專利名稱：禽流感病毒h9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)及制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種禽流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)及制備方法，屬于獸 用生物制品領域。
背景技術：
英國藥典(BP)的化學對照物質(zhì)是從1963年才開始提出，由于WHO在英國建立了 國際生物標準物質(zhì)中心，所以英國一直沿用國際標準物質(zhì)，而其本國標準物質(zhì)建立較晚，至 1970年后，歐洲藥典問世，英國除引用國際標準物質(zhì)外，也用歐洲藥典標準物質(zhì)，少量使用 本國的標準物質(zhì)。即使如此，BP1968年版及其增補本再加英國藥典(1968年)收載的數(shù)量 已超過260個，1980年版已超過300個，BP1993版收載了 371個。美國藥典委員會可提供 約1805多種藥品標準物質(zhì)；歐洲藥典委員會有2098種，其中生物制品標準物質(zhì)有319種。目前，我國已研制出國家一級標準物質(zhì)1262種，二級標準物質(zhì)1739種，涉及鋼鐵、 地質(zhì)、石油、核材料、環(huán)境、食品以及臨床檢驗等領域。獸用生物制品的標準物質(zhì)研究較滯 后，目前只有192種，而獸用生物制品檢驗用標準物質(zhì)幾乎為零。獸用生物制品標準物質(zhì)是控制和確定獸用生物制品產(chǎn)品質(zhì)量、校準驗證檢驗儀器 和方法是否準確的物質(zhì)標準，是正確診斷傳染病、準確監(jiān)測免疫情況的物質(zhì)基礎。禽流感(Al)是我國重點防控的重大動物疫病，禽流感病毒(AIV)H9亞型流行很廣 泛。目前禽流感診斷、免疫監(jiān)測及其疫苗免疫效果評價中應用最廣泛的方法是HI試驗，這 是2006年我國農(nóng)業(yè)部批準通過的方法，但是目前我國尚無禽流感病毒H9亞型血凝抑制試 驗用標準物質(zhì)及其相關研究的報道，國外國際動物衛(wèi)生組織(OIE)等參考實驗室也沒有， 嚴重影響了前后不同時期檢測數(shù)據(jù)的一致性和不同實驗室數(shù)據(jù)的可比性。近年各級實驗室 對禽流感標準物質(zhì)的需求越來越多，特別是H9亞型和H5亞型相關的診斷試劑標準物質(zhì)，因 此研制禽流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)尤為迫切，該標準物質(zhì)是禽流感H9亞型 準確診斷、免疫監(jiān)測及對其疫苗免疫效果進行正確評價的根本保障，提高禽流感的防控水 平。目前我國標準物質(zhì)的研制主要參考和遵循1987年7月10日國家計量局發(fā)布實施 的《標準物質(zhì)管理辦法》以及一級標準物質(zhì)技術規(guī)范(JJG 1006-94)，但是這個技術規(guī)范是 適用于化學成分、物理化學特性及工程技術特性一級標準物質(zhì)的研制，對于生物制品標準 物質(zhì)，特別是獸用生物制品標準物質(zhì)研制目前尚無技術規(guī)范可循。因此獸用生物制品標準 物質(zhì)研制是一項無基礎的研究，填補了該項研究領域的空白。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為制備一種禽流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)，該抗原標準物質(zhì) 含有滅活的禽流感病毒H9亞型CKSHOl株病毒；血凝抑制試驗抗原對雞紅細胞凝集價應 ^ 71og2 ；該抗原只能被禽流感病毒H9亞型陽性血清所抑制，而對禽流感病毒H5亞型、H7 亞型陽性血清，雞新城疫陽性血清和減蛋綜合征病毒陽性血清均呈陰性反應。
本發(fā)明的主要制備方法為(1)制備禽流感病毒H9亞型血凝抑制 試驗抗原標準物質(zhì)候選物，包括H9亞型禽 流感病毒毒種的制備與檢驗；病毒液的制備與檢驗；病毒液滅活、濃縮、半成品檢驗；凍干、 成品檢驗、均一性檢驗及穩(wěn)定性檢驗；(2)標準物質(zhì)的標定、定值。本發(fā)明技術方案的詳細闡述包括禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原標準物質(zhì)、其制備方法和程序、其制備 規(guī)程和協(xié)作標定操作規(guī)范等內(nèi)容。本發(fā)明人在國家現(xiàn)行的禽流感病毒H9亞型(株)血凝抑制方法基礎上，制定了禽 流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)的質(zhì)量標準和制備規(guī)程，研制出了禽流感病毒H9 亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)，并與中國獸藥監(jiān)察所、中國農(nóng)業(yè)大學等8家單位對其效價進 行了協(xié)作標定。一、禽流感病毒H9亞型(株)血凝抑制抗原標準物質(zhì)的制備1病毒毒種(1)病毒毒種的來源本發(fā)明用于制造禽流感病毒H9亞型(株)血凝抑制抗原標準物質(zhì)的病毒毒株為 A型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01(H9N2)株(簡稱CKSHOl株)，由中國國家禽流 感參考實驗室(中國哈爾濱市中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所內(nèi))鑒定、保管和供應。(2)病毒毒種的特性1)紅細胞凝集價按附錄1進行雞紅細胞凝集價測定，毒種對雞紅細胞凝集價 應彡81og2。2)病毒含量將毒種用滅菌生理鹽水作10倍系列稀釋，取10-6、10-7、10_83個稀釋 度，各尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5個，每胚0. lml。置37°C繼續(xù)孵育，24h前死亡的雞 胚棄去不計，24 72h內(nèi)死亡的雞胚隨時取出并于2 8°C冷藏保存。至72h，測定所有雞胚 液的紅細胞凝集價，凝集價>41og2者判為感染，計算EID5tl(中國獸藥典委員會.中華人民 共和國獸藥典二〇〇五年版三部.中國農(nóng)業(yè)出版社，2006，本發(fā)明以下稱《中國獸藥典》)， 每ml病毒含量應彡IO7-5EID5003)特異性將毒種用滅菌生理鹽水稀釋至103EID5Q/0. Iml與等量禽流感病毒H9亞 型特異陽性血清混合，置室溫中和Ih后，接種10日齡SPF雞胚10個，觀察120h。在接種后 24 120h內(nèi)不應引起特異死亡，至少有8/10接種雞胚健活，雞胚液作紅細胞凝集試驗，應 為陰性。4)對雞的毒力將毒種用滅菌生理鹽水作10倍稀釋，滴鼻接種4 5周齡SPF雞 10只，每只0. Iml0另取條件相同的SPF雞5只，不接種作為對照，在同條件下分別飼養(yǎng)，觀 察14日，感染雞和對照雞均不應出現(xiàn)任何異常反應。5)純凈性按《中國獸藥典》規(guī)定的方法應無細菌、霉菌、支原體及外源病毒污染。6)基礎種子代數(shù)5代以內(nèi)。7)毒種保存在-70°C以下，保存期為60個月。2實驗動物所使用的SPF雞及SPF雞胚均由哈爾濱獸醫(yī)研究所實驗動物中心提供。3禽流感病毒H9亞型(株)血凝抑制抗原標準物質(zhì)候選物的制備
(1)抗原的制備按照常規(guī)方法(《中國獸藥典》)，將毒種接種SPF雞胚，收獲雞胚液制備禽流感 病毒H9亞型(株)血凝抑制抗原半成品，經(jīng)滅活、濃縮，進行無菌檢驗、效價測定后，按每 瓶Iml分裝凍干。保護劑采用本課題研制的配方和配制方法(用注射用水配制蔗糖濃度為 100%的凍干保護劑，過濾除菌后，保護劑與雞胚液按1 9比例配制)，批號為200901。(2)抗原檢驗1)物理性狀白色或灰白色海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。2)無菌檢驗抽樣檢驗，應無細菌或霉菌生長。3)效價測定按凍干時不同部位隨機抽取3個樣品進行HA測定，每個樣品重復測 2次，凝集價應均不低于71og2。4)特異性檢驗采用血凝抑制試驗的方法(詳見附錄1)，用該抗原分別對禽流感 病毒H5亞型、H7亞型和H9亞型陽性血清、雞新城疫陽性血清、減蛋綜合征病毒陽性血清進 行血凝抑制試驗，該抗原只能被禽流感病毒H9亞型陽性血清所抑制，而對其它陽性血清均 呈陰性反應。5)剩余水分測定按《中國獸藥典》剩余水分測定法進行，應低于3%。6)真空度測定按《中國獸藥典》進行，用高頻電子火花儀進行檢測，應符合規(guī)定。4標準物質(zhì)的定值(1)定值方法紅細胞凝集試驗96孔微量板法進行測定。(2)定值單位由6 8家具有資質(zhì)且事先經(jīng)過比對確認其定值能力相同的試驗 室，采用同一方法進行協(xié)作標定。(3)定值要求1)應對每個被測標準樣品分別做六到八次獨立的測定，分兩個單元，每個單元做 三次獨立測定；兩個單元之間相隔不少于3天。所獲得的6個數(shù)據(jù)應按統(tǒng)計學方法檢驗異 常值，如發(fā)現(xiàn)有異常值，應予標明，并補做一次測定。然后報出全部結果。2)所有用于定值測量的計量器具/測量儀器需經(jīng)檢定或校準合格，并在有效期 內(nèi)。(4)數(shù)據(jù)處理1)匯總?cè)吭紨?shù)據(jù)，考察全部測量數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性。2)在數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布或近似正態(tài)分布的情況下，將每個實驗室的所測數(shù)據(jù)的平 均值視為單次測量值，構成一組新的測量數(shù)據(jù)。剔除可疑值。計算出總平均值和標準偏差。3)當全部數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布或近似正態(tài)分布情況下，也可視其為一組新的測量數(shù) 據(jù)。剔除可疑值，再計算全部原始數(shù)據(jù)的總平均值和標準偏差。5均一性檢驗(1)抽樣數(shù)量凍干數(shù)量在500支以上時取樣25支；凍干數(shù)量在500只以下時取樣 15支。(2)測量分別稱量每支內(nèi)容物的凈重量，用統(tǒng)計學方法分析其均一性。6穩(wěn)定性檢驗抗原在_20°C、4°C、37°C條件下保存，并定期進行HA價測定，每一時 間均要進行2次重復測量，用統(tǒng)計學方法從統(tǒng)計上剔除可疑值，再計算每次的平均值，該值與定值的偏差應不大于標準偏差。 二、禽流感H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)的使用抗原系用A型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/10/01 (H9N2)株接種SPF雞胚，收獲感染雞胚液，用甲醛溶液滅活，經(jīng)濃縮后，加適宜穩(wěn)定劑凍干制成。主要用于(一)HA試驗中，校定H9亞型抗原HA效價1標準抗原的稀釋取禽流感H9亞型抗原凍干安瓿1支，啟封后加Iml生理鹽水恢 復原量；先進行10倍、20倍、80倍稀釋，然后依次進行1/320、1/400、1/480、1/560、1/640、 1/720、1/800 倍稀釋。2工作抗原的稀釋取禽流感H9亞型工作抗原1支，啟封后加生理鹽水恢復原量； 先進行10倍、20倍、80倍稀釋，然后依次進行320、400、480、560、640、720、800…依次遞增 80倍進行稀釋。3紅細胞凝集試驗(1)取96孔V型微量血凝板，每一稀釋度分別取25 μ L加入到孔中，加入生理鹽水 25 μ L，再加入1 %雞紅細胞懸液25 μ Lo(2)對照50 μ L生理鹽水+25 μ L 1 %雞紅細胞懸液。(3)在微量振蕩器振蕩Imin 2min。(4)室溫(24 26°C )放置30min，判定結果。將血凝板傾斜70°且靜置10秒左 右開始記錄，凡反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面向下呈淚珠狀流淌，呈現(xiàn)與紅細胞對 照孔一樣者為完全不凝集孔(_)；反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面緩慢向下呈淚珠狀 流淌者為不完全凝集孔(+)；反應孔底部有紅細胞沉積但不沿傾斜面流淌者為50%凝集孔 (++)；除底部有少許紅細胞外，反應孔其他部位幾乎為完全凝集孔者(+++)；反應孔底部無 紅細胞，整個反應孔完全凝集者為完全凝集孔(#)。(5)結論當標準抗原完全凝集孔對應的最高稀釋度為460士80倍，且對照孔呈 (“)時，工作抗原完全凝集孔對應的最高稀釋度即為該抗原的紅細胞凝集價。(二)HI試驗中，校定禽流感病毒H9亞型抗體的HI效價1抗原的稀釋取禽流感H9亞型抗原凍干安瓿1支，啟封后加Iml生理鹽水恢復 原量；先做10倍、20倍、80倍稀釋。然后依次進行320、400、480、560、640倍稀釋。2紅細胞凝集試驗(1)取96孔V型微量血凝板，每一稀釋度分別取25 μ L加入到孔中，加入生理鹽水 25 μ L，再加入1 %雞紅細胞懸液25 μ Lo(2)對照50 μ L生理鹽水+25 μ L 1 %雞紅細胞懸液。(3)在微量振蕩器振蕩1 2min。(4)室溫(24 26°C )放置30分鐘，判定結果。將血凝板傾斜70°且靜置10秒 左右開始記錄，凡反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面向下呈淚珠狀流淌，呈現(xiàn)與紅細胞 對照孔一樣者為完全不凝集孔(_)；反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面緩慢向下呈淚珠 狀流淌者為不完全凝集孔(+)；反應孔底部有紅細胞沉積但不沿傾斜面流淌者為50%凝集 孔(++)；除底部有少許紅細胞外，反應孔其他部位幾乎為完全凝集孔者(+++)；反應孔底部 無紅細胞，整個反應孔完全凝集者為完全凝集孔(#)。(5)結論完全凝集孔對應的最高稀釋度應為460士80倍。
3微量血凝抑制試驗(1)4HAU抗原的配制與驗證1)抗原稀釋方法將含有400個血凝單位的抗原先進行10倍稀釋，再進行100倍稀釋，即100倍稀 釋液為4HAU血凝素。將配制的4HAU血凝素用生理鹽水進行1 2、1 3、1 4、1 5、 1 6禾口 1 7稀釋。2)取96孔V型微量血凝板，每一稀釋度分別取25 μ L加入到孔中，加入生理鹽水 25 μ L，再加入1 %雞紅細胞懸液25 μ Lo3)對照50 μ L生理鹽水+25 μ L 1 %雞紅細胞懸液。4)以上試驗做2個平行重復。5)在微量振蕩器振蕩1 2min。6)室溫(24 26°C )放置30min，判定結果。7)判定標準如果配制的抗原液為4HAU，貝Ij 1 4稀釋度將給出100%凝集點，即 反應孔底部無紅細胞，整個反應孔完全凝集；如果4HAU高于4個單位，可能1 5或1 6 為100%凝集點；如果較低，則可能1 2或1 3為100%凝集點。應根據(jù)測定結果適當 調(diào)整，使抗原工作液確為4HAU。(2)血清的稀釋1)標準陽性血清的的稀釋血清恢復原量后，依次進行10倍、20倍和120倍稀 釋；然后進行720、840、960、1080和1200倍稀釋。將稀釋好的陽性血清每一稀釋倍數(shù)取 0. 025ml，分別加入到V型微量反應板對應孔中。2)陰性血清的稀釋在V型微量反應板中，每孔加0. 025ml生理鹽水；第1孔加 入恢復原量后的陰性血清0. 025ml,反復抽打3 5次混勻；從第1孔吸取0. 025ml血清 加入第2孔，混勻后吸取0. 025ml加入第3孔，如此進行對倍稀釋至第6孔，從第6孔吸取 0. 025ml 棄去。3)被檢血清的稀釋在V型微量反應板中，每孔加0. 025ml生理鹽水；第1孔加 0. 025ml被檢血清，反復抽打3 5次混勻；從第1孔吸取0. 025ml血清加入第2孔，混勻 后吸取0. 025ml加入第3孔，如此進行對倍稀釋至第11孔，從第11孔吸取0. 025ml棄去。3. 3V型微量反應板上所有血清孔加入4HAU的抗原液25 μ L。最后1排設50 μ L 生理鹽水和25 μ L生理鹽水+25 μ L 4HAU抗原(各4個孔)做對照。(4)充分振蕩后，室溫(24 26°C )下靜置30分鐘。每孔再加入1 %雞紅細胞懸 液25 μ L，充分振蕩。(5)室溫(24 26°C )放置30分鐘后判定結果。將血凝板傾斜70°且靜置10秒 左右開始記錄，凡反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面向下呈淚珠狀流淌，呈現(xiàn)與紅細胞 對照孔一樣者為完全不凝集孔(_)；反應孔底部有紅細胞沉積且沿傾斜面緩慢向下呈淚珠 狀流淌者為不完全凝集孔(+)；反應孔底部有紅細胞沉積但不沿傾斜面流淌者為50%凝集 孔(++)；除底部有少許紅細胞外，反應孔其他部位幾乎為完全凝集孔者(+++)；反應孔底部 無紅細胞，整個反應孔完全凝集者為完全凝集孔(#)。(6)結論陽性血清840倍稀釋孔為(-)，960、1080和1200倍稀釋孔為(+)、(++)、(+++)或(#) ；50 μ L生理鹽水對照孔為㈠，25 μ L生理鹽水+25 μ L 4HAU抗原孔為(#)，此時試驗方可判為成立。被檢血清的完全不凝集孔對應的最高稀釋度即為該血清的紅細胞凝集抑制價。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明涉及禽流感病毒Η9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)及制備方法。本標準物質(zhì) 是由禽流感病毒Η9亞型CKSHOl株病毒經(jīng)過病毒液的制備與檢驗；病毒液滅活、濃縮、半成 品檢驗；凍干、成品檢驗、均一性檢驗及穩(wěn)定性檢驗及標準物質(zhì)的標定、定值等一系列的工 藝過程而制成。該標準物質(zhì)是禽流感Η9亞型準確診斷、免疫監(jiān)測及對其疫苗免疫效果進行 正確評價的根本保障，提高禽流感的防控水平。實施例1抗原制造及半成品檢驗1生產(chǎn)用毒種制備(1)毒種繁殖將毒種用滅菌生理鹽水作10倍系列稀釋，取10-4稀釋度，尿囊腔內(nèi) 接種11日齡SPF雞胚，每胚0. lml，密封針孔，置37°C繼續(xù)孵育，不必翻蛋。接種24h后，每 8h照蛋1次，至72h，死亡的雞胚隨時取出，氣室部向上直立，在2 8°C中冷卻，接種后24h 前死亡者棄去不用。將冷卻8 24h的雞胚取出，用碘酊消毒氣室部位，然后以無菌手術剔 除氣室部的卵殼，揭去卵黃殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜(勿使卵黃破裂)，吸出雞胚液(尿 囊液和羊水)。尿囊液收集于一滅菌容器內(nèi)。制備的病毒毒種經(jīng)檢驗應符合該病毒毒種的 標準(見附錄2《禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原毒種標準》)。(2)病毒液的制備1)接種取生產(chǎn)用毒種，用滅菌生理鹽水作10_4稀釋，尿囊腔內(nèi)接種11日齡SPF雞 胚，每胚0. 1ml，密封針孔，置37°C繼續(xù)孵育，不必翻蛋。2)孵育和觀察雞胚接種后，每日照蛋2次，將24h前死亡的雞胚棄去，24h后死亡 的雞胚隨時取出，至72h，無論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2 8°C冷卻8h以 上。3)收獲將冷卻的雞胚取出，用碘酊消毒氣室部位，然后以無菌手術剝除氣室部位 卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜(謹防卵黃破裂)，用滅菌小鑷子亞壓住雞胚，用IOml無菌 注射器吸取胚液。在吸取胚液前應對每個雞胚仔細檢查，凡胎兒腐敗、胚液混濁及有任何污 染可疑者，棄去不用。死胚和活胚分別收獲，每若干個雞胚分為一組，吸取胚液放于同一滅 菌中性瓶中，每更換一中性瓶時同時更換注射器，每吸取完一枚胚應將聶子在火焰上燒一 下再用來接觸下一枚胚。收獲的雞胚液放在2 8°C條件下保存。(3)病毒液的檢驗1)無菌檢驗每瓶雞胚液分別取樣，按《中國獸藥典》規(guī)定的方法進行檢驗，應無細 菌或霉菌或支原體生長也無外源病毒。2)HA價測定每瓶雞胚液分別取樣，樣品對雞紅細胞凝集價均≥ 71og2。3)滅活將上述檢驗合格的胚液以滅菌多層紗布濾過，混合于一個大容器內(nèi)，按最 終濃度為0. 的量加入甲醛溶液；加甲醛溶液后最好傾倒于另一瓶中，以避免瓶頸附近 粘附的病毒未能接觸滅活劑。然后置于37°c滅活24h(以瓶內(nèi)溫度達到37°C開始計時，期 間振搖1次)。滅活后將胚液置于2 8°C條件下保存。
4)滅活檢驗取10 11日齡SPF雞胚5個，各尿囊腔內(nèi)接種滅活胚液0. Iml, 37°C 孵育72h，收獲雞胚液，測定血凝性為陰性，并盲傳1代，測定血凝性，也無血凝現(xiàn)象，判為滅
活完全。 5)濃縮與保存將滅活徹底的雞胚液分裝到滅菌的透析袋中，袋外鋪加聚乙二醇， 在室溫下透析濃縮5倍左右。濃縮后的雞胚液分別收集于滅菌容器內(nèi)，置于4 8°C條件下存放，不得超過3個月。6)半成品檢驗透析后雞胚液分別取樣，進行無菌檢驗，無細菌或霉菌生長。透析 后雞胚液分別取樣，樣品對雞紅細胞凝集價> 91og2。7)抗原配制、分裝及凍干保護劑的配制用注射用水配制蔗糖濃度為100%的凍干保護劑，過濾除菌后備用。抗原制備將檢驗合格的雞胚液，混入同一容器內(nèi)，保護劑與雞胚液按1 9比例 配制。分裝與凍干將配好的抗原液用安瓶進行分裝，每瓶lrnl，精確度在士5%以內(nèi)，分 裝后迅速進行冷凍真空干燥。密封后放置-20°C保存。實施例2成品檢驗1物理性狀白色或灰白色海綿狀疏松團塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。2無菌檢驗抽樣檢驗，應無細菌或霉菌生長。檢驗結果見表1，所有凍干制品全部 呈陰性。表1無菌檢驗統(tǒng)計表
權利要求
1.種禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原標準物質(zhì)，其特征在于該抗原標準物質(zhì) 含有滅活的禽流感病毒H9亞型CKSHOl株病毒；血凝抑制試驗抗原對雞紅細胞凝集價均 ^ 71og2 ；該抗原只能被禽流感病毒H9亞型陽性血清所抑制，而對禽流感病毒H5亞型、H7 亞型陽性血清，雞新城疫陽性血清和減蛋綜合征病毒陽性血清均呈陰性反應。
2.一種禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原標準物質(zhì)的制備方法，其特征在于是通 過利用由我國分離的禽流感病毒H9亞型CKSHOl株病毒經(jīng)過以下步驟(1)制備禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原標準物質(zhì)候選物H9亞型禽流感病毒毒種的制備與檢驗；病毒液的制備與檢驗；病毒液滅活、濃縮、半成品檢驗；凍干、成品檢驗、均一性檢驗及穩(wěn)定性檢驗；(2)標準物質(zhì)的標定、定值。
3.如權利要求2所述的一種禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原標準物質(zhì)的制備方 法，其特征在于制備過程中使用的凍干保護劑為用注射用水配制蔗糖濃度為100%的凍 干保護劑，過濾除菌后，保護劑與雞胚液按1 9比例配制。
全文摘要
本發(fā)明涉及禽流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質(zhì)及制備方法。本標準物質(zhì)是由禽流感病毒H9亞型CKSH01株病毒經(jīng)過病毒液的制備與檢驗；病毒液滅活、濃縮、半成品檢驗；凍干、成品檢驗、均一性檢驗及穩(wěn)定性檢驗及標準物質(zhì)的標定、定值等一系列的工藝過程而制成。該標準物質(zhì)是禽流感H9亞型準確診斷、免疫監(jiān)測及對其疫苗免疫效果進行正確評價的根本保障，提高禽流感的防控水平。
文檔編號G01N33/531GK102004151SQ20101053237
公開日2011年4月6日 申請日期2010年11月5日 優(yōu)先權日2010年11月5日
發(fā)明者劉景利, 孫建宏, 張從祿, 楊帆, 王在時, 田國彬, 胡井雷, 韓正博 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所