專利名稱：鼠李糖乳桿菌用于治療、預(yù)防或減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的用途的制作方法
鼠李糖乳桿菌用于治療、預(yù)防或減少 配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的用途發(fā)明背景(1 )技術(shù)領(lǐng)域
概括地，本發(fā)明涉及LGG在制備用于治療、預(yù)防或減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的藥物中的用途。 (2)相關(guān)技術(shù)的描述
炎性反應(yīng)(inflammatory response)是機(jī)體在傳染原侵入，抗原 激發(fā)，或物理、化學(xué)或創(chuàng)傷性損傷后，試圖恢復(fù)和維持動態(tài)平衡的反應(yīng)。 局部炎癥包含在特定的區(qū)域內(nèi)，并可表現(xiàn)為變化的癥狀，包括發(fā)紅、肺 脹、發(fā)熱和疼痛。
雖然炎性反應(yīng)通常認(rèn)為是對損傷所進(jìn)行的有益健康的反 應(yīng)，如果免疫系統(tǒng)不受到適當(dāng)調(diào)節(jié)，就可能出現(xiàn)不需要的生理學(xué)反應(yīng)。 在這些情形下，機(jī)體正常的保護(hù)性免疫系統(tǒng)通過處理健康組織(好^f象它受 到感染或不知何故不正常)引起自身組織損傷。選擇性地，如果有損傷, 炎性反應(yīng)可以與它正處理的威脅不成比例。這種炎性反應(yīng)可4吏4區(qū)體產(chǎn)生 比誘發(fā)因素本身所產(chǎn)生的更多的損傷。
據(jù)發(fā)現(xiàn),炎性反應(yīng)部分地包括促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子 均增加的表達(dá)。細(xì)胞因子為低分子量的、生物學(xué)活性蛋白質(zhì)，它涉及免 疫及炎性反應(yīng)的協(xié)調(diào)和特異性免疫細(xì)胞群之間的傳遞。許多這樣的細(xì)胞 類型產(chǎn)生細(xì)胞因子，包括嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，由于它 們大量存在于損傷部位因而為炎性反應(yīng)期間的主要來源。
存在多種才幾制，通過這些才幾制，炎癥部位所產(chǎn)生的細(xì)月包因子 影響炎性反應(yīng)。如果促炎反應(yīng)不能被抗炎細(xì)胞因子成功地抵制，就可出 現(xiàn)不受控制的全身性炎癥。
與局部炎癥不同，全身性炎癥廣泛地遍及全身。這種類型的 炎癥可以包括特定部位的局部炎癥，但是它也可以與一般的"流感樣，， 癥狀有關(guān)，其包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、疲勞或精力不濟(jì)(lossofenergy)、頭痛、 食欲不振(loss of appetite)、和肌強(qiáng)直。全身性炎癥可導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解、 分解代謝和代謝亢進(jìn)。因而，基本器官(諸如肌肉、心臟、免疫系統(tǒng)和肝)的結(jié)構(gòu)和功能可能受到連累，并可促成多器官衰竭和死亡。Jeschke,等，Mol. Med. 8(8):443-450 (2002)。雖然在了解全身性炎癥的機(jī)制上已經(jīng)取 得巨大的進(jìn)展，但此病癥的死亡率依然保持不能接受的高死亡率。間定居腸腔內(nèi)的個體微生物的平衡。眾所周知腸道的粘膜表面定居了巨 大量的、復(fù)雜的和動態(tài)的微生物群。腸內(nèi)微生物群的組分隨著消化道以 及不同的小環(huán)境(例如上皮粘液層、隱窩的深粘液層、和粘膜上皮細(xì)胞表 面)而變化。具體的定居群取決于外部和內(nèi)部的因素，包括腔內(nèi)可用的分 子、粘液性質(zhì)、和宿主一鼓生物的和孩吏生物-孩￡生物的相互作用。Murch, S.H.,7b〃 o/爿〃e， T^/匿d卸/Vo&oto， Lancet, 357:1057-1059 (2001 )。
組成腸孩i生物群(gut microflora)的這些孩i生物積極地涉入 免疫應(yīng)答。它們與上皮細(xì)胞在對兩合作者互相有益關(guān)系的條件下(共生關(guān) 系)或有益一個合作者而無害于另外一個的條件下(偏利共生)相互作 用。Hooper,等，//ow //ay/"Wcra6/"/ /"ferac"'o似iS7z"/ e /7ze jEVrw廠owwew/ //ze Mamm"/^w /"feWwe, Annu. Rev. Nutr. 22:283-307 (2002)。事實(shí)上，正出現(xiàn)的相當(dāng)多的證據(jù)表明腸內(nèi)微生物群和腸粘膜中 不同種群的細(xì)胞之間存在強(qiáng)的相互作用或"相互干擾"Bourlioux,等，Report on the Danone Symposium "77ze //7/e〃/'gew/1 /"/^邊'we， '， /ze/c/ /力尸<3"'《， J麗e /《26>02， Am. J. Clin. Nutr. 78:675 (2003);Hooper, L.V. & Gordon, J丄: Cow膨朋a/ i^e/Wo似/z— z" /7ze GW， Sci. 292:1115(2001》Haller, 等，7Vow-尸a/7zogem'c Sa"en'(2 ￡7/c" a Z)z,re船W Q^oA:z力e Ae^y/ o似e /"teW憩/ i^"/zWa/ Ce〃/Zewcoqy" Co-Cw/ wes, GUT 47:79 (2000); Walker, W.A., Ao/e o/jVw/We她朋J Ba"e〃'"/ Co/om'za"o/7 z力/7ze Deve/o/ 慰wf q/' /wto"力a/ Z/oW De/e朋e, J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 30:S2 (2000)。另外，已經(jīng)證明腸微生物群誘發(fā)成人局部和全身水平的特 異寸生免疫應(yīng)答。Isolauri,E.,等，/Vo6/o"c&' i^fec" ow /附/wwwz'(y' Am. J. Clin. Nutr. 73:444S-50S (2001 )。
眾所周知嬰兒內(nèi)腸微生物群的發(fā)育遠(yuǎn)不如成人。當(dāng)成年人的 微生物群包括幾乎500種的多于1013個的微生物(一些是有害的和一些
是有益的)時，嬰兒的微生物群在絕對數(shù)目和種類多樣性上均只有那些微 生物的一部分。嬰兒出生時具有無菌的腸，但是可從其初始環(huán)境產(chǎn)道和 他們攝食之中獲得腸內(nèi)菌叢。因?yàn)樵谛律鷥荷脑缙谥心c微生物群總 體是非常不穩(wěn)定的，對于嬰兒腸道常常難于維持有害細(xì)菌和有益細(xì)菌之 間的巧妙平衡，因而減少免疫系統(tǒng)的正常功能的能力。
對于配方喂養(yǎng)嬰兒，維持這種平衡是尤其困難的，因?yàn)榕?方喂養(yǎng)和母乳喂養(yǎng)嬰兒之間的腸道細(xì)菌種類是不同的。母乳喂養(yǎng)嬰兒的糞便含有大量的雙岐桿菌(A/z^^acfehwm),及作為普通貢獻(xiàn)者的較少量 的鏈^求菌(5V"e/7/ococc"力和乳酸菌(丄""W""〃z^)。 不同地，酉己方口畏養(yǎng)嬰 兒的微生物群是更多變化的，含有雙岐桿菌和類桿菌C^/c^wJe力以及 更多的致病種類的葡萄5求菌(5V"尸/2y/ococc船)、大腸桿菌(Esr/^〃c/2/a "/0、和梭菌(C/oWn^")。母乳喂養(yǎng)和配方喂養(yǎng)嬰兒糞便中的雙岐桿菌 的種類多樣性也是不相同的。已經(jīng)提出多種因素作為母乳喂養(yǎng)和配方喂 養(yǎng)嬰兒糞便菌叢不同的理由，包括人乳中更低含量的和不同組分的蛋白 質(zhì)、人乳中更低的磷含量、人乳中大量多樣的低聚糖、和母乳中大量的 免疫功能調(diào)的體液和細(xì)胞介質(zhì)。Agostom,等，尸ra&o"c 5w/e〃a z"朋淑""ow， J. Pedmtr. Gastro. Nutr. 38:365-374 (Apr. 2004)。
因?yàn)榕浞轿桂B(yǎng)嬰兒微生物群是如此不穩(wěn)定并且腸微生物群大量參與腸免疫的興奮，配方喂養(yǎng)嬰兒更可能發(fā)展有炎性病。許多影 響嬰兒的主要病(包括慢性肺病、腦室周圍白質(zhì)軟化、新生兒腦膜炎、新 生兒肝炎、膿毒癥、和壞死性小腸結(jié)腸炎)，其本性是炎性的。依賴于特 定的疾病，伴隨的炎癥可以出現(xiàn)在具體的器官，諸如肺、腦、肝或腸， 或者這種炎癥本性上可以確實(shí)為全身性的。
例如，慢性肺病引起肺內(nèi)組織發(fā)炎，而新生兒腦膜炎累及 腦和脊髓的內(nèi)層發(fā)炎。腦室周圍白質(zhì)軟化是由炎癥損害正發(fā)育的腦中室 周區(qū)域所引起的。壞死性小腸結(jié)腸炎引起腸內(nèi)炎癥，這可導(dǎo)致腸部分或 全部破壞；和新生兒肝炎涉及嬰兒早期發(fā)生的肝臟炎癥。膿毒癥也稱為 全身炎癥反應(yīng)綜合征，為產(chǎn)生毒素的細(xì)菌對血流暴發(fā)性感染 (overwheming infection)所引起的嚴(yán)重疾病，其中血流中存在的病菌i秀發(fā) 遍及全身的炎性反應(yīng)。
早產(chǎn)兒和危急病的嬰兒在發(fā)展腸免疫和預(yù)防全身性炎癥
方面也受到嚴(yán)重的挑戰(zhàn)。早產(chǎn)兒和危急病的嬰兒常常被立刻置于無菌保 溫箱中，在那里他們保持不接觸對他們健康有益的細(xì)菌群體，而足月兒 會正常接觸到這些細(xì)菌群體的。這可能會延遲或損害自然的定居過程。 這些嬰兒也常常用廣譜抗菌素治療，而廣語抗菌素殺死了試圖在嬰兒腸 道定居的共棲細(xì)菌。此外，這些嬰兒也常常依靠嬰兒配方喂養(yǎng)，而不是 母乳喂養(yǎng)。每個這些因素都可以使嬰兒腸微生物群不合適地發(fā)育，從而 引起或加速危及生命的全身性炎癥。
—種促進(jìn)配方喂養(yǎng)嬰兒中有益微生物腸定居的方法為給 予益生菌(probiotic)細(xì)菌。益生菌細(xì)菌為活的微生物，它對宿主的健康產(chǎn) 生有益作用。乳酸菌屬(Lactobacillus spp.)和雙岐詐干菌屬(Bifidobacterium spp.)是健康腸的正常棲居者，也是益生菌的常見種類。[OOOI5] 不幸地，對嬰兒補(bǔ)充益生菌的臨床效果很少有公開的研 究。Agostoni, C.,等，7VoZ /o"c i ac/e〃'" z力Z)z'efe"c /Vo(iwc^"/or //7y^"^sv j Cowwew/^ry Z/2e j5"5"尸G7/z47V CommWfee ow 7Vwfrz'"0w, J. Pediatr. Gastro. Nutr. 38:365-374 (2004)。甚至更少知道益生菌在嬰兒內(nèi)調(diào)節(jié)腸內(nèi)炎癥和 改變對其它器官傳播炎性反應(yīng)的能力。
關(guān)于益生菌對嬰兒作用的研究結(jié)果是有爭論的。例如， 1994年的研究結(jié)論為與安慰劑相比，給予添加乳雙岐桿菌 z/油6a"e〃.應(yīng)/ac"力和嗜熱鏈球菌(5Vre/^ococcm /7ze簡o/ /z/7w力的標(biāo)準(zhǔn) 嬰兒配方減少了醫(yī)院內(nèi)腹瀉的流行。Saavedra,J.,等，F(xiàn)ee力"gZ/o，'to/ /or /Vevew"'(9/7 o/ Z)/"/r/zea朋J 5Tzeii(iz'"g o/ AofaWrws, Lancet 344:1049-49 (1994)。相反地，然而1999年的研究報道單獨(dú)添加雙岐桿 菌或聯(lián)合添加雙岐桿菌與嗜熱鏈球菌的嬰兒配方對腹瀉發(fā)作沒有保護(hù) ^乍用。Phuapradit,P.,等，丑et/wc"ow o/丑o/vtw';-u51 z' CTn'Airewi ecem力g i^/z.(io/)a"e/7."-Sw，/ewew/e(i Fo簡w/", J. Med. Assoc. Thai. 82:S43-48 (1999)。
Versalovic等的美國專利申請?zhí)?0040208863涉及一種化 合物，其來自乳酸細(xì)菌的分泌并具有抗炎活性。此申請描述鼠李糖乳桿 菌(LACTOBACILLUS RHAMNOSUS GG)(LGG)抑制促炎細(xì)胞因子產(chǎn)生 的用途。然而，此參考文獻(xiàn)只關(guān)注于成年模型，并沒有公開或建議該發(fā) 明會有益于嬰兒。正如上述解釋，嬰兒的腸和免疫系統(tǒng)極不相同于成人 的腸和免疫系統(tǒng)。因?yàn)閶雰汉统扇四c之間的細(xì)菌群體和種類變化如此巨 大，以及這兩種人群免疫系統(tǒng)成熟度的巨大差別，因此不能假定它在嬰 兒內(nèi)會達(dá)到相同的結(jié)果。
Vidal等的美國專利申請?zhí)?0040147010涉及減少或預(yù)防 炎癥過程的方法，此炎癥過程與細(xì)菌介導(dǎo)的人胃腸道、骨、皮膚、眼睛、 耳、肺和口腔中的疾病有關(guān)。該方法包括給予來自乳酸細(xì)菌的有效量的 脂磷壁酸(LTA)和/或給予可產(chǎn)生LTA的乳酸細(xì)菌。此申請也指明了這些 組分可改變新生兒期內(nèi)細(xì)菌的定居和傳染。
Vidal申請的菌抹為嗜酸乳桿菌(Z^"o^"〃m "cWo/ /zz7m力 和約lt遜氏乳桿菌(丄""o6acz〃M ，/zmom力。Vidal沒有指明LGG的用 途。事實(shí)上,Vidal公開的是"來自革蘭陽性菌的LTA從一個菌抹到另一 個菌林中顯示出極大的差異。"Vidal申請中的p.
。因此,僅僅因 為在成人結(jié)腸細(xì)胞抹中所測定的嗜酸乳酸桿菌和約翰遜氏乳桿菌產(chǎn)生 抗炎作用，不能假定所有的乳酸菌種會有這種作用。
Vidal還指出來自某些菌種的LTA對免疫細(xì)胞具有調(diào)解 促炎作用，而不是抗炎作用。Vidal申請中的p.
。因?yàn)長TA是促 炎的還是抗炎取決于細(xì)菌的種類，因此Vidal的公開內(nèi)容限于具體描述 的種類。正如Vidal在發(fā)表文章中所認(rèn)可的，"[不同的菌種的]LTA的生 物活性無法予貞知"。Vidal, 等，丄—化/c/zoic ^4c7'(is'/夫cw 丄a"o6w'〃wsZ^》o/ o/>w<2cc/2(3n.(ie "/7(i Gn2w-A^ga〃've B"cfen'a, Infect. Immun. 70:2057-2064 (2002)。
根據(jù)上述參考文獻(xiàn),LGG對嬰兒免疫系統(tǒng)的作用直到此時 還沒有公開。嬰兒的腸和免疫系統(tǒng)與成人的腸和免疫系統(tǒng)相比，存在巨 大和根本的差別。因此，集中在成年受試者或成人細(xì)胞林的研究不能用 于評價LGG對嬰兒的作用。先前還沒有顯示LGG對配方喂養(yǎng)嬰兒具有 全身性免疫作用。此外，也沒有顯示在配方喂養(yǎng)嬰兒中補(bǔ)充LGG將可 預(yù)防或減少全身性炎癥，以達(dá)到母乳喂養(yǎng)嬰兒的類似水平。因此，提供 減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒中全身性炎癥的方法應(yīng)當(dāng)是有益的，該方法包 括給予LGG。
發(fā)明概述
簡言之,因此，本發(fā)明涉及LGG在制備用于治療、預(yù)防或 減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的藥物中的新用途。
本發(fā)明也涉及LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒 的全身性炎癥以達(dá)到母乳喂養(yǎng)嬰兒相似水平的藥物中的新用途。
此外，本發(fā)明涉及LGG在制備用于減少或預(yù)防炎癥的藥 物中的用途，該炎癥位于選自配方喂養(yǎng)嬰兒的胃腸道、肝、血漿、肺和 腦之中的一種或多種器官。
在另 一個方面,本發(fā)明涉及LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒腸粘膜物理損傷的藥物中的用途。
本發(fā)明也涉及LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒 中的一種或多種促炎細(xì)胞因子或趨化因子全身釋放的藥物中的用途。
本發(fā)明還涉及LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒 中的髓過氧化物酶myloperoxidase (MPO)全身釋放的藥物中的用途。
在本發(fā)明所發(fā)現(xiàn)并取得的若干優(yōu)點(diǎn)之中，它可減少或預(yù)防 配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥。進(jìn)一步地，本發(fā)明減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰 兒的全身性炎癥，達(dá)到母乳喂養(yǎng)嬰兒類似水平。本發(fā)明可以減少胃腸 道、肝、血漿、肺和腦中的炎癥。本發(fā)明再一個優(yōu)點(diǎn)是預(yù)防或減少配方 喂養(yǎng)嬰兒腸粘膜的物理損傷。另外地，本發(fā)明減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒 中的多種促炎細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，包括肺瘤壞死因子-oc (TNF-cx)、白細(xì)胞介素-1 |3(IL-1 (3)、IL-6、IL-18和生長相關(guān)性癌基因(GRO/KC) 的水平。因?yàn)楸景l(fā)明可用于改善嬰兒的炎性疾病，它也可以預(yù)防有害的 感染或疾病的發(fā)病。附圖簡述
至于更完整地理解本發(fā)明，可以參照與附圖結(jié)合的以下說明。


圖1說明LGG對幼大鼠生長的影響，以在研究時程的體 重表示。
圖2說明LGG對幼大鼠的腸形態(tài)學(xué)的影響，以在炎癥條 件下給予LGG或不給LGG時腸組織的顯微照片描繪。
圖3中使用酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)，說明LGG對腸 (圖A)、肝(圖B)、血漿(圖C)和肺(圖D)的細(xì)胞因子誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞 趨化因子-1 (CINC-1 )肽產(chǎn)物的影響。
圖4中使用ELISA，說明LGG對血漿(圖A)和肺(圖B) 的TNF-a產(chǎn)物的影響。
圖5說明LGG對末端小腸(圖A)和肺(圖B)的腸MPO活 性的影響。
圖6說明LGG對細(xì)胞因子豐度的影響。圖A展示肺中細(xì) 胞因子水平,圖B展示肝中細(xì)胞因子水平，和圖C展示血漿中細(xì)月包因子 水平。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述
可詳細(xì)地參照以下提出的本發(fā)明的實(shí)施方案、 一個或多個際上，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白在沒有脫離本發(fā)明范圍或精神下可對本 發(fā)明進(jìn)行多種修飾和變化。例如，作為說明或描述一個實(shí)施方案的一部 分的特征可用于另一個實(shí)施方案，得到又一個實(shí)施方案。
因此，本發(fā)明旨在涵蓋如所附權(quán)利要求及其等同物范圍的 這些修飾和變化。本發(fā)明的其它目的、特征和方面公開于或顯而易見于 以下詳細(xì)的說明中。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解本討論只是示例性實(shí) 施方案的說明，而不用于限制本發(fā)明的廣泛的方面。縮寫
如本文所用的，使用以下縮寫LGG，鼠李糖乳桿菌； LCPUFA,長鏈多不飽和脂肪酸；LPS,脂多糖；IL,白細(xì)胞介素;TNF,腫瘤 壞死因子;CINC-l,細(xì)胞因子誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞趨化因子-l;GRO/KC,生 長相關(guān)性癌基因；ELISA,酶聯(lián)免疫吸附測定;RT-PCR,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈 反應(yīng);ANOVA,方差分析；SD,標(biāo)準(zhǔn)差;PAF,血小板活化因子;RMS,鼠乳代 替物；MPO,髓過氧化物酶myl叩erioxidase;TLRs,Toll樣受體;EPA, 二十 ^友五烯酸；DHA,二十二》友六烯酸；ARA，花生四烯酸。定義
術(shù)語"益生菌"是指對宿主的健康產(chǎn)生有益作用的微生物。
術(shù)語"益生素(prebiotic)"是指刺激益生菌生長和/或活性 的不能消化的食物成分。
本文所用的術(shù)語"治療"是指緩解、改善或治愈疾病、病
癥、或疾病或病癥的癥一犬。
術(shù)語"減少"是指范圍、量或程度上的減小
術(shù)語"預(yù)防"是指通過一些行為中止或阻礙疾病、病癥、 或疾病或病癥的癥^)犬。
本文所用的術(shù)語"全身性"是指涉及或影響全身。
術(shù)語"治療有效量"是指導(dǎo)致疾病、病癥、或疾病或病癥 的癥狀改善或治愈的量。
術(shù)語"早產(chǎn)，，是指在妊娠滿37周以前出生的嬰兒。
術(shù)語"嬰兒，，是指小于大約l歲的人。
本文所用的術(shù)語"嬰兒配方，，是指作為人乳代替品滿足嬰 兒營養(yǎng)需求的組合物。在美國，21 C.F. R. Sections 100、 106和107中所 述的聯(lián)邦法規(guī)規(guī)定了嬰兒配方的內(nèi)容。這些法規(guī)限定常量營養(yǎng)素、維生 素、礦物質(zhì)和其它成分的水平，以盡力模擬人母乳的營養(yǎng)和其它性質(zhì)。發(fā)明
根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了 LGG在制備用于治療或預(yù)防配 方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的藥物中的新用途。
LGG為從健康人腸內(nèi)菌叢中分離出來的益生菌菌4朱。它 公開于Gorbach等的美國專利第5,032,399號中，在此將其全文引入作 為參考。LGG對大多數(shù)抗生素具有抵抗力，在酸和膽汁存在下是穩(wěn)定 的，并且渴望與人腸道粘膜細(xì)胞接觸。在大多數(shù)個體中可存活1-3天， 在30%的受試者中可存活高達(dá)7天。除其定居能力之外，LGG也有益地 影響粘膜的免疫應(yīng)答。LGG存放在保藏單位美國典型微生物菌種保藏中 心(American Type Culture Collection),登錄號為ATCC 53103。
在本發(fā)明方法中，LGG對嬰兒的治療有效量可相應(yīng)為大約 lxl04~ lxl0^cfu/L/kg/天。在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包括給嬰兒施 用大約lxl06-lxl0、fu/L/kg/天的LGG。在又一個實(shí)施方案中，本發(fā)明 包括主合嬰兒施用大約lxl08 cfu/L/kg/天的LGG。
本發(fā)明方法中給予LGG的形式不是關(guān)鍵性的，只要給予 了治療有效量。最方便地，將LGG添加到可隨后喂給嬰兒的嬰兒配方 中。
在另一個實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的嬰兒配方為全營養(yǎng) 的，并且含有適當(dāng)類型和量的脂質(zhì)、碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素和礦
物質(zhì)。脂質(zhì)或脂肪的量一般可為大約3至大約7 g/100千卡。蛋白質(zhì)的量一般可為大約1至大約5g/100千卡。碳水化合物的量一般可為大約8 至大約12g/100千卡。蛋白質(zhì)源可為本領(lǐng)域應(yīng)用的任何類型，如脫脂乳、 乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、水解蛋白、氨基酸等。碳水化合物源可 為本領(lǐng)域應(yīng)用的任何類型，如乳糖、葡萄糖、玉米糖漿固體、麥芽糖糊 精、蔗糖、淀粉、稻米糖漿固體等。脂質(zhì)源可為本領(lǐng)域應(yīng)用的任何類型， 如植物油諸如棕櫚油、大豆油、棕櫚油精(palmolem)、椰子油、中《連甘 油三酯油、高油酸葵花子油、高油酸紅花油等。
適宜地，可應(yīng)用商業(yè)上可得的嬰兒配方。例^。，可向 Enfamil 、 Enfamil Premature Formula 、含鐵的Enfamil 、 Lactofree⑧、 Nutramigen 、 Pregestimil 、 和 ProSobee⑧(得自 Mead Johnson & Company, Evansville, IN, U.S.A.)中添加適當(dāng)水平的LGG,并用于本發(fā)明 方法的實(shí)施中。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，LGG可以與一種或多種另 外的益生菌組合，用于治療或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥。在此實(shí) 施方案中，本領(lǐng)域已知的任何益生菌都是可接受的。在具體的實(shí)施方案 中，益生菌選自乳酸菌和雙岐桿菌。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，LGG可以與一種或多種 益生素組合，用于治療或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥。在此實(shí)施方 案中，本領(lǐng)域已知的任何益生素都是可接受的。本發(fā)明益生素可包括乳 果糖、低聚半乳糖、低聚果糖、異麥芽低聚糖(isomalto-oligosaccharide)、 大豆j氐l^f唐、享L,、辟唐(lactosucrose)、 4氐^i木jf唐(xylo-oligosacchairde)、 禾口 龍膽低聚糖(gentio-oligosaccharides)。
在本發(fā)明的又一個實(shí)施方案中，嬰兒配方可含有其它的活 性劑諸如長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)。適用的LCPUFA包括但不限 于cc -亞油酸、y -亞油酸、亞油酸、亞麻酸、二十》友五烯酸 (EPA)eicosapentanoic acid、 ARA和DHA。在一個實(shí)施方案中，LGG與 DHA聯(lián)合給予。在另一個實(shí)施方案中，LGG與ARA聯(lián)合給予。在又一 個實(shí)施方案中，LGG與DHA和ARA—起組合給予?？梢韵蛏虡I(yè)上可得 的含有DHA、 ARA、或它們組合的嬰兒配方中添加LGG,并用于本發(fā) 明。例如Enfamil LIPIL⑧(其含有有效水平的DHA和ARA)為商業(yè)上 可得的，它可以被添加LGG，并用于本發(fā)明。
在一個實(shí)施方案中，DHA和ARA均用于與LGG的《且合， 以治療嬰兒的全身性炎癥。在此實(shí)施方案中，ARA:DHA的重量比例一 般為大約1:3至大約9:1。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，這種比例為大約 1:2至大約4:1。在又一個實(shí)施方案中，此比例為大約2:3至大約2:1 。在 一個具體實(shí)施方案中，此比例為大約2:1。
本發(fā)明實(shí)施方案中DHA的有效量一般為每天每千克體重 大約3 mg至每天每千克體重大約150 mg。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案 中，此量為每天每千克體重大約6mg至每天每千克體重大約100 mg。 在另一個實(shí)施方案中，此量為每天每千克體重大約10mg至每天每千克 體重大約60 mg。在又一個實(shí)施方案中，此量為每天每千克體重大約 15mg至每天每千克體重大約30mg。
本發(fā)明實(shí)施方案中ARA的有效量一般為每天每千克體重 大約5 mg至每天每千克體重大約150 mg。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案 中，此量為每天每千克體重大約10 mg至每天每千克體重大約120 mg。 在另一個實(shí)施方案中，此量為每天每千克體重大約15mg至每天每千克 體重大約90mg。在又一個實(shí)施方案中，此量為每天每千克體重大約20 mg至每天每千克體重大約60 mg。
用于本發(fā)明的嬰兒配方中DHA的量一般為大約5 mg/100 千卡至大約80mg/100千卡。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，此量為大約 10 mg/100千卡至大約50mg/100千卡；在另一個實(shí)施方案中，為大約15 mg/100千卡至大約20mg/100千卡。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，DHA 的量一般為大約17mg/100千卡。
用于本發(fā)明的嬰兒配方中ARA的量一般為大約10 mg/100千卡至大約100mg/100千卡。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，ARA 的量為大約15 mg/100千卡至大約70mg/100千卡。在另一個實(shí)施方案 中，ARA的量為大約20 mg/100千卡至大約40mg/100千卡。在本發(fā)明 的具體實(shí)施方案中，ARA的量為大約34 mg/100千卡。
應(yīng)用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可制備本發(fā)明所用的添加含 有DHA和ARA油的嬰兒配方。例如，可將它們加入到配方中，以等量 代替此配方中通常存在的油(例如高油酸葵花子油)。作為另一個實(shí)施 例，可將含有DHA和ARA油加入到配方中，以等量代替不含DHA和 ARA的該配方通常存在的其它所有脂肪混和物。
DHA和ARA源可為本領(lǐng)域已知的任何來源。在本發(fā)明的 一個實(shí)施方案中，DHA和ARA源為美國專利號5,374,567、 5,550,156、 和5,397,591中所教導(dǎo)的單細(xì)胞油，在此將它們的^^開內(nèi)容全部引入作 為參考。然而，本發(fā)明不僅僅限于這樣的油類。DHA和ARA可為天然的或精制的形式。
在一個實(shí)施方案中，此源為基本上不含EPA的。例如， 在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，嬰兒配方含有小于大約16mgEPA/100千 卡；在另一個實(shí)施方案中，小于大約lOmgEPA/100千卡；在又一個實(shí) 施方案中，小于大約5mgEPA/100千卡。 一個具體實(shí)施方案基本上不含 EPA。另一個實(shí)施方案不含EPA,即使痕量的EPA在此配方也不存在。
作為嬰兒配方的替代性選擇，可以以非配方喂養(yǎng)整體的補(bǔ) 充物給予LGG。例如可以以丸、片、膠嚢、嚢片(caplet)、粉、液體或凝 膠形式攝入LGG。在本方法的一個實(shí)施方案中，攝入LGG補(bǔ)充物可以 與其它營養(yǎng)補(bǔ)充物(例如維生素)組合，或與LCPUFA補(bǔ)充物(例如DHA 或ARA)組合。
在另一個實(shí)施方案中，在糖、脂肪、或多糖基質(zhì)中將LGG 包入嚢粒中，以進(jìn)一步增加細(xì)菌存活的機(jī)率。本發(fā)明的組分可以以選自 以下的適合嬰兒的形式提供第二階段配方奶(follow-on formula),飲 料、奶、酸奶酪、果汁、水果營養(yǎng)型飲料、咀嚼片、小甜餅(cookie)、餅 干(cracker)、或它們的纟且合。
在本發(fā)明的應(yīng)用中，嬰兒為配方喂養(yǎng)的。在一個實(shí)施方案 中，此嬰兒為從出生起開始配方喂養(yǎng)的。在另一個實(shí)施方案中，此嬰兒 為從出生起母乳喂養(yǎng)至其年齡小于一歲，此后為配方喂養(yǎng)并在此時開始 補(bǔ)充LGG。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括治療或預(yù)防配方 喂養(yǎng)早產(chǎn)兒的全身性炎癥。在這種應(yīng)用中，可以以嬰兒配方的形式或任 何其它適用的形式給早產(chǎn)兒施用LGG。
在本發(fā)明的應(yīng)用中，LGG減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒中的 一種或多種促炎細(xì)胞因子或趨化因子的全身釋放。本文所用的"促炎" 細(xì)胞因子或趨化因子包括本領(lǐng)域已知的涉及上調(diào)炎性反應(yīng)的那些。實(shí)例 包4舌i旦不限于TNF-a 、 IL-1 (3 、 IL-6、 IL-18、和GRO/KC。
趨化因子為一類細(xì)胞因子，它能使白細(xì)胞從血中移行至炎
癥部位的組織。當(dāng)產(chǎn)生過量時，趨化因子可導(dǎo)致健康組織的損傷。生長相關(guān)性癌基因(GRO/KC)為補(bǔ)充免疫細(xì)胞至炎癥部位的趨化因子。大鼠 細(xì)胞因子誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞趨化因子(CINC-1)為人類相似物，它在機(jī)能 上與白細(xì)胞介素-8家族有關(guān)。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，LGG減少或預(yù)防配方喂 養(yǎng)嬰兒中的MPO的全身釋放。MPO為含鐵蛋白質(zhì)，位于嗜中性白細(xì)胞 的嗜苯胺藍(lán)顆粒(azurophilic granules)和位于單核細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。它利 用過氧化氫酶將氯化物轉(zhuǎn)化為次氯酸。所產(chǎn)生的次氯酸然后與細(xì)菌反應(yīng) 并破壞細(xì)菌。炎癥期間，MPO水平達(dá)到高峰，因?yàn)樗噲D破壞病原體。 因此，該酶作為炎癥的標(biāo)志是非常有用的。Frode, T. & Medeiros, Y.丄ea&age /"t/wcet/Carmgee腿w z" /7ze A/ot/e/ o/尸/ewr一, MI 10:4,223-227 (2001 )。
如同實(shí)施例中所示，LGG顯示出將配方喂養(yǎng)嬰兒的全身 性炎癥減少到母乳喂養(yǎng)嬰兒的類似水平。當(dāng)它們飲食添加LGG時，配 方喂養(yǎng)大鼠嬰兒腸粘膜的物理損傷也被減少到母乳喂養(yǎng)大鼠嬰兒的類 似水平。另外，當(dāng)補(bǔ)充LGG時，配方喂養(yǎng)大鼠嬰兒的CINC-1、 MPO、 和多種細(xì)胞因子水平也減少到母乳喂養(yǎng)大鼠嬰兒的類似水平。
以下實(shí)施例描述了本發(fā)明的多個實(shí)施方案。在考慮本文所 公開的本發(fā)明的說明書或?qū)嵺`后，本權(quán)利要求范圍內(nèi)的其它實(shí)施方案對 本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。打算將說明書以及實(shí)施例只考慮為 示例性的，而本發(fā)明范圍和精神在隨實(shí)施例后的權(quán)利要求中指出。在實(shí) 施例中，除非另外說明，所有的百分?jǐn)?shù)是基于重量給出的。實(shí)施例1
本實(shí)施例描述了為證實(shí)LGG對配方喂養(yǎng)新生幼大鼠影響 所必需的材料和方法。在兩個分開的實(shí)驗(yàn)中，將十個Spmgue-Dawley (Taconic, Germantown, NY)嬰兒大鼠隨機(jī)分配為胃造口術(shù)喂養(yǎng)的每組五 個大鼠的兩組。使用大鼠嬰兒"杯中幼小動物(pup-m-the-cup)"模型， 胃造口術(shù)喂養(yǎng)開始于幼大鼠生命的第七天。胃造口術(shù)飼管由插入幼小動 物胃中的14-cm節(jié)長的聚乙烯管構(gòu)成的。當(dāng)在缺失母乳喂養(yǎng)下利用營養(yǎng) 組分為重要時，該模型是營養(yǎng)開發(fā)研究中通常應(yīng)用的模型。在異氟烷麻 醉下進(jìn)行胃造口術(shù)安置。將定時器控制的注射器泵連接到飼管，并設(shè)定
每小時的前20分鐘以體重依賴的流速喂養(yǎng)大鼠。五個由母親養(yǎng)育的相 同年齡的大鼠用作對照控制。
在兩天的適應(yīng)環(huán)境期間，對胃造口術(shù)喂養(yǎng)的幼大鼠喂給大 鼠奶代替物(RMS)。 RMS的蛋白質(zhì)成分為30~40 g/kg/天，這是正常生 長所必需的并與母乳類似。RMS喂養(yǎng)的一組中也纟合予lx108 cfu/L/kg/天 的LGG補(bǔ)充物。另一組只喂給RMS，而沒有LGG補(bǔ)充物。所有胃造口 術(shù)喂養(yǎng)的組接受同樣量的脂肪和碳水化合物。
通過渦旋將來自大腸桿菌 0127:B8的脂多糖 (LPS)(LPS;Sigma, St. Louis, MO)以2 mg/ml的濃度溶解在水中。在人工 喂養(yǎng)開始后經(jīng)開始兩天的胃造口術(shù)管對胃造口術(shù)喂養(yǎng)大鼠給予0.25 ~ 0.5 mg/kg/天的LPS。對幼小動物給予6天LPS補(bǔ)充物。這種劑量是在初 步研究中確定的，可導(dǎo)致偶然的顫抖、豎毛、和弱的體重增加，但是與 6天期內(nèi)顯著增加的死亡率無關(guān)。
在6天處理期結(jié)束后，對幼大鼠用超劑量的戊巴比妥鈉處 死。將小腸移出并分成三部分:回腸、空腸、和十二指腸,然后在-80。C下 貯存以用于酶測定和ELISA，或者固定于10%中性緩沖的福爾馬林中以 用于腸形態(tài)學(xué)。將肺、肝和血漿在-80。C下貯存以用于酶測定和ELISA。
應(yīng)用Sigmastat統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS, Chicago, IL)分析體重、絨 毛測量結(jié)果、和酶活性、MPO、 CINC-1的ELISA、以及RT-PCR的TNF畫 oc和密度測定的結(jié)果。以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(SD)報告所有數(shù)據(jù)。應(yīng)用組間 的單因素方差分析法(AN O V A)，確定所有治療組之間是否存在顯著差異實(shí)施例2
本實(shí)施例說明LGG對胃造口術(shù)喂養(yǎng)后的幼小動物生長的 影響。胃造口術(shù)喂養(yǎng)后每日將幼大鼠稱量并且與母親喂養(yǎng)的參照動物對 比。圖l表明母親喂養(yǎng)的動物比LPS-處理的胃造口術(shù)喂養(yǎng)的幼小動物生 長更快。線圖代表從研究開始幼小動物所表現(xiàn)增加的體重對時間的增加 率。對胃造口術(shù)喂養(yǎng)LPS處理的幼小動物提供LGG,沒有改善體重增 加。實(shí)施例3
本實(shí)施例說明LGG對幼大鼠的腸形態(tài)學(xué)的影響。顯微鏡 檢查研究集中在回腸，因?yàn)檫@是嬰兒對一些病理學(xué)最高敏感的區(qū)域(例如,
壞死性小腸結(jié)腸炎和非壞死性小腸結(jié)腸炎相關(guān)的穿孔)。將福爾馬林固定的回腸樣本埋入石臘中；應(yīng)用2030 Rekhert-Jung石臘切片機(jī)切6- ju m 切片。然后將切片用常規(guī)的蘇木精和伊紅(H&E)染料染色。圖2展示該 染色的結(jié)果。
LPS處理的幼大鼠的回腸切片(圖2G-2I)與母親養(yǎng)育的對 照(圖2A-2C)相比，在絨毛狀的上皮細(xì)胞上顯示出顯著的組織變形，并 具有增加的透明細(xì)胞質(zhì)(clearing of the cytoplasm)。圖2G-2F表明這些切 片也具有由于淋巴漿細(xì)胞樣浸潤的粘膜固有層擴(kuò)展、肌粘膜變薄、和隱 窩再生的變化(包括增加隱窩數(shù)目和分支和增加有絲分裂活性)的特征。 這些特征在母親養(yǎng)育的對照動物中不存在,和在LPS加LGG處理的組中 減弱(圖2D-2F)。 LPS/LGG組的腸粘膜物理損傷減少到母奶喂養(yǎng)幼大鼠 的相似水平。在后者的腸中，絨毛中化生性改變居于對照組和LPS組的 組織中所見的之間。值得注意地，這似乎如語帶樣(spectrum)出現(xiàn)，如同 絨毛中所見的組織變形的說明，其接近LPS-處理組的情況。實(shí)施例4
本實(shí)施例說明LGG對CINC-1的影響。對于大鼠生長相關(guān) '性癌基因/CINC-l, 通過TiterZyme Enzyme lmmunometric Assay i式齊'J盒 測定小腸和血漿CINC畫1水平(Assay Designs, Ann Arbor, Ml)。在450 nm 處測定吸收度，然后應(yīng)用線性標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的方程式計(jì)算濃度。
為了進(jìn)一步研究飲食對CINC-1肽的影響，通過ELISA在 小腸、肝、肺和血漿中評價CINC-1的產(chǎn)物。在初始實(shí)驗(yàn)中,給幼大鼠施 用LPS使得CINC-1超過胃造口術(shù)喂養(yǎng)的非LPS處理的幼小動物的近似 4倍的提高(數(shù)據(jù)未顯示)。如圖3A所示，當(dāng)將胃造口術(shù)喂養(yǎng)LPS處理的 幼小動物與LPS/LGG處理的和母親喂養(yǎng)大鼠相比時，幼小動物腸的 CINC-1水平在這3個組中沒有顯著差別，但在用LPS并沒用LGG處 理的組中提示有向更高發(fā)展的輕微趨勢。然而肝(圖3B)和血漿(圖3C) 的CINC-1濃度,在沒有接收LGG的LPS處理組中幾乎高出2倍，但是 它在用LGG組中顯著地減弱。肺(圖3D)此處用于確定益生菌的作用是 否能延伸到遠(yuǎn)端器官，當(dāng)與母親喂養(yǎng)對照相比時，也顯示出LPS處理的 組中CINC-1的顯著提高(近似4倍)，但是它在用LGG組中顯著地減弱。 在肝和血漿中，補(bǔ)充LGG將CINC-1水平減少至母奶喂養(yǎng)幼大鼠的非常 相似的水平。這些結(jié)果顯示LGG具有將配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥減
少到與母乳喂養(yǎng)嬰兒相似水平的能力。實(shí)施例5
本實(shí)施例說明LGG對嬰兒大鼠的TNF-oc水平的影響。對 于TNF- oc ， 通過TiterZyme Enzyme lmmunometric Assay i式劑盒測定小 腸和血漿TNF- oc水平(Assay Designs, Ann Arbor, Ml)。在450 nm處測定
為了進(jìn)一步研究飲食對TNF-cc的影響，通過ELISA在血 漿和肺中評價TNF-a的產(chǎn)物。圖4中應(yīng)用ELISA,說明了 LGG對血漿(圖 4A)和肺(圖4B)TNF-oc產(chǎn)物的影響。圖4表明胃造口術(shù)喂養(yǎng)的LPS處理 幼小動物與母親養(yǎng)育幼小動物相比，其TNF-oc水平是顯著更高的，并 且LGG顯著減弱了 LPS引起的血漿和肺中的TNF-oc提高。實(shí)施例6
本實(shí)施例說明LGG對MPO水平的影響。MPO活性為中 性白細(xì)胞累積測量和組織損害的標(biāo)志，通過標(biāo)準(zhǔn)酶的操作測定MPO活 性。將腸樣品于0.01 MKH2P04緩沖液中水浴下勻漿。在4。C、 10,000 g 下離心20分鐘，通過超聲將片狀沉淀物再混懸于溴化十六烷基三曱銨 緩沖液(13.7 mM CTAB、 50mMKH2PO4、和50 mM醋酸，pH6.0)中。 保留上清液用于ELISA分析。將混懸液在10,000 g下再離心15分鐘。 然后將上清液在60。C水浴中將化2小時。通過四曱基聯(lián)苯胺的11202-依 賴性氧化作用，測量上清液的MPO濃度。在650 nm處測定吸收度，并 與線性標(biāo)準(zhǔn)曲線比專交。應(yīng)用BioRad Dc Protein Assay (BioRad)測定蛋白 質(zhì)。
圖5說明LGG對遠(yuǎn)端小腸(圖5A)和肺(圖5B)的MPO活 性的影響。胃造口術(shù)喂養(yǎng)的LPS處理幼小動物與母親養(yǎng)育幼小動物相 比，其MPO水平是顯著更高的，并且LGG顯著減弱了 LPS引起的遠(yuǎn)端 小腸和肺中的MPO提高。在LPS/LGG處理的大鼠中減少后的MPO水 平與母親喂養(yǎng)大鼠中的MPO水平非常相似，表明LGG將配方喂養(yǎng)嬰兒 的全身性炎癥減少到與母乳喂養(yǎng)嬰兒水平的相似水平。實(shí)施例7
本實(shí)施例說明LGG對多種細(xì)胞因子水平的影響。多因子 芯片試劑盒(Multiplex bead kits)購自LINCO Research, Inc. (St.Charles, MO,USA)。通過以下試劑盒分析細(xì)胞因子/趨化因子，這些試劑盒包括: 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)、干擾素-入(IFN-人)、白細(xì)胞介 素-1 oc(IL畫l cc)、 IL-1 oc 、 IL-2、 IL國4、 IL-5、 IL-6、 IL- 10、 IL-12p70、 IL-18、 單核細(xì)胞趨化蛋白-l(MCP-l)、 GRO/KC (大鼠CINC-1)、和肺瘤壞死因 子-oc(TNF-a)。根據(jù)制造商的說明書進(jìn)行多種測定。通過應(yīng)用制造商提 供的參照濃度制備每種細(xì)胞因子/趨化因子的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過MasterPlex Quantitation Software (MiraiBio, Inc., Alameda, CA, USA)分才斤原始凄t才居(平均熒光強(qiáng)度)，獲得濃度值。
為了進(jìn)一步研究LPS和LGG對細(xì)胞因子的影響，檢測了 來自肺、肝、血漿和末端小腸的14種細(xì)胞因子/趨化因子。它們包括粒 細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)、干擾素-人(IFN-A)、白細(xì)胞介素 -loc(IL-lcc)、 IL- 1 P 、 IL-2、 IL-4、 IL -5、 IL-6、 IL- 10、 IL-12p70、 IL-18、單核細(xì)胞趨化蛋白-l(MCP-l)、 GRO/KC (大鼠CINC-1)、和肺瘤壞 死因子-cc(TNF-cx)。[OOOW] 圖6A說明胃造口術(shù)喂養(yǎng)的LPS處理幼小動物與母親養(yǎng)育 幼小動物相比,其肺的IL-1 P 、 IL-6、 IL-18、 GRO/KC (大鼠CINC-1)、和 腫瘤壞死因子-a(TNF-a)是顯著更高的，并且LGG顯著減弱了 LPS引 起的IL-1 p 、 IL-6、 IL-IO、 IL-18、 GRO/KC (大鼠CINC-1)、和TNF-cx 的提高。圖6B展示胃造口術(shù)喂養(yǎng)的LPS處理幼小動物與母親養(yǎng)育幼小 動物相比,其肝的IL-1 P 、 IL-6、 IL隱18、和GRO/KC (大鼠CINC隱l)的水 平是顯著更高的，并且LGG顯著減弱了 LPS引起的這些細(xì)胞因子/趨化 因子的提高。圖6C也展示了接受LPS的動物血槳中細(xì)胞因子/趨化因子 的水平顯著增加。這種作用在接受LGG的動物中減弱。
這些結(jié)果表明給配方喂養(yǎng)嬰兒補(bǔ)充LGG可減少全身性炎 癥。進(jìn)一步地，這些結(jié)果也表明LGG減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥, 達(dá)到母乳喂養(yǎng)嬰兒的相似水平。這也在此處所述的LGG治療組和專用 母乳喂養(yǎng)組的對照結(jié)果中得到證明。在一些情況下，給予LGG導(dǎo)致特 定的炎性反應(yīng)，而這在LGG治療組和母乳喂養(yǎng)組之間沒有顯著的差別， 表明兩組為相似的炎性反應(yīng)。
本發(fā)明減少胃腸道、肝、血漿、肺、和腦中的炎癥，以及 預(yù)防或減少配方喂養(yǎng)嬰兒腸粘膜的物理損傷。因?yàn)楸景l(fā)明可用于改善嬰 兒炎性疾病，它也可以預(yù)防有害感染或疾病的發(fā)病。
本說明書中引用的所有參考文獻(xiàn)，包括但不限于所有的論
文、出版物、專利、專利申請、介紹、課本、報告、手稿、小冊、書、 因特網(wǎng)公開(postings)、期刊文章、雜志等，在此將它們的全文引入本說 明書中作為參考。本文對參考文獻(xiàn)的討論僅僅旨在概述它們作者的主 張，而不是對任何參考文獻(xiàn)構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)的認(rèn)可。申請人保留置疑所引 用參考文獻(xiàn)的準(zhǔn)確性和相關(guān)性的權(quán)利。[0009習(xí)在沒有脫離本發(fā)明精神和范圍下(其在所附權(quán)利要求中更具體地提出)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以實(shí)施對本發(fā)明的這些和其它的修 飾和變化。另外,應(yīng)當(dāng)理解不同實(shí)施方案的多個方面可以全部或部分;也互 換。此外，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解前述說明只是示例性的，而不 打算限制在所附權(quán)利要求中進(jìn)一步描述的本發(fā)明。因此所附權(quán)利要求的 精神和范圍不限于本文所包含的優(yōu)選形式的描述。
權(quán)利要求
1. LGG在制備用于治療、預(yù)防或減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥 的藥物中的用途。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中在嬰兒的胃腸道、肝、血漿、肺、 和/或腦中治療或預(yù)防全身性炎癥。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中藥物被摻入嬰兒配方中并由嬰兒 消費(fèi)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中藥物中LGG的量為大約lx104 lxl01Q cfu/L/kg/天。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中藥物中LGG的量為大約lx106 lx109 cfu/L/kg/天。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中藥物中LGG的量為大約lx108 cfu/L/kg/天。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中此藥物還包含至少一種其它的益生菌。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中此藥物還包含至少一種的益生素。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中嬰兒為早產(chǎn)兒。
10. LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥以達(dá)到 母乳喂養(yǎng)嬰兒類似水平的藥物中的用途。
11. LGG在制備用于減少或預(yù)防炎癥的藥物中的用途，該炎癥位于 選自配方喂養(yǎng)嬰兒的胃腸道、肝、血漿、肺和腦之中的一種或多種器官。
12. LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒腸粘膜物理損傷的藥 物中的用途。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中物理損傷包括透明細(xì)胞質(zhì)、由 于淋巴漿細(xì)胞樣浸潤的粘膜固有層擴(kuò)展、肌粘膜變薄、隱窩數(shù)目和分支 增加、和/或有絲分裂活性增加。
14. LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒中的一種或多種促炎 細(xì)胞因子或趨化因子全身釋放的藥物中的用途。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14的用途，其中促炎細(xì)胞因子或趨化因子包括 選自TNF-cc、 IL-1 |3 、 IL-6、 IL-18和GRO/KC中的一種或多種。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中在嬰兒的肺、肝、或血漿中減 少或預(yù)防TNF-oc、 IL-1 P 、 IL-6或IL-18的全身釋放。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中在嬰兒的腸、肝、血漿、或肺 中減少或預(yù)防GRO/KC的全身釋放。
18. LGG在制備用于減少或預(yù)防配方喂養(yǎng)嬰兒中的MPO全身釋放 的藥物中的用途。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18的用途，其中在嬰兒的腸或肺中減少或預(yù)防 MPO的全身釋放。
全文摘要
本發(fā)明涉及LGG在制備用于治療、預(yù)防或減少配方喂養(yǎng)嬰兒的全身性炎癥的藥物中的用途。
文檔編號A61K35/74GK101146544SQ200680009824
公開日2008年3月19日 申請日期2006年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月15日
發(fā)明者J·諾伊, R·J·麥馬洪 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司