專利名稱：H9亞型禽流感hi穩(wěn)定抗原的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)，具體涉及一種H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原。
背景技術(shù)：
禽流感(Avian Influenza，AI)是由正粘病毒科流感病毒屬型流感病毒引起的禽類烈性傳染病，是一種從呼吸系統(tǒng)到全身嚴(yán)重?cái)⊙Y等多種疾病的綜合癥?？筛腥径喾N禽類家禽(如雞、鴨、鵝、火雞、鴿等)、珍禽(如珍珠雞、天鵝、鷗等)、觀賞鳥類(如鸚鵡、鷯歌等)和野禽(如雞、鴨、燕鷗等)等。目前，有據(jù)可查的帶毒鳥類已達(dá)88種之多。根據(jù)致病力的不同，可將其分為高致病性、低致病性和無(wú)致病性禽流感。低致病性禽流感(如H9亞型)可嚴(yán)重影響家禽的生產(chǎn)性能，產(chǎn)蛋率可從90％降至20％以下，甚至絕產(chǎn)，對(duì)商品肉雞可導(dǎo)致30％左右的死亡，且極易與大腸桿菌混合感染。高致病性禽流感以高發(fā)病率和高死亡率為特征，給養(yǎng)禽業(yè)造成毀滅性打擊。H9亞型禽流感原來(lái)一般被認(rèn)為是低致病性的，但是該亞型病毒由于細(xì)菌感染或環(huán)境等其他因素的共同作用，引起的AI給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。疫苗免疫是防止AIV暴發(fā)和避免造成巨大損失的有效措施和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。國(guó)外一些發(fā)達(dá)國(guó)家如美國(guó)、德國(guó)、澳大利亞等已研制出AI油乳劑滅活苗、基因工程亞單位疫苗、病毒活載體疫苗。我國(guó)從1998年開始進(jìn)行低致病性禽流感(H9亞型)的免疫，2004年開始進(jìn)行高致病性H5亞型的免疫。
我國(guó)已建立了禽流感瓊脂擴(kuò)散(AGP)、血凝抑制試驗(yàn)(HI)、神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)(NI)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等血清學(xué)診斷技術(shù)，以及分子診斷技術(shù)(RT-PCR)，解決了我國(guó)對(duì)禽流感流行病學(xué)監(jiān)測(cè)、診斷與防制的要求。
AI的特異性抗體可以通過(guò)血清學(xué)方法來(lái)檢測(cè)。相對(duì)于AGP(瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn))、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))等檢測(cè)方法，HI方法具有型特異性、敏感、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。如AGP只能對(duì)HI效價(jià)大于6log2的抗體滴度時(shí)才能檢測(cè)出來(lái)，而且不能區(qū)分禽流感的各個(gè)亞型。同時(shí)HI方法的敏感度極高，當(dāng)檢測(cè)HI效價(jià)大于等于3log2時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)，此時(shí)證明禽類體內(nèi)已免疫成功有抗體存在，當(dāng)小于3log2時(shí)為陰性反應(yīng)可證明免疫失敗，因此使用HI方法可以直接測(cè)定被測(cè)禽類是否有抗體存在，也就是可以區(qū)分抗體反應(yīng)的陰陽(yáng)性，較之AGP方法更加準(zhǔn)確。
HI抗體檢測(cè)是目前生產(chǎn)中抗體檢測(cè)最常用的檢測(cè)方法，具有操作簡(jiǎn)便、快捷，敏感度高，和型特異性等特點(diǎn)。HI就是血凝抑制實(shí)驗(yàn)，HI檢測(cè)方法成為實(shí)際生產(chǎn)中評(píng)價(jià)疫苗質(zhì)量、雞體免疫水平的高低和確定是否免疫的最重要手段。但是，目前HI檢測(cè)方法存在的首要問(wèn)題是缺乏穩(wěn)定的、安全的HI診斷抗原。具體表現(xiàn)在首先活病毒抗原隱患大，由于現(xiàn)有單位使用的禽流感診斷抗原為活病毒，必然存在散毒的危險(xiǎn)；其次，活病毒抗原為了保護(hù)病毒本身的活性必須冷凍保存，要求高，如果在4℃條件下放置，1個(gè)星期即開始出現(xiàn)蛋白沉淀、效價(jià)降低，而反復(fù)冷凍又會(huì)使蛋白變性，抗原效價(jià)降低；此外，穩(wěn)定性差，利用活的病毒作為診斷抗原需每次測(cè)定抗原的血凝效價(jià)，增加了工作量；雖然可以對(duì)活病毒進(jìn)行滅活處理，用以減少病毒擴(kuò)散的危險(xiǎn)，但是現(xiàn)有技術(shù)一般使用甲醛作為滅活劑，而甲醛滅活一般是作用于病毒的核酸以及病毒殼蛋白，這樣就會(huì)破壞病毒表面的纖突蛋白，而纖突蛋白又是血凝試驗(yàn)所不可缺少的，大量的表面纖突蛋白被破壞就會(huì)使血凝效價(jià)降低而且存放時(shí)間大大縮短，通過(guò)簡(jiǎn)單滅活后病毒血凝素的穩(wěn)定性差，同時(shí)受到保存條件、緩沖液和滅活劑等因素影響較大，也會(huì)導(dǎo)致血凝效價(jià)常急劇降低甚至消失，可見目前實(shí)際應(yīng)用的抗原均有活病毒制得，而甲醛作為滅活劑也不適用于本病毒的滅活。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述生產(chǎn)中實(shí)際存在的問(wèn)題，發(fā)明人經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，制備了效價(jià)穩(wěn)定、便于存放、安全的禽流感(H9亞型)HI穩(wěn)定抗原，該抗原采用滅活的病毒制得。
該禽流感(H9亞型)滅活HI穩(wěn)定抗原的制備工藝如下按病毒液體積的0.1～0.2％加入滅活劑，在4℃條件下震蕩滅活16～24h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/2～1/5，之后使用超聲波處理病毒液。然后按病毒液與穩(wěn)定劑3～8∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
病毒液一般是指經(jīng)過(guò)處理的雞胚尿囊液，具體處理過(guò)程是將禽流感病毒(H9亞型)按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。采用其他處理過(guò)程的病毒液只要HA效價(jià)符合上述要求也可適用于本發(fā)明所述的制備工藝。
所用滅活劑為β-丙內(nèi)酯，β-丙內(nèi)酯作為滅活劑，一般應(yīng)用于人體的非典病毒及其他病毒的滅活，其作用于病毒的核酸，而不直接作用于蛋白，因此可以盡量減少對(duì)病毒表面纖突蛋白的破壞，使血凝效價(jià)在病毒滅活后依然很高，達(dá)到了活病毒的血凝效價(jià)，因此使得滅活抗原達(dá)到與活病毒抗原一樣的檢測(cè)效果。將β-丙內(nèi)酯的用量限定在病毒液體積的0.1～0.2％，當(dāng)加入量小于0.1％時(shí)，滅活效果不好，會(huì)使一部分病毒存活下來(lái)，依然會(huì)使該抗原存在散毒的危險(xiǎn)，當(dāng)加入量大于0.2％時(shí)首先會(huì)增加病毒滅活的成本，同時(shí)過(guò)多的滅火劑加入，會(huì)使病毒表面的纖突結(jié)構(gòu)發(fā)生變化從而影響抗原的血凝效價(jià)，降低其檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
將滅活病毒液進(jìn)行濃縮，使其體積濃縮至原體積的1/2～1/5，然后采用100W的超聲波處理3s，使病毒粒子分散均勻。濃縮到原體積的1/2～1/5后使病毒液濃度加大，同時(shí)使用超聲波處理，較之普通的震蕩等操作能夠使病毒粒子更加均勻的分散，在檢測(cè)時(shí)可以達(dá)到最佳的效果。
按滅活病毒液與穩(wěn)定劑3～8∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑混勻后4℃保存。當(dāng)滅活病毒液與穩(wěn)定劑的比例小于3∶1時(shí)，穩(wěn)定劑的量過(guò)大從而會(huì)導(dǎo)致抗原的整體效價(jià)降低，當(dāng)兩者比例大于8∶1時(shí)，穩(wěn)定劑的量過(guò)小，無(wú)法對(duì)所有的病毒液起到穩(wěn)定的作用，從而影響抗原的存放時(shí)間以及降低其效價(jià)。
所述的穩(wěn)定劑每100ml按照以下配比配置蔗糖3～5g，谷氨酸鈉1.5～2.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.5～1g，磷酸氫二鈉0.08～0.16g。
在以上配比的基礎(chǔ)上穩(wěn)定劑中還可以含有氯化鉀0.01～0.05g，磷酸氫二鉀0.02～0.03g，氯化鎂0.03～0.05g。
采用這種組分的穩(wěn)定劑，可以對(duì)禽流感(H9亞型)病毒具有較好保護(hù)效果，保證滅活后的抗原的效價(jià)不會(huì)降低，同時(shí)延長(zhǎng)了抗原的儲(chǔ)存時(shí)間，為快速的對(duì)禽類進(jìn)行檢測(cè)創(chuàng)造了有利條件，同時(shí)，由于現(xiàn)有的禽流感抗原一般都沒(méi)有采用固定的穩(wěn)定劑，無(wú)法評(píng)價(jià)穩(wěn)定劑的效用，而本發(fā)明確定了相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中較為適用的穩(wěn)定劑成分及配比，為相關(guān)抗原的生產(chǎn)提供了技術(shù)上的支持。
穩(wěn)定劑在使用前在115℃滅菌5-15min，然后在4℃條件下儲(chǔ)存。該穩(wěn)定滅活抗原為淡黃或深黃色透明液體。使用時(shí)與活病毒抗原使用方法一致。
本抗原為滅活的抗原，因此在使用和儲(chǔ)存時(shí)不存在散毒的危險(xiǎn)，減少了因?yàn)槭褂每乖鴮?duì)人體造成的危害；由于采用了特殊配比的穩(wěn)定劑使得抗原的存放時(shí)間得到延長(zhǎng)，方便了抗原的儲(chǔ)存，運(yùn)輸和使用；由于采用了β-丙內(nèi)酯作為滅活劑，使得滅活后的病毒依然有很好的效價(jià)，不會(huì)影響檢測(cè)的準(zhǔn)確度，其檢測(cè)的準(zhǔn)確度與活病毒的檢測(cè)準(zhǔn)確度基本一致，這種抗原的HA血凝效價(jià)穩(wěn)定，使用前不需檢測(cè)，減少了工作人員的工作量，為在最短的時(shí)間內(nèi)檢驗(yàn)免疫效果提供了便利條件。


圖1為本發(fā)明所述穩(wěn)定抗原與活病毒抗原血清樣品檢測(cè)對(duì)比實(shí)驗(yàn)效果圖，檢測(cè)時(shí)所用方法及檢測(cè)環(huán)境相同，圖中的穩(wěn)定抗原為本發(fā)明所述制得的滅活抗原。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將H9N2禽流感病毒按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.1％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活16h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/2，之后使用100W的超聲波處理3s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑3∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中蔗糖3.0g，谷氨酸鈉1.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鈉0.08g。
實(shí)施例2將H9N2禽流感病毒按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.15％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活20h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/3，之后使用100W的超聲波處理3.5s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑4.5∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑每100ml按照以下配比配置蔗糖3.5g，谷氨酸鈉2.0g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.6g，磷酸氫二鈉0.10g，氯化鉀0.02g，磷酸氫二鉀0.02g，氯化鎂0.03g。
實(shí)施例3將H9N2禽流感病毒病毒液按其體積的0.2％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活24h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/4，之后使用100W的超聲波處理3s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑5∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。病毒液從市場(chǎng)上直接購(gòu)得。
穩(wěn)定劑每100ml按照以下配比配置蔗糖4g，谷氨酸鈉2.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.8g，磷酸氫二鈉0.012g，氯化鉀0.03g，磷酸氫二鉀0.025g。
實(shí)施例4將H9N2禽流感病毒毒株制造為病毒液，檢測(cè)其HA效價(jià)≥8log2為合格。按病毒液體積的0.1％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活18h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/5，之后使用100W的超聲波處理3s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑6.5∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑每100ml按照以下配比配置蔗糖5g，谷氨酸鈉2.0g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.7g，磷酸氫二鈉0.014g。
在以上配比的基礎(chǔ)上穩(wěn)定劑中還可以含有氯化鉀0.02g，氯化鎂0.045g。
實(shí)施例5將H9N2禽流感病毒按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.15％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活24h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/3，之后使用100W的超聲波處理3.0s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑7∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑每100ml按照以下配比配置蔗糖3.5g，谷氨酸鈉2.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.8g，磷酸氫二鈉0.16g，磷酸氫二鉀0.03g，氯化鎂0.05g。
實(shí)施例6將H9N2禽流感病毒按1∶800倍稀釋后，接種SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)＞8log2為合格。按尿囊液體積的0.2％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活24h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/2，之后使用100W的超聲波處理3s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑8∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中蔗糖5.0g，谷氨酸鈉1.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鈉0.08g，氯化鎂0.45g。
實(shí)施例7
將H9N2禽流感病毒按1∶1200倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.1％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活18h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/5，之后使用100W的超聲波處理2.5s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑7.5∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中蔗糖4.0g，谷氨酸鈉1.8g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鈉0.15g，氯化鉀0.02g，磷酸氫二鉀0.03g，氯化鎂0.04g。
實(shí)施例8將H9N2禽流感病毒毒株按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.2％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活24h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/4，之后使用100W的超聲波處理3s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑6.5∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中蔗糖5.0g，谷氨酸鈉2g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.8g，磷酸氫二鈉0.14g，氯化鉀0.03g，磷酸氫二鉀0.025g，氯化鎂0.035g。
實(shí)施例9將H9N2禽流感病毒按1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液，檢測(cè)HA效價(jià)≥8log2為合格。按尿囊液體積的0.15％加入β-丙內(nèi)酯，在4℃條件下震蕩滅活20h。將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/5，之后使用100W的超聲波處理3.5s使病毒粒子分散均勻。然后按病毒液與穩(wěn)定劑7∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中蔗糖5.0g，谷氨酸鈉1.8g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.75g，磷酸氫二鈉0.15g，氯化鉀0.025g，磷酸氫二鉀0.025g，氯化鎂0.045g。
在實(shí)際使用時(shí)效果如附圖所示，采用上述方法制得的滅活H9亞型禽流感病毒抗原，其效果與活病毒抗原所得到的效果是一致的，甚至是高出活病毒抗原的，但是由于其采用了滅活后的病毒，因此不再存在通過(guò)使用抗原造成病毒擴(kuò)散的危險(xiǎn)，同時(shí)由于采用了滅活病毒且加入了合適的穩(wěn)定劑，使得抗原的存放時(shí)間得到了延長(zhǎng)，效價(jià)也不會(huì)有下降，可見采用本發(fā)明所述的滅活抗原較之活病毒抗原在檢測(cè)時(shí)更為簡(jiǎn)便、安全。
權(quán)利要求
1.一種H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原，其特征在于該抗原為H9亞型禽流感HI滅活抗原。
2.一種H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其制造工藝如下按病毒液體積的0.1～0.2％加入滅活劑，在4℃條件下滅活16～24h；將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/2～1/5，之后使用超聲波處理病毒液；按濃縮后病毒液與穩(wěn)定劑體積比3～8∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原制造方法，其特征在于滅活時(shí)所用滅活劑為β-丙內(nèi)酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于所述滅活前的病毒液是經(jīng)過(guò)處理的雞胚尿囊液；具體處理過(guò)程是將H9亞型禽流感病毒按體積比1∶1000倍稀釋后，接種11日齡SPF雞胚，每胚0.2ml，置37℃繼續(xù)孵育，24小時(shí)照蛋1次，棄去死亡雞胚，此后每4小時(shí)照蛋1次，及時(shí)取出死亡雞胚置2～8℃冷卻，至96小時(shí)全部取出置2～8℃冷卻12～16小時(shí)，無(wú)菌方法收獲雞胚尿囊液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于所述超聲波處理病毒液是使用100W超聲波處理病毒液2.5-3.5秒。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于所述收獲雞胚尿囊液的HA效價(jià)≥8log2。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于所述穩(wěn)定劑的配比為每100ml穩(wěn)定劑中含有蔗糖3～5g，谷氨酸鈉1.5～2.5g，甘油50ml，蒸餾水50ml，氯化鈉0.5～1g，磷酸氫二鈉0.08～0.16g。
8.根據(jù)權(quán)利要求2或7所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于所述穩(wěn)定劑中每100ml還含有氯化鉀0.01～0.05g，磷酸氫二鉀0.02～0.03g，氯化鎂0.03～0.05g。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原的制造方法，其特征在于穩(wěn)定劑在115℃滅菌5-15min，然后在4℃條件下儲(chǔ)存。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種H9亞型禽流感HI穩(wěn)定抗原，該抗原為滅活病毒制得，其制造工藝如下按病毒液體積的0.1～0.2％加入滅活劑，在4℃條件下滅活16～24h；將滅活好的病毒液濃縮為原體積的1/2～1/5，之后使用超聲波處理病毒液；按濃縮后病毒液與穩(wěn)定劑體積比3～8∶1的比例加入滅菌穩(wěn)定劑，振蕩混勻后即可使用。這種滅活抗原在使用和儲(chǔ)存時(shí)不存在散毒的危險(xiǎn)，減少了因?yàn)槭褂每乖鴮?duì)人體造成的危害，同時(shí)具有很好的效價(jià)，不會(huì)影響檢測(cè)的準(zhǔn)確度。
文檔編號(hào)A61K31/16GK101024081SQ20071001389
公開日2007年8月29日 申請(qǐng)日期2007年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月29日
發(fā)明者徐懷英, 秦卓明, 王友令, 歐陽(yáng)文軍, 袁小遠(yuǎn), 賈強(qiáng), 楊金興, 張世棟 申請(qǐng)人:徐懷英, 秦卓明, 王友令