專利名稱：：一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種治療更年期綜合征的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：更年期綜合征是指婦女絕經(jīng)前后，由于卵巢功能衰退，雌激素水平低下所導(dǎo)至以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主的癥狀。中醫(yī)認(rèn)為是由于腎氣虛衰，陰陽失衡所致。據(jù)國內(nèi)外有關(guān)資料統(tǒng)計報道，在45-50歲90%的婦女均有程度不同的臨床表現(xiàn)。隨著老齡化社會的到來，更年期綜合征的婦女日漸增多，據(jù)統(tǒng)計，2000年我國50歲以上婦女約為1.2億，到2030年將達(dá)約2.8億，因此對更年期綜合征的防治，已成為全球關(guān)注的醫(yī)學(xué)課題和社會問題。對于更年期綜合征的治療西醫(yī)常用激素替代療法。(HormonRelaccmentTherapy，HRT)HRT有較好的臨床療效，但不良反應(yīng)較多，增加了乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、血栓性疾病等的危險性，從而在很大程度上限制了其使用。中醫(yī)多通過中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)，根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)，以辯證論治，通常以補(bǔ)腎益精為主要法則，使其達(dá)到腎精充足，陰陽平衡，氣血調(diào)達(dá)，則其病自愈的目的且中藥不良反應(yīng)及副作用小。因此，臨床應(yīng)用日趨廣泛。有關(guān)治療更年期綜合征及相關(guān)疾病的中成藥，文獻(xiàn)中涉及的不下幾十種。有的已成商品上市，如天津樂仁堂生產(chǎn)的更年安糖衣片、廣州白云由制藥廠生產(chǎn)的更年康、上海市中藥三廠生產(chǎn)的珍合靈片、湖南醫(yī)科大學(xué)的地顆粒，它如婦寧膠囊、更年女寶片、更年樂、參芪三仙片、蓯蓉補(bǔ)腎丸、安年更年片、養(yǎng)血安神片、更美寧膠囊等?？v觀以上品種，其功能主治雖涵蓋了溫腎陽、滋腎陰、補(bǔ)腎精、益氣血、清解心肝火熱，適應(yīng)腎陽虛、腎陰虛、陰虛陽亢、氣血不足或肝腎陰虧、心肝火旺等證，但多功效單一。然中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，更年期綜合征雖以腎虛為其主要的病理機(jī)制，但由于體質(zhì)等不同，臨床上亦多虛中突實，在疾病過程常常累及心肝脾等臟腑，難以用一種治療原則以偏概全，其關(guān)鍵在于補(bǔ)腎益精的同時平衡陰陽，調(diào)和氣血。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種治療更年期綜合征的中藥組合物；本發(fā)明目的還在于提供一種治療更年期綜合征的中藥組合物制備方法；本發(fā)明目的還在于提供一種治療更年期綜合征的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明所述的治療更年期綜合征的中藥組合物是由如下重量比的原料藥制成的制何首烏200-800重量份淫羊藿200-700重量份菟絲子300-800重量份虎杖200-700重量份白芍200-700重量份川芎200-700重量份。本發(fā)明所述的治療更年期綜合征的中藥組合物優(yōu)選如下重量比的原料藥制成的淫羊藿300-600重量份虎杖300-500重量份川考300-600重制何首烏400-700重量份菟絲子500-700重量份白芍300-600重量份上述原料優(yōu)選配比為制何首烏600重量份菟絲子600重量份白芍400重量份上述原料優(yōu)選配比為制何首烏650重量份菟絲子650重量份白芍550重量份上歩原料優(yōu)選配比為制何首烏550重量份菟絲子500重量份白芍360重量份淫羊藿400重i虎杖400重量份川芎400重量份淫羊藿350重J虎杖350重量份川芎350重量份'淫羊藿580重』虎杖460重量份川芎460重量份t份。t份份t份本發(fā)明所述的組合物可按常規(guī)工藝加入輔料制成片劑、膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑、顆粒劑等臨床可接受的劑型；所述輔料包括溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、基質(zhì)等。本發(fā)明所述的組合物劑型優(yōu)選顆粒劑，顆粒劑輔料優(yōu)選乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦，制成顆粒劑時在上述原料藥中再加入如下配比的輔料:乳糖400-700重量份硬脂酸鎂3-10重量份微粉硅膠1-6重量份阿司帕坦3-15重量份；輔料配比優(yōu)選為乳糖560重量份硬脂酸鎂5重量份微粉硅膠2重量份阿司帕坦9重量份；乳糖450重量份硬脂酸鎂8重量份微粉硅膠2重量份阿司帕坦12重量份或乳糖700重量份硬脂酸鎂5重量份微粉硅膠5重量份阿司帕坦6重量份。本發(fā)明上述的中藥組合物顆粒制劑的制備方法為選取原料藥及輔料淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮2-4次，每次1-2小時，加水量為藥材量的12-16倍；合并煎液，濃縮至40-60"C測相對密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)40-60%，3-l(TC冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用50-70%的乙醇回流提取2-3次，每次加乙醇5-7倍量，回流1-3小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液;取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.20-1.40，80-5(TC減壓干燥，干浸膏粉碎過100目篩;加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒，即得。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.取1/10-2/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理15-30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2-3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用60-75%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6-8:1-3:1-2氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置20-40分鐘后，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取1/10-2/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材50-70目lg，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:1-2:0.1-0.3甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取1/10-2/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，'殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材50-70目0.5g，加乙醚20mL,超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8uL,分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:0.4-0.7的60-9(TC石油醚一醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和.10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取1/10-2/5單位制劑，加入甲醇20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3G00轉(zhuǎn)/分離心5-15鐘，取上清液過大孔樹脂柱，'先用水50mL洗脫，棄去水液，再用25-35y。乙醇50niL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙醚提取2-4次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以35-45:4-7:8-12:0.1-0.8氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和10-25分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IO(TC加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；20-35:65-80甲醇一O.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加40-60%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加40_60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑，70-90目研細(xì)，取1/30-1/10單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL,，稱定重量，'超聲處理15-30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20yL，注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-3-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于10-15mg/單位制劑。本發(fā)明藥物組合物質(zhì)量控制方法優(yōu)選如下鑒別方法和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g，14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取本發(fā)明組合物顆粒劑，600目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材60目lg，同法制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1:0.2甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm,取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、敢本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目(X5g，同法制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9.5:0.5石油醚(60-90°C)—醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入甲醇20mL,超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心10鐘，取上清液過HPD100，高8cm，內(nèi)徑1cm大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用309&乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10m「溶解，用乙醚提取3次，'每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過2g，內(nèi)徑1cm中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40:5:10:0.2氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IO(TC(或電吹風(fēng))加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上,顯相同顏色的斑點；含M測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；29:71甲醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-0-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備，取本發(fā)明組合物顆粒劑，80目研細(xì)，取l/20單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率IOOW，頻率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0,5iim微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-e-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于12.5mg/單位制劑。所述組合物質(zhì)量控制方法可以應(yīng)用于組合物的各種劑型，如片劑、膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑、顆粒劑等臨床可接受的劑型，由于不同劑型的制劑其中所含的相當(dāng)生藥量是相同的，因此各個劑型在進(jìn)行質(zhì)量控制時，所選用樣品量可統(tǒng)一折算為相當(dāng)生藥量，本質(zhì)量控制方法以相當(dāng)生藥量15-20g為每單位制劑，每單位制劑可以為每片、每粒、每支或每丸等。本發(fā)明組合物是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，根據(jù)更年期的病機(jī)和癥狀特點，通過辯證論治，結(jié)合多年臨床實踐的基礎(chǔ)上研制而成。其組方由制何首烏、淫羊藿、菟絲子、虎杖、白芍等藥組成，具有補(bǔ)腎益精，調(diào)和陰陽，除煩安神的功效，即可益腎以治本，又除煩安神以治標(biāo)。經(jīng)過多年的臨床驗證，證明該方療效確切，并在藥效毒理學(xué)研究中得以進(jìn)一步證明。本發(fā)明組合物使用安全，療效確切，制劑恰當(dāng)，質(zhì)量可控、穩(wěn)定，與同類產(chǎn)品相比療效更佳，具有良好的開發(fā)潛力和市場前景。本發(fā)明組合物制劑提取、分離工藝條件、制劑和劑型合理，建立了具有針對性、操控性較強(qiáng)的質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)，且制劑質(zhì)量穩(wěn)定。本發(fā)明針對更年期特殊的生理病特點，以補(bǔ)益腎精、調(diào)和陰陽以治其本，安神除煩以顧其標(biāo)，以達(dá)本固標(biāo)除，陰陽合和，其證自除之目的。不僅對更年期的婦女有效，對更年期的男性出^心煩、失眠、腰膝酸痛等癥也有非常好的療效。.對于治療用于腎精不足、心腎不交引起的更年期前后綜合征及男性患有類似癥狀者有顯著的療效，并通過藥效、毒理和臨床研究證明本方安全有效。主要藥效學(xué)試驗表明，本發(fā)明組合物制成的顆粒劑可提高雌性去卵巢大鼠更年期模型的血清E2水平，降低FSH和LH水平，表明其對性激素紊亂具有改善作用，同時使該模型動物對戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠具有一定的協(xié)同作用，表現(xiàn)為入睡加快，入睡潛伏期縮短，睡眠時間明顯延長。對地塞米松導(dǎo)致的大鼠骨質(zhì)疏松模型，本發(fā)明組合物顆粒劑可明顯增加股骨灰重及其比重，明顯改善多項骨計量學(xué)指標(biāo)，同時使用血鈣水平恢復(fù)正常，對雌性大鼠和雄性大鼠的作用相似。由毛果蕓香堿誘發(fā)小鼠汗液分泌增加，本發(fā)明組合物有顯著止汗作用，而對正常小鼠的汗出無明顯影響，同時可明顯延長正常小鼠負(fù)重游泳時間。下述實驗例和實施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1對地塞米松導(dǎo)致的大鼠骨質(zhì)疏松的影響1、試驗?zāi)康牟捎玫厝姿蓪?dǎo)致的大鼠骨質(zhì)疏松模型，觀察本發(fā)明組合物顆粒劑對大鼠骨比重、密度、骨灰重以及骨計量學(xué)指標(biāo)的影響，以了解安寧顆粒對骨質(zhì)疏松是否具有改善作用。2、試驗材料2.l供試品2.1.1受試藥本發(fā)明組合物顆茅立，批號200412062.1.2來源中藥研究所劑型室2.1.3含量7.1g生藥/g藥粉2.1.6溶劑蒸餾水2.1.7配制方法用電子天平精確稱量安寧顆粒藥粉，加蒸餾水研磨配制成濃度為0.035、0.07和0.14g藥粉/ml(分別相當(dāng)于:0.25、0.5、1.0g生藥/ml)的三種受試濃度2.2陽性藥2.2.1名稱仙靈骨葆膠囊2.2.1來源貴州同濟(jì)堂制藥股份有限公司2.2.2批號0410122.2.3溶劑蒸餾水2.2.4辨格0.5g/粒2.2.5配制方法用蒸餾水將仙靈骨葆膠囊配成0.07g藥粉/ml2.2.6陰性對照品蒸餾水2.3造模藥2.3.l名稱地塞米松注射液2.3.2來源上海第九制藥廠2.3.3批號062512.3.4溶劑鹽水2.3.5規(guī)格25mg/ml236配制方法用生理鹽水稀釋成2.5mg/ml2.4實驗動物及飼養(yǎng)2.4.1品種大鼠2.4.2品系SD2.4.3性別和數(shù)量共72只，雌、雄各半2.4.4動物體重240—260g2.4.5動物來源由北京維迎利華實驗動物有限公司提供，合格證號SCXK京2002-20062.4.6詞料中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供2.4.7飼養(yǎng)動物詞養(yǎng)于中國中醫(yī)研究院SPV級動物房內(nèi)，溫度19一22。C，濕度40%—70%，人工照明，12小時明暗周期2.4.8每組動物數(shù)12只，雌、雄各個3.實驗方法大鼠到達(dá)后，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天。然后將大鼠隨機(jī)分成6組，每組12只，雌、雄各6只。分組為(l)正常對照組，(2)模型組，(3)陽性藥仙靈骨葆組0.7g/kg，(4)(6)本發(fā)明組合物顆粒劑高、中、低劑量組(IO、5、2.5g生藥/kg)。受試藥本發(fā)明組合物顆粒劑和陽性藥仙靈骨葆的給藥途徑均為灌胃給藥，與臨床擬用途徑一致，每日灌胃給藥l次，連續(xù)給藥50天，給藥體積為1ml/100g體重。對照組灌胃等體積的蒸餾水。從試驗開始，除了對照組外，其余各組均于每周肌肉注射給予地塞米松2次，劑量為2.5mg/kg，2次給藥間隔3天，一直至試驗結(jié)束。于試驗結(jié)束的第14天和結(jié)束前第3天，所有試驗組均腹腔注射給予鹽'酸四環(huán)素30mg/kg(Sigma進(jìn)口分裝)。所有試驗組于末次給藥后禁食12h。稱體重，取血，離心，分離血清，測定鈣、磷含最，并將動物處死。取雙側(cè)股骨，，剔凈軟組織和肌肉，用電子天平稱量股骨濕重，用容積測定儀測量股骨容積。然后用烤箱將雙側(cè)股骨在IO(TC溫度下烘烤48h，稱量干燥股骨重量。然后再將股骨置入馬福爐內(nèi)，50(TC烤9h，使之灰化。稱量骨灰重量。取大鼠左側(cè)脛骨近端1/3，去除軟組織。用乙醇逐級脫水，二甲苯透明，每級各兩次，每次24h。浸透液的配制I液甲基丙烯酸甲酯(北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號2005031>)75ml，鄰苯二甲酸二丁酯(北京化學(xué)試劑公司，批號040401)25ml;II液在I液的基礎(chǔ)上加過氧化苯甲酰(北京金龍化學(xué)試劑有限公司，批號20000420)lg;III液在I液的基礎(chǔ)上加過氧化苯甲酰2.5g。以上三液，用磁力攪拌器充分?jǐn)噭?。?biāo)本在I、II、III液各浸透36h。在青霉素小瓶中注入約5ml的III液，將標(biāo)本按同一方向放入瓶中，然后置于40'C烘箱中聚合34天，待變?yōu)闊o色透明的堅硬包埋塊后，砸碎小瓶，取出包埋塊。修塊后，在Reicheit—Jung2040切片機(jī)(德國)上，用鎢鋼刀分別切出5um和10um的縱向不脫鈣骨切片。5um切片用二甲苯溶掉樹脂后，梯度乙醇至水，進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，觀察骨小梁形態(tài)和進(jìn)行骨組織形態(tài)計量學(xué)觀察；同時每只脛骨苒制備10um，直接用熒光顯微鏡觀察2次給予四環(huán)素后在骨質(zhì)沉積的四環(huán)素?zé)晒猓?次沉積的熒光帶之間的間.距作為骨皮質(zhì)礦化率。骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的測定，'按照章明放等人的方法，采用LeicaQwin圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行以下骨組織形態(tài)計量學(xué)測定骨小梁組織形態(tài)計量骨小梁體積百分比(TBVX):骨小梁體積占被測骨髓腔總體積的百分比，是骨量水平的主要標(biāo)志骨小梁吸收表面百分比(TRSX):不規(guī)則、凹凸不平的骨小梁表面的百分比；.骨小梁形成表面百分比(TFSX):有成骨細(xì)胞被覆的類骨質(zhì)表面占骨小梁表面的百分比；活性生成表面百分比(AVSX):有熒光標(biāo)記帶的骨小梁表面占骨小梁表面的百分比骨小梁礦化率(MAR):骨小梁表面由四環(huán)素?zé)晒怆p標(biāo)記帶的平均距離除以兩次標(biāo)記相隔的天數(shù)。皮質(zhì)內(nèi)形態(tài)計量類骨質(zhì)平均寬度(0SW):皮質(zhì)內(nèi)表面類骨質(zhì)的平均寬度；骨皮質(zhì)礦化率(mAR):皮質(zhì)內(nèi)2次四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記帶的平均距離除以兩次標(biāo)記相隔的天數(shù)。4.統(tǒng)計分析采用組間t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析，比較各給藥組與模型組的差異，以P〈0.05認(rèn)為有顯著性差異。股骨比重=股骨干重/肌骨容積股骨灰比重=股骨灰重/股骨容積5.結(jié)果5.l對股骨干重、灰重及其比重的影響股骨干重、灰重及其比重可以反映股骨的密度。結(jié)果顯示，給人鼠長期注射地塞米松后，大鼠股骨干重及其比重、股骨灰重及其骨灰比重均明顯降低(與對照組比較P<0.05，或P〈0.01)，反映出模型組的骨密度降低，說明存在明顯的骨質(zhì)疏松狀況。灌胃給予本發(fā)明組合物顆粒劑10g生藥/kg，對雌、雄動物的股骨干重以及骨比重有升高趨勢，可明顯增加股骨灰重以及骨灰比重(與模型組比較p〈0.05)，說明本發(fā)明組合物顆粒劑可明顯抑制地塞米松引起的骨質(zhì)疏松。結(jié)果見表1-4.表1本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股骨干重的影響(g)(7土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較求p〈0.05，**p<0.01表2本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股重比重的影響(干股骨重量g/股骨體積ml)(i±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較求P〈0.05，**p<0.01表3本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股骨灰重的影響(g)(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較求p〈0.05，**p〈0.01表4本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠股骨灰比重的影響(股骨灰重量g/股骨體積ml,X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>注與模型組比較水p〈0.05，**p<0.015.2將雌、雄動物的血鈣、磷含量單獨或合并計算時，模型組血鈣含量均較正常組有降低趨勢，但未見統(tǒng)計學(xué)意義。表明地塞米松對大鼠體內(nèi)鈣代謝有一定影響，但由于動物代償能力較強(qiáng)，其影響程度尚未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著性意義。本發(fā)明組合物顆粒劑2.5g、5.0、10.0g生藥/kg劑量組雌、雄單獨計算或合并計算的血鈣含量均較模型組有增高趨勢，2.5g生藥/kg組有統(tǒng)計學(xué)顯著性意義，其他組的血鈣值均接近正常對照組。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物顆粒劑可改善地塞米松造成骨質(zhì)疏松大鼠的血鈣水平，使之恢復(fù)正常。結(jié)果見表5。表5本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠血清磷含量的影響(mg/dl)(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>6.結(jié)論本發(fā)明組合物顆粒劑510g生藥/kg，在地塞米松造成的雌性和雄性大鼠骨質(zhì)疏松模型上，可明顯增加股骨灰重及其比重(與模型組比較P〈0.05=,明顯改善多項骨計量學(xué)指標(biāo)，還能改善地塞米松造成骨質(zhì)疏松大鼠的血鈣水平，使之恢復(fù)正常。因此，本發(fā)明組合物顆粒劑對地塞米松誘導(dǎo)的雌性和雄性大鼠骨質(zhì)疏松均具有明顯的改善作用。本發(fā)明組合物顆粒劑對雌性大鼠和雄性大鼠的骨質(zhì)疏松改善作用相似。實驗例2對雌性大鼠更年期模型的血漿性腺激素、降鈣素、骨鈣素以及性腺器官重量的影響采用去卵巢大鼠更年期模型，灌胃給予本發(fā)明組合物顆粒劑2.5、5、10g生藥/kg,連續(xù)1個月，觀察本發(fā)明組合物顆粒劑對性腺激素、降鈣素、骨鈣素以及性腺器官重量的影響。結(jié)果顯示，本發(fā)明組合物顆粒劑各劑量組對去卵巢大鼠的性腺器官重量無明顯影響；10g生藥/kg對去卵巢大鼠的血清雌二醇(E2)水平有明顯的提升作用(與模型組比較P<0.05)，升高率為32.17%:5g生藥/kg對E2水平有增高趨勢，增高率為25.5%。本發(fā)明組合物顆粒劑中、高劑量組(5、10g生藥/kg)的降鈣素、骨鈣素比模型組有升高趨勢，中、高劑量組降鈣素的升高率分別為15.5%和21.33%，對骨鈣素的升高率分別為32.3%和32.8%。結(jié)果表明本發(fā)明組合物顆粒劑可明顯提高體內(nèi)雌激素水平，調(diào)節(jié)降鈣素和骨鈣素水平，抑制骨吸收，提高成骨細(xì)胞活性，對骨質(zhì)疏松起到一定的改善作用。實驗例3對雄性去勢大鼠血漿睪酮、骨鈣素、降鈣素以及性器官重量的影響采用雄性去勢大鼠，灌胃給予本發(fā)明組合物顆粒劑2.5、5、10g生藥/kg，連續(xù)1個月，觀察本發(fā)明組合物顆粒劑對血漿睪酮、骨鈣素、降鈣素以及性腺器官重量的影響，以了解本發(fā)明組合物顆粒劑對雄性激素減少相關(guān)的病理生理改變是否的改善作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明組合物顆粒劑對去勢大鼠的睪丸酮水平和雄性器官重量無明顯影響，說明其無雄激素樣作用。本發(fā)明組合物顆粒劑高劑量組(10g生藥/kg)對降鈣素有明顯的升高作用(與模型組比較P〈0.05)，增高率為55.2%;3個劑量組的血液骨^素水平均有一定的升高趨勢，表明本發(fā)明組合物顆粒劑可通過對降鈣素和骨鈣素的調(diào)節(jié)，抑制破骨細(xì)胞活動，抑制骨質(zhì)吸收，從而對骨質(zhì)疏松癥具有改善作用。實驗例4對去卵巢大鼠睡眠時間的影響采用摘除卵巢的大鼠作為更年期模型，觀察本發(fā)明組合物顆粒劑對睡眠時間的影響，以了解其對更年期的失眠是否具有改善作用。結(jié)果顯示，本發(fā)明組合物顆粒劑5、10g生藥/kg可以使動物入睡加快，入睡潛伏期明顯縮短(與模型組比較P〈0.05);睡眠時間明顯延長。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物顆粒劑對更年期的睡眠障礙具有一定的緩解作用。實驗例5對正常小鼠自發(fā)活動的影響采用正常小鼠，灌胃給予本發(fā)明組合物顆粒劑3、6、12g/kg，每日1次，連續(xù)給藥7天，觀察本發(fā)明組合物顆粒劑對自發(fā)活動的影響。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物顆粒劑各劑量組的自發(fā)活動次數(shù)均與對照組相近，表明本發(fā)明組合物顆粒劑對正常小鼠自發(fā)活動無明顯影響。實驗例6對小鼠正常泌汗及毛果蕓香堿誘導(dǎo)的汗腺分泌機(jī)能亢進(jìn)的作用分別采用正常小鼠和毛果蕓香堿誘導(dǎo)的汁腺分泌亢進(jìn)小鼠模型，觀察本發(fā)明組舍物顆粒劑的止汗作用。結(jié)果顯示，在毛果蕓香堿引起的汗液分泌亢進(jìn)模型上，本發(fā)明組合物顆粒劑6、12g生藥/kg顯示有顯著的止汗作用，但其對正常小鼠的汙腺分泌無明顯影響。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物顆粒劑對異常出汗增多具有止汗作用。-實驗例7對正常小鼠游泳耐力的影響觀察了本發(fā)明組合物顆粒劑對正常小鼠負(fù)重游泳耐力的影響。結(jié)果顯示，本發(fā)明組合物顆粒劑3、6g生藥/kg劑量組灌胃給藥連續(xù)7大，可明顯延長小鼠的負(fù)重游泳時間(與對照組比較P〈0.05)，具延長百分率為35.1—73.8%。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物顆粒劑具有一定的抗疲勞作用。實驗例8提取工藝條件的研究1.淫羊藿、菟絲子、白芍水提工藝條件的優(yōu)選(1)淫羊藿、菟絲子、白芍水提工藝條件的正交試驗方法分別稱取淫羊藿16g、菟絲了24g、白芍16g，共9份，按表6的因素水平和表7的試驗條件安排試驗，加水回流提取，水提取液冷藏過夜，離心后分別取上清液，用HPLC法(按藥典法)測定淫羊藿苷的含量，并對其進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表8。表6因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>*:Fw.。5(2，2)=19。0**:Fw.(u(2，2)二99.0由表8可知，A因素(加水量)對結(jié)果無顯著的影響，A3為最佳條件；B因素(提取次數(shù))對結(jié)果無顯著性影響，以B3為最佳；C因素(提取時間)對結(jié)果^影響，確定C3為最佳。故淫羊藿等藥水提最佳條件為A3B3C3，也即飲片加水14倍，加熱提取3次，每次1.5小時。(2)水提部分最佳提取工藝重復(fù)性試驗按處方比例稱取淫羊藿60g、菟絲子90g白芍60g，共計210g，按最佳條件平行提取三份，測定淫羊藿苷含量，結(jié)果見表9。表9水提最佳工藝重復(fù)性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>由表9結(jié)果可知，篩選出的淫羊藿等藥水提工藝穩(wěn)定，淫羊藿苷含量高于正交實驗結(jié)果，說明優(yōu)選出的提取條件適宜。2.制何首烏、虎杖、川芎乙醇提取工藝條件的優(yōu)選(1)制何首烏、虎杖、川芎乙醇提取的正交試驗方法分別稱取制何首烏12g、虎杖8g、川芎8g共9份，按表10的因素水平和表11的試驗條件安排試驗，加不同濃度乙醇提取2次，提取液冷藏過液，離心后取上清液，濃縮干燥，稱重，計算出膏率，并用HPLC法(按藥典法)測定二苯乙烯苷的含量，'進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表12。表10因素水平表_<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表12<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*:F卜0.05(2，4)=6.94F卜隨Cl8.00由表12可知，A因素(乙醇濃度)對結(jié)果無顯著的影響，A2為最佳條件；C因素(提取時間)對結(jié)果有明顯影響，C3為最佳。綜合考慮醇提最佳條件為A2B3G,也即飲片加60%乙醇6倍，加熱提取2次，每次2小時。(2)制何首烏、虎杖、川芎乙醇提取次數(shù)的比較方法分別稱取制何首烏60g、虎杖40g、川芎40g，加60%乙醇6倍提取，每次2h，提取次數(shù)按表13安排試驗，各次提取液分別冷藏過夜，離心后取上清液，濃縮干燥，稱重，按藥典法測定二苯乙烯苷的含量，并計算出膏率和二苯乙烯苷的轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表13。表13制何首烏、虎杖、川芎乙醇提取次數(shù)的比較結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>由表13可見，第一次和第二次提取二苯乙烯苷的總轉(zhuǎn)移率占藥材含量的83.93%?？紤]到成本和環(huán)保因素選擇提取次數(shù)為2次。(3)最佳醇提工藝重復(fù)性試驗取制何首烏45g、虎杖30g、川芎30g，三份，加60%乙醇6倍提取2次，每次提取2小時，提取液冷藏過夜，離心后取上清液，濃縮干燥，稱重，按藥典法測定二苯乙烯苷的含量，并計聳出膏率。結(jié)果見表14。表14制何首烏、虎杖、川芎醇提最佳工藝重復(fù)試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>由表14結(jié)果可知，制何首烏、虎杖、川芎醇提工藝穩(wěn)定，二苯乙烯苷含量高于正交試驗最好值。由此確定虎杖、川芎的醇提工藝為60%乙醇6倍提取2次，每次提取2小時。實驗例.9分離、純化、濃縮與干燥工藝的研究(一)、分離、純化工藝的研究1.淫羊藿菟絲子、白芍水提液的精制(1)水提液醇沉濃度的比較試驗.取淫羊藿、菟絲子、白芍的合煎濃縮藥液(每ml相當(dāng)lg藥材)50ml，三份，分別加乙醇至含醇量分別達(dá)50%、60%和70%，冷藏過夜，取上清液測定淫羊藿苷的含量。結(jié)果見表15。表15醇沉濃度的比較試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>由表15結(jié)果可見，乙醇濃度對醇沉效果較影響不大，淫羊藿苷含量相似，考慮到生產(chǎn)成本，故采用50%乙醇沉。(2)50%醇沉?xí)r藥液濃縮程度的比較取淫羊藿、菟絲子、白芍的合煎藥液三份，分別按下表中濃度濃縮，測定相對密度，加乙醇至含醇量達(dá)50%，冷藏過夜，取上清液測定淫羊藿苷的含量。結(jié)果見表16。表1650%醇沉?xí)r藥液濃縮程度的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>由表16結(jié)果可見，藥液的濃縮程度對淫羊藿苷含量有較大影響，故選擇藥液濃縮至相對密度1.05(每ml相當(dāng)0.5藥材)時，加乙醇使含醇量達(dá)50%的方法來去除雜質(zhì)。(二)濃縮與干燥工藝研究取600g藥材的提取液回收乙醇至無醇味，分為3份，一份濃縮至相對密度1.10，為備用液①。另2份濃縮至相對密度1.30，為備用液②和(D。取備用液①進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)口溫度170。C士5。C，出口溫度75-C土5X:，壓力lkg/cm2)試驗，結(jié)果噴霧干燥出粉困難，黏壁現(xiàn)象嚴(yán)重。另取備用液②和③分別在5(TC和7(TC條件下減壓干燥，并對干燥物進(jìn)行二苯乙烯苷的含量測定。結(jié)果見表17。表17不同干燥溫度對提取物中二苯乙烯苷含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>結(jié)果顯示，減壓干燥時浸膏易膨起，干燥效果較好，干浸膏疏松，有利于下一步粉碎、制粒等操作。干燥溫度對二苯乙烯苷含量影響很小，故采用濃縮至相對密度1.30，控制干燥溫度70。C，以下進(jìn)行減壓干燥的干燥工藝。實驗例10制劑成型工藝研究1、-制粒方法的選擇曾實驗本品使用噴霧干燥一步制粒，由于輔料量比便較少，粘壁現(xiàn)象嚴(yán)重。而采用干法制粒則可以順利制粒，同時還能節(jié)省能源，降低成本，故本品的制粒方法選擇了干法制粒。試驗結(jié)果證明，干法制粒效果較好，減小了輔料用量，顆粒粒度均勻，外型美觀。2、制粒用輔料品種及用量的選擇(1)填充劑品種的選擇'方法取提取物適量，分別對預(yù)膠化淀粉、乳糖、糊精等輔料進(jìn)行優(yōu)選，以顆粒成型率及吸濕百分率為考察指標(biāo)，輔料種類、用量及制粒情況見表18。表18填充劑品種的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>注"一"為未測。從表18可知用預(yù)膠化淀粉(2號)、糊精(3號)和混合輔料(4號)作填充劑制粒時成型性不好，故不采用；而用乳糖(1號)作填充劑比較適宜。(2)助流劑、潤滑劑品種與用量的選擇為了提高進(jìn)一步改善顆粒的成型情況和藥物粉末的流動性，又對助流劑和潤滑劑品種與用量進(jìn)行了選擇。方法取提取物適量，加乳糖混勻，分別加入不同助流劑和潤滑劑，混勻制粒，結(jié)果見表19。表19助流劑和潤滑劑品種與用量的選擇<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>由表19可見，3種處方的顆粒成型率和制粒情況均比較好，選擇6號處方，即以0.5%硬脂酸鎂和0.2%微粉硅膠作為助流劑和潤滑劑。(三)阿司帕坦(甜味劑)用量的選擇取上述實驗的顆粒劑3份，每份5g，，按表2分別加入不同量的阿司帕坦，混勻后加200ml熱水溶解，嘗試口感，記錄，結(jié)果見表20。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>方法采用干粉末法測定本品顆粒的臨界相對濕度。取7個小型玻璃干燥器，按表22配制不同相對濕度鹽的飽和溶液，分別放入上述干燥器內(nèi)，加蓋，室溫25t:平衡24小時。另取14只大小相同的稱量瓶，精密稱量，放入樣品約0.3g,然后將稱量瓶放入干燥器中，25'C放置24小時，重新精密稱量，并記錄樣品外觀。結(jié)果見表22。表22各種相對濕度下顆粒的吸濕量與外觀變化<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>注顆粒試驗前外觀為棕黃色顆粒狀，流動性好。表22結(jié)果可見本品顆粒有一定的吸濕性，其臨界相對濕度為60%。實驗例11含量測定實驗1、儀器與試劑儀器惠譜iioo-型高效液相色譜儀。試劑水為純水，甲醇為優(yōu)級純，其他試劑均為分析純。二苯乙烯苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110844二200404，為含量測定規(guī)格。制何首烏飲片購于中國藥材公司。2、色譜分析條件色譜柱Luna5um，C18(2)，250X4.60mml00A。流動相甲醇一0.2%磷酸溶液(29:71)。柱溫30°C。檢測波長320nm。流速lml/min。分離度(R)二苯乙烯苷峰與相鄰雜峰分離度大于1.5。理論板數(shù)按二苯乙烯苷峰計算應(yīng)不低于3000。3、方法與結(jié)果(1)流動相選擇通過流動相選擇試驗，認(rèn)為甲醇——0.2%磷酸溶液水(29f71)為流動相，二苯乙烯苷峰與鄰峰達(dá)到基線分離。(2)線性關(guān)系考察精密吸取二苯乙烯苷對照品溶液(0.0998mg/ml)0.5、1.0、1.5、2.0、3mL,分別置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得二苯乙烯苷對照品系列溶液，精密吸取各對照品溶液20uL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以二苯乙烯苷進(jìn)樣量(yg數(shù))為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為Y=3483.99X-4.3784，r=0.9999。結(jié)果表明，二苯乙烯苷在0.09880.5928ug范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見表23。_表23二苯乙烯苷線性關(guān)系_二苯乙烯苷量(Pg)_峰面積(n=2)_RSD(%)_0.0988337.350.520.1976681.250.010.2恥41033.50.39521376.50.59282057.00.750.220.14(3)提取溶媒選擇取樣品數(shù)份，分別加入甲醇、50%甲醇、50%乙醇，超聲處理30分鐘，按正文方法測定，結(jié)果見表24。表24不同溶媒提取比較結(jié)果溶媒二苯乙烯苷含量(mg/g)甲醇.4.7350%甲醇4.6750%乙醇4.71上述結(jié)果表明，采用上述3種溶媒提取，二苯乙烯苷含量相差不大，以甲醇提取溶液顏色淺，利于保護(hù)色譜柱壽命，故選擇甲醇作為提取溶媒。(4)提取方法選及提取時間選擇取樣品數(shù)份，加入甲醇，分別以超聲處理10、20、30分鐘，加熱回流30分鐘等方式提取，按正文方法測定，結(jié)果見表25_表25不同提取方式樣品中二苯乙烯苷含量_提取方式二苯乙烯苷含量(mg/g)超聲處理(分鐘)104.71204.73304.75回流提取(分鐘)30.__上述結(jié)果表明，采用2種方式及不同超聲時間提取，二苯乙烯苷含量差異不大，為方便起見，采用超聲提取20分鐘即可。(5)精密度試驗(6)穩(wěn)定性試驗精密稱取樣品(批號050511)，按正文方法制成供試品溶液，分別于制備后O、3、6、9、12、24小時，依法測定，結(jié)果表明供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定，結(jié)果見表26。表26穩(wěn)定性試驗結(jié)果放置時間飛小時)03691224XRSD(%)峰面積1065.01052.01069.01084.01078.01081.01071.51.10(7)重復(fù)性試驗按正文含量測定方法，對同一批％(批號050511)樣品，進(jìn)行測定，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%，結(jié)果見表27。_表27重復(fù)性試驗_次數(shù)二苯乙烯苷含量(mg/g)_平均含量(mg/g)_RSD(%)14.7224.7834.824.831.64'4.8654.8564.95(8)回收率試驗采用加樣回收法，精密稱取已知含量的同一批號(批號050511)的樣品約O.lg，分別精密加入二苯乙烯苷對照品溶液(0.1620mg/ml)3.0ml，按正文供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件，測定，按下式計算回收率，結(jié)果見表28?；厥章?=測出二苯乙烯苷總量-樣品中二苯乙烯苷的含量加入二苯乙烯苷對照品量X100%表28二苯乙烯苷回收率測定結(jié)果次數(shù)樣品稱樣量樣品中二苯乙加入二苯乙烯測出二苯乙烯二苯乙烯苷回收平均回收RSD(W<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>下述實施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實驗例所述的效果具體實施例方式制何首烏600g淫羊藿400g菟絲子600g虎杖犯0g白芍400g川穹400g輔料乳糖560g硬脂酸鎂5g微粉硅膠2g阿司帕坦9g;制法以上六味，淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮三次，每次1.5小時，加水量為藥材量的14倍；合并煎液，濃縮至50'C相對測密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)50%，5-10。C冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用60%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量，回流2小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液；取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.30左右，減70。C以下壓干燥，干浸膏粉碎過IOO目篩；加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒，包裝成袋，5g/袋；即得。實施例2:制何首烏650g淫羊藿350g菟絲子650g虎杖350g白芍550g川芎350g;輔料乳糖660g硬脂酸鎂9g微粉硅膠4g阿司帕坦12g;制法以上六味，淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮三次，每次2小時，加水量為藥材量的15倍；合并煎液，i^縮至55"C相對測密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)55%，5-10。C冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用66%的乙醇回流提取3次，每次加乙醇6倍量，回流2小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液；取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.30左右，減6(TC以下壓干燥，干浸膏粉碎過IOO目篩；加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒，包裝成袋，5g/袋；即得。實施例3:制何首烏550g淫羊藿580g菟絲子500g虎杖460g白芍360g川芎460g;制法以上六味，淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮三次，每次2小時，加水量為藥材量的15倍；合并煎液，濃縮至55。C相對測密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)55%，5-l(TC冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用66%的乙醇回流提取3次，每次加乙醇6倍量，回流2小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液；取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.30左右，減60'C以下壓干燥，常規(guī)工藝制成片劑。質(zhì)量控制方法鑒別A.取本發(fā)明組合物片劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g，14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取本發(fā)明組合物片劑，60目研iffl，稱取1/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材60目lg，同法制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1:0.2甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開齊U，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取本發(fā)明組合物片劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目0,5g，同法制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8wL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9.5:0.5石油醚(60_90°C)—醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取本發(fā)明組合物片劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加入甲醇20mL,超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心10鐘，取上清液過HPDIOO，高8cm，內(nèi)徑1cm大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用30%乙醇50mL，洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過2g，內(nèi)徑lcm中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40:5:10:0.2氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IO(TC(或電吹風(fēng))加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照fe效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；29:71甲醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3,5，4'-四羥基二竿乙烯-2-0-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備，取本發(fā)明組合物顆粒劑，80目研細(xì)，取l/20單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率100W，顛率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于12.5mg/單位制劑。實施例4:制何首烏650g淫羊藿380g菟絲子660g虎杖450g白芍460g川芎460g常規(guī)工藝制成口服液。實施例5:質(zhì)量控制方法針對實施例1的顆粒制劑所實施的質(zhì)量控制方法鑒別A.取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙'酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g，14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液;另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和1&分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目0.5g，同法制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8PL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90°C)—醋酸乙酯(9.5:0.5)為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；甲29:71醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備:精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-e-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0_P葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物顆粒劑裝量差異項下的內(nèi)容物，80目研細(xì)，取1/20單位制劑，精密稱定，'置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率100W，頻率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20yL，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明組合物顆粒劑每單位單位制劑含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于12.5mg。實施例6:質(zhì)量控制方法針對實施例2的顆粒制劑所實施的質(zhì)量控制方法鑒別A、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g，14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅pG薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365mn紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取本發(fā)明組合物顆粒劑，600目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材60目lg，同法制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1:0.2甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)，和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視;供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，.殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目0.5g，同法制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8PL,分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90°C)—醋酸乙酯(9.5:0.5)為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；甲29:71醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-e-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2_0_P-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物顆粒劑裝量差異項下的內(nèi)容物，80目研細(xì)，取1/20單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率100W，頻率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得；'本發(fā)明組合物顆粒劑每單位制劑含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-O-e-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于12.5mg。實施例7:質(zhì)量控制方法針對實施例1的顆粒制劑所實施的質(zhì)量控制方法鑒別A.-取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g，14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4PL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取本發(fā)明組合物顆粒劑，600目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材60目lg，同法制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4iiL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:'1:0.2甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目0.5g，同法制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8yL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90°C)—醋酸乙酯(9.5:0.5)為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入甲醇20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心10鐘，取上清液過HPD100，高8cm，內(nèi)徑1cm大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用3(^乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水.10mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過2g,內(nèi)徑lcm中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40:5:10:0.2氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，100°C(或電吹風(fēng))加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲29:71醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中,加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷16yg;供試品溶液的制備取本發(fā)明組合物顆粒劑裝量差異項下的內(nèi)容物，80目研細(xì)，取1/20單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率100W，頻率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20"L，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明組合物顆粒劑每單位制劑含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計，不得少于12.5mg。權(quán)利要求1、一種治療更年期綜合征的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為制何首烏200-800重量份淫羊藿200-700重量份菟絲子300-800重量份虎杖200-700重量份白芍200-700重量份川芎200-700重量份。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中的原料藥組成中制何首烏400-700重量份淫羊藿300-600重量份菟絲子500-700重量份虎杖300-500重量份白芍300-600重量份川考300-600重量份。3、如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為制何首烏600重量份淫羊藿400重量份菟絲子600重量份k杖400重量份白芍400重量份川粵400重量份。4、如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為制何首烏650重量份淫羊藿350重量份菟絲子650重量份虎杖350重量份白芍550重量份川芎350重量份。5、如權(quán)利要求1-4所述的任意一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物中加入如下輔料制成顆粒劑乳糖400-700重量份硬脂酸鎂3-10重量份微粉硅膠l-6重量份阿司帕坦3-15重量份。6、如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于加入如下輔料制成顆粒劑乳糖700重量份硬脂酸鎂5重量份微粉硅膠5重量份阿司帕坦6重量份。7、如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于加入如下輔料制成顆粒劑乳糖560重量份硬脂酸鎂5重量份微粉硅膠2重量份阿司帕坦9重量份。8、如權(quán)利要求5所述的任意一種藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為淫羊、菟絲子、白芍加水煎煮2-4次，每次1-2小時，加水量為藥材量的12-16倍；合并煎液，濃縮至40-6(TC測相對密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)40-60%，3-l(TC冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用50-70%的乙醇回流提取2-3次，每次加乙醇5-7倍量，回流1-3小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液;取醇提液和上述醇沉上清液合并，'回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.20-1.4，80-50。C壓干燥，干浸膏粉碎過100目篩;加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒，即得。9、如權(quán)利要求8所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮三次，每次1.5小時，加水量為藥材量的14倍；合并煎液，濃縮至5(TC相對測密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)50%，5-l(TC冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用60%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量，回流2小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液；取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.30,70-60。C減壓干燥，干浸膏粉碎過100目篩；加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒即得。10、如權(quán)利要求6或7所述的任意一種藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮2-4次，每次1-2小時，加水量為藥材量的12-16倍；合并煎液，濃縮至40-60。C測相對密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)40-60%,3-10。C冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用50二70%的乙醇回流提取2-3次，每次加乙醇5-7倍量，回流1-3小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液;取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.20-1.4，80-50'C壓干燥，干浸膏粉碎過100目篩';加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒，即得。11、如權(quán)利要求10所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮三次，每次1.5小時，加水量為藥材量的14倍；合并煎液，濃縮至5(TC相對測密度為1.04-1.05，加乙醇使藥液含醇量達(dá)5'0%，5-l(TC冷藏過液，濾過，醇沉上清液備用；制何首烏、虎杖、川芎用60%的乙醇回流提取2次，每次加乙醇6倍量，回流2小時，合并醇提液，濾過，即得醇提液；取醇提液和上述醇沉上清液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度1.30,70-6(TC減壓干燥，干浸膏粉碎過100目篩；加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒即得。12、如權(quán)利要求l、2、3、4、6或7所述的任意一種藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定鑒別A.取1/10-2/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理15-30分鐘，濾過，濾液蒸干，'殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2-3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用60-75%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4iiL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以6-8:1-3:1-2氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置20-40分鐘后，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取'1/10-2/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材50-70目lg，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:1-2:0.1-0.3甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取1/10-2/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材50-70目0.5g，加乙醚20mL,超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:0.4-0.7的60-9(TC石油醚一醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取1/10-2/5單位制劑，加入甲醇20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心5-15鐘，取上清液過大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用25-35y。乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙醚提取2-4次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以35-45:4-7:8-12:0.l-0.8氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和10-25分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IO(TC加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；20-35:65-80甲醇一O.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，.3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-0-0-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加40-60%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加40-60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備4取所述組合物制劑裝量差異項下的內(nèi)容物，70-90目研細(xì)，取1/30-1/10單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15-30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.5um微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20nL,注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯_2-0-6-0-葡萄糖苷"晶209計，不得少于10-15mg/單位制劑。13、如權(quán)利要求5所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下鑒別方法和/或含量測定鑒別A..取所述組合物顆粒劑，50-70目研細(xì)，稱取1/10-2/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理15-30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2-3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用60-75%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL,分別點于同一硅膠G薄層板上，以6-8:1「3:1-2氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置20-40分鐘后，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取所述組合物顆粒'劑，50-70目研細(xì)，稱取1/10-2/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材50-70目lg，加氯仿20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL.，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:1-2:0.1-0.3甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；-C、取本發(fā)明組合物顆粒劑，50-70目研細(xì)，稱取1/10-2/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材50-70目0.5g，加乙醚20mL，超聲處理15-25分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥襯溶液各8uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以8-11:0.4-0.7比例的60-90。C石油醚一醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和10-20分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取所述組合物顆粒劑，50-70目研細(xì)，稱取1/10-2/5單位制劑，加入甲醇20mL，超聲處理5-15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心5-15鐘，取上清液過大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用25-35%乙醇501^洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙醚提取2-4次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過中性熟化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1mL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4iiL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以35-45:4-7:8-12:0.1-0.8氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和10-25分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IOO'C加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；20-35:65-80甲醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加40-60%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，加40-60%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備:取所述組合物顆粒劑，70-90目研細(xì)，取1/30-1/10單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15-30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置IOmL量瓶中，力D^:稀釋至刻度，搖勻，用0.5ym微孔濾膜濾過，鄰得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20uL，注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷C2。H22OJt，不得少于10-15mg/單位制劑。14、如權(quán)利要求12所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別A.取所述組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加入乙醇20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次20mU合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，過2g,14-30目，內(nèi)徑1.8cm聚酰胺柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液蒸干，殘渣加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每lmL含0.5mg的甲醇溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以7:2.5:1氯仿一甲醇一水的下層溶液為展開劑，飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，放置30分鐘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光的斑點；B、取所述組合物顆粒劑，600目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，'殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材60目lg，加氯仿20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，制成lmL甲醇溶液，作為對照品藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液各4uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9:1:0.2甲苯一乙酸乙酯一甲酸為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，于可見光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；C、取所述組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取1/5單位制劑，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，作為供試品溶液；另取川芎對照藥材60目0.5g，加乙醚20mL，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯5mL使溶解，制成5mL乙酸乙酯溶液，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液與對照藥材溶液各8^L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9.5:0.5比例的60-9(TC石油醚一醋酸乙酯為展開劑，預(yù)飽和15分鐘，展開9cm，取出，晾干，置365nm紫外燈光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮熒光斑點；D、取本發(fā)明組合物顆粒劑，60目研細(xì)，稱取l/5單位制劑，加入甲醇20mL，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，3000轉(zhuǎn)/分離心10鐘，取上清液過HPD100;高8cm，內(nèi)徑1cm大孔樹脂柱，先用水50mL洗脫，棄去水液，再用3(Fo乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水10mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，棄去醚液，水液蒸干，殘渣加5mL甲醇溶解，過2g，內(nèi)徑lcm中性氧化鋁柱，用20mL甲醇洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇lmL使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每lmL含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10uL、對照品溶液4iiL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以40:5:10:0.2氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸的溶液為展開劑，預(yù)飽和20分鐘，展開9cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，IO(TC加熱至斑點顯色；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲29:71醇一0.2%磷酸溶液為流動相；檢測波長為320nm;理論板數(shù)按2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷峰計算應(yīng)不低于3000;對照品溶液的制備:精密稱取2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷對照品5mg，置50mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4mL，置25mL量瓶中，力口50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每lmL含2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-2-0-3-D-葡萄糖苷16ug;供試品溶液的制備:取所述組合物顆粒劑裝量差異項下的內(nèi)容物，80目研細(xì)，取l/20單位制劑，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，功率100W，頻率40KHz超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液4mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用0.51im微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20yL，注入液相色譜儀，測定，即得，含制何首烏以2、3、5、4'-四羥基二苯乙烯-D-葡萄糖苷C2。H2209計，不得少于12.5mg/單位制劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療更年期綜合征的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的藥物組合物原料藥組成為制何首烏、淫羊藿、菟絲子、虎杖、白芍、川芎，制備方法為淫羊藿、菟絲子、白芍加水煎煮，加乙醇醇沉；制何首烏、虎杖、川芎用50-70％的乙醇回流提?。蝗〈继嵋汉蜕鲜龃汲辽锨逡汉喜?，減壓干燥，加乳糖、硬脂酸鎂、微粉硅膠、阿司帕坦混勻，干壓制粒。本發(fā)明采用高效液相色譜法對2、3、5、4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行含量測定。本發(fā)明藥物組合物用于治療更年期綜合征具備很好的療效。文檔編號A61K36/71GK101288700SQ20071006555公開日2008年10月22日申請日期2007年4月16日優(yōu)先權(quán)日2007年4月16日發(fā)明者瘳軍鮮申請人:北京陸爾草醫(yī)藥科技有限公司