專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種用于治療心血管疾病的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及一種用于治療心血管疾病的化學(xué)成分的組合物及其注射用制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
：參麥注射液是在古方參麥飲基礎(chǔ)上用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)研制成功的中藥制劑，選用紅參、麥冬精制而成，為靜脈用復(fù)合制劑，具有益氣強(qiáng)心、生津復(fù)脈、活血化瘀、理氣開(kāi)竅之功能。其中人參具有類(lèi)似強(qiáng)心甙的作用，能增強(qiáng)心肌收縮力，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善微循環(huán)；麥冬可促進(jìn)體液免疫，調(diào)節(jié)核酸代謝；合用可起到強(qiáng)心、擴(kuò)血管和調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌功能的作用。實(shí)驗(yàn)研究表明，其藥理學(xué)作用主要表現(xiàn)在擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠狀動(dòng)脈血流、增加心肌收縮力、降低外周阻力、降低心肌耗氧量、改善心肌能量代謝、提高機(jī)體抗缺氧能力、清除氧自由基、保護(hù)心肌的作用。同時(shí)對(duì)穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜、維持心律具有良好的作用，且未發(fā)現(xiàn)明顯毒副作用，安全有效。紅參的主要有效成分為人參皂苷，按其苷元的化學(xué)結(jié)構(gòu)，人參皂苷可分為三類(lèi)人參二醇系皂苷、人參三醇系皂苷、齊墩果酸為苷元的人參皂苷。人參皂苷按苷元的結(jié)構(gòu)可分為3類(lèi);齊墩果酸型如人參皂苷Ro，主要有抗炎、抗血小板釋放作用。原人參二醇型如人參皂苷-Rbl和-Rb2表現(xiàn)為中樞神經(jīng)抑制、降低細(xì)胞內(nèi)鈣、抗氧化、清除自由基和改善心肌缺血再灌注損傷等作用，原人參二醇組皂苷無(wú)溶血活性。原人參三醇組皂苷有溶血活性，原人參三醇型皂苷如-Rgl則表現(xiàn)為中樞神經(jīng)興奮，促智，促進(jìn)蛋白質(zhì)、DNA和RNA的合成等作用；-Re是抗心律失常有效成分，可抑制嗎啡誘發(fā)小鼠產(chǎn)生的耐藥性等作用；-Rg2可抑制兔血小板釋放反應(yīng)等作用。麥冬主要成分為麥冬皂苷、黃酮。含多種甾體皂苷麥冬皂苷A、B、C、D的苷元均為魯斯考皂苷元，麥冬皂苷B'、C'、D'的苷元均為薯蕷皂苷元。麥冬皂苷增強(qiáng)心臟收縮力，增加冠脈流量；可提高小鼠缺血心肌對(duì)低氧的耐受力，改善心肌細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)血流量的作用；抗心律失常及抗休克作用。麥冬黃酮具有強(qiáng)心作用，提高機(jī)體抗缺氧能力、清除氧自由基、保護(hù)心肌的作用。參麥注射液已廣泛用于臨床治療心血管、呼吸系統(tǒng)疾病，現(xiàn)有的參麥注射制劑存在質(zhì)量不穩(wěn)定問(wèn)題，這主要是因?yàn)橹皇墙?jīng)過(guò)提取、簡(jiǎn)單精制后配液灌封滅菌而得，中草藥提取物中含有大量的雜質(zhì)如糅質(zhì)、色素、細(xì)菌熱源等,放置時(shí)間久會(huì)出現(xiàn)色澤變深、產(chǎn)生沉淀、含量降低等問(wèn)題，而且制劑中藥效成分不明確，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，各批次質(zhì)量存在較大差異，影響了注射劑的療效確切穩(wěn)定及規(guī)范化生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種用于治療心血管疾病的組合物；本發(fā)明目的還在于提供一種用于治療心血管疾病的組合物制劑；本發(fā)明目的還在于提供一種用于治療心血管疾病的組合物原料藥的純化方法；本發(fā)明目的還在于提供一種用于治療心血管疾病的組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的技術(shù)方案1:一種用于治療心血管疾病的組合物是由如下重量比的原料藥制成的-紅參皂苷2-20重量份麥冬皂苷0.1-3重量份優(yōu)選紅參皂苷5-10重量份麥冬皂苷0.5-1重量份優(yōu)選紅參皂苷12-18重量份麥冬皂苷0.5-1重量份優(yōu)選紅參皂苷12-18重量份麥冬皂苷1.5-2.8重量份其中紅參皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rg,不得少于9.09&,人參皂苷Re的不得少于3.0%，人參皂苷Rh不得少于12.0%，人參總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0%，麥冬皂苷D'不得少于6.0%，麥冬總皂苷含量不得少于80%;技術(shù)方案2:本發(fā)明所述一種用于治療心血管疾病的組合物可由是由如下重量比的原料藥制成的麥冬皂苷0.2-份紅參皂苷2-20重量份麥冬黃酮0.02-3重量份優(yōu)選紅參皂苷5-10重量份麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮0.1-1重量份優(yōu)選紅參皂苷12-18重量份麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮2.2-3重量份優(yōu)選紅參皂苷5-10重量份麥冬皂苷1.5-3重量份麥冬黃酮0.2-1重量份進(jìn)一步優(yōu)選為紅參皂苷麥冬皂苷:麥冬黃酮二IO重量份1重量份:O.1重量份進(jìn)一步優(yōu)選為紅參皂苷麥冬皂苷:麥冬黃酮二IO重量份:3重量份:O.3重量份其中紅參皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rgi不得少于9.(F。，人參皂苷Re的不得少于3.0%，人參皂苷RbL不得少于12.096，人參總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0%，麥冬皂苷D'不得少于6.0%,麥冬總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬黃酮提取物按干燥品計(jì)算含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量不得少于80%;技術(shù)方案3:本發(fā)明所述一種用于治療心血管疾病的組合物可由是由如下重量比的原料藥制成的麥冬皂苷0.2-3重量份麥冬黃酮0.2-3重量份優(yōu)選麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮0.4-1重量份優(yōu)選麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮2.2-3重量份優(yōu)選麥冬皂苷1.5-2.8重量份麥冬黃酮1.2-2重量份其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0%，麥冬皂苷D'不得少于6.0%，除含上述麥冬皂苷D、D'成分外還含有其他主要六種麥冬皂苷類(lèi)成分，麥冬總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬黃酮提取物按干燥品計(jì)算含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量不得少于80%;上述三種技術(shù)方案所述的用于治療心血管疾病組合物，加入藥學(xué)上可接受的輔料/載體，可制成臨床可接受的各種劑型，如膠囊、顆粒劑、軟膠囊等。上述三種技術(shù)方案所述的用于治療心血管疾病的組合物優(yōu)選的劑型為注射劑，可以在配方中加入甘露醇80-200重量份注射用水800-2000體積份；制備方法為取處方量原料藥在無(wú)菌條件下加至300-500體積份注射用水中，加8-1296NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，加入處方量甘露醇使充分溶解，加注射用水稀釋至1000體積份，加0.01-0.06%活性炭吸附除熱源，用微孔濾膜濾過(guò)，分裝，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)，在無(wú)菌條件下封裝即成。其中所述重量份/體積份與g/ml相對(duì)應(yīng)。例如其中一種組合物注射劑的制備方法為選取紅參皂苷2-20重量份麥冬皂苷0.2-3重量份麥冬黃酮0.2-3重量份甘露醇80-200重量份注射用水800-2000體積份；取紅參皂苷2-20重量份麥冬皂苷0.2-3重量份麥冬黃酮0.2-3重量份在無(wú)菌條件下加至300-500體積份注射用水中，加8_12%NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，加入處方量甘露醇使充分溶解，加注射用水稀釋至1000ml，加0.01-0.06%活性炭吸附除熱源，用微孔濾膜濾過(guò)，分裝，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)，在無(wú)菌條件下封裝即成。本發(fā)明所述的紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮可以取自市售，也可以通過(guò)現(xiàn)有文獻(xiàn)記載的方法制備；也可以下述本發(fā)明所提供的制備紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮的方法。本發(fā)明提供了一種優(yōu)選的制備紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮的方法其中紅參皂苷提取物制備方法為提取將紅參用乙醇或一定比例的乙醇水(0:100-100:0)做溶劑，采用滲漉提取或熱循環(huán)回流提取，收集提取液至紅參皂苷提取充分；水沉提取液減壓濃縮至0.8-1.5倍生藥量，放冷，加水稀釋至1-3倍萃取紅參水液加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)PH值9-10，用正丁醇萃取，至紅參皂苷萃取充分；柱層析吸附收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)ra值910，藥液上大孔吸附樹(shù)脂柱吸附；柱層析洗脫先用水洗至洗脫液為中性，再用60_90%乙醇洗脫至紅參皂苷洗脫完全，收集乙醇洗脫液；精制合并乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至1倍生藥量，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋?，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得；其中紅參皂苷提取物制備方法優(yōu)選為將紅參藥材10重量份，用60-80%乙醇做溶劑，先用15體積份溶劑浸漬L0-14小時(shí)后進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉液至紅參皂苷提取充分。滲漉液減壓濃縮至約10體積份，放冷，加水稀釋至20體積份，冷藏10-14'J、時(shí)，濾過(guò)得紅參水液。紅參水液加無(wú)水碳酸鈉0.2重量份攪拌溶解(PH值910),用正丁醇翠取8_12次，前三次每次加正丁醇18-22體積份；后續(xù)每次加正丁醇8-12體積份，至紅參皂苷萃取充分；收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水10體積份充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉0.1重量份攪拌溶解(PH值910)，藥液上D101大孔吸附樹(shù)脂拄(樹(shù)脂量10重量份)吸附，吸附流速為1.5-3柱體積/小時(shí)。用水洗46柱體積，至洗脫液為中性，再用65-80%乙醇洗脫，洗脫4-6注體積，洗脫流速為1.5-3柱體積/小時(shí)，收集65-80%乙醇洗脫液；合并所收集的柱層析乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至9-12體積份，加101%溶液量活性炭常溫?cái)嚢杳撋?0分鐘，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。其中麥冬皂苷提取物制備方法提取將麥冬用乙醇或一定比例的乙醇水做溶劑，采用滲漉提取或熱循環(huán)回流提取，收集提取液至麥冬皂苷、麥冬黃酮提取充分；水沉提取液減壓濃縮至1倍生藥量，放冷，加水稀釋至1.5-2.5倍生藥量，冷藏，濾過(guò)得麥冬水液；黃酮部分收集沉淀用石油醚加熱提取至麥冬黃酮充分溶解，得麥冬黃酮沉淀部分，麥冬水液用石油醚萃取至麥冬黃酮萃取充分得麥冬黃酮萃取部分，合并兩部分即得麥冬黃酮粗品；萃取麥冬水液加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)PH值910，用正丁醇萃取,至麥冬皂苷萃取充分；柱層析吸附收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)PH值910，藥液上大孔吸附樹(shù)脂柱吸附；柱層析洗脫先用水洗至洗脫液為中性，再用60-90%乙醇洗脫至麥冬皂苷洗脫完全，收集乙醇洗脫液；精制合并乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至1倍生藥量，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋?，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得；麥冬皂苷提取物制備方法的優(yōu)選為將麥冬藥材10重量份，切片或粉碎為粗粉，用65-75%乙醇做溶劑，先用14-16體積份溶劑浸漬10-13小時(shí)后進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉液至麥冬皂苷及黃酮提取充分。滲漉液減壓濃縮至約10體積份，放冷，加水稀釋至20體積份，冷藏20-28小時(shí)，濾過(guò)，分別得麥冬水液及麥冬黃酮沉淀部分。濾液用石油醚萃取10次，每次加石油醚10體積份，合并石油醚萃取液，回收石油醚，并濃縮至稠膏，得麥冬黃酮石油醚萃取部分，同上述麥冬黃酮沉淀部分合并得麥冬黃酮粗品，留存?zhèn)溆?。麥冬石油醚萃取后母液加無(wú)水碳酸鈉0.2重量份攪拌溶解，PH值910，加正丁醇萃取9-12次，前三次每次加正丁醇20體積份；后續(xù)每次加正丁醇10體積份，至麥冬皂苷萃取充分。合并正丁醇萃取液，濃縮至5體積份，分次加少量水洗滌正丁醇液，每次加1體積份，洗滌3-4次，再用1%無(wú)水碳酸鈉溶液洗滌至無(wú)色；每次加1體積份，洗滌6-8次；水洗至中性，每次加l體積份，洗滌6-8次。取正丁醇液，回收正丁醇并蒸干，加水5體積份充分溶解，藥液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱，樹(shù)脂量5重量份吸附，吸附流速為2柱體積/小時(shí)。先用水洗至洗脫液為中性，洗46柱體積，再用65_80%乙醇洗脫，洗脫4-6柱體積，HPLC檢測(cè)是否洗脫完全，洗脫流速為2柱體積/小時(shí)，收集75%乙醇洗脫液。合并所收集的柱層析乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至約5體積份，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋?0分鐘，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。其中麥冬黃酮提取物制備方法取上述麥冬黃酮粗品加2-4倍量的硅膠拌樣，上樣于硅膠層析柱，先加石油醚洗脫除雜，再用石油醚乙酸乙脂=95:5-90:10洗脫，收集至麥冬中黃酮成分洗脫充分，合并主要黃酮洗脫流份，40-6(TC減壓回收溶劑，少量石油醚洗滌樣品，30-5(TC真空干燥，粉碎得干粉，即得。麥冬黃酮提取物制備方法優(yōu)選為取麥冬黃酮粗品加3倍量的硅膠拌樣，蒸干研勻；上樣于硅膠層析柱，先加石油醚4倍柱體積量洗脫，再用石油醚乙酸乙脂=95:5-90:IO洗脫，收集l/4柱體積為一流份，至麥冬中黃酮成分全部洗脫充分，合并主要黃酮洗脫流份，5(TC減壓回收溶劑，少量石油醚洗滌樣品，4(TC真空干燥，粉碎得干粉，即得。上述提取物制備工藝中所述重量份/體積份是與kg/L相對(duì)應(yīng)。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括如下含量測(cè)定中的一種或兩種(該質(zhì)量控制方法適用于組合物的各種劑型)1、紅參皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定人參皂苷RghRe、Rb色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B,梯度洗脫方法為030分鐘，流動(dòng)相A20—21(%)，流動(dòng)相B80—79(%);3031分鐘，流動(dòng)相A21—28(%)，流動(dòng)相B79—72(%);3150分鐘，流動(dòng)相A28—30(%)，流動(dòng)相B72—70(%);5060分鐘，流動(dòng)相A30—40(%),流動(dòng)相B70—60(%);6080分鐘，流動(dòng)相A40—65(%),流動(dòng)相B60—35(%);8080.l分鐘，流動(dòng)相A65—20(%)，流動(dòng)相B35—80(%);80.190分鐘，流動(dòng)相A20(%)，流動(dòng)相B80(%);流速l.OmL/min;進(jìn)樣量:20uL;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度ll(TC，氣體流速2.9L/min,不分流；柱溫25°C。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取紅參皂苷適量，加甲醇制成每lml含本品4.0mg的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)減壓干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbi對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml中分別含0.64mg、0.24mg、0.80mg的混合溶液，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄80分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rgi(C42H72014)不得少于9.0%，人參皂苷Re(C48H82018)的不得少于3.0%，人參皂苷(C54H92023)不得少于12.0%。2、麥冬皂苷檢測(cè)-色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，梯度洗脫方法為025分鐘，流動(dòng)相AIOO(%)，流動(dòng)相B0(%);2525.l分鐘，流動(dòng)相A100—0(%)，流動(dòng)相BO—100(%);25.150分鐘，流動(dòng)相AO(%)，流動(dòng)相BIOO(%);5060分鐘，流動(dòng)相AO—100(%)，流動(dòng)相B100—0(%);流速:l.OmL/min;進(jìn)樣量:20uL;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度95.2°C，氣體流速2.5L/min，不分流；柱溫25°C。供試品溶液的制備取麥冬皂苷提取物加甲醇配制成每lml含2.Omg的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備取麥冬皂苷D、麥冬皂苷D'對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml分別含0.3mg的溶液作為參照物溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得;麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)含麥冬皂苷D應(yīng)不低于6.0%、麥冬皂苷D'應(yīng)不低于6.0%。3、甲基麥冬高異黃酮A、B含量測(cè)定色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以50-60:4-8:35-45乙腈-甲醇-0.2%冰醋酸水溶液為流動(dòng)相；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，理論塔板數(shù)按甲基麥冬黃垸酮A峰計(jì)算應(yīng)不低于6000;對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取經(jīng)55-65T:減壓干燥至恒重的甲基麥冬高異黃酮A、B對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含甲基麥冬高異黃酮A、B各0.lmg的溶液；供試品溶液的制備取黃酮提取物加甲醇配制成每lml含0.25mg的溶液，即得測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液20W，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，即得，黃酮提取物按干燥品計(jì)含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量應(yīng)不低于809L本發(fā)明三個(gè)技術(shù)方案所述的組合物具有很好的藥效，通過(guò)進(jìn)一步明確及控制組合物中有效成分的百分含量，去除了一些不必要的雜質(zhì)，從而在藥效上相比較粗提物制劑有更好的效果，并能避免一些不良反應(yīng)的發(fā)生。如在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示對(duì)心肌缺血有很好的治療作用及具有更好的抗休克作用。本發(fā)明還公開(kāi)了紅參麥冬精致的方法，紅參麥冬中所含藥效成分紅參皂苷、麥冬皂苷均易溶于水、乙醇及一定濃度的乙醇水溶液，麥冬黃酮溶于乙醇及高濃度乙醇水溶液，不溶于水?，F(xiàn)有技術(shù)多采用水、乙醇熱回流提取，熱回流提取雜質(zhì)較多，溫度越高提取出來(lái)的色素及脂溶性雜質(zhì)越高，純水提取則提取出大量糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、多糖、色素?zé)o機(jī)鹽等非藥效成分，增加了后續(xù)純化的難度，工藝操作較復(fù)雜，成本高，本發(fā)明采用滲漉或溫浸熱回流提取的提取手段，用一定濃度的乙醇水溶液作提取溶劑，既能使皂苷及黃酮類(lèi)成分提取完全，又保證盡量少浸出多量的雜質(zhì)成分。紅參及麥冬皂苷類(lèi)成分水溶性較好，又能溶于正丁醇，結(jié)合皂苷類(lèi)成分的性質(zhì)，提取液濃縮后先冷藏水沉淀除去水不溶性雜質(zhì)，以保證澄清度，利于后續(xù)純化和制劑，水沉液用正丁醇萃取和大孔吸附樹(shù)脂吸附兩種純化手段結(jié)合處理，取得了十分特別的效果。本發(fā)明還公開(kāi)了質(zhì)量控制方法，該方法十分有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，使注射劑能夠在臨床上安全使用。本發(fā)明在注射液劑型上提高其安全性和質(zhì)量可控性，對(duì)其中的有效化學(xué)成分進(jìn)行深入的分析和鑒定，采用樹(shù)脂吸附、溶劑萃取和結(jié)晶純化手段相結(jié)合的工藝方法，使藥效成分純度達(dá)到可控成分占80%以上，除去了影響穩(wěn)定性的相關(guān)雜質(zhì)；增加指紋圖譜控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證各批次間的質(zhì)量穩(wěn)定及規(guī)范化生產(chǎn)。下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。試驗(yàn)例1參麥提取物對(duì)Iso所致大鼠心肌缺血損傷的影響1、試驗(yàn)過(guò)程取健康大鼠70只，220-260g，雌雄各半，按體重隨即分為7組，分別為空白對(duì)照組、模型組、A組(紅參皂苷10mg/kg+麥冬皂苷l(shuí)mg/kg)、B鬼(麥冬黃酮0.lmg/kg)、C組(紅參皂苷10mg/kg+麥冬皂苷l(shuí)mg/kg+麥冬黃酮O.lmg/kg),每組10只。各給藥組靜脈注射不同組份的藥液10ml/kg,模型組和空白對(duì)照組靜脈注射等容積的5%葡萄糖注射液，每天一次，連續(xù)10天，第10天給藥后30min除空白組外，其余各組份分別腹腔注射Iso8mg/kg，空白對(duì)照組給予等容積的生理鹽水，記錄注射Iso后30min的心電圖，測(cè)量T波和心率，計(jì)算給藥后與給藥前T波升高的mV數(shù)均值作為心肌缺血損傷程度的指標(biāo)。2、試驗(yàn)結(jié)果表l參麥提取物對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血損傷的保護(hù)作用(S土SD，n=10)組別T波升高幅度(mv)心率_(藥后一藥前)_(藥后一藥前)正常對(duì)照組0.0008±0.00133.0±3.4模型組0.0094±0.005412.1±7.4A組0.0030±0.0046*14.8±8.3B組0.0047±0.006715.5±10.8C組0.0020**±0.006217.9±7.2P〈0.05，**P<0.01與模型組比較由上表可見(jiàn)，模型組大鼠T波振幅比較明顯升高，與正常組比較有明顯差異；A、C組大鼠T波振幅明顯降低，與模型組比較有明顯差異；B組大鼠T波振幅亦降低，但與模型組比較無(wú)明顯差異。A、B、C組大鼠心率有所升高，但與模型組比較無(wú)明顯差異。A組、C組對(duì)T波升高都有降低作用，提示對(duì)心肌缺血有治療作用，單用麥冬黃酮即B組也有作用趨勢(shì)，但強(qiáng)度較小；C組對(duì)心率的升高作用趨勢(shì)最為明顯。C組與單方比較有相加協(xié)同作用，因此據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，紅參皂苷10mg/kg+麥冬皂苷l(shuí)mg/kg+麥冬黃酮0.lmg/kg抗心肌缺血效果最為明顯。試驗(yàn)例2參麥提取物對(duì)犬心源性休克的影響試驗(yàn)1、試驗(yàn)過(guò)程取健康犬12只，12-15kg，雌雄各半，按體重隨即分為6組，分別為模型組、A組(紅參皂苷4mg/kg+麥冬皂苷0.4mg/kg)、B組(麥冬黃酮0.04mg/kg)、C組(紅參皂苷4mg/kg+麥冬皂苷0.4mg/kg+麥冬黃酮0.04mg/kg),每組8只。動(dòng)物經(jīng)戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接呼吸機(jī)；頸外靜脈插管持續(xù)滴注5%葡萄糖(30滴/分)；分離右側(cè)股靜脈，連接恒速輸液泵，以備輸入戊巴比妥鈉；分離頸總動(dòng)脈，主動(dòng)脈插管，測(cè)定主動(dòng)脈血壓；左側(cè)第四肋間開(kāi)胸，剪開(kāi)心包包床；分離主動(dòng)脈，放置電磁流量計(jì)探頭，用電磁流量計(jì)測(cè)定心輸出量。上述觀測(cè)指標(biāo)記錄于八導(dǎo)生理記錄儀上。手術(shù)完畢，靜脈推注肝素125(U/kg)，穩(wěn)定20分鐘后，記錄主動(dòng)脈血壓和心輸出量的正常值，作為心源性休克前的基礎(chǔ)值，然后用輸液泵恒速輸入2%戊巴比妥鈉(0.2ml/kg/min)，以主動(dòng)脈血壓及心輸出量下降40%作為心源性休克的指標(biāo)，此后以0.08ml/kg/min的速度保持10分鐘，記錄各項(xiàng)指標(biāo)，,作為造模后給藥前的基礎(chǔ)值，然后恒速靜脈注入藥物，并測(cè)定藥后l、5、15、30、60、90及120分鐘的主動(dòng)脈血壓和心輸出量。2、試驗(yàn)結(jié)果表2藥后心輸出量變化值如下(藥后-藥前)(；土SD，n=8)組別lmiri5min15min30min60rain90min120min模型組0.030±0.060±0.100±0.130±0.200±0.315±0.405±0.0000.0140.0110.0140.0220.0070.021A組0.040±0.065±0.119±0.150±0.245±0.342±0.455±0.0280.0070.0420.0280.1060.0850.148B組0.035±0.070±0.120±0.151±0.231±0.335±0.445±0.0070.0070.0070.0120.0620,1060.132C組0.036土0.078±0.125±0.170±0.260±0.378±0.488±0.0060.0120.007*0.018*0.010*0.006*0.014*由上表可見(jiàn)，藥后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)A、B、C組犬心輸出量與模型組比較均有增加，以C組最為明顯。表3藥后平均動(dòng)脈壓變化值如下(藥后-藥前)(；士SD，n=8)組別lmiri5min15min30min60min90min120min模型組5.5±3.55.0±1,412.0±1.421.0±0.929.0±1.035.0±2.837.5±2.1A組-10±4.24.5±0.713.1±2.122.0±0.531.5±2.I37.5±3.541.0±2.8B組5.0±1.48,0±1.412.5±0.725.5±0.7*33,0±1.1*41.0±2.143.5±0.7*C組0.5±3,56.0±2.815.5±0.7*26.5±0.7*35.0±1.8*43.5±2.8*49.5±3.1*由上表可見(jiàn)，藥后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組犬平均動(dòng)脈壓與模型組比較均有不同程度增加，以B組、C組最為明顯，提示黃酮在此模型中具有抗休克作用。下述實(shí)施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例所述的效果具體實(shí)施方式實(shí)施例1:紅參皂苷100g麥冬皂苷10g甘露醇100g，注射用水1000ml其中紅參皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rgi不得少于10.0%，人參皂苷Re的不得少于3.6%，人參皂苷Rh不得少于12.6%，人參總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于8.0%，麥冬皂苷D'不得少于8.0%，麥冬總皂苷含量不得少于80%;取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例2:紅參皂苷10g麥冬皂苷l(shuí)g麥冬黃酮0.8g，甘露醇100g，注射用水1000ml取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加1(FoNaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例3:麥冬皂苷l(shuí)g麥冬黃酮0.8g，甘露醇100g，注射用水1000ml取處方量麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加10y。NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lnil，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例4:紅參皂苷10g麥冬皂苷l(shuí)g麥冬黃酮0.8g，甘露醇100g，注射用水1000ml取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加10y。NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例5:注射劑紅參皂苷16g麥冬皂苷2g麥冬黃酮2g，甘露醇100g，注射用水1000ml取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加UmNaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例6:注射劑紅參皂苷13g麥冬皂苷l(shuí)g麥冬黃酮0.8g，甘露醇lOOg,注射用水1000ml取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加10。/。NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例7:將紅參藥材10kg，切制成23mm的薄片(或粉碎為粗粉)，用75%乙醇做溶劑，先用15L溶劑浸漬12小時(shí)后進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉液至紅參皂苷提取充分(約200-250L，HPLC檢測(cè))。滲漉液減壓濃縮至約10L,放冷，加水稀釋至20L，冷藏12小時(shí)，濾過(guò)得紅參水液。紅參水液加無(wú)水碳酸鈉200g瑰拌溶解(PH值910),用正丁醇萃取，前三次每次加正丁醇20L;后續(xù)每次加正丁醇IOL，至紅參皂苷萃取充分(HPLC檢測(cè)，約需萃取10次)。收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水10L充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉100g攪拌溶解(PH值910)，藥液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱(樹(shù)脂量10kg)吸附，吸附流速為2柱體積/小時(shí)。先用水洗至洗脫液為中性(約洗46柱體積)，再用75%乙醇洗脫，洗脫約4-6柱體積(HPLC檢測(cè)是否洗脫完全)，洗脫流速為2柱體積/小時(shí)，收集75%乙醇洗脫液。合并75%乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至約10L，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋?0min，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。將麥冬藥材10kg，切制成23mm的薄片(或粉碎為粗粉)，用75%乙醇做溶劑，先用15L溶劑浸漬12小時(shí)后進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉液至麥冬皂苷及黃酮提取充分(約200-250L,HPLC檢測(cè))。滲漉液減壓濃縮至約IOL，放冷，加水稀釋至20L，冷藏24小時(shí)，濾過(guò)，分別得麥冬水液及麥冬黃酮沉淀部分。濾液用石油醚萃取，每次加石油醚10L(HPLC檢測(cè)是否萃取完全，約需萃取10次)，合并石油醚萃取液，回收石油醚，并濃縮至稠膏，得麥冬黃酮萃取部分。麥冬石油醚萃取后母液加無(wú)水碳酸鈉200g攪拌溶解(PH值910)，加正丁醇萃取，前三次每次加正丁醇20L;后續(xù)每次加正丁醇IOL，至麥冬皂苷萃取充分(HPLC檢測(cè)，約需萃取10次)。合并正丁醇萃取液，濃縮至5L，分次加少量水洗滌正丁醇液(每次加1L，洗滌約3-4次)，再用1%無(wú)水碳酸鈉溶液洗滌至無(wú)色(每次加1L，洗滌約6-8次；)，水洗至中性(每次加1L，洗滌約6-8次)。取正丁醇液，回收正丁醇并蒸干，加水5L充分溶解，藥液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱(樹(shù)脂量5kg)吸附，吸附流速為2柱體積/小時(shí)。先用水洗至洗脫液為中性(約洗46柱體積)，再用75%乙醇洗脫，洗脫約4-6柱體積(HPLC檢測(cè)是否洗脫完全)，洗脫流速為2柱體積/小時(shí)，收集75%乙醇洗脫液。合并75%乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至約5L，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋?0min,蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45mn微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。取麥冬黃酮部分加3倍量的硅膠拌樣，蒸干研勻；上樣于硅膠層析柱，先加石油醚4倍柱體積量洗脫，再用石油醚乙酸乙脂二95:5-90:10洗脫，收集1/4柱體積為一流份，至麥冬中黃酮成分全部洗脫充分，合并主要黃酮洗脫流份，5CTC減壓回收溶劑，少量石油醚洗滌樣品，4(TC真空干燥，粉碎得干粉，即得。取紅參皂苷10g，麥冬皂苷l(shuí)g，麥冬黃酮O.lg,甘露醇100g在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。實(shí)施例8:質(zhì)量控制方法(該方法中適用上述實(shí)施例1-7所述制劑原料的質(zhì)量控制)l紅參皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定人參皂苷Rgi、Re、R卜色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速l.OmL/min;進(jìn)樣量:20uL;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度11(TC，氣體流速2.9L/tnin，不分流；柱溫25°C。時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相a(%)流動(dòng)相b(%)03020—2180—79303121—2879—72315028—3072—70506030—4070—60608040—6560—358080.165—2035—8080.1902080供試品溶液的制備精密稱(chēng)取制劑樣品適量，加甲醇制成每lml含紅參皂苷4.0mg的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)減壓干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rhh對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml中分別含0.64mg、0.24mg、0.80mg的混合溶液，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄80分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品紅參皂苷中含人參皂苷Rgi(C42H72014)不得少于10.0%，人參皂苷Re(C48H82018)的不得少于3.6%，人參皂苷(C54H92023)不得少于12.6%。2麥冬皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定麥冬皂苷D、麥冬皂苷D'色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(首選COSMOSIL5u-MS-II柱)，柱溫25°C;以乙腈_異丙醇-水(160:40:245)為流動(dòng)相A，以乙腈-水(45:55)為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測(cè)((優(yōu)選AlltechELSD2000ES，漂移管溫度95.2。C，氣體流速2.5L/min，不分流)；柱溫25°C，理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。_時(shí)間(分鐘)_流動(dòng)相aa)_流動(dòng)相b(%)02510002525.1100—010025.150010050600—1000供試品溶液的制備精密稱(chēng)取制劑樣品適量，加甲醇配制成每lml含2.0mg麥冬皂苷提取物的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備取麥冬皂苷D、麥冬皂苷D'對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml分別含0.3mg的溶液作為參照物溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品麥冬皂苷中含麥冬皂苷D應(yīng)不低于6.0%、麥冬皂苷D'應(yīng)不低于6.0%。3、甲基麥冬高異黃酮A、B含量測(cè)定甲基麥冬高異黃酮A、B照高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇-0.2%冰醋酸水溶液(54:6:40)為流動(dòng)相；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)296nm，理論塔板數(shù)按甲基麥冬黃烷酮A峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。對(duì)照品溶液的制備:精密稱(chēng)取經(jīng)6(TC減壓干燥至恒重的甲基麥冬高異黃酮A、B對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml含甲基麥冬高異黃酮A、B各O.lmg的溶液。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取制劑樣品適量，加甲醇配制成每lml含0.25mg黃酮提取物的溶液，即得測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液20W，注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，即得。本品黃酮提取物中含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量應(yīng)不低于80%。實(shí)施例9:紅參皂苷10g麥冬皂苷3g麥冬黃酮0.3g,甘露醇100g，注射用水1000ml制備工藝取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加109&NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml，用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。對(duì)原料的質(zhì)量控制方法紅參皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定人參皂苷RghRe、Rth色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速l.OmL/min;進(jìn)樣量:20uL;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度110'C，氣體流速2.9L/min，不分流；柱溫25°C。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>供試品溶液的制備精密稱(chēng)取制劑樣品適量，加甲醇制成每lml含紅參皂苷4.0mg的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)減壓干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rb,對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml中分別含0.64mg、0.24mg、0.80mg的混合溶液，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄80分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品紅參皂苷含人參皂苷Rgi(C42H72014)不得少于10.0%，人參皂苷Re(C48H82018)的不得少于3.6%，人參皂苷Rbi(C54H92023)不得少于12.6%。實(shí)施例10:紅參皂苷10g麥冬皂苷3g麥冬黃酮0.3g,甘露醇100g，注射用水1000ml制備工藝取處方量紅參皂苷、麥冬皂苷、麥冬黃酮在無(wú)菌條件下加至300-500ml注射用水中，加l(F。NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，使充分溶解，加0.02%活性炭吸附除熱源，加注射用水稀釋至1000ml,用0.22um微孔濾膜濾過(guò)，分裝于西林瓶，每瓶裝量lml，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)在無(wú)菌條件下封裝即成。對(duì)原料的質(zhì)量控制方法1、紅參皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定人參皂苷Rgl、Re、Rbi色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速l.OmL/min;進(jìn)樣量:20uL;蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，漂移管溫度ll(TC，氣體流速2.9L/min，不分流；柱溫25°C。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品適量，加甲醇制成每lml含本品4.Omg的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)減壓干燥至恒重的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbh對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml中分別含0.64mg、0.24mg、0.80mg的混合溶液，搖勻，即得。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品30mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖均，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄80分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算,即得。本品紅參皂苷含人參皂苷Rgi(C42H72014)不得少于10.0%，人參皂苷Re(C48H82018)的不得少于3.6%，人參皂苷Rbi(C54H92023)不得少于12.6%。2麥冬皂苷檢測(cè)高效液相色譜法測(cè)定麥冬皂苷D、麥冬皂苷D'色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八垸基硅垸鍵合硅膠為填充劑(首選COSMOSIL5u-MS-I1柱)，柱溫25°C;以乙腈-異丙醇-水(160:40:245)為流動(dòng)相A，以乙腈-水(45:55)為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測(cè)((優(yōu)選AlltechELSD2000ES，漂移管溫度95.2'C，氣體流速2.5L/min，不分流)；柱溫25°C，理論塔板數(shù)按麥冬皂苷D峰計(jì)算應(yīng)不低于6000。_時(shí)間(分鐘)_流動(dòng)相A(%)_流動(dòng)相B(%)02510002525.1100—010025.150010050600—1000供試品溶液的制備精密稱(chēng)取制劑樣品適量，加甲醇配制成每lml含2.0mg麥冬皂苷提取物的溶液，即得。對(duì)照品溶液的制備取麥冬皂苷D、麥冬皂苷D'對(duì)照品適量，加甲醇制成每lml分別含0.3mg的溶液作為參照物溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul、20ul與供試品溶液20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘的圖譜，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。本品麥冬皂苷含麥冬皂苷D應(yīng)不低于6.0。/。、麥冬皂苷D'應(yīng)不低于6.0%。權(quán)利要求1、一種用于治療心血管疾病的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷2-20重量份麥冬皂苷0.2-3重量份麥冬黃酮0.02-3重量份；其中紅參皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rg1不得少于9.0％，人參皂苷Re的不得少于3.0％，人參皂苷Rb1不得少于12.0％，人參總皂苷含量不得少于80％；其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0％，麥冬皂苷D′不得少于6.0％，麥冬總皂苷含量不得少于80％；其中麥冬黃酮提取物按干燥品計(jì)算含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量不得少于80％。2、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷5-10重量份麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮O.1-l重量份。3、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷12-18重量份麥冬皂苷0.5-1重量份麥冬黃酮2.2-3重量份。4、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷5-10重量份麥冬皂苷1.5-3重量份麥冬黃酮0.2-1重量份。5、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷麥冬皂苷麥冬黃酮=10重量份1重量份:0.1重量份。6、如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為紅參皂苷麥冬皂苷麥冬黃酮=10重量份3重量份力.3重量份。7、一種用于治療心血管疾病的組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為麥冬皂苷0.2-3重量份麥冬黃酮0.2_3重量份；其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0%，麥冬皂苷D'不得少于6.0%，除含上述麥冬皂苷D、D'成分外還含有其他主要六種麥冬皂苷類(lèi)成分，麥冬總皂苷含量不得少于80%;其中麥冬黃酮提取物按干燥品計(jì)算含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量不得少于80%。8、如權(quán)利要求1-7中的任一種藥物組合物的注射劑，其特征在于該注射劑的制備方法為配方中加入甘露醇80-200重量份注射用水800-2000體積份；制備方法為取處方量原料藥在無(wú)菌條件下加至300-500體積份注射用水中，加8-1296NaOH溶液調(diào)pH值至7-8，加入處方量甘露醇使充分溶解，加注射用水稀釋至1000體積份，加0.01-0.06%活性炭吸附除熱源，用微孔濾膜濾過(guò)，分裝，低溫冷凍干燥24-36小時(shí)，在無(wú)菌條件下封裝即成。9、一種紅參皂苷提取物制備方法，其特征在于該方法為將紅參藥材10重量份，用60-80%乙醇做溶劑，先用15體積份溶劑浸漬10-14小時(shí)后進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉液至紅參皂苷提取充分；滲漉液減壓濃縮至約10體積份，放冷，加水稀釋至20體積份，冷藏10-14小時(shí)，濾過(guò)得紅參水液；紅參水液加無(wú)水碳酸鈉0.2重量份攪拌溶解，PH值為910,用正丁醇萃取8-12次，前三次每次加正丁醇18-22體積份;后續(xù)每次加正丁醇8-12體積份，至紅參皂苷萃取充分；收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水10體積份充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉0.1重量份攪拌溶解，PH值為910，藥液上D101大孔吸附樹(shù)脂柱附，吸附流速為1.5-3柱體積/小時(shí)；用水洗46柱體積，至洗脫液為中性，再用65-80%乙醇洗脫，洗脫4-6柱體積，洗脫流速為1.5-3柱體積/小時(shí)，收集65-80%乙醇洗脫液；合并所收集的柱層析乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至9-12體積份，加0.01%溶液量活性炭常溫?cái)嚢杳撋?0分鐘，蒸干得干膏，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解,用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。10、一種麥冬皂苷提取物的制備方法，其特征在于該方法為提取將麥冬用乙醇或一定比例的乙醇水做溶劑，采用滲漉提取或熱循環(huán)回流提取，收集提取液至麥冬皂苷、麥冬黃酮提取充分；水沉提取液減壓濃縮至1倍生藥量，放冷，加水稀釋至1.5-2.5倍生藥量，冷藏，濾過(guò)得麥冬水液；黃酮部分收集沉淀用石油醚加熱提取至麥冬黃酮充分溶解，得麥冬黃酮沉淀部分，麥冬水液用石油醚萃取至麥冬黃酮萃取充分得麥冬黃酮萃取部分，合并兩部分即得麥冬黃酮粗品；萃取麥冬水液加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)PH值910，用正丁醇萃取，至麥冬皂苷萃取充分；柱層析吸附收集正丁醇萃取液，回收正丁醇并蒸干，加水充分溶解，加無(wú)水碳酸鈉攪拌溶解調(diào)PH值910，藥液上大孔吸附樹(shù)脂柱吸附；柱層析洗脫先用水洗至洗脫液為中性，再用60-90%乙醇洗脫至麥冬皂苷洗脫完全，收集乙醇洗脫液；精制合并乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至1倍生藥量，加0.01%活性炭常溫?cái)嚢杳撋舾傻酶筛?，粉碎，常溫下加無(wú)水乙醇溶解，用0.45um微孔濾膜濾過(guò)，回收乙醇，蒸干得干膏，粉碎，即得。11、一種麥冬黃酮提取物的制備方法，其特征在于該方法為提取將麥冬用乙醇或一定比例的乙醇水做溶劑，采用滲漉提取或熱循環(huán)回流提取，收集提取液至麥冬皂苷、麥冬黃酮提取充分；水沉提取液減壓濃縮至1倍生藥量，放冷，加水稀釋至1.5-2.5倍生藥量，冷藏，濾過(guò)得麥冬水液；黃酮部分收集沉淀用石油醚加熱提取至麥冬黃酮充分溶解，得麥冬黃酮沉淀部分，麥冬水液用石油醚萃取至麥冬黃酮萃取充分得麥冬黃酮萃取部分，合并兩部分即得麥冬黃酮粗品；取麥冬黃酮粗品加2-4倍量的硅膠拌樣，上樣于硅膠層析柱，先加石油醚洗脫除雜，再用石油醚乙酸乙脂=95:5-90:IO洗脫，收集至麥冬中黃酮成分洗脫充分，合并主要黃酮洗脫流份，40-6(TC減壓回收溶劑，少量石油醚洗滌樣品，30-50。C真空干燥，粉碎得干粉，即得。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種用于治療心血管疾病的組合物及其制備方法。該組合物包括紅參皂苷2-20重量份、麥冬皂苷0.2-3重量份、麥冬黃酮0.02-3重量份；其中紅參皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含人參皂苷Rg₁不得少于9.0％，人參皂苷Re的不得少于3.0％，人參皂苷Rb₁不得少于12.0％，人參總皂苷含量不得少于80％；其中麥冬皂苷提取物按干燥品計(jì)算，含麥冬皂苷D不得少于6.0％，麥冬皂苷D′不得少于6.0％，麥冬總皂苷含量不得少于80％；其中麥冬黃酮提取物按干燥品計(jì)算含甲基麥冬高異黃酮A、B總含量不得少于80％。本發(fā)明組合物在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示對(duì)心肌缺血有很好的治療作用及具有更好的抗休克作用。文檔編號(hào)A61K31/7028GK101375990SQ200710121028公開(kāi)日2009年3月4日申請(qǐng)日期2007年8月29日優(yōu)先權(quán)日2007年8月29日發(fā)明者鞏洪剛,馬振元申請(qǐng)人:濟(jì)南天瑞本草醫(yī)藥科技有限公司