專利名稱：：一種柘木提取物、其制備及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及天然藥物及中藥提取物的
技術領域：
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背景技術：
：拓木為?？仆貙僦参顲udra.niatricuspidata(Carr.)Bun.落葉灌木或小喬木，其功能為清熱涼血，近代民間用于消化道腫瘤。主要化學成分為黃酮類、氧雜蒽酮類、木脂素、香豆素及多糖類化合物，70年代至90年代，國內外學者(中日韓)對柘木抗癌作用進行研究，基本確認黃酮類化合物是柘木抗癌、抑癌有效成分，多糖參與了免疫調節(jié)，對抗癌具有協(xié)同作用。另外關于山奈酚與槲皮素以及它們的糖甙化合物，國際上普遍認為具有抗氧化、抗炎、抗心血管疾病以及抗癌等生理活性(ElliottMiddletonetalPharmacologicalReviews52(4):673-751,2002)。在國內，有關柘木的藥品開發(fā)始于60年代，研發(fā)成功的制劑為糖漿劑，并收載于部頒藥品標準。經臨床使用，證實柘木糖漿對消化道腫瘤患者化療或放療有輔助治療作用，并能改善病人的生活質量。然而作為一種受當時年代限制的中藥制劑，人們對它的有效成分并不充分了解，更談不上建立制劑中有效成分的定量分析；該制劑還存在產氣、沉淀等質量不穩(wěn)定因素，制劑中需加入一定量的防腐劑；另外該藥品攜帶和運輸不方便，影響了藥品廣泛的使用。鑒于上述情況，繼續(xù)探索研究柘木有效成分，開發(fā)各類更為科學合理的柘木制劑具有很大的現(xiàn)實意義，它不僅可提高中藥產品的現(xiàn)代化程度，又能適應現(xiàn)代用藥的需求，是中藥產品二次開發(fā)的必然趨勢，也是中藥走向國際世界的必有之路。深入的現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，有越來越多的中藥或天然藥，其有效的生物活性主要是來自于其內部的復合成分，而非單一成分。為了達到各種成分有效的萃取，需要建立各自的相適應的生產工藝；其次中成藥的多成分特點，使得藥品的質量控制以及中藥的藥理闡述遠比化學藥來的復雜，然而正是這種系列的復雜性構成了中成藥自身所具有的獨特性質。中國專利03114766.6公丌了一種含柘木提取物的固體制劑，當中提及了柘木提取物，但是該專利制備柘木提取物的方法純化工藝不夠完善，工藝指標也尚不健全，獲得的柘木提取物質量受初始藥材影響大，可控性相對薄弱。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種純化工藝完善，質量可控的柘木提取物，其制備方法及應用。發(fā)明人通過對各種提取方法的探索嘗試，及對各種提取方法獲得的符合藥用要求的提取物中主要黃酮成分的分析研究，總結出了以山奈酚-7-0-!3-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙為質控指標的一套完善的生產工藝。利用本發(fā)明的生產工藝獲得柘木提取物療效顯著，質量可控性優(yōu)良，十分適合工業(yè)化生產。本發(fā)明第一方面，公丌了一種柘木提取物，提取物中的山奈酚-7-0-e-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙的重量比為1:0.6—1.1，優(yōu)選l:0.6—0.9，以提取物重量為基礎，總黃酮重量百分比為1.5—50%，優(yōu)選14一50%，其中山奈酚-7-CM;-D-葡萄糖甙重量百分比為0.3—20%，優(yōu)選2.5—20%，槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙重量百分比為0.2—15%，優(yōu)選1.7—15%，符合要求的提取物經本發(fā)明的制備工藝獲得。7-葡萄糖-山奈酚甙(populnin)是目前已知的用于柘木制劑質控的唯一黃酮甙成分，這在專利申請文件CN1515294及CN1726962中均有報道。槲皮素-7-0-葡萄糖甙是柘木的另-一黃酮甙成分，本發(fā)明人在有效成分分離中也獲得此物質。根據(jù)系統(tǒng)文獻檢索發(fā)現(xiàn)，至今尚無其它植物同時含有山柰酚-7-0-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-葡萄糖甙二成分的報道。對此發(fā)明人認為若能在柘木及其制劑質控中同時檢測上述二成分，不僅能顯著提高質控項目專屬性，而且擴大了有效成分控制數(shù)量，有利于進一歩完善柘木及其制劑的質量控制體系。本發(fā)明的柘木提取物中總黃酮含量測定采用以山奈酚-7-0-0-D-葡萄糖甙為對照的UV法，山奈酚-7-O-P-0-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-P-D-葡萄糖甙含量分別采用HPLC法測定。本發(fā)明第二方面，公開了上述柘木提取物的制備方法，包括下列歩驟a)柘木提取工藝取柘木藥材，用5—10倍于初始藥材重量的0%—70%醇水溶液，回流提取2-4次，每次1—5小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.06—1.07(70°C±10);b)柘木純化工藝將步驟a制得的提取濃縮液，過一裝有大孔樹脂的層析柱，經3—6倍于樹脂床體積量的水洗滌，用2—4倍于樹脂床體積量的20—80%乙醇溶液梯度洗脫(實施例中選取的是20%、40%、60%和80%的梯度)，收集40—60%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。上述醇水溶液中的醇選自低級脂肪醇，如甲醇、乙醇、丙醇等。較佳的，大孔樹脂為中低極性，層析柱中所裝大孔樹脂的重量為初始藥材重量的1/2—1/4。改進的，在上述步驟b獲得大孔樹脂層析柱40—60%乙醇流份濃縮液后，再過一裝有聚酰氨(初始藥材量的1/3—1/8)的層析柱，經3—6倍于柱體積量的水洗滌，用l一4倍于柱體積量的20_50%乙醇梯度洗脫(實施例中選取的是20%、30%、40%和50%的梯度)，收集30—50%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。較佳的，聚酰氨優(yōu)選40—80目。層析柱中所裝聚酰氨的重量為初始藥材重量的1/3—1/8。進一歩改進的，在上述歩驟過聚酰氨層析柱并獲得30—50%乙醇流份濃縮液后，再過一裝有凝膠的層析柱，經4一8倍的柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8倍的柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。同樣改進的，也可以在上述步驟b獲得大孔樹脂40—60。/。層析柱乙醇流份濃縮液后，直接過一裝有凝膠的層析柱，經4一8倍柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。較佳的，上述凝膠為葡萄糖凝膠，優(yōu)選羥丙基葡萄糖凝膠。層析柱中所裝凝膠的重量為上柱濃縮液總固量(即干重量)的10—50倍。本發(fā)明中，各種的醇百分比均為體積百分比。研究表明，上述三種工藝獲得的提取物均可達到前述山奈酚-7-0-e-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0_e-D-葡萄糖甙的技術指標。本發(fā)明的第三方面，公開將上述柘木提取物用于制備抗腫瘤藥用制劑。所述藥用制劑包括顆粒劑、片劑、膠囊、干糖漿或凍干粉針等劑型。本發(fā)明第四方面，公開了一種藥物組合物，由治療有效量的上述柘木提取物及藥用輔料組成，柘木提取物與藥用輔料的重量比為3—8:7—2。本發(fā)明所述藥用輔料為制備固體制劑常用之輔料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、低取代羥丙纖維素、蔗糖、山梨醇、甘露醇、甘氨酸、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉、可溶性淀粉、麥芽糊精、微粉硅膠和矯味劑等。采用本發(fā)明柘木提取工藝純化工藝完善，工藝指標健全，本發(fā)明的柘木提取物及其各類制劑，活性成分可控，抗腫瘤效果顯著，具有廣闊的市場應用前景。具體實施例方式下面結合實施例進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明各測定方法如下總黃酮含量測定-以山奈酚-7-o-e-D-葡萄糖甙為對照，采用UV法定量測定，步驟如下(1)配置山奈酚-7-O-0-D-葡萄糖甙對照品溶液；(2)制備標準曲線；(3)供試樣品溶液制備精密稱取或量取適量柘木粉末或提取物或制劑，經常規(guī)提取或溶解處理制成樣品；(4)測定法在樣品溶液加A1CL及醋酸鉀溶液前后，分別用分光光度計測定408nm波長處的吸收度，以兩者吸收度的差值從標準曲線上讀出供試品溶液中山奈酚-7-O-e-D-葡萄糖甙的重量，計算，即得。槲皮素-7-O-e-D-葡萄糖甙含量測定采用HPLC法測定，操作步驟按照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)進行(1)色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗填充劑為卜八烷基硅烷基合硅膠，流動相為體積比為38:62的甲醇-水溶液或甲醇一體積百分比0.3%的醋酸水溶液或甲醇_體積百分比O.1%的三氟乙酸水溶液，檢測波長為257nm，理論板數(shù)按槲皮素-7-0_|3葡萄糖甙計算，應不低于1000;(2)配置槲皮素-7-O-0-D-葡萄糖甙對照品溶液；(3)供試樣品溶液制備精密稱取或量取適量柘木粉末或提取物或制劑，經常規(guī)提取或溶解處理，先用大孔樹脂柱純化處理，再經微孔濾膜過濾獲得；(4)測定法分別精密精密吸取對照品溶液與供試樣品溶液5-15li1，注入液相色譜儀，測定，即得。山奈酚-7-O-f3-D-葡萄糖甙含量測定采用HPLC法測定，操作歩驟按照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)進行(1)色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗填充劑為十八烷基硅烷基合硅膠，流動相為體積比44:56的甲醇-水溶液或甲醇一O.3%的醋酸水溶液或甲醇_0.1%的三氟乙酸水溶液；檢測波長為265nm，理論板數(shù)按山奈酚-7-0_0-D-葡萄糖武計算，應不低于1000;(2)配置山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙對照品溶液；(3)供試樣品制備精密稱取或量取適量柘木粉末或提取物或制劑，經常規(guī)提取或溶解處理，先用大孔樹脂柱純化處理，再經微孔濾膜過濾獲得；(4)測定法分別精密吸取對照品溶液與供試樣品溶液5-15wl，注入液相色譜儀，測定，即得。實施例1柘木中槲皮素-7-O-{3-D-葡萄糖甙與山奈酚-7-o-e-D-葡萄糖甙的分離和鑒別取經水或稀醇提取的柘木提取濃縮液，直接過一已經水相處理的大孔樹脂柱，經水充分洗脫干凈后，以30%95%乙醇溶液梯度洗脫，對收集的30%50%乙醇流份部分，經濃縮后，上一硅膠柱，以乙酸乙酯-甲醇(030%甲醇)梯度洗脫，洗脫液以TLC法為檢測手段，硅膠TLC檢測的展丌條件乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5:3:0.5:0.5)，顯色條件噴灑A1C13乙醇液，薄板揮干后在365nm螢光下檢視欲分離成分是否在與槲皮素-7-0-P-D-葡萄糖甙或山奈酚-7-0-D-葡萄糖武對照色譜相同的位置上，顯有相同黃綠熒光斑點，有則確認為含槲皮素-7-o-e-0-葡萄糖甙或山奈酚-7-0-e-D-葡萄糖甙的流份。分別合并含山奈酚-7-0-0-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-0-D-葡萄糖甙的流份，富含山奈酚-7-o-e-0-葡萄糖甙和槲皮素-7-0_0-D-葡萄糖甙的流份分別濃縮后，以甲醇作洗脫液，多次過凝膠柱分離，收集欲分離的山奈酚-7-o-e-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-P-D-葡萄糖甙。得到的山奈酚-7-0-{3-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙粗品分別經反相制備液相進一歩純化分離，精制后二個的對照品純度達到98%(HPLC歸一法)。山奈酚-7-O-0-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-O-e-D-葡萄糖甙化學結構經UV、EI-MS、ESI-MS、H-N服及C-NMR光譜分析研究加以確認。鑒定經分離的山奈酚-7-0-3-D-葡萄糖甙淡黃色粉末(MeOH)，mp.259261°C(未校正)，紫外吸收入max(Me0H):252、265和369匿。質譜EIM/Z286(強峰，甙元離子峰)，448(微弱，分子離子峰)，ESI(M-l)/Z447.2(最強峰)，(M+l)/Z449.0(最強峰)，理論分子量448.37。核磁共振1H-NMR(DMS0-d6)5(ppm):5.11(1H，戒鍵上質子)、6.38(1H，d，C6-H)、6.77(1H，d，C8-H)、6.90(2H,d,C3，-H,C5'-H)、8.04(2H，d，C2，-H,C6，-H)、9.53(1H,C3-0H)、10.13(1H，C4，-0H)、12.45(1H'C5-0H);13C-麗R(DMS0-d6)S(ppm)數(shù)據(jù)見表l。紫外吸收、質譜以及氫、碳核磁共振數(shù)據(jù)與山奈酚-7-o-e-D-葡萄糖甙文獻值(張月華，任婉薇，萬樹文等.柘木化學成分研究[J].醫(yī)藥工業(yè)(3):15,1980)均對應吻合，其中碳譜的數(shù)據(jù)與文獻值高度一致(K.R.Markham,B.Ternal,R.Stanley,H.GeigerandT.J.MabryCARB0N-13NMRSTUDIESOFFUWONOIDS-III[J].Tetrahedron.1978，34:1389-1397)。經分離的槲皮素-7-0-D-葡萄糖甙淡黃色粉末(MeOH)，mp.219223°C(未校正)，紫外吸收Amax(MeOH):208、257和375nm。質譜ESI(M-1)/Z463.24(最強峰)，理論分子量464.37。核磁共振1H-NMR(DMSO-d6)S(ppm):5.15(1H,d，甙鍵上質子)、6.41(1H，d，C6—H)、6.76(1H，d，C8—H)、6.91(1H,d，C5'_H)、7.55(1H，dd，C2'—H)、7.71(1H,d,C6，—H)、9.10(3H,m，C3、C3'、C4，-OH)、L2.47(1H,s，C5—OH);13C-NMR(DMSO-d6)5(ppm)數(shù)據(jù)見表1。質譜以及氫、碳核磁共振數(shù)據(jù)與槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙文獻值(張曉峰，胡伯林，周丙南.藏藥熏倒牛的活性物質研究[J].藥學學報。1995，30(3):211-214)均對應吻合。碳譜的測定數(shù)據(jù)與文獻(K.R.Markham，B.Ternal，R.Stanley,H.GeigerandT.J.MabryCARBON-13NMRSTUDIESOFFLAVONOIDS-III[J].Tetrahedron.1978,34:1389-1397)高度一致。表l.化合物I(山奈酚-7-o-e-D-葡萄糖甙)和II(槲皮素-7-O-e-D-葡萄糖甙)13C-NMR測定的化學位移數(shù)據(jù)(ppm)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>經上述試驗確認從柘木中分離獲得的化合物分別是山奈酚-7-O-P-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙，純度達98%。本實驗同時也說明了柘木中含有山奈酚-7-O-P-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-o-e-D-葡萄糖甙。實施例2—5柘木提取物的制備(過大孔樹脂層析柱)提取工藝100kg拓木小塊，用5—10倍于初始藥材重量的0%-—70%醇水溶液，回流提取2次，每次1一5小時，合并提取液，減壓濃縮至藥液無醇味。純化工藝將濃縮液過一中性大孔樹脂柱(HPD-100，寶恩化工)，然后用3—6倍柱體積量的純凈水洗脫，分別用2—4倍柱體積量的20%、40%、60%、80%乙醇洗脫，收集40—60%乙醇洗脫液并濃縮干燥。提取工藝參數(shù)選擇及獲得的結果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>成份一成份二成份一成份二2#水5hr水3hrL4kg14%2.5%1.7%1:0.683#50%乙醇3hr50%乙醇2hr1.5kg18%3.0%2.0%1:0.674#70%甲醇4hr70%甲醇1hr!.6kg19%3.1%1.9%1:0.615#30%丙醇3hr30%丙醇3hrllg16%2.7%1.8%1:0.66成份一山奈酚-7-0-p-D-葡萄糖武；成份二槲皮素-7-o-e-D-葡萄糖甙實施例6柘木提取物的制備(過大孔樹脂和凝膠層析柱)取實施例3獲得的40—60%乙醇流份部分濃縮液，再過一裝有凝膠(SephadexLH-20,Pharmacia)的層析柱，經4一8倍柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉100g，其中，總黃酮含量35%，山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙9X，槲皮素-7-0-P-D-葡萄糖甙8X，山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙與槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙的重量比為1:0.88。實施例7柘木提取物的制備(過大孔樹脂和聚酰氨層析柱)取實施例3獲得的40—60%乙醇流份部分濃縮液，再過一裝有聚酰氨的層析柱，經3—6倍于柱體積量的水洗滌，用1—4倍于柱體積量的20%、30%、40%和50%乙醇梯度洗脫，收集30—50%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉500g，其中，總黃酮含量30%，山奈酚-7-0-p-D-葡萄糖甙7%，槲皮素-7-O-0-D-葡萄糖甙6%，山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙與槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙的重量比為1:0.86。實施例8柘木提取物的制備(過大孔樹脂、聚酰氨和凝膠層析柱)取實施例7獲得的30—50%乙醇流份部分濃縮液，再過一裝有凝膠的層析柱，經4—8倍柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉100g，其中，總黃酮含量50%，山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙20%，槲皮素-7-0-f3-D-葡萄糖甙15%，山奈酚-7-0-P-D-葡萄糖甙與槲皮素-7-0-f3-D-葡萄糖甙的重量比為1:0.75。實施例9片劑的制備取實施例3制得的干浸膏粉(黃酮含量18%)45%，加微晶纖維素35%，低取代羥丙纖維素8%，淀粉8%，混合制粒，內加微粉硅膠、硬脂酸鎂各0.5%，壓片，薄膜包衣3%，上述百分比均為重量百分含量。片重0.5g，每片含黃酮40mg，其中山奈酚-7-0-(3-D-葡萄糖甙6.5mg，槲皮素-7-0-e-D-葡萄糖甙4.5mg。實施例10膠囊的制備取實施例3制得的浸膏粉(總黃酮含量18%)60%，糊精20%、淀粉10%，混合，另取10%量淀粉制漿，用于濕法制粒，干燥后裝填膠囊，上述百分比均為重量百分含量。粒重0.4g，每粒含總黃酮40mg，其中山奈酚-7-0-l3-D-葡萄糖甙7.0mg，槲皮素-7-O-0-D-葡萄糖甙4.5mg。實施例11粉針劑的制備取實施例8制得的浸膏粉50g，加葡萄糖50g，用1000ml滅菌水溶解，滅菌過濾，分裝至瓶內，每瓶2ml，然后冷凍干燥，密封即得。每瓶粉針含總黃酮50mg，山奈酚-7-O-p-D-葡萄糖甙20mg，槲皮素-7-O-e-D-葡萄糖甙15mg。實施例12抗腫瘤活性試驗(腸癌)l.受試藥物柘木提取物樣品1:實施例3的柘木提取物樣品2:實施例6的柘木提取物樣品3:實施例7的柘木提取物樣品4:實施例8的柘木提取物2.腫瘤細胞株HCT-116(人源性大腸癌，國家藥物篩選中心)。3.實驗方法蟥酰羅丹明B(SulforhodamineB,SRB)蛋白染色法。作用時間為72小時。4.實驗結果見表l。表l.柘木提取樣品14對人HCT-116腫瘤細胞生長的抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>5.實驗結論柘木提取樣品14對人HCT-116腸癌的生長活性具有明顯的抑制作用。實施例13抗腫瘤活性試驗(胃癌)1.受試藥物柘木提取物樣品14(同實施例12)2.腫瘤細胞株HGC-7901(人源性胃癌，國家藥物篩選中心)。3.實驗方法蟥酰羅丹明B(SulforhodamineB,SRB)蛋白染色法。作用時間為72小時。4.實驗結果見表2。表2.柘木提取樣品15對人HGC-7901腫瘤細胞生長的抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>5.實驗結論柘木提取樣品15對人HGC-7901胃癌的生長活性具有明顯的抑制作用。上述試驗表明，本發(fā)明的柘木提取物及其各類制劑，其活性成分可控，抗腫瘤效果顯著，具有廣闊的市場應用甜景。實施例14毒理學研究對于實施例12的4個樣品樣品，進行了最大給藥量測定提取物分別灌胃給小鼠，劑量加倍提增，其中樣品2的劑量分別為0.4、0.8、1.6g/kg，其最高劑量相當生藥510g/kg，為臨床使用劑量的101倍，結果動物無一死亡，亦未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副反應。權利要求1.一種柘木提取物，其特征在于，提取物中的山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖甙的重量比為10.6—1.1，以提取物重量為基礎，總黃酮重量百分比為1.550％，山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖甙重量百分比為0.3—20％，槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖甙重量百分比為0.2—15％，提取物由包括下列步驟的方法制得a)柘木提取工藝取柘木藥材，用5—10倍于初始藥材重量的0％—70％醇水溶液，回流提取2—4次，每次1—5小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.06—1.07，其中，所述醇選自低級脂肪醇；b)柘木純化工藝將步驟a制得的提取濃縮液，過一裝有大孔樹脂的層析柱，經3—6倍于樹脂床體積量的水洗滌，用2—4倍于樹脂床體積量的20—80％乙醇溶液梯度洗脫，收集40—60％乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。2.如權利要求如權利要求1所述柘木提取物，其特征在于，所述提取物中的山奈鼢-7-o-e-0-葡萄糖甙和槲皮素-7-0-6-0-葡萄糖甙的重量比為1:0.6—0.9，以提取物重量為基礎，總黃酮重量百分比為14—50%，山奈酚-7-0-e-D-葡萄糖戒重量百分比為2.5—20%，槲皮素-7-0-P-D-葡萄糖甙重量百分比為1.7—15%。3.如權利要求1所述柘木提取物，其特征在于，所述歩驟b在獲得大孔樹脂層析柱40—60%乙醇流份濃縮液后，再過一裝有聚酰氨的層析柱，經3—6倍于柱體積量的水洗P，用1一4倍于柱體積量的20—50%乙醉梯度洗脫，收集30—50%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。4.如權利要求3所述柘木提取物，其特征在于，在所述過聚酰氨層析柱并獲得30—50%乙醇流份濃縮液歩驟后，再過一裝有凝膠的層析柱，經4—8柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。5.如權利要求1所述柘木提取物，其特征在于，在所述歩驟b獲得大孔樹脂層析柱40—60%乙醇流份濃縮液后，過一裝有凝膠的層析柱，經4—8倍柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。6.如權利要求15中任一權利要求所述柘木提取物的制備方法，包括下列步驟a)柘木提取工藝取柘木藥材，用5—10倍于初始藥材重量的()％—70%醇水溶液，回流提取2—4次，每次1一5小時，合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.06—1.07，其中，所述醇選自低級脂肪醇；b)柘木純化工藝將歩驟a制得的提取濃縮液，過一裝有大孔樹脂的層析柱，經3—6倍于樹脂床體積量的水洗滌，用2—4倍于樹脂床體積量的20—80%乙醇溶液梯度洗脫，收集40—60%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。7.如權利要求6所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，所述大孔樹脂為中低極性大孔樹脂，層析柱中所裝大孔樹脂的體積為初始藥材體積的1/2—1/4。8.如權利要求6或7所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟b在獲得大孔樹脂層析柱40—60%乙醇流份濃縮液后，再過一裝有聚酰氨的層析柱，經3—6倍于柱體積量的水洗滌，用l一4倍于柱體積量的20—50%乙醇梯度洗脫，收集30—50%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。9.如權利要求8所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，所述聚酰氨優(yōu)選40—80目聚酰氨，層析柱中所裝聚酰氨的重量為初始藥材重量的1/3—1/8。10.如權利要求8所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，在所述過聚酰氨層析柱并獲得30—50%乙醇流份濃縮液步驟后，再過一裝有凝膠的層析柱，經4一8柱體積量的50%乙醇洗滌，再用4—8柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。11.如權利要求6所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，在所述歩驟b獲得大孔樹脂層析柱40—60%乙醇流份濃縮液后，過一裝有凝膠的層析柱，經4-一8倍柱體積量的50%乙醇洗漆，再用4一8倍柱體積量的95%乙醇洗脫，收集95%乙醇流份，減壓濃縮，真空干燥，得到浸膏粉。12.如權利要求10或11所述柘木提取物的制備方法，其特征在于，所述凝膠為葡萄糖凝膠，層析柱中所裝凝膠的重量為上柱濃縮液干重量的10—50倍。13.權利要求15中任一權利要求所述柘木提取物用于制備抗腫瘤藥用制劑。14.如權利要求13所述柘木提取物的用途，其特征在于，所述藥用制劑選自顆粒劑、片劑、膠囊、干糖槳或凍干粉針。15.—種藥物組合物，由治療有效量的權利要求15中任--權利要求所述柘木提取物及藥用輔料組成，柘木提取物與藥用輔料的重量比為3—8:7—2。全文摘要本發(fā)明涉及天然藥物及中藥提取物的
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。公開了一種柘木提取物，提取物中的山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖甙和槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖甙的重量比為1∶0.6-1.1，以提取物重量為基礎，總黃酮重量百分比為1.5-50％，其中山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖甙重量百分比為0.3-20％，槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖甙重量百分比為0.2-15％。本發(fā)明還公開了上述柘木提取物的制備工藝及用途。本發(fā)明柘木提取物的制備方法工藝完善，工藝指標健全，制得的柘木提取物及其各類制劑活性成分可控，抗腫瘤效果顯著，具有廣闊的市場應用前景。文檔編號A61K9/19GK101375937SQ20071004542公開日2009年3月4日申請日期2007年8月30日優(yōu)先權日2007年8月30日發(fā)明者張國明,謝家駿申請人:上海雷允上科技發(fā)展有限公司;上海市中藥研究所