專利名稱：一種用于治療急性腎衰的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類藥物組合物、其制備方法及其用途，特別是涉及在制藥領(lǐng)域中的用途。

背景技術(shù)：
急性腎衰是指一類由多種原因引起腎功能損害，出現(xiàn)血中尿素氮、肌酐升高及水電解質(zhì)紊亂的急性尿毒癥綜合征。其病因為各種原因引起的急性血容量不足和周圍循環(huán)衰竭。主要為(1)有毒物質(zhì)、身體對藥物的免疫反應(yīng)，以及諸如急性腎小球腎炎等感染或疾病對腎臟的嚴重損害，使其發(fā)生衰竭；(2)嚴重灼燒傷時的血壓突然降低、嚴重出血(例如受到壓榨性外傷)、或是心臟病大發(fā)作等導(dǎo)致供血失常，嚴重損害腎臟；(3)泌尿道某處發(fā)生阻塞，使尿流突然完全受阻。臨床表現(xiàn)為突然發(fā)生少尿，每日尿量少于400毫升，并伴有惡心嘔吐、嗜睡、水腫、血壓升高及血尿、蛋白尿等，常伴有心衰、休克等嚴重并發(fā)癥。
由于急性功能衰竭多為可逆的，治療應(yīng)主要針對于去除原發(fā)因素，糾正水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，積極治療心力衰竭、心律紊亂、腦病、應(yīng)激性潰瘍大出血等嚴重的并發(fā)癥、有條件者應(yīng)盡量采取透析療法。治療重點為維持體內(nèi)水、電解質(zhì)和酸堿平衡，控制氮質(zhì)血癥，治療原發(fā)病和防止各種并發(fā)癥。已施行透析治療的患者，致病情穩(wěn)定后才可停止透析?；謴?fù)期時一般無需特殊處理，定期檢查腎功能，避免使用對腎有損害的藥物。
雖然現(xiàn)在市場上治療急性腎衰竭的藥物很多，但是這些藥物的毒性一般都較大，致使部分患者無法使用；且使用不穩(wěn)定；治療效果也不太理想。
發(fā)明人在中國專利申請200310110934.2中公開了一類可以治療慢性腎衰的藥物組合物及其制備方法，其中該藥物組合物中各原料藥的重量配比為 川芎15-25重量份，黃芪40-50重量份，大黃12-18重量份，當(dāng)歸20-25重量份，淫羊藿15-20重量份，生地15-25重量份，白芍10-15重量份，澤瀉15-20重量份，茯苓15-20重量份，三七6-8重量份。
優(yōu)選是 川芎15-20重量份，黃芪40-45重量份，大黃12-15重量份，當(dāng)歸20-22重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，白芍12-155重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份，三七6-75重量份。
最優(yōu)選是 川芎20重量份，黃芪40重量份，大黃15重量份，當(dāng)歸20重量份，淫羊藿15重量份，生地20重量份，白芍15重量份，澤瀉15重量份，茯苓15重量份，三七6重量份。
該專利文獻公開的上述配方能夠顯著改善慢性腎衰患者的抗氧化能力、促進增生的系膜細胞凋亡、抑制殘腎組織纖維化、降低血漿肌酐和尿素氮濃度、升高血色素、降低死亡率、延長患者壽命。
但是，急性腎衰無論在致病機理上，還是在癥狀上均與慢性腎衰截然不同，是另外一種疾病。
慢性腎衰是發(fā)生在各種慢性腎臟疾病基礎(chǔ)上緩慢出現(xiàn)的腎功能減退，直至衰竭的一種臨床綜合征，主要的表現(xiàn)就是腎功能減退，代謝產(chǎn)物潴留，導(dǎo)致腎臟不能維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。引起慢性腎衰的病因比較復(fù)雜，在原發(fā)性腎臟病中，最常見的是慢性腎小球腎炎占慢性腎衰總發(fā)病率的半數(shù)以上。臨床表現(xiàn)為無力、疲乏、體力下降、腹痛、腹瀉、嘔吐。治療方案主要針對慢性腎小球腎炎。由此可見，急性腎衰和慢性腎衰在致病機理、臨床癥狀、治療方法等方面完全不同，是兩種不同的疾病。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員知道，常規(guī)治療急性腎衰的藥物如三氧化二砷注射液等，并不能治療慢性腎衰；而治療慢性腎衰的藥物參芪地黃湯等，并不能治療急性腎衰。
經(jīng)過本申請人的多項實驗表明，發(fā)現(xiàn)一類治療急性腎衰竭的新的藥物組合物，這類藥物組合物中部分配方是中國專利申請200310110934.2中公開配比的進一步改進。同時，發(fā)明人通過大量的實驗發(fā)現(xiàn)中國專利申請200310110934.2中公開的配比除了可以治療急性腎衰竭，還對治療急性腎衰和/或增強免疫力、抗疲勞方面具有顯著的作用。


發(fā)明內(nèi)容
一方面，本發(fā)明的目的在于提供一種治療急性腎衰的藥物組合物，其中各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份。
另一方面，本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明的藥物組合物在制備增強免疫力的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明的藥物組合物在制備抗疲勞的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明的藥物組合物在制備治療急性腎衰和增強免疫力的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明的藥物組合物在制備治療急性腎衰和抗疲勞的藥物中的應(yīng)用。
另一方面，本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明的藥物組合物在制備治療急性腎衰、增強免疫力和抗疲勞的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的藥物組合物根據(jù)實際需要，可進一步加工制成口服液、片劑、膠囊劑、顆粒劑以及注射劑等任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。上述劑型均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。如丸劑制備根據(jù)本發(fā)明的配方取各原料藥粉碎成細粉，過120-140目篩，加水混勻，制丸，干燥，即得。
片劑的制備工藝為根據(jù)本發(fā)明的配方取各原料藥加水煎煮三次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮成稠膏；將處方量黨參、沉香粉碎成細粉，與上述稠膏均勻混合，干燥，制成顆粒，壓制成1000片，包糖衣，即得。
本發(fā)明的技術(shù)方案是將中國專利申請200310110934.2中公開得治療慢性腎衰的藥物用來制備治療急性腎衰中的應(yīng)用。
即本發(fā)明得技術(shù)方案是下述藥物組合物在制備治療急性腎衰的藥物中的應(yīng)用川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份。
本發(fā)明的另一個技術(shù)方案是下述藥物組合物在制備治療急性腎衰的藥物中的應(yīng)用川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，大黃12-150重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，白芍12-155重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份，三七6-75重量份。
本發(fā)明的再一個技術(shù)方案是下述藥物組合物在制備治療急性腎衰的藥物中的應(yīng)用川芎15-25重量份，黃芪40-50重量份，大黃12-18重量份，當(dāng)歸20-25重量份，淫羊藿15-20重量份，生地15-25重量份，白芍10-15重量份，澤瀉15-20重量份，茯苓15-20重量份，三七6-8重量份。
本發(fā)明的又一個技術(shù)方案是下述藥物組合物在制備治療急性腎衰的藥物中的應(yīng)用川芎20重量份、黃芪40重量份、大黃15重量份、當(dāng)歸20重量份、淫羊藿15重量份、生地20重量份、白芍15重量份、澤瀉15重量份、茯苓15重量份、三七6重量份。
其中，本發(fā)明的藥物組合物應(yīng)用是在制備治療急性腎衰和增強免疫力的藥物中的應(yīng)用；或者是在制備治療急性腎衰和抗疲勞的藥物中的應(yīng)用；也可以是在制備治療急性腎衰、增強免疫力和抗疲勞的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的應(yīng)用中使用的藥物組合物的劑型是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。例如將本發(fā)明的藥物組合物與一種或多種常規(guī)的藥物載體混合，然后制備成所需的劑型。上述劑型均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。如丸劑制備根據(jù)本發(fā)明的配方取各原料藥粉碎成細粉，過120-140目篩，加水混勻，制丸，干燥，即得。
片劑的制備工藝為根據(jù)本發(fā)明的配方取各原料藥加水煎煮三次，第一次2小時，第二、三次各1小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮成稠膏；干燥，制成顆粒，壓制成1000片，包糖衣，即得。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用于需要的患者。用于口服時，可以將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等；或制成液體制劑，如水或油懸浮劑，或其他液體制劑，如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液、凍干粉針劑等。
發(fā)明人首先通過觀察本發(fā)明的藥物組合物對甘油造成的急性腎衰少尿模型的影響，驗證本發(fā)明的藥物組合物的藥效。
其中本發(fā)明的藥物組合物-國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心提供，配制方法是取權(quán)利要求4的藥物組合物，用蒸餾水配制成濃度0.05、0.1、0.2提取物/ml。陽性藥是尿毒清顆粒-廣州康臣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。批號20040320，配制方法用蒸餾水配成0.52g顆粒/ml；造模用藥是甘油，進口分裝品，北京市燕京制藥廠分裝，批號000825；陰性對照是蒸餾水。試驗中使用的試劑尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、鈉(Na)、鉀(Ka)、氯(Cl)、鈣(Ca)、磷(P)試劑盒，為北京市康泰化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品； 儀器是Humanlyzer 2000型半自動生化分析儀；大鼠代謝籠；70只雄性SD大鼠由-軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號SCXK-(軍)2002-001。
本發(fā)明的藥物組合物設(shè)四個劑量組2.0、1.0、0.5、0.25g提取物/kg(各相當(dāng)于11.0、5.5、2.8、1.4g生藥/kg)，各相當(dāng)于按體表面積折算的臨床擬用劑量的4、2、1、1/2倍。陽性藥尿毒清顆粒劑量為5.2g/kg，相當(dāng)于按體表面積折算的人臨床日用劑量的2倍。
將大鼠隨機分成7組，分別為①正常對照組，②模型組，③陽性藥尿毒清顆粒5.2g/kg，④本發(fā)明的藥物組合物低劑量組2.8g生藥/kg，⑤本發(fā)明的藥物組合物中劑量組5.5g生藥/kg，⑥本發(fā)明的藥物組合物高劑量組11.0g生藥/kg。本發(fā)明的藥物組合物各劑量組和陽性藥組大鼠均為灌胃給藥，每日1次，給藥體積10ml/kg，連續(xù)給藥5天。模型組和正常對照組灌胃給予同體積蒸餾水。于第4天給藥后，將各組大鼠禁水16h，次日再給藥1次，并于給藥后即刻，各組大鼠雙側(cè)大腿肌肉注射50％甘油，每側(cè)5ml/kg(正常對照組除外)。然后，將大鼠單只放入代謝籠，收集并記錄每只大鼠24h尿量、飲水量，并測定尿糖、尿蛋白濃度。尿液收集結(jié)束后，放血處死大鼠，分離血清，測定血清肌酐、尿素氮、以及鉀、鈉、氯濃度。試驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示。本發(fā)明的藥物組合物各劑量組及陽性藥組分別與模型組進行比較，用t-檢驗進行統(tǒng)計分析。實驗結(jié)果見表1 表1清毒安腎對甘油引起的急性腎功衰大鼠的尿量和飲水量的影響(n＝10，
注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 從表1可以看出，模型組大鼠的尿量和飲水量較正常對照組明顯減少(P＜0.01)，本發(fā)明的藥物組合物11.0g生藥/kg劑量組動物的尿量較模型組增高(與模型組比較P＜0.05)，飲水量較模型組有增高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)顯著性意義。這些結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物可在一定程度上改善甘油引起的急性腎衰大鼠的少尿癥狀。尿毒清顆粒對急性腎衰大鼠的尿量有增加趨勢。
其次，發(fā)明人觀察了本發(fā)明的藥物組合物對急性腎衰大鼠血BUN和Cr的影響，驗證本發(fā)明的藥物組合物的藥效。
表2清毒安腎對甘油引起的急性腎功衰大鼠的腎功能的影響(n＝10，

) 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 結(jié)果顯示，模型組大鼠的血清Cr、BUN水平顯著增高(與正常對照組比較P＜0.05或P＜0.01)。本發(fā)明的藥物組合物11.0g生藥/kg劑量組的血Cr水平較模型組降低(P＜0.05)，但其BUN水平與模型組比較無顯著差異。本發(fā)明的藥物組合物5.5g生藥/kg和2.8g生藥/kg劑量對BUN、Cr含量無明顯影響。陽性藥尿毒清組的血Cr較模型組有降低趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。這些結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物對甘油肌肉注射引起急性腎衰具有一定的改善作用，能使血Cr濃度降低。
再次，發(fā)明人觀察了本發(fā)明的藥物組合物對急性腎衰大鼠血液中鈉、鉀、氯水平的影響，驗證本發(fā)明的藥物組合物的藥效。結(jié)果見表3 表3清毒安腎對甘油引起的急性腎功衰大鼠血液電解質(zhì)的影響(n＝10，

) 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 急性腎衰模型組的血Na水平較對照組顯著降低(P＜0.05)，血Ka和血Cl水平與對照組比較未見顯著差異。本發(fā)明的藥物組合物5.5g生藥/kg和2.8g生藥/kg劑量組能顯著抑制急性腎衰大鼠的血Na降低，對血鈉異常有一定的調(diào)節(jié)作用。但劑量更高時(11.0g生藥/kg)對血Na指標無明顯改善作用。
最后，發(fā)明人觀察本發(fā)明的藥物組合物對急性腎衰大鼠尿糖和尿蛋白的影響，驗證本發(fā)明的藥物組合物的藥效。結(jié)果見表4 表4清毒安腎對甘油引起的急性腎功衰大鼠尿糖和尿蛋白的影響(n＝10，

) 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 綜上所述，本發(fā)明的藥物組合物11.0g生藥/kg能增高甘油所致急性腎衰大鼠的尿量，改善少尿癥狀，能顯著降低血Cr水平，改善腎功能；5.5、2.8g生藥/kg劑量下可糾正急性腎衰大鼠的電解質(zhì)紊亂，使血鈉異常得到明顯改善；11.0、5.5和2.8g生藥/kg劑量下對尿糖水平具有一定的降低趨勢。因此，本發(fā)明的藥物組合物對甘油所致的急性腎衰竭少尿模型具有一定的改善作用。
發(fā)明人還通過觀察本發(fā)明的藥物組合物對綿羊紅細胞致敏引起的小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響。
其中，本發(fā)明的藥物組合物-國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心提供，配制方法取權(quán)利要求8的用蒸餾水配制成濃度37.5、75、150mg提取物/ml(分別相當(dāng)于0.2、0.4、0.8g生藥/ml)。陽性藥尿毒清顆粒-廣州康臣藥業(yè)有限公司提供。批號20040320。配制方法用蒸餾水配成0.52g顆粒/ml。西藥陽性對照藥醋酸潑尼松，批號031101，上海通用藥業(yè)股份有限公司。陰性對照品蒸餾水。實驗動物ICR小鼠由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。
本發(fā)明的藥物組合物設(shè)3個劑量組，分別為16、8、4g生藥/kg，各相當(dāng)于按體表面積折算的臨床擬用劑量的4、2、1倍；西藥陽性對照藥醋酸潑尼松劑量為10mg/kg，中藥陽性對照藥尿毒清顆粒劑量為7.8g顆粒/kg，為臨床用量的2倍。
將小鼠按體重隨機分成7組，每組10只，分別為①正常對照組，②模型組，③尿毒清顆粒7.8g/kg，④醋酸潑尼松10mg/kg，⑤本發(fā)明的藥物組合物低劑量組4g生藥/kg，⑥本發(fā)明的藥物組合物中劑量組8g生藥/kg，⑦本發(fā)明的藥物組合物高劑量組16g生藥/kg。
本發(fā)明的藥物組合物各劑量組均為灌胃給藥，與臨床擬用途徑一致，陽性對照藥醋酸潑尼松為肌肉注射給藥。其中，本發(fā)明的藥物組合物各劑量組和尿毒清顆粒組每日灌胃給藥1次，給藥體積20ml/kg體重，連續(xù)給藥10天。模型組和正常對照組灌胃給予同體積的蒸餾水，西藥陽性對照藥醋酸潑尼松組5mg/kg，隔日肌肉注射給藥1次，共5次。在給藥的第6天，除正常對照組外，各組小鼠均背部皮下注射2×109/mlSRBC100ul致敏。致敏后96h，左后腳掌皮內(nèi)再次注射2×1010/mlSRBC20ul攻擊致敏小鼠，于攻擊后24h，處死小鼠，齊踝關(guān)節(jié)剪下雙側(cè)后腳(以右側(cè)后腳作為自身對照)稱重，以足趾腫脹度(雙側(cè)后足趾腫脹差值)作為遲發(fā)超敏的反應(yīng)強度。各組試驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示。各試驗組及陽性對照藥組分別與模型組進行比較，用t-檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見表5 表5清毒安腎對遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響(n＝10，

) 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 結(jié)果顯示，模型組小鼠呈現(xiàn)強烈的遲發(fā)性超敏反應(yīng)，抗原攻擊側(cè)足趾顯著腫脹，足趾腫脹度顯著高于正常對照組(P＜0.01)。本發(fā)明的藥物組合物4、8、16g生藥/kg劑量組小鼠的足腫脹程度較模型組顯著降低(P＜0.05或P＜0.01)。中藥陽性藥尿毒清顆粒和西藥陽性藥潑泥松均對遲發(fā)性超敏反應(yīng)有顯著的抑制作用。結(jié)果表明本發(fā)明的藥物組合物對小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)具有顯著的抑制作用。所以，本發(fā)明的藥物組合物可顯著抑制小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)，對異常細胞免疫具有抑制作用。
發(fā)明人還觀察了本發(fā)明的藥物組合物對免疫低下小鼠淋巴細胞增殖的影響，以評價其對細胞免疫的調(diào)節(jié)作用。
其中，本發(fā)明的藥物組合物-國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心提供，批號040615。配制方法取權(quán)利要求8的用蒸餾水配制成濃度37.5、75、150mg提取物/ml(分別相當(dāng)于0.2、0.4、0.8g生藥/ml)。陽性對照藥為腎寶合劑-江西匯仁藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號0501012。陰性對照品為蒸餾水。造模型用藥是醋酸潑尼松-上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號031101。ICR小鼠由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。
將本發(fā)明的藥物組合物設(shè)16、8、4g生藥/kg劑量組。各相當(dāng)于按體表面積折算的臨床擬用劑量的4、2、1倍；陽性對照藥腎寶合劑15.6ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量2倍。小鼠按體重隨機分成6組，每組10只，分別為①正常對照組，②模型組，③陽性對照藥腎寶合劑15.6ml/kg，④本發(fā)明的藥物組合物低劑量組4g生藥/kg，⑤本發(fā)明的藥物組合物中劑量組8g生藥/kg，⑥本發(fā)明的藥物組合物高劑量組16g生藥/kg。
本發(fā)明的藥物組合物和陽性對照藥腎寶合劑均為灌胃給藥，與臨床擬用途徑一致。每日給藥一次，體積為20ml/kg體重，連續(xù)10天，正常對照組和模型組灌胃給予同體積蒸餾水。于給藥的第4、6、8、10天，除正常對照組外，其余各組小鼠均肌肉注射醋酸潑泥松5mg/kg，各組大鼠雙側(cè)大腿肌肉注射30％甘油，每側(cè)3ml/kg(正常對照組除外)。第11天，處死小鼠，取出每只小鼠的脾臟，按文獻方法單只制備脾臟淋巴細胞懸液，用含5％胎牛血清的RPMI 1640液將每鼠的脾細胞調(diào)制成5×106/ml。將制備好的脾細胞按0.1ml/孔加入到96孔培養(yǎng)板中，每只小鼠的脾細胞加3個復(fù)孔，加入含ConA的培養(yǎng)液100μl(終濃度為5μg/ml)，培養(yǎng)板放置于37℃5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，離心，棄上清，每孔加入1mg/ml的MTT 50μl，置37℃5％CO2培養(yǎng)箱中4h。然后，每孔加入DMSO 150μl，震蕩，使細胞裂解，用酶標儀于波長570nm(參考波長630nm)比色，分別測定OD值。
先分別計算每只小鼠三個復(fù)孔的OD平均值，然后再用每只小鼠得出的平均值計算每組的平均值。每組的數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示，本發(fā)明的藥物組合物各劑量組和腎寶合劑組分別與模型組比較，用t一檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見表6 表6清毒安腎對淋巴細胞增殖的影響(n＝10，

) 注與模型組比較*P＜0.05 表6顯示，給小鼠肌肉注射醋酸潑泥松5mg·kg-1·d-1×4次可使小鼠的脾細胞對分裂原ConA的分裂反應(yīng)降低，表明對小鼠的T淋巴細胞增殖功能抑制。給小鼠灌服本發(fā)明的藥物組合物16、4g/kg可明顯對抗醋酸潑泥松誘導(dǎo)的小鼠細胞免疫功能抑制，明顯增強ConA誘導(dǎo)的脾細胞分裂反應(yīng)(分別與醋酸潑泥松模型組比較P＜0.05和P＜0.01)。陽性對照藥腎寶合劑對ConA誘導(dǎo)的脾細胞分裂反應(yīng)有增強趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物可明顯增強ConA誘導(dǎo)的脾細胞分裂反應(yīng)，對細胞免疫具有增強作用。同時，試驗藥物可糾正急性腎衰大鼠的電解質(zhì)紊亂，使血鈉異常得到明顯改善，對急性腎衰竭有一定的治療作用. 發(fā)明人進一步觀察了本發(fā)明的藥物組合物對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌的影響，以了解本發(fā)明的藥物組合物對體液免疫功能的調(diào)節(jié)作用。
其中，本發(fā)明的藥物組合物由國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心提供，配制方法取權(quán)利要求8的用蒸餾水配制成濃度37.5、75、150mg提取物/ml(分別相當(dāng)于0.2、0.4、0.8g生藥/ml)。
中藥陽性對照藥腎寶合劑-江西匯仁藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號0501012。陰性對照品蒸餾水。造模型用藥環(huán)磷酰胺-上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)，批號010907 Balb/c小鼠-軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。
本發(fā)明的藥物組合物設(shè)4、8、16g生藥/kg劑量組，各相當(dāng)于按體表面積折算的臨床擬用劑量的4、2、1倍。陽性對照藥腎寶合劑15.6ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量的2倍。
小鼠按體重隨機分成6組，每組10只，分別為①正常對照組，②模型組，③腎寶合劑15.6ml/kg，④本發(fā)明的藥物組合物低劑量組4g生藥/kg，⑤本發(fā)明的藥物組合物中劑量組8g生藥/kg，⑥本發(fā)明的藥物組合物高劑量組16g生藥/kg。本發(fā)明的藥物組合物和腎寶合劑均為灌胃給藥，與臨床擬用途徑一致。每日灌胃給藥一次，體積為20ml/kg體重，連續(xù)10天。正常對照組和模型組灌胃給予同體積蒸餾水。給藥后的第7、8、9天，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺15mg/kg，每日各一次，連續(xù)3天。第1次給予環(huán)磷酰胺后，所有小鼠均靜脈注射羊紅細胞以致敏，致敏后96小時，放血處死小鼠，取出脾臟，制備脾臟淋巴細胞，向脾臟淋巴細胞懸液中加入羊紅細胞和豚鼠血清，37℃孵育1h后，離心，取上清用半自動生化分析儀于波長405nm測定OD值。
計算每組的平均值，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示。本發(fā)明的藥物組合物各劑量組和腎寶合劑組的數(shù)據(jù)分別與環(huán)磷酰胺模型組進行比較，用t-檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見表7 表7本發(fā)明的藥物組合物對小鼠脾臟淋巴細胞抗體產(chǎn)生的影響(n＝10，

) 注與正常對照比較**P＜0.01，***P＜0.001 結(jié)果表明，環(huán)磷酰胺15mg/kgip，1次/d×3d造模后，可使小鼠脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌水平明顯降低(與正常對照組比較P＜0.01)。本發(fā)明的藥物組合物8、16g生藥/kg給小鼠連續(xù)給藥10天，對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠的脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌具有明顯的促進作用(與模型組比較P＜0.01))。陽性對照藥腎寶合劑對小鼠脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌也有促進作用。本發(fā)明的藥物組合物可糾正急性腎衰大鼠的電解質(zhì)紊亂，使血鈉異常得到明顯改善，對急性腎衰竭有一定的治療作用.同時對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠的脾臟淋巴細胞溶血素抗體分泌具有明顯的促進作用，表明對免疫低下小鼠的體液免疫功能具有增強作用。
發(fā)明人在進一步實驗了了本發(fā)明的藥物組合物對小鼠低溫游泳時間的延長作用，以評價本發(fā)明的藥物組合物是否具有抗疲勞作用。
其中，本發(fā)明的藥物組合物，國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心，配制方法取權(quán)利要求8的用蒸餾水配制成濃度37.5、75、150mg提取物/ml(分別相當(dāng)于0.2、0.4、0.8g生藥/ml)。2.2中藥陽性對照藥腎寶合劑-江西匯仁藥業(yè)有限公司，批號0501012。陰性對照品蒸餾水。實驗動物及飼養(yǎng)ICR小鼠，雄性，50只，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供，動物合格證號SCXK-(軍)2002-001。本發(fā)明的藥物組合物設(shè)4、8、16g生藥/kg劑量組，各相當(dāng)于按體表面積折算的臨床擬用劑量的4、2、1倍。陽性對照藥腎寶合劑為15.6ml/kg，相當(dāng)于臨床劑量的2倍。
小鼠按體重隨機分成5組，每組10只，分別為①對照組，②腎寶合劑15.6ml/kg，③本發(fā)明的藥物組合物低劑量組4g生藥/kg，④本發(fā)明的藥物組合物中劑量組8g生藥/kg，⑤本發(fā)明的藥物組合物高劑量組16g生藥/kg。本發(fā)明的藥物組合物和腎寶合劑均為灌胃給藥，與臨床擬用途徑一致。每日給藥一次，體積為0.2ml/10g體重，連續(xù)10天。對照組灌胃給予同體積蒸餾水。末次給藥后1h，將小鼠單只放入預(yù)先調(diào)好水溫和水深度的桶內(nèi)(直徑30cm，水深20cm，水溫15℃)游泳，觀察小鼠自入水至沉入水下超過7秒的時間，將此時間記錄為游泳時間。
計算每組的游泳時間平均值，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差表示。本發(fā)明的藥物組合物各劑量組和腎寶合劑組的數(shù)據(jù)分別與對照組進行比較，用t-檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見表8 表8本發(fā)明的藥物組合物對小鼠游泳時間的影響(

) 注與對照組比較**P＜0.01，***P＜0.001 結(jié)果顯示，對照組小鼠在低溫環(huán)境中持續(xù)游泳時間20.14±9.90min，本發(fā)明的藥物組合物4g生藥/kg和16g生藥/kg給小鼠連續(xù)灌胃給藥10天，可顯著延長小鼠的低溫游泳時間(與對照組比較P＜0.05)，本發(fā)明的藥物組合物8g生藥/kg對游泳時間有一定延長趨勢，但由于標準差較大，統(tǒng)計學(xué)上沒有顯著性意義。結(jié)果表明，本發(fā)明的藥物組合物可明顯延長小鼠低溫游泳時間，具有明顯的抗疲勞作用。

具體實施例方式 下面結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
各實施例按照表9所列的配比稱取原料，各原料以重量千克計把上述除三七外的其他原料粉碎，用50％乙醇回流提取3次，每次1.5小時；乙醇用量滿足下述配比，重量以千克計，體積以升計 第一次生藥重量∶乙醇體積＝1∶2.5-3 第二、三次生藥重量∶乙醇體積＝1∶1.5-2 合并提取液，濃縮至稠膏狀，并加入1-1.5％重量比的淀粉混勻，烘干，收取干浸膏打粉；再按比例加入生三七粉及適量淀粉混勻，使淀粉加入后成藥的重量為原生藥重量的4-4.5％；用80％乙醇作為粘合劑，16目篩制粒；60℃以下低溫烘干；14目篩整粒，按每粒0.45克分裝成膠囊。整個過程均在滿足國家藥品生產(chǎn)標準條件下進行。
表9.各實施例配方組成(重量配比) 實施例8提取與分離制備成大容量注射液 將川芎150g、淫羊藿150g、當(dāng)歸200g、澤瀉150g加70wt.％乙醇于多功能提取罐中，浸泡過夜?；亓魈崛《?，每次1.5小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I，藥液I置于減壓濃縮鍋中，濃縮得濃縮液A(80℃，d＝1.10)，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將黃芪400g、生地200g、茯苓150g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1.5小時，過濾， 合并濾液，棄除藥渣，將合并液置三效濃縮器中，濃縮至比重1.12時停止?jié)饪s，放冷至室溫，緩慢加入計算量之95％乙醇，使乙醇濃度達50％，放置過夜，抽取上清液，棄去沉淀物。濃縮上清液得濃縮液B，另器放置，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將上述醇提的濃縮液A和水提的濃縮液B充分混合，取上述濃縮液加入注射用水440ml，加熱煮沸20分鐘，攪拌下加入活性炭0.8g，繼續(xù)煮沸10分鐘，取出冷卻，過濾除炭，加入注射用水至近400ml，用10wt.％的NaOH溶液調(diào)pH值為6.5，粗濾，精濾(采用三級微濾技術(shù))初級3um，二級0.45um，三級0.22um，灌封于20ml的安瓿中100℃，30分鐘滅菌，檢查合格后即得注射液。
實施例9 將川芎200g、淫羊藿150g、當(dāng)歸220g、大黃150g加70wt.％乙醇于多功能提取罐中，浸泡過夜?；亓魈崛《?，每次2.0小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I，藥液I置于減壓濃縮鍋中，濃縮得濃縮液A(80℃，d＝1.10)，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將黃芪450g、生地205g、茯苓185g、白芍155g、澤瀉185、三七5g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，棄除藥渣，將合并液置三效濃縮器中，濃縮至比重1.12時停止?jié)饪s，放冷至室溫，緩慢加入計算量之95％乙醇，使乙醇濃度達50％，放置過夜，抽取上清液，棄去沉淀物。濃縮上清液得濃縮液B(d＝1.12)，另器放置，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將上述醇提的濃縮液A和水提的濃縮液B充分混合，取上述濃縮液加入注射用水440ml，加熱煮沸20分鐘，攪拌下加入活性炭0.8g，繼續(xù)煮沸10分鐘，取出冷卻，過濾除炭，加入注射用水至近400ml，用10wt.％的NaOH溶液調(diào)pH值為6.5，粗濾，精濾(采用三級微濾技術(shù))初級3um，二級0.45um，三級0.22um，灌封于20ml的安瓿中100℃，30分鐘滅菌，檢查合格后即得注射液。
實施例1020ml的凍干粉針劑的制備 (1)取將川芎200g、淫羊藿185g、當(dāng)歸200g、大黃150g，以上各組分總重量7倍60wt.％乙醇，加熱回流提取2次，每次2.0小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I。
(2)將黃芪450g、生地15g、茯苓100g、白芍155g、澤瀉15、三七75g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，得到提取組合物。取提取組合物10g，加注射用水適量使溶解，加入氯化鈉2.25g，用注射用水調(diào)整體積至250ml，加入適量注射用炭，煮沸20分鐘，放冷，濾過，消毒，按1ml體積分灌于低硼玻璃安瓿瓶中，冷卻干燥，即得凍干粉針劑樣品。
實施例1120ml的凍干粉針劑的制備 (1)取將川芎100g、淫羊藿100g、當(dāng)歸200g、大黃50g，以上各組分總重量5倍60wt.％乙醇，加熱回流提取2次，每次2.5小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I。
(2)將黃芪200g、生地100g、茯苓185g、白芍50g、澤瀉100、三七75g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，得到提取組合物。取提取組合物10g，加注射用水適量使溶解，加入氯化鈉2.25g，用注射用水調(diào)整體積至250ml，加入適量注射用炭，煮沸20分鐘，放冷，濾過，消毒，按1ml體積分灌于低硼玻璃安瓿瓶中，冷卻干燥，即得凍干粉針劑樣品。
實施例12顆粒劑的制備方法 將川芎100g、淫羊藿100g、當(dāng)歸20g、大黃50g等藥材加70wt.％乙醇于多功能提取罐中，浸泡過夜。回流提取二次，每次1.5小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I，藥液I置于減壓濃縮鍋中，濃縮得濃縮液A，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將黃芪200g、生地150g、茯苓15g、白芍50g、澤瀉100、三七30g等藥材加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1.5小時，過濾，合并濾液，棄除藥渣，將合并液置三效濃縮器中，濃縮至比重1.0(70℃)時停止?jié)饪s，放冷至室溫，緩慢加入計算量之95％乙醇，使乙醇濃度達50％，放置過夜，抽取上清液，棄去沉淀物。濃縮上清液得濃縮液B，另器放置，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將淀粉烘干，過篩，甘露醇過篩，備用。稱取處方量的浸膏與甘露醇500g、淀粉150g混合均勻，于顆粒機上用12目不銹鋼篩網(wǎng)制粒，沸騰床干燥，12目篩整粒，測定顆粒的含量和水分，分裝，每袋裝7g，密封，于陰涼干燥處保存 實施例13片劑的制備 1.將川芎200g、淫羊藿150g、當(dāng)歸200g、大黃150g加60wt.％乙醇于多功能提取罐中，浸泡過夜?；亓魈崛《?，每次1.0小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I，藥液I置于減壓濃縮鍋中，濃縮得濃縮液A(d＝1.06)，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
將黃芪400g、生地200g、茯苓150g、白芍12g、澤瀉150、 三七60g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1小時，過濾，合并濾液，棄除藥渣，將合并液置三效濃縮器中，濃縮至比重1.08(70℃)時停止?jié)饪s，放冷至室溫，緩慢加入計算量之95％乙醇，使乙醇濃度達50％，放置過夜，抽取上清液，棄去沉淀物。濃縮上清液得濃縮液B(70℃，d＝1.08)，另器放置，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
取A、B均勻混合，加入填充劑200g，混合均勻；將混合物置制粒機中，加入30wt.％酒精60ml，制粒，干燥，即可。
2.取維生素50克，加入填充劑120g，混合均勻；將混合物置制粒機中，加入6wt.％粘合劑35ml，制粒，干燥，即可。
3.將兩組按處方比例混合均勻，測含量，33沖旋轉(zhuǎn)壓片機壓片，分裝，即可。
實施例14栓劑的制備 (1)將川芎200g、淫羊藿185g、當(dāng)歸220g、大黃150g加60％乙醇于多功能提取罐中，浸泡過夜?；亓魈崛《危看?.0小時，過濾得藥渣I和藥液I，保留藥渣I，藥液I置于減壓濃縮鍋中，濃縮得濃縮液A(d＝1.06)，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
(2)將黃芪40g、生地200g、茯苓150g、白芍150g、澤瀉150g、三七6g加入注射用水3200ml浸泡1小時，加入上述保留藥渣I，加入3200ml注射用水煎煮二次，每次1小時，過濾， 合并濾液，棄除藥渣，將合并液置三效濃縮器中，濃縮至比重1.08(70℃)時停止?jié)饪s，放冷至室溫，緩慢加入計算量之95％乙醇，使乙醇濃度達50％，放置過夜，抽取上清液，棄去沉淀物。濃縮上清液得濃縮液B(70℃，d＝1.08)，合并提取液，濃縮至稠膏狀，烘干，收取干浸膏打粉，貼標簽，注明品名、批號、日期等。
稱取栓劑基質(zhì)于燒杯中，水浴加熱至60℃熔化，將浸膏粉加入熔融的基質(zhì)中，邊加邊攪拌，至混合均勻，待冷卻至40℃左右，灌模，冷卻，即可。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物在治療急性腎衰中的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物進一步含有大黃、白芍、三七，并且各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，大黃12-150重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，白芍12-155重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份，三七6-75重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-25重量份，黃芪40-50重量份，大黃12-18重量份，當(dāng)歸20-25重量份，淫羊藿15-20重量份，生地15-25重量份，白芍10-15重量份，澤瀉15-20重量份，茯苓15-20重量份，三七6-8重量份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎20重量份、黃芪40重量份、大黃15重量份、當(dāng)歸20重量份、淫羊藿15重量份、生地20重量份、白芍15重量份、澤瀉15重量份、茯苓15重量份、三七6重量份。
5.一種藥物組合物在增強免疫力中的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物進一步含有大黃、白芍、三七，并且各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，大黃12-150重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，白芍12-155重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份，三七6-75重量份。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-25重量份，黃芪40-50重量份，大黃12-18重量份，當(dāng)歸20-25重量份，淫羊藿15-20重量份，生地15-25重量份，白芍10-15重量份，澤瀉15-20重量份，茯苓15-20重量份，三七6-8重量份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎20重量份、黃芪40重量份、大黃15重量份、當(dāng)歸20重量份、淫羊藿15重量份、生地20重量份、白芍15重量份、澤瀉15重量份、茯苓15重量份、三七6重量份。
9.一種藥物組合物在治療急性腎衰和增強免疫力中的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物進一步含有大黃、白芍、三七，并且各原料藥的重量配比為川芎15-200重量份，黃芪40-450重量份，大黃12-150重量份，當(dāng)歸20-220重量份，淫羊藿15-185重量份，生地15-205重量份，白芍12-155重量份，澤瀉15-185重量份，茯苓15-185重量份，三七6-75重量份。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎15-25重量份，黃芪40-50重量份，大黃12-18重量份，當(dāng)歸20-25重量份，淫羊藿15-20重量份，生地15-25重量份，白芍10-15重量份，澤瀉15-20重量份，茯苓15-20重量份，三七6-8重量份。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于各原料藥的重量配比為川芎20重量份、黃芪40重量份、大黃15重量份、當(dāng)歸20重量份、淫羊藿15重量份、生地20重量份、白芍15重量份、澤瀉15重量份、茯苓15重量份、三七6重量份。
全文摘要
本發(fā)明涉及一類藥物組合物在治療急性腎衰和/或增強免疫力中的用途。該中藥組合物的組分是下列重量份的原料藥川芎15－200重量份，黃芪40－450重量份，當(dāng)歸20－220重量份，淫羊藿15－185重量份，生地15－205重量份，澤瀉15－185重量份，茯苓15－185重量份。這種中藥組合物具有治療急性腎衰，并同時增強免疫力、抗疲勞的作用。
文檔編號A61P13/12GK101085130SQ20071013615
公開日2007年12月12日 申請日期2007年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月19日
發(fā)明者孫虹, 解荷芝, 陳劍, 胡菊華, 陳春貴 申請人:麗珠醫(yī)藥集團股份有限公司