專利名稱：：一種治療乙型肝炎的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種由葉下珠和虎杖組成的中藥復(fù)方，本發(fā)明復(fù)方具有抗乙肝病毒的作用。
背景技術(shù)：
：當(dāng)前全世界約有20億人遭受過乙型肝炎病毒(HBV)的侵襲，其中有3.5億人次發(fā)展成慢性HBV感染者。慢性乙型肝炎可發(fā)展為肝硬化和肝癌，全球每年約有IOO萬人死于HBV感染相關(guān)的疾病。我國為乙型肝炎高發(fā)病區(qū)，約有50%的人感染過HBV，慢性HBV攜帶者占全國人口的9.75%。當(dāng)前，國內(nèi)外用于治療乙肝的抗病毒藥物主要有干擾素及拉米夫定，但效果不很理想，且容易產(chǎn)生耐藥性。因此，安全、有效、穩(wěn)定的藥物已顯得非常必要，中藥在這方面有其獨特的療效。葉下珠(PhyllanthusurinariaL.)為大戟科葉下珠屬植物，有平肝清熱、利水解毒之功效，主要用于治療傳染性肝炎、腸炎、痢疾、腎炎水腫、小兒疳積等。1988年印度學(xué)者Thyagarajan在英國LANCET雜志首次報道苦味葉下珠具有抗HBV作用，能使59。/。HBV攜帶者乙型肝炎s抗體(HBsAg)轉(zhuǎn)陰，引起了國內(nèi)外極大的關(guān)注。其主要有效成分為總酚酸類化合物?；⒄葹榱慰浦参锘⒄萷o/ygo"wwcm//血似wS/e6.e/Zwcc.的干燥根莖及根，主要含有蒽醌類化合物、黃酮、白藜蘆醇苷、水溶性多糖和鞣質(zhì)等成分?；⒄刃院⒖?，歸肝、膽、肺經(jīng)，有祛風(fēng)濕、止咳化痰之功效。中醫(yī)臨床用于治療濕熱黃疸、肺熱咳嗽、瘡癰腫毒、經(jīng)閉痛經(jīng)、水火燙傷、趺打損傷等。現(xiàn)代藥理學(xué)表明，虎杖具有擴(kuò)張血管、抗血栓、抗休克、降血脂、抗菌抗病毒、抗氧化和保肝的作用。文獻(xiàn)(洪照友，高毅，等.中藥虎杖對大鼠肝臟缺血性損傷保護(hù)形態(tài)學(xué)觀察[J].世界華人消化雜志，2000，8(2):162-164)表明，虎杖煎劑具有改善損傷肝組織的微循環(huán)，抑制白細(xì)胞、血小板與肝臟內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，達(dá)到促進(jìn)肝細(xì)胞再生、修復(fù)損傷的能力。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種由葉下珠和虎杖組成的藥物組合物。本發(fā)明中，青葉膽與虎杖的比例為1:50-50:1,優(yōu)選為1:10-10:1,更優(yōu)選為葉下珠10重量份，虎杖5重量份。眾多研究表明，葉下珠具有較強的抗乙肝病毒作用，而虎杖則具有保肝作用，可以保護(hù)肝細(xì)胞免受損傷。在研究中我們意外發(fā)現(xiàn)，將葉下珠和虎杖組合在一起用于治療乙型肝炎，具有令人驚喜的效果，其聯(lián)合應(yīng)用較單獨用藥效果明顯增強。本發(fā)明通過適當(dāng)?shù)奶崛》蛛x方法，分別提取葉下珠和虎杖的有效部位，而后將兩活性部位混合在一起，即成本發(fā)明組合物活性提取部位。本發(fā)明中，葉下珠有效部位的提取可以通過如下方法得到稱取葉下珠，粉碎成粗粉，以8~12倍量的0-60%的乙醇提取1~3次，過濾，合并各次濾液，60°C減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的0.52倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位。提取時，所用的提取方法可以是溫浸法，也可以是回流提取或煎煮法。本發(fā)明中，提取葉下珠有效部位時，溶劑可以是用水煎煮提取，溫水浸泡提取；也可以用小于60%的乙醇回流提取。本發(fā)明中，虎杖有效部位的提取可以通過如下方式實現(xiàn)取虎杖，粉碎成粗粉，以8-10倍量的50%-80%的乙醇回流提取2~4次，每次12小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用60%-80%的乙醇洗脫3-6個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物。將葉下珠提取物和虎杖提取物合并，混勻，即可得到本發(fā)明組合物活性提取物。本發(fā)明中，加入藥劑上可接受的制藥輔料，通過適當(dāng)?shù)姆椒?，即可制成所需的各種劑型，本發(fā)明優(yōu)選口服制劑。本發(fā)明中，制藥上可接受的輔料可以是粘合劑(可以是聚維酮、淀粉漿、纖維素等)、崩解劑(可以是干燥淀粉、羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素、聚乙烯比咯烷酮等)、潤滑劑(可以是滑石粉、硬脂酸、硬脂酸錦鎂、硬脂酸錦等)、矯味劑(可以是蔗糖、阿司巴甜、甜菊素、果糖等)、穩(wěn)定劑(可以是對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯等)、稀釋劑(可以是淀粉、糊精、糖粉、乳糖等)、潤濕劑(可以是水或乙醇)、助流劑(可以是微粉硅膠)、賦形劑(可以是糖類衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇；淀粉類衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精或羧甲基淀粉；纖維素衍生物如結(jié)晶纖維、羥丙基纖維、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鉀；硅酸鹽衍生物如硅酸鎂鋁；磷酸鹽衍生物如磷酸鈣；硫酸鹽衍生物如硫酸錦；碳酸鹽衍生物如碳酸鉤；阿拉伯膠；右旋糖苷)。本發(fā)明中藥組合物具有抗乙肝病毒的作用，可用于制備具有治療乙型肝炎的藥物。具體實施例本發(fā)明藥物制備實施例實施例1葉下珠100g，粉碎成粗粉，以8倍量的水提取1次，過濾，合并各次濾液，6(TC減壓濃縮至相對密度約為1.15,然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的0.5倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖5kg，粉碎成粗粉，以8倍量的50。/。的乙醇回流提取2次，每次l小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用60%的乙醇洗脫3個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混勻，即得本發(fā)明活性提取物。實施例2稱取葉下珠5kg,粉碎成粗粉，以12倍量的60%的乙醇提取3次，每次1小時過濾，合并各次濾液，60'C減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的2倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖100g,粉碎成粗粉，以IO倍量的80%的乙醇回流提取4次，每次2小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用80%的乙醇洗脫6個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混勻，即得本發(fā)明活性提取物。實施例3稱取葉下珠lkg,粉碎成粗粉，以9倍量的10%的乙醇提取3次，每次1小時過濾，合并各次濾液，6(TC減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取,每次正丁醇的用量為分散液的1倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖10kg,粉碎成粗粉，以9倍量的70°/。的乙醇回流提取3次，每次1.5小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用70%的乙醇洗脫5個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混句，即得本發(fā)明活性提取物。實施例4稱取葉下珠10kg，粉碎成粗粉，以9倍量的20%的乙醇提取2次，每次l小時過濾，合并各次濾液，6(TC減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的1倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖lkg,粉碎成粗粉，以8倍量的60。/。的乙醇回流提取2次，每次1.5小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為U5濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用60%的乙醇洗脫5個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混勻，即得本發(fā)明活性提取物。實施例5稱取葉下珠10kg，粉碎成粗粉，以9倍量的10%的乙醇提取3次，每次l小時過濾，合并各次濾液，60'C減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的1倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖5kg,粉碎成粗粉，以9倍量的70%的乙醇回流提取3次，每次1.5小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用70%的乙醇洗脫5個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混勻，即得本發(fā)明活性提取物。實施例6稱取葉下珠5kg,粉碎成粗粉，以9倍量的10%的乙醇提取3次，每次l小時過濾，合并各次濾液，6(TC減壓濃縮至無醇味浸膏狀，加適量蒸餾水分散，蒸餾水的用量與浸膏的量的比例約為lg浸膏l(xiāng)ml蒸餾水，然后用水飽和的正丁醇萃取，每次正丁醇的用量為分散液的1倍，至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，薄膜濃縮或減壓濃縮，干燥，即得葉下珠活性部位；虎杖5kg,粉碎成粗粉，以9倍量的70%的乙醇回流提取3次，每次1.5小時，過濾，合并乙醇提取液，薄膜或減壓濃縮至無醇味，濃縮液相對密度約為1.15濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用去離子水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用70%的乙醇洗脫5個柱體積，合并乙醇洗脫液，薄膜或減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；將葉下珠活性部位和虎杖活性部位合并，混勻，即得本發(fā)明活性提取物。藥理實施例以下從藥理實施例對本發(fā)明的有益效果做進(jìn)一步說明。以下藥理實施例中，所用的原料藥葉下珠10重量份，虎杖5重量份。需要說明的是，用此重量份說明不是為了限制本發(fā)明原料配比關(guān)系，而是一種非限制性的舉例說明。給藥按本發(fā)明制備方法得到的本發(fā)明提取物；'同工藝得到的青葉膽提取物、虎杖提取物。(1)對鴨乙型肝炎病毒的影響重慶麻鴨蛋孵化的1曰齡雛鴨，經(jīng)腹腔接種O.lmLDHBV-DNA陽性血清，1周后頸外筋脈抽血，用地高辛標(biāo)記的DHBV-DNA探針經(jīng)斑點雜交檢測選出感染陽性鴨，伺養(yǎng)23周后作為實驗動物。正常對照組用未感染病毒的同齡鴨。將40只DHBV-DNA陽性鴨隨機(jī)分為4組，分別每曰清晨ip給藥。另設(shè)正常對照組。每天給藥一次，連續(xù)一個月，各組動物于用藥前、用藥2周、用藥l個月、停藥后l周分別于頸外靜脈取血，分離血清于-2(TC保存，釆用斑點雜交法(陳壓西，等.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1994:19(4):295)，用地高辛探針，將用藥前后4次血清統(tǒng)一對比檢測血清DHBV-DNA，以與探針同源性的質(zhì)粒DNA倍比稀釋后點樣與硝酸纖維膜上雜交顯示的斑點顏色深淺為標(biāo)準(zhǔn)，與待檢測血清斑點雜交斑點的顏色深淺比較來定量，結(jié)果見表l。用藥1個月測血清ALT、AST(賴氏法)，結(jié)果見表2。表l本發(fā)明組合物對血清DHBV-DNA滴度的影響(S±s)^曰,~,,、logDHBV-DNA^i(mg/kg)用藥前用藥2周用藥i月停藥i周與病毒對照組相比，*P<0.05,**P<0.0190.22±0.300.27±0.380.26±0.35030±0.412.98±0.872.54±0.952.51±0.912.45±1.021502.88±0.921.86±0.57*1.77±0.61*1.92±0.75*虎杖組1503.01±1.022.32±0.79*2.19±0.82*2.29±1.12*本發(fā)明組1502.81±0.791.48±0.66**1.36±0.59**1.41±0.69**沼c召"且曰；"資對對珠常毒下正病葉表2本發(fā)明用藥l月后對血清轉(zhuǎn)氨酶改變情況(酶活力單位S士S)組別_^_AST正常對照組11.98±3.676.69±2.54病毒^"照組29.65±8.245.17±2.30葉下珠組16.38±4.02**2.24±1.59虎杖組15.27±5.31**2.46±1.21本發(fā)明組13.14±3.69**2.07±0.98與病毒對照組相比，**P<0.01從表l中可以看出，各給藥組均使血清DHBV-DNA滴度總體水平明顯降低，停藥后一周，各給藥組的DHBV-DNA滴度總體回升也不明顯，說明各給藥組均具有一定的抑制乙肝病毒的作用。其中本發(fā)明聯(lián)合用藥組與病毒對照組相比，顯著性明顯(PO.Ol)，而單獨用藥組與病毒對照組相比，也具有差異性(P<0.05)，不如聯(lián)合用藥效果強。從表3可以看出，用藥1個月后，各給藥組均比病毒對照組同一時相ALT明顯下降，但AST變化不明顯，說明各藥物均具有顯著降低轉(zhuǎn)氨酶的作用，聯(lián)合用藥組作用較單獨用藥稍強，但不明顯。(2)體外抗HBV活性研究將乙肝病毒細(xì)胞HBV2.2.15解凍后常法(唐紅，等.中華傳染病雜志，1992:10(4):215)接種到96孔板上，37°C5%C02條件下培養(yǎng)4天，換治療藥物濃度分別為25、50、75、100ng/ml的RPMI1640完全培養(yǎng)基，每個濃度接種6孔，培養(yǎng)IO天后測定(第五天時換液1次)，結(jié)果取平均值，求出對細(xì)胞基本無毒性的最高藥物濃度為100|ig/ml。選用基本無毒性的濃度三個，每個平均6孔，并設(shè)不加藥物的對照，結(jié)果取平均值。將2.2.15細(xì)胞按常規(guī)方法傳入96孔板，5%C02條件下培養(yǎng)4天后，各孔分別換不同濃度藥物培養(yǎng)基(50、75、100yg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)10天并分別收集藥物作用后IO天的培養(yǎng)上清液，分別做HBsAg、HBeAg和HBV-DNA測定，操作按試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果如表3。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>表3本發(fā)明對2.2.15細(xì)胞HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用翻率葉下珠虎杖本發(fā)明組合物<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表3可知，作用IO天后，各藥物組中，當(dāng)濃度在75和100pg/ml時，葉下珠組和本發(fā)明組合物組對細(xì)胞HBeAg均具有有效(以抑制率大于50%為有效)，并可使培養(yǎng)上清液中的HBV-DNA量減少。同等劑量下，本發(fā)明組合物對2.2.15細(xì)胞HBeAg的作用強于葉下珠，說明當(dāng)葉下珠與虎杖合用時，虎杖對葉下珠體外抗HBV活性有一定的協(xié)同增強作用。以上體內(nèi)體外實驗證明，虎杖和葉下珠合用在治療乙型肝炎時，具有協(xié)同增強的作用。權(quán)利要求1、一種治療乙型肝炎的藥物組合物，其特征是由原料藥葉下珠和虎杖組成，其重量配比為葉下珠:虎杖＝1:50-50:1。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是原料藥葉下珠與虎杖的重量配比為1:10-10:1。3、一種制備如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物的方法，其特征在于包括以下步驟(1)取葉下珠，粉碎成粗粉，以0-60%的乙醇提取1~3次，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，以蒸餾水分散，用水飽和的正丁醇萃取至正丁醇萃取液顏色變淡，合并正丁醇萃取液，減壓濃縮，干燥即得葉下珠活性部位；(2)取虎杖，粉碎成粗粉，以50%-80%的乙醇提取，過濾，合并乙醇提取液，減壓濃縮至無醇味，濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫至洗脫液顏色變淡，改用60%-80%的乙醇洗脫3-6個柱體積，合并乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，得虎杖活性提取物；(3)將葉下珠活性提取物和虎杖活性提取物合并，混合均勻，粉碎，即得本發(fā)明活性提取物。4、如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物在制備具有治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及抑制治療乙型肝炎的藥物組合物，該組合物由原料藥葉下珠和虎杖組成，通過分別提取各原料藥的藥效部位，再將其有效部位合并，即可得到本發(fā)明活性提取物。本發(fā)明組合物具有抗乙肝病毒的作用，可用于制備具有治療乙肝疾病的藥物。文檔編號A61P31/00GK101375951SQ20071012105公開日2009年3月4日申請日期2007年8月29日優(yōu)先權(quán)日2007年8月29日發(fā)明者張樹祥申請人:北京星昊嘉宇醫(yī)藥科技有限公司