專利名稱：一種用于治療急性腎衰的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療急性腎衰的組合物，尤其是指一種用于治療急性腎衰的組合物在制藥領(lǐng)域中的用途。
背景技術(shù)：
在臨床實(shí)踐中，常見病人由于創(chuàng)傷、休克、及大手術(shù)后出現(xiàn)急性缺血性腎功能障礙。病人的腎臟排泄功能在短期內(nèi)迅速減退，腎小球?yàn)V過(guò)功能下降到正常值50％以下，血肌酐和尿素氮水平迅速升高并引起水、電解質(zhì)及酸堿平衡失調(diào)和急性尿毒癥癥狀。急性腎功能衰竭，雖發(fā)生率低，但至今病死率仍高達(dá)49％-71％。如何減輕和預(yù)防急性腎功能衰竭，一直是人們對(duì)腎損傷保護(hù)的主要研究課題。
近年來(lái)關(guān)于應(yīng)用藥物預(yù)防和治療急性腎功能障礙時(shí)的細(xì)胞損傷和促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)與再生的報(bào)道日益增多。常見有腺嘌呤核苷酸類藥物、氧自由基清除劑、鈣離子阻滯劑、鈣鎂鋅等兩價(jià)陽(yáng)離子、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、前列腺素。氨基酸對(duì)腎功能保護(hù)作用的機(jī)理尚未闡明。若甘氨酸、丙氨酸用量過(guò)高(125umol/kg·min)，GFR下降32％，說(shuō)明甘氨酸、丙氨酸用量過(guò)高有潛在腎毒性。低至中劑量的氨基酸可引起腎血管擴(kuò)張及GFR的增加。Weinberg JM等發(fā)現(xiàn)存在甘氨酸和L-丙氨酸增加腎近端小管細(xì)胞耐受缺氧損傷，保護(hù)作用不依賴細(xì)胞內(nèi)的ATP的水平，和氨基酸的代謝無(wú)關(guān)。認(rèn)為高度的特異受體和配體的作用在維持細(xì)胞的完整性起關(guān)鍵作用。Paller Ms等發(fā)現(xiàn)甘氨酸和丙氨酸對(duì)培養(yǎng)腎近端小管細(xì)胞的缺氧再供氧有保護(hù)作用。Silva p等2mM的甘氨酸加入離體灌注大鼠腎模型中，甘氨酸能保護(hù)髓攀粗升支的缺氧損傷，丙氨酸也有同樣作用，與NO和降低細(xì)胞活動(dòng)無(wú)關(guān)。Baines AD等發(fā)現(xiàn)在離體灌注腎模型中檢查氨基酸的保護(hù)作用發(fā)現(xiàn)甘氨酸和丙氨酸等中性氨基酸的保護(hù)不需代謝，和它們穩(wěn)定膜蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)。
丹參和降香，唇形科植物丹參干燥根及根莖和豆科植物降香檀的樹干和根的干燥心。主要具有1、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量，改善心肌缺血狀態(tài)；2、擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)障礙；3、抑制血液凝固，促進(jìn)纖溶，改善血液流變性；4、清除自由基，抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷；5、降低血脂，防止動(dòng)脈粥樣硬化。
現(xiàn)有兩者的組合制劑，香丹注射液，主要用于治療臨床可用于治療中風(fēng)、腦供血不足、冠心病、心肌梗塞、心肌炎、肺心病、慢性腎功能不全，腎病綜合癥等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于治療急性腎衰的藥物組合物，由香丹注射液、甘氨酸、生理鹽水組成，各組分的重量比為20％香丹注射液 10.0-25.0甘氨酸 1.0-5.0生理鹽水 70.0-88.0。
本發(fā)明提供的用于治療急性腎衰的藥物組合物，其組分優(yōu)選重量比為20％香丹注射液 15.0～20.0甘氨酸 2.0～4.0生理鹽水 75.0～85.0。
本發(fā)明提供的用于治療急性腎衰的藥物組合物，其組分優(yōu)選重量比為20％香丹注射液 20.0甘氨酸 2.2生理鹽水 80.0。
組合物中20％香丹注射液是由原生藥丹參、降香配制而成，可用市售香丹注射液，也可通過(guò)以下步驟獲得由丹參的酚酸類提取物精制液的0.2-4.0％、降香的蒸餾液0.2-4.0％，滴注液常規(guī)輔料的一定比例組成。在制備過(guò)程中，取丹參水煎煮，濃縮水液至相對(duì)密度為1.04-1.06，再冷卻至50度左右，加入一定量的明膠溶液，直至不產(chǎn)生沉淀為止，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.17時(shí)，加入乙醇達(dá)50-60％，然后于室溫條件下靜置并過(guò)濾，濾液回收乙醇后的濃縮液，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于丹參生藥1-3g，過(guò)濾后再調(diào)節(jié)pH至酸性，用等量的醋酸乙酯萃取多次，合并醋酸乙醋萃取液，回收醋酸乙醋，得丹參酚酸提取物浸膏，加注射用水稀釋至相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入若干倍量的注射用水于室溫條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，再過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參苯酚酸提取物精制液。
蒸餾降香，蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，低溫靜置后除去油層，水層重蒸餾，收集重蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g。
把所取得的丹參酚酸類提取物精制液、降香蒸餾液，與滴注液常規(guī)輔料混合，調(diào)節(jié)PH至弱酸性即為香丹注射液。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述組合物在制備預(yù)防或治療缺血導(dǎo)致的急性腎功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
由本發(fā)明提供的組合物制備的藥物，為下列之一的劑型注射劑、粉劑、片劑、膠囊。
本發(fā)明由于采用上述方案，因而具有以下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明的組合物對(duì)腎缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。
實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明的組合物能增加缺血性腎功能障礙時(shí)的腎小球?yàn)V過(guò)率，尿流率；減緩血肌酐和尿素氮升高；減輕腎小管細(xì)胞損傷程度。
2.本發(fā)明的組合物可以避免單種甘氨酸用于預(yù)防和/或治療急性腎功能障礙時(shí)甘氨酸用量過(guò)高存在潛在腎毒性。
3.本發(fā)明使用的各種組成成分來(lái)源豐富，價(jià)格實(shí)惠。
4.本發(fā)明的組合模式較新。
具體實(shí)施方案為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將本發(fā)明的氨基酸組合物對(duì)腎功能保護(hù)的實(shí)驗(yàn)以及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其用途，但這些具體實(shí)施方案不是要以任何方式限制所要求保護(hù)的發(fā)明范圍。
實(shí)施例1香丹注射液制備稱取丹參10g、降香10g，取丹參水煎煮，濃縮水液至相對(duì)密度為1.04-1.06，再冷卻至50度左右，加入一定量的明膠溶液，直至不產(chǎn)生沉淀為止，將上清液濃縮至相對(duì)密度為1.15-1.17時(shí)，加入乙醇達(dá)50-60％，然后于室溫條件下靜置并過(guò)濾，濾液回收乙醇后的濃縮液，加注射用水稀釋至1ml相當(dāng)于丹參生藥1-3g，過(guò)濾后再調(diào)節(jié)pH至酸性，用等量的醋酸乙酯萃取多次，合并醋酸乙醋萃取液，回收醋酸乙醋，得丹參酚酸提取物浸膏，加注射用水稀釋至相當(dāng)于含丹參生藥3g，加入若干倍量的注射用水于室溫條件下靜置后，過(guò)濾去除沉淀，濾液加熱濃縮至1ml相當(dāng)于含丹參生藥10g，再過(guò)濾去除沉淀，加入活性炭，加熱煮沸，制得丹參苯酚酸提取物精制液。
蒸餾降香，蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥0.5g，低溫靜置后除去油層，水層重蒸餾，收集重蒸餾液至1ml相當(dāng)于含降香生藥2.5g。
把所取得的丹參的酚酸類提取物精制液0.2-4.0％，降香蒸餾液0.2-4.0％，與滴注液常規(guī)輔料混合，調(diào)節(jié)PH至弱酸性即為香丹注射液。
本發(fā)明的組合物配制取20％香丹注射液20ml，然后再與甘氨酸2g、生理鹽水80g配制成本發(fā)明組合物。
實(shí)施例2稱取甘氨酸1g丹參10g、降香10g、生理鹽水80g；參照實(shí)施例1的方法先把丹參與降香制成濃度為20％的香丹注射液，取20％香丹注射液20ml，然后再與甘氨酸、生理鹽水配制成本發(fā)明組合物。
實(shí)施例3稱取甘氨酸0.5g、丹參10g、降香10g、生理鹽水80g；參照實(shí)施例1的方法先把丹參與降香制成濃度為20％的香丹注射液，取20％香丹注射液20ml，然后再與甘氨酸、生理鹽水配制成本發(fā)明組合物。
實(shí)施例4稱取甘氨酸2.2g丹參10g、降香10g、生理鹽水80g；參照實(shí)施例1的方法先把丹參與降香制成濃度為20％的香丹注射液，取20％香丹注射液20ml，然后再與甘氨酸、生理鹽水配制成本發(fā)明組合物。
實(shí)施例5組合物對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)方案 健康成年雄性Wistar大鼠40只，體重(250±18)g。隨機(jī)分A組假手術(shù)組，B組對(duì)照組，C組香丹甘氨酸治療組，D組香丹治療組，E組甘氨酸治療組。每組8只。
2％戊巴比妥鈉60mg/kg腹腔注射麻醉。左股靜脈插管，接微泵持續(xù)輸注生理鹽水，速度7ml/h維持1.5h。膀胱造瘺，接以預(yù)先稱重1.5ml微量離心管，收集尿標(biāo)本，計(jì)算尿流率。輸注液體1h后，行腹部正中切口，無(wú)損傷動(dòng)脈夾阻斷雙腎蒂30min。假手術(shù)組不夾閉。在開放腎血流前8min，A和B組注射生理鹽水、C組注射香丹甘氨酸合劑(組合物)(20％香丹、2％甘氨酸)、D組注射香丹注射液(20％香丹)、E組注射2％甘氨酸，注射量各5ml。后繼續(xù)相應(yīng)的注射液7ml/h維持1h，于再灌注30、60、90、120min留取尿標(biāo)本，2h時(shí)斷尾取血0.5ml。再灌注24h時(shí)，取門靜脈血3ml，切取雙腎。血標(biāo)本離心后-20℃凍存。測(cè)定血清和尿液的肌酐、尿素氮濃度。計(jì)算出2h尿肌酐排出、120min內(nèi)生肌酐清除率、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶測(cè)定評(píng)估腎小管的損傷程度。腎臟標(biāo)本10％中性甲醛固定，HE(蘇木素—伊紅)常規(guī)染色，常規(guī)光鏡檢查，按Paller標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。透射電鏡檢查腎臟去包膜，矢狀面切成1mm厚的組織切片，置4％戊二醛液中4℃固定，超薄切片作透射電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)變化。免疫組化檢測(cè)iNOS蛋白的表達(dá)。
通過(guò)對(duì)上述4組不同配比的組份所制備所得的用于治療急性腎衰的組合物，應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)論具有較大差異，其中第4組所列組份組成的組合物具有較好的實(shí)驗(yàn)效果，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
結(jié)果如下1.尿量的變化在再灌注30min時(shí)尿量3組無(wú)顯著性差異。對(duì)照組在再灌注60min開始尿量明顯增加，90、120min與假手術(shù)組比較有顯著性差異。香丹甘基酸合劑治療組(C組)在60min開始尿量明顯增加，高于其他組；30、60、90、120min時(shí)與其他組比較有顯著性差異。香丹治療組(D組)在再灌注60min開始尿量明顯增加，與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。甘基酸治療組(E組)在再灌注60min開始尿量明顯增加，30、60min時(shí)與對(duì)照組比較有顯著性差異，90、120min時(shí)與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。2小時(shí)總尿量，C組與其他組比較差異有顯著性，B、D、E組間差異無(wú)顯著性。見表1。
表1.大鼠急性缺血再灌注后尿量(ml)的變化組別 30min 60min 90min 120min 2h總量A0.20±0.140.21±0.140.19±0.120.17±0.120.77±0.19B0.22±0.170.65±0.200.60±0.100.47±0.181.94±0.20C0.39±0.132.19±0.941.77±0.750.83±0.335.18±1.88D0.17±0.160.83±0.230.77±0.240.47±0.182.23±0.66E0.36±0.161.10±0.350.91±0.270.56±0.282.93±0.862.再灌注2、24h血肌酐、尿素氮濃度的變化對(duì)照組(B組)與假手術(shù)組(A組)比較，2、24h血肌酐、尿素氮濃度B組高。香丹甘氨酸治療組(C組)，2、24h血肌酐低于B、D、E組，有顯著性差異。2、24h血尿素氮低于B、D、E組，有顯著性差異。香丹治療組(D組)與對(duì)照組比較，2h血肌酐、尿素氮差異有顯著性。24h血肌酐、尿素氮差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。甘氨酸治療組(E組)與對(duì)照組比較，2h、24h尿素氮差異有顯著性。2h、24h血肌酐與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性。見表2。
表2大鼠急性缺血后血肌酐和尿素氮的變化組別 2h Cr 2h BUN 24h Cr 24h BUN(μmol/L)(mmol/L) (μmol/L)(mmol/L)A103.76±12.638.10±2.20 75.68±15.02 8.38±2.97B140.18±10.4213.10±1.53115.51±14.4717.24±3.09C122.43±18.4717.20±1.6695.01±22.09 11.76±3.23D125.96±13.3910.81±2.39100.95±13.7414.83±2.63E131.33±12.0417.95±1.53104.83±26.0110.74±2.213.2h尿肌酐排出，120min內(nèi)生肌酐清除率變化對(duì)照組(B組)與假手術(shù)組(A組)比較，2h尿肌酐排出，120min內(nèi)生肌酐清除率不B組低。香丹甘氨酸治療組(C組)，2h尿肌酐排出，120min內(nèi)生肌酐清除率低于B、D、E組，有顯著性差異。香丹治療組(D組)與對(duì)照組比較，2h尿肌酐排出，120min內(nèi)生肌酐清除率差異有顯著性。甘氨酸治療組(E組)與對(duì)照組比較，2h尿肌酐排出，120min內(nèi)生肌酐清除率差異有顯著性。見表3。
表3大鼠急性缺血后尿肌酐排出和內(nèi)生肌酐清除率的變化組別2h肌酐排出 2h肌酐清除率(nmol/min) (μl/min)A 49.15±2.98 476.97±38.94B 31.71±1.64 227.19±17.93C 49.23±5.83 414.07±96.51D 43.95±2.80 352.55±43.19E 42.18±5.41 324.84±57.164.尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)的變化對(duì)照組(B組)與假手術(shù)組(A組)比較，B組60min 120min尿液NAG活性明顯增高，差異有顯著性。香丹甘氨酸治療組(C組)與B組比較，60min120min尿液NAG活性明顯降低，差異有顯著性。C組與D、E組比較，60min120min尿液NAG活性差異無(wú)顯著性。香丹治療組(D組)、甘氨酸治療組(E組)與對(duì)照組比較，60min 120min尿液NAG活性明顯降低，差異有顯著性。見表4。
表4大鼠急性缺血后尿NAG活性的變化(U/L)組別 60min 120minA5.80±1.74 6.17±1.94B48.50±5.5149.67±7.20C19.33±1.9719.17±2.14D19.25±1.7118.75±0.96E21.00±3.7420.00±1.835.腎組織學(xué)檢查假手術(shù)組(A組)大鼠腎臟HE切片未發(fā)現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變。光鏡下對(duì)照組(B組)近曲小管上皮細(xì)胞空泡變性和壞死，腎小管腔擴(kuò)張，內(nèi)可見管型和壞死脫落的細(xì)胞損傷累及近曲小管所有細(xì)胞；可見明顯管周血管的擴(kuò)張淤血間質(zhì)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。香丹甘氨酸治療組(C組)、香丹治療組(D組)、甘氨酸治療組(E組)近曲小管上皮細(xì)胞部分腫脹、顆粒變性和小空泡變性罕見細(xì)胞壞死和管型。三組中以C組損傷程度最輕，E組居中，D組最重。Paller評(píng)分C組低于對(duì)照組(103.9±13.2vs 172.6±16.5，p＜0.01)。
6.腎組織透射電鏡檢查對(duì)照組(B組)線粒體明顯腫脹變形，細(xì)胞內(nèi)排列不整齊，嵴稀疏斷裂，排列紊亂，有的已失去正常內(nèi)部結(jié)構(gòu)而成為均勻的一團(tuán)，基底褶及刷狀緣微絨毛減少消失，細(xì)胞漿內(nèi)變性嚴(yán)重，區(qū)域溶酶體增多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張成大小不一的囊泡。香丹甘氨酸治療組(C組)、香丹治療組(D組)、甘氨酸治療組(E組)線粒體輕度腫脹，嵴損傷較輕，細(xì)胞內(nèi)排列整齊，細(xì)胞基部可見質(zhì)膜反褶，細(xì)胞游離緣微絨毛豐富，個(gè)別細(xì)胞溶酶體略多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體輕度擴(kuò)張或正常。三組中以C組損傷程度最輕，E組居中，D組最重。
7.腎組織誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)水平的變化用免疫組化技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，iNOS表達(dá)細(xì)胞在胞質(zhì)或胞核中著色，呈彌漫性或棕黃色顆粒。對(duì)照組(B組)與假手術(shù)組相比iNOS表達(dá)明顯增加，而香丹甘氨酸治療組(C組)、香丹治療組(D組)、甘氨酸治療組(E組)iNOS表達(dá)明顯低于對(duì)照組，三組中以C組表達(dá)水平最低，E組居中，D組最高。采用高倍視野記數(shù)法結(jié)果顯示對(duì)照組iNOS蛋白免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯高于假手術(shù)組(3.55±0.62 vs 1.04±0.31 P＜0.01)，而C組iNOS蛋白免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯低于對(duì)照組(1.79±0.75 vs 3.55±0.62，p＜0.05)。iNOS是引起缺血性腎損害發(fā)生的的重要因子。本合劑的保護(hù)機(jī)制之一可能是通過(guò)抑制iNOS蛋白表達(dá)起保護(hù)作用。
綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，香丹甘氨酸組合物能增加缺血性腎功能障礙時(shí)的腎小球?yàn)V過(guò)率，尿量；減緩血肌酐和尿素氮升高；減輕腎小管細(xì)胞損傷程度；減低腎小管細(xì)胞iNOS蛋白表達(dá)。本發(fā)明的組合物對(duì)腎缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。本發(fā)明組合物具有良好的開發(fā)和臨床應(yīng)用前景。
當(dāng)然，上述所列例子只是本發(fā)明所列舉的具體實(shí)施例，顯然，本發(fā)明包括但并不限于上述實(shí)施例，只要本領(lǐng)域普通技術(shù)人員從本發(fā)明中不再需要?jiǎng)?chuàng)造性勞動(dòng)即可獲取的所有情形，都應(yīng)當(dāng)列入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于治療急性腎衰的藥物組合物，其特征是由香丹注射液、甘氨酸、生理鹽水組成，各組分的重量比為20％香丹注射液 10.0-25.0甘氨酸 1.0-5.0生理鹽水70.0-88.0。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療急性腎衰的藥物組合物，其特征是其組分重量比為20％香丹注射液 15.0～20.0甘氨酸 2.0～4.0生理鹽水75.0～85.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一所述的藥物組合物，其特征是其組分的優(yōu)選重量比為20％香丹注射液 20.0甘氨酸 2.2生理鹽水80.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3任一所述的一種用于治療急性腎衰的藥物組合物在制備急性腎臟缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于治療急性腎衰的藥物組合物在制備預(yù)防或治療腎缺血再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述的藥物為下列之一的劑型注射劑、粉劑、片劑、膠囊。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療急性腎衰的藥物組合物，由重量比為10.0－25.0的香丹注射液、1.0－5.0的甘氨酸、70.0－88.0的生理鹽水組成。本發(fā)明組合物對(duì)急性腎臟缺血再灌注損傷的病人，具有良好預(yù)防和/或治療作用，適用于制備預(yù)防和/或治療由缺血導(dǎo)致的急性腎功能障礙的藥物，包括注射劑、粉劑、片劑、膠囊等多種劑型。本發(fā)明的組合物可以避免單種甘氨酸用于預(yù)防和/或治療急性腎功能障礙時(shí)甘氨酸用量過(guò)高存在潛在腎毒性。實(shí)驗(yàn)研究表明本發(fā)明的組合物能增加缺血性腎功能障礙時(shí)的腎小球?yàn)V過(guò)率，尿流率；減緩血肌酐和尿素氮升高；減輕腎小管細(xì)胞損傷程度。可用于預(yù)防和/或治療由缺血引起的腎功能障礙等疾病。
文檔編號(hào)A61K9/10GK1720959SQ20051005046
公開日2006年1月18日 申請(qǐng)日期2005年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月27日
發(fā)明者謝立平 申請(qǐng)人:浙江大學(xué), 江志祥