專利名稱：β葡聚糖合酶抑制劑與抗HSP90抗體聯(lián)合治療真菌感染的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的作為有效抗真菌劑的組合物及制劑，以及一種可組合到該組合物及制劑中的新抗體。

背景技術(shù)：
真菌感染是重癥監(jiān)護病房病人死亡的一個主要原因，較多發(fā)生于免疫減弱和身體衰弱的病人中(Gold，J.W.M.，1984，Am.J.Med.(美國醫(yī)學雜志)76458-463；Klein，R.S.等人，1984，N.Engl.J.Med.(英國國家醫(yī)學雜志)311354-357；Burnie，J.P.，1997，Current Anaesthesia & Critical Care(現(xiàn)代麻醉與急救)8180-183)。真菌感染的存在和持續(xù)可以歸結(jié)為廣譜抗真菌劑的選擇性壓力、病人經(jīng)常性延長在如重癥監(jiān)護病房等設(shè)施中的停留、診斷感染中的問題、以及治療中所應用的真菌試劑缺乏效力。雖然嚴格的衛(wèi)生控制可能在某種程度上預防醫(yī)院或其它環(huán)境中真菌的感染，但感染的暴發(fā)仍是一個嚴重的問題，需得到重視。
全身性真菌感染如侵襲性念珠菌病和侵襲性曲霉病可能由多種真菌病原體所引起，如毒性念珠菌屬的白色念珠菌、熱帶念珠菌、克柔克柔念珠菌以及次毒性的種類近平滑念珠菌和光滑球擬酵母(后者在某些文章中指光滑假絲酵母)。盡管白色念珠菌一度是從重癥監(jiān)護病房獲得的最常見的真菌分離物，但最近的研究顯示，熱帶念珠菌、光滑假絲酵母、近平滑念珠菌和克柔念珠菌現(xiàn)在占該類分離物的大約半數(shù)(Pfaller，M.A.等人，1998，J.Clin.Microbiol.(臨床微生物雜志)361886-1889；Pavese，P.等人，1999，Pathol.Biol.(生物病理學)46579-583)。非白色念珠菌種類的上升提示念珠菌屬出現(xiàn)對傳統(tǒng)抗真菌治療的耐藥性(Walsh，T.J.等人，New Eng.J.Med.(新英格蘭醫(yī)學雜志)340764-771)。
對造成感染的真菌病原體的檢測和診斷對隨后的治療至關(guān)重要，這是由于抗真菌劑可能對某些菌種更有效。英國專利2240979和EP專利0406029(在此將它們?nèi)恳氡疚淖鳛閰⒖嘉墨I)揭示了一種真菌應激蛋白和它的抗體，可用于一種靈敏的且高特異性的檢測真菌病原體的實驗中。
傳統(tǒng)上，用抗真菌劑兩性霉素B治療白色念珠菌、熱帶念珠菌和近平滑念珠菌，被認為是全身性抗真菌治療的“金標”(Burnie，J.P.，1997，見上文)。遺憾的是，兩性霉素B本身具高毒性，它的應用被其副作用如寒戰(zhàn)、發(fā)燒、肌痛或血栓性靜脈炎所影響。其它抗真菌劑包括口服吡咯藥物(咪康唑，酮康唑，伊曲康唑，氟康唑)和5-氟胞嘧啶。然而，真菌種類如克柔念珠菌和光滑球擬酵母對氟康唑具耐藥性，這些菌類經(jīng)常發(fā)生于已預防性施用了氟康唑的患者中。另外，已報道白色念珠菌對氟康唑具耐藥性的菌株(Opportunistic Pathogens(機會致病菌)，1997，127-31)。因此，盡管近期研究在治療藥物如氟康唑，伊曲康唑以及系統(tǒng)性基于脂質(zhì)體的兩性霉素B變異物上取得了進展(Burnie，J.P.，1997，見上文)，但是對有效治療真菌感染試劑的需求仍是很急迫的。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明通過提供一種新的組合物，致力于滿足以上所發(fā)現(xiàn)的需求，該組合物相對于本技術(shù)領(lǐng)域以前治療人類或動物真菌感染的抗真菌劑有明顯的改進，并且本發(fā)明也提供了一種可組合到該組合物中的新抗體。本發(fā)明所述組合物包括與已知的抗真菌劑混合的、可結(jié)合真菌應激蛋白的一個或多個抗原決定簇的抗體。發(fā)明者非常意外地發(fā)現(xiàn)，該抗真菌劑抗真菌感染的效力得到明顯的增強，從而允許使用低劑量或使原劑量發(fā)揮更好的效果，這樣降低了非必需的副作用。另外，本發(fā)明中的組合物可有效治療對該組合物中所使用的真菌試劑自身具耐藥性的真菌感染。
本發(fā)明提供一種組合物，該組合物包括一種可特異性結(jié)合一種真菌應激蛋白的一個或多個抗原決定簇的抗體或其中的抗原結(jié)合片段和一種抗真菌劑，該抗真菌劑包含至少一種選自多烯抗真菌劑和棘白菌素(echinocandin)抗真菌劑。
本發(fā)明進一步提供一種組合制劑，該制劑包含一種可特異性結(jié)合一種真菌應激蛋白的一個或多個抗原決定簇的抗體或其中的抗原結(jié)合片段、一種包含至少一種選自多烯抗真菌劑和一種棘白菌素抗真菌劑的抗真菌劑，用于在治療真菌感染時同時、單獨或相繼使用。
抗體可能針對來源于念珠菌屬或球擬酵母屬成員的一種熱休克蛋白有特異性。(一般認為，念珠菌屬或球擬酵母菌屬是同義的)。特別地，抗體可能對來源于白色念珠菌的hsp90的熱休克蛋白有特異性，正如英國專利2240979和EP專利0406029中所描述的。
抗體或其中的抗原結(jié)合片段可能對含有SEQ ID NO1所示序列的抗原決定簇具特異性?？贵w及其生產(chǎn)和應用已熟知并得到闡明，如Harlow，E和Lane，D.，AntibodiesA Laboratory Manual(抗體實驗室手冊)，冷泉港實驗室出版，冷泉港，紐約，1999。
抗體可經(jīng)本技術(shù)領(lǐng)域所熟知的標準方法進行生產(chǎn)?？贵w的例子包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段、由Fab表達文庫所產(chǎn)生的片斷、以及抗體的抗原結(jié)合片段。
抗體可由多種宿主生產(chǎn)，例如山羊、兔子、大鼠、小鼠、人等。宿主可由來源于念珠菌屬的熱休克蛋白進行注射免疫，如白色念珠菌的hsp90，或它的具有免疫原性的任何片段或寡肽。根據(jù)宿主的種類，可使用不同的佐劑以增強其免疫應答。這類佐劑包括，但不限于，福氏佐劑，礦物凝膠如氫氧化鋁，和表面活性物質(zhì)如溶血卵磷脂，聚醚多元醇，聚陰離子，多肽，油乳膠，匙孔血藍蛋白，和二硝基苯酚。在用于人類的佐劑中，BCG(結(jié)核菌苗)和小棒狀桿菌尤為有用。
抗來源于念珠菌屬的熱休克蛋白如白色念珠菌hsp90的單克隆抗體或其中的任何片段或寡肽，可由可連續(xù)培養(yǎng)的細胞系經(jīng)任何生產(chǎn)抗體分子的方法所制備。這些方法包括，但不限于，雜交瘤技術(shù)、人B細胞雜交瘤技術(shù)、和EBV(EB病毒)雜交瘤技術(shù)(Koehler等人，1975，Nature(自然)，256495-497；Kosbor等人，1983，Immunl.Today(今日免疫)472；Cote等人，1983，PNAS USA，802026-2030；Cole等人，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy(單克隆抗體和癌癥治療)，Alan R.Liss Inc，紐約，pp 77-96)。
另外，隨著“嵌合抗體”技術(shù)的發(fā)展，可采用將鼠抗體基因與人抗體基因拼接來獲得具合適的抗原特異性和生物活性的分子(Morrison等人，1984，PNAS USA 816851-6855；Neuberger等人，1984，Nature(自然)，312604-608；Takeda等人，1985，Nature(自然)，314452-454)。可選擇的，可采納已經(jīng)描述過的生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)，利用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法，生產(chǎn)念珠菌熱休克蛋白的特異性單鏈抗體。具有相關(guān)的特異性、但具有不同的獨特型組成的抗體，也可以從隨機組合的免疫球蛋白文庫中通過鏈改組進行生產(chǎn)(Burton，D.R.，1991，PNAS USA，88，11120-11123)。
抗體的生產(chǎn)也可通過誘導體內(nèi)淋巴細胞系的產(chǎn)生、或通過重組免疫球蛋白文庫進行篩選、或通過高特異性結(jié)合試劑面板篩選(Orlandi等人，1989，PNAS USA，863833-3837；Winter G等人，1991，自然，349293-299)。
也可以生產(chǎn)抗原結(jié)合片段，如F(ab’)2片段可通過用胃蛋白酶消化抗體分子而得到，F(xiàn)ab片段可通過還原F(ab’)2片段的二硫鍵而產(chǎn)生。可選擇的，可通過構(gòu)建Fab表達文庫而快速、簡單地鑒定具所需特異性的單克隆Fab片段(Huse等人，1989，Science(科學)，2561275-1281)。
可以應用各種免疫分析來篩選鑒定具有所需特異性的抗體。在本技術(shù)領(lǐng)域中已熟知有多種該類方法，可以利用已建立特異性的多克隆抗體或單克隆抗體做競爭性結(jié)合或免疫放射量分析。這類免疫分析特異地涉及來源于念珠菌屬的熱休克蛋白與其特異性抗體的復合物形成的測量，其中的熱休克蛋白來源于念珠菌屬，例如白色念珠菌的hsp90或其任何片段或寡肽。可采用一種雙位點、基于單克隆的免疫分析，其中所使用的是特異性針對念珠菌熱休克蛋白的兩個無關(guān)抗原決定簇的，但也可采用一種競爭性結(jié)合實驗(Maddox等人，1983，J.Exp.Med.(實驗醫(yī)學雜志)，1581211-1216)。
抗體可能含有SEQ ID NO2所示的序列。
抗真菌多烯試劑可能含有例如兩性霉素B、兩性霉素B的衍生物、或制霉菌素。兩性霉素B的衍生物可使用包括制劑如脂質(zhì)體兩性霉素B(由英國劍橋NexStar制藥公司提供樣品)、兩性霉素B脂質(zhì)體復合物(Abelcet)，兩性霉素B膠體分散體(Amphocil)和兩性霉素B英脫利匹特乳劑(Burnie JP，1997，見上文)。兩性霉素B可以和另一種抗真菌劑5-氟胞嘧啶聯(lián)合使用(Burnie JP，1997，見上文)。
棘白菌素抗真菌劑可以是如LY303366(Eli Lilly公司，Indianapolis，美國)。棘白菌素是環(huán)脂質(zhì)肽，可抑制真菌中β-1，3葡聚糖的合成(Redding，JA等人，1998，Antimicrob.Agents Chemo.Ther.(抗微生物試劑化學治療學)42(3)1187-1194)。
本發(fā)明也提供一種在這里所描述的用于治療真菌感染的組合物?？捎迷摻M合物或組合制劑治療的真菌感染可能是由念珠菌屬、隱球菌屬、組織胞漿菌屬、曲霉菌屬、球擬酵母菌、毛霉菌、芽酵母菌、球孢子菌或副球孢子菌所引起。球孢子菌在本領(lǐng)域中也指粗球酵母菌，而副球孢子菌是近粗球酵母菌的同意詞。真菌感染可能對抗真菌劑本身具耐藥性，即真菌感染本身是不能用特定的試劑所治療的，這是因為這些特定的抗真菌劑傳統(tǒng)上用于自身時是無效的。
本發(fā)明也提供一種在這里所描述的組合物或組合制劑，用于人或動物體的真菌感染的治療方法中。
本發(fā)明也提供一種用于治療人或動物真菌感染的藥劑的生產(chǎn)方法，其特色是應用本申請中所描述的組合物或組合制劑。藥劑的生產(chǎn)方法已熟知。例如，藥劑可能另外含有一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑(Remington’s Pharmaceutical Sciences and USPharmacopoeia，1984，Mack Publishing Company，Easton，PA，美國)。
本發(fā)明也提供將本申請中所描述的組合物或組合制劑在一種藥劑的生產(chǎn)方法中的應用，該藥劑用于治療真菌感染。真菌感染可能對抗感染試劑本身具耐藥性。
本發(fā)明也提供一種用于治療人或動物體真菌感染的方法，包括給予有相同需要的患者根據(jù)本申請的組合物或組合制劑。給予患者的組合物或組合制劑的確切劑量(即藥學可接受劑量)可由本技術(shù)領(lǐng)域的熟練人員所輕易確定，如通過應用簡單的劑量依賴性實驗。組合物或組合制劑可口服。
本發(fā)明中還進一步提供一種試劑盒，該試劑盒包括一種可特異性結(jié)合一種真菌應激蛋白的一個或多個抗原決定簇的抗體或其中的抗原結(jié)合片段、一種包含至少一種選自多烯抗真菌劑和棘白菌素抗真菌劑。該試劑盒可用于治療真菌感染。
本發(fā)明也提供一種針對含SEQ ID NO1所示序列的抗原決定簇的特異性抗體或它的抗原結(jié)合片段。
本發(fā)明中的抗體可能具有診斷價值。因此用于診斷時，可利用抗體來檢測宿主中是否存在應激蛋白，從而確定宿主是否有特異的真菌感染，如由于念珠菌屬、隱球菌屬、組織胞漿菌屬、曲霉菌屬、球擬酵母菌、毛霉菌、芽酵母菌、球孢子菌或副球孢子菌所引起的感染。例如可用于診斷真菌性膿腫，特別是肝臟念珠菌病，和/或監(jiān)測針對此類感染的治療進程。這類診斷方法形成了本發(fā)明的另一個目的，而且可以使用一些標準技術(shù)，如像酶聯(lián)免疫吸附的免疫學方法、放射免疫方法、乳膠凝集方法或免疫印跡法。
本發(fā)明中的抗體可用一種可檢測的標記物進行標記，或用一種效應分子應用傳統(tǒng)的方法進行共軛結(jié)合，效應分子如一種藥，例如抗真菌劑像兩性霉素B或氟胞嘧啶或一種毒素，如篦麻毒素，或一種酶。本發(fā)明可擴展到這類經(jīng)標記的抗體或抗體共軛物。
本發(fā)明也提供一種診斷劑的制劑。該制劑是用本發(fā)明中的抗體或抗原結(jié)合片段來診斷一種或多種真菌感染。該診斷劑可以由試劑盒所提供。該試劑盒可能包括用于診斷一種或多種真菌感染的操作說明。這里所描述的試劑盒也根據(jù)本發(fā)明而提供。
如果需要，根據(jù)本發(fā)明可將抗體混合物用于診斷或治療，如識別一種真菌應激蛋白不同抗原決定簇的兩種或以上抗體的混合物，和/或者不同種類抗體的混合物，如識別本發(fā)明中相同或不同的抗原決定簇的IgG和IgM的混合物。
這里所討論的每一條參考文獻的內(nèi)容，包括它所引用的文獻，以參考文獻的全部進行引用。
本發(fā)明將進一步從以下的描述中得到明確，描述僅通過實施例來顯示本發(fā)明中的組合物和其實驗的特定的實施方案。

具體實施例方式 實驗 以下所描述的實驗研究了抗體與抗真菌劑如兩性霉素B或氟康唑聯(lián)合使用的抗真菌效果，其中所述抗體是抗來源于白色念珠菌的hsp90抗原的抗體。結(jié)果顯示，在一些情況下，與單獨應用一種化合物本身相比較，抗體和抗真菌劑的聯(lián)合應用使抗真菌的效果得到增強。實驗證實，兩性霉素B與抗白色念珠菌hsp90的抗體聯(lián)合應用，對于多種常見的難以解決的真菌病原體具有非常令人吃驚的強協(xié)同效果。這種協(xié)同效果對于臨床上治療真菌感染具有非常重要的意義。一項涉及四名念珠菌感染患者的臨床初步試驗證實了本發(fā)明對于人類的有效性。
材料和方法 菌株 實驗采用一種非曲霉菌的酵母菌株(表1)，將菌株涂布于薩布羅氏(Sabouraud’s)葡聚糖瓊脂(Oxoid，Basingstoke，英國)中并在37℃培養(yǎng)24小時。菌株用API 20C系統(tǒng)(BioMerieux，MarcyL’Etoile，法國)進行鑒定。如果需要，可用在玉米粉瓊脂(Oxoid)上的形態(tài)學顯微檢測對鑒定進行證實。
將曲霉菌所有種(表1)的分離物在薩布羅氏葡聚糖瓊脂(Oxoid，Basingstoke，英國)于35℃培養(yǎng)24小時。
接種物 對于非曲霉菌，其懸液的制備是將單個菌落(直徑≥1毫米)懸于5毫升消毒過的0.85％生理鹽水中形成1×104細胞/毫升的濃度，通過用血球計數(shù)器計數(shù)柵進行計數(shù)而獲得。對于曲霉菌，見下文。
抗真菌劑 兩性霉素B作為一種凍干粉劑購于Sigma公司(Poole，Dorset)，并用于靜脈注射(Fungizone)。氟康唑以靜脈注射用的溶劑形式(Diflucan)由Pfizer公司提供。兩性霉素B以1.2mg/ml的濃度溶于二甲基亞砜，氟康唑也以1.2mg/ml的濃度溶于0.85％生理鹽水。貯存液保存于-70℃至使用。臨床研究中所使用的Abelcet(脂質(zhì)體兩性霉素B)由Bristol-Meyers Squid(美國)生產(chǎn)，并根據(jù)生產(chǎn)者的說明書進行配制。
抗體 對于英國專利2240979和EP專利0406029所揭示的一種針對白色念珠菌hsp90抗原決定簇的特異性抗體的以前的DNA序列，通過密碼子優(yōu)化進行遺傳改造，用于在大腸桿菌(Operon Technologies Inc公司，Alameda，CA，美國)中進行表達，并插入到大腸桿菌表達載體中。本發(fā)明中抗hsp90抗體的氨基酸序列包含SEQ ID NO2所示序列(包括重鏈、輕鏈和間隔區(qū)結(jié)構(gòu)域)。本發(fā)明的抗體可識別含SEQ ID NO1所示序列的抗原決定簇。
抗hsp90抗體在大腸桿菌宿主中表達，然后用親和層析和咪唑交換柱進行純化，純度高達95％。應用了標準分子生物學方法(參考，例如，Harlow和Lane，supra；Sambrook J.等人，1989，MolecularCloningA Laboratory Mannual(分子克隆實驗室手冊)，第二版，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約；Sambrook J.和Russell D.，2001，Molecular CloningA Laboratory Mannual(分子克隆實驗室手冊)，第三版，冷泉港實驗室出版社，冷泉港)。
Mycograb(RTM)配制品的制備如下將小瓶中裝有的10毫克純抗hsp90抗體，150毫克藥學級(Ph Eur)尿素和174毫克L-精氨酸(PhEur)，重新溶于5毫升水中。
分析培養(yǎng)液 RPMI肉湯的制備是在每升RPMI1640肉湯培養(yǎng)液(Sigma R7880)中添加0.3克谷氨酰胺，然后用34.6克/每升嗎啉基丙磺酸(MOPS)進行緩沖，調(diào)ph至7.0。
肉湯微量稀釋實驗 兩種貯存液用RPMI肉湯進行兩倍稀釋(將兩性霉素B從40稀釋至0.024毫克/毫升，將氟康唑從400至0.4毫克/毫升)。將100微升經(jīng)1∶10稀釋的接種物懸液(相當于1×103菌落形成單位)加入到微量滴定板中。然后在其中加入50微升抗真菌劑和50微升抗體?？贵w可以為原液(0.4毫克/毫升)或1/10或1/100稀釋液。無抗體存在時，用RPMI補足50微升體積。每孔的總體積為200微升。實驗中抗體的終濃度為100微克/毫升(原液)，10微克/毫升(1/10抗體)，或1微克/毫升(1/100抗體)。
滴定板在37℃培養(yǎng)過夜，最低抑制濃度(MIC)定義為抑制生長的最低濃度。
對有肉眼可見的酵母生長減少的培養(yǎng)孔進行菌落計數(shù)。結(jié)果表示為每毫升肉湯的菌落形成單位(cfu/ml)。
曲霉菌研究 煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉的分離物由RPMI1640培養(yǎng)液制備。接種物懸液的終濃度為每毫升1×104分生孢子，然后分別以100微升/孔加入到平底微量滴定板。對兩性霉素B進行系列雙倍稀釋(濃度范圍為250微克/毫升至0.75微克/毫升)并加入到相應的滴定孔中。將Mycograb加入到每孔中，使其在配制緩沖液中的終濃度為100微克/毫升。每種分離物的系列對照只含配制緩沖液。然后將測定板在35℃/200rpm孵育48小時，每種分離物的最低抑制濃度(MIC)值以有無菌生長的滴定孔來決定。
動物協(xié)同性 30只CD1小鼠(每只體重約25克)用100微升爆發(fā)型白色念珠菌菌種注射接種(相當于1.5×107cfc)，2小時后將小鼠分為三組并注射 (A)第一組100微升10毫摩爾醋酸銨溶液(AAT，pH 9)，然后是100微升以5％(w/v)葡萄糖溶液配制的兩性霉素B，相當于0.6毫克/千克； (B)第二組100微升含500微克抗hsp90抗體的10毫摩爾醋酸銨溶液(pH9)，然后是100微升以5％(w/v)葡萄糖溶液配制的兩性霉素B，相當于0.6毫克/千克； (C)第三組100微升含50微克抗hsp90抗體的10毫摩爾醋酸銨溶液(pH9)，然后是100微升以5％(w/v)葡萄糖溶液配制的兩性霉素B，相當于0.6毫克/千克。
48小時后將動物挑出而殺掉，并在薩布羅氏板上進行肝、脾以及腎組織的酵母計數(shù)。
臨床研究 在英國曼切斯特的曼切斯特健康護理中心和Wythenshawe兩家醫(yī)院進行了抗hsp90抗體(以Mycograb的形式，見上)的開放標記安全性和藥物動力學研究，有四名受念珠菌感染的患者參加。對患者進行了念珠菌膿毒癥體征檢測，包括對多個部位或深創(chuàng)面進行白色念珠菌陽性培養(yǎng)；高溫或變溫(發(fā)熱)檢測；高脈搏率(心動過速)以及高白細胞計數(shù)(WBC)。
繼傳統(tǒng)的Abelcet(脂質(zhì)體兩性霉素B)和/或氟康唑治療后，然后再給予患者各種劑量的Mycograb，包括可選擇的實驗劑量(0.1毫克/公斤)和治療劑量1毫克/公斤。對患者進行臨床和實驗室感染體征監(jiān)測(監(jiān)測的實驗室參數(shù)包括血液化學、血液學和凝血因子)，并對患者血清及尿中的Mycograb水平進行了檢測。
結(jié)果 體外實驗檢測聯(lián)合應用抗白色念珠菌hsp90抗體(抗體)和抗真菌劑的效果以表2到表18表示。動物實驗結(jié)果用表19表示。
體外實驗 含抗體和氟康唑的組合物 表2顯示氟康唑抗所檢測的真菌病原體的最低抑制濃度(MIC)，其中存在或不存在不同稀釋度的抗hsp90抗體，MIC用肉湯微量稀釋實驗進行評價。在抗體以原液或10倍稀釋液存在時，爆發(fā)型白色念珠菌菌株的最低抑制濃度(MIC)降低了4倍(1.56微克/毫升至0.39微克/毫升氟康唑)，而100倍稀釋的抗體使氟康唑的最低抑制濃度(MIC)降低了2倍。
在抗體以原液存在時，觀察到對氟康唑耐藥的白色念珠菌株和克柔念珠菌的氟康唑最低抑制濃度(MIC)有輕微的降低。而當抗體以1∶10或1∶100稀釋后，與不含抗體進行比較，發(fā)現(xiàn)對這些菌株的氟康唑最低抑制濃度(MIC)無影響。
對剩余的菌株如熱帶念珠菌、近平滑念珠菌和光滑球擬酵母，抗白色念珠菌hsp90抗體對氟康唑最低抑制濃度(MIC)無可識別的影響。
對每一種真菌菌株在不同的氟康唑濃度、不同抗白色念珠菌hsp90抗體稀釋度條件下，進一步的存活細胞菌落數(shù)的定量實驗表示于表2中。
在所檢測的不同的氟康唑濃度中，白色念珠菌(爆發(fā)型)的存活率在加入抗體原液或1∶100稀釋液時沒有減少(表3)。
對于氟康唑耐藥性的白色念珠菌菌株，在氟康唑濃度為12.5微克/毫升、抗體以原液存在時，觀察到菌落存活減少2倍(表4)。在抗體以原液存在、而氟康唑為低濃度時，該相同菌株的存活率有少量降低，而抗體為1∶100的稀釋度時，無可見的影響。
在所檢測的氟康唑濃度范圍內(nèi)抗體原液或稀釋液對克柔念珠菌無明顯的抗真菌效果(表5)。
無論抗體存在與否，每種檢測的氟康唑濃度對熱帶念珠菌的存活率無顯著的影響(表6)。
表7顯示抗體的存在與否在每種檢測的氟康唑濃度中，對光滑球擬酵母的菌落存活率無影響。
表8表明抗體的存在與否在不同的氟康唑檢測濃度中，對近平滑念珠菌的菌落存活率無顯著的影響。
抗體和兩性霉素B的組合物 表9顯示在無抗體或抗白色念珠菌hsp90抗體以不同稀釋度存在時，兩性霉素B對所檢測真菌病原體的最低抑制濃度(MIC)，檢測方法為肉湯微量稀釋法。
與氟康唑的結(jié)果相比(見前面的表2-8)，這里檢測的所有菌株在培養(yǎng)的肉湯中加入未稀釋的抗體時，兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)至少降低4倍(表9)。另外，在所有檢測的菌株中，即使在培養(yǎng)的肉湯中加入100倍稀釋的抗體時，兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)至少降低2倍(抗體的終濃度為1微克/毫升)。
含抗體和兩性霉素B的組合物在降低兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)時，觀察到的最顯著效果是對氟康唑耐藥的白色念珠菌菌株。抗體原液使兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)降低10倍，即使是100 倍稀釋的抗體，也使兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)降低了大約25％(表9)。
在不同的兩性霉素濃度和不同的抗白色念珠菌hsp90抗體稀釋度條件下，對每一種真菌菌株所進行的細胞存活菌落數(shù)定量的詳細實驗結(jié)果表示于表9中。
表10顯示爆發(fā)型白色念珠菌菌株在有或無抗體的情況下，加入兩性霉素B進行培養(yǎng)時的存活率。在檢測的所有兩性霉素濃度中，抗體顯著降低了菌落的存活數(shù)(至少10倍)。例如，在兩性霉素B的濃度為0.078微克/毫升時，與無抗體時菌株的存活率進行比較，抗體為100倍稀釋液時，白色念珠菌(爆發(fā)型)的存活率為0.2％。兩性霉素B的濃度為0.078微克/毫升，稀釋度為100的抗體的抑制效果相當于該菌株在0.156微克/毫升的兩性霉素B(無抗體)中的存活率。因此，即使相當?shù)蜐舛鹊目贵w，也可降低使該菌株達到特有的死亡率所需的兩性霉素B的量。
表11顯示在不同兩性霉素B濃度和不同抗體稀釋度情況下，白色念珠菌(氟康唑耐藥菌株)的菌落存活率。在抗真菌劑為低濃度時，抗體或兩性霉素B無明顯的效果。然而，當兩性霉素B的水平接近抗真菌劑的最低抑制劑量時(見上面的表9)，抗體對菌落存活有顯著影響。例如，在兩性霉素B的濃度為0.078微克/毫升時，與無抗體時菌株的存活率進行比較，抗體在100倍稀釋時，該菌株的存活率為0.1％。
在有兩性霉素B和不同濃度的抗體時，克柔念珠菌的菌落存活率 顯示于表12。在所檢測的高濃度兩性霉素B條件下，發(fā)現(xiàn)抗體對該菌株非常有效。即使在100倍稀釋度，當兩性霉素B的濃度為0.312微克/毫升時，可檢測的克柔念珠菌的菌落數(shù)量與無抗體時相比為0.01％。
對于檢測的兩性霉素B的所有濃度(范圍為0.019-0.156微克/毫升)，觀察到抗體可降低熱帶念珠菌株的菌落存活率(表13)。這種效果在高濃度抗體和高濃度兩性霉素B時得到增強。
表14表示在各種濃度的兩性霉素B和抗體存在時光滑球擬酵母的存活率。在檢測的所有兩性霉素B的濃度，觀察到抗體對光滑球擬酵母的生長具顯著的抑制效果。例如，當兩性霉素B的濃度為0.009微克/毫升時，抗體稀釋100倍對該菌株生長的抑制率為99.2％，兩性霉素B的濃度為0.019微克/毫升時為99.99％，兩性霉素B的濃度為0.039微克/毫升時為99.91％。
在不同水平的抗體和兩性霉素B條件下，真菌近平滑念珠菌的存活率表示于表15。對所檢測的所有濃度的兩性霉素B，觀察到抗體原液均降低了該菌株的存活率。當抗體為低濃度時，效果低于所檢測的其它菌株。
含抗體但不含抗真菌劑的組合物 在一個進一步的實驗中，檢測了不同濃度抗白色念珠菌hsp90抗體(無抗真菌劑)對不同真菌菌株(如上面表2-15所使用的)的影響。表16所示的結(jié)果表明對所測的多數(shù)菌株，抗體本身對這些菌株的存活無影響。然而，對于菌株光滑球擬酵母，熱帶念珠菌和近平滑念珠菌，觀察到抗體自身可降低它們的部分存活率。
所有曲霉菌實驗 煙曲霉對兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)是2.5μg/ml。加入Mycograb以后，MIC變?yōu)?.125μg/ml(降低2倍)。黃曲霉對兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)是2.5μg/ml。加入100μg/ml Mycograb以后，MIC變?yōu)?.125μg/ml(降低2倍)。黑曲霉對兩性霉素B的最低抑制濃度(MIC)是2.5μg/ml。加入100μg/ml Mycograb以后，MIC變?yōu)?.125μg/ml(降低2倍)。
體外實驗結(jié)果小結(jié) 表2-16的結(jié)果顯示，抗白色念珠菌hsp90抗體自身可抑制某些真菌的生長，當抗體和兩性霉素B聯(lián)合應用時，觀察到對所有檢測菌株均具令人驚奇的極高抗真菌活性。抗體與兩性霉素B之間的這種令人驚奇的作用在其它被檢測的抗真菌劑中未發(fā)現(xiàn)；氟康唑與抗體的聯(lián)合應用不產(chǎn)生明顯的和可能有用的結(jié)果。
采用對MIC有4倍差異的截止標準，表2的數(shù)據(jù)顯示，氟康唑與抗體原液(終濃度100μg/ml)或抗體的10倍稀釋液(終濃度10μg/ml)聯(lián)合使用時，僅對爆發(fā)型白色念珠菌有效。然而當應用同樣的標準，從表9可以看出，當兩性霉素B與抗體原液或10倍稀釋液聯(lián)合使用時，對檢測的所有菌株均有效。因此可得出結(jié)論，當用MIC上的改進來衡量時，兩性霉素B與抗白色念珠菌hsp90抗體之間存在很強的協(xié)同作用。
對于用不同抗真菌劑和抗體處理的定量真菌菌落的實驗(見以上的表3-8和10-15)，可以引用另一種不同的截止標準來檢測聯(lián)合治療的可能有效性，這種標準定義為存活菌落下降2個對數(shù)級(100倍)。
氟康唑與抗白色念珠菌hsp90抗體聯(lián)合治療效果的總結(jié)表示于表17。這里，顯示了能起所需作用的最低氟康唑濃度(或?qū)嶒炛胁捎玫淖罡邼舛?，并由截止標準提示，真菌的存活率可至少降低100倍。結(jié)果顯示，當聯(lián)合應用氟康唑和抗體原液時，只有對白色念珠菌氟康唑耐藥菌株可產(chǎn)生明顯的效果。
兩性霉素B與抗白色念珠菌hsp90抗體聯(lián)合治療效果的總結(jié)表示于表1 8?？煽闯?，抗體原液針對所有檢測菌株滿足截止標準(真菌菌落生長降低100倍)，10倍稀釋的抗體對(爆發(fā)型和氟康唑耐藥型)白色念珠菌菌株、克柔念珠菌和光滑球擬酵母以及100倍稀釋的抗體對(爆發(fā)型)白色念珠菌菌株和光滑球擬酵母滿足截止標準。
值得注意的是，觀察到兩性霉素B與抗體之間的協(xié)同效應不僅針對氟康唑敏感型白色念珠菌菌株，而且也針對氟康唑耐藥型白色念珠菌菌株和酵母菌如克柔念珠菌和光滑球擬酵母，這些菌株本身對氟康唑具有耐藥性。
所有曲霉菌實驗結(jié)果顯示，兩性霉素B與Mycograb之間對最常見的曲霉菌具有協(xié)同效應。
(2)動物實驗 以爆發(fā)型白色念珠菌菌株感染的小鼠分為三組，只用兩性霉素B處理(第一組)，用兩性霉素B和500微克抗hsp90抗體處理(第二組)和用兩性霉素B和50微克抗hsp90抗體處理(第三組)。治療48小時后對小鼠各種組織的酵母菌落計數(shù)結(jié)果列于表19。結(jié)果顯示，與只用兩性霉素B處理(第一組)的動物相比，以兩性霉素B和500微克抗體(第二組)處理的動物酵母數(shù)量顯著減少(至少一個數(shù)量級)。用兩性霉素B和50微克抗體處理(第三組)的動物與只用兩性霉素B處理(第一組)的動物相比，酵母計數(shù)也減少。因此，體內(nèi)實驗數(shù)據(jù)驗證了體外實驗數(shù)據(jù)，證實抗hsp90抗體與抗真菌劑兩性霉素B之間在治療真菌感染時具協(xié)同效應。
(3)臨床研究 對4位有念珠菌感染且對傳統(tǒng)的抗真菌治療無應答的患者，給予抗真菌劑和以Mycograb形式的抗hsp90抗體(見上文)聯(lián)合治療，并對他們的病情進行監(jiān)測。
患者1最初被診斷為急性胰腺炎，并患有術(shù)后成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)，需換氣。病人多部位包括胰腺床白色念珠菌體外培養(yǎng)陽性。該患者白細胞計數(shù)(WBC)非常高(78.4)，盡管這個計數(shù)變化很大，可能不僅是單獨由膿毒癥所引起。最初采用3mg/kg的Abelcet進行治療。
Abelcet治療開始5天后，另外給予患者1第一劑0.1mg/kg檢測劑量的Mycograb(第1天)。第3天，給予該患者1mg/kg臨床劑量的Mycograb。由于多種原因，如至少4天的低血小板計數(shù)，給予臨床劑量的Mycograb之后，在第3天病人的Abelcet和Mycograb治療中斷。然而，6天后(第9天)患者1腹水中又有白色念珠菌生長，給予氟康唑治療(400mg)。隨后一天(第10天)，給予患者最后兩劑臨床劑量的Mycograb，每劑劑量為1mg/kg。
盡管患者1的Abelcet治療進行了7天，在該患者從第3天開始接受臨床劑量Mycograb治療前，病人的氣管造口部位仍有白色念珠菌生長，且病人心動過速。第3天給予的Abelcet和Mycograb聯(lián)合治療導致隨后5天內(nèi)無白色念珠菌生長。在Mycograb治療期間，沒有觀察到與Mycograb有關(guān)的血液化學、血液學和凝血因子的改變。對隨后的復發(fā)使用氟康唑和Mycograb的聯(lián)合治療(第10天兩劑)與體外實驗的協(xié)同結(jié)果(例如，見表2和17)的期望值比較，不太成功，但最終該患者確實從念珠菌病康復。
在給予Mycograb治療后，患者1在不同時間間隔的血清Mycograb水平列于表20。第1天給予的檢測劑量沒有達到血清檢測水平。第3天和第10天給予的1mg/kg的劑量達到血清檢測水平，這些檢測結(jié)果與體外實驗中與兩性霉素B的協(xié)同作用具可比性(見表9和表18)。在第10天給予第二劑后，血清Mycograb水平提高，提示第一劑后Mycograb在某些組織中有累集。1.0mg/kg劑量的Mycograb在尿中可檢測到(數(shù)據(jù)未顯示)。
患者2被診斷患由于粘連引起的小腸狹窄，并患有成人呼吸窘迫綜合征，需換氣。病人多部位包括腹水有白色念珠菌生長，并有與感染相關(guān)的波動性體溫(35.8-38.2℃)、升高的白細胞計數(shù)(11.4)和偶發(fā)的心動過速(110)?；颊咦畛醪捎?mg/kg的Abelcet治療。
Abelcet治療開始后4天，患者2仍有波動性體溫潴留、升高的白細胞計數(shù)和偶發(fā)的心動過速。給予患者0.1mg/kg檢測劑量的Mycograb(第1天)。隨后一天，給予該患者1mg/kg臨床劑量的Mycograb(第2天)。為完成一個5天的療程，第2天又給予患者最后一劑Abelcet。2天后(第4天)，患者接受了最后2劑臨床劑量的Mycograb。
患者對Mycograb有很好的耐受性。第2天給予的臨床劑量的Mycograb使體溫下降并趨于穩(wěn)定(第2天接受臨床劑量的Mycograb后為38.2-36.7℃，一直到第3天維持在36.7-37.4℃)，而且白細胞計數(shù)下降(從11.9下降到9.6)。第4天，患者臨床表現(xiàn)好轉(zhuǎn)，而且腹水、血培養(yǎng)物或尿中無白色念珠菌生長。治療期間，無與Mycograb相關(guān)的血液化學、血液學和凝血因子改變。后續(xù)的恢復并發(fā)了細胞膿毒癥，但這種膿毒癥對抗生素應答，患者完全康復。
在給予Mycograb治療后，患者2在不同時間間隔的血清Mycograb濃度列于表21。第1天給予的檢測劑量沒有達到血清檢測水平。第2天給予的1.0mg/kg的劑量確實達到血清檢測水平，這些檢測結(jié)果與體外實驗中與兩性霉素B的協(xié)同作用具可比性(見表9和表18)。1.0mg/kg劑量的Mycograb在尿中可檢測到(數(shù)據(jù)未顯示)。
患者3有6個星期的胰腺炎病史并導致80％的胰腺切除?；颊哂兄卸鹊母喂δ芩?LFT)增高，可能與酗酒有關(guān)，而且是耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)的攜帶者?；颊叨嗖课挥邪咨钪榫L，因此給予靜脈氟康唑治療。12天后，失去對氟康唑的應答，患者改為300mg的Abelcet治療。3天后，患者仍發(fā)熱(38.5℃)，而且多部位仍有白色念珠菌生長(腹部引流管和胃鏡檢測管)，因此在Abelcet的基礎(chǔ)上給予臨床劑量的Mycograb(1mg/kg)治療(第1天)。
在給予Mycograb劑量的同一天，患者3急性革蘭氏陰性型膿毒癥休克發(fā)作(體溫高達39.5℃，低血壓性)，這可能由于銅綠假單胞菌感染所引起，在患者的胰液中發(fā)現(xiàn)該菌生長，雖然在患者的血培養(yǎng)中也有糞腸球菌生長。由于這次發(fā)病，沒有進一步給予Mycograb治療。患者后來對抗生素治療有反應(萬古霉素和頭孢他啶)。
由于細菌性并發(fā)癥，很難對患者3進行單劑量Mycograb作用的評估。盡管如此，注意到給予Mycograb 48小時后該患者白色念珠菌生長中止(例如，從他的胃鏡檢測管和創(chuàng)面引流液中)，而且在第2和第3天沒有發(fā)熱。沒有觀察到與Mycograb相關(guān)的實驗室參數(shù)的改變(血液化學、血液學和凝血因子)。第4天，患者在仍進行Abelcet治療時復發(fā)白色念珠菌，但后來完全康復。
在給予Mycograb治療后，患者3在不同時間點的血清Mycograb濃度列于表22。第1天的1.0mg/kg單劑量給出了血清檢測水平，這些檢測結(jié)果與體外實驗中與兩性霉素B的協(xié)同作用具可比性(見表9和表18)。1.0mg/kg劑量的Mycograb在尿中可檢測到(數(shù)據(jù)未顯示)。
患者4被診斷為白色念珠菌膿胸，盡管該患者最初由于米氏鏈球菌(從血培養(yǎng)中分離出來)引起的肺膿腫收入重癥治療室(ITU)?；颊邇商幹夤芄嘞礃吮?右和左肺)有白色念珠菌生長。3天和4天后兩處膿胸液標本中也有白色念珠菌生長。隨后一天開始Abelcet治療(5mg/kg)。Abelcet治療開始5天后，注意到一些臨床惡化，接下來的早晨(第1天)出現(xiàn)了白細胞計數(shù)高(15.7)和肋間引流液中白色念珠菌的再生長。
患者4在第1天早晨8點半和晚上8點半分別給予Mycograb(1mg/kg體重)。除了在第1天晚上有暫時的體溫升高以外，患者的臨床癥狀得到改善。第3天的膿胸液樣品培養(yǎng)沒有白色念珠菌生長，患者日益好轉(zhuǎn)。
患者4對Mycograb有很好的耐受性。沒有觀察到與Mycograb相關(guān)的實驗室參數(shù)的改變(血液化學、血液學和凝血因子)。因此，盡管患者開始Abelcet治療后6天在胸積液中仍有白色念珠菌生長，而且就在接受第一劑Mycograb之前其白細胞計數(shù)很高(15.7)，但隨后患者漸趨穩(wěn)定而且停止了白色念珠菌的生長。
在給予Mycograb治療后，患者4在不同時間點的血清Mycograb濃度列于表23。第1天給予的1.0mg/kg劑量達到了血清檢測水平，這些檢測結(jié)果與體外實驗中與兩性霉素B的協(xié)同作用具可比性(見表9和表18)。在第一天的第二次劑量之后，血清中Mycograb的濃度升高，表明在第一次劑量之后，某些組織發(fā)生積累。1.0mg/kg劑量的Mycograb在尿中可檢測到(數(shù)據(jù)未顯示)。
結(jié)論 這里呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)明顯證實，在抗白色念珠菌hsp90抗體與抗真菌劑兩性霉素B之間存在驚人的協(xié)同作用，這種作用增強了對大量病理學的重要真菌菌株的抗真菌活性。這些結(jié)果允許將新的、高效的組合物以及一種可組合到該組合物中的新的抗體應用于人和動物體真菌感染的治療。本發(fā)明允許使用低劑量或使原劑量發(fā)揮更好的效果，因此可降低非必需的副作用。
本發(fā)明的臨床意義包括(i)兩性霉素B和抗hsp90抗體聯(lián)合后協(xié)同作用應當成為治療傳播性酵母感染的特別好的治療方法。這將導致這些感染所致的死亡率和發(fā)病率的降低。這里提供的臨床初步試驗結(jié)果證實了與已存在的治療方法比較，本發(fā)明所具的效力；(ii)兩性霉素B是一種有毒性、特別是腎毒性的藥物。本發(fā)明所提供的協(xié)同作用意味著可應用低劑量的兩性霉素B而保持其效果并伴隨毒性的降低；而且(iii)抗hsp90抗體的減毒效果允許臨床上探索使用高劑量的兩性霉素B，并進一步有助于取得更好的臨床效果。
序列表
<110>神經(jīng)技術(shù)制藥有限公司
<120>β葡聚糖合酶抑制劑與抗HSP90抗體聯(lián)合治療真菌感染
<130>N00/0101/PCT
<140>
<141>
<160>2
<170>PatentIn Vet.2.1
<210>1
<211>9
<212>PRT
<213>念珠菌
<400>1
Leu Lys Val Ile Arg Lys Asn Ile Val
1 5
<210>2
<211>248
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>人工序列的描述合成的
<400>2
His Met Ala Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
1 5 10 15
Pro Gly Glu Set Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Cys Ile Ile
20 25 30
Ser Ser Tyr Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu
35 40 45
Glu Trp Met Gly Lys Ile Asp Pro Gly Asp Ser Tyr Ile Asn Tyr Ser
50 55 60
Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ash
65 70 75 80
Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Asn Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Arg Asp Phe Gly Asp Set Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Set Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Set Phe Leu Ser Ala Phe Val Gly Asp Arg Ile Thr Ile Thr
145 150 155 160
Cys Arg Ala Ser Ser Gly Ile Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Ala Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu
180 185 190
Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln His Leu Asn Set Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Asp Ile Lys Arg Ala Ala
24權(quán)利要求
1.一種對針對包含SEQ ID NO1所述序列的抗原決定簇特異的抗體或其抗原結(jié)合片段。
2.一種含SEQ ID NO2所述序列的抗體。
3.如權(quán)利要求1所述的抗體或抗原結(jié)合片段或如權(quán)利要求2所述的抗體，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段是用可檢測標記進行標記的。
4.如權(quán)利要求1或3中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，或如權(quán)利要求2或3中任一項所述的抗體，其中所述的抗體或抗原結(jié)合片段是與一種效應分子共軛結(jié)合的。
5.如權(quán)利要求1、3或4中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段或如權(quán)利要求2至4中任一項所述的抗體在制備用于診斷一種或多種真菌感染的診斷劑中的用途。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的診斷劑是由試劑盒提供的。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其中所述的試劑盒包括用于診斷一種或多種真菌感染的使用說明。
8.一種由權(quán)利要求6或7中的任一項所描述的診斷試劑盒。
9.一種組合物，其中包括權(quán)利要求1或2的抗體或其抗原結(jié)合片段、一種包含至少一種選自多烯抗真菌劑和棘白菌素抗真菌劑的抗真菌劑。
10.一種組合制劑，該制劑包含權(quán)利要求1或2的抗體或其抗原結(jié)合片段、一種包含至少一種選自多烯抗真菌劑和棘白菌素抗真菌劑的抗真菌劑，其在治療真菌感染時同時、分別或相繼使用。
11.如權(quán)利要求9的組合物，或權(quán)利要求10的組合制劑，其中所述的多烯抗真菌劑包含兩性霉素B或兩性霉素B的衍生物。
12.如權(quán)利要求9的組合物，或權(quán)利要求10的組合制劑，其中所述的棘白菌素抗真菌劑包含LY303366。
13.如權(quán)利要求9、11或12任一項的組合物在治療真菌感染中的應用。
14.如權(quán)利要求13的組合物，或權(quán)利要求10-12任一項的組合制劑，其中所述的真菌感染是由于念珠菌屬、隱球菌屬、組織胞漿菌屬、曲霉菌屬、球擬酵母菌、毛霉菌、芽生菌、球孢子菌或副球孢子菌所引起。
15.如權(quán)利要求13或14的組合物，或權(quán)利要求10-12、或14任一項的組合制劑，其中所述的真菌感染是對所述抗真菌劑本身耐藥的。
16.如權(quán)利要求9-15任一項的組合物，或權(quán)利要求10-12、14或15任一項的組合制劑在治療人或動物體真菌感染的方法中的應用。
17.一種生產(chǎn)用于治療人或動物體真菌感染的藥物的方法，其特征為使用權(quán)利要求9-16任一項的組合物或權(quán)利要求10-12或14或16任一項的組合制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的作為有效抗真菌劑的組合物及制劑，以及一種可組合到所述組合物及制劑中的新的抗體。
文檔編號A61K31/70GK101095952SQ20071011266
公開日2008年1月2日 申請日期2001年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月6日
發(fā)明者J·P·伯尼 申請人:神經(jīng)技術(shù)制藥有限公司