專利名稱：：鈉通道阻斷劑及其衍生物與阿片受體拮抗劑的聯(lián)合制劑的制作方法鈉通道阻斷劑及其衍生物與阿片受體拮抗劑的聯(lián)合制劑發(fā)明領(lǐng)域此項(xiàng)發(fā)明的涉及鈉通道阻斷劑(尤其是河豚毒素)及其衍生物與阿片受體拮抗劑(尤其是納洛酮)的新型聯(lián)合制劑，相應(yīng)的用于人類和/或動(dòng)物的醫(yī)療的藥物產(chǎn)品，以及它們在治療多種疾病一尤其是疼痛(優(yōu)選為神經(jīng)病性疼痛)中的應(yīng)用。發(fā)明背景疼痛的治療在醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)占有重要地位。目前，全球都亟需新的疼痛治療方法。若干年來，科研人員為了尋求成功的、療效滿意的疼痛治療方法，在鎮(zhèn)痛藥領(lǐng)域或有關(guān)疼痛的基礎(chǔ)研究領(lǐng)域進(jìn)行了大量工作，驗(yàn)證了醫(yī)學(xué)界對疼痛的特異性治療方法以及對某類特殊疼痛治療方法的迫切需求。國際疼痛研究協(xié)會(huì)(IASP)的"疼痛"定義為與組織損傷有關(guān)的令人不愉快的感覺和情感經(jīng)歷(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版〔2002)，210)。雖然疼痛常是一種主觀體驗(yàn)，但是仍然可以依據(jù)其誘因或綜合征進(jìn)行分類。神經(jīng)病性疼痛，即由外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變導(dǎo)致的疼痛，始終是臨床醫(yī)生所面臨的挑戰(zhàn)，因?yàn)闆]有特異性藥物能夠有效緩解這類疼痛。事實(shí)上，利用抗抑郁藥和抗驚厥藥治療神經(jīng)病性疼痛僅僅見于經(jīng)驗(yàn)性的用藥觀察。這些藥物的療效有限，主要表現(xiàn)為疼痛緩解幅度有限以及療程受限。此外，患者常發(fā)生不良反應(yīng)，并且對這些藥物的鎮(zhèn)痛作用產(chǎn)生耐藥性。因此，必須探討新的藥物研發(fā)策略，如很可能從藥物作用原理上找到新的疼痛治療方法。綜上，本發(fā)明的宗旨就是探尋全新的疼痛(尤其是神經(jīng)病性疼痛)治療方法。附圖簡要描述圖l所示為本發(fā)明中聯(lián)合制劑的縮足試驗(yàn)的時(shí)-程曲線，以及兩組(生理鹽水+TTX與納洛酮+TTX)整體療效的比較。見實(shí)施例l。圖2所示為本發(fā)明中聯(lián)合制劑的發(fā)聲試驗(yàn)的時(shí)-程曲線，以及兩組(生理鹽水+TTX與納洛酮+TTX)整體療效的比較。見實(shí)施例l。圖3所示為TTX與嗎啡(阿片受體激動(dòng)劑)聯(lián)合使用的縮足試驗(yàn)的時(shí)-程曲線(左)和發(fā)聲試驗(yàn)的時(shí)-程曲線(右)，以及兩組(生理鹽水+TTX與嗎啡+TTX)整體療效的比較。見實(shí)施例2。圖4所示為與圖3中時(shí)-程曲線變化相對應(yīng)的AUC值。從左至右，每欄分別為生理鹽水+TTX，嗎啡+生理鹽水，TTX+嗎啡。見實(shí)施例2。圖5所示為經(jīng)DAGO刺激的["S]GTPyS與鼠腦組織亞細(xì)胞組分的特異性結(jié)合。SPM:突觸漿膜，MI:微粒體膜，C:生理鹽水，ChroT:慢性TTX，ChroM:慢性嗎啡，ChroM+T:慢性嗎啡+TTX。數(shù)據(jù)用來表示pS]GTPyS的結(jié)合活性，單位為fmolXmg蛋白質(zhì)—、數(shù)據(jù)采用均值iS.E.M.形式表示，見實(shí)施例3。圖6所示為經(jīng)過慢性藥物治療，在鼠腦的亞細(xì)胞組分中，[35S]GTPYS的基礎(chǔ)結(jié)合活性的變化。SPM:突觸漿膜，MI:微粒體膜，C:生理鹽水，ChroT:慢性TTX，ChroM:慢性嗎啡，ChroM+T:慢性嗎啡+TTX。數(shù)據(jù)用來表示["S]GTPyS的結(jié)合活性，單位為fmolXmg蛋白質(zhì)"，數(shù)據(jù)采用均值士S.E.M.形式表示，見實(shí)施例3。圖7所示為經(jīng)過慢性藥物治療，在鼠腦的亞細(xì)胞組分中，[35S]GTPYS最大結(jié)合活性的變化。SPM:突觸漿膜，MI:微粒體膜，C:生理鹽水，ChroT:慢性TTX，ChroM:慢性嗎啡，ChroM+T:慢性嗎啡+TTX。數(shù)據(jù)用來表示["S]GTPyS的結(jié)合活性，單位為fmolXmg蛋白質(zhì)"，數(shù)據(jù)采用均值士S.E.M.形式表示，見實(shí)施例3。圖8所示為經(jīng)過慢性藥物治療，在鼠腦的亞細(xì)胞組分中，[35S]GTPYS結(jié)合活性的ECso的變化。SPM:突觸漿膜，MI:微粒體膜，C:生理鹽水，ChroT:慢性TTX,ChroM:慢性嗎啡，ChroM+T:慢性嗎啡+TTX。數(shù)據(jù)用來表示["S]GTPyS結(jié)合活性的EC50，單位為nM，數(shù)據(jù)采用均值士S.E.M.形式表示，見實(shí)施例3。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的主要對象為多種藥理學(xué)活性化合物的聯(lián)合制劑，所述聯(lián)合制劑包括至少一種化合物A，所述化合物A選自鈉通道阻斷劑和/或其一種衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體—尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。以及至少一種化合物B，所述化合物B選自阿片受體拮抗劑，可選地以其外消旋體形式，和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。本發(fā)明的另一對象為一種藥物配方，所述藥物配方包括如上所限定的化合物A和化合物B，并且可選地包括一種輔料和/或添加劑。本發(fā)明的另一方面是如上所限定的化合物A和化合物B的聯(lián)合制劑在藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述藥物用于治療和/或預(yù)防下文在對應(yīng)的標(biāo)題下將要闡述的狀況。研究發(fā)現(xiàn)了，鈉通道阻斷劑和阿片受體拮抗劑的聯(lián)合使用對疼痛一尤其是對于神經(jīng)病性疼痛，正以所未有的附加效應(yīng)展示出驚人的強(qiáng)大療效。此外，這兩類化合物聯(lián)合使用對于藥物成癮，尤其是阿片類成癮有很好的療效。發(fā)明詳述定義本發(fā)明申請所提及的"鈉通道阻斷劑"的定義為與鈉通道特異性結(jié)合，而且能夠特異性阻斷鈉通道的化合物，尤其是TTX-耐受型或TTX-敏感型鈉通道。所謂"TTX-耐受"和"TTX-敏感"是指與TTX結(jié)合緊密程度存在差異。TTX-耐受型通道的結(jié)合常數(shù)可見于下列文獻(xiàn)Hunteretal.,CurrentOpinioninCNSInvestigationalDurgsl(1)，1999;以及Clareetal.DDT，5(11),2000,506-520。TTX-敏感型通道的結(jié)合常數(shù)可見于下列文獻(xiàn)Hunteretal.，CurrentOpinioninCNSInvestigationalDurgsl(1)，1999;以及Clareetal.DDT，5(ll)，2000,506-520。理想的鈉通道阻斷劑與鈉通道結(jié)合的IC5o應(yīng)該小于200|iM，最好能夠小于lOO^M或者IC5Q=2^M。上面提及的抑制作用是指鈉通道被激活后引起的任何下游效應(yīng)的抑制或改變。準(zhǔn)確地說，本項(xiàng)發(fā)明中所提及的鈉通道阻斷劑是指與鈉通道(尤其是TTX-耐受型或TTX-敏感型鈉通道)a亞單位結(jié)合的化合物。更準(zhǔn)確地說，是指與鈉通道(尤其是TTX-耐受型或TTX-敏感型鈉通道)a亞單位的SSI或SS2部位結(jié)合的化合物。適于本項(xiàng)發(fā)明的理想鈉通道阻斷劑為河豚毒素和蛤蚌毒素，因?yàn)樗鼈兛梢酝瑫r(shí)特異性阻斷上述兩種鈉通道。阿片劑是一個(gè)通用名，指與鴉片類化合物的作用機(jī)制相同的所有化合物，它是罌粟種子中乳白色液體的干燥物(Brownstein，1993)。所有阿片劑均通過相同的受體一即所謂阿片受體與生物系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)。阿片肽系統(tǒng)在疼痛方面發(fā)揮重要作用，對于阻斷痛覺形成過程有著顯著影響。阿片肽的主要成員包括腦啡肽、強(qiáng)啡肽、P內(nèi)啡肽，分別來自腦啡肽原、強(qiáng)啡肽原和黑素促皮質(zhì)素原。迄今，人類已經(jīng)克隆出3類阿片受體p，S-，K-阿片受體(Evans等(1992〕Science2581952;Kieffer等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA8912048;Chen等〔1993〕Mol.Pharmacol.448,Minami等〔1993〕FEBSLett29291)。最近，第4類阿片受體，即ORLl-受體已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)(Meunier等，1995)。在n-和5-阿片受體中，各有兩個(gè)受體亞型得到證實(shí)，即和p-2亞型以及S-l和S-2亞型。k-阿片受體還包含一個(gè)k-3亞型。全部阿片受體均含有7個(gè)跨膜疏水結(jié)構(gòu)，均屬于視紫質(zhì)家族中的百日咳毒素敏感型G蛋白偶聯(lián)受體組。4類不同阿片受體的肽結(jié)構(gòu)非常相似(Gaveriaux-Ruff和Kieffer，1999)，這也正是為何大部分阿片受體配基對一種以上的阿片受體均有親和力的原因。在多數(shù)情況下，阿片受體配基主要與一類受體結(jié)合，其作用和副反應(yīng)也都由此受體的特性所決定。有必要進(jìn)一步開展研究，以發(fā)現(xiàn)受體特異性的選擇性配基。不過，目前，每類阿片受體均己經(jīng)被發(fā)現(xiàn)有若干種選擇性激動(dòng)劑和拮抗劑。此項(xiàng)申請所提及的"阿片受體拮抗劑"的定義為與一種阿片受體有親和力的分子或化合物，可以抑制、修飾或者減弱其下游信號(hào)強(qiáng)度。此外，"阿片受體拮抗劑"還指一種化合物，經(jīng)放射活性替代試驗(yàn)證實(shí)，其在10pM濃度下，具備至少50%的抑制作用；或者其針對一類阿片受體的Ki值至少為lpiM。此項(xiàng)發(fā)明中的阿片受體包括p，k，S或ORL-l阿片受體。阿片受體拮抗劑的例子包括、但不局限于下列物質(zhì)納洛酮、納曲酮、Etonitazenylisothiocyanate、雙鹽酸纟內(nèi)》各月井、Clocinnamoxmesylate、b-Funaltrexaminehydrochloride、CTOP或者CTAP。此申請中的"類似物"的定義為與一種活性化合物結(jié)構(gòu)相關(guān)，活性相似的化學(xué)物質(zhì)。本申請中所提及的"衍生物"一詞的定義為由一種活性化合物(例如一種p-阿片受體拮抗劑)發(fā)生化學(xué)衍生反應(yīng)后得到的化學(xué)物質(zhì)，從而改變(更適于藥用)原始化合物的物理一化學(xué)性質(zhì)。衍生物中包括所謂的"藥物前體"，即活性化合物的酯類或醚類衍生物。關(guān)于常用的生產(chǎn)活性化合物的藥物前體的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員了如指掌，在Krogsgaard-Larsen等人的"TextbookofDrugdesignandDiscovery(藥物設(shè)計(jì)和藥物發(fā)現(xiàn)教科書)"(Taylor&Francis,2002年4月)中也有所闡述。本發(fā)明中的"中性分子形式"不僅指非離子形式(位于等電點(diǎn))或凈電核為中性的分子形式(含有等量的正電荷和負(fù)電荷)，尤其是Zwitter-Ion。本發(fā)明中的"鹽"一詞是指活性化合物的任何形式，在這種形式下，化合物呈現(xiàn)為離子形式或帶電核形式，如果可行的話，還可以與反離子偶聯(lián)(陽離子或陰離子)。"鹽"一詞還指活性化合物與其他分子和離子形成的復(fù)合物，尤其是通過離子相互作用形成的復(fù)合物。典型的鹽類物質(zhì)包括醋酸、三氟醋酸、醋酸酯鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、苦味酸鹽、氫溴酸鹽、單氫溴酸鹽、一氫氯化物或氫氯化物。本發(fā)明中的"生理學(xué)可以采用的鹽類"是指本申請中的至少一種"鹽類"化合物(定義如上文)，而且這些鹽類在人類和/或哺乳動(dòng)物中有良好的生理耐受性。本發(fā)明中的"溶劑"是指本申請中任何形式的活性化合物，此化合物通過非共價(jià)鍵與另一個(gè)分子(最可能為極性溶劑)相連接。溶劑的例子包括氫氧化物和醇化物(如甲醇化物)。化合物A和化合物B的聯(lián)合制劑如上文所述，本發(fā)明主要涉及一種藥理學(xué)活性化合物構(gòu)成的聯(lián)合制劑，至少包含一種化合物A)和一種化合物B)。進(jìn)一步來說，本發(fā)明是藥理學(xué)活性化合物構(gòu)成的聯(lián)合制劑，其組成為至少一種化合物A，所述化合物A選自鈉通道阻斷劑和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。以及至少一種化合物B，所述化合物B選自阿片受體拮抗劑，可選地以其外消旋體形式，和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问剑灰灾行缘男问?、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。本發(fā)明中最佳聯(lián)合制劑中的至少一種化合物A是TTX—敏感型鈉通道特異性阻斷劑。"特異性"一詞是指，對于TTX而言，與一種鈉通道亞型(TTX—敏感型或TTX—耐受型)結(jié)合的IQ()低于同另一種鈉通道亞型結(jié)合的IC5();對于阿片受體拮抗劑而言，是指與任何一種阿片受體亞型(H、k、S或OPL-l)結(jié)合的Ki值低于同其他阿片受體亞型結(jié)合的Ki值。"TTX—敏感型鈉通道"是指一類電壓門控鈉通道，它與TTX結(jié)合的ICso范圍在l~12nM之間，如IUPHARCompendiumofVoltage-gatedIonChannels(2002)中所闡述。TTX-敏感型鈉通道包括Navl.l，Nav1.2，Nav1.3，Nav1.6禾PINav1.7。此發(fā)明中的另一優(yōu)選方面為根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑，其中至少一種化合物A是TTX一耐受型鈉通道特異性阻斷劑。"TTX—耐受型鈉通道"是指一類電壓門控鈉通道，它與TTX結(jié)合的IC5Q范圍〉1(^M，如IUPHARCompendiumofVoltage-gatedIonChannels(2002)中所闡述。TTX-耐受型鈉通道包括Nav1.4，Nav1.5，Nav1.8和Nav1.9。此發(fā)明中的另一優(yōu)選方面為根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑，其中至少一種化合物A是選自河豚毒素和/或至少其類似物或衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔飭涡问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。和/或選自蛤蚌毒素和/或其類似物或衍生物中的至少一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。河豚毒素(本申請中縮寫為TTX)，也被稱為TiQuDuoXin，是在河豚魚中發(fā)現(xiàn)的一種堿類物質(zhì)。它的化學(xué)名為八氫-12-(輕甲基)-2-亞氨基-5，9,7，10a-二甲橋-10aH-[l,3]二橋氧并[6,5-d]嘧啶-4，7，10，ll，12-五醇，分子式為CnH17N308，分子量為319.27。TTX是一種高效非蛋白質(zhì)神經(jīng)毒素，也是神經(jīng)生物學(xué)和生理學(xué)研究必不可少的工具。TTX是一種海洋有機(jī)毒素，主要存在于河豚的睪丸、卵巢、卵、肝臟、脾臟、眼球和血液中，也見于其他廣泛的動(dòng)物物種，包括蝦虎魚、蠑螈、青蛙和藍(lán)環(huán)章魚，甚至海藻體內(nèi)也存在TTX。目前，若干種TTX的生產(chǎn)方法已經(jīng)廣為人知。除了下列文獻(xiàn)US6,552,191，US6,478，966，US6，562，968或者2002/0086997(所有文獻(xiàn)均被作為此申請的參考文獻(xiàn))所描述的多種TTX的合成方法(這些方法也被用來制備與本發(fā)明有關(guān)的河豚毒素)之外，通常，TTX是從海洋有機(jī)物中被提取出來(例如JP270719GotoandTakahashi)。河豚毒素是一種眾所周知的化合物，其全身鎮(zhèn)痛作用曾在專利WO02/22129的實(shí)施例中被描述過。在眾多對河豚毒素的介紹中，推薦下列文獻(xiàn)TuAnthony(Ed.)HandbookofNaturalToxins,Vol.3:MarineToxinsandVenoms,1988,185-210;Kao(1966)，Pharmacol.Rev.18:997-1049;還有其他一些文獻(xiàn)。早期雜志依據(jù)Tahara在US1,058,643中描述的方法報(bào)道過在日本銷售的產(chǎn)品中含有1%的TTX提取物溶液，用于治療遺尿和其他疾病(IwakawaandKimura，ArchivfuerExperimentellePathologieundPharmakologie(1922〕，93，305-31)。與此相應(yīng)，在20世紀(jì)30年代，若干項(xiàng)研究檢驗(yàn)了TTX治療阿片成癮的療效(Hsiang，NaiSHI;ManshulgakuZasshi(1939)，30，639-47(Germanabstr.179))。河豚毒素是眾所周知的化合物，例如，在CN1145225中被作為鎮(zhèn)痛藥，同時(shí)也用來治療藥物成癮，在WO02/22129中，TTX被作為全身性鎮(zhèn)痛藥，包括治療神經(jīng)病性疼痛。上述將神經(jīng)病性疼痛作為TTX治療疼痛的例證的總體描述并未包含任何有關(guān)此類疼痛的細(xì)節(jié)，尤其是沒有提及任何亞型。本項(xiàng)發(fā)明中采用的"河豚毒素衍生物"一詞的定義是采用US6,030,974(見參考文獻(xiàn))的定義，即指氨基酸氫喹唑啉類化合物，分子式為C11H17N308。本項(xiàng)發(fā)明中的"河豚毒素衍生物"包括了US5,846,975(見參考文獻(xiàn))中描述的氨基酸氫化喹唑啉，以及從第3欄第40行至第6欄第40行列出的物質(zhì)。此項(xiàng)發(fā)明中專門列舉出的"河豚毒素衍生物"包括、但不僅僅局限于下列物質(zhì)脫水河豚毒素、氨基河豚毒素、甲氧基河豚毒素、乙氧基河豚毒素、脫氧河豚毒素、河豚酸、6-表河豚毒素、ll-脫氧河豚毒素以及TTX的半乳化衍生物(例如4-表-TTX，6-表-TTX，ll-脫氧-TTX，4-表-ll-脫氧-TTX，TTX-8-0-半琥珀酸酉旨，chiriquitoxin，ll-nor-TTX-6(S)-ol，ll-nor-TTX-6(R)-ol，ll-nor-TTX-6,6-diol,ll-oxo-TTX以及TTX-ll-羧酸)，TTX內(nèi)酯衍生物〔例如6-表-TTX(內(nèi)酯)，ll-脫氧-TTX(內(nèi)酯)，ll-nor-TTX-6(S)-ol(內(nèi)酯)，ll-nor-TTX-6(R)-ol(內(nèi)酯)，11-nor-TTX-6,6-diol(內(nèi)酯),5-脫氧-TTX，5，11-雙脫氧-TTX，4-表-5，1l-雙脫氧-TTX，1-羥-5，1l-雙脫氧-TTX，5,6,11-三脫氧-TTX以及4-亞-5，6，1l-三脫氧-TTX〕以及4，9-脫水TTX類似物(例如4，9-脫水-TTX，4,9-脫水-6-表-TTX，4，9-脫水-ll-脫氧-TTX，4,9-脫水-TTX-8-0-半琥珀酸酯，4,9-脫水-TTX-ll-O-半琥珀酸酯)。根據(jù)小鼠生物測定法，典型TTX衍生物的毒性僅為TTX的1/8_1/40。有研究觀察到，這些衍生物可以產(chǎn)生協(xié)同作用，且沒有負(fù)面的相互作用。TTX衍生物的例子包括從多種有機(jī)物中分離到的新型TTX衍生物，以及部分或全部經(jīng)化學(xué)合成的衍生物(見Yotsu，M.etal.Agric.Biol.Chem.，53(3):893-895(1989))。TTX"類似物"與鈉通道ct亞單位結(jié)合的部位與TTX相同。蛤蚌毒素依據(jù)Merk索引12:1CD版，蛤蚌毒素是一種蚌類毒素，蛤類毒素，麻痹性蛤蚌毒素、膝溝藻毒素。這禾中強(qiáng)效神經(jīng)毒素由dinoflagellatesGonyaulaxcatenella,或G.tamarensis產(chǎn)生,食用后轉(zhuǎn)變成CaliforniaseamusselMytiluscalifomianus,theAlaskanbutterclamsaxidomusgiganteus和扇貝成為有毒食物Sommeretal.,Arch.Pathol.24,537,560(1937);Schantzetal"Can.J.Chem.39，2117(1961);Ghazarossianetal.，Biochem.Biophys.Res.Commun.59,1219(1974)。這些有毒的貝類與有毒的"紅潮"有關(guān)，紅潮中使海水脫色的高濃度海藻就是膝溝藻(Isolnandpartialcharacterization:Schantzetal.，J.Am.Chem.Soc.79，5230(1957);Moldetal.,ibid.5235)。在神經(jīng)化學(xué)研究中，蛤蛘毒素是一種很常用的工具，最近，若干文章對其作為鈉通道阻斷劑在眾多醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行了闡述。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A選自河豚毒素，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。在本發(fā)明的非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A選自中性形式的河豚毒素，或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式的河豚毒素。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A選自河豚毒素、其衍生物或其類似物,它們均可被分離自生物來源，優(yōu)選分離自魚類，尤其是河豚魚在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A選自河豚毒素、其衍生物或類似物，它們可為合成制品。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為至少一種化合物B是非特異性阿片受體拮抗劑、特異性p阿片受體拮抗劑、特異性O(shè)RLl-拮抗劑、特異性S-阿片受體拮抗劑，或者特異性K-阿片受體拮抗劑，包括它們的衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问剑灰灾行缘男问?、以酸或堿的形式或以鹽—尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定至少一種化合物B是特異性S-阿片受體拮抗劑，包括其衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性形式或以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑形式一尤其是水合物的形式。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為至少一種化合物B是特異性^阿片受體拮抗劑，包括其衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體—尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性形式或以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑形式一尤其是水合物的形式。的聯(lián)合制劑限定為至少一種化合物B是納洛酮、納曲酮、Etonitazenylisothiocyanate、雙鹽酸納洛肼、Clocinnamoxmesylate、b-Funaltrexaminehydrochloride、CTOP或者CTAP。在本發(fā)明的高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A是河豚毒素，而化合物B是^阿片受體拮抗劑。在本發(fā)明的高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑限定為化合物A是河豚毒素，而化合物B是S-阿片受體拮抗劑。在本發(fā)明的高度優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑定義為化合物A是河豚毒素，而化合物B是納洛酮、納曲酮、Etonitazenylisothiocyanate、雙鹽酸納洛肼、Clocinnamoxmesylate、b-Funaltrex咖inehydrochloride、CTOP或者CTAP。藥物配方本發(fā)明的另一方面是藥物配方，該配方中包含一種聯(lián)合制劑，并且可選地包括至少任意一種輔料和/或添加劑。在根據(jù)本發(fā)明的該藥物配方的優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物A，尤其是河豚毒素的含量為10嗎一4mg，尤其是在5-2000ng之間，最好是在250-1000昭或者25-50嗎之間。在根據(jù)本發(fā)明的該藥物配方的優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物B，尤其是納洛酮的用量為10-4000mg/日，最好在20-2000mg/日之間，最理想的劑量范圍是40-500mg/日。在根據(jù)本發(fā)明的該藥物配方的優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物A(尤其是河豚毒素)與化合物B(尤其是納洛酮)的比例為1:2000—1:10，最好是1:500—1:50，最理想的比例為1:300一l龍?jiān)谌祟愔委燁I(lǐng)域，鈉通道阻斷劑(尤其是河豚毒素)及其衍生物或類似物的劑量通常為10-4000嗎/日。尤其是河豚毒素，其劑量通常為10-4000嗎/日，或者每日2次，每次的劑量為5-2000嗎，有時(shí)，單次劑量最好在250-1000叫；有時(shí)，根據(jù)給藥途徑單次劑量最好在25-50嗎之間。在人類治療領(lǐng)域，阿片受體拮抗劑的劑量通常為10-4000mg/日，最好在20-2000mg/日，最理想的劑量為40-500mg/日，或者每日2次，每次劑量為5-2000mg，有時(shí)為10-1000mg，有時(shí)，根據(jù)給藥途徑單次劑量最好在20-250mg之間。納洛酮的適合劑量在這一領(lǐng)域是眾所周知的。在此項(xiàng)發(fā)明中，任何含量均指每個(gè)化合物的含量，而不是聯(lián)合制劑的含量，并且均指純度297%的化合物。這在另一方面可以排除任何含量>3%的雜質(zhì)被提及、定義或者被作為活性化合物。例如，如果一個(gè)制劑包含純度為99%的TTX0.5mg，以及0.8e/。的脫水-TTX，那么根據(jù)此項(xiàng)發(fā)明的分類和定義，這一制劑中僅有TTX是活性成分。輔料和/或添加劑可以是一種或多種防腐劑、乳化劑和/或靜脈給藥載體。依據(jù)給藥方式確定輔料和/或添加劑種類和含量。范例中特別包含了胃腸外給藥途徑(如靜脈、皮下或肌肉注射)，但是，也可以用其他的給藥途徑。TTX及其衍生物和類似物的給藥途徑包括肌肉注射、靜脈注射、皮下注射、舌下、口腔、經(jīng)皮給藥、經(jīng)口嚼服、可植入式滲透微泵、膠原植入、氣霧劑或栓劑。本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑的生產(chǎn)工藝，其中化合物A和化合物B被混合。本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物配方的生產(chǎn)工藝，其中在配置所述藥物配方的過程期間化合物A和化合物B被組合?；衔顰和化合物B的聯(lián)合制劑的應(yīng)用此項(xiàng)發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑在藥品生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述藥物用于治療疼痛，尤其是中一重度疼痛、癌性疼痛(由癌癥引起)和神經(jīng)病性疼痛。在優(yōu)選實(shí)施方案中，此項(xiàng)發(fā)明所治療的疼痛為神經(jīng)病性疼痛。IASP將"神經(jīng)病性疼痛"定義為"由原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)損傷或者功能障礙引起的疼痛"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002〕210)。就本發(fā)明而言，在上述定義之下或者作為相同的病癥進(jìn)行治療的疾病名稱為"神經(jīng)源性疼痛"，IASP的定義為"外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損傷、功能障礙或一過性紊亂引起的疼痛"。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是中樞性疼痛。根據(jù)IASP，"中樞性疼痛"是指"中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損傷或者功能障礙引起的疼痛"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)211)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛包括外周神經(jīng)病性疼痛或者外周祌經(jīng)源性疼痛。根據(jù)IASP，"外周神經(jīng)病性疼痛"是指"外周神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損傷或者功能障礙引起的疼痛"；"外周神經(jīng)源性疼痛"是指"外周神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損傷、功能障礙或者一過性功能紊亂引起的疼痛"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)213)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)源性疼痛是指異常性疼痛。根據(jù)IASP，"異常性疼痛"是指"由正常情況下不引起疼痛的刺激導(dǎo)致的疼痛"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)210)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指皮膚灼熱痛。根據(jù)IASP，"皮膚灼熱痛"是指"外傷性神經(jīng)損傷后的持續(xù)性燒灼樣疼痛、異常性疼痛和痛覺過敏綜合征，常伴隨血管收縮神經(jīng)和泌汗運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能障礙以及隨后的皮膚營養(yǎng)改變"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)210)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指痛覺過敏。根據(jù)IASP，"痛覺過敏"是指"對于正常情況下可以引起疼痛的刺激，反應(yīng)增強(qiáng)"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版〔2002)211)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指感覺過敏。根據(jù)IASP，"感覺過敏"是指"對刺激的敏感性增強(qiáng)，不包括感覺"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002〕211)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指痛覺過度。根據(jù)IASP，"痛覺過度"是指"對刺激(尤其是重復(fù)性刺激)產(chǎn)生異常疼痛反應(yīng)的綜合征，同時(shí)閾值升高"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)212)。IASP對"異常疼痛"、"痛覺過敏"、"痛覺過度"的區(qū)分如下表(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)212)。異常疼痛閾值降低刺激和反應(yīng)模式不同痛覺過敏反應(yīng)增強(qiáng)刺激和反應(yīng)率相同痛覺過度閾值升高反應(yīng)增強(qiáng)刺激和反應(yīng)率可以相同或不同在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指神經(jīng)痛。根據(jù)IASP，"神經(jīng)痛"是指"在神經(jīng)分布區(qū)域的疼痛"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版〔2002〕212)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指神經(jīng)炎。根據(jù)IASP，"神經(jīng)炎"是指"神經(jīng)炎癥"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002)212)。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，神經(jīng)病性疼痛是指神經(jīng)病。根據(jù)IASP，"神經(jīng)病"是指"神經(jīng)的病理性改變或功能障礙。單支神經(jīng)的病變被稱為單神經(jīng)病變，多個(gè)神經(jīng)的病變被稱為多發(fā)的單神經(jīng)病變，如果為彌漫性或者雙側(cè)均有，則成為多發(fā)神經(jīng)病變"(IASP，慢性疼痛分類，第2版，IASP出版(2002〕212)。在根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，此項(xiàng)發(fā)明的聯(lián)合制劑是用于藥品生產(chǎn)，可預(yù)防和/或治療毒品濫用和/或毒品成癮，藥物濫用和/或藥物成癮，尤其是毒品濫用和/或毒品成癮。經(jīng)常被濫用的藥物/毒品(導(dǎo)致成癮)包括阿片類，尤其是嗎啡、巴比妥類、大麻、可卡因、安非他明、苯環(huán)己哌啶、迷幻劑和苯(并)二氮。本發(fā)明中提及的"治療"一詞是指使用本文中的化合物或制劑預(yù)防、改善或消除一種或多種毒品/藥物脫癮相關(guān)的癥狀。這些癥狀可由戒斷引起，或毒癮復(fù)發(fā)行為，例如尋求用過的毒品/藥物。"治療"還包括預(yù)防、改善或消除成癮個(gè)體在戒斷毒品/藥物后出現(xiàn)的一系列能夠感知到的生理后遺癥，"治療"還包括減少個(gè)體的毒品/藥物用量。本發(fā)明中提及的"脫癮治療反應(yīng)"是指脫癮治療伴隨的任何副反應(yīng)，尤其是各種戒斷綜合征。本發(fā)明中提及的"改善"一詞是指患者情況的改善，包括主觀的(患者自身感覺)或客觀的(參數(shù)評(píng)估)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合制劑是用于藥品生產(chǎn)，所述藥品用于治療焦慮和精神分裂癥或精神分裂樣疾病。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物A的使用劑量為10-4000ng/日，最好在5-2000昭/日。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物B的使用劑量為10-4000mg/日，最好在20-2000mg/日。在根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，化合物A與化合物B的比例為1:2000—1:10，最好是1:500—1:50，最理想的比例為1:300—1:80。本發(fā)明還闡述了使用本發(fā)明的聯(lián)合制劑對于疼痛或毒品成癮，尤其是神經(jīng)病性疼痛折磨的患者或哺乳動(dòng)物(包括人類)的治療方法。在這里，"聯(lián)合"包括、但并不僅僅意味著多種化合物同時(shí)應(yīng)用，還意味著多種化合物序貫使用；以及先使用某種化合物，隨后使用另外一種，兩種化合物的使用間隔可以為1分鐘一l周。此外，"聯(lián)合"還指某種配方，其單一包裝內(nèi)(例如片、膠囊、丸、香口膠)含有所有的化合物，這里，"聯(lián)合"一詞意味著單一劑型中(例如(片、丸、膠囊、香口膠)多種化合物的固定比例。如果化合物A限定為TTX，化合物B為一阿片受體拮抗劑，那么，TTX、其衍生物和/或它的一個(gè)類似物的用量為1(Hig/日一4mg/日，并且它們可以從生物體中分離得到，尤其是魚類(如河豚魚)或者為合成制品；化合物B的用量為10mg/日一4000mg/日。本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案是一種包含藥物的藥盒，所述藥物包括包含A物質(zhì)的一種藥物，所述A物質(zhì)選自由鈉通道阻斷劑和/或其衍生物中的一種組成的組，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物形式；以及包含B物質(zhì)的一種藥物，所述B物質(zhì)選自阿片受體拮抗劑，可選地以其外消旋體形式，和/或其衍生物的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问剑灰灾行孕问健⒁运峄驂A的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。下文的范例和圖例部分所介紹的藥理學(xué)研究僅是舉例說明，本發(fā)明并不局限于研究中的用法。實(shí)施例實(shí)施例l:疼痛試驗(yàn)老鼠被麻醉后，通過鈍性剝離暴露坐骨神經(jīng)，使之從周圍組織中游離出來。隨后，在坐骨神經(jīng)上進(jìn)行4處結(jié)扎(5-0鉻制羊腸線，每隔l-2mm結(jié)扎一處)(BennettandXie，1998)。為了獲得滿意的夾閉效果，采用BennettandXie(1988)制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作。在坐骨神經(jīng)被結(jié)扎的老鼠中，采用Randall和Selitto(1957)法確定機(jī)械性痛閾(以克(g)表示)，具體方法為對試驗(yàn)鼠受損神經(jīng)支配的后爪逐步施加壓力，直至出現(xiàn)縮足反射以及嘶叫聲(發(fā)聲)。試驗(yàn)大鼠先給于納洛酮或生理鹽水，15分鐘后皮下注射TTX，劑量為3嗎/kg。納洛酮的給藥濃度為0.5mg/kg，對照組大鼠在相同時(shí)間和環(huán)境下接受安慰劑(0.09%NaCl)治療。每只試驗(yàn)鼠只接受一次治療(一種化合物，單次劑量)，并且只使用一次。數(shù)據(jù)采用均值土S.E.M.的形式記錄。采用非參數(shù)Kruskal-Wallis(1952)單因素方差分析(ANOVA)法進(jìn)行分析，采用Mann-Whitney檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。采用trapezoidal法則計(jì)算時(shí)-程曲線下面積(AUC)。采用t檢驗(yàn)比較兩組間的整體療效(AUCs)。PO.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果見圖1和圖2。研究結(jié)果清晰證實(shí)，在坐骨神經(jīng)受損的試驗(yàn)鼠中，TTX和納洛酮(一阿片受體拮抗劑)聯(lián)合使用的療效優(yōu)于TTX單用，表明這一聯(lián)合用藥方式具備顯著的鎮(zhèn)痛療效。實(shí)施例2:采用阿片類激動(dòng)劑的疼痛試驗(yàn)試驗(yàn)大鼠的處理方式如實(shí)施例1。在給予TTX15分鐘前，注射嗎啡或生理鹽水。在注射TTX30分鐘后，每隔30分鐘記錄壓力閾值，直至2小時(shí)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)為試驗(yàn)鼠壓力閾值的均值iS.E.M(每只大鼠測試一次壓力閾值)，如括號(hào)內(nèi)所示。所用嗎啡的濃度為3mg/kg，TTX劑量為3昭/kg，對照組大鼠在相同時(shí)間和環(huán)境下接受安慰劑(0.09%NaCl)治療。每只大鼠只接受一次治療(一種化合物，單次劑量)，并且只使用一次。數(shù)據(jù)采用均值iS.E.M.的形式記錄。采用非參數(shù)Kmskal-Wallis(1952)單因素方差分析(ANOVA)法進(jìn)行分析，采用Mann-Whitney檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。采用trapezoidal法則計(jì)算曲線下面積(AUC)。采用t檢驗(yàn)比較兩組間的整體療效(AUCs)。PO.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果見圖3和圖4。研究結(jié)果清晰證實(shí)，在坐骨神經(jīng)受損的大鼠模型中，TTX和嗎啡(^阿片類激動(dòng)劑)聯(lián)合使用，鎮(zhèn)痛療效弱于TTX或嗎啡單用。實(shí)施例3:TTX對fi-阿片受體的影響，尤其是TTX慢性活體給藥對于p阿片受體信號(hào)傳導(dǎo)的影響試驗(yàn)?zāi)康氖菣z驗(yàn)TTX對于阿片受體調(diào)節(jié)功能改變的影響，這一改變與阿片類耐藥/依賴有關(guān)。試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑閷Υ笫竽X組織進(jìn)行亞細(xì)胞組分的配基結(jié)合試驗(yàn)以及功能評(píng)價(jià)(SZUCS和Coscia，1992;Fabian等，2002)。關(guān)于藥物對細(xì)胞內(nèi)p阿片受體的影響，試驗(yàn)進(jìn)行了機(jī)浙灘動(dòng)物雌性Wistar大鼠，體重約200g，隨機(jī)分配至不同試驗(yàn)組，每組5只。在藥物治療期間大鼠被單獨(dú)詞養(yǎng)在小金屬絲籠子中，并且保持12小時(shí)的晝夜循環(huán)，試驗(yàn)期間大鼠可自由進(jìn)食和飲水。全部藥物治療均在同一天的相同時(shí)間段內(nèi)完成(7:00-8:00，17:00-18:00)，從而排除晝夜變化對藥效的影響。接受藥物治療的大鼠均可自由行動(dòng)。藥物和藥物治療鹽酸嗎啡(M)溶解于無菌生理鹽水中，皮下注射，0.2ml/100g體重，2次/日，共天。此用法源自已發(fā)表的治療方案(Fabian等，2002)，見下文。表l:嗎啡慢性給藥方案(mg/kg，皮下注射)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>嗎啡依賴(ChroM)大鼠被分成以下幾組。ChroM+T組，河豚毒素(TTX或T)溶解于Na-醋酸鹽/醋酸(0.083M，pH4.26)緩沖液中，制成10mM緩沖液，進(jìn)而用生理鹽水稀釋，在為期5天的嗎啡治療中，在第2-5天以0.1ml/100g體重的劑量給藥(3pg/kg/日，2次/日，皮下注射)。C組(對照組)，該組動(dòng)物同時(shí)接受生理鹽水治療，共5天。ChroT組，一個(gè)生理鹽水治療組的大鼠在第2-5天也接受TTX治療G昭/kg/日，2次/曰，皮下注射)。在第9天，試驗(yàn)大鼠被殺死，并將其腦組織制成亞細(xì)胞組分。大鼠腦組織亞細(xì)胞組分采用已經(jīng)發(fā)表的試驗(yàn)方法對大鼠腦的亞細(xì)胞組分進(jìn)行純化(Szucs和Coscia，1992;Fabian等，2002)。簡而言之，新鮮前腦組織被混勻，隨后以1,000Xg的速度離心10分鐘。這一離心步驟重復(fù)進(jìn)行，直至形成小微粒?；旌衔锏纳锨逡阂?2,000Xg的速度離心20分鐘。以10%蔗糖制成微粒懸液，隨后在20,000Xg的速度離心25分鐘，在14,000Xg的速度離心20分鐘，重復(fù)進(jìn)行2次，獲得突觸漿膜粗品(SPM)。此前在12,000Xg速度下離心得到的上清液連續(xù)在20,000Xg速度下離心25分鐘，以及在165,000Xg速度下離心1小時(shí)得到微粒體粗品。粗品SPM組分經(jīng)過10%、28.5%和34%的蔗糖密度梯度離心(100,000Xg，2小時(shí))得到純化，在相同速度下，粗品微粒體膜(MI)經(jīng)過10%和28.5%的密度梯度離心得到純化。采用Tris緩沖液將SPM和MI組分稀釋3倍，在100,000Xg離心1小時(shí)，以50mM的Tris-HCl(pH7.4)緩沖液制成懸液，形成濃度為0.3-0.8mg膜蛋白/ml的成品。采用Bradford法，利用小牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)對照，確定蛋白質(zhì)濃度(Bradford,1996)。采用新鮮的膜懸液用于配基刺激的["S]GTPYS功能分析；對于配基結(jié)合力分析，可以將膜懸液等分并凍存于-8(TC，用于配體結(jié)合試驗(yàn)。受體結(jié)合試驗(yàn)將恒定濃度的[3H]DAGO(<lnM)(活性36Ci/mmol)，11種濃度(10-1Q—10-5M)的未標(biāo)記DAGO(Tyr-D-Ala-Gly-(NMe)Phe-Gly-ol)，和膜懸液(200-300昭蛋白質(zhì))溶于50mMTris-HCl(pH7.4)緩沖液中(終體積為lml)進(jìn)行同源取代試驗(yàn)。將膜懸液與不斷增加濃度(0-8nM)的[3H]DAGO(溶于50mMTris-HCl(pH7.4)緩沖液中，終體積為孵育后進(jìn)行飽和結(jié)合試驗(yàn)。出現(xiàn)0pM的未標(biāo)記DAGO的結(jié)合放射活性被定義為非特異性結(jié)合，并從總體結(jié)合反應(yīng)中去除，以計(jì)算特異性結(jié)合力。試管在25'c下孵育1小時(shí)。采用細(xì)胞收集器，通過玻璃纖維過濾器進(jìn)行真空過濾，從而終止反應(yīng)。采用3X5ml冰冷Tris-HCl(pH7.4)緩沖液(50mM)快速洗滌過濾器，然后風(fēng)干，并在閃爍計(jì)數(shù)器中加入甲苯閃爍液進(jìn)行計(jì)數(shù)。全部分析均采用雙份樣本進(jìn)行，并至少重復(fù)3次。繪制曲線并分析、獲得Ko(解離常數(shù))、Bmax(結(jié)合位點(diǎn)密度)和EC5。值(配體達(dá)到半數(shù)最大結(jié)合力時(shí)的濃度)。采用飽和等溫線的一階非線性回歸方法進(jìn)行Scatchard分析。數(shù)據(jù)以均值士S.E.M.形式表達(dá)。采用Student-t檢驗(yàn)方法對慢性給藥引起的結(jié)合參數(shù)改變進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。配基-刺激["SGTPyS功能試驗(yàn)參照文獻(xiàn)(Fabianetal2002)，在總體積為lml的緩沖液中(由50mMTris-HCI、lmMEGTA和3mMMgCl2配置而成，pH7.4)，將新鮮純化大鼠腦組織膜組分(-10昭蛋白質(zhì)/試管)與0.05nM[35S]GTPYS(35-37TBq/mmol)和不同濃度的O(T9—10-4)DAGO或嗎啡進(jìn)行孵育，孵育溫度為30°c，時(shí)間為1小時(shí)。采用10nMGTPyS測定非特異性結(jié)合，并將之去除。每個(gè)試驗(yàn)都計(jì)算基礎(chǔ)結(jié)合力，即在缺乏配基刺激情況下的結(jié)合力，并被定義為100%(除非數(shù)據(jù)表示為fmolXmg蛋白質(zhì)—1)。釆用細(xì)胞收集器的玻璃纖維過濾器進(jìn)行真空過濾，從而將結(jié)合的和游離的["S]GTPyS分離開。釆用3X3ml冰緩沖液洗滌過濾器，并在閃爍計(jì)數(shù)器中加入甲苯閃爍液對干燥過濾器的放射活性進(jìn)行檢測。全部試驗(yàn)均采用3份樣本進(jìn)行，并至少重復(fù)3次。繪制曲線，并通過擬合S型劑量-反應(yīng)曲線獲得基礎(chǔ)結(jié)合力、結(jié)合強(qiáng)度(EC5Q，配基達(dá)到半數(shù)最大結(jié)合力時(shí)的濃度)、結(jié)合效力(Emax，與基礎(chǔ)結(jié)合力比較的最大刺激百分比％)。數(shù)據(jù)以均值士S.E.M.形式表達(dá)。采用Student-t檢驗(yàn)方法對慢性給藥弓I起的結(jié)合參數(shù)改變進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。結(jié)果TTX慢性活體給藥對于p-阿片受體信號(hào)傳導(dǎo)的影響如研究方法中所述，本研究進(jìn)行了下列慢性體內(nèi)藥物治療C:生理鹽水ChroT:慢性TTXChroM:慢性嗎啡ChroM+T:慢性嗎啡和TTX大鼠在接受上述治療后，對其腦組織進(jìn)行亞細(xì)胞分離，以獲得SPM和MI組分。對強(qiáng)效p-阿片受體特異性激動(dòng)劑DAGO(1(T9-10-5M)刺激["S]GTPyS結(jié)合的能力進(jìn)行評(píng)估。圖5為單次試驗(yàn)的匯總曲線。其結(jié)果顯示，所有4個(gè)不同處理的試驗(yàn)中，TTX慢性給藥均不同程度地使DAGO的劑量一反應(yīng)曲線右移并降低其結(jié)合活性。相應(yīng)的F和p值如下F(3,8)=24.78，p=0.0002(CSPM和ChroTSPM);F(3，8)=4.57，p=0.038(ChroMSPM和ChroM+TSPM);F(3，8)二66.73，p〈0.0001(CMI和ChroTMI);F(3,8)=177.2，pO.0001(ChroMI和ChroM+TMI)。結(jié)果見圖5。然后，采用student-t檢驗(yàn)法比較基礎(chǔ)結(jié)合力、Emax和EC5Q之各個(gè)試驗(yàn)的最佳擬合值的平均值。這些數(shù)據(jù)見圖6、7、8，表V對其進(jìn)行了總結(jié)。表V.TTX慢性治療對DAGO刺激["SGTPyS結(jié)合參數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>數(shù)據(jù)為均值士S.E.M.，在某些試驗(yàn)中，ChroT組療效顯著*P<0.1;**P<0.05;ChroM組與C組比較，療效顯著(+PO.I)++<0.05，基于student-t檢驗(yàn)。研究結(jié)果見圖6，7,8。重要結(jié)論在嗎啡依賴的亞細(xì)胞組分中之G蛋白活化作用下，用TTX慢性處理可降低阿片受體激動(dòng)劑DAGO誘導(dǎo)信號(hào)傳到的能力(ED5o增加)。這些數(shù)據(jù)支持實(shí)例2中TTX和u-阿片受體激動(dòng)劑間存在負(fù)性相互作用。據(jù)此得到令人鼓舞的結(jié)果似乎合理，即u-阿片受體拮抗劑與鈉通道阻斷劑(TTX)聯(lián)合使用將產(chǎn)生良好的療效，尤其是對于疼痛。參考文獻(xiàn)quantitiesofproteinutilizingtheprincipleofdye-binding.歷oc/ze肌72,2,25(Fabian,G.,Bozo，B.，Szikszay,M.,Horvath，G.，Coscia,C丄andSzucs,M.(2002)Chronicmorphine-inducedchangesinmu-opioidreceptorsandGproteinsofdifferentsubcellularlociinratbrain./JP/zwwaa/.￡!x/>.772e/-aja302f2/.77^-7<5ftSzucs，M.andCoscia,C丄(1992)Differentialcouplingofopioidbindingsitestoguanosinetriphospatebindingregulatoryproteinsinsubcellularfractionsofratbrain.J!iVewmscz'.ie51.3/，5<15-572.權(quán)利要求1.一種藥學(xué)活性化合物的聯(lián)合制劑，包括至少一種化合物A，所述化合物A選自鈉通道阻斷劑和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體-尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式，或者以其立體異構(gòu)體-尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽-尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物-尤其是水合物形式；以及至少一種化合物B，所述的化合物B選自阿片受體拮抗劑，可選地以其外消旋形式，和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的形式，或者以立體異構(gòu)體-尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式，以酸或堿的形式或以鹽-尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物-尤其是水合物形式。2.—種藥學(xué)活性化合物的聯(lián)合制劑，所述聯(lián)合制劑由以下組分組成至少一種化合物A，所述化合物A選自鈉通道阻斷劑，和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的形式，或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)比例的混合物的形式；以中性的形式，以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物形式；以及至少一種化合物B，所述化合物B選自阿片受體拮抗劑，任選地以其外消旋形式，和/或其衍生物中的一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的形式，或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)比例的混合物的形式；以中性的形式，以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A是TTX一敏感型鈉通道特異性阻斷劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A是TTX一耐受型鈉通道特異性阻斷劑。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A選自河豚毒素和/或其類似物或衍生物中的至少一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式，或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意合適比例的混合物的形式；以中性的形式，以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式，或者以溶劑化物一尤其是水合物的形式；和/或選自蛤蚌毒素和/或其類似物或衍生物的至少一種，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的形式，或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意合適比例的混合物的形式；以中性的形式，以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A是河豚毒素，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式，或者以其立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，化合物A選自以中性形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式的河豚毒素。8.根據(jù)權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，化合物A選自河豚毒素、其衍生物或其類似物，分離自生物來源，優(yōu)選分離自魚類，尤其是河豚魚。9.根據(jù)權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，化合物A選自河豚毒素、其衍生物或其類似物，是合成的。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物B是非特異性阿片受體拮抗劑、特異性p-阿片受體拮抗劑、特異性O(shè)RLl-拮抗劑、特異性S-阿片受體拮抗劑，或者特異性K-阿片受體拮抗劑，包括它們的衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體—尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體—尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。11.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物B是特異性S-阿片受體拮抗劑，包括衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物一尤其是水合物形式。12.根據(jù)權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物B是特異性^阿片受體拮抗劑，包括它們的衍生物，可選地以其外消旋體、純立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體形式；或者以立體異構(gòu)體一尤其是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體的任意適當(dāng)?shù)谋壤幕旌衔锏男问?；以中性的形式、以酸或堿的形式或以鹽一尤其是生理學(xué)可接受的鹽的形式；或者以溶劑化物—尤其是水合物形式。13.根據(jù)權(quán)利要求12中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物B是納洛酮、納曲酮、Etonitazenylisothiocyanate、雙鹽酸纟內(nèi)洛肼、Clocinnamoxmesylate、b-Funaltrexaminehydrochloride、CTOP或者CTAP。14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，其中至少一種化合物A是河豚毒素或其衍生物或類似物中的一種，而至少一種化合物B是S-阿片受體拮抗劑。15.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A是河豚毒素或其衍生物或類似物中的一種，而至少一種化合物B是p-阿片受體拮抗劑。16.根據(jù)權(quán)利要求15中所述的聯(lián)合制劑，其特征在于，至少一種化合物A是河豚毒素，而化合物B是納洛酮、納曲酮、Etonitazenylisothiocyanate、雙鹽酸納洛肼、Clocinnamoxmesylate、b-Funaltrexaminehydrochloride、CTOP或者CTAP。17.—種藥物配方，所述藥物配方包括根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑，并且可選地包括至少一種輔料和/或添加劑。18.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療疼痛，尤其是癌性疼痛、中一重度疼痛和神經(jīng)病性疼痛。19.根據(jù)權(quán)利要求18中的應(yīng)用，其中，所述神經(jīng)病性疼痛是外周神經(jīng)源性疼痛、外周神經(jīng)病性疼痛、異常疼痛、灼痛、感覺過敏、痛覺過度、神經(jīng)痛、神經(jīng)炎或神經(jīng)病。20.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防和/或治療毒品濫用和/或毒品成癮、醫(yī)療藥物濫用和/或醫(yī)療藥物成癮，優(yōu)選用于毒品濫用和/或毒品成癮。21.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的聯(lián)合制劑在生產(chǎn)藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療焦慮和精神分裂癥或精神分裂樣疾病。全文摘要本發(fā)明涉及鈉通道阻斷劑(尤其是河豚毒素)及其衍生物與阿片受體拮抗劑(尤其是納洛酮)的新型聯(lián)合制劑，相應(yīng)的用于人類和/或動(dòng)物的醫(yī)療的藥物產(chǎn)品，以及它們在治療多種疾病-尤其是疼痛(優(yōu)選為神經(jīng)病性疼痛)中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K45/06GK101151051SQ200680008716公開日2008年3月26日申請日期2006年3月17日優(yōu)先權(quán)日2005年3月18日發(fā)明者A·費(fèi)雷·格米斯,H·H·布希曼,M·哈蒙申請人:威克斯藥業(yè)有限公司