專利名稱：一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法。 技術(shù)背景中藥膜莢黃芪為豆科植物膜莢黃芪AWragfl/t^ wew力ra""cew (Fisch.) Bge.的十燥根。中藥膜莢黃芪具有補(bǔ)氣向表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌的功效。是我閨應(yīng)用 最為廣泛的滋補(bǔ)中藥之一?，F(xiàn)代科學(xué)研究證明，中藥膜莢黃芪中含有皂苷、黃酮、多 糖和生物堿等多種化學(xué)成分。其中的皂苷類成分為三萜皂苷類化合物，黃酮類成分主 要為異黃酮及其苷類化合物，此兩類成分為普遍認(rèn)可的中藥膜莢黃芪中有效成分。現(xiàn) 在市場上中藥黃芪品種眾多，而各品種之間的化學(xué)成分及含量均有差異，若化學(xué)成分 和含量不能達(dá)到質(zhì)量要求，勢(shì)必會(huì)影響臨床應(yīng)用的安全性以及有效性。為確保中藥使 用的安全有效，對(duì)中藥材進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的質(zhì)量檢測(cè)是十分必要。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法利用中藥膜莢黃 芪粗提物的電噴霧質(zhì)譜作為指紋圖譜，利用紫外-可見分光光度法確定屮藥膜莢黃芪 中總皂苷、總黃酮的含量，保證了質(zhì)量檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的先進(jìn)性。本發(fā)明利用軟電離質(zhì)譜技術(shù)對(duì)中藥膜莢黃芪的粗提物進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)得到的中藥 膜莢黃芪粗提物的電噴霧指紋圖譜中皂苷及黃酮的個(gè)數(shù)及強(qiáng)度，對(duì)中藥膜莢黃芪的質(zhì) 量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。該指紋圖譜可以清晰反映出由于產(chǎn)地、采收季節(jié)所帶來的皂苷和黃 酮種類的不同。本發(fā)明考慮到中藥膜莢黃芪中所含皂苷類成分為三萜皂苷類化合物， 基于二萜皂苷與香草醇-濃硫酸能發(fā)生顯色反應(yīng)這一原理，以黃芪甲苷作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì),照 品，通過測(cè)定總皂苷水解產(chǎn)物中黃芪甲苷的含量來測(cè)定中藥膜莢黃芪中總皂苷含量。 而總黃酮的含量測(cè)定采用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，硝酸鋁與黃酮類化合物形成配合物的 顯色原理進(jìn)行測(cè)定。實(shí)施本發(fā)明的技術(shù)方案如下(1) 供試樣品溶液制備本發(fā)明選擇50%-100% (V/V)的乙醇作為溶媒，將中藥膜莢黃芪粉碎，過40-60 目篩，稱取己粉碎的中藥膜莢黃芪5-10g于200ml錐形瓶中，加50%-100% (V/V) 的乙醇50-100 ml，通過超聲提取l-3次，20-40 min/次，超聲提取溫度20-60 °C;合 并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和正丁醇萃取 樣品溶液a2-4次，20-40 ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇溶液，減壓蒸干，殘?jiān)?以甲醇溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜 '樣品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取5-10 nl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至100-500 nl，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源， 正離子電離方式，噴霧電壓3.5-5.5 kV，毛細(xì)管溫度180-220 。C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流 速2-8 pl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。利用正離子電噴霧質(zhì)譜確認(rèn)皂苷.的 種類，在m/z 700-1000范圍內(nèi)，存在m/z785,m/z827,m/z869,m/z911,m/z947等離 子；利用正離子電噴霧質(zhì)譜確認(rèn)黃酮的種類，在m/z 50-600范圍內(nèi)，存在m/z 269, m/z 285, m/z 301, m/z 303, m/z 431, m/z 447, m/z 463, m/z 465, m/z 517, m/z 533, m/z 549, m/z551等離子。(3) 總皂苷含量測(cè)定總皂苷含量測(cè)定的方法精密稱取干燥的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品50mg，用無水乙
醇溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，即為黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；香草 醛配成8%乙醇溶液；硫酸配成72% (V/V)溶液；用移液槍精密移取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液O、 15、 30、 45、 60、 75fil及10pl供試樣品溶液分別置于七個(gè)10ml具 塞試管中，分別加入無水乙醇至2ml，再分別加入0.5ml的8。/。香草醛乙醇試劑，在 冰水浴中加入7.5ml72。/c) (V/V)硫酸溶液，搖勻，于62 'C水浴保溫20min，取出， 搖勻，作為待測(cè)溶液；在30mm內(nèi)，于530-560 nm波長處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度， 以黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度 (C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸 方程，然后根據(jù)供試樣品溶液的吸光度和得到的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，測(cè)得供試樣品中總皂苷的含量。 (4)總黃酮含量測(cè)定總黃酮含量測(cè)定精密稱量約10 mg的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用60%乙醇溶解并定容 至25ml容量瓶中，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；用移液槍精密移取蘆丁 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液0、 20、 40、 60、 80、 100 pl及25 pl供試樣品溶液分別置于七個(gè)25 ml 容量瓶中，分別加入5。/。亞硝酸鈉溶液0.2ml，搖勻，靜置6min，再分別加入10%硝 酸鋁溶液0.2ml，搖勻，靜置6min，再分別加入4。/。氫氧化鈉溶液1 ml，加60%乙醇 定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測(cè)溶液；于490-510 nm波長處測(cè)定待測(cè)溶 液的吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品 濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸 方程，然后根據(jù)供試樣品溶液的吸光度和得到的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè) 得供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法。木方法的樣品前處理過程簡單，提取效率高。利用中藥膜莢黃芪提取物的電噴霧
質(zhì)譜作為指紋圖譜，通過皂苷、黃酮的種類可以清晰地看出不同產(chǎn)地、不同季節(jié)采收 的中藥膜莢黃芪的質(zhì)量差異，再結(jié)合紫外-可見分光光度計(jì)對(duì)中藥膜莢黃芪提取物中 總皂苷、總黃酮的含量測(cè)定結(jié)果，可以對(duì)中藥膜莢黃芪的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:(1) 供試樣品溶液制備將中藥膜莢黃芪粉碎，過40目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃疾5g于200ml錐 形瓶中，加50% (V/V)的乙醇50ml，通過超聲提取l次，20min/次，超聲提取溫 度2(TC;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和 正丁醇萃取樣品溶液a 2次，20ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸干， 殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜取5pl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至100nl，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜 實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓3.5kV，毛細(xì)管溫度180 。C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速2 pl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。利用正離子電 噴霧質(zhì)譜確認(rèn)皂苷的種類，在m/z 700-1000范圍內(nèi)，存在m/z 785, m/z 827， m/z 869, m/z911,m/z 947等離子；利用正離子電噴霧質(zhì)譜確認(rèn)黃酮的種類，在m/z 50-600范 圍內(nèi)，存在m/z 269, m/z 285, m/z 301, m/z 303， m/z 431, m/z 447， m/z 463, m/z 465， m/z 517, m/z 533, m/z 549, m/z 551等離子。(3) 總皂苷含量測(cè)定 精密稱取干燥的黃民甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品50 mg，用無水乙醇溶解并定容至10 ml容 量瓶中，搖勻，即為黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；香草醛配成8%乙醇溶液；硫酸配成72% (V/V)溶液；用移液槍精密移取黃賓甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液O、 15、 30、 45、 60、 75^a及10^il供試樣品溶液分別置于七個(gè)10ml具塞試管中，分別加入無水 乙醇至2ml，再分別加入0.5ml的8。/。香草醛乙醇試劑，在冰水浴中加入7.5 ml 72% (V/V)硫酸溶液，搖勻，于62 。C水浴保溫20 min，取出，搖勻，作為待測(cè)溶液； 在30mm內(nèi)，于530nm波長處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度，以黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液 的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性'回 歸，得到黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸方程，然后根據(jù)供試樣品溶 液的吸光度和得到的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)得供試樣品中總皂苷的 今量n里o(4)總黃酮含量測(cè)定 ,精密稱量約10 mg的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用60%乙醇溶解并定容至25 ml容量瓶中， 搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；用移液槍精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液O、 20、 40、 60、 80、 100 pl及25 nl供試樣品溶液分別置于七個(gè)25 ml容量瓶中，分別 加入5%亞硝酸鈉溶液0.2 ml，搖勻，靜置6 min，再分別加入10%硝酸鋁溶液0.2 ml， 搖勻，靜置6min，再分別加入4%氫氧化鈉溶液1 ml，加60%乙醇定容至刻度，搖 勻，靜置15min，作為待測(cè)溶液；于4卯nm波長處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度，以蘆丁 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度(C)為橫坐標(biāo) 進(jìn)行線性回歸，得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸方程，然后根據(jù)供試 樣品溶液的吸光度和得到的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)得供試樣品中總黃酮 的*量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)施例2:(1)供試樣品溶液制備 將中藥膜莢黃芪粉碎，過60目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪10 g于200 ml 錐形瓶中，加100% (V/V)的乙醇100ml，通過超聲提取3次，40min/次，超聲提 取溫度6(TC;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a， 飽和正丁醇萃取樣品溶液a4次，40ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸 干，.殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜取10pl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至500 ^1，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì) 譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓5.5 kV，毛細(xì)管溫,度 220 。C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速8 nl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。按照實(shí)施 例1的步驟(2)確認(rèn)皂苷和黃酮的種類。(3) 總皂苷含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總皂苷含量測(cè)定的方法在560 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總皂苷的含量。(4) 總黃酮含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總黃酮含量測(cè)定的方法在510 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量 檢測(cè)方法。 '實(shí)施例3:(1)供試樣品溶液制備將中藥膜莢黃芪粉碎，過50目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪7g于200ml錐 形瓶中，加70。/。(V/V)的乙醇70ml，通過超聲提取2次，30 min/次，超聲提取溫 度40'C;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和
正丁醇萃取樣品溶液a3次，30ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸干， 殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶屮，搖勻，即為供試樣品溶液；(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜取7pl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至200 pl，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜 實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓4.5kV，毛細(xì)管溫度200 。C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速5 pl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。按照實(shí)施例1 的步驟(2)確認(rèn)皂苷和黃酮的種類。(3) 總皂苷含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總皂苷含量測(cè)定的方法在545 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總皂苷的含量。(4) 總黃酮含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總黃酮含量測(cè)定的方法在500 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量 檢測(cè)方法。實(shí)施例4: '(l)供試樣品溶液制備將中藥膜莢黃甚粉碎，過50目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪8g于200ml錐 形瓶中，加80。/。(V/V)的乙醇80ml，通過超聲提取2次，35 mm/次，超聲提取溫 度50。C;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和 正丁醇萃取樣品溶液a4次，40ml欣，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸十， 殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2)供試樣品的電噴霧指紋圖譜 .取8nl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至300 ^11，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓5.0kV，毛細(xì)管溫度210 °C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速7 pl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。按照實(shí)施例1 的歩驟(2)確認(rèn)皂苷和黃酮的種類。(3) 總皂苷含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總皂苷含量測(cè)定的方法在550 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總皂苷的含量。(4) 總黃酮含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總黃酮含量測(cè)定的方法在505 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量 檢測(cè)方法。實(shí)施例5:(1) 供試樣品溶液制備將中藥膜莢黃芪粉碎，過40目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪6g于200ml錐 形瓶中，加60% (V/V)的乙醇60ml，通過超聲提取l次，25min/次，超聲提取溫 度30。C;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和 正丁醇萃取樣品溶液a2次，20ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸干， 殘漳以甲醇溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜取6nl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至180^1，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜 實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓4.0kV，毛細(xì)管溫度190 °C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速4 pl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。按照實(shí)施例1
的歩驟(2)確認(rèn)皂苷和黃酮的種類。(3) 總皂苷含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總皂苷含量測(cè)定的方法在540 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總皂苷的含量。(4) 總黃酮含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總黃酮含量測(cè)定的方法在495 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)'量 檢測(cè)方法。實(shí)施例6:(1) 供試樣品溶液制備將中藥膜莢黃芪粉碎，過60目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪9g于200ml錐 形瓶中，加90。/。(V/V)的乙醇90ml，通過超聲提取3次，40 mm/次，超聲提取溫 度30。C;合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和 正丁醇萃取樣品溶液a3次，30ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇層，減壓蒸干， 殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液； ，(2) 供試樣品的電噴霧指紋圖譜取9pl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至400 ^1，作電噴霧質(zhì)譜分析。電噴霧質(zhì)譜 實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，正離子電離方式，噴霧電壓4.5kV，毛細(xì)管溫度200 。C，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速6 nl/min;掃描范圍質(zhì)荷比(m/z) 50-2000。按照實(shí)施例1 的步驟(2)確認(rèn)皂苷和黃酮的種類。(3) 總皂苷含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總皂苷含量測(cè)定的方法在555 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供
試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總皂苷的含量。(4)總黃酮含量測(cè)定利用實(shí)施例1中總黃酮含量測(cè)定的方法在500 nm波長下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和供 試樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，確定供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量 檢測(cè)方法。
權(quán)利要求
1、一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于步驟和條件如下(1)供試樣品溶液制備本發(fā)明選擇50％-100％(V/V)的乙醇作為溶媒，將中藥膜莢黃芪粉碎，過40-60目篩，稱取已粉碎的中藥膜莢黃芪5-10g于200ml錐形瓶中，加50％-100％(V/V)的乙醇50-100ml，通過超聲提取1-3次，20-40min/次，超聲提取溫度20-60℃；合并上述提取液并濃縮，水定容至10ml容量瓶中，即為樣品溶液a，飽和正丁醇萃取樣品溶液a 2-4次，20-40ml/次，分別合并各次萃取的正丁醇溶液，減壓蒸干，殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?0ml容量瓶中，搖勻，即為供試樣品溶液；(2)供試樣品的電噴霧指紋圖譜供試樣品的電噴霧指紋圖譜通過如下步驟得到取5-10μl的供試樣品溶液，用甲醇稀釋至100-500μl，作電噴霧質(zhì)譜分析，電噴霧質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件如下電噴霧離子源，噴霧電壓3.5-5.5kV，毛細(xì)管溫度180-220℃，流動(dòng)注入泵進(jìn)樣流速2-8μl/min；掃描范圍質(zhì)荷比(m/z)50-2000，利用正離子模式電噴霧質(zhì)譜確認(rèn)皂苷、黃酮的種類；(3)總皂苷含量測(cè)定總皂苷含量測(cè)定的方法精密稱取干燥的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品50mg，用無水乙醇溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，即為黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；香草醛配成8％乙醇溶液；硫酸配成72％(V/V)溶液；用移液槍精密移取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液0、15、30、45、60、75μl及10μl供試樣品溶液分別置于七個(gè)10ml具塞試管中，分別加入無水乙醇至2ml，再分別加入0.5ml的8％香草醛乙醇試劑，在冰水浴中加入7.5ml 72％(V/V)硫酸溶液，搖勻，于62℃水浴保溫20min，取出，搖勻，作為待測(cè)溶液；在30min內(nèi)，于530-560nm波長處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度，以黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸方程，然后根據(jù)供試樣品溶液的吸光度和得到的黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)得供試樣品中總皂苷的含量；(4)總黃酮含量測(cè)定總黃酮含量測(cè)定精密稱量約10mg的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用60％乙醇溶解并定容至25ml容量瓶中，搖勻，即為蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，備用；用移液槍精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液0、20、40、60、80、100μl及25μl供試樣品溶液分別置于七個(gè)25ml容量瓶中，分別加入5％亞硝酸鈉溶液0.2ml，搖勻，靜置6min，再分別加入10％硝酸鋁溶液0.2ml，搖勻，靜置6min，再分別加入4％氫氧化鈉溶液1ml，加60％乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15min，作為待測(cè)溶液；于490-510nm波長處測(cè)定待測(cè)溶液的吸光度，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和線性回歸方程，然后根據(jù)供試樣品溶液的吸光度和得到的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)得供試樣品中總黃酮的含量，完成一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥膜莢黃芪的質(zhì)量檢測(cè)方法。利用粉碎、過篩、乙醇提取、過濾、水飽和正丁醇萃取、濃縮、定容等樣品前處理手段將中藥膜莢黃芪處理后，通過電噴霧質(zhì)譜得到中藥膜莢黃芪中總皂苷、總黃酮的指紋圖譜，根據(jù)其指紋圖譜確定中藥膜莢黃芪中所含的皂苷、黃酮的種類；利用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定中藥膜莢黃芪中總皂苷、總黃酮的含量。綜合其指紋圖譜及含量測(cè)定數(shù)據(jù)，可以對(duì)中藥膜莢黃芪的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。該質(zhì)量檢測(cè)方法準(zhǔn)確、快捷、方便、有效。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101152240SQ200710056178
公開日2008年4月2日 申請(qǐng)日期2007年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月16日
發(fā)明者劉志強(qiáng), 劉淑瑩, 宋鳳瑞, 王淑敏, 鑫 黃 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所