專利名稱：：一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其質(zhì)量控制方法，特別涉及一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其質(zhì)量控制方法，屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：心腦血管疾病一直號稱威脅人類健康的頭號殺手，據(jù)有關(guān)調(diào)査報告顯示，我國每年死于心腦血管病的人有300多萬，占我國每年總死亡人數(shù)的50%，而患病幸存下來的人75%不同程度喪失勞動能力，4%重殘。更令人擔(dān)憂的是，我國30歲以上的成年人80%都或多或少、或輕或重地患有高血脂、高血壓、冠心病、腦中風(fēng)等心腦血管疾病。目前在市場上存在的治療心腦血管疾病的藥物中，多數(shù)化學(xué)藥長期服用易產(chǎn)生耐受性和嚴重的副作用，而很多中藥產(chǎn)品雖然副作用小，但由于質(zhì)量控制不科學(xué)，存在藥效不穩(wěn)定的缺陷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種治療心腦血管疾病的中藥組合物；本發(fā)明目的還在于提供一種治療心腦血管疾病的中藥組合物的制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種治療心腦血管疾病的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明所述的治療心腦血管疾病的中藥組合物是由如下重量比的原料藥制成的丹參300-500重量份、川萼150-300重量份、葛根150-300重量份上述原料藥優(yōu)選配比為丹參350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份上述原料藥優(yōu)選配比為丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份本發(fā)明所述的治療心腦血管疾病的中藥組合物也可由如下重量比的原料藥制成的丹參300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份、何首烏200-400重量份、山楂200-400重量份；上述原料藥優(yōu)選配比為丹參350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份、何首烏250-350重量份、山楂250-350重量份；上述原料藥優(yōu)選配比為丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首烏300重量份、山楂300重量份；本發(fā)明藥物組合物組方科學(xué)，方中丹參活血化瘀，清心安神，專行心、腦脈絡(luò)閉塞，故為君藥。川芎為血中氣藥，行氣活血，氣行則血行；山楂活血化瘀，化濁降脂；何首烏滋補肝腎，養(yǎng)血祛風(fēng)，潤腸通便，可兼治氣血運行不暢所致的肝腎陰虧、腸燥便秘，輔助君藥共起活血、養(yǎng)血、降脂通脈之功效。葛根活血化瘀，上通腦絡(luò)，下通心絡(luò)，為消散瘀血，通痹散結(jié)的要藥，且能引藥人經(jīng)，故為佐使藥。取上述組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床接受的劑型，包括但不限于膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、片劑、口服液。本發(fā)明所述的中藥組合物顆粒劑的制備方法為選取上述原料藥丹參300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份、何首烏200-400重量份、山楂200-400重量份；以上五味，加水煎煮二次，第一次l-3小時，第二次0.5-1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精300-600重量份、甜菊素1.5-5重量份，制成顆粒500-1000重量份，即得。本發(fā)明藥物組合物顆粒劑優(yōu)選的制備方法為選取原料藥丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首烏300重量份、山楂300重量份以上五味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精500重量份、甜菊素3重量份，制成顆粒800重量份，即得；本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別方法A.葛根的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙酸乙酯10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇0.5-2ml溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5-20W,分別點于同一硅膠G薄層板上，以15-40:5-20:0.5-2比例的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B.丹參的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加30-70mL50-80。/。乙醇溶液超聲提取10-40min，濾過，濾液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用稀HC調(diào)PH值至1~2，用乙醚提取2-4次，每次10-30mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加0.5-2ml乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液3-7ul，樣品溶液10-20uL，分別點于同一硅膠G板上，以10-30:2-6:0.5-2比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；C.川芎的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加50-80%乙醇30-70mL，超聲提取20-40min，濾過，濾液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用乙酸乙酯提取l-4次，每次10-30mL，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯10-30mL，超聲提取10-30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液3~5uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5-15:0.5-2比例的正己垸-乙酸乙酯為展幵劑，預(yù)飽和10-20min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點；D.丹參的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙醚10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材0.5-2g，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各5-15uL，點于同一硅膠G薄層板上，以10-30:0.5-2比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾干，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點；含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以4-12:80-100比例的甲醇-1%醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm;理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加30-70%甲醇制成每lml含20-80yg的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素18-72ug)，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研成細粉，取約0.3-0.8g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入30-70%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)3-10分鐘，放冷，再稱定重量，用30-70%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45um)過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液5-15p1，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10.0mg，即得；B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以15-35:65-85比例的甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加20-50%乙醇制成每lml含10.0-20.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取0.3-0.8g，置具塞錐形瓶中，精密加20-50%乙醇30-70ml,稱定重量，加熱回流20-40min，放冷，再稱定重量，用20-50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10iil，注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得；C.川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以20-50:50-70:0.5-2比例的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25。C;對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含20.0-40.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取5.0-10.0g，溶于10-30ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10-20ml，合并乙醚液于50'C水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10iU，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。本發(fā)明藥物組合物的優(yōu)選質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別方法A.葛根的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙酸乙酯20ral，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各IOW，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:0.25比例的三氯甲垸-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加50mL70。/。乙醇溶液超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HC1調(diào)PH值至1~2，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加lmL乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液5uL，樣品溶液15uL，分別點于同一硅膠G板上，以20:4:1比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；C.川芎的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加70。/。乙醇50mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯20mL，超聲提取20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液3~5uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1比例的正己垸-乙酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15min，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點；D.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙醚10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材lg，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各lOuL，點于同一硅膠G薄層板上，以19:1比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾千，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點；含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇_1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm，理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50Ug的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45ug)，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45um)過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10mg，即得；B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水(25:75)為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加30%乙醇制成每lml含16.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10phi1，注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得；C.川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水-冰醋酸(40:60:l)為流動相；檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25'C;對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含30.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取8.0g，溶于20ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于50。C水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。本發(fā)明所述重量份與體積份的關(guān)系為克/毫升。本發(fā)明藥物組合物用于治療心腦血管疾病的藥物，尤其適用于缺血性心腦血管疾病，動脈硬化，腦血栓，腦缺血，冠心病，心絞痛等。本發(fā)明藥物組合物經(jīng)實驗研究證實可明顯延長小鼠體內(nèi)頸動脈血栓的形成；能明顯改善腦缺血引起的毛細血管通透性增加；對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用；能顯著降低大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積和紅細胞聚集指數(shù)；對腦血栓形成患者語言障礙的改善、肢體功能的恢復(fù)以及綜合功能的改善均有顯著作用；具有見效快，無毒副作用，使用安全，獲效后不易復(fù)發(fā)等優(yōu)點。本發(fā)明所提供的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗篩選后得到，鑒別方法中通過對樣品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得鑒別專屬性很好，而且方法經(jīng)濟適用、結(jié)果快速，并且對不同的薄層板都能應(yīng)用。含量測定方法中通過對樣品、供試品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得含量測定方法可以很有效的對產(chǎn)品進行質(zhì)量控制，并且用該方法測定的產(chǎn)品相比其他方法測定的產(chǎn)品在藥效上表現(xiàn)的更為穩(wěn)定。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1.質(zhì)量檢測方法篩選試驗(1)薄層鑒別方法的篩選空白樣品的制備按本發(fā)明藥物組藥味與用量比例，分別自配不含丹參、川芎、葛根的群藥，按制備工藝制成空白樣品制劑。丹參的鑒別方法篩選丹參為方中的君藥，其中的主要成分為丹酚酸B、原兒茶醛、丹參酮IU等取實施例7本發(fā)明顆粒劑0.625倍每次用劑量，分別按下表方法操作表1丹參的鑒別方法篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2丹參的鑒別方法篩選(續(xù)表l)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>通過以上篩選試驗，證明方法1和方法5為該組合物優(yōu)選的鑒別丹參的方法。川芎的鑒別方法篩選取本品0.625倍每次用劑量，分別按下表方法操作表3川芎的鑒別方法篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>通過以上篩選試驗，證明方法2為該組合物優(yōu)選的鑒別川芎的方法。葛根的鑒別方法篩選取本品0.625倍每次用劑量，分別按下表方法操作表4葛根的鑒別方法篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>通過以上篩選試驗，證明方法2為該組合物優(yōu)選的鑒別葛根的方法。(2)含量測定方法的篩選丹參含量測定采用高效液相色譜法測定本發(fā)明藥物中的丹參素的含量，丹參含量以丹參素計，以完善本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法，部分試驗結(jié)果見下試驗儀器高效液相色譜儀島津，LC-10Atvp(威馬龍色譜站)分析天平梅特勒，AE240色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150mm，5ta)對照品丹參素鈉購于中國藥品生物制品檢定所批號110855-200506①色譜條件的優(yōu)化實驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-W醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000。分別配制以下比例的流動相甲醇-1%醋酸溶液(8:72)、甲醇_1%醋酸溶液(8:82)、甲醇-1%醋酸溶液(8:92)、甲醇-1%醋酸溶液(8:102)、甲醇-1%醋酸溶液(8:112)分別按以上色譜條件進樣對照品、樣品，結(jié)果見下表5:表5色譜條件的優(yōu)化<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>全分離全分離_§_象實驗結(jié)果表明，優(yōu)選流動相為甲醇_1%醋酸溶液(8:92)。②樣品處理條件的優(yōu)化對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50ug的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45yg)，即得。供試品溶液的制備取實施例7本發(fā)明顆粒劑，研細，精密稱取0.5g五份，No.lNo.5精密加入50y。乙醇25ml，密塞，稱重，超聲處理，放冷，再稱定重量，補足減失的溶劑重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。供試品溶液，按上述色譜條件，進樣20)il測定，并對測定結(jié)果進行統(tǒng)計，結(jié)果見表6。表6超聲時間考察(丹參素含量mg/g)l(lmin)2(3min)3(5min)4(10min)5(15mir00.52310.57260.63480.63510.63480.51230.58460.63540.63650.63510.54720.59150.62840.62870.62840.51290.58420.63180.63040.6311X0.52390.58320.63260.63270.6324實驗結(jié)果顯示，各組間無明顯差異。但以超聲1分鐘及3分鐘的含量略低。5分鐘，10分鐘含量基本一致。依以上方法，在提取時間為5min的條件下，考察甲醇溶液的濃度，結(jié)果見下表7表7提取溶液濃度考察(丹參素含量mg/g)20%30%50%60%70%0.42610.56310.64820.64740.64530.42440.57070.64780.64910.64320.43850.55510.63850.63720.64530.42540.55830.64070.63690.6324X0.42860.56180.64380.64270.6416實驗結(jié)果顯示，各組間無明顯差異，以50%甲醇液提取，丹參素得率較高。依以上方法，在提取時間為5min，提取液為50%甲醇的條件下，考察加溶劑倍數(shù)，結(jié)果見表8:表8加溶劑倍數(shù)的考察(丹參素含量mg/g)20倍30倍50倍70倍80倍0.55350.55530.58820.58750.63150.66230.64250.65420.56520.56210.55420.5575X0.55510.58820.58780.58790.65250.64030.64670.63340.64540.64390.63230.64140.6003結(jié)果可知各組間無明顯差異，加50倍量溶劑條件下丹參素得率較高。結(jié)論確定樣品的提取條件提取溶劑為50倍量的50%甲醇，超聲5分鐘。③含量檢測的方法學(xué)考察對本發(fā)明藥物所采用的含量檢測方法，從線性關(guān)系、穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性、回收率等方面進行了相關(guān)方法學(xué)考察，具體方法及結(jié)果如下穩(wěn)定性試驗精密吸取同一本藥物組合物供試品溶液5ul，分別于配制后0、2、4、6、8、24小時，依法測定，結(jié)果見表9:表9穩(wěn)定性測定結(jié)果<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>結(jié)果表明丹參素鈉在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。線性關(guān)系考察取丹參素對照品溶液(43.2Pg/ml)搖勻，分別精密吸取2.5、5、7.5、10、注入高效液相色譜儀，測定峰面積，結(jié)果見表IO，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。Area=929622.247X-6438.649(R=0.9998)表10丹參素鈉對照品線性關(guān)系考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>精密度試驗精密吸取同一丹參素對照品溶液(43.2Pg/ml)5W，重復(fù)進樣6次，結(jié)果見表ll:表ll丹參素對照品精密度試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>結(jié)果顯示相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，說明精密度良好。重現(xiàn)性試驗按正文方法，取同一批號本發(fā)明藥物組合物制劑制備5份樣品進行測定，結(jié)果見表12:表12樣品重現(xiàn)性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>平均含量(mg/g)2.6485RSD(%)1.5395結(jié)果顯示5份樣品中丹參素的含量平均為2.6485mg/g,其RSD值為1.5395%，符合試驗要求，表明該方法重現(xiàn)性好?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥眨芊Q取己知含量的同一批號的樣品約0.24g，分別精密加入丹參素對照品溶液(43.2Pg/ml)15ml，再加入50%甲醇10ml，按正文供試品溶液的制備方法及上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結(jié)果見表13。回收率%=謹參素含量-樣品中丹參腦環(huán)%加入丹參素對照品的量表13加樣回收率試驗結(jié)果試驗號取樣量g樣品中量Dig加入的量(mg)測出的量(mg)回收率％平均回收率(％)RSD(%)10.23900.63300.6481.263097.2320.24020,63620.6481.276598.8230.24]00.63830.6481.2939101.1799.431.4940.23940.63410.6481.280699.7850.24060.63720.6481.2861100.13結(jié)果表明丹參素回收率在97%101.2%之間，平均回收率為99.43%，符合規(guī)定。從以上試驗結(jié)果可以看出，對本發(fā)明藥物制劑中的有效成份丹參素進行含量檢測控制，以控制處方中丹參的生藥量，方法穩(wěn)定、科學(xué)，可以有效保證藥物質(zhì)量和療效，這也是本發(fā)明藥物療效與同類產(chǎn)品比較更顯著的原因。葛根含量測定采用高效液相色譜法測定本發(fā)明藥物中的葛根素的含量，以完善本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法，部分試驗結(jié)果見下試驗儀器高效液相色譜儀島津，LC-10Atvp(威馬龍色譜站)分析天平梅特勒，AE240色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150mm，5Mra)對照品葛根素購于中國藥品生物制品檢定所批號120456-200703①色譜條件的優(yōu)化實驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水為流動相;檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000。柱溫為室溫，對流動相中甲醇與水的比例進行了研究，優(yōu)化了色譜條件。分別配制以下比例的流動相:甲醇-水(25:65)、甲醇-水(25:70)、甲醇-水(25:75)、甲醇-水(25:80)、甲醇-水(25:85)分別按以上色譜條件進樣對照品、樣品，結(jié)果見下表14:表14色譜條件的優(yōu)化<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實驗結(jié)果顯示，優(yōu)選流動相為甲醇-水(25:75)。②樣品處理條件的優(yōu)化對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量,加3(W乙醇制成每lml含16.Oug的溶液,即得。取實施例7本發(fā)明顆粒劑，研細，精密稱取0.5g五份，No.1No.5精密加入3(M乙醇25ml，密塞，稱重，按下表條件加熱回流，放冷，再稱定重量,補足減失的溶劑重量,搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液，按上述色譜條件，進樣20iil測定，并對測定結(jié)果進行統(tǒng)計，結(jié)果見表15。表15提取時間考察(葛根素含量mg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實驗結(jié)果顯示，各組間無明顯差異。但以超聲10分鐘及20分鐘的含量略低。30分鐘，40分鐘含量基本一致。依以上方法，在提取時間為30min的條件下，考察提取溶劑的濃度，結(jié)果見下表16表16提取溶劑濃度考察(葛根素含量mg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實驗結(jié)果顯示，各組間無明顯差異，以30%乙醇液提取，葛根素得率較高。依以上方法，在提取時間為30min，提取溶劑為30%乙醇的條件下，考察加溶劑倍數(shù)，結(jié)果見表17。表17加溶劑倍數(shù)的考察(葛根素含量mg/g)<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>結(jié)果可知各組間無明顯差異，加100倍量溶劑條件下葛根素得率較高，超過100倍量溶劑變化減少。結(jié)論確定樣品的提取條件提取溶劑為100倍量的60%甲醇，超聲30分鐘。③含量檢測的方法學(xué)考察對本發(fā)明藥物所采用的含量檢測方法，從線性關(guān)系、穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性、回收率等方面進行了相關(guān)方法學(xué)考察，具體方法及結(jié)果如下-穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品品溶液5ul，分別于配制后0、2、4、6、8、24小時，依法測定，結(jié)果見表18:表18穩(wěn)定性測定結(jié)果<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>精密度試驗精密吸取同一葛根素對照品溶液(16.Wg/ml)5W，重復(fù)進樣6次，結(jié)果見表20:表20葛根素對照品精密度試驗結(jié)果<table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>結(jié)果顯示相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2%，說明精密度良好。重現(xiàn)性試驗按正文方法，取同一批號本藥物組合物樣品制備5份樣品進行測定，結(jié)果見表21:表21樣品重現(xiàn)性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>結(jié)果顯示5份樣品中葛根素的含量平均為0.3110mg/g，其RSD值為1.18%，符合試驗要求，表明該方法重現(xiàn)性好?；厥章试囼灢捎眉訕踊厥?，精密稱取已知含量的同一批號的樣品約0.24g，分別精密加入葛根素對照品溶液(16.0Pg/ml)15ml，再加入50%甲醇10ml，按正文供試品溶液的制備方法及上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結(jié)果見表22?；厥章剩?測出葛根素含量-樣品中葛根素含量加入葛根素對照品的量表22回收率試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>結(jié)果表明葛根素回收率在97.69%102.5%之間，平均回收率為99.39%，符合規(guī)定。從以上試驗結(jié)果可以看出，對本發(fā)明藥物制劑中的有效成份葛根素進行含量檢測控制，以控制處方中葛根的生藥量，方法穩(wěn)定、科學(xué)，可以有效保證藥物質(zhì)量和療效，這也是本發(fā)明藥物療效與同類產(chǎn)品比較更顯著的原因。川芎含量測定采用高效液相色譜法測定本發(fā)明藥物中的阿魏酸的含量，以完善本發(fā)明的質(zhì)量檢測方法，部分試驗結(jié)果見下試驗儀器高效液相色譜儀島津，LC-10Atvp(威馬龍色譜站)分析天平梅特勒，AE240色譜柱迪瑪公司(ZorbaxC184.6X150mm,5Mm)對照品阿魏酸購于中國藥品生物制品檢定所批號148658-200612①色譜條件的優(yōu)化實驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水為流動相;檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000。柱溫為室溫，對流動相中甲醇與水的比例進行了研究，優(yōu)化了色譜條件。分別配制以下比例的流動相甲醇-水-冰醋酸(40:40:1)、甲醇-水(40:50:1)、甲醇-水(40:60:1)、甲醇-水(40:70:1)、甲醇-水(40:80:1)分別按以上色譜條件進樣對照品、樣品，結(jié)果見下表23:表23色譜條件的優(yōu)化<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實驗結(jié)果顯示，優(yōu)選流動相為甲醇-水-冰醋酸(40:60:1)。②樣品處理條件的優(yōu)化對照品溶液的制備精密稱阿魏酸對照品適量,加入甲醇溶液制成每lml含30.72ug的溶液，即得。取實施例7本發(fā)明顆粒劑，研細，精密稱取0.5g五份，No.1No.5精密加入甲醇溶液25ml,密塞，稱重，加熱回流,放冷，再稱定重量,補足減失的溶劑重量，搖勻，濾過,取續(xù)濾液，即得供試品溶液，按上述色譜條件，進樣20"1測定，并對測定結(jié)果進行統(tǒng)計，結(jié)果見表24。表24提取時間考察(阿魏酸含量mg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實驗結(jié)果顯示，各組間無明顯差異。但回流10分鐘及20分鐘的含量略低。30分鐘，40分鐘含量基本一致。依以上方法，在提取時間為30min，提取液甲醇的條件下，考察加溶劑倍數(shù)，結(jié)果見表25。表25加溶劑倍數(shù)的考察(阿魏酸含量mg/g)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>結(jié)果可知各組間無明顯差異，加90倍量溶劑條件下阿魏酸得率較高,溶劑超過90倍量幾乎無變化。結(jié)論確定樣品的提取條件提取溶劑為90倍量的甲醇溶液，回流30分鐘。③含量檢測的方法學(xué)考察對本發(fā)明藥物所采用的含量檢測方法，從穩(wěn)定性、線性關(guān)系、精密度、重現(xiàn)性、回收率等方面進行了相關(guān)方法學(xué)考察，具體方法及結(jié)果如下穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品品溶液5ul，分別于配制后0、2、4、6、8、24小時，依法測定，結(jié)果見表26:表26穩(wěn)定性測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>結(jié)果表明葛根素在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。線性關(guān)系考察準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的阿魏酸對照品51.2mg,置于100ml量瓶中.加入甲醇溶解并稀釋至刻度(作為貯備液)臨用前以甲醇將貯備液稀釋成阿魏酸濃度為5.12.10.24.20.48.30.72.51.20ug/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件每次進樣lOul.以峰而積均值Y(『3)對濃度X進行線性回歸.得回歸方程<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>表27阿魏酸對照品線性關(guān)系考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表明阿魏酸檢測濃度在5.12-51.20ug/ml范圍內(nèi)與峰而積值呈.良好線性關(guān)系。精密度試驗取阿魏酸對照品溶液(30.72ug/ml)連續(xù)進樣5次.進樣量lOul.測得峰面積值依次為1552238、1562644、1565656、1546531、1539120.計算出R5D=0.71%結(jié)果表明.儀器與色譜條件均具有良好的精密度重現(xiàn)性試驗按正文方法，取同一批號本藥物組合物樣品制備5份樣品進行測定，結(jié)果見表21:表28樣品重現(xiàn)性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>結(jié)果顯示5份樣品中阿魏酸的含量平均為0.1552mg/g，其RSD值為1.0%，符合試驗要求，表明該方法重現(xiàn)性好?；厥章试囼灉?zhǔn)確量取同一批己知阿魏酸含量(O.1864ug/g)的通脈顆粒5g共6份.按低、中、高梯度精密添加阿魏酸對照品溶液(0.5120ug/m1)1.0、1.5、2.Oml，定容至10ml.按上述方法測定含量測得平均回收率為99.50%,RSD=1.83%回收率試驗結(jié)果詳見表29表29回收率試驗結(jié)果(n=6)己知量加入量(mg)實測量(mg)回收萄S平均回收率RSD(%)(mg)(%)(%)0.7320.5121.246100.3999.500.7320.5121.257102.540.7320.7681.49198.831.830.7320.7681.49799.610.7321.0241.73097.430.7321.0241.73798.14結(jié)果表明阿魏酸回收率在97.43°/。100.39%之間，平均回收率為99.50%，符合規(guī)定。結(jié)論:從以上試驗結(jié)果可以看出，對本發(fā)明藥物制劑中的有效成份阿魏酸進行含量檢測控制，以控制處方中川芎的生藥量，方法穩(wěn)定、科學(xué)，可以有效保證藥物質(zhì)量和療效，這也是本發(fā)明藥物療效與同類產(chǎn)品比較更顯著的原因。實驗例2.藥效學(xué)實驗該藥物具有活血通脈的作用。根據(jù)其功能主治，本實驗?zāi)康氖怯^察驗證其藥理作用。實驗器材藥物本發(fā)明藥物組I:實施例l制得藥物本發(fā)明藥物組n:實施例9制得藥物本發(fā)明藥物組III:實施例8制得藥物本發(fā)明藥物組IV:實施例7制得藥物陽性對照組活血通脈膠囊12粒/板。批號06070101。由新鄉(xiāng)恒久遠藥業(yè)有限公司提供。動物Wistar大鼠170只，雌雄兼有。購自中國科學(xué)院遺傳研究所實驗動物中心，合格證號DB11/019.1-92儀器實驗性體內(nèi)血栓形成儀、VZS-723分光光度計、PAT-4型血小板聚集儀、R80血液黏度儀。方法和結(jié)果(1)本發(fā)明藥物抗大鼠頸動脈血栓形成實驗Wistar雄性大鼠60只，體重(232土21)g。隨機分為6組，即本發(fā)明藥物I-IV0.24g/kg、陽性對照藥活血通脈膠囊組0.24g/kg及空白對照組，每組10只。灌胃給藥。每日1次，連續(xù)給藥5天。給藥體積為2ml/200g。對照組給予等容積的生理鹽水。于末次給藥后1.5h開始實驗。大鼠經(jīng)2.5%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，分離右側(cè)頸總動脈，采用電流損傷頸動脈內(nèi)膜法在動脈上放置電極進行電刺激(2mA，7min)，記錄自電刺激開始至血栓形成時間。結(jié)果詳見表30:_表30本發(fā)明藥物對大鼠頸動脈血栓形成的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01;與本發(fā)明藥物組IV比較眾P〈0.05;與活血通脈膠囊組比較※P〈0.05;結(jié)果表明本發(fā)明藥物I-IV均可明顯延長小鼠體內(nèi)頸動脈血栓的形成，與活血通脈膠囊相同劑量相比具有顯著性差異；本發(fā)明藥物組i-m與本發(fā)明藥物組iv比較，有顯著性差異，本發(fā)明藥物m最優(yōu)。(2)本發(fā)明藥物對大鼠腦組織毛細血管通透性的影響Wistar大鼠70只，體重(215士26)g，雌雄各半。隨機分為7組，本發(fā)明藥物I-IV0.24g/kg，陽性對照藥活血通脈膠囊組0.24g/kg、腦缺血模型組和假手術(shù)組，每組10只。灌胃給藥。每日l次，連續(xù)給藥5天。給藥體積為2ml/200g。假手術(shù)組和腦缺血模型組給予等體積的生理鹽水。于末次給藥后1.5h開始實驗。動物用25。/。烏拉坦(lg/kg)腹腔麻醉。頸部正中切口，分離兩側(cè)頸總動脈，穿線備用。缺血模型組及各藥物實驗組則在結(jié)扎兩側(cè)頸總動脈前5min由尾靜脈注射伊文思藍50mg/kg。假手術(shù)組與模型組和各實驗組相同要求時間尾靜脈注射伊文思藍50mg/kg，但不結(jié)扎兩側(cè)頸總動脈。結(jié)扎3h后，斷頭取腦稱重，并分別浸泡于甲酰胺溶液(4ml/腦)中，在45'C恒溫箱中溫育72h，待腦組織中伊文思藍色素全部浸出，取含伊文思藍色素液于VZS-723分光光度計620nm處進行比色，測定OD值。結(jié)果詳見表3h表31本發(fā)明藥物對大鼠腦組織毛細血管通透性的影響組別OD值假手術(shù)組腦缺血模型組活血通脈膠囊本發(fā)明藥物組I本發(fā)明藥物組II0.048±0.0040.065±0.011*女0.060±0.0050.052±0.015*※0.051±0.017**眾※本發(fā)明藥物組m0.049±0.010**☆《本發(fā)明藥物組IV_0.053±0.012**※_與假手術(shù)組比較**P<0.01;與腦缺血模型比較*<0.05，**P<0.01;與本發(fā)明藥物組IV比較眾P〈0.05;與活血通脈膠囊組比較※P〈0.05;結(jié)果表明本發(fā)明藥物組I-IV均可明顯改善腦缺血引起的毛細血管通透性增加，本發(fā)明藥物組優(yōu)于活血通脈膠囊組；本發(fā)明藥物組n、III優(yōu)于本發(fā)明藥物IV。(3)本發(fā)明藥物對大鼠血小板聚集功能的影響Wistar大鼠60只，體重(228土19)g，雌雄各半。隨機分為6組，即本發(fā)明藥物I、II、III、IV組，陽性對照藥活血通脈膠囊組及空白對照組，每組10只。灌胃給藥。每日1次，連續(xù)給藥5天。給藥體積為2ml/200g。對照組給予等容積的生理鹽水。于末次給藥后1.5h開始實驗。從頸靜脈取血2.5ml放入加3.8。/。枸櫞酸鈉的試管內(nèi)(與血液之比為l:9)，封口，混勻。以1000r/min離心10min，分離出富血小板血槳(PRP);以3000r/min離心30min，分離出貧血小板血漿(PPP)，對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集進行測定，并計算最大聚集率和5min解聚率。結(jié)果詳見表32:表32本發(fā)明藥物對大鼠血小板聚集功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05,**P<0.01;與本發(fā)明藥物組IV比較眾P〈0.05，與對照藥物比較AP〈0.05結(jié)果表明本發(fā)明藥物對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用，本發(fā)明藥物與對照藥物活血通脈膠囊相比具有顯著性差異，本發(fā)明藥物組I-III與本發(fā)明藥物組IV比較，有顯著性差異，本發(fā)明藥物III最優(yōu)。(4)對ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集有明顯抑制作用本發(fā)明藥物對大鼠血液黏度的影響Wistar雄性大鼠60只，體重(231土25)g，隨機分為6組，每組IO只，灌胃給藥，每日l次，連續(xù)給藥5天，給藥體積為2ml/200g;對照組給予等容積的生理鹽水，于末次給藥后1.5h從頸靜脈采血2ml(抗凝)，用R80血液黏度儀測定血液黏度。結(jié)果詳見表33表33本發(fā)明藥物對大鼠血液黏度的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01，與對照藥物比較AP0.05，與本發(fā)明藥物組IV比較眾P0.05結(jié)果表明本發(fā)明藥物能顯著降低大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積和紅細胞聚集指數(shù)，與對照藥物活血通脈膠囊相比有顯著性差異，本發(fā)明藥物組i-m與本發(fā)明藥物組iv比較，有顯著性差異，本發(fā)明藥物ni最優(yōu)。(5)對家兔離體腸管的作用。取家兔60只，處死，迅速剖取回盲部一段回腸，立即于冷凍的臺氏液中保養(yǎng)。實驗時剪取長約1.5cm長段，用DC-001型離體器官測定儀記錄，紙素20mm/min,待平靜15nin后，描記一段正常收縮曲線，依次給藥，記錄曲線，結(jié)果見表34表34對離體家兔回腸平滑肌的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>**與蒸餾水組比較，p<0.01以上試驗說明，含有山楂與何首烏的本發(fā)明藥物組n、m能顯著增強離體家兔回腸平滑肌的收縮力和收縮頻率。(6)對胃腸推進運動的影響取小鼠90只，分組及給藥同前。實驗前禁食12h，不禁水，六組分別灌胃碳末阿拉伯膠混懸液0.lml/10g,15分鐘后將動物處死測定碳末推進百分率結(jié)果見表35。表35對小鼠胃腸推進運動的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>與蒸餾水組比較，**p<0.01以上試驗說明，含有山楂與何首烏的本發(fā)明藥物組n、m能顯著增強小鼠胃腸推進運動。實驗例3、毒性試驗(1)急性毒性實驗昆明種小鼠20只，體重20士2g，雌雄兼有。購自甘肅省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院實驗動物中心，合格證號甘醫(yī)動字14-009號。動物以2.4g/kg、3.6g/kg、0.8ml/20g灌胃本藥物組合物后，行為活動正常，飲食體重等各種狀況無明顯變化，無一動物死亡，未能測出LD50，遂進行小鼠最大給藥量試驗。動物以3.6g/kg、0.8ml/20g—日間隔4h，灌胃本藥物組和物兩次后，觀察一周，小鼠行為活動正常，飲食體重等各種狀況無明顯變化，無動物死亡。結(jié)果可見小鼠未見明顯中毒表現(xiàn)，表明小鼠最大給藥量〉14.4g/kg。相當(dāng)于人用量的180倍。結(jié)論本發(fā)明藥物對小鼠急性毒性實驗表明，該藥對小鼠最大給藥量〉14.4g/kg，相當(dāng)于人用量的180倍。(2)長期毒性實驗方法選健康Wistar大鼠80只，雌雄各半，隨機分為四組。每組20只陰性對照組，本發(fā)明藥物大、中、小劑量組，給藥劑量分別為1.6、4.8、7.2g/kg.d，雌雄分籠詞養(yǎng)，室溫1920°C，相對濕度4560%,每天灌胃一次，對照組給予等量常水，給藥前、后及停藥15天后測大鼠血象及血液生化指標(biāo)，每周給藥6天，于90天實驗結(jié)束時處死動物，做病理組織學(xué)檢查。一般狀況實驗期間觀察記錄各組動物飲水、進食、活動、糞便、毛色等一般狀況，每隔10天稱重一次。血液及生化指標(biāo)于給藥前、后停藥15天后檢測大鼠血象白細胞計數(shù)(WBC)、白細胞分類(DC%)、紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HB)、血小板(PC);血液生化指標(biāo)總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、血糖(GLU)、總膽固醇(T-CHO)、總膽紅素(T-BIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)共9項，結(jié)果未見異常反應(yīng)。實驗例4、臨床療效觀察試驗臨床通過本藥物組合物顆粒劑的療效觀察，來觀察風(fēng)痰祛瘀、痹阻脈絡(luò)證患者420例，其中急性期治療組(本發(fā)明藥物顆粒劑)120例，對照組(活血通脈膠囊)60例，非對照組試驗組60例；恢復(fù)早期治療組、對照組、非對照試驗組各60例。(1)對語言障礙的改善表36治療前后各組語言障礙療效比較(例)<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>由表可看出本品對腦梗塞病人語言功能恢復(fù)有明顯作用(2)不同病理時期臨床療效比較表37:不同病期總療效比較<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*治療組與對照組比較P<0.05;A治療組與非對照試驗組比較P<0.05由表顯示，無論急性期還是恢復(fù)早期，治療組療效均優(yōu)于對照組。經(jīng)臨床觀察結(jié)果說明，本發(fā)明藥物對腦血栓形成患者語言障礙的改善、肢體功能的恢復(fù)以及綜合功能的改善均有顯著作用。充分證明本發(fā)明藥物是治療腦血栓形成的急性期、恢復(fù)早期具有顯著效果，臨床應(yīng)用安全。具體實施例方式下述實施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實驗例所述的效果實施例l顆粒劑丹參500g川芎220g葛根220g以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精320g、甜菊素2g,制成顆粒500g，即得。實施例2片劑丹參350g川芎250g葛根250g以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精80g，制成顆粒，干燥，整粒250g，加入硬脂酸鎂10g，混勻，壓片，包衣，得500片，即得。實施例3膠囊劑丹參600g川芎200g葛根300g以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精60g，制成顆粒280g，裝膠囊，得700粒，即得。實施例4滴丸劑丹參400g川芎225g葛根225g何首烏300g山楂200g以上五味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，干燥，粉碎成細粉，取200-300g聚乙二醇一6000,加入上述藥粉攪拌均勻，加熱熔融后，保持溫度在609(TC，滴入液體石蠟中(05'C),滴制成滴丸，即得。實施例5口服液丹參400g川芎200g葛根200g何首烏300g山楂300g以上五味，加水煎煮二次，第一次1.5小吋，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至適量，用調(diào)節(jié)pH值至8，加2%明膠溶液適量；使沉淀完全，濾過，濾液濃縮至適量，冷藏24小時，濾過，濾液加入附加劑適量，調(diào)整總量至600ml,攪勻，靜置，灌封，滅菌，即得。實施例6丹參500g川芎500g葛根500g以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，然后制成本領(lǐng)域各種常規(guī)制劑，如膠囊劑、片劑、顆粒劑。鑒別方法A.葛根素的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙酸乙酯20ml，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各IOW，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:0.25比例的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。B.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加50mL70。/。乙醇溶液超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HC1調(diào)PH值至12，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加lmL乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液5uL，樣品溶液15uL,分別點于同一硅膠G板上，以20:4:1比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。C.川芎的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加70o/。乙醇50mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯20mL，超聲提取20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液3~5uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1比例的正己烷-乙酸乙酯為展開齊U，預(yù)飽和15min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點。D.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙醚10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材lg，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各10uL，點于同一硅膠G薄層板上，以19:1比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾干，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點。含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，力卩50%甲醇制成每lml含50ug的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45yg)，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45um)過濾，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOul，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10.0mg，即得。B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料；以甲醇-水(25:75)為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加30%乙醇制成每lml含16.0ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取0,5g，置具塞錐形瓶中，精密加30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液l(HU，注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得。C川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水-冰醋酸(40:60:l)為流動相；檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25t:。對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含30.0ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取8.0g，溶于20ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于5(TC水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOul，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。實施例7丹參500g川芎500g葛根500g以上三味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精500g、甜菊素3g,制成顆粒800g，即得；鑒別取本品5g,加乙酸乙酯20ml，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10W，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-甲醇-水(7:2.5:0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000。取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50jig的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45iig)，即得。取本品適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50^甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45yra)過濾，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10wl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每袋含丹參以丹參素(C9HiA)計，不得少于10mg。功能主治活血通脈。用于缺血性心腦血管疾病，動脈硬化，腦血栓，腦缺血，冠心病，心絞痛。用法用量口服。一次8g，一日23次。規(guī)格每袋裝8g實施例8丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首烏300重量份、山楂300重量份以上五味，加水煎煮二次，第一次L5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精500g、甜菊素3g，制成顆粒800g，即得；鑒別方法A.葛根素的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑，加乙酸乙酯20ml，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各1014，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:0.25比例的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。B.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑，加50mL70Q/Q乙醇溶液超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HC1調(diào)PH值至1~2，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加lmL乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液5uL，樣品溶液15uL，分別點于同一硅膠G板上，以20:4:1比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。C.川芎的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑，力Q70%乙醇50mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL,合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯20mL，超聲提取20min,濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液3~5uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1比例的正己垸-乙酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點。D.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑，加乙醚10-30ml,超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材lg，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各10uL，點于同一硅膠G薄層板上，以19:1比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾干，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點。含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇_1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50Ug的溶液(相當(dāng)于每lral含丹參素45ug)，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50X甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45wm)過濾，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10yl，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10.Omg，即得。B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水(25:75)為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加30%乙醇制成每lml含16.0ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑適量，研細，精密稱取o.sg，置具塞錐形瓶中，精密加30%乙醇50ml,稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul,注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得。C川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填料；以甲醇-水-冰醋酸(40:60:l)為流動相；檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25'C。對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含30.0ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑適量，研細，精密稱取8.0g，溶于20ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于5(TC水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10u1，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。實施例9.丹參350g川芎250g葛根250g何首烏200g山楂200g以上五味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精420g、甜菊素2.5g，制成顆粒660g，即得；鑒別取本品5g，加乙酸乙酯20ml，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10M，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲垸-甲醇-水(7:2.5:0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000。取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50ug的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45ug)，即得。取本品適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50X甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45um)過濾，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOiil，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每袋含丹參以丹參素(C孔A)計，不得少于10mg。功能主治活血通脈。用于缺血性心腦血管疾病，動脈硬化，腦血栓，腦缺血，冠心病，心絞痛。用法用量口服。一次8g，一日23次。規(guī)格每袋裝8g權(quán)利要求1、一種治療治療心腦血管疾病的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份。2、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份。3、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份。4、如權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參300-500重量份、川芎150-300重量份、葛根150-300重量份、何首烏200-400重量份、山楂200-400重量份。5、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參350-450重量份、川芎200-250重量份、葛根200-250重量份、何首烏250-350重量份、山楂250-350重量份。6、如權(quán)利要求l所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物的原料藥組成為丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首烏300重量份、山楂300重量份。7、如權(quán)利要求l-6意一項所述的中藥組合物，其特征在于它是膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、片劑、口服液。8、如權(quán)利要求l-6任意一項所述的中藥組合物顆粒劑的制備方法如下以上述原料藥，第一次l-3小時，第二次0.5-1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精300-600重量份、甜菊素1.5-5重量份，制成顆粒500-1000重量份，即得。9、如權(quán)力要求8所述中藥組合物顆粒劑的制備方法如下選取原料藥丹參400重量份、川芎225重量份、葛根225重量份、何首烏300重量份、山楂300重量份以上五味，加水煎煮二次，第一次1.5小時，第二次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.151.20的稠膏，加糊精500重量份、甜菊素3重量份，制成顆粒800重量份，即得。10、如權(quán)利要求1-6所述的任一中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定方法中的一種或幾種A.葛根的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙酸乙酯10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇0.5-2ml溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5-2(mi，分別點于同一硅膠G薄層板上，以15-40:5-20:0.5-2比例的三氯甲烷-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B.丹參的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加30-70mL50-80。/。乙醇溶液超聲提取10-40min，濾過，濾液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用稀HC1調(diào)PH值至1~2,用乙醚提取2-4次，每次10-30mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加0.5-2ml乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液3-7ul，樣品溶液10-20uL，分別點于同一硅膠G板上，以10-30:2-6:0.5-2比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；C.川芎的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加50-80%乙醇30-70mL，超聲提取20-40min，濾過，濾液蒸至近干，加水10-30mL充分溶解，用乙酸乙酯提取l-4次，每次10-30mL，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯10-30mL,超聲提取10-30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液35uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以5-15:0.5-2比例的正己垸-乙酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和10-20min，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點；D.丹參的定性鑒別取0.5-2倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙醚10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材0.5-2g，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各5-15uL，點于同一硅膠G薄層板上，以10-30:0.5-2比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾干，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點；含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以4-12:80-100比例的甲醇-1%醋酸溶液為流動相；檢測波長為280nm;理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加30-70%甲醇制成每lml含20-80ug的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素18-72ug)，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研成細粉，取約0.3-0.8g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入30-70^甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)3-10分鐘，放冷，再稱定重量，用30-70%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45lim)過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液5-15nl，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10.0mg，即得；B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填料；以15-35:65-85比例的甲醇-水為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加20-50%乙醇制成每lml含10.0-20.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取0.3-0.8§，置具塞錐形瓶中，精密加20-50%乙醇30-70ml，稱定重量，加熱回流20-40min，放冷，再稱定重量，用20-50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10"1，注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得；C.川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；以20-50:50-70:0.5-2比例的甲醇-水-冰醋酸為流動相；檢測波長為323nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25。C;對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含20.0-40.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取5.0-10.0g，溶于10-30ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10-20ml，合并乙醚液于50'C水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOul，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。11、如權(quán)利要求10所述的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別方法A.葛根的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙酸乙酯20ml，超聲處理20分鐘，濾過，揮干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；另取葛根素對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各IOW，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:0.25比例的三氯甲垸-甲醇-水為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加50mL70。/。乙醇溶液超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用稀HC1調(diào)PH值至1~2，用乙醚提取3次，每次20mL，合并乙醚液，用無水硫酸鈉脫水，濾過，蒸干乙醚，殘渣加lmL乙醇使溶解，作為供試品溶液；另取原兒茶醛對照品，加乙醇溶解，制成lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述對照品溶液5uL，樣品溶液15uL，分別點于同一硅膠G板上，以20:4:1比例的氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鐵乙醇溶液，用風(fēng)筒吹至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；C.川芎的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加70%乙醇50mL，超聲提取30min，濾過，濾液蒸至近干，加水20mL充分溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯層，用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘留物加乙酸乙酯lmL溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材0.5g，加乙酸乙酯20mL，超聲提取20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取對照藥材溶液3~5uL供試品溶液10uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1比例的正己烷-乙酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15min，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同的熒光斑點；D.丹參的定性鑒別取0.625倍每次服用劑量的本品制劑或內(nèi)容物，加乙醚10-30ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml溶解，作為樣品液；另取丹參酮IIA對照品，加入醋酸乙酯制成每lml含2mg的對照品液；再取丹參對照藥材lg，置于具塞試管中，加入乙醚5ml振搖，放置lh，過濾，濾液揮干，殘渣加入醋酸乙酯lml溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，取上述4種溶液各10uL，點于同一硅膠G薄層板上，以19:1比例的苯-醋酸乙酯為展開劑，展開，晾干，置于日光下檢視，供試品、丹參酮IIA對照品、丹參對照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點；含量測定方法A.丹參含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1%醋酸溶液(8:92)為流動相；檢測波長為280nm，理論板數(shù)按丹參素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備取丹參素鈉對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每lml含50yg的溶液(相當(dāng)于每lml含丹參素45ug)，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研成細粉，取約0.5g，精密稱定，置50ml錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)5分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補充減失的重量，搖勻，微孔濾膜(0.45um)過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOul，注入液相色譜儀，測定，丹參含量以丹參素納含量計每次服用量不得少于10mg，即得；B.葛根含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填料；以甲醇-水(25:75)為流動相；檢測波長為250nm，理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品適量，加30%乙醇制成每lml含16.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加30。/。乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液lOiU，注入液相色譜儀，測定，葛根含量以葛根素計每次服用量不得少于1.6mg，即得；C.川芎含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅垸鍵合硅膠為填料；以甲醇-水-冰醋酸(40:60:l)為流動相；檢測波長為323nm,理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于2000，柱溫25。C;對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每lml含30.0ug的溶液，即得；供試品溶液的制備取本藥物組合物制劑或內(nèi)容物適量，研細，精密稱取8.0g，溶于20ml蒸餾水中，置于分液漏斗中，用乙醚萃取3次，每次10ml，合并乙醚液于50'C水浴中揮干，殘渣置于25ml棕色量瓶中，加入甲醇溶解和定容，過濾，得供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10ul，注入液相色譜儀，測定，川芎含量以阿魏酸計每次服用量不得少于1.2mg，即得。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其質(zhì)量控制方法，屬于中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成為丹參、川芎、葛根等。本發(fā)明針對中藥療效不穩(wěn)定的問題提供上述原料制成的中藥組合物的質(zhì)量控制方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗篩選后得到，鑒別方法中通過對樣品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得鑒別專屬性很好，而且方法經(jīng)濟適用、結(jié)果快速，并且對不同的薄層板都能應(yīng)用。含量測定方法中通過對樣品處理方法的篩選，展開劑的選擇，使得含量測定方法可以很有效的對產(chǎn)品進行質(zhì)量控制，并且用該方法控制質(zhì)量的產(chǎn)品相比其他方法在藥效上表現(xiàn)的更為穩(wěn)定。文檔編號A61K36/537GK101361795SQ200710120119公開日2009年2月11日申請日期2007年8月9日優(yōu)先權(quán)日2007年8月9日發(fā)明者付建家,付立家申請人:北京亞東生物制藥有限公司