專(zhuān)利名稱(chēng)：：作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物的制作方法作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物本發(fā)明涉及具有組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制酶活性的化合物。本發(fā)明還涉及它們的制備方法，包括它們的組合物，以及它們?cè)隗w外和體內(nèi)抑制HDAC和作為藥品的用途，例如作為藥品用于抑制增殖性病癥，例如癌癥和牛皮褲。核組蛋白被稱(chēng)為機(jī)器的整體和動(dòng)態(tài)組分，所述機(jī)器負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄以及其它DNA-模板過(guò)程例如復(fù)制、修復(fù)、再結(jié)合和染色體分離。它們是翻譯后修飾包括乙?；?、磷酸化、曱基化、遍在蛋白化和ADP-核糖基化的對(duì)象。組蛋白脫乙酰酶，在此稱(chēng)為"HDACs",是催化除去蛋白賴(lài)氨酸殘基上乙?；?務(wù)飾的酶，包括核小體組蛋白H2A、H2B、H3和H4。與組蛋白轉(zhuǎn)乙酰酶一起，在此稱(chēng)為"HATs",HDACs調(diào)節(jié)組蛋白乙酰化的水平。核小體組蛋白乙酰化的平衡在許多基因的轉(zhuǎn)錄中起重要作用。組蛋白的次乙?；c縮合染色質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)，該縮合染色質(zhì)結(jié)構(gòu)導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的抑制，而乙酰化組蛋白與更開(kāi)放的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄激活有關(guān)。已經(jīng)描述了十一個(gè)結(jié)構(gòu)有關(guān)的HDACs并分成兩種類(lèi)型。I類(lèi)HDACs由HDAC1、2、3、8和11組成，而II類(lèi)HDACs由HDAC4、5、6、7、9和IO組成。第三類(lèi)HDACs的成員在結(jié)構(gòu)上是與第I類(lèi)和II類(lèi)HDACs無(wú)關(guān)的。I類(lèi)/II類(lèi)HDACs通過(guò)鋅-相關(guān)的機(jī)理起作用，而m類(lèi)HDACs是NAD-相關(guān)的。除組蛋白外，其它蛋白也是乙?；牡孜?，特別是轉(zhuǎn)錄因子例如p53、GATA-1和E2F;核受體例如糖皮質(zhì)激素受體、曱狀l泉受體、雌激素受體；和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白例如pRb。蛋白乙?；c蛋白穩(wěn)定有關(guān)，例如p53穩(wěn)定，輔助因子的募集和增加DNA結(jié)合。p53是一種肺瘤抑制基因，響應(yīng)各種應(yīng)激信號(hào)，例如DNA損傷，其可以誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯或細(xì)胞調(diào)亡。p53-誘導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯的主要靶標(biāo)似乎是p21基因。緊接于它由p53導(dǎo)致的激活，p21已經(jīng)根據(jù)它與細(xì)胞周期蛋白/依賴(lài)細(xì)胞周期蛋白的激酶絡(luò)合物的結(jié)合被識(shí)別，其導(dǎo)致Gl和G2階段細(xì)胞周期停滯，老年期間上調(diào)，以及它與增殖細(xì)胞核抗原的相互作用。HDAC抑制劑的研究表明，它們?cè)诩?xì)胞周期停滯、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和變異表型反轉(zhuǎn)中起重要作用。抑制劑曲古抑菌素A(TSA),例如，在G1和G2階段引起細(xì)胞周期停滯，恢復(fù)各種細(xì)胞系的變異表型，以及誘導(dǎo)弗羅德白血病細(xì)胞及其他的分化。已經(jīng)報(bào)道TSA(和辛二酰苯胺異羥肟酸SAHA)在小鼠中抑制細(xì)J包生長(zhǎng)、i秀導(dǎo)終末分化和預(yù)防腫瘤形成(Finnin等，Nature,401:188-193,1999)。還報(bào)道曲古抑菌素A用于治療纖維變性，例如肝纖維化和肝硬化(Geerts等，歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)EP0827742,1998年3月11日公開(kāi))。HDAC抑制劑的藥效基團(tuán)由金屬-結(jié)合區(qū)域組成，其與HDACs的含鋅-活性位點(diǎn)、連接基區(qū)域和表面識(shí)別區(qū)域或封端區(qū)域相互作用，其在活性位點(diǎn)的邊緣上與殘基相互作用。還報(bào)道HDACs抑制劑誘導(dǎo)p21基因表達(dá)。由這些抑制劑所引起的p21基因的轉(zhuǎn)錄激活通過(guò)如下促進(jìn)染色質(zhì)重新塑造，接著在p21啟動(dòng)子區(qū)域中的組蛋白H3和H4的乙?；?。p21的這種激活以p53-獨(dú)立方式存在，因此HDAC抑制劑在含突變p53基因的細(xì)胞是有效的，其中突變p53基因是許多腫瘤的標(biāo)志。此外，HDAC抑制劑可以具有間接活性，例如增大宿主免疫應(yīng)答和抑制腫瘤血管生成，并因此可以抑制原發(fā)性腫瘤的生長(zhǎng)和阻礙轉(zhuǎn)移(Mai等，MedicinalResearchReviews,25:261-309,2005)。鑒于上述，HDAC抑制劑在治療細(xì)胞增殖性疾病或病癥中，包括具有突變p53基因的腫瘤可能具有很大的潛力。2003年8月14日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1472216公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的雙環(huán)異羥肟酸鹽。2003年9月18日7^開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370、EP1485378等公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的取代哌。秦基嘧啶基異羥肟酸，此外EP1485365公開(kāi)了R306465。2003年10月9日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1492534公開(kāi)了作為HDAC抑制劑的包含哌嗪鍵的氨基甲酸化合物。2003年10月23日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1495002公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的取代哌。泰基苯基苯曱酰胺化合物。2003年11月13日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1501508公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的苯曱酰胺。2004年l月29日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO04/009536公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的在芳基和異羥肟酸鹽之間含烷基連接基的衍生物。2004年2月12日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP15251997^開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的(雜)芳基烯基取代的雙環(huán)異鞋肟酸鹽。2004年6月24日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1572626公開(kāi)了作為藥理學(xué)試劑的亞芳基-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺衍生物。2004年7月29日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1581484公開(kāi)了具有抗炎和抗肺瘤活性的N-羥基-苯甲酰胺衍生物的衍生物。2004年7月29日^^開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1585735^A開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的取代芳基異羥肝酸鹽衍生物。2004年8月19日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1592667公開(kāi)了作為藥理學(xué)試劑的單-酰化O-亞苯基二胺衍生物。2004年8月19日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP15卯340公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的二氨基亞苯基衍生物。2004年8月26日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1592665z^開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的苯甲酰胺衍生物。2004年8月26日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO04/072047公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的丐l"呆、苯并。米哇和萘并咪唑。2004年9月30日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1608628^A開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的與非芳族雜環(huán)體系連接的異羥肟酸鹽。2004年IO月14日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1613622公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的肝書(shū)f生物。2004年10月28日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)EP1611088公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的異羥坊酸鹽衍生物。2005年3月31日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/028447公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的苯并n米唑。2005年4月7日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/030704和WO05/030705公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的苯曱酰胺。2005年5月6日乂>開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/040101乂>開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的?；暹B接的和磺?；暹B接的異羥肟酸鹽。同樣在2005年5月6日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/040161公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的二芳基連接的異羥肟酸鹽。2005年8月18日/>開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/075469z^開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的瘞唑基異輕肟酸和p塞二唑基異羥將酸。2005年9月22日公開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)WO05/086898公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶抑制劑的雜五環(huán)異幾肟酸。2005年10月6日7>開(kāi)的專(zhuān)利申請(qǐng)\￥005/0928997>開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰酶的烯基苯甲酰胺。本發(fā)明的化合物在結(jié)構(gòu)、它們的藥理學(xué)活性和/或藥理學(xué)效力方面不同于現(xiàn)有技術(shù)。所解決的問(wèn)題是提供具有高酶和細(xì)胞活性的組蛋白脫乙酰酶抑制劑，其具有增加的生物利用度和/或體內(nèi)效力。本發(fā)明的新化合物解決了上述問(wèn)題。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出極好的組蛋白脫乙酰酶抑制酶和細(xì)胞活性。它們具有大容量以激活p21基因。它們可能具有所希望的藥物動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)和^f氐的P450酶親和性，其降4氐不利的藥物-藥物相互作用的風(fēng)險(xiǎn)，使其提供寬的安全范圍。本發(fā)明化合物的有利特點(diǎn)可能是代謝穩(wěn)定性、溶解性和/或p21誘導(dǎo)能力。本發(fā)明涉及式(I)的化合物其N(xiāo)-氧化物形式、藥學(xué)上可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中n是0或l以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；m是0、l或2以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；p是0或l以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；每個(gè)X獨(dú)立地是N或CH;每個(gè)Y獨(dú)立地是O、NH、N-d-6烷基、CH或CH2，以及當(dāng)Y是CH時(shí),那么所述取代基與環(huán)結(jié)構(gòu)的Y原子相連；W是羥基或式(a-l)的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>R"是羥基或-NH2;R"是氫、噻吩基、呋喃基或苯基，并且每個(gè)噻吩基、呋喃基或苯基可以任選被鹵素、氨基、硝基、氰基、羥基、苯基、Q-6烷基、(二Cw烷基)氨基、d-6烷氧基、苯基d-6烷氧基、羥基d-6烷基、Cw烷氧基羰基、羥基羰基、Cw烷基羰基、多囟代d-6烷氧基、多卣代C"烷基、d-6烷基磺酰基、羥基羰基d-6烷基、Cw烷基羰基氨基、氨基磺?；?、氨基磺?；鵆w烷基、異噁唑基、氨基羰基、苯基Cw烯基、苯基C3_6炔基或吡啶基C3-6炔基取代；R6、R7和RS每個(gè)獨(dú)立地是氫、-NH2、硝基、呋喃基、鹵素、Cw烷基、C^烷氧基、三氟甲基、噻吩基、苯基、d-6烷基羰基氨基、氨基羰基Cw烷基或-OC-CH2-RH;其中RH是氫、Cw烷基、羥基、氨基或Cw烷氧基；RZ是d—6烷基、Cw環(huán)烷基、CL6烷基氨基羰基或Cw烷氧基羰基；R3是氫、d-6烷基、C3—7環(huán)烷基、羥基Cw烷基、CL6烷氧基C"烷基、C^烷氧基羰基或d-6烷基氨基羰基；或112和113可以是橋連的(即形成環(huán)狀的環(huán)體系)，具有亞甲基、亞乙基或亞丙基橋連基；R4是氫、d—6烷基、陽(yáng)C(=0)國(guó)C服H-S(=0)2陽(yáng)N(CH3)2;^巾每個(gè)R"和R"獨(dú)立地是氫、氨基、d—6烷基或氨基C!-6烷基；和W是氫、羥基、氨基、卣素、C"烷基、多卣代C^烷基、C"烷氧基羰基、羥基羰基、C"烷基羰基氨基、d—6烷氧基或單-或二(Cw烷基)氨基。/人取4戈基上引入雙環(huán)體系的線(xiàn)表示該4建可以與雙環(huán)體系的任何合適的環(huán)原子相連。術(shù)語(yǔ)"組蛋白脫乙酰酶抑制劑"或"組蛋白脫乙酰酶的抑制劑"用來(lái)識(shí)別化合物，該化合物能夠與組蛋白脫乙酰酶相互作用并抑制它的活性，更特別地抑制它的酶活性。抑制組蛋白脫乙酰酶酶活性是指減少組蛋白脫乙酰酶從組蛋白中除去乙?；哪芰Α?yōu)選地，這種抑制是專(zhuān)一性的，即在抑制劑濃度低于產(chǎn)生某種其它的、無(wú)關(guān)的生物效應(yīng)所需要的抑制劑的濃度時(shí)，該組蛋白脫乙酰酶抑制劑降低組蛋白脫乙酰酶從組蛋白中除去乙?；哪芰ΑＨ缭谏鲜龆x和下文中所使用，卣代通常是指氟、氯、溴和碘；d-6烷基是指具有l(wèi)-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈飽和烴基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、l-甲基乙基、2-甲基丙基、戊基、2-甲基-丁基、己基、2-曱基戊基等；C2—6烯基是指含有一個(gè)雙鍵以及具有2-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烴基，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-曱基-2-丁烯基等；Cw炔基是指含有一個(gè)三鍵以及具有3-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈鏈烴基，例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、3-己炔基等；多卣代d—6烷基是指含有三個(gè)相同的或不同的鹵素取代基的C^6烷基，例如三氟甲基；以及C3—7環(huán)烷基包括具有3-6個(gè)碳的環(huán)烴基團(tuán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)庚基等。藥學(xué)上可接受的加成鹽包括藥學(xué)上可接受的酸加成鹽和藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。在本文中以上所述的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽是指包含治療活性的無(wú)毒酸加成鹽形式，其中式(I)的化合物能夠生成。具有堿性質(zhì)的式(I)化合物通過(guò)用合適的酸處理所述堿形式，可以轉(zhuǎn)化成它們的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。合適的酸包括例如無(wú)才幾酸，例如氫囟酸，例如鹽酸或氫溴酸；石克酸；^肖酸；-岸酸等酸；或有才幾酸，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥基乙酸、乳酸、焦葡萄酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯>^黃酸、對(duì)曱苯-黃酸、環(huán)拉酸、水楊酸、對(duì)氨基水楊酸、樸酸等酸。具有酸性質(zhì)的式(I)化合物通過(guò)用合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)堿處理所述酸形式，可以轉(zhuǎn)化成它們的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。合適的堿鹽形式包括例如銨鹽，堿金屬和堿土金屬鹽，例如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣鹽等，與有機(jī)堿形成的鹽，例如千星(benzathine)、N-曱基-D-葡糖胺、哈胺鹽，以及與氨基酸例如精氨酸、賴(lài)氨酸等形成的鹽。術(shù)語(yǔ)"酸或堿加成鹽"還包括水合物和溶劑加成形式，其中式(I)的化合物能夠形成。這些形式的實(shí)例例如是水合物、醇化物等。在此所使用的術(shù)語(yǔ)"式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)形式"是指由相同的原子、通過(guò)相同的連接順序構(gòu)成的、但具有不同的三維結(jié)構(gòu)的所有可能的化合物，其是不可互換的，其中式(I)的化合物可能具有。除非另作說(shuō)明或表明，化合物的化學(xué)名稱(chēng)包括所述化合物可能具有的所有可能的立體化學(xué)異構(gòu)形式的混合物。所述混合物可能含有所有所述化合物基本分子結(jié)構(gòu)的非對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ丑w。式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)形式，包括純的形式或彼此的混合物，擬包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。式(I)化合物的N-氧化物形式是指包含式(I)化合物的那些，其中一個(gè)或數(shù)個(gè)氮原子被氧化成所謂的N-氧化物，特別是其中哌啶-、哌溱或噠溱基-氮中的一個(gè)或多個(gè)被N-氧化的那些N-氧化物。式(I)的一些化合物還可以以它們的互變異構(gòu)形式存在。雖然沒(méi)有明確地表示在上面式中的這些形式擬包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。當(dāng)在下文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"式(I)的化合物"是指還包括藥學(xué)上可接受的加成鹽以及所有立體異構(gòu)形式。在此所使用的術(shù)語(yǔ)"組蛋白脫乙酰酶"和"HDAC"擬指任何一族的酶，其從組蛋白N-末端處的賴(lài)氨酸殘基的s-氨基中除去乙?；３潜疚闹辛碛姓f(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"組蛋白"是指任何組蛋白蛋白，包括來(lái)自任何物種的H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。人HDAC蛋白或基因產(chǎn)物包括但不局限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC國(guó)6、HDAC國(guó)7、HDAC-8、HDAC-9、HDAC國(guó)IO和HDAC-11。所述的組蛋白脫乙酰酶還可以源自原生動(dòng)物或真菌來(lái)源。第一組感興趣的化合物由式(I)的那些化合物組成，其中應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)下列限制條件a)n是l;b)p是0;c)每個(gè)X是N;d)每個(gè)Y是CH;e)W是羥基；f)R2是Cw烷基；g)R和RS可以是用亞甲基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連的；h)113是氫;i)R4是d-6烷基；和j)115是氫。第二組感興趣的化合物由式(I)的那些化合物組成，其中應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)下列限制條件a)n是l;b)p是O;c)每個(gè)Y是CH;d)R"是氬;e)R6、R和RS每個(gè)獨(dú)立地是氫，f)R2是d-6烷基；g)112和113可以是用亞甲基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連的；h)R3是氬；i)R4是d-6烷基；和j)R5是氫。第三組感興趣的化合物由式(I)的那些化合物或第一組和第二組的那些化合物組成，其中應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)下列限制條件a)n是O;b)每個(gè)Y獨(dú)立地是O、CH或CH2;c)W是羥基；和d)RS是C3.7環(huán)烷基、d-6烷氧基羰基或d-6烷基氨基羰基。四組感興趣的4t合物由式(I)的那些化合物組成，其中應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)下列限制條件a)n是l;b)m是l或2;c)p是O;d)每個(gè)X是N;e)每個(gè)Y是CH;f)112和113是用亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連的；g)R4是d-6烷基；h)115是氫。一組優(yōu)選的化合物由式(I)的那些化合物組成，其中n是l;p是0;每個(gè)X是N;每個(gè)Y是CH;W是羥基；112是(^-6烷基和R3是氫或者R2和R3可以與亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基一起橋連；R"是d-6烷基；以及115是氫。另一組優(yōu)選的化合物由式(I)的那些化合物組成，其中n是1;p是0;每個(gè)Y是CH;111()是氳；R6、R7和118每個(gè)獨(dú)立地是氫，！^是d-6烷基以及R3是氫或者R2和R3可以與亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基一起橋連；W是Cw烷基；以及W是氫。一組更優(yōu)選的化合物由式(I)的那些化合物組成，其中n是l;m是l或2;p是0;每個(gè)X是N;每個(gè)Y是CH;R"和R"與亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基一起橋連；R"是d-6烷基；以及115是氬。最優(yōu)選的化合物是化合物No.2和化合物No.3。o.0.84C2HF302化合物No2.1.38C2HF302化合物No.3式(I)的化合物和它們的藥學(xué)上可接受的鹽和N-氧化物和立體化學(xué)異構(gòu)形式可以以常規(guī)方式制備。起始物質(zhì)和一些中間體是已知的化合物并且是市場(chǎng)上可買(mǎi)到的，或者可以根據(jù)通常本領(lǐng)域已知的常規(guī)反應(yīng)步驟或如專(zhuān)利申請(qǐng)EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370和EP1485378中所述的反應(yīng)步驟制備。一些制備方法將在下文中更詳細(xì)地進(jìn)行描述。獲得最終式(I)化合物的其它方法在實(shí)施例中描述。式(I)的異羥坊酸，其中W是鞋基，在此稱(chēng)為式(I-a)的化合物，可以通過(guò)式(II)的中間體與合適的酸例如三氟乙酸反應(yīng)制備。所述反應(yīng)在合適的溶劑例如曱醇或二氯曱烷中進(jìn)行。式(I)的化合物，其中W是式(a-l)的基團(tuán)以及119是-,2,在此稱(chēng)為式(I-b)的化合物，可以通過(guò)式(III)的中間體其中M代表氫或鈉或鋰或堿金屬陽(yáng)離子如鈉，在此稱(chēng)為式(III-a)的化合物，與式(IV)的中間體在合適的試劑例如苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷基)構(gòu)六氟磷酸鹽(PyBOP)存在下反應(yīng)進(jìn)4亍制備。該反應(yīng)可以在石咸如三乙胺存在下、在合適的溶劑如二氯甲烷和四氫呋喃的混合物中進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>式(I-b)的化合物還可以通過(guò)式(V)的中間體與合適的酸例如三氟乙酸反應(yīng)制備。所述反應(yīng)在合適的溶劑例如曱醇或二氯曱烷中進(jìn)行。式(I)的化合物，其中W是式(a-l)的基團(tuán)以及W是羥基，在此稱(chēng)為式(I-c)的化合物，可以通過(guò)式(VI)的中間體與氟化四丁基銨在合適的溶劑如四氫呋喃中反應(yīng)制備。在式(VI)的中間體中的TBDMS是指叔丁基(二甲基)硅烷基。式(II)的中間體可以通過(guò)式(III)的中間體與式(VII)的中間體在合適的試劑如N'-(乙基羰基亞氨基)"^,^[-二甲基-1,3-丙二胺，一氬氯化物(EDC)和l-羥基-lH-苯并三唑(HOBT)存在下反應(yīng)制備。該反應(yīng)可以在堿如三乙胺存在下、在合適的溶劑如二氯甲烷和四氫吹喃的混合物中進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>式(V)的中間體可以通過(guò)式(III)的中間體與式(VIII)的合適的叔丁氧羰基(Boc)保護(hù)的苯胺在苯并三唑-l-基氧基三(二甲氨基)锜六氟磷酸鹽(BOP)和氫化鈉存在下反應(yīng)制備。所述反應(yīng)可以在合適的溶劑如p比咬中進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>式(VI)的中間體可以通過(guò)式(III)的中間體與式(IX)的合適的叔丁基(二曱基)硅烷基(TBDMS)保護(hù)的苯胺在苯并三唑-l-基氧基三(二曱氨基)錛六氟磷酸鹽(BOP)和三乙胺存在下反應(yīng)制備。所述反應(yīng)在合適的溶劑如N,N-二曱基甲酰胺中進(jìn)行。式(III)的中間體可以通過(guò)式(X)的中間體與合適的酸溶液如鹽酸或》咸溶液如氫氧化鋰或氬氧化鈉在合適的溶劑如醇，例如乙醇或丙醇或二嗯烷中反應(yīng)制備。式(X)的中間體其中RS除氪以外如上所定義，可以通過(guò)相應(yīng)的式(X)的化合物其中R3是氫與合適的用來(lái)引入合適的W基團(tuán)的功能性試劑反應(yīng)制備。例如，當(dāng)RS是d—6烷基、C3.7環(huán)烷基、羥基d—6烷基或d-6烷氧基d-6烷基時(shí)，那么該試劑是合適的烷基化試劑例如合適的烷基卣化物，如氯化物，該反應(yīng)在石咸性條件如l吏用三乙胺下在合適的溶劑如二曱基甲酰胺中進(jìn)行。當(dāng)RS是Q-6烷氧基羰基或CL6烷基氨基羰基時(shí)，那么該試劑是合適的?；瘎├绾线m的?；u，例如氯化物，該反應(yīng)在石咸性條件如使用三乙胺下在合適的溶劑如二氯甲烷中進(jìn)行。式(X)的中間體其中RS是氳，在此稱(chēng)為式(X-a)的中間體，可以通過(guò)式(XI)的中間體與式(XII)的中間體在合適的試劑如NaBH(OAc)3和Ti(OEt)4存在下在合適的溶劑如二氯乙烷或曱醇中反應(yīng)制備?；蛘?，該反應(yīng)可以使用BH3CN在酸性條件例如使用乙酸下在合適的溶劑如曱醇中或在氬化條件使用鈀-碳催化劑下在合適的溶劑如甲醇中進(jìn)行。o(ch2)n=N廠|、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>式(X)的中間體其中n是1，112和113是橋連的，虛線(xiàn)表示亞甲基、亞乙基或亞丙基橋連基和n是1,在此稱(chēng)為式(X-b)的中間體，可以通4存在下在合適的溶劑如二氯乙烷中反應(yīng)制備?；蛘?，該反應(yīng)可以使用BH3CN在酸性條件例如使用乙酸下在合適的溶劑如甲醇中或在氫化條件使用鈀-碳催化劑下在合適的溶劑如甲醇中進(jìn)行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>本發(fā)明還涉及式(II)、(III)、(X)、(X-a)和(X-b)的中間體，在此共同稱(chēng)為式(A)的化合物，其中Q是Cw烷氧羰基、羥基羰基或四氬吡喃氧基氨基羰基，以及n、m、p、X、Y、Z、R2、R3、R4和115如式(1)所定義，及其N(xiāo)-氧化物形式、藥學(xué)上可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)體形式。對(duì)于上述中間體，可以根據(jù)對(duì)式(I)化合物所定義的組，定義感興趣的、優(yōu)選的、更優(yōu)選的和最優(yōu)選的4匕合物的組。式(I)的化合物和一些中間體在它們的結(jié)構(gòu)中可以具有至少一個(gè)立體異構(gòu)中心。此立體異構(gòu)中心可以以R或S構(gòu)型存在。合物，其可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的拆分方法相互分開(kāi)。通過(guò)與合適的手性酸反應(yīng)，式(I)的外消旋化合物可以轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的非對(duì)映體鹽形式。所述非對(duì)映體鹽形式隨后例如通過(guò)選擇性或分步結(jié)晶分離，該對(duì)映異構(gòu)體通過(guò)堿從其中釋放。分離式(I)化合物的對(duì)映異構(gòu)體形式的另一方法包括使用手性固定相的液相色譜。所述純的立體化學(xué)異構(gòu)體形式還可以源自于合適的起始物質(zhì)的相應(yīng)純的立體化學(xué)異構(gòu)形式，條件是該反應(yīng)立體異構(gòu)專(zhuān)一性地進(jìn)行。優(yōu)選地，如果需要專(zhuān)一性的立體異構(gòu)體，所述化合物將通過(guò)立體專(zhuān)一性制備方法進(jìn)行合成。這些方法將有利地使用對(duì)映體純的起始物質(zhì)。式(I)的化合物、其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽和立體異構(gòu)形式具有有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，因?yàn)樗鼈兙哂薪M蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制作用。通過(guò)給予有效量的本發(fā)明化合物，本發(fā)明提供一種抑制細(xì)胞(包括變異細(xì)胞)異常生長(zhǎng)的方法。細(xì)胞異常生長(zhǎng)是指細(xì)胞生長(zhǎng)與正常的調(diào)節(jié)機(jī)制無(wú)關(guān)(例如接觸性抑制喪失)。這包括直接引起癌細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、終末分化和/或調(diào)亡以及間接抑制腫瘤新血管形成的腫瘤生長(zhǎng)抑制。本發(fā)明還提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，通過(guò)給予有效量的本發(fā)明的化合物給需要這種治療的受試者，例如哺乳動(dòng)物(更特別是人)。特別地，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，通過(guò)給予有效量的本發(fā)明的化合物?？梢员灰种频碾狭龅膶?shí)例，但不局限于，肺癌(例如腺癌和包括非小細(xì)胞肺癌)，胰腺癌(例如胰腺癌癥如外分泌胰腺癌癥)，結(jié)腸癌(例如結(jié)腸癌，例如結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)，前列腺癌包括晚期疾病，淋巴系統(tǒng)的造血胂瘤(例如急性淋巴細(xì)胞性白血病，B細(xì)胞淋巴瘤，伯基特氏胂瘤)，骨髓性白血病(例如急性髓性白血病(AML))，甲狀腺濾泡狀癌，骨髓發(fā)育異常綜合征(MDS),間質(zhì)來(lái)源的胂瘤(例如纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤)，黑色素瘤，畸胎癌，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，膠質(zhì)瘤，皮膚的良性腫瘤(例如角化棘皮瘤)，乳腺癌(例如晚期乳腺癌)，腎癌，卵巢癌，膀胱癌和表皮癌。本發(fā)明的化合物可以用于其它治療目的，例如a)通過(guò)在對(duì)治療癌癥的腫瘤進(jìn)行輻射之前、期間或之后給予本發(fā)明的化合物，寧:化;改射治療的腫瘤；b)治療關(guān)節(jié)病和骨病例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、少年關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多關(guān)節(jié)炎、牛皮辮關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；c)抑制平滑肌細(xì)胞增殖包括血管增殖性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄；d)治療炎性病癥和皮膚病癥例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、過(guò)敏性鼻炎、移植物抗宿主病、結(jié)膜炎、哮喘、ARDS、貝切特氏病、移植排斥、蕁麻滲、過(guò)敏性皮炎、局限性脫發(fā)、硬皮病、皮滲、濕滲、皮肌炎、粉刺、糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、川畸(氏)病、多發(fā)性硬化、肺氣肝、嚢性纖維化和慢性支氣管炎；e)治療子宮內(nèi)膜異位、子宮平滑肌瘤、功能障礙性子宮出血和子宮內(nèi)膜增生；f)治療眼睛血管形成，包括影響視網(wǎng)膜與脈絡(luò)膜血管的血管病變；g)治療心功能障礙；h)抑制免疫抑制性病癥，如治療HIV感染；i)治療腎功能障礙；j)抑制內(nèi)分泌病變；k)抑制生糖作用異常的功能障礙；l)治療神經(jīng)病變，例如帕金森氏癥或造成^人知異常的神經(jīng)病變，例如阿茲海默氏癥或與聚谷酰胺病變相關(guān)的神經(jīng)性疾?。籱)治療精神錯(cuò)亂例如精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁癥、焦慮和并青神??；n)抑制神經(jīng)肌肉病變，例如肌萎縮性側(cè)硬化；o)治療脊柱月幾肉萎縮；p)治療其它通過(guò)加強(qiáng)基因表達(dá)而可治療的其它病變；q)加強(qiáng)基因療法；r)抑制脂肪形成；s)治療寄生蟲(chóng)病例如瘧疾。因此，本發(fā)明公開(kāi)了用作藥品的式(I)化合物，以及式(I)的這些化合物在制備用于治療一種或多種上述病癥的藥物的用途。式(I)的化合物、其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽和立體異構(gòu)形式可以具有有價(jià)值的診斷性質(zhì)，因?yàn)樗鼈冊(cè)诎_企測(cè)或測(cè)定在標(biāo)記化合物和HDAC間形成絡(luò)合物的生物樣品中可用于才企測(cè)或識(shí)別HDAC。該檢測(cè)或識(shí)別法可使用由標(biāo)記試劑如方文射性同位素、酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)等等標(biāo)記的化合物。放射性同位素的實(shí)例包括1251、1311、3H與"C。酶通常通過(guò)適當(dāng)?shù)孜锏墓曹椂蓹z測(cè)，其進(jìn)而催化可檢測(cè)的反應(yīng)。其實(shí)例包括例如p-半乳糖苷酶、P-葡糖苷酶、堿性磷酸酶、過(guò)氧化酶與蘋(píng)果酸脫氫酶，優(yōu)選辣根過(guò)氧化酶。發(fā)光物質(zhì)包括例如魯米諾、魯米諾衍生物、熒光素、多管水母素(aequorin)與熒光素酶。生物才羊品可定義為體組織或體液。體液的實(shí)例為腦脊ft液、血液、血漿、血清、尿液、痰、唾液等等。就其實(shí)用的藥物性質(zhì)而言，本發(fā)明化合物可配制成用于給藥目的的不同的藥物形式。為了制備本發(fā)明的藥物組合物，將作為活性成分的有效量的堿或酸加成鹽型特定化合物與藥學(xué)上可接受的載體密切混合，該載體可呈多種不同形式，取決于所需給藥制劑型式。這些藥物組合物最好呈適合優(yōu)選用于經(jīng)口、直腸、經(jīng)皮膚給藥或胃腸外注射用的單位劑型。例如，制備口服劑型組合物時(shí)，可使用任何常用的藥物介質(zhì)，如在口服液體制劑，如懸浮液、糖漿、酏劑和溶液的情況中可^f吏用例如水、二醇、油類(lèi)、醇類(lèi)等等；或在制備粉劑、丸劑、膠嚢和片劑的情況中可使用固態(tài)載體如淀粉、糖類(lèi)、高嶺土、潤(rùn)滑劑、結(jié)合劑、崩解劑等等。由于片劑與膠嚢方便給藥，因此代表最有利的口服單位劑型，在這種情況下當(dāng)然使用固態(tài)藥物載體。對(duì)于胃腸外組合物，載體通常包括無(wú)菌水，至少占絕大部分，但也可包含其它成份，例如有助于溶解度。例如，可制備可注射液，其中載體包括鹽水溶液、葡萄糖溶液或鹽水與葡萄糖溶液的混合物。也可制備注射用懸浮液，在這種情況下可使用適當(dāng)液態(tài)載體、懸浮劑等等。在適合經(jīng)皮膚給藥的組合物中，載體任選包含滲透加強(qiáng)劑及/或合適的濕化劑，任選與任何性質(zhì)的少量合適添加劑組合，該添加劑不對(duì)皮膚引起顯著的不良效應(yīng)。這些添加劑可促進(jìn)給藥至皮膚及/或可能有助于制備所需組合物。這些組合物可依多種方法給藥，例如作為透皮式貼布、滴劑或軟膏。特別有利的是以方便給藥且劑量均一的單位劑型配制上述藥物組合物。本說(shuō)明書(shū)與權(quán)利要求中所使用的單位劑型指物理性分離的適合作為單一劑量的單位，各單位包含經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量活性成分，與所需的藥物載體組合。這些單位劑型實(shí)例為片劑(包括有劃痕或有包衣的片劑)、膠嚢、丸劑、散劑包、扁嚢片、注射用溶液或懸浮液、茶匙劑、湯匙劑等等，及其離散多重劑型。本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易由下文出示的試驗(yàn)結(jié)果決定有效量。通常，考慮治療有效量為每公斤體重0.005亳克至100毫克，尤其是每公斤體重0.005毫克至10毫克?？梢栽谝惶靸?nèi)以適當(dāng)時(shí)間間隔將所需劑量分成2、3、4或更多個(gè)亞劑量給藥。該小劑量可配制成單位劑型，例如每單位劑型包含0.5至500毫克，尤其是10至500毫克活性成分。本發(fā)明另一方面提出一種HDAC-抑制劑與另一種抗癌劑的組合，尤其用于藥物，更具體地，用于治療癌癥或相關(guān)疾病。治療上述病癥時(shí)，本發(fā)明化合物可以有利地用于與一種或多種其它藥劑組合，更尤其是，與其它抗癌劑組合。抗癌劑的實(shí)例為-柏配^立^:合物例如順柏、卡輛或奧沙利4白(oxalyplatin);-紫杉烷化合物例如紫杉醇或紫杉萜；-拓樸異構(gòu)酶I抑制劑例如喜樹(shù)堿化合物例如伊立替康或托泊替康；-拓樸異構(gòu)酶II抑制劑例如抗腫瘤鬼臼霉素衍生物例如依托泊苷或替尼泊苷；-抗肺瘤長(zhǎng)春花生物堿例如長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿或長(zhǎng)春瑞濱；-抗胂瘤核苦衍生物例如5-氟尿嘧咬、吉西他濱或卡培他濱；畫(huà)烷基化試劑例如氮芥或亞硝基脲例如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、亞硝脲氮芥或環(huán)己亞硝脲；-抗腫瘤蒽環(huán)類(lèi)抗生素衍生物例如柔紅霉素、多柔比星、伊達(dá)比星或米托蒽醌；-HER2抗體例如曲妥單抗；-雌激素受體拮抗劑或選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑例如他莫昔芬、托瑞米芬、屈洛昔芬、氟維司群(faslodex)或雷洛昔芬；-芳香酶抑制劑例如依西美坦、阿那曲唑、來(lái)曲唑和Y犬氯唑；-分化劑例如類(lèi)視色素、維生素D和維曱酸代謝阻滯劑(RAMBA)例如異維甲酸；-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑例如氮胞苷；-激酶抑制劑例如flavoperidol、伊馬替尼曱磺酸酯或吉非替尼；-法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑；-其它HDAC抑制劑；國(guó)泛激素-蛋白酶體途徑抑制劑例如Velcade;或-Yondelis。在此使用的術(shù)語(yǔ)"鈿配位化合物"表示提供離子形式鉑的任何胂瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制鉑配位化合物。術(shù)語(yǔ)"紫杉烷化合物，，表示具有紫杉烷環(huán)體系的一類(lèi)化合物，并且與某些物種的紫杉(Taxus)樹(shù)的提取物相關(guān)或來(lái)源于其中。術(shù)語(yǔ)"拓樸異構(gòu)酶抑制劑"用來(lái)表示在真核細(xì)胞中能夠改變DNA拓樸結(jié)構(gòu)的酶。它們對(duì)重要的細(xì)胞功能和細(xì)胞增殖是關(guān)鍵的。在真核細(xì)胞中存在兩種類(lèi)型的拓樸異構(gòu)酶，即類(lèi)型I和類(lèi)型II。拓樸異構(gòu)酶I是約100,000分子量的單體酶。該酶結(jié)合DNA,引進(jìn)一個(gè)暫時(shí)性單鏈裂口，打開(kāi)雙螺旋(或使之解開(kāi))，然后先使裂口封合后，再自DAN股上解離。拓樸異構(gòu)酶II的作用機(jī)理類(lèi)似，其涉及誘導(dǎo)DNA股開(kāi)裂或形成游離基。術(shù)語(yǔ)"喜樹(shù)堿化合物"用來(lái)表示與母體喜樹(shù)堿化合物相關(guān)或由其所衍生的化合物，它是書(shū)f生自中國(guó)樹(shù)種Camptothecinacuminata及印度樹(shù)種Nothapodytesfoetida的不可溶于7Jc的才直物石咸。術(shù)語(yǔ)"鬼臼毒素化合物，，用來(lái)表示與自剝度比爾謨(mandrake)植物萃取出的母體鬼臼毒素化合物相關(guān)或由其所衍生的化合物。術(shù)語(yǔ)"抗胂瘤長(zhǎng)春花石咸"用來(lái)表示與來(lái)自長(zhǎng)春花(Vincarosea)植物的萃取物相關(guān)或由其所衍生的化合物。術(shù)語(yǔ)"烷化劑"包括一類(lèi)共同特點(diǎn)為在生理?xiàng)l件下有能力提供烷基給具有生物活性的大分子如DNA的化學(xué)劑。對(duì)于大多數(shù)較重要試劑如氮芥及亞硝基脲，活性烷化部分在體內(nèi)在復(fù)雜的降解反應(yīng)(其中有些為酶反應(yīng))之后產(chǎn)生。烷化劑的最重要藥物作用為特別在DNA合成與細(xì)胞分裂過(guò)程中干擾與細(xì)胞增殖相關(guān)的基本機(jī)理。烷化劑在快速增殖組織中干擾DNA功能與整體性的能力提供了其醫(yī)療用途及其多種毒性的基礎(chǔ)。術(shù)語(yǔ)"抗肺瘤蒽環(huán)素衍生物"包括得自真菌波賽鏈球菌(Strep,peuticusvar.caesius)的抗生素及其書(shū)亍生物，其特征在于具有一個(gè)四環(huán)素環(huán)結(jié)構(gòu)，利用糖苷鍵連接一種罕見(jiàn)糖道諾糖胺。已知原發(fā)性乳癌瘤中人類(lèi)上皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白質(zhì)(HER2)的擴(kuò)增作用與某些患者的臨床預(yù)后結(jié)果不佳有相關(guān)性。曲妥單抗為一種高度純化的重組體DNA-衍生的擬人化單克隆IgGl-K抗體，其與HER2受體的細(xì)胞外區(qū)域具有高的親和性和專(zhuān)一性。許多乳腺癌有雌激素受體，且這些腫瘤的生長(zhǎng)可受到雌激素刺激。術(shù)語(yǔ)"雌激素受體拮抗劑"和"選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑"用來(lái)表示與雌激素受體(ER)結(jié)合的雌二醇的竟?fàn)幮砸种苿＿x擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑與ER結(jié)合時(shí)，會(huì)誘發(fā)受體的三維空間形狀改變，調(diào)節(jié)其與DNA上雌激素反應(yīng)元素(ERE)的結(jié)合。在停經(jīng)后婦女中，循環(huán)雌激素的主要來(lái)源為腎上腺與卵巢雄激素(雄烯二醇與睪固酮)經(jīng)由周邊組織中芳香酶轉(zhuǎn)化成雌激素(雌固酮與雌二醇)。經(jīng)由芳香酶抑制或去活化作用消耗雌激素可有效且選擇性治療某些患有與激素相關(guān)的乳癌的停經(jīng)后患者。在此使用的術(shù)語(yǔ)"抗雌激素劑"不僅包括雌激素受體拮抗劑和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，而且包括如上所述的芳香酶抑制劑。術(shù)語(yǔ)"分化劑"包括可依不同方式抑制細(xì)胞增殖及誘發(fā)分化的化合物。已知維生素D和類(lèi)視黃素在調(diào)節(jié)多種正常和惡性細(xì)胞型態(tài)的生長(zhǎng)與分化上扮演重要角色。視黃酸代謝作用阻斷劑(RAMBA's)通過(guò)抑制細(xì)胞色素P450-所介導(dǎo)的視黃酸分解代謝作用而提高內(nèi)因性視黃酸含量。DNA的甲基化變化為人體贅生瘤最常見(jiàn)的異?，F(xiàn)象。特定基因的發(fā)動(dòng)子中的過(guò)度甲基化通常與所涉及的基因失活有關(guān)。術(shù)語(yǔ)"DNA甲基轉(zhuǎn)化酶抑制劑"用來(lái)表示通過(guò)DNA甲基轉(zhuǎn)化酶的藥物抑制作用而發(fā)揮作用及使腫瘤抑制基因表達(dá)再活化的化合物。術(shù)語(yǔ)"激酶抑制劑"包括涉及細(xì)胞循環(huán)發(fā)展及計(jì)劃性細(xì)胞死亡(細(xì)胞凋亡)的激酶的強(qiáng)力抑制劑。術(shù)語(yǔ)"法呢基轉(zhuǎn)化酶抑制劑"用來(lái)表示設(shè)計(jì)用于防止Ras及其它細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的法呢基化反應(yīng)的化合物。已知其可影響惡性細(xì)胞增殖與存活。術(shù)語(yǔ)"其它HDAC抑制劑"包括但不局限于-羧酸酯例如丁酸酯、肉桂酸、4-苯基丁酸酯或丙戊酸；畫(huà)異羥肟酸例如辛二酰基苯胺異羥肟酸(SAHA),含有哌嗪的SAHA類(lèi)似物，二芳基異羥肟酸鹽A-161906及其吵唑基醚-,四氫吡啶-和四氫萘酮-類(lèi)似物，雙環(huán)芳基-N-羥基羧酰胺，pyroxamide，CG-1521，PXD-101,磺酰胺異羥lt酸，LAQ-824,LBH-589，曲古抑菌素A(TSA)，oxamflatin,scriptaid，與scriptaid相關(guān)的三環(huán)分子，間羧基肉桂酸二異羥肟酸(CBHA),CBHA-類(lèi)異羥肟酸，trapoxin-異羥肟酸類(lèi)似物，CRA-024781,R306465和相關(guān)的苯甲?；?和雜芳基-異羥肟酸，氨基辛二酸酯和丙二?；０?；誦環(huán);j犬四肽例》口trapoxin，apidicin,縮酚酸肽，spiruchostatin有關(guān)的化合物，RedFK-228,含巰基環(huán)狀四肽(SCOPs)，含異羥肟酸環(huán)狀四肽(CHAPs),TAN-174s和azumamides;-苯甲酰胺類(lèi)例如MS-275或CI-994,或-depudecin。術(shù)語(yǔ)"泛激素-蛋白酶體途徑抑制劑"用來(lái)識(shí)別化合物，所述化合物在蛋白酶體包括細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白中抑制細(xì)胞蛋白的目標(biāo)破壞。對(duì)于癌癥的治療，本發(fā)明化合物可以連同輻射一起給予如上所述的患者。輻射是指電離輻射，特別是指Y輻射，尤其是由直線(xiàn)加速器或現(xiàn)在通用的放射性核素發(fā)射的那種。由放射性核素進(jìn)行的腫瘤輻射可以是外部的或內(nèi)部的。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的抗癌劑和本發(fā)明的HDAC抑制劑的組合。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的組合在藥物治療中的用途，例如用于抑制腫瘤細(xì)力包生長(zhǎng)。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的組合用于抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。本發(fā)明還涉及在人類(lèi)受試者中抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，其包括給予該受試者有效量的本發(fā)明的組合。本發(fā)明還提供抑制細(xì)胞(包括變異細(xì)胞)異常生長(zhǎng)的方法，通過(guò)給予有效量的本發(fā)明的組合。其它藥物試劑和HDAC抑制劑可以同時(shí)(例如單獨(dú)或整體組合物)或以任何順序依次給藥。在后者情況中，該兩種化合物將在一個(gè)時(shí)間段內(nèi)和以足以確保達(dá)到有利的或協(xié)同作用的數(shù)量和方式給藥。可以理解，優(yōu)選的給藥方法和順序以及該組合的每一組分的各個(gè)劑量和方案將取決于所給予的具體的其它藥物試劑和HDAC抑制劑、它們的給藥途徑、所治療的具體腫瘤和所治療的具體宿主。給藥的最佳方法和順序以及劑量數(shù)量和方案可以容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)方法并鑒于在此所述的信息組來(lái)確定。鉑配位化合物的有利給藥劑量為每平方米體表面積1至500毫克(mg/m2),例如50至400mg/m2，尤其是每個(gè)療程的順鉑劑量為約75mg/m2，卡鉑劑量為約300mg/m2。紫杉烷化合物的有利給藥劑量為每平方米體表面積50至400毫克(mg/m2),例如75至250mg/m2,尤其是每個(gè)療程的紫杉醇劑量為約175至250mg/m2,及紫杉辟的劑量為約75至150mg/m2。喜樹(shù)堿化合物的有利給藥劑量為每平方米體表面積0.1至400毫克(mg/m2),例如1至300mg/m2,尤其是每個(gè)療程的依立替康劑量為約100至350mg/m2,托泊替康劑量為約1至2mg/m2。抗腫瘤鬼臼毒素衍生物的有利給藥劑量為每平方米體表面積30至300毫克(mg/m2),例如50至250mg/m2,尤其是每個(gè)療程的依托泊甙劑量為約35至100mg/m2，登尼泊甙劑量為約50至250mg/m2。抗腫瘤長(zhǎng)春花堿的有利給藥劑量為每平方米體表面積2至30毫克(mg/m2),尤其是每個(gè)療程的長(zhǎng)春花堿劑量為約3至12mg/m2,長(zhǎng)春新石咸劑量為約1至2mg/m2,長(zhǎng)春瑞賓劑量為約10至30mg/m2?？闺狭龊讼阊苌锏挠欣o藥劑量為每平方米體表面積200至2500毫克(mg/m2),例如700至1500mg/m2,尤其是每個(gè)療程的5-FU劑量為200至500mg/m2,吉西他濱劑量為約800至1200mg/m2，卡培他濱劑量為約1000至2500mg/m2。烷化劑，如氮芥或亞硝基脲的有利給藥劑量為每平方米體表面積100至500毫克(mg/m2)，例如120至200mg/m2,尤其是每個(gè)療程的環(huán)石粦酰胺劑量為約100至500mg/m2,苯丁酸氮芥劑量為約0.1至0.2mg/m2,卡莫司汀劑量為約150至200mg/m2,洛莫司汀劑量為約100至150mg/m2?？鼓[瘤蒽環(huán)素衍生物的有利給藥劑量為每平方米體表面積10至75毫克(mg/m2),例如15至60mg/m2,尤其是每個(gè)療程的柔紅霉素劑量為約40至75mg/m2，阿霉素劑量為約25至45mg/m2,伊達(dá)比星劑量為約10至15mg/m2。曲妥單抗的有利給藥劑量為每平方米體表面積1至5毫克(mg/m2),尤其是每個(gè)療程劑量為2至4mg/m2?？勾萍に貏┑挠欣o藥劑量為每天約1至100毫克，依特定藥劑及所治療病癥而定。它莫西芬的有利口服劑量為一天服用兩次5至50毫克，優(yōu)選為10至20毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)成及維持治療效果。托瑞米芬的有利口服劑量為一天服用一次約60毫克，持續(xù)治療一段足夠時(shí)間，以達(dá)成及維持治療效果。阿納托唑的有利口服劑量為一天服用一次約1毫克。屈洛昔芬的有利口服劑量為一天服用一次約20-100毫克。雷洛昔芬的有利口服劑量為一天服用一次約60毫克。依西美坦的有利口服劑量為一天服用一次約25毫克。這些劑量可以每個(gè)療程給藥例如一次、兩次或多次，可以每7、14、21或28天重復(fù)一次。就其有用的藥物性質(zhì)而言，根據(jù)本發(fā)明的組合中的組分(即其它藥劑與HDAC抑制劑)可配制成各種不同給藥目的的藥物型式。各組分可于分開(kāi)的藥物組合物中分開(kāi)配制，或于同時(shí)含有兩種組分的單一藥物組合物中配制。因此，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包含另一個(gè)藥劑和HDAC抑制劑以及一種或多種藥物載體。本發(fā)明還涉及一種以藥物組合物形式的本發(fā)明的組合，其包含抗癌劑和本發(fā)明的HDAC抑制劑以及一種或多種藥物載體。組合物中的用途。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)品，其含有作為第一活性成分的本發(fā)明的HDAC抑制劑以及作為第二活性成分的抗癌劑，作為混合制劑用于同時(shí)、單獨(dú)或依次用途用于治療患有癌癥的患者。實(shí)驗(yàn)部分下列實(shí)施例舉例說(shuō)明本發(fā)明。在下文中，"EDC，，定義為N'-(乙基羰基亞氨基)^,]^二曱基-1,3-丙二胺，一氳氯化物，"DCM"定義為二氯甲烷，"DMSO"定義為二甲亞砜，"EtOAc，，定義為乙酸乙酯，"EtOH，，定義為乙醇，"HOBt，，定義為l-羥基-lH-苯并三唑，"MeOH"定義為甲醇，"TFA，，定義為三氟乙酸以及"THF，，定義為四氬呋喃。A.中間體化合物的制備實(shí)施例Al.^)...±.間..體.丄的.制.務(wù)在室溫下，在N2流中，將乙醇鈥(IV)(0.017mol)加入到2-[4-(氨基曱基)-l-哌啶基]-5-嘧啶甲酸乙酯(0.0083mol)和l-(I畫(huà)曱基國(guó)IH-吲咮-3-基)-乙酮(O.Olmol)在l，2-二氯-乙烷(150ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌4天。加入三(乙酸根合-a-O)硼氫化物(l-)鈉(0.017mol)。將混合物在室溫下攪拌3天，倒入到石友酸鉀10%中。加入DCM。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后在石圭藻土(celite)中過(guò)濾。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(5g)用硅膠柱色譜提純(15-40|um)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH97/3/1)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到1.9g(54。/。)中間體l。D...i且體....的.制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>將中間體1(0.0045mol)和氬氧化鈉(0.018mol)在EtOH(190ml)中的混合物攪拌并回流4小時(shí)，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)至干。將殘余物吸收到乙醚中。濾出沉淀并千燥，得到1.6g(86%)中間體2，熔點(diǎn)>260°C。.P.丄..中..間..體.l.的.制.務(wù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>在N2流中，將EDC(0.0117mol)和HOBT(0.0117mol)加入到中間體2(0.0039mol)在THF(160ml)和DCM(160ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥胺(0.0117mol)。將混合物在室溫下攪拌3天，倒入到水水中，接著用DCM萃取。分離有才幾層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(3g)用硅月交柱色譜提純(15-40|um)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH93/7/0.5)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到1.55g(82%)中間體3。實(shí)施例A2.^)....中..亂體丄的.制.務(wù)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>在N2流中，將氰基硼氫化鈉(0.0034mol)和乙酸(0.037mol)在室溫下加入到中間體8(0.0038mol)和1-甲基-3-(3-吡咯烷基)-1H-。引咮(0.0034mol)在MeOH(70ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，倒入到碳酸鉀10%中，接著用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(L6g)用硅膠柱色譜提純(5|um)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH99/1/0.05-94/6/0.3)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到0.38g(26。/。)中間體4。D...中..間.體.l.的制..備.將中間體4(0.0096mol)和氳氧化鈉(0.038mol)在EtOH(450ml)中的混合物攪拌并回流4小時(shí)，然后冷卻至室溫并吸收到乙醚中。濾出沉淀，干燥，得到3.8g(900/。)中間體5，熔點(diǎn)〉260。C。丄.中..亂體.々..的.制.務(wù)在N2流中，在室溫下，將EDC(0.0172mol)和HOBT(0.0172mol)加入到中間體5(0.0086mol)在THF(400ml)和DCM(400ml)中的溶液中。將混合物攪拌45分鐘。加入O-(四氬-2H-吡喃-2-基)-羥胺(0.0172mol)。將混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，倒入到冰水中，并用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(6.8g)用硅膠柱色譜提純(15-40|um)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.1)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到3g(68。/。)中間體6，熔點(diǎn)8(TC。實(shí)施例A3i)....中.河體....的.制.備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>在l(TC下，在N2流中，將2-(甲基磺?；?-5-嘧啶甲酸乙酯(0.094mol)在乙腈(40ml)中的溶液加入到4-哌啶曱醇(0.086mol)和碳酸鉀(0.172mol)在乙腈(200ml)中的懸浮液中。將混合物恢復(fù)至室溫，然后攪拌4小時(shí)，倒入到水中并用EtOAc萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS04)，過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(23g)用CH3CN/乙醚結(jié)晶。將沉淀濾出并干燥，得到7.8g(340/。)中間體7。殘余物用硅膠柱色譜提純(20-45|dm)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.1)。收集純的餾分，蒸除溶劑，得到4.6g(200/())中間體7，熔點(diǎn)129。C。t丄.t.間.體.l.的.制..備.O在畫(huà)78。C,在N2流中，將DMSO(0.127mol)加入到草酰氯(0.061mol)在DCM(110ml)中的溶液中。將混合物攪拌15分鐘。加入中間體7(0.051mol)在DCM(200ml)中的溶液?；旌衔镌?78。C攪拌1.5小時(shí)。滴加三乙胺(0.26mol)。將混合物在-78。C攪拌15分鐘，然后冷卻至室溫2.5小時(shí)。加入水?；旌衔镉肈CM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSOj,過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(14g)用硅膠柱色譜提純(20-45fim)(洗脫液環(huán)己烷/EtOAc70/30)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到7.6g(57%)中間體8。.Q.)....中.N.體.義的.勉務(wù)O在N2流中，將乙醇鈦(IV)(0.0019mol)在室溫下加入到中間體8(0.0014mol)和l-曱基國(guó)3畫(huà)(3-哌啶基)-IH國(guó)巧I哚(0.0012mol)在1,2-二氯-乙烷(25ml)中的溶液中。將混合物在60。C下攪拌24小時(shí)，然后冷卻至5°C。在N2流中，加入三(乙酸根合-a-O)硼氫化(l-)鈉(0.0036mol)。將混合物在室溫下4覺(jué)拌48小時(shí)，倒入到^友酸鉀10°/。中。加入DCM。將混合物在硅藻土上過(guò)濾。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(1g)用硅膠柱色譜提純(0.15-40pm)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.1)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到0.36g(44%)中間體9。.H.i.間.體丄Q..的.制.務(wù)將中間體9(0.0008mol)和氬氧化鈉(0.0032mol)在EtOH(40ml)中的混合物攪拌并回流4.5小時(shí)，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)至干。將殘余物吸收到乙醚中。將沉淀濾出并干燥，得到0.36g(100%)中間體IO,熔點(diǎn)〉260。C。.l..中..亂體j丄.的.制.務(wù).在N2流中，在室溫下，將EDC(0.0024mol)和HOBT(0.0024mol)加入到中間體10(0.0008mol)在THF(40ml)和DCM(40ml)中的溶液中。將混合物攪拌15分鐘。加入O-(四氫-2H-吡喃-2-基)-羥胺(0.0024mol)。將混合物在室溫下攪拌4天，倒入到水中，接著用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSOj,過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(0.49g)用kromasil柱色"i普提純(5)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH98/2/0.2-93/7/0.7)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到0.26g(61%)中間體11。實(shí)施例A4"...中..間..體.丄...的.制.務(wù)在N2流中，將乙醇，鈦(4+)鹽(0.0172mol)在室溫下加入到中間體8(0.0104mol)和l-甲基誦3國(guó)(3-吡咯烷基)-IH誦舊(0.0115mol)在1,2-二氯乙烷(50ml)中的溶液中?；旌衔镌?0。C下攪拌3小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。分批加入三(乙酸根合-ot-O)硼氬化(l-)鈉(0.0345mol)。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，接著倒入到水水中。加入DCM。將混合物在硅藻土上過(guò)濾。濾液用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgS04),過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(3.2g)用硅膠柱色譜提純(0.15-40ium)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH96/4/0.2)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到0.55g(lP/。)中間體12。L)...中..間.體丄..的.制.務(wù)將中間體12(0.0012mol)和氪氧化鈉(0.0024mol)在EtOH(40ml)中的混合物在6(TC下攪拌8小時(shí)，然后冷卻至室溫。過(guò)濾沉淀，用EtOH洗滌，然后用乙醚洗滌并干燥，得到0.6g(100%)中間體13,作為鈉鹽形式被分離。.d...中..間..體..M..的.制.務(wù).在室溫下，將HOBt(0.0024mol)和EDC(0.0024mol)加入到中間體13(0.0016mol)和三乙胺(0.0048mol)在DCM/THF(20ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌15分鐘。加入(四氫-2H-吡喃國(guó)2誦基)-羥胺(0.0032mol)。將混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，倒入到水中，接著用DCM萃取。分離有機(jī)層，千燥(MgS04)，過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(0.6g)用kromasil柱色鐠提純(10|iim)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.3)。收集純的餾分，并蒸除溶劑，得到0.046g(6%)中間體14。B.最終化合物的制備實(shí)施例Bl.佐.全物.丄的.制.備.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>將中間體3(0.003mol)在TFA(7.5ml)和MeOH(150ml)中的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在3(TC下進(jìn)行蒸發(fā)。殘余物用氨基涂敷的珪膠柱色譜提純(25-40)(洗脫液DCM/MeOH/水80/20/2)。收集純的餾分，蒸除溶劑。殘余物(0.453g,37%)用MeOH/CH3CN/乙醚結(jié)晶。將沉淀濾出并干燥，得到0.255g(18%)化合物1,熔點(diǎn)296°C。實(shí)施例B2佐.會(huì).教義.的.制.備..0.32C2HF3021.24H20<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>將中間體6(0.0003mol)在TFA(0.9ml)和MeOH(18ml)中的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后蒸發(fā)至干。殘余物用氨基涂敷的硅膠柱色譜提純(25-40jam)(洗脫液DCM/MeOH/水90/10/1)。收集純的餾分，蒸除溶劑。殘余物(0.195g)用乙醚吸收若干次。將混合物蒸發(fā)并干燥，得到0.122g(66%)化合物2，熔點(diǎn)231。C。實(shí)施例B3佐.金鮑.1.的.制.備.將中間體11(0.0005mol)在TFA(1.5ml)和MeOH(30ml)中的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在3(TC蒸發(fā)。殘余物用CH3CN/MeOH/乙醚結(jié)晶。沉淀濾出并干燥，得到0.17g(56%)化合物3,熔點(diǎn)224。C。實(shí)施例B4化.全鮑.4..的.制.務(wù).將中間體14(0.00009mol)在TFA(0.2ml)和MeOH(2ml)中的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后蒸發(fā)至干。殘余物(0.05g)用氨基涂l丈的硅月交柱色i普提純(25-40|um)(洗脫液DCM/MeOH/水85/15/1)。收集純的餾分，蒸除溶劑，得到0.022g(56%)化合物4，熔點(diǎn)70°C。實(shí)施例B5.佐.金物j..的.制.備.在室溫下，將三乙胺(0.0027mol)加入到中間體13(0.0006mol)、1,2-苯二胺(0.0016mol)和苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷酮)錛六氟磷酸鹽(0.0014mol)在DCM(5ml)和THF(5ml)中的溶液中。將混合物在室溫下攪拌72小時(shí)，倒入到水中，并用DCM萃取。分離有機(jī)層，干燥(MgSOj,過(guò)濾，并蒸除溶劑。殘余物(0.8g)用kromasil柱色譜提純(3.5|im)(洗脫液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.3-92/8/0.3)。收集純的餾分，蒸除溶劑，得到0.014g(4%)化合物5，熔點(diǎn)9CTC。表F-l列出了根據(jù)上述實(shí)施例之一制得的化合物。表F-1<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>C.藥理學(xué)實(shí)施例組蛋白脫乙酰酶抑制作用的體外分析法(參見(jiàn)實(shí)施例C.1)測(cè)定采用式(I)化合物所得的抑制HDAC酶活性。式(I)化合物的細(xì)胞活性在A2780腫瘤細(xì)l包上，采用測(cè)試細(xì)l包毒性或存活性的比色測(cè)定法測(cè)定(MosmammTim,JournalofImmunologicalMethods65:55-63,1983)(參見(jiàn)實(shí)施例C.2)。化合物的溶解度測(cè)定化合物保留在溶液中的能力。在第一種方法中，測(cè)定稀釋時(shí)化合物保留在水溶液中的能力(參見(jiàn)實(shí)施例C.3.a)。DMSO儲(chǔ)備液使用單一含水緩沖溶劑在不同的連續(xù)步驟中稀釋。然后，在BDGentest溶解度掃描儀中掃描混合物檢測(cè)沉淀的出現(xiàn)。在第二種方法中，化合物在不同pH下的溶解度可以使用化學(xué)發(fā)光氮?dú)鈾z測(cè)器(參見(jiàn)實(shí)施例C.3.b)進(jìn)行測(cè)定。藥物的通透性表示其由一種介質(zhì)移動(dòng)至或通過(guò)另一種介質(zhì)的能力。具體地說(shuō)，其移動(dòng)通過(guò)腸膜進(jìn)入血流與/或從血流進(jìn)入目標(biāo)中的能力。通透性(參見(jiàn)實(shí)施例C.4)可以通過(guò)測(cè)定過(guò)濾器固定化的人工膜^f岸脂雙層的形成進(jìn)行測(cè)定。在過(guò)濾器固定化的人工膜分析法中，由96孔微滴定板和96孔過(guò)濾板形成"夾心"，使得每個(gè)復(fù)合孔中被分隔成兩個(gè)隔間，底層為供體溶液，上層為受體溶液，中間以涂覆2%(重量/體積)二油?；字；?膽堿的十二碳烷溶液的125jam微過(guò)濾片(0.45iluti孔徑)分隔，處于當(dāng)該系統(tǒng)接觸到含水緩沖液時(shí)，過(guò)濾器通道內(nèi)形成多層膜的雙層物的條件下。以厘米/秒測(cè)定通過(guò)此人工膜的化合物的通透性。其目的為檢視藥物在兩種不同pH:4.0與7.4下通過(guò)平行人工膜的通透性。采用UV-分光光度計(jì)于250至500nm之間的最適當(dāng)波長(zhǎng)下檢測(cè)化合物。藥物的代謝作用表示該脂溶性異種生物化合物或生物內(nèi)生化合物經(jīng)酶轉(zhuǎn)化成極性、水溶性且可排泄的代謝物(群)。藥物代謝作用的主要器官為肝臟。代謝產(chǎn)物的活性通常低于母體化合物或無(wú)活性。然而，有些代謝物可能加強(qiáng)活性或毒性效果。因此，藥物代謝作用可包括"去毒化"與"毒化"過(guò)程。決定生物體處理藥物與化學(xué)物能力的主要酶系統(tǒng)之一由細(xì)胞色素P450單氧化酶代表，該酶是依賴(lài)NADPH的酶?；衔锏拇x穩(wěn)定性可于體外使用亞細(xì)胞人類(lèi)組織測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例C.5)。本文中化合物的代謝穩(wěn)定性由這些化合物與微粒體培養(yǎng)15分鐘后的藥物代謝％表示。4乜合物的數(shù)量用LC-MS分碎斤法測(cè)定?，F(xiàn)已表明，多種抗腫瘤劑激活p21蛋白，包括DNA損傷劑和組蛋白脫乙酰酶抑制劑。DNA損傷劑通過(guò)腫瘤抑制基因p53激活p21基因，而組蛋白脫乙酰酶抑制劑通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子Spl轉(zhuǎn)錄激活p21基因。因此，DNA損傷劑通過(guò)p53應(yīng)答元件激活p21啟動(dòng)子，而組蛋白脫乙酰酶抑制劑通過(guò)spl部位激活p21啟動(dòng)子(相對(duì)于TATA盒位于-60bp-+40bp區(qū)域)，這二者都引起p21蛋白表達(dá)增加。當(dāng)細(xì)胞中的p21啟動(dòng)子由不包含p53應(yīng)答元件的p211300bp啟動(dòng)子片l殳組成時(shí)，它因此對(duì)DNA損傷劑是非應(yīng)答的?；衔镎T導(dǎo)p21的能力可以通過(guò)試驗(yàn)化合物誘導(dǎo)p21的能力進(jìn)而在細(xì)胞水平引起HDAC抑制進(jìn)行評(píng)價(jià)。與對(duì)照組水平相比，該細(xì)月包可以穩(wěn)定地用含不包含p53應(yīng)答元件并且其中報(bào)道基因表達(dá)增加的p211300bp啟動(dòng)子片段的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染，確定化合物具有p21誘導(dǎo)能力。該報(bào)道基因是一種熒光蛋白，該報(bào)道基因的表達(dá)以所發(fā)射熒光的數(shù)量進(jìn)行測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例C.6.a)。最后的方法是一種體內(nèi)方法，其中小鼠用于篩選化合物的藥物活性。上述穩(wěn)定變異的腫瘤細(xì)胞可以以足以產(chǎn)生腫瘤的數(shù)量給予小鼠。在肺瘤細(xì)胞在足夠的時(shí)間內(nèi)形成腫瘤后，可以將潛在活性化合物給予該動(dòng)物，所述化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用通過(guò)測(cè)定報(bào)道基因的表達(dá)進(jìn)行評(píng)價(jià)。與對(duì)照組水平相比，與藥物活性化合物一起培養(yǎng)將導(dǎo)致報(bào)道基因表達(dá)增加(參見(jiàn)實(shí)施例C.6.b.)專(zhuān)一性HDAC抑制劑不應(yīng)抑制其它酶，例如大量存在的CYPP450蛋白質(zhì)。CYPP450(大腸桿菌表達(dá)的)蛋白質(zhì)3A4、2D6en2C9將其專(zhuān)一性底物轉(zhuǎn)化成熒光分子。CYP3A4蛋白質(zhì)可使7-苯甲氧基-三氟曱基香豆素(BFC)轉(zhuǎn)化成7-羥基-三氟甲基香豆素。CYP2D6蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化3-[2-(N，N-二乙基-N-甲基氨基)乙基]-7-曱氧基-4-甲基香豆素(AMMC)形成3-[2-(N,N-二乙基氨基)乙基]-7-羥基-4-曱基香豆素鹽酸鹽，CYP2C9蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化7-曱氧基-4-三氟甲基香豆素(MFC)形成7-羥基-4-三氟曱基香豆素。抑制這種酶反應(yīng)的化合物將導(dǎo)致熒光訊號(hào)降低(參見(jiàn)實(shí)施例C.7)。實(shí)施例C.1:組蛋白脫乙酰酶的抑制作用的體外分析法使用Biomol的HDAC熒光活性分析/藥物發(fā)現(xiàn)試劑盒(cat.No:AK-500-0001)。該HDAC熒光活性分析基于FluordeLys(熒光組蛋白脫乙酰酶賴(lài)氨?；?Fl麗ogenicHistonedeAcetylaseLvsvl))底物和顯影劑組合。該FluordeLys底物，包含乙?；馁?lài)氨酸側(cè)鏈。該底物的脫乙酰作用4t丈化該底物，^使得在第二步中，用FluordeLys顯影劑處理產(chǎn)生熒光基團(tuán)。HeLa核萃取物(供應(yīng)商Biomol)以60iug/ml與75iuM底物一起進(jìn)行培養(yǎng)。將該FluordeLys底物加入到含有25mMTris，137mMNaCl,2.7mMKCl和lmMMgCl2.6H20在pH7.4的緩沖液中。30min后,加入l體積的顯影劑。該熒光基團(tuán)用355nm燈激發(fā)，在熒光板讀數(shù)器上檢測(cè)發(fā)射光(450nm)。對(duì)于每一實(shí)驗(yàn)，平行運(yùn)行對(duì)照組(含HeLa核萃取物和緩沖液)，空白培養(yǎng)物(含緩沖液，但沒(méi)有HeLa核萃取物)和樣品(含溶于DMSO中的化合物并且進(jìn)一步在緩沖液和HeLa核萃取物中稀釋)。在第一實(shí)例中，化合物在1(^M濃度進(jìn)行測(cè)試。當(dāng)化合物在1(^M表現(xiàn)出活性時(shí)，產(chǎn)生濃度-反應(yīng)曲線(xiàn)，其中該化合物在10^M和10一M之間的濃度范圍內(nèi)進(jìn)行試^r。所有樣品試驗(yàn)4次。在每一試^r中，空白值從對(duì)照組和樣品值中扣除。對(duì)照樣品表示100%的底物脫乙酰化。對(duì)于每一樣品，熒光用對(duì)照組平均值的百分比來(lái)表示。當(dāng)合適時(shí)，釆用分級(jí)數(shù)據(jù)的概率分析法計(jì)算IC5o值(將代謝物的數(shù)量減少到對(duì)照組的50%所需的藥物濃度)。本文中測(cè)試化合物的效果用pIC50來(lái)表示(IC5o值的負(fù)log值)(參見(jiàn)表F國(guó)2)。實(shí)施例C.2:在A2780細(xì)J包上測(cè)定抗增殖活性所有試驗(yàn)化合物均溶于DMSO中，并進(jìn)一步在培養(yǎng)基中稀釋。細(xì)胞增殖分析法中的最終DMSO濃度從未超過(guò)O.1%(v/v)。對(duì)照組含有A2780細(xì)胞及不含化合物的DMSO,而空白組則含有DMSO,但不含細(xì)胞。將MTT以5mg/ml溶于PBS中。制備甘氨酸緩沖液，其包含0.1M甘氨酸和0.1MNaCl,通過(guò)NaOH(1N)緩沖至pH10.5(所有試劑均來(lái)自Merck)。取人類(lèi)A2780卵巢癌瘤細(xì)胞(美國(guó)賓州FoxChase癌癥中心T.C.Hamilton博士的熱心捐贈(zèng))于補(bǔ)充2mML-谷酰胺、50貼/ml慶大霉素與10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細(xì)胞照例以單層培養(yǎng)物保持在37°C的潮濕5%C02氣氛中。每周使用胰蛋白酶/EDTA溶液傳代細(xì)胞一次，分割比例為l:40。所有培養(yǎng)基與補(bǔ)充物均得自LifeTechnologies。采用Gen-Probe霉?jié){菌組織培養(yǎng)試劑盒(供應(yīng)商BioM6rieux)測(cè)得細(xì)胞中不含霉?jié){菌污染物。將細(xì)胞接種在NUNCTM96孔培養(yǎng)板中(供應(yīng)商LifeTechnologies),使之附著在塑膠板上過(guò)夜。用于鋪板的密度為每孔1500個(gè)細(xì)胞，總體積為200pl培養(yǎng)基。細(xì)胞附著在培養(yǎng)板上后，更換培養(yǎng)基，添加藥物與/溶劑至最終體積200|Lil。培養(yǎng)4天后，以200pl新鮮培養(yǎng)基置換培養(yǎng)基，采用以MTT為基礎(chǔ)的分析法分析細(xì)胞密度與活力。每孔中添加25|LilMTT溶液，細(xì)胞再于37。C下培養(yǎng)2小時(shí)。然后，小心吸出培養(yǎng)基，依序添加25inl甘氨酸緩沖液及100iulDMSO,使藍(lán)色MTT-甲臘產(chǎn)物溶解。微試驗(yàn)板于微板振蕩器上振蕩10分鐘，使用Emax96孔分光光度計(jì)(供應(yīng)商Sopachem)測(cè)定540nm的吸光度。實(shí)驗(yàn)中，各實(shí)驗(yàn)條件的結(jié)果均為3個(gè)重復(fù)孔的平均值。出于初次篩選的目的，化合物在單一固定濃度10《M下測(cè)試。對(duì)于活性化合物，則重復(fù)試-瞼，以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線(xiàn)。對(duì)于每次實(shí)馬全，對(duì)照組(不含藥物)及空白培養(yǎng)組(不含細(xì)胞或藥物)均平行進(jìn)行。所有對(duì)照組與樣品組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。對(duì)于每個(gè)樣品，細(xì)胞生長(zhǎng)平均值(以吸光度為單位)均以相對(duì)于對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)平均值的百分比表示。當(dāng)適當(dāng)時(shí)，采用分級(jí)數(shù)據(jù)的概率分析法計(jì)算IC50值(使細(xì)胞生長(zhǎng)下降至對(duì)照組的50%時(shí)所需藥物濃度)(Finney,D.J.,ProbitAnalyses,第2版，第IO章,GradedResponse,CambridgeUniversityPress,Cambridge,1962)。本文中以pICso(ICso值的負(fù)對(duì)數(shù)值)表示測(cè)試化合物的效果(參見(jiàn)表F-2)。實(shí)施例C.3:溶解度/穩(wěn)定性.^^...在.盒杰介質(zhì).中..的.動(dòng).左.學(xué)婆.解.度.5000-9.8jxM(1/2稀釋)的DMSO-儲(chǔ)備液在DMSO中在96孔儲(chǔ)備液板(200ml每孔)中制備。每次稀釋后，將所述樣品混合。然后，將這些DMSO溶液(2)的等分試樣轉(zhuǎn)移到2個(gè)其它96孔緩沖板中，含有200|iil每孔含水緩沖液。每一緩沖板含有含水緩沖液pH7.4或含水緩沖液pH4.0。上次稀釋后，將緩沖板混合，樣品在室溫下穩(wěn)定0.5小時(shí)。每一化合物稀釋一式兩份以排除隨機(jī)誤差。然后，在BDGentest溶解度掃描儀中掃描混合物檢測(cè)沉淀的出現(xiàn)。基于混合物中不存在/存在沉淀，通過(guò)內(nèi)插法計(jì)算動(dòng)力學(xué)溶解度。評(píng)級(jí)分為3類(lèi)。高溶解度化合物得到3分，其具有大于或等于50pM的溶解度。中等溶解度的化合物得到2分，其具有大于10)LiM小于50pM的溶解度。低溶解度的化合物得到l分，這些化合物的溶解度小于或等于lO]uM。(參見(jiàn)表F-2)。不同pH化合物的溶解度還可以使用化學(xué)發(fā)光氮?dú)鈾z測(cè)器進(jìn)行測(cè)定(參見(jiàn)表F-2)。實(shí)施例C.4:平行人工膜通透性分析法在含2ml含水緩沖液系統(tǒng)pH4或pH7.4(PSR4系統(tǒng)溶液濃縮物(pION))的深孔或預(yù)混合板中稀釋儲(chǔ)備液樣品(10|ul于100%DMSO中的5mM儲(chǔ)備液的等分試樣)。在添加樣品至參考玲反中之前，先添加150iul緩沖液至孔中，測(cè)定空白UV值。之后，棄置i爰沖液，并將該板用作參考板。所有測(cè)定均在耐UV的板子上進(jìn)行(供應(yīng)商Coaster或Grcinsr)。在測(cè)定參考板的空白值后，添加150pl稀釋的樣品至參考板中，添加200iul稀釋樣品至供體板1中。使用4iul人工膜形成溶液(1,2-二油?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸于含0.1%2,6-二-叔丁基-4-曱基苯酚的十二碳烷中)涂覆受體過(guò)濾板l(供應(yīng)商Millipore,MAIPN45型)，置于供體板l上方，形成"夾心，，。添加緩沖液(200|iil)至上方的受體孔中。此"夾心"加蓋，保存在室溫與黑暗中18小時(shí)。在添加150jal緩沖液至孔中后，測(cè)定UV值，測(cè)定受體板2的空白值。在受體板2測(cè)定空白值后，棄置緩沖液，從受體過(guò)濾板1中取出150ili1受體溶液移至受體板2中。然后自?shī)A心中取出受體過(guò)濾板l。在測(cè)定供體板2的空白值(如上述)后，自供體板l中取出150pl供體溶液移至供體板2中。掃描供體板2、受體板2及參考板的孔中UV光譜(SpectraMAX190)。所有光譜均經(jīng)PSR4p控制軟件計(jì)算通透性。所有化合物均進(jìn)行三次重復(fù)。每次實(shí)驗(yàn)均使用卡馬西平、灰黃霉素、無(wú)環(huán)烏苷、阿替洛爾、呋塞米和氯噻溱作為標(biāo)準(zhǔn)物?；衔锓殖扇?lèi)低通透性(平均值O.5xl0—、m/s;得分l),中通透性(lxl(T6cm/s〉平均值^0.5x10—6cm/s;得分2)或高通透性(2lxl(T6cm/s;得分3)。實(shí)施例C.5:代謝穩(wěn)定性依據(jù)Gorrod等人(Xenobiotica5:453-462,1975)通過(guò)在使組織經(jīng)過(guò)機(jī)械性均質(zhì)化后離心分離制備亞細(xì)胞組織制劑。肝組織于水冷O.lMTns-HCl(pH7.4)緩沖液中漂洗，以洗除過(guò)量血液。隨后吸干組織，稱(chēng)重，使用手術(shù)用剪刀粗略剪斷。組織碎片于3倍體積水冷的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，使用裝有特氟隆搗杵的Potter-S(意大利Bmun公司)或SorvallOmni-Mix均質(zhì)器均質(zhì)化7xl0秒。在兩種情況下，在均質(zhì)化期間，容器均保持在水中/上。組織均質(zhì)液于4。C下，4吏用Sorvall離心才幾或Beckmann超離心才幾，于9000xg下離心20分鐘。所得上清液保存在-80。C下，稱(chēng)為"S9"。此S9部分可4吏用Beckmann超離心才幾于100,000xg下再離心60分鐘(4°C)。小心吸出所得上清液，等分并稱(chēng)為"胞液，，。將沉淀再懸浮于0.1M石舞酸鹽i爰沖液中(pH7.4),每0.5克原始組織重的i冬體積為1ml,稱(chēng)為"微粒體"。所有亞細(xì)胞組織部分被等分后，立即于液氮中冷凍，保存在-8(TC下，直到使用時(shí)為止。對(duì)于測(cè)試樣品，培養(yǎng)混合物含有PBS(0.1M)、化合物(5jiM)、微粒體(1mg/ml)與NADPH-發(fā)生系統(tǒng)(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化鎂及0.8單位葡萄糖-6-磷酸去氫酶)。對(duì)照組樣品含有相同材料，但微粒體被熱去活(95。C下10分鐘)的微粒體替代。對(duì)照組樣品中化合物的回收率總是100%。混合物于37。C下預(yù)培養(yǎng)5分鐘。添加0.8mMNADP在零時(shí)間點(diǎn)(t=0)開(kāi)始反應(yīng)，并將樣品培養(yǎng)15分鐘(t=15)。添加2倍體積DMSO停止反應(yīng)。樣品隨后于900xg下離心IO分鐘，分析前上清液在室溫下保存不超過(guò)24小時(shí)。所有培養(yǎng)均進(jìn)行二次重復(fù)。采用LC-MS分析法分析上清液。所有培養(yǎng)均進(jìn)行二次。采用LC-MS分析法分析上清液。在XterraMSC18(50x4.6mm，5]um，美國(guó)Waters乂〉司)上洗脫樣品。采用Alliance2790(供應(yīng)商美國(guó)Waters公司)HPLC系統(tǒng)。洗脫劑為緩沖液A(在&0/乙腈(95/5)中的25mM乙酸銨(pH5.2)),溶劑B為乙腈，且溶劑C為曱醇，流速為2.4ml/min。所使用的梯度為在5分鐘內(nèi)，以線(xiàn)性方式，使有機(jī)相濃度由0%逐漸提高至50%B與50%C，于1分鐘內(nèi)至100%B,然后保持有機(jī)相濃度固定另外1.5分鐘。樣品注射總體積為25iliI。采用附有ESI光源的Quattro(供應(yīng)商英國(guó)曼徹斯特市Micromass公司)三重四級(jí)質(zhì)譜儀作為檢測(cè)器。光源與去溶劑化溫度分別設(shè)定在120與350°C,使用氮?dú)庾鳛闅忪F劑及干燥氣體。以正掃描沖莫式取得數(shù)據(jù)(單離子反應(yīng))。錐管電壓設(shè)定在10V,停留時(shí)間為l秒。代謝穩(wěn)定性以化合物于活性微粒體(E(act))的存在下培養(yǎng)15分鐘后的代謝％表示(代謝％=100%-((E(act)于t為15時(shí)的總離子電流(TIC)/E(act)于t為0時(shí)的TIC)xioo)。代謝百分比小于20%的化合物則定義為是高度代謝穩(wěn)定的。代謝百分比在20與70%之間的化合物則定義為是中度穩(wěn)定的，而代謝百分比高于70%的化合物則定義為是低度代謝穩(wěn)定的。當(dāng)進(jìn)行代謝穩(wěn)定性?huà)呙钑r(shí)，總是包含3種參考化合物。包含維拉帕米作為低度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％=73%)。包含西沙比利作為中度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％=45%),并且包含丙醇作為中度至高度代謝穩(wěn)定性的化合物(代謝％=25%)。使用這些參考化合物確認(rèn)代謝穩(wěn)定性分析法的有效性。測(cè)試化合物2和3，并分別發(fā)現(xiàn)它們是高代謝穩(wěn)定的和中等代謝穩(wěn)定的。實(shí)施例C.6:P21誘導(dǎo)能力.實(shí).燕.對(duì).d終.:.....紳.胞方.法A2780細(xì)胞(ATCC)在補(bǔ)充有10。/。FCS,2mML-谷氨酰胺和慶大霉素的RPMI1640培養(yǎng)基中在37"在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中與5%C02—起培養(yǎng)。所有細(xì)胞培養(yǎng)溶液由Gibco-BRL(Gaithersburg，MD)提供。其它物質(zhì)由Nunc提供?；蚪MDNA從增殖A2780細(xì)胞提取并用作p21啟動(dòng)子的嵌套式PCR分離的模板。首次擴(kuò)增在55。C的退火溫度下使用低聚核苷酸對(duì)作為模板進(jìn)行20周期。相對(duì)于TATA盒含-4551至+88片段的所得4.5kb片段用低聚核普酸TCGGGTACCGAGGGCGCGGTGCTTGG和周期，產(chǎn)生4.5kb片段并隨后用低聚核苷酸對(duì)TCGGGTACCGGTAGATGGGAGCGGATAGACACATC和期，產(chǎn)生相對(duì)于TATA盒含-1300至+88片段的1.3kb片段。存在于低聚核苷酸(下劃線(xiàn)序列)的限制性位點(diǎn)XhoI和KpnI用于亞克隆。所述熒光素酶指針從pGL3-堿基中除去并在Kpnl和Xbal限制性位點(diǎn)用ZsGreen指針代替(來(lái)自pZsGreenl-Nl質(zhì)粒)。pGL3-堿基-ZsGreen-1300通過(guò)將上述人p21啟動(dòng)子區(qū)域的1.3kb片段插入到XhoI和KpnI位點(diǎn)的pGL3-石咸基-ZsGreen進(jìn)行構(gòu)造。所有限制酶由BoehringerManheim(德國(guó))提供。將A2780細(xì)胞以2xlOS細(xì)胞密度平鋪到6孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)，并用2ug的pGL3-堿基-ZsGreen-1300和0.2ug的pSV2neo載體通過(guò)使用Lipofectamine2000(Invitrogen,布魯塞爾，比利時(shí))4姿照廠商描述進(jìn)行轉(zhuǎn)染。該轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞用G418(Gibco-BRL,Gaithersburg,MD)選擇IO天，并使單細(xì)胞懸浮液進(jìn)行生長(zhǎng)。三周后，獲得單克隆。擴(kuò)展A2780選擇的克隆并以10000細(xì)胞每孔接種到96孔板中。接種24小時(shí)后，細(xì)胞用化合物(在鄰近p21啟動(dòng)子區(qū)域中影響spl部位)處理另外24小時(shí)。接著，細(xì)胞用4。/oPFA固定30，并用Hoechst染料對(duì)比染色。引起ZsGreen產(chǎn)生并由此產(chǎn)生熒光的p21啟動(dòng)子激活，通過(guò)AscentFluoroskan(ThermoLabsystems,布魯塞爾，比利時(shí))進(jìn)行監(jiān)測(cè)。對(duì)于每一實(shí)驗(yàn)，平行進(jìn)行對(duì)照組(不含藥物)和空白培養(yǎng)(不含細(xì)胞或藥物)。從所有對(duì)照組和樣品值中扣除空白值。對(duì)于每一樣品，p21誘導(dǎo)值用存在于對(duì)照組中的p21百分比值來(lái)表示。誘導(dǎo)百分比高于130%定義為顯著誘導(dǎo)。測(cè)試化合物l、2和3,并且其在100nM濃度下表現(xiàn)出顯著誘導(dǎo)。.實(shí).掩創(chuàng)..d.!,.;....體.改方.漆.將選擇的克隆皮下注射(107細(xì)胞/200到棵鼠側(cè)腹中，12天后獲得可用卡尺測(cè)量的腫瘤。從第12天起，對(duì)動(dòng)物口服或靜脈內(nèi)每日給藥6天，給予溶劑和20-40mpk化合物(4-10只動(dòng)物每組)。通過(guò)內(nèi)部發(fā)展自動(dòng)全身成像系統(tǒng)(裝備有GFP過(guò)濾器并與CCD攝像機(jī)型JAI⑧CV-M卯耦合的熒光立體顯微鏡型OlympusSZX12,通過(guò)基于NationalInstruments的IMAQ視覺(jué)軟件軟件包控制)的熒光評(píng)價(jià)肺瘤。測(cè)試化合物2并與對(duì)照組相比，其表現(xiàn)出增加的熒光。實(shí)施例C.7:P450抑制能力所有試l全化合物均溶于DMSO(5mM)中，再于乙腈中稀釋至5xl(T4M。使用分析緩沖液(0.1MNaK磷酸鹽緩沖液pH7.4)進(jìn)一步稀釋?zhuān)罱K溶劑濃度從未超過(guò)2%。CYP3A4蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含15pmolP450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15。/。KCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氫酶、1.3mMNADP與3.3mMMgCl2.6H20的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。于37。C下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加150]uM含熒光探針底物BFC的分析緩沖液開(kāi)始酶反應(yīng)。于室溫下培養(yǎng)30分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。在激發(fā)波長(zhǎng)405nm及發(fā)射波長(zhǎng)535nm下測(cè)定熒光。其中包含酮基康唑(ketoconazole)(IC5。值=3《1(T8M)作為此實(shí)'瞼的參考化合物。CYP2D6蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含6pmolP450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15y。KCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含0.41mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氫酶、0.0082mMNADP與0.41mMMgCl2'6H2〇的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。在37。C下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加3|LiM含熒光探針底物AMMC的分析緩沖液開(kāi)始酶反應(yīng)。于室溫下培養(yǎng)45分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。在激發(fā)波長(zhǎng)405nm及發(fā)射波長(zhǎng)460nm下測(cè)定熒光。其中包含喹尼定(quinidine)(IC5C^l<5xlO-8M)作為此實(shí)馬全的參考化合物。CYP2C9蛋白質(zhì)的分析法包括每孔中含15pmolP450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15。/oKCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氬酶、1.3mMNADP與3.3mMMgCl2.6H20的分析緩沖液)及化合物，總分析體積為100微升。在37t:下預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，添加200iLiM含熒光探針底物MFC的分析緩沖液開(kāi)始酶反應(yīng)。在室溫下培養(yǎng)30分鐘后，添加2倍體積乙腈中止反應(yīng)。在激發(fā)波長(zhǎng)405nm及發(fā)射波長(zhǎng)535nm下測(cè)定熒光。其中包含速吩唑(sulfaphenazole)(IC5(^i=6.8xlO-7M)作為此實(shí)驗(yàn)的參考化合物。出于初次篩選的目的，化合物在lxlO-SM的單一固定濃度下測(cè)試。對(duì)于活性化合物，重復(fù)實(shí)驗(yàn)以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線(xiàn)。對(duì)于每次實(shí)驗(yàn)，均平行進(jìn)行對(duì)照組(不含藥物)與空白培養(yǎng)組(不含酶或藥物)。所有化合物均分析四次。所有對(duì)照組與樣品組數(shù)值均扣除空白組數(shù)值。對(duì)于各樣品，樣品的P450活性平均值(以相對(duì)熒光單位表示)以相對(duì)于對(duì)照組中P450活性平均值的百分比表示。抑制作用百分比以100%減去樣品中P450活性平均值表示。若適當(dāng)時(shí)，計(jì)算IC5o值(使P450活性下降至對(duì)照組的50%時(shí)所需藥物濃度)。表F-2:列舉了根據(jù)實(shí)施例C.l、C.2、C.3.a.和C.3.b試驗(yàn)的化合物的結(jié)果。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>D.組合物實(shí)施例薄膜衣片劑.片.刑.核.的..制.備.將100g式(I)化合物、570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，其后用5g十二烷基石危酸鈉和10g聚乙烯-p比咯烷酮在約200ml水中的溶液濕潤(rùn)。將該濕4分末混合物過(guò)篩，干燥并再次過(guò)篩。然后，加入100g微晶纖維素和15g氫化植物油。將整個(gè)充分混合并壓制成片劑，得到10.000片，每片包含10mg式(I)化合物。向10g曱基纖維素在75ml變性乙醇中的溶液中加入5g乙基纖維素在150ml二氯甲烷中的溶液。然后，加入75ml二氯甲烷和2.5ml1,2,3-丙三醇。將10g聚乙二醇熔融并溶于75ml二氯甲烷中。將后者溶液加入到前者中，然后加入2.5g十八烷酸^t美、5g聚乙烯-p比咯烷酮和30ml濃縮色素懸浮液，接著將整個(gè)均化。該片劑核用由此獲得的混合物在包衣裝置中包衣。權(quán)利要求1.式(I)的化合物其N(xiāo)-氧化物形式、藥學(xué)上可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中n是0或1，以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；m是0、1或2，以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；p是0或1，以及當(dāng)n是0時(shí)，那么是指直接鍵；每個(gè)X獨(dú)立地是N或CH；每個(gè)Y獨(dú)立地是O、NH、N-C1-6烷基、CH或CH2，以及當(dāng)Y是CH時(shí)，那么所述取代基與環(huán)結(jié)構(gòu)的Y原子相連；R1是羥基或式(a-1)的基團(tuán)其中R9是羥基或-NH2；R10是氫、噻吩基、呋喃基或苯基，并且每個(gè)噻吩基、呋喃基或苯基可以任選被鹵素、氨基、硝基、氰基、羥基、苯基、C1-6烷基、(二C1-6烷基)氨基、C1-6烷氧基、苯基C1-6烷氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、羥基羰基、C1-6烷基羰基、多鹵代C1-6烷氧基、多鹵代C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、羥基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基、氨基磺?；?、氨基磺酰基C1-6烷基、異噁唑基、氨基羰基、苯基C2-6烯基、苯基C3-6炔基或吡啶基C3-6炔基取代；R6、R7和R8每個(gè)獨(dú)立地是氫、-NH2、硝基、呋喃基、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、噻吩基、苯基、C1-6烷基羰基氨基、氨基羰基C1-6烷基或-C≡C-CH2-R11；其中R11是氫、C1-6烷基、羥基、氨基或C1-6烷氧基；R2是C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、C1-6烷基氨基羰基或C1-6烷氧基羰基；R3是氫、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、羥基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基或C1-6烷基氨基羰基；或R2和R3可以與亞甲基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連(即形成環(huán)狀的環(huán)體系)；R4是氫、C1-6烷基、-C(＝O)-CHR12R13或-S(＝O)2-N(CH3)2；其中每個(gè)R12和R13獨(dú)立地是氫、氨基、C1-6烷基或氨基C1-6烷基；和R5是氫、羥基、氨基、鹵素、C1-6烷基、多鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、羥基羰基、C1-6烷基羰基氨基、C1-6烷氧基或單-或二(C1-6烷基)氨基。2.權(quán)利要求1的化合物，其中n是l;p是0;每個(gè)Y是CH;R"是氫；R6、117和118每個(gè)獨(dú)立地是氫，RS是d—6烷基以及I^是氫或者I^和RS可以與亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連；W是C"烷基；以及RS是氫。3.權(quán)利要求1和2的化合物，其中n是l;m是l或2;p是0;每個(gè)X是N;每個(gè)Y是CH;112和113與亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基橋連；W是Cw烷基；以及W是氫。4.權(quán)利要求l、2和3的化合物，其中所述化合物是化合物No.2和化合物No.3。<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>5.藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和作為活性成分的治療有效量的權(quán)利要求1-4所述的化合物。6.制備權(quán)利要求5所述的藥物組合物的方法，其中將所述的藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利要求1-4所述的化合物密切混合。7.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的化合物，作為藥品。8.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的化合物制備用于治療增殖性疾病的藥物的用途。9.抗癌劑和權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)所述的HDAC抑制劑的組合。10.制備權(quán)利要求1所述的化合物的方法，其特征在于a)使式(II)中間體與合適的酸反應(yīng)，得到式(I)的異羥肟酸，其中Ri是羥基，在此稱(chēng)為式(I-a)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I-a)b)使式(III)的中間體，其中M代表氫或鈉或鋰或堿金屬陽(yáng)離子，與式(IV)的中間體在合適的試劑存在下和在合適的溶劑中反應(yīng)，生成式(I)的化合物，其中W是式(a-1)的基團(tuán)以及RS是-NH2，在此稱(chēng)為式(I-b)的化合物，R6IO^,II/=N/\(CH2>nR4廠l、-N\_7R5(I-b)c)使式(V)的中間體與合適的酸在合適的溶劑中反應(yīng)，生成式(I-b)的化合物，或d)使式(VI)的中間體，其中TBDMS是指叔丁基(二曱基)硅烷基,與氟化四丁基銨在合適的溶劑中反應(yīng)，生成式(I)的化合物，其中R]是式(a-1)的基團(tuán)以及W是羥基，在此稱(chēng)為式(I-c)的化合物。11.式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基、羥基羰基或四氫p比喃氧基氨基羰基以及n、m、p、X、Y、Z、R2、R3、114和115如式(I)所定義，及其N(xiāo)-氧化物形式、藥學(xué)上可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>12.制備權(quán)利要求11所述的化合物的方法，其特征在于a)使式(III-a)的中間體與式(VII)的中間體反應(yīng)，生成式(A)的化合物，其中Q是四氫吡喃氧基氨基羰基，由式(II)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>b)使式(X)的中間體與合適的酸性溶液反應(yīng)，生成式(A)的化合物，其中Q是羥基羰基，在此稱(chēng)為式(III)的化合物，c)使式(XI)的中間體與式(XII)的中間體反應(yīng)，形成式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基以及R^是氫，在此稱(chēng)為式(X-a)的化合物，或d)使式(XIII)的中間體與式(XIV)的中間體反應(yīng)，形成式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基以及I^和RS是橋連的，所述的虛線(xiàn)代表亞曱基、亞乙基或亞丙基橋連基以及n是1，在此稱(chēng)為式(X-b)的中間體<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>全文摘要本發(fā)明包含新的式(I)的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有所定義的含義，具有組蛋白脫乙酰酶抑制酶活性；它們的制備方法、含有它們的組合物以及它們用作藥品的用途。文檔編號(hào)A61K31/506GK101370803SQ200780002579公開(kāi)日2009年2月18日申請(qǐng)日期2007年1月16日優(yōu)先權(quán)日2006年1月19日發(fā)明者I·N·C·皮拉特,P·R·安基鮑德申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司