙片(直徑8.12mm)，干燥1天。使用金黃色葡萄球菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、銅綠假單胞菌、念球菌作為受驗菌。將所述細菌與2mL滅菌水混合，制備濁度1(菌濃度1()S/mL)的菌液。將這些菌液各0.2mL與19.8mLBffl培養(yǎng)基混合，制備瓊脂平板。在瓊脂平板上放置干燥后的紙片，在37。C的恒溫箱中培養(yǎng)，評價化合物的抗菌活性。結(jié)果示于表7。表中的(-)表示無抗菌活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>根據(jù)上述結(jié)果可知，5，7,4，-三羥基-3，，5，-二曱氧基黃酮對沙門菌、銅綠假單胞菌具有抗菌活性。而且，即使與兒茶素比較，其抗菌活性也;f艮強。通過乙酸乙酯提取山白竹葉的熱水提取液(Sa，2.3kg),得到乙酸乙酯可溶組分(Sa-l，78g)。對金黃色葡萄球菌進行抗菌試驗的結(jié)果是抗菌活性分布于乙酸乙酯可溶組分(Sa-l)。使用中性硅膠色譜法將乙酸乙酯可溶組分(Sa-l)分離為7種組分。將所得的7種組分分別稱為Sa-1-A(90mg)、Sa畫l-B(250mg)、Sa-l畫C(3.36g)、Sa-1-D(3.00g)、Sa-l鄰10mg)、Sa-1-F(1.56g)、Sa-l鄰0.0g)。向Sa-1-C(3.36g)中加入氯仿和正己烷將其分離為2層，得到Sa-1-C(l)(2.22g)、Sa-l-C(2)(1.14g)。使用中性硅膠色鐠法分餾Sa-1-C(l)(2.22g)得到Sa-l-C(l)-a、Sa-l-C(l)-b。使用高效液相色譜儀(HPLC)的制備用ODS色i普柱分餾Sa-l-C(l)-a得到白色固體Sa-l-C(l)-a(60mg)。根據(jù)光譜數(shù)據(jù)和HPLC的分析的結(jié)果確定白色固體(Sa-l-C(l)-a)是香草醛。而且，再次使用中性硅膠色譜法分餾Sa-l-C(l)-b得到Sa-l-C(l)-ba,使用制備用TLC將其分餾得到86mg淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)。根據(jù)光譜數(shù)據(jù)確定淡黃色固體(Sa-l-C(l)-baa)為對羥基苯曱醛。而且，將Sa-l-C(2)(U4g)2次重結(jié)晶得到478mg淡黃色固體(Sa-l-C(2)-a)。根據(jù)光譜數(shù)據(jù)確定淡黃色固體(Sa-l-C(2)-a)為反式-對香豆酸。接下來，將Sa-1-F(1.56g)分離為分為可溶于丙酮的Sa-1-F(l)(162mg)和不溶于丙酮的Sa-1-F(2)(1.40g)。再次向Sa-1-F(l)(162mg)中加入丙酮，分離液層，得到10mg黃色固體(Sa-l-F(l)-a)。根據(jù)光譜數(shù)據(jù)確定黃色固體(Sa-l-F(l)-a)為5，7,4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮。使用中性硅膠色譜法分餾Sa-1-F(2)(1.40g),得到46mg淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)。根據(jù)光譜數(shù)據(jù)確定淡黃色固體(Sa-l-F(2)-a)為3-羥基吡啶。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>3-羥基吡啶反式-對香豆酸對羥基苯曱搭香草趁5,7，4，-三羥基-3，，5，-二甲氧基黃駒使用瓊脂稀釋法考察香草醛、對羥基苯曱醛、反式-對香豆酸、3-羥基吡啶的抗菌活性。其結(jié)果是確認了香草醛、對羥基苯曱醛、反式-對香豆酸、3-羥基吡啶具有抗菌活性。其中，特別是香草醛、對羥基苯曱醛對作為食物中毒致病菌的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌顯示出強抗菌活性。使用紙片法考察5，7,4，-三羥基-3，，5，-二甲氧基黃酮的抗菌活性。其結(jié)果是確認了5,7,4，-三羥基-3，，5，-二曱氧基黃酮對沙門菌、銅綠假單胞菌顯示出抗菌活性。即使與兒茶素比較，這種活性也很強。本發(fā)明人等嘗試從山白竹以外的植物中提取上述有效成分。其結(jié)果是發(fā)現(xiàn)禾本科的多種植物中包含豐富的5，7，4，-三羥基-3，,5，-二甲氧基黃酮(麥黃酮)，例如稻(米)、小麥、玉米、大麥、棵麥、甘蔗、竹、芒草、蒲蘋、^苐等。具體的植物名如下稻、小麥、大麥、燕麥、棵麥、黍子、小米、稗子、玉米、四國稗子、高粱、竹、茭白、甘蔗、薏苡、葦、芒草、赤竹、蘆竹、蒲蘋和羊胡子草。禾本科Gra脂'"e"e竹亞科5"/wfeuszW/cfefle(竹科Bambusaceae)孝順竹屬S"wZ^":孝順竹(Houraichiku)、蕨葉孝順竹(Hououchiku)(以上為Bamboo類)倭竹屬倭竹(Okamezasa)岡'J竹屬P/zj^/ostoc/zj^:龜曱竹(Mousouchiku)、才圭竹(Madake)、毛金竹CHachiku)業(yè)平竹屬&w/arM"d/"(3n'at:業(yè)平竹(Narihiradake)、夜叉竹(Yashyadake)(以上為竹類)苦竹屬/Ve/o6/os加Nezasa、青苦竹(Azumanezasa)、川竹(Medake)、琉球矢竹(Ryukyuchiku)矢竹屬尸sewdososa:矢竹(Yadake)、Yakushimadake華箬竹屬Sosamo^/2a:煤竹(Suzutake)青籬竹屬爿nmc/Wwan'a:Azumazasa、Suekozasa赤竹屬Sosof:Miyakozasa、Chimakizasa、Kumazasa、Chishimazasa(以上為赤竹類)亞科Poe/Zcfeae)水草屬v4grc>p>ro":4匾麥草(Shibarnugi)、、小麥草(Kamojigusa)、纖毛草(Aokamojigusa)看麥4良屬J/o/ecwms:看麥々良、日本看麥4良(Setogaya),竹屬」n/"血蘆竹凌風(fēng)草屬5r&a:大凌風(fēng)草、小凌風(fēng)草(Himekobansou)雀麥屬Bro腦s:雀麥、扁穗雀麥(Inumugi)鴨茅屬Dac/y/":鴨茅(Kamogaya)畫眉草屬五ragrosfe:知風(fēng)草(Kazekusa)、大畫眉草、彎葉畫眉草(Shinadare-suzumegaya)、Niwahokori大麥屬//orzcfew附大麥、鼠大麥(Mugikusa)小麥屬7W"c"附普通小麥黑麥草屬丄o/Zwm:黑麥草、多花黑麥草、毒麥早熟禾屬早熟禾、莓系屬的牧草(Ichigotsunagi)羊茅屬Fe"i/ca:鼠茅(Naginatagaya)、羊茅、小穎羊茅(Toboshigara)甜茅屬G7yce〃'a:曰本甜茅(Mutsuoregusa)、Dojoutsunagi臭草屬Me//ca:廣序臭草(Michishiba)、垂穗臭草(Komegaya)^炎口十沖個屬丄op/zaf/zen/m:5炎p十沖亇(Sasakusa)千金子屬丄eptoc/z/oa:千金子(Azegaya)筒草屬5ecA7wa朋/fl:筒草鼠尾粟屬SporoZjo/ws:Nezumino-o、Higeshiba蟪蟀草屬五/eim'we:牛筋草(Ohishiba)、龍爪稷(Shikokubie)狗牙根屬cy"o^":狗牙根,蘋屬i^rag/w'to:Urahagusa、蘆苐、Tsuruyoshi顯子草屬尸/2ae"os/^-m"李氏禾屬稻屬稻子芟白屬Z/zfl"/":茭白燕麥屬」ve"a:野燕麥、燕麥發(fā)草屬D^sc/zam戸'a:曲芒發(fā)草(Komesusuki)、發(fā)草/e*ci/b//a變種(Hirohano-komesusuki)三毛草屬Trisetum:三毛草、穗、三毛草a/osca"wm亞種(Rishirikanitsuri)落草屬Xoe/eWa:落草茅香屬/^erac/z/oe:光稃茅香■sac/n^//"e"1s/>s亞種(Koubou)、高山茅香(Miyamakoubou)草,屬尸/^/an's:草,、金絲雀草蘆(canary-kusayoshi)剪骨穎草屬^gnwfe:巨序剪骨穎、華北剪股穎ma&wwwrae亞種(Nukabo)棒頭草屬尸o/少pogo"梯牧草屬/Wewm:鬼蠟燭、梯牧草拂子茅屬CWamagroWs:短毛野青茅、假葦拂子茅、拂子茅結(jié)縷草Zow/a:結(jié)縷草、細葉結(jié)縷草、中華結(jié)縷草mj^om'ca變種(Nagamionishiba)亞科Panicoideae野古草屬」rw"&"e〃a黃金茅屬五w/a/a:金茅(Un-nuke)、四脈金茅(Un-nuke-modoki)柳葉箬屬A"c/2"e:柳葉箬、日本柳葉箬黍?qū)偈琣m'cwm:稷、鋪地黍、糠稷稗屬五c/n'"oc/7/oa:日本稗(Hie)、稗cms-ga〃/變種(Inubie)求米草屬0//"膨"ws:求米草狗尾草屬^tonk棕葉狗尾草、狗尾草、小米、小狗尾草(Kin-enokoro)雀稗屬Pos/a/iwz:雀稗、雙穗雀稗、毛花雀稗(Shima-suzumenohie)馬唐屬Z)^z'toWa:升馬唐、紫馬唐狼尾草屬尸em^e/wm:狼尾草(Chikarashiba)、紫狼尾草(napiergrass)説刺屬Sp/m/ex:臘刺(Tsukiige)甘蔗屬Sacc/wn^w:甘蔗、甜才艮子草a""/co/a變種(Waseobana)白茅屬/m/erato:白茅油芒屬五ccoz'/o;ms:油芒芒屬M/，"^2^s:芒、荻、常綠芒(Tokiwasusuki)、青茅(Kariyasu)莠沖個屬M/croWeg/w附Sasagaya、柔才支莠沖t(Ashiboso)金發(fā)草屬尸ogo"W/zerwm:金絲草(Itachigaya)雁茅草屬D/men'":雁茅(Karimatagaya)牛鞭草屬/femaW/zn'a:Ushinoshippei、扁穗牛鞭草(Kobano-ushinoshippei)束尾草屬Ptee/w環(huán)束尾草(Aiashi)鴨嘴草屬/"/^emwm:芒穗鴨嘴草(Kamonohashi)、毛鴨嘴草(Kekamonohashi)泉草屬^w/zraxo":落草(Kobunagusa)香茅屬OwZc;pogo":扭鞘香茅(Ogarukaya)孑U貞草屬Bo^Woc/j/oa:纟田柄草(Hime-aburasusuki)裂稃草屬5b/^oflc/^Wwm:裂稃草(Ushikusa)須芒草屬爿"diro;ogo":Meriken-karukaya.草字頭官草屬77zemWa:黃背草(Megarukaya)蜀黍?qū)賁org/wm:高粱、甜高粱、石茅高粱(Seiban-morokoshi)、雙色高粱(Sudangrass)薏苡屬Co/x:薏苡(Juzudama)、薏米4二25玉蜀黍?qū)儆衩卓墒褂煤线m的溶劑提取上述植物的葉、莖等，使用HPLC等分離提純手段分離純化麥黃酮。例如，可通過濃縮水提取物，使用醇、含水醇(例如，曱醇、乙醇、含水曱醇、含水乙醇)提取所得固體物質(zhì)，將所得固體成分溶解于水中，在乙酸乙酯中分配等手段進行純化。將5g山白竹的千燥葉浸漬于50ml各種有機溶劑中，靜置，濃縮提取液得到固體成分。在下表中表示當(dāng)以山白竹葉的質(zhì)量為100時，各種提取液的固體成分的比例和各固體成分中含有的麥黃酮的比例。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>隨后，使用1L溶劑提取50g山白竹葉，計算餾去提取液的溶劑時固體成分中含有的麥黃酮的量(mg)。在下表中顯示結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>將50g山白竹葉浸漬于500ml甲醇中，靜置。其后，過濾，餾去溶劑得到5.05g曱醇提取物。隨后，按己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇的順序進行分配操作，計算固體成分的量和其中的麥黃酮的量。在下表中顯示結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>隨后，使用500ml曱醇提取50g山白竹葉，餾去溶劑后，溶解于水中，計算使用各種溶劑進行分配操作時各固體成分中含有的麥黃酮的量。在下表中顯示結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>濃縮干燥山白竹葉的各種含水乙醇提取液，得到固體成分(B)。將其溶解于水中后，進行乙酸乙酯的分配操作，餾去溶劑得到固體成分(C)。下表顯示以固體成分(B)為100時的乙酸乙酯提取固體成分(C)的比例。并一同顯示固體成分(B)和固體成分(C)中的麥黃酮的分析結(jié)果(％(質(zhì)量))。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>*:已經(jīng)預(yù)先濃縮餾去,蘋的葉和莖以及竹葉的各種含水乙醇提取液(D)中的溶劑得到固體成分(E)。將其溶解于水中，進行乙酸乙酯的分配操作，得到乙酸乙酯可溶部分的固體成分(F)。分析使用100g固體成分(E)的情況下的固體成分(E)以及固體成分(F)中的麥黃酮的量。在下表中顯示結(jié)果。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>本發(fā)明的抗《敖生物組合物將上述化合物(香草醛、對羥基苯曱醛、反式-對香豆酸、3-羥基吡啶、5，7，4，-三羥基-3，,5，-二甲氧基黃酮)(本說明書中稱為"本發(fā)明的化合物")的至少1種作為有效成分的本發(fā)明的抗微生物劑能以各種形態(tài)使用。例如，適合作為粘膜保護組合物、細菌感染預(yù)防和/或治療用組合物、防腐劑、過濾裝置等的抗;敞生物劑。本發(fā)明的抗微生物劑的劑型可以是液態(tài)、固態(tài)、氣態(tài)等的任何形態(tài)。本發(fā)明的抗微生物劑可以采用經(jīng)口給藥和胃腸外給藥的任何給藥方式。經(jīng)口給藥的形態(tài)有片劑、丸劑、散劑、液劑、口香糖、糖果、巧克力、面包、糕點、蕎麥面、切面、各種口服液等食品形式，胃腸外給藥的形態(tài)有注射劑、局部給藥劑(乳膏、軟膏等)、栓劑等。作為局部給藥劑型的例子，有將本發(fā)明抗微生物劑含浸到天然纖維或合成纖維紗布等載體上得到的劑型，還有使本發(fā)明抗微生物劑含在口紅等化妝品中等。本發(fā)明的抗微生物劑不用說當(dāng)然對人有效，作為除人以外的哺乳類、鳥類、魚類、爬蟲類等使用的抗微生物劑也是有效的。因此，本發(fā)明的抗微生物劑可以用作這些動物用抗微生物劑(例如寵物用藥物、寵物食品等)。除動物外，本發(fā)明的抗微生物劑還可用作各種植物抗微生物劑，或者可用作防腐劑。在制造本發(fā)明的各種劑型的抗微生物劑時，除使用預(yù)定量的上述化合物外，還可使用通常藥物組合物、化妝品、皮膚用組合物等可用的油性成分等基材成分、保濕劑、防腐劑等?？刮⑸飫┲兴玫乃梢允亲詠硭?、天然水、純凈水等，對此沒有特別限定，通常優(yōu)選離子交換水等高純度水。油性成分有例如角鯊?fù)?、牛脂、豬脂、馬油、羊毛脂、蜂蠟等動物性油；橄欖油、葡萄籽油、棕櫚油、霍霍巴油、胚芽油(例如米胚芽油)等植物油；液體石蠟、高級脂肪酸酯(例如棕櫚酸辛酯、棕櫚酸異丙酯、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯)、硅油等合成油、半合成油。為適應(yīng)皮膚的保護、提供滋潤效果(用薄膜覆蓋皮膚表面防止干燥，同時產(chǎn)生柔軟性、彈性的效果)、清爽感等要求，可適當(dāng)組合使用油性成分。角豊烷、橄欖油和棕櫚酸辛基十二烷基酯的組合是優(yōu)選例中的一個。為調(diào)節(jié)抗微生物劑的硬度、流動性，可使用硬脂酸、硬脂醇、山崳酸、鯨蠟醇、凡士林等固體油，優(yōu)選組合使用硬脂酸與鯨蠟醇。為了將本發(fā)明的抗微生物劑制造成乳膏組合物，可使用用于將本發(fā)明化合物、水、油性成分制成膏狀的膏化劑，對膏化劑沒有特別限定，通常是將甘油單硬脂酸酯與自乳化型甘油單硬脂酸酯(向甘油單硬脂酸酯中添加乳化劑后形成的物質(zhì))組合使用。還可以根據(jù)需要使本發(fā)明的抗微生物劑含有穩(wěn)定劑、保濕劑、傷口愈合劑、防腐劑、表面活性劑等。穩(wěn)定劑的例子有羧基乙烯基聚合物與氫氧化鉀的組合、聚乙二醇二硬脂酸酯等。特別是聚乙二醇倍半硬脂酸酯(聚乙二醇二硬脂酸酯與聚乙二醇單硬脂酸酯的1:1混合物)(聚乙二醇的分子量為1000至2萬)的穩(wěn)定性高，水與油不分離，并且可有效調(diào)節(jié)作為膏狀組合物涂布于皮膚上時的硬度，因而優(yōu)選。保濕劑的例子有透明質(zhì)酸鈉、膠原、,薈提取物(特別優(yōu)選提取自木本,薈的,薈提取物(2))、尿素、1，3-丁二醇、甘油、海藻糖、山梨糖醇、氨基酸、吡咯烷酮羧酸鈉等。傷口愈合劑的例子有尿嚢素、甘草酸二鉀、甘草提取物、艾提取物等。由于本發(fā)明的化合物本身具有抗菌作用，因而僅輔助性使用防腐劑。防腐劑可列舉例如苯曱酸鈉、對羥基苯甲酸低級烷基酯(例如稱為對羥基苯曱酸酯的曱酯、乙酯、丙酯或丁酯等化合物)、丙酸鈉、混合脂肪酸酯(癸酸甘油酯、聚甘油-2月桂酸酯、聚甘油-10月桂酸酯的混合物)、苯氧基乙醇、201號感光素(黃色色素)、1，2-戊二醇等，優(yōu)選對羥基苯曱酸酯、混合脂肪酸酯、1,2-戊二醇。表面活性劑的例子有N-酰基-L-谷氨酸鈉、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸酯等。還可以根據(jù)需要含有芳香成分，例如橙油、檸檬油、橙皮油、香料等。含有本發(fā)明的抗微生物劑的粘膜保護組合物、細菌感染預(yù)防和/或治療用組合物可有效的抑制來自眼、鼻、喉、耳、肛門、陰部等30的粘膜或創(chuàng)傷部位和皮膚的傳染性細菌向體內(nèi)的入侵，可有效的預(yù)防和/或治療包括醫(yī)院內(nèi)感染的細菌感染。粘膜保護組合物、細菌感染預(yù)防和/或治療用組合物的更具體的形態(tài)可以列舉粘膜保護布或口腔組合物。粘膜保護布是通過浸漬、噴霧等方法使具有透氣性的載體含有本發(fā)明的抗微生物劑而得到的，所述載體是例如天然纖維(例如絲、棉、麻等)、合成纖維(例如聚氨基曱酸乙酯、聚乙烯、聚丙烯、尼龍、聚酯、丙烯酸纖維染料(acryl)等)、半合成纖維或2種以上所述纖維的混合纖維；或紗線或其機織布、編織布、無紡織布、紙等。為了方便，本說明書中的"保護布"除了布，還包括纖維本身、絲、紙等。作為具體的形態(tài)，所述保護布除了可分類為紗布、口罩、遮眼罩、衛(wèi)生帶、衛(wèi)生棉、繃帶、衛(wèi)生紙、痔瘡處理用紗布、耳栓、液體繃帶等的衛(wèi)生用品的直接接觸粘膜或皮膚的保護布之外，還可列舉衣服(白大衣等)、小服飾(手套、帽子、襪子、日式短布襪等)、寢具(床單、被罩、枕套、床上用品等)、室內(nèi)裝飾品以及內(nèi)裝修材料(窗簾、壁紙、地毯等)、醫(yī)療材料(手術(shù)用縫合線等)等直接或間接接觸皮膚的物品。包含本發(fā)明的抗微生物劑的口腔組合物可列舉膠質(zhì)(gummy)、凝膠、糖錠、糖、口香糖、片劑、丸劑、洗口劑、漱口劑、牙膏、粘膜貼膜、咽喉部炎癥治療用噴霧劑等。由上述實驗例可知，山白竹提取物中包含的本發(fā)明的化合物的濃度相對于提取物中固體成分是約1/1,000~1/100,000。因此，本發(fā)明的化合物用于抗微生物劑時，所述濃度可為山白竹提取物固體成分的使用量的約1/1，000~1/100，000?？筛鶕?jù)使用目的適宜的決定使用濃度。例如，粘膜保護布含有本發(fā)明的化合物時，例如，可將保護布浸漬于本發(fā)明的化合物的2~20><(1/1，000~1/100,000)%(質(zhì)量)溶液(水、31醇、DMSO等的有機溶液或其混合溶液)或?qū)⒈景l(fā)明的化合物的220x(l/l，000l/100,000)。/。(質(zhì)量)溶液噴射于保護布上，干燥。此時，本發(fā)明的化合物的浸漬量或噴霧量以本發(fā)明的化合物的固體成分計優(yōu)選2~20x(l/l,000~l/100，000)%(質(zhì)量)，更優(yōu)選6~15x(1/1,000~1/100，000)%(質(zhì)量)，最優(yōu)選812x(l/l,000l/100,000)。/o(質(zhì)量)。在例如膠質(zhì)、凝膠、糖錠、糖、口香糖、片劑、丸劑(例如赤竹丹)、洗口劑、漱口劑、牙膏、粘膜貼膜等口腔組合物中包含本發(fā)明的化合物時，制造口腔組合物的任一階段中，相對于口腔組合物原料包含本發(fā)明化合物的量以固體成分計優(yōu)選2~20x(1/1，000~1/100，000)%(質(zhì)量)，更優(yōu)選615x(l/l，000l/100，000)。/o(質(zhì)量)，最優(yōu)選8-12x(l/l，000l/100,000)。/。(質(zhì)量)。根據(jù)劑型，可在本發(fā)明的口腔組合物中適當(dāng)?shù)募尤霊T用的成分。例如，賦形劑(葡萄糖、乳糖、蔗糖、淀粉糖漿、糊精、環(huán)糊精等)、粘合劑(阿拉伯膠、羧曱基纖維素鈉、結(jié)晶纖維素、香糖膠基等)、崩解劑(淀粉等)、潤滑劑(硬脂酸鎂、蔗糖脂肪酸酯)、香料、清涼劑(葉綠素、薄荷、l-薄荷醇等)等。以保護布的形式使用本發(fā)明的粘膜保護組合物時，預(yù)先使接觸粘膜或創(chuàng)傷部位的部位的保護布(紗布等)包含本發(fā)明的化合物，所述保護布可每日替換1~3次。以手術(shù)用縫合線的形式使用時，可有效的抑制由縫合部位的細菌的侵入，抑制患部的炎癥，促進手術(shù)部位的恢復(fù)。為了防止醫(yī)院等處的醫(yī)院內(nèi)感染以保護布的形式使用本發(fā)明的粘膜保護組合物時，本發(fā)明的粘膜保護組合物的防止感染的效果可長時間的持續(xù)。由于洗滌而使其效果降低時，可適當(dāng)?shù)奶鎿Q或進行處理以再次包含本發(fā)明的化合物。以口腔組合物的形式使用本發(fā)明的粘膜保護組合物時，其攝入量無特別限制，以本發(fā)明的化合物的固體成分的量計可攝入約2~15x(l/l,000~l/100，000)mg，例如每日1~5次，通常1~3次。根據(jù)目的可適當(dāng)?shù)脑鰷p攝入量和攝入次數(shù)。本發(fā)明的粘膜保護組合物包含本發(fā)明的化合物，包含的量以固體成分計是220x(l/l，000l/100，000)。/()(質(zhì)量)，對于耐受傳統(tǒng)的抗生素的耐藥菌顯示顯著的殺菌效果。而且，以口腔組合物的形式使用本發(fā)明的粘膜保護組合物時，必要時，通過適當(dāng)?shù)念A(yù)先含在口中，可極其簡便的預(yù)防傳染性細菌的感染或抑制其繁殖。而且，口香糖、糖等緩釋形式的組合物可長時間的發(fā)揮所述效果，因而是有利的。本發(fā)明的粘膜保護組合物可作為洗液或油的形式使用。通過在皮膚等上預(yù)先涂抹以固體成分計為2-20x(l/l，000l/100，000)。/c)(質(zhì)量)的濃度包含本發(fā)明的化合物的洗液或油，可極其簡便的預(yù)防傳染性細菌的感染或抑制其繁殖。防腐劑為防腐劑使用時的形式無特別的限制。作為防腐對象的組合物可列舉食品、飲料、調(diào)味料、化妝品(包括洗液或油)、創(chuàng)傷部位治療用噴霧劑、咽喉部炎癥治療用噴霧劑等。所述對象包含本發(fā)明化合物的量以固體成分計優(yōu)選2-20x(l/l,000l/100，000)Q/o(質(zhì)量)，更優(yōu)選6~15x(l/l，000l/100，000)。/。(質(zhì)量)，最優(yōu)選8~12><(1/1,0001/100，000)%(質(zhì)量)。過濾裝置本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的化合物作為有效成分的空氣過濾裝置。具體的形式可列舉在換氣扇、空調(diào)、車用空調(diào)、空氣吸入口、空氣排出口、紗門、空氣凈化器等的空氣通過部位使用的過濾器。過濾器的材料無特別限制，可列舉天然纖維(絲、棉、羊毛、麻等)、合成纖維(聚氨基曱酸乙酯、聚乙烯、聚丙烯、尼龍、聚酯、丙烯酸33纖維染料等)、半合成纖維或所述2種以上的纖維的混合物的機織布、編織布、無紡織布、紙等。可通過浸漬、噴霧等方法將本發(fā)明的化合物的水稀釋液包含于所述過濾器，干燥。所述過濾器包含本發(fā)明化合物的量以固體成分計優(yōu)選2-20x(l/l,000l/100，000)o/o(質(zhì)量)，更優(yōu)選6-15x(l/l，000l/100，000)。/。(質(zhì)量)，最優(yōu)選8~12x(l/l,000l/100,000)。/。(質(zhì)量)。權(quán)利要求1.抗微生物劑，其有效成分選自對羥基苯甲醛、5，7，4’-三羥基-3’，5’-二甲氧基黃酮、3-羥基吡啶和香草醛中的至少1種。2.權(quán)利要求1所述的抗微生物劑，其中所述微生物選自鏈球菌(5Vre/tococc—、腸球菌(五她racocc—、葡萄球菌(5"啤/^/ococcM力、i矣希菌、沙、門菌(Sa/mowe〃a)、耳卩爾森菌(y"e/^/"/a)、瓜菌(Fi^Wo)、假單胞菌CP"Mcfomo"os)、芽胞桿菌CBacz'〃ws)以及念珠菌3.抗微生物劑，其有效成分選自對羥基苯曱醛以及5,7，4，-三羥基-3，,5，-二曱氧基黃酮中的至少1種。4.權(quán)利要求3所述的抗微生物劑，其中所述微生物選自鏈球菌、腸球菌、葡萄球菌、埃希菌、沙門菌、耶爾森菌、弧菌、假單胞菌、芽胞桿菌以及念珠菌。5.權(quán)利要求1所述的抗微生物劑，該抗微生物劑包含3-羥基吡啶作為有效成分，其中所述微生物選自肺炎鏈球菌(&re;tococcws;wew/wowz'ae)、化膿性鏈球菌(Sreptococci^p;;ogewe力、金黃色葡萄J求菌(Stop/^/ococcws、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Fe"/m'aewferaco/"z'ca)、4同纟錄邗I單月包菌(尸sewcfomo"owaerag/wosa)以及念珠菌6.權(quán)利要求1所述的抗微生物劑，該抗微生物劑包含對羥基苯甲醛作為有效成分，其中所述微生物選自肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌(&c/2eWc/z^CO")、沙門菌(5b/mowe〃a小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌(W6Wo;ara/zaemo/;^cw力、銅綠假單胞菌、蠟狀芽孢桿菌(5ac/〃wscwew力、枯草芽孢桿菌(S""〃wjsw&z7/力以及念珠菌。7.權(quán)利要求1所述的抗微生物劑，該抗微生物劑包含香草醛作為有效成分，其中所述微生物選自肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、副溶血弧菌、蠟狀芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌以及念珠菌。8.權(quán)利要求1所述的抗微生物劑，該抗微生物劑包含5,7,4，-三羥基-3，，5，-二曱氧基黃酮作為有效成分，其中所述微生物選自沙門菌以及銅綠假單胞菌。9.抗微生物組合物，其包含權(quán)利要求1~8中任一項所述的抗微生物劑。全文摘要以選自對羥基苯甲醛、5，7，4’-三羥基-3’，5’-二甲氧基黃酮、3-羥基吡啶和香草醛的至少1種作為有效成分的抗微生物劑及含有該抗微生物劑的抗微生物組合物。文檔編號A61P31/04GK101442996SQ20078001684公開日2009年5月27日申請日期2007年3月8日優(yōu)先權(quán)日2006年3月10日發(fā)明者內(nèi)海輝雄,土田小太郎,土田裕三,櫻井大輔,河邊光郎,渡邊邦友,纐纈守申請人:土田裕三