專利名稱：：常春藤皂苷元及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種從維藥瘤果黑種草籽中提取常春藤皂苷元及其制備方法和作為治療糖尿病的蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑的藥物用途。通過體外實驗證實的提取的常春藤皂苷元所具有的蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTP1B)抑制劑的效果以及形成的抗糖尿病藥物及保健品的用途。
背景技術：
：瘤果黑種草籽是毛莨科植物瘤果黑種草的干燥成熟種子，呈三棱狀卵形，長2.5-3mm,寬約1.5mm。表面黑色，粗糙，頂端較狹而尖，下端稍鈍，有不規(guī)則的突起。質(zhì)堅硬，斷面灰魄，有油性。氣微香，味辛?？梢源碳は?qū)風止痛、補腎健腦、利尿、發(fā)汗、健胃、抗蠕蟲、治療哮喘等，是維吾爾醫(yī)學中一種習慣用藥。近年來，通過大量的試驗研究出它的同屬植物過黑種草籽在降脂、降糖方面具有一定功效。多年以來治療糖尿病主要以控制空腹血糖作為治療目標，治療藥物很長時間只有磺酰脲類和雙胍類則通過增加外周組織對葡萄糖的利用而降血糖，兩者對降低n型糖尿病人的空腹血糖均有較好的療效。由于2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展可由遺傳和環(huán)境因素的相互作用等引起，其中，胰島素信號轉(zhuǎn)導障礙在發(fā)病機制中所起的重要作用。蛋白酪氨酸磷酸酶lB(ProteintyrosinephosphatasePTP1B)是胰島素信號轉(zhuǎn)導關鍵的負調(diào)控子。PTP1B是胞內(nèi)PTP的代表，是第一個被鑒定并純化出的哺乳動物蛋白酪氨酸磷酸酶，由435個氨基酸殘基組成，分子量約50KD，蛋白酪氨酸磷酸酶1B在人體各組織細胞中普遍存在并表達，并通過使激活的胰島素受體及胰島素，底物(IRs-1)等去磷酸化失活而發(fā)揮生理功能。它可協(xié)調(diào)酪氨酸殘基磷酸化和去磷酸化之間的平衡，阻止胰島素信號轉(zhuǎn)導。2型糖尿病和胰島素抵抗患者體內(nèi)特異的蛋白酪氨酸磷酸酶含量及活性均有所增加，當?shù)鞍桌野彼崃姿崦副惶蕹?，不僅胰島素敏感性增高，而且糖尿病癥狀也有所改善。蛋白酪氨酸磷酸酶1B缺乏的小鼠與其野生型對照小鼠相比對胰島素更敏感，血糖控制更好，缺乏的小鼠與其野生型對照小鼠相比對胰島素更敏感，血糖控制更好，而且對飲食誘導的肥胖有更好的抵抗作用。因此，抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的作用已成為一種新的治療胰島素抵抗(IR)、II型糖尿病和肥胖的方法。同時，蛋白酪氨酸磷酸酶1B的高表達可引起胰島素抵抗和瘦素抵抗，它的過度表達可促使載脂蛋白B100(ApoB100)分泌增加，使血漿極低密度脂蛋白(VLDL)生成增多，從而導致脂代謝紊亂、2型糖尿病及肥胖。研究表明，蛋白酪氨酸磷酸酶1B基因敲除鼠不僅胰島素敏感性增強，而且由于去除了蛋白酪氮酸磷酸酶1B對胰島素和瘦素信號轉(zhuǎn)導的抑制，使小鼠在高脂飲食條件下也不發(fā)生肥胖。為明確蛋白酪氨酸磷酸酶1B與脂代謝紊亂之間的關系，Klaman等對蛋白酪氨酸磷酸酶Nl基因敲除小鼠進行了研究，結(jié)果顯示長期果糖喂養(yǎng)普通小鼠會導致了血漿極低密度脂蛋白升高，而果糖喂養(yǎng)PTPN1基因敲除小鼠中未見極低密度脂蛋白升高，提示蛋白酪氨酸磷酸酶1B有促進極低密度脂蛋白分泌的作用。Taghibiglou等在對攜帶人載脂蛋白B(ApoB100)但缺乏褐色脂肪組織的載脂蛋白B(ApoB)/褐色脂肪組織(BAT)缺陷小鼠和經(jīng)果糖詞養(yǎng)的倉鼠模型的研究中發(fā)現(xiàn)，肝極低密度脂蛋白一載脂蛋白B增多將導致胰島素抵抗。有報道表明，蛋白酪氨酸磷酸酶1B可調(diào)控果糖誘導的糖尿病模型動物的脂蛋白譜，下調(diào)蛋白酪氨酸磷酸酶1B表達可抑制高碳水化合物誘導的胰島素抵抗及與之相關的脂代謝紊亂。因此蛋白酪氨酸磷酸酶1B不僅胰島素增敏劑的靶點之一，同時也可能是脂代謝紊亂的治療靶點之一。鑒于瘤果黑種草籽具有降脂、降糖作用，本發(fā)明利用大孔樹脂，從瘤果黑種草籽中提取了異常春藤皂苷元，利用理化常數(shù)、波譜數(shù)據(jù)及單晶x-衍射確定了它的結(jié)構(gòu)，并在體外證實了其蛋白酪氨酸磷酸酶蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的作用。到目前為止，關于瘤果黑種草的研究僅限于郝海峰、劉玉明等先后從瘤果黑種草籽中分離得到了14個化合物，以及田澤等考察常春藤皂苷的抗腫瘤活性，但對其降脂降糖活性的研究尚未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種化合物常春藤皂苷元及其制備方法和用途，該化合物是從維藥瘤果黑種草籽中采用脫脂、萃取及大孔樹脂吸附的方法提取的常春藤皂苷元，利用理化常數(shù)、波譜數(shù)據(jù)及單晶X-衍射確定了它的結(jié)構(gòu)，并在體外證實了其蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制劑的作用，以及它形成的抗糖尿病藥物及保健品的用途，同時可作為該化合物或其衍生物的藥物組合物的應用。本發(fā)明所述的一種從維藥瘤果黑種草籽中采用脫脂、萃取及大孔樹脂吸附的方法制備常春藤皂苷元，按下列步驟進行a、取干燥瘤果黑種草籽，用石油醚脫脂后，用95%、50%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；b、按常規(guī)方法處理大孔樹脂，將浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:3—1:30，用水，10—95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用硅膠拌樣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸除溶劑，干燥或直接液體上樣，硅膠柱層析或凝膠色譜，氯仿-甲醇梯度洗脫或甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得化合物常春藤皂苷元粗品；C、采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得化合物常春藤皂苷元，結(jié)構(gòu)式為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>含有常春藤皂苷元化合物或其衍生物的藥物組合物。一種從維藥瘤果黑種草籽中制備常春藤皂苷元的方法，按下列步驟進行a、取千燥瘤果黑種草籽，用石油醚脫脂后，用95%、50%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；b、按常規(guī)方法處理大孔樹脂，將浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:3—1:30，用水，10—95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用硅膠拌樣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸除溶劑，干燥或直接液體上樣，硅膠柱層析或凝膠色譜，氯仿-甲醇梯度洗脫或甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得化合物常春藤皂苷元粗品；c、采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得化合物常春藤皂苷元。一種從維藥瘤果黑種草籽中制備常春藤皂苷元作為治療糖尿病的蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑的藥物或保健品的用途。本發(fā)明所述的常春藤皂苷元及其制備方法和用途，經(jīng)過對大鼠口服黑種草籽固態(tài)油12周，未發(fā)現(xiàn)對肝臟中主要的酶產(chǎn)生影響，同時，血液中的膽固醇、甘油三酯、葡萄糖、淋巴細胞和血小板數(shù)目分別比對照降低了15.5，22，16.5，35和32%血細胞比容和血紅蛋白水平上升了6.4和17.4%。用胃內(nèi)管飼法給正常大鼠詞喂黑種草籽石油醚提取物4周，石油醚提取物由于減少了25%的食物，因而體重短期減輕。在體內(nèi)和體外試驗中均未觀察到植物的毒性且空腹血糖保持穩(wěn)定。治療4周后與對照組相比治療組的大鼠空腹胰島素和甘油三酯水平較低而HDL-膽固醇水平較高。通過Western雜交分析表明發(fā)現(xiàn)從各組動物中分離出來的肝細胞對胰島素水平反應上升了。在體內(nèi)石油醚部分通過增加激素受體的兩種細胞內(nèi)信號傳導途徑起到了胰島素增敏劑的作用。按400mg/kg給鏈尿菌素(STZ)誘導的糖尿病倉鼠胃內(nèi)管詞法飼喂黑種草籽油6周，在誘導糖尿病之后，用膠原酶消化并收集分離的肝細胞已確定肝糖的產(chǎn)生。通過在一段時間內(nèi)注射熒光素乳液，24小時后收集腹膜巨噬細胞以評價吞噬能力。治療組血糖從治療前的391+/-3.0mg/dl在第一、二、三、四周后減少到325+/-4.7，246+/_5.9:208+/-2.5和179+/-3.1mg/dl。在治療組倉鼠中從糖異生作用前體來的肝糖產(chǎn)物明顯減少提示著它的降糖效果部分源于減少了肝糖元的合成。另外，經(jīng)黑種草籽油治療后腹膜巨噬細胞的吞噬活性和吞噬指數(shù)明顯上升，外周血中淋巴細胞數(shù)量增加。這表明其免疫保護作用是通過直接刺激巨噬細胞的吞噬活力或通過刺激淋巴細胞的活力來完成的。給雄性易于中風的自發(fā)性高血脂大鼠和Wistar大鼠按800mg/kg劑量口服黑種草籽油4周，可明顯降低血清中總膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯的含量，同時，升高高密度脂蛋白含量。用STZ和煙酰胺誘導形成了糖尿病的大鼠為模型。給大鼠口服黑種草籽油4周，血糖明顯減少，經(jīng)酶連免疫和抗胰島素單抗證明，胰島素水平明顯上升。經(jīng)免疫組化染色可在胰島中觀察到大量的胰島素陽性反應區(qū)，結(jié)果顯示在2型糖尿病模型中，黑中草籽油有類似胰島素的功能。圖1為本發(fā)明免疫印跡方法分析過度表達蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B的CHO細胞中磷酸化AKT電i永圖；其中++++為蛋白酪氨酸磷酸酶IB;-+++為胰島素(16.7納摩爾)；--+-為陽性對照(IO微摩爾)；——+中為常春藤皂苷(50微克/毫升)；p-AKT為磷酸化AKT;GADPH為3-磷酸甘油醛脫氫酶。具體實施方式實施例1取干燥瘤果黑種草籽10KG,用石油醚脫脂后，用95%、50%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；按常規(guī)方法處理大孔樹脂AB-8，浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:3，用水，10—95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用硅膠拌樣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸去溶劑，干燥，硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，合并流出液，硅膠薄層板層析檢測，相同流份合并，得該化合物粗品；采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得該化合物常春藤皂苷元。實施例2取干燥瘤果黑種草籽IOKG，用石油醚脫脂后，用95%、50%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；按常規(guī)方法處理大孔樹脂AB-8，浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:30，用水、10—95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用甲醇、水溶解，液體上樣，甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得該化合物粗品；采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得該化合物常春藤皂苷元。實施例3取干燥瘤果黑種草籽IOKG，用石油醚脫脂后，用95%、50%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；按常規(guī)方法處理大孔樹脂AB-8，浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:15，用水，10—95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用甲醇、水溶解，液體上樣，甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得該化合物粗品；采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得該化合物常春藤皂苷元。實施例4常春藤皂苷元作為蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑的藥物或保健品的用途的生物活性篩選篩選方法用對-硝基苯基磷酸二鈉(pNPP)作為底物，以在陽性藥物釩酸鈉為對照，利用酶標儀進行蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制劑的高通量篩選，根據(jù)蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制劑水解對-硝基苯基磷酸二鈉(pNPP)的磷酸基團而產(chǎn)生顏色反應來測定蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制劑的活性。酶反應體系組成如下緩沖液(50mMHEPES，pH7.3，100mM氯化鈉，0.1%牛血清白蛋白和1mM二硫代蘇糖醇)，蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制劑融合蛋白，對-硝基苯基磷酸二鈉(pNPP)，蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)特異抑制劑釩酸鈉(100ug/mL)。反應體系混勻后在37'C放置30rnin，加入1M氫氧化鈉終止反應，置比色儀上測定405波長條件下的吸收值(A)，測定結(jié)果減去本底值后計算酶活性。篩選結(jié)果:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結(jié)論:從實驗結(jié)果表明，常春藤皂苷元具有蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的功效，其ICso為70uM。免疫印跡實驗1)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染倉鼠卵巢癌細胞(CHO)在傳代后在F12+10。/。胎牛血清(FBS)培養(yǎng)基中培養(yǎng)30h后，按照Lipofectamine2000TM使用說明書上的方法將攜帶全長-PTPlB基因的pJ3H質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體混合后轉(zhuǎn)染進CHO細胞中，6小時后，除去含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基換上F12+10%FBS培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)過夜；2)給第一步中處理好的細胞更換含有測試樣品的F12+10%FBS培養(yǎng)基，3小時后加入適量的胰島素刺激5min，收獲細胞。在冰浴中，用細胞刮刮下細胞，收集細胞裂解液；3)電泳結(jié)束后，取出凝膠，在Tris/甘氨酸緩沖液中漂洗數(shù)秒。取凝膠方法用刀片將兩玻璃板分開，將多余的凝膠劃去，上部以濃縮膠為準全部棄去，下部以分子量標準最小分子帶下一點全部劃去，取一10ml注射器注滿轉(zhuǎn)印緩沖液，插入玻璃板與凝膠之間注水，使水的壓力將兩者自然分開，邊推邊進，反復多次注水，直至凝膠從玻璃板上滑落下來。打開電轉(zhuǎn)印夾，每側(cè)墊上一^^用的用轉(zhuǎn)印液浸泡透的海面墊，再各放一塊轉(zhuǎn)印液浸透的濾紙，濾紙與海面墊大小相同或與PVDF膜，凝膠大小相同均可，將凝膠平放在陰極側(cè)濾紙上，最后將膜平放在凝膠上，去除氣泡，夾好電轉(zhuǎn)印夾。電泳槽加滿電轉(zhuǎn)印液，插入電轉(zhuǎn)印夾，將電泳槽放入冰箱內(nèi)(電轉(zhuǎn)印液之前要放入冰箱內(nèi)預冷)，連接好電極，接通電流，轉(zhuǎn)印夾的膜應對電泳槽的正極。利用電轉(zhuǎn)儀將SDS-PAGE上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上。條件400mAlh或280rnA，1.5-2h;4)封閉在進行抗體雜交之前，需要先對轉(zhuǎn)印膜進行封閉，以防止免疫試劑的非特異性吸附。①洗轉(zhuǎn)印膜室溫漂洗3次xl0min，以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。取漂洗的轉(zhuǎn)印膜，放入含5%脫脂奶粉的封閉液內(nèi)，搖床震動，室溫封閉2h，也可在4'C過夜。③用緩沖液，PH7.6室溫漂洗3次xl0min;5)抗體雜交抗體表面主要采用間接法。①封閉后的雜交膜放入雜交袋中，加入抗體稀釋液，封口，4。C孵育過夜或室溫(22-25°C)搖動孵育2h.②液洗膜3次xlOmin③加入二抗稀釋液，室溫lh，洗膜3xl0min);6)檢測采用增強化學發(fā)光(ECL)檢測是利用辣根過氧化物酶催化化學發(fā)光物質(zhì)，生成一種不穩(wěn)定的中間物質(zhì)，其衰變時在暗室內(nèi)形成明顯的肉眼可見的化學發(fā)光帶，利用X線膠片感光原理，將結(jié)果記錄下來:ECM顯色劑配制按lmlH20加顯色劑A、B各1滴，混勻。在暗室將雜交后印跡膜放入顯色盒中，加上混合好的顯色液，約卜5分鐘用，紙巾吸去印跡膜邊緣或者邊角部分多余的顯色液，將一透明的玻璃紙蓋住撫平，并確定干的表面與膠片接觸.將印跡膜在暗室中使膠片暴光1-5分鐘，沖洗膠片以確定所測抗原的正確暴光時間，暴光時間可短至幾秒也可以長到數(shù)小時.沖洗膠片步驟先在顯影液中沖洗至膠片上出現(xiàn)條帶或者膠片透明為止，在放入定影液中漂洗，十秒即可。結(jié)果表明可以增加中細胞磷酸化AKT&^S，這使得常春藤皂苷元有可能通過PI3K/AKT途徑刺激GLUT4轉(zhuǎn)運，從而達到降低血糖的目的。結(jié)構(gòu)鑒定常春藤皂苷元化合物為無色結(jié)晶，經(jīng)LiebermannBurchard反應呈陽性，磷鉬酸顯色為藍色，，提示為一個三萜類皂苷化合物。從其氫譜看，可明顯觀察到在S0,92,0.97,1.03，1.08,1.09，1.24ppm處存在6個角甲基信號。在S5.50ppm處有一個烯氫信號應為齊墩果酸或烏索酸類三萜皂苷中C12雙鍵質(zhì)子的信號。從其"C譜上看S122.70，144.93、烯碳特征信號，以及S180.69羧基信號提示該化合物具有12-烯-28-齊墩果酸骨架。因^醒R中只有六個角甲基單峰信號，說明另一個角甲基被CH20H取代，因此，判定該化合物為一個齊墩果烯型三蔽并有一個羧基。與文獻[KamiyaK，YoshiokaK，SaikiY，etal.TriterpenoidsanflavonoidsfromPaeonialactiflora[J].Phytochemistry，1997，44(1):141-144.和而Shao-hua，WUDa-gang，CHENYou-weiet.alChemicalconstituentsofPaeoniadelavayiChineseTraditionalandHerbalDrugs2005，36(5):648-65l]報道的hedaragenin的數(shù)據(jù)一致，故確定該化合物為常春藤皂苷元。'H(二甲基亞砜DMS0600HzSppm):0.92(3H,s)，0.97(3H,s)，1.03，(3H,s)，1.08(3H,s)1.09(3H,s),1.24(3H,S)5.50(lH,brs)，^C麗R(二甲基亞砜DMS0150HzSppm)數(shù)據(jù)歸屬如下:180.69(C-28)，144.93(C-13)，122.70(C—12)，73.52(C—3)，66.18(024)，48.73(C-5)，48.26(C-9)，46.75(C—19)，46.55(C-17)，42.99(C—4)，42.29(C-14)，42.11(C-18)，39.89(C-8)，38.89(C-l),37.33(C—10),33.32(C-21):31.44(C—7)，30.04(C-20)，28.44(C—15)，27.8(C-2)，26.26(027)，23.95(C-16)，23.85(C-30),23.79(C-11)，18.69(C-6),17.59(C-26):16.06(C-25)，13.22(C-23)。X-單晶衍射的結(jié)果也顯示該化合物的結(jié)構(gòu)為:權(quán)利要求1、一種從維藥瘤果黑種草籽中采用脫脂、萃取及大孔樹脂吸附的方法制備常春藤皂苷元，其特征在于按下列步驟進行a、取干燥瘤果黑種草籽，用石油醚脫脂后，用95％、50％乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；b、按常規(guī)方法處理大孔樹脂，將浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1∶3-1∶30，用水，10-95％的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95％的組分用硅膠拌樣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸除溶劑，干燥或直接液體上樣，硅膠柱層析或凝膠色譜，氯仿-甲醇梯度洗脫或甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得化合物常春藤皂苷元粗品；c、采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得化合物常春藤皂苷元，結(jié)構(gòu)式為2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物常春藤皂苷元，其特征在于該化合物或其衍生物的藥物組合物。3、一種從維藥瘤果黑種草籽中制備常春藤皂苷元的方法，其特征在于按下列步驟進行a、取干燥瘤果黑種草籽，用石油醚脫脂后，用30_90%乙醇依次提取，減壓濃縮至無醇味的浸膏，用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收正丁醇萃取液，減壓濃縮至浸膏狀；b、按常規(guī)方法處理大孔樹脂，將浸膏用水溶解后，液體上樣，上樣量與樹脂用量比例為1:3—1:30，用水，1(1一95%的乙醇依次洗脫大孔樹脂柱，減壓濃縮，利用薄層色譜合并成分近似的組分，70-95%的組分用硅膠拌樣，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸除溶劑，干燥或直接液體上樣，硅膠柱層析或凝膠色譜，氯仿-甲醇梯度洗脫或甲醇水洗脫，硅膠薄層板層析檢測，合并相同流份，得化合物常春藤皂苷元粗品；c、采用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得化合物常春藤皂苷元。4、一種從維藥瘤果黑種草籽中提取的化合物常春藤皂苷元作為治療糖尿病的蛋白酪氨酸磷酸酶抑制劑的藥物或保健品的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種常春藤皂苷元及其制備方法和用途，該化合物是從維藥瘤果黑種草籽中采用脫脂、萃取及大孔樹脂吸附的方法提取的常春藤皂苷元，利用理化常數(shù)、波譜數(shù)據(jù)及單晶X-衍射確定了它的結(jié)構(gòu)，并在體外證實了提取的常春藤皂苷元具有蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制劑的作用，以及形成的抗糖尿病藥物及保健品的用途，同時可作為該化合物或其衍生物的藥物組合物的應用。文檔編號A61P3/10GK101125880SQ20071014672公開日2008年2月20日申請日期2007年8月13日優(yōu)先權(quán)日2007年8月13日發(fā)明者信學雷,阿吉艾克拜爾·艾薩申請人:中國科學院新疆理化技術研究所