專利名稱：4－甲基－1h－二芳基吡唑衍生物及其作為藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式I的4-甲基-1H-二芳基吡唑衍生物及其藥用鹽，其制備方法，含它們的藥用組合物及通式I化合物作為腦內(nèi)大麻素I型(CB1)受體抑制劑在治療與CB1受有關(guān)疾病或癥狀如肥胖、改善記憶、戒煙方面的用途。
背景技術(shù)：
大麻類物質(zhì)是最早被人類認(rèn)識(shí)的成癮性物質(zhì)之一，大約有一千年的藥用歷史，其主要活性成分是Δ9-四氫大麻酚(delta-9-tetrahydro-cannabinol，Δ9-THC)。大麻類物質(zhì)具有止痛、鎮(zhèn)靜、抗痙攣、抗嘔吐、抗青光眼及抗高血壓等多種藥理作用，但易產(chǎn)生耐受性和成癮性，限制了它們的使用(R.K.Razden，Pharmacol.Rew.，1986，38，75-149)。
大麻素(cannabinoid，CB)受體是指對(duì)大麻類物質(zhì)如Δ9-THC有應(yīng)答的受體。90年代初，大麻素的兩種受體亞型被成功克隆CB1(R.Mechoulam，et al.，Biochem.Pharmacol.，1995，50，83-90)和CB2(S.Munro，et al.，Nature，1993，365，61-65)。它們都屬于G蛋白偶聯(lián)受體的視紫質(zhì)樣家族A綱?；蚩寺⊙芯堪l(fā)現(xiàn)這兩種受體完整的氨基酸序列有44％的同源性，跨膜區(qū)氨基酸序列有68％的同源性(L.A.Matsuda，et al.，Nature，1990，346，561-564)。氨基酸序列的分析顯示，它們的結(jié)構(gòu)中都包括七次親酯跨膜α螺旋結(jié)構(gòu)。兩種大麻素受體可以激活多重細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括通過抑制腺苷酸環(huán)化酶、抑制鈣通道、激活鉀通道、激活MAP激酶通道來抑制cAMP的生成。且都對(duì)百日咳毒素(pertussis toxin)敏感，表明兩種受體主要為Gi/o型G蛋白偶聯(lián)受體(P.H.Reggio，Curr.Pharm.Des.，2003，9，1607-1633)。CB1受體主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，又名中樞型大麻素受體；CB2受體主要存在于外周神經(jīng)元，又名外周型大麻素受體；功能之一都是阻止神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。它們的主要區(qū)別在于其氨基酸序列、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制、器官分布及對(duì)某些激動(dòng)劑和抑制劑敏感度的不同。
CB1受體是利用氚標(biāo)記的CP55940，通過放射自顯影技術(shù)和放射配體結(jié)合研究方法確證的受體。它包含473個(gè)氨基酸，由17個(gè)跨膜區(qū)組成，該受體在進(jìn)化中有著高度保守性和重要性。人類與大鼠的CB1受體氨基酸序列有97.3％同源，分子量大約為52800左右。CB1受體主要位于腦、脊髓與外周神經(jīng)系統(tǒng)中，腦內(nèi)CB1受體主要分布于基底神經(jīng)節(jié)(黑質(zhì)、蒼白球、外側(cè)紋狀體)、海馬CA錐體細(xì)胞層，小腦和大腦皮層。CB1受體的這種分布可能與大麻素對(duì)記憶、認(rèn)知、運(yùn)動(dòng)控制的調(diào)節(jié)有關(guān)。
研究證實(shí)，大麻素受體I型的內(nèi)源性配體對(duì)食物攝取和能量消耗有雙重調(diào)控作用，從而達(dá)到控制體重的目的(A.C.Howlett，et al.Pharmacol.Rev.，2002，54，161-202)。
大麻素受體激動(dòng)劑大多沒有特異性，均可以同時(shí)與兩種大麻素受體結(jié)合。與激動(dòng)劑不同的是，目前人工合成的幾種大麻素受體抑制劑都表現(xiàn)出非常高的受體特異性。其中，大麻素受體I型抑制劑直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，表現(xiàn)出多種多樣的活性。如抗肥胖、戒煙、改善記憶和認(rèn)知障礙、治療精神疾病和腫瘤化療等。二芳基吡唑類化合物是最受矚目的CB1受體抑制劑之一，它可高效選擇性的與CB1受體結(jié)合，迅速的阻斷或逆轉(zhuǎn)CB1受體的調(diào)節(jié)作用，降低信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性(M.Rinaldi-Carmona，et al.，F(xiàn)EBS Lett，1994，350，240 244)。因此，尋找結(jié)構(gòu)新穎的具有CB1抑制活性的二芳基吡唑類化合物是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于尋找并開發(fā)作用于CB1受體的新的二芳基吡唑類小分子抑制劑。
本發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，具有下面通式(I)的化合物具有抑制CB1受體的作用，因此可以用于治療與CB1受體有關(guān)的疾病或癥狀，如用于治療肥胖、戒煙、改善記憶和認(rèn)知障礙、治療精神疾病和腫瘤化療等各種疾病或癥狀。
本發(fā)明第一方面涉及通式(I)的化合物或其可藥用的鹽或水合物， 其中R是H，C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，C3-7環(huán)烷基，或是C6-C15的取代或未取代的芳香基，代表性芳香基如苯基、萘基、蒽基、芴基，或含N雜環(huán)如喹啉、吡咯、哌啶、哌嗪、嗎啉、咪唑、吡唑、嗎啉或其他雜環(huán)如噻唑、呋喃等；取代基選自鹵素、氰基、硫氫基、甲?；⒘u基、磺酸酯、硝基、亞硝基、C1-C8取代或未取代烷氨基、C1-6烷硫基、C1-C8烷氧基、C1-C15烷基、尤其是C1-C8直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的R是任意一取代或二取代的苯、芴、吡啶，取代基選自鹵素、氨基、甲酰基、C1-6烷氧基、；R亦可以是哌啶、嗎啉、呋喃、咪唑，取代基選自鹵素、C1-6烷基、氨基；R亦可以是C1-8直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
本發(fā)明所用術(shù)語“C1-C15烷基”或“C1-C8烷基”是指含1-15個(gè)或1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，包括但并不局限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。
本發(fā)明所用術(shù)語“鹵素”是指由元素氟、氯、溴、碘所衍生的原子團(tuán)本發(fā)明所用術(shù)語“環(huán)烷基”是指含有3-7個(gè)碳原子的環(huán)烷基，包括但是并不局限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明涉及的通式(I)化合物或其可藥用的鹽或水合物優(yōu)選下面的化合物(1)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-9H-芴基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(2)N-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(3)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(4)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-環(huán)戊基-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(5)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(甲基環(huán)己基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(6)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(7)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-呋喃-甲基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(8)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(4-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(9)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(10)N-(4-甲氧基苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(11)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(12)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺
(13)N-[3-(1-1H-咪唑基)-丙基]-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(14)1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-[4-(二甲基氨基)苯基]-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺及其可藥用鹽或水合物。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明涉及如通式I所示化合物或其立體異構(gòu)體的合適的可藥用鹽或水合物，其中可藥用的鹽包括但是并不局限于通式I化合物與無機(jī)酸如鹽酸、硫酸、磷酸、亞磷酸、氫溴酸和硝酸所成的鹽以及與各種有機(jī)酸，如馬來酸、蘋果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、乙酸、乳酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、棕櫚酸等所成的鹽。本發(fā)明中的一些化合物可能用水或各種有機(jī)溶劑結(jié)晶或重結(jié)晶，在這種情況下，可能形成各種溶劑化物。本發(fā)明包括那些化學(xué)計(jì)量的溶劑化物，包括水合物，也包括在用低壓升華干燥法制備時(shí)形成的包含可變量水的化合物。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明式I化合物的立體異構(gòu)體指本發(fā)明中部分化合物可能以光學(xué)異構(gòu)體或互變異構(gòu)體的形式存在，本發(fā)明包括其所有存在形式，特別是純異構(gòu)體的形式。不同的異構(gòu)體形式可以以各種常規(guī)的手段與其它形式的異構(gòu)體分離或拆分開，或者某種異構(gòu)體可以各種常規(guī)的合成方法或立體專一或不對(duì)稱合成的方法得到。既然通式I化合物是以藥用為目的的，可以理解它們最好以純的形式提供，例如至少60％的純度，更合適的75％，更好的85％，最好至少98％的純度(％是指重量百分比)。不純化合物的制備方法可用來用于藥用組合物中更純的形式。這些不夠純的產(chǎn)物中至少含有1％，更適合的5％，更好的至少10％的如通式I所示的化合物或其可藥用的衍生物。
本發(fā)明另一方面涉及制備通式I化合物的方法。通式I的化合物可以從已知的或可購(gòu)得的化合物為原料，經(jīng)過人工合成的方法制備。如果原料不能購(gòu)得，則這里提供它們的制備方法，或它們可以通過文獻(xiàn)報(bào)道的方法制備。
通式(I)的化合物的制備方法包括
(i)將式II5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酸和氯化亞砜反應(yīng)，得到5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯。
(ii)將5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯與取代胺NHR反應(yīng)得到通式(I)化合物 其中R的定義同如前所述。
式(II)的合成方法在相關(guān)文獻(xiàn)如Design and synthesis of theCB1 selective cannabinoid antagonist AM281A Potential HumanSPECT ligand，R.Lan，Q.Lu and P.Fan，(AAPS Pharmsci 1999，1(3)，article 4)和The synthesis and pharmacological evaluationof the cannabinoid antago--nist SR141716A，A.K.Dutta，et al.，(Med Chem Res 1994，5，54-62)中已有詳盡的論述。
通式(I)化合物可以用常規(guī)方法單個(gè)合成，亦可用組合化學(xué)的混-分方法或平行合成的方法以庫(每個(gè)庫中至少含兩個(gè)，或5-1000個(gè)，最好是10-100個(gè)化合物)為單位合成，即可以在液相中合成也可以用固相合成方法。
關(guān)于制備通式(I)化合物更詳盡的資料見實(shí)施例本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種式I化合物和至少一種藥用載體或賦形劑。通式I的化合物或其可藥用的鹽可以單獨(dú)使用，或與可藥用的載體或賦形劑一起以藥物組合物的形式使用，當(dāng)以藥物組合物的形式使用時(shí)，通常將有效劑量的本發(fā)明通式I化合物或其可藥用鹽或水合物以及一種或多種可藥用載體或稀釋劑結(jié)合制成適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问?，這一程序包括通過合適的方式將組分混合、?；嚎s或溶解。
本發(fā)明藥用組合物可以以下方面的任意方式施與口服、噴霧吸入、直腸給藥、鼻腔給藥、陰道給藥、局部給藥、非腸道給藥如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)或顱內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植的儲(chǔ)器用藥，其中優(yōu)選口服、肌注、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)用藥方式。
本發(fā)明的藥物組合物中含有的藥用載體包括但不局限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，緩沖物質(zhì)如磷酸鹽，甘油，山梨酸，山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蜂蠟，羊毛酯等。載體在藥物組合物中的含量可以是1重量％-98重量％，通常大約占到80重量％。為方便起見，局部麻醉劑，防腐劑，緩沖劑等可直接溶于載體中。
口服制劑如口服片劑和膠囊可以含有賦形劑如粘合劑，如糖漿，阿拉伯膠，山梨醇，黃芪膠，或聚乙烯吡咯烷酮，填充劑，如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸鈣，山梨醇，氨基乙酸，潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂，滑石，聚乙二醇，硅土，崩解劑，如馬鈴薯淀粉，或可接受的增潤(rùn)劑，如月桂醇鈉硫酸鹽。片劑可以用制藥學(xué)上公知的方法包衣。
口服液形式的本發(fā)明藥物組合物可以制成水和油的懸浮液，溶液，乳濁液，糖漿或酏劑，也可以制成干品，用前補(bǔ)充水或其它合適的媒質(zhì)。這種液體制劑可以包含常規(guī)的添加劑，如懸浮劑，山梨醇，纖維素甲醚，葡萄糖糖漿，凝膠，羥乙基纖維素，羧甲基纖維素，硬脂酸鋁凝膠，氫化的食用油脂，乳化劑，如卵磷脂，山梨聚醣單油酸鹽，阿拉伯樹膠；或非水載體(可能包含可食用油)，如杏仁油，油脂如甘油，乙二醇，或乙醇；防腐劑，如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加調(diào)味劑或著色劑。
栓劑可包含常規(guī)的栓劑基質(zhì)，如可可黃油或其它甘油酯。
非腸道給藥，液態(tài)劑型通常由化合物和至少一種消毒或無菌的載體制成。載體首選水。依照所選載體和藥物濃度的不同，化合物既可溶于載體中也可制成懸浮溶液，在制成注射用溶液時(shí)先將化合物溶于水中，過濾消毒后裝入封口瓶或安瓿中。
當(dāng)皮膚局部施用時(shí)，本發(fā)明化合物可以制成適當(dāng)?shù)能浉?，洗劑，或霜?jiǎng)┑男问?，其中活性成分懸浮或溶解于一種或多種的載體中。其中軟膏制劑可以使用的載體包括但不局限于礦物油，液體凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蠟和水；洗劑和霜?jiǎng)┛墒褂玫妮d體包括但不限于礦物油，脫水山梨糖醇單硬脂酸酯，吐溫60，十六烷酯蠟，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，芐醇和水。
依據(jù)給藥方式的不同，組合物中可以含有重量比0.1％，或更合適的重量比10-60％的活性組分。但組合物為單位劑型時(shí)，每個(gè)單位最好包含50-500毫克活性成分。依據(jù)給藥途徑和給藥頻率的不同，用于成人的適宜治療劑量，舉例講可為每天100-3000毫克，如每天1500毫克。這一劑量對(duì)應(yīng)于1.5-50毫克/公斤/天，合適的劑量是5-20毫克/公斤/天。
必須認(rèn)識(shí)到，通式I化合物的最佳給藥劑量和間隔是由疾病或癥狀的嚴(yán)重程度、化合物性質(zhì)和諸如給藥的形式、路徑和部位以及所治療的特定哺乳動(dòng)物等條件決定的，而這一最佳給藥劑量可由臨床醫(yī)生來確定。
本發(fā)明還涉及式I化合物或其立體異構(gòu)體或它們的藥用鹽或它們的水合物在制備用于治療與CB1受體有關(guān)疾病或癥狀的藥物中的用途。
具體實(shí)施方案下面的具體實(shí)施例是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，其不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。
化合物的熔點(diǎn)由RY-1熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度計(jì)未較正。質(zhì)譜由Micromass ZabSpec高分辨率質(zhì)譜儀(分辨率1000)測(cè)定。1H NMR由JNM-ECA-400超導(dǎo)NMR儀測(cè)定，工作頻率1HNMR 400MHz。
實(shí)施例實(shí)施例1 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-9H-芴基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
步驟1 5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備。
取0.5g 5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酸，用10ml甲苯溶解，加入0.29ml氯化亞砜，加熱至回流，4小時(shí)后，蒸出氯化亞砜和甲苯，再分三次加入各10ml甲苯，蒸餾，得0.4g紅棕色油狀物。直接投料下步反應(yīng)。
步驟2 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-9H-芴基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
將上步所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.23g2-氨基芴和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)9小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1柱層析分離，得到0.388g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-9H-芴基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp212.9-214.5℃，兩步總收率54.34％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.32(s，3H)，3.92(s，2H)，7.27(dd，1H)，7.36(t，1H)，7.48(m，2H)，7.55(d，1H)，7.61(dd，1H)，7.78-7.84(m，4H)，8.18(s，1H)，10.25(s，1H).FAB-MS(m/e)545.1(M+)。
實(shí)施例2 N-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.215g對(duì)溴苯胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)9小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1柱層析分離，得到0.327g的N-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp157.6-159.3℃，兩步總收率46.58％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.29(s，3H)，7.26(dd，2H)，7.47-7.51(m，5H)，7.79-7.83(m，4H)，10.35(s，1H)。FAB-MS(m/e)536.0(M+)。
實(shí)施例3 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.141g對(duì)溴苯胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)6.5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝1∶3柱層析分離，得到0.311g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基)-1H-吡唑-3-甲酰胺mp162.8-164.1℃，兩步總收率51.86％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.31(s，3H)，7.27-7.38(m，3H)，7.47(d，2H)，7.60(dd，1H)，7.80-7.84(m，2H)，8.22-8.30(m，2H)，8.98(d，1H)，10.47(s，1H).FAB-MS(m/e)457.0(M+)。
實(shí)施例4 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-環(huán)戊基-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.256g環(huán)戊胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)5.5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1柱層析分離，得到0.398g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-環(huán)戊基-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp146.9-148.7℃，兩步總收率67.69％，1H-NMR(DMSO，δppm)1.50-1.66(m，6H)，1.80-1.88(m，2H)，2.24(s，3H)，4.20-4.24(m，1H)，7.21-7.24(d，2H)，7.44-7.59(m，3H)，7.74-7.76(m，2H)，8.01(d，1H).FAB-MS(m/e)448.1(M+)。元素分析C22H20Cl3N3O，計(jì)算值(％)C58.88，H4.49，N9.36，測(cè)定值(％)C58.98，H4.50，N9.49。
實(shí)施例5 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(甲基環(huán)己基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.22g氨甲基環(huán)戊烷和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)4.5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1柱層析分離，得到0.250g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(甲基環(huán)己基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp110.4-111.9℃，兩步總收率40％，1H-NMR(DMSO，δppm)0.87-1.68(m，10H)，2.24(s，3H)，3.05(t，1H)，7.22(d，2H)，7.45-7.60(m，3H)，7.75-7.78(m，2H)，8.20(t，1H).FAB-MS(m/e)476.2(M+)。
實(shí)施例6 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備 5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.225g的1-氨基-4甲基哌嗪和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)4.5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1柱層析分離，得到0.266g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp96.7-98.9℃，兩步總收率42.42％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.16-2.21(d，6H)，2.50(s，4H)，2.81(t，4H)，7.21(d，2H)，7.44-7.48(d，2H)，7.57-7.60(dd，1H)，7.76-7.77(m，2H)，9.22(s，1H).FAB-MS(m/e)478.2(M+)。
實(shí)施例7 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-呋喃-甲基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.189g的2-呋喃甲基胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)6小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1柱層析分離，得到0.415g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-呋喃-甲基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp154.7-156.1℃，兩步總收率68.75％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.25(s，3H)，4.40(d，2H)，6.22(d，1H)，6.38(m，1H)，7.23(d，2H)，7.45-7.60(m，4H)，7.75-7.79(m，2H)，8.69(t，1H).FAB-MS(m/e)462.1(M++1)。
實(shí)施例8 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(4-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.22g的4-氟苯胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1柱層析分離，得到0.398g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(4-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp174.7-176.3℃，兩步總收率63.99％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.30(s，3H)，7.14-7.29(m，4H)，7.46-7.63(m，3H)，7.80-7.86(m，4H)，10.30(s，1H).FAB-MS(m/e)474.1(M+)。
實(shí)施例9 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.22g的2-氟苯胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)5小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝7∶1柱層析分離，得到0.438g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp163.5-165.0℃，兩步總收率70.42％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.29(s，3H)，7.20-7.31(m，5H)，7.47-7.50(d，2H)，7.60-7.63(dd，1H)，7.74-7.84(m，3H)，9.81(s，1H).FAB-MS(m/e)474.0(M+)。
實(shí)施例10 N-(4-甲氧基苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.268g的(4-甲氧基苯基)-甲基胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)6小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝6∶1柱層析分離，得到0.405g的N-(4-甲氧基苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp130.8-132.3℃，兩步總收率61.74％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.25(s，3H)，3.72(s，3H)，4.34(d，2H)，6.86(d，2H)，7.23(t，4H)，7.45-7.59(m，3H)，7.75-7.78(m，2H)，8.75(t，1H).FAB-MS(m/e)500.0(M+)。
實(shí)施例11 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.211g的4-氨甲基吡啶和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)7小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1柱層析分離，得到0.263g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp64.7-67.0℃，兩步總收率42.55％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.25(s，3H)，4.42(d，2H)，7.24-7.30(m，4H)，7.46(d，2H)，7.59(dd，1H)，7.78-7.80(m，2H)，8.49(m，2H)，8.98(t，1H).FAB-MS(m/e)471.2(M+)。
實(shí)施例12 N-[3-(1-1H-咪唑基)-丙基]-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.244g的N-(3-氨基丙基)-咪唑和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)7小時(shí)。用氨水∶乙醇∶氯仿＝1∶10∶200柱層析分離，得到0.42g的N-[3-(1-1H-咪唑基)-丙基]-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp184.5-186.8℃，兩步總收率65.58％，1H-NMR(DMSO，δppm)1.93-1.95(m，2H)，2.25(s，3H)，3.21(dd，2H)，3.96(t，2H)，6.88(t，1H)，7.21-7.25(m，3H)，7.45(d，2H)，7.57(dd，1H)，7.67(s，1H)，7.75-7.79(m，2H)，8.43(t，1H).FAB-MS(m/e)488.0(M+)。
實(shí)施例14 1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-[4-(二甲基氨基)苯基]-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺的制備。
5-(4-氯苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰氯的制備方法參見實(shí)施例1。
將所得甲酰氯用4ml二氯甲烷溶解，0℃下，緩慢滴加入0.266g的N，N-二甲基對(duì)位苯胺和0.234ml三乙胺在5ml二氯甲烷的溶液中，室溫下反應(yīng)7小時(shí)。用石油醚∶乙酸乙酯＝1∶3柱層析分離，得到0.443g的1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-[4-(二甲基氨基)苯基]-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺，mp151.5-152.8℃，兩步總收率67.65％，1H-NMR(DMSO，δppm)2.29(s，3H)，2.86(s，6H)，6.68(d，2H)，7.25(d，2H)，7.46(d，2H)，7.59(dd，3H)，7.79-7.81(m，2H)，9.88(s，1H).FAB-MS(m/e)500.1(M+)。
實(shí)施例15 本發(fā)明化合物對(duì)大鼠小腦CB1受體的作用實(shí)驗(yàn)方法(1)大鼠小腦CB1受體膜蛋白的制備用Wistar大鼠，220～260g，雌雄不限，斷頭處死后，迅速分離出小腦，稱量后加入10倍體積的Tris-HCl Buffer(50mM Tris HCl，5mM MgCl26.H20，1mM EDTA，0.5％(W/V)BSA，pH7.4)，用勻漿器15000rpm/min進(jìn)行勻漿，每次30秒，共5次。勻漿液經(jīng)400×g離心10min，取上清液再用39000×g離心10min，收集沉淀，用原重量的10倍體積Tris-HCl Buffer pH7.4重新懸浮，再用39000×g離心10min，取沉淀用相同緩沖液洗滌，39000×g離心10min，最后將得到的沉淀用Tris-HCl Buffer懸浮，分裝后(整個(gè)操作過程要在4℃進(jìn)行)在-80℃保存?zhèn)溆?。用Folin法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
(2)CB1受體蛋白質(zhì)含量的測(cè)定樣品100μl，內(nèi)含BSA 5～100μg(作標(biāo)準(zhǔn)曲線用)或待測(cè)樣品，不足100μl者用H20補(bǔ)足，加試劑甲(①含4％碳酸鈉及0.2％酒石酸鈉(Na2C4 H906 2H20)的0.2N NaOH溶液，②4％硫酸銅(CuSO4.5H2O)水溶液，將①和②按100∶1的比例混合均勻，即為試劑甲，配制后一天內(nèi)使用)100μl，混合后放在室溫反應(yīng)10分鐘，再加試劑乙(Folin-酚試劑，最后濃度為1N)20μl，立即混勻，置50℃水浴中，孵溫15分鐘，取200μl用微量多道掃描光密度計(jì)，波長(zhǎng)690nm，光程0.6cm，測(cè)光密度值，用H2O 100μl代替樣品作空白對(duì)照。
(3)CB1受體與3H-SR141716A的飽和實(shí)驗(yàn)所有管中依次加30μg相同受體的蛋白量，在非特異結(jié)合管中加入25μl(10-4M)SR141716A，在30℃反應(yīng)30分鐘；全部試管依次加入不同的3H-SR141716A，用Tris-HCl Buffer補(bǔ)足所有反應(yīng)管體積為300μl，在30℃反應(yīng)1小時(shí)；然后點(diǎn)樣于49型玻璃纖維濾紙上(濾紙預(yù)先用0.1mg/ml BSA濕潤(rùn))，經(jīng)負(fù)壓抽濾，再用冰冷的Tris-HClBuffer(50mM Tris-HCl Buffer，pH 7.4，1mM EDTA，5mM MgCL2)洗滌，每次2ml，共10次，抽干濾紙，將濾紙取出烘干后，放在閃爍瓶中，加1ml閃爍液，用LS6500型液閃計(jì)數(shù)器測(cè)定放射性強(qiáng)度。
(4)藥物對(duì)CB1受體與3H-SR141716A結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)在30℃的反應(yīng)條件中擺放試管，所有管中依次加入100μg受體蛋白量，測(cè)試管中依次加入20μl一定濃度的藥物，非特異結(jié)合管中加入50μl非標(biāo)配體(ACEA)，非標(biāo)配體終濃度為1mM，預(yù)先反應(yīng)30分鐘，全部試管依次加入30μl 3H-SR141716A(16nM)，標(biāo)記配體終濃度為2.4nM，用Buffer補(bǔ)足所有反應(yīng)管體積為200μl，在30℃反應(yīng)條件下反應(yīng)1小時(shí)，然后點(diǎn)樣于49型玻璃纖維濾膜上，經(jīng)負(fù)壓抽濾，再用冰冷的Buffer洗滌10次，每次2ml，抽干濾膜，將濾膜取出烘干后，放在閃爍瓶中，加1ml閃爍液，用LS6500型液閃計(jì)數(shù)器測(cè)定放射性強(qiáng)度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果活性評(píng)價(jià)結(jié)果如下表所示表1

根據(jù)初篩結(jié)果，對(duì)CB1受體親和力較高的化合物，進(jìn)一步測(cè)定其IC50(Log M)。SR141716為1.30×10-10，實(shí)施例1化合物為2.53×10-10。
實(shí)施例16 本發(fā)明化合物的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)方法把所合成化合物組建一個(gè)ISISBase數(shù)據(jù)庫，*.db格式的文件，用Concord 4.08程序?qū)⒒衔飶?D轉(zhuǎn)化到3D，轉(zhuǎn)為*.mo12格式，傳入SYBYL給化合物以相應(yīng)的電荷。在SYBYL中組建一個(gè)數(shù)據(jù)庫，*.mdb格式，把所有分子導(dǎo)入，)用VolSurf3.010的GRID程序計(jì)算3D分子與水、疏水和羰基3個(gè)探針之間的相互作用場(chǎng)，分別計(jì)算Caco-2細(xì)胞吸收透膜模型、BBB血腦屏障透過性模型和藥物蛋白結(jié)合模型的描述參數(shù)。
預(yù)測(cè)結(jié)果見下表

上表中，BBB透過性模型的預(yù)測(cè)結(jié)果能穿透的為BBB+，不能穿透的為BBB-；Caco-2模建的結(jié)果，得分高者，透膜性高；蛋白結(jié)合模型的結(jié)果，得分者高，蛋白結(jié)合能力強(qiáng)。從表中可以看出，化合物實(shí)施例4、實(shí)施例5在三項(xiàng)預(yù)測(cè)中都有良好表現(xiàn)，優(yōu)于對(duì)照化合物SR141716A，實(shí)施例1的透膜性也強(qiáng)于陽性對(duì)照藥SR141716A。
權(quán)利要求
1.通式I的4-甲基-1H-二芳基吡唑衍生物或其立體異構(gòu)體或它們的可藥用的鹽或它們的水合物 其中R是H，C1-C15烷基，尤其是C1-C8的直鏈或支鏈烷基，環(huán)烷基，或是C6-C15的取代或未取代的芳香基，有代表性的如苯基、萘基、蒽基、芴基，或是含N雜環(huán)如喹啉、吡咯、哌啶、哌嗪、嗎啉、咪唑、吡唑、嗎啉或其他雜環(huán)如噻唑、呋喃等；取代基選自鹵素、氰基、硫氫基、甲?；?、羥基、磺酸酯、硝基、亞硝基、C1-C8取代或未取代烷氨基、C1-6烷硫基、C1-C8的烷氧基、C1-C15烷基、尤其是C1-C8直鏈、支鏈和環(huán)狀結(jié)構(gòu)烷基。
2.權(quán)利要求1的4-甲基-1H-二芳基吡唑衍生物，其選自下列化合物1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-9H-芴基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺N-(4-溴苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基)-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-環(huán)戊基-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(甲基環(huán)己基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-呋喃-甲基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(4-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-(2-氟苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺N-(4-甲氧基苯基)-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(3-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-N-(4-吡啶基-甲基)-1H-吡唑-3-甲酰胺N-[3-(1-1H-咪唑基)-丙基]-1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺1-(2，4-二氯苯基)-5-(4-氯苯基)-N-[4-(二甲基氨基)苯基]-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
3.一種藥物組合物，其包含作為活性的成分，如權(quán)利要求1～2中任何一項(xiàng)所述的4-甲基-1H-二芳基吡唑衍生物，或其立體異構(gòu)體或它們的可藥用鹽，或它們的水合物或溶劑化物及藥用載體或賦形劑。
4.權(quán)利要求3的藥物組合物一種用于治療肥胖的藥物組合物。
5.權(quán)利要求3的藥物組合物，其是一種用于改善記憶的藥物組合物。
6.權(quán)利要求3的藥物組合物，其是一種用于戒煙的藥物組合物。
7.通式I的4-甲基-1H-二芳基吡唑衍生物或其立體異構(gòu)體或它們的可藥用的鹽或它們的水合物在制備具有治療肥胖、改善記憶、戒煙活性的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的4－甲基－1H－二芳基吡唑衍生物及其藥用鹽，其制備方法，含它們的藥用組合物作為腦內(nèi)大麻素I型(CB1)受體抑制劑特別是在治療肥胖、改善記憶、戒煙方面的用途。
文檔編號(hào)A61P3/04GK101062919SQ20071010211
公開日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2007年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月26日
發(fā)明者李松, 劉夢(mèng)佳, 鄭志兵, 王莉莉 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所