專利名稱：：蛋白藥物的緩釋組合物的制作方法蛋白藥物的緩釋組合物
背景技術：
：1.發(fā)明領域本發(fā)明涉及緩釋組合物，其包括載體基質和摻入到該載體基質中的蛋白藥物，所述載體基質基本上由(a)透明質酸或其鹽，(b)聚垸基氧化物，以及(c)氨基酸組成。該組合物允許生理學活性藥物持續(xù)釋放一延長時間段，優(yōu)選一周或更長。2.
背景技術：
：由于蛋白藥物在活體內具有高的生理學活性以及對靶具有高的特異性，因此已被報道用于治療多種不同的疾病。蛋白藥物還被報道在活體內具有短的半衰期和低的吸收率，這些缺陷限制了蛋白藥物作為治療藥物的可用性。蛋白藥物通常經(jīng)由注射途徑給藥至患者。給患者注射蛋白藥物通常是痛苦的。注射的蛋白藥物在患者中半衰期一般為2-4小時，患者需要每天或每隔一天給藥延長的持續(xù)延長的時間段，例如一年或更久。提出了蛋白藥物的緩釋制劑。在開發(fā)蛋白藥物的緩釋制劑的早期過程中，已提及含有該藥物的脂質體，微膠囊和植入物。然而，這些制劑并不令人滿意，因為制劑所含蛋白易喪失其活性，從而不能產(chǎn)生藥物的緩釋。己提出含有蛋白藥物的聚合物微顆粒。由非生物可降解的聚合物形成的微顆粒的問題在于它們不能在患者體內消化，因此有時需要手術去除未溶解的殘余物。另外，它們還對活體有害，并且難以控制藥物的釋放。為了克服與使用非生物可降解的聚合物有關的缺陷，已提出將藥物捕獲在生物可降解聚合物中的微顆粒。微顆粒的生物可降解的聚合物在患者體內緩慢降解，從而釋放藥物。合成聚酯，諸如聚交酯，聚乙醇酸交酯，聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)，聚酸酐，聚原酸酯，聚磷腈，假聚氨基酸，已經(jīng)被用作生物可降解和生物相容性聚合物。自諸如PLGA的聚酯制成的微膠囊產(chǎn)生肽藥物的緩釋持續(xù)一周至一個月的延長時間段。然而，PLGAM在生產(chǎn)蛋白藥物的緩釋制劑中的使用受到限制，這是因為PLGA的疏水性導致蛋白藥物的變性，破壞藥物的生理活性。PLAG本身在患者體內的降解，生成酸，由此降低微顆粒的pH，也加速蛋白藥物的變性和聚集。利用在從疏水聚合物生產(chǎn)微顆粒中常用的有機溶劑，還導致蛋白藥物的不穩(wěn)定性。聚合物在患者中相對緩慢的消化也產(chǎn)生外來物質的感覺。已提出使用從天然聚合物制成的緩釋制劑。天然聚合物，諸如，明膠，膠原質，幾丁質，羧甲基纖維素，藻酸，或透明質酸，在吸水后形成粘性膠。天然聚合物的膠產(chǎn)生藥物包括蛋白藥物的緩釋。然而，在導入患者體內時，由于聚合物在體內的消化和膠的稀釋導致膠的粘度和密度在患者中快速下降，該膠易喪失其保留藥物的能力。因此，天然聚合物膠沒有提供令人滿意的緩釋。透明質酸為由N-乙?；?D-葡糖胺和D-葡糖醛酸構成的天然、生物可降解的高分子聚合物。它發(fā)現(xiàn)于活體的多種器官和組織。其用于眼科手術和風濕病治療。已嘗試在緩釋制劑中使用透明質酸凝膠。一般而言，透明質酸凝膠的粘度越高，生產(chǎn)緩釋的蛋白藥物的效率果越高。然而，含有百分之幾透明質酸凝膠的組合物粘性太大，難以通過注射導入患者體內。象其他天然聚合物凝膠制劑一樣，蛋白藥物的透明質酸凝膠制劑一旦導入對象體內，不提供藥物有效的緩釋。例如，當含有1%透明質酸凝膠的胰島素制劑，如JP1989-287041所公開，注射至兔子時，注射后降低血糖水平的作用維持不超過24小時。美國專利No.5，416，071描述了含有1.5%透明質酸和血漿蛋白的干擾素緩釋制劑。當干擾素制劑導入對象時，血干擾素水平在注射后24小時內急劇降低至其初始水平的1/10。作為凝膠制劑的替代品，已經(jīng)提出通過噴霧干燥生產(chǎn)的含有蛋白藥物、透明質酸或其鹽的微顆粒。例如，U.S.申請公開No.2003/0064105描述了緩釋制劑，其制備方法為通過噴霧干燥生產(chǎn)含有蛋白藥物的透明質酸微顆粒；以親脂材料，諸如卵磷脂，涂布微顆粒；以及將涂布的微顆粒分散至油中。該申請還描述了涂布的微顆粒被配制成水包油乳劑。當卵磷脂涂布的干擾素-Q!微顆粒的水包油乳劑被注射至兔子時，干擾素-a血液水平維持延長的時間段。為了消除上述涂布工藝，親脂材料可被分散在含有透明質酸和活性成分的溶液中，所得溶液進行干燥(例如，噴霧干燥)。U.S.申請公開No.2003/0064105。U.S.專利No.6,375,988公開了藥物釋放速率受控的藥物組合物。該藥物組合物含有由(a)生物可降解、生物可相溶的高分子物質和/或多價金屬離子或多價金屬源，和(b)透明質酸或其鹽形成的基質，以及作為成分摻在基質中的(c)藥物。組分(a)包括明膠，酪蛋白鈉，白蛋白，溶菌酶氯化物，聚-L-賴氨酸，幾丁質，Ca2+，Al3+，和Fe3、覆蓋的藥物從抗炎藥物到關節(jié)炎治療藥物。透明質酸或其鹽的分子量范圍從600,000到2,000,000Da，尤其從l，OOO，OOO到2,000,000Da。該專利未明確教導蛋白藥物的受控遞送。U.S.專利No.6,375,988未教導含有載體基質的緩釋組合物，所述載體基質基本上由摻在載體基質中的透明質酸或其鹽，氨基酸，聚環(huán)氧烷和蛋白藥物組成，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚環(huán)氧烷的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:10。總而言之，對蛋白藥物的緩釋制劑仍存在需要，該制劑可顯示藥物的優(yōu)異的緩釋持續(xù)延長的時間段同時保留藥物生理活性。聚乙二醇(PEG)為一種聚烷基氧化物。低分子量PEGs(分子量小于1000Da)室溫下為液體，而高分子量PEGs(分子量為1000Da或以上)為固體。高分子量PEGs已用作增塑劑，栓劑基質，和親水賦形劑。藥物賦形劑手冊，第二版(HandbookofPharmaceuticalExcipients，2ndEd.)，ThePharmaceuticalPress(1994)。低分子量PEGs—直主要用作藥物組合物的溶劑或媒介。低分子量PEGs—直用作穩(wěn)定劑，防止蛋白藥物在蛋白藥物的液體制劑中結晶或沉淀。InternationalJournalofPharmaceutics,185，129-188(1999)。液體形式的低分子量PEGs被提議用作蛋白固體制劑的媒介。例如，U.S.專利No.5,385,738描述了一種方法，其中諸如IGF-1或B-hGH的與膠原質混合的蛋白，冷凍干燥后研磨成粉，然后分散在液體PEG中。U.S.專利No.6,004,549描述了使用PEGs作為晶體干擾素的媒介。U.S.專利No.6,004,549提出了不同分子量PEG的混合物。例如，它描述了在生產(chǎn)晶體干擾素的可注射緩釋組合物中使用PEG3350和PEG400或PEG40,000和PEG550的混合物。還暗示使用分子量為8000Da或3350Da的PEGs。然而，U.S.專利No.6，004，549并未教導或公開含有載體基質的緩釋組合物，所述載體基質基本上由摻在載體基質中的透明質酸或其鹽，氨基酸，聚環(huán)氧烷和蛋白藥物組成，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚環(huán)氧烷的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:10。U.S.專利No.6,004,549教導的干擾素-a的緩釋組合物注射后釋放干擾素-a長達48小時。已經(jīng)報道，含有低分子量PEGs作為媒介的藥物組合物產(chǎn)生藥物緩釋維持短的時間段。例如，U.S.專利No.4,041,155描述了使用80%PEG400或PEG300的溶液作為生長激素抑制素的媒介。分散在38%PEG400溶液中的生長激素抑制素的溶液顯示生長激素抑制素緩釋持續(xù)4小時。U.S.專利No.6，011,011公開了來自+包含PEG300或PEG600的組合物的蛋白藥物的緩釋。建議使用小于30%的PEG300，這是因為40%體積或更高濃度的PEG300可在注射位點周圍誘導溶血作用。藥物賦形劑手冊，第二版(HandbookofPharmaceuticalExcipients,2nd)，ThePharmaceuticalPress(1994)。發(fā)明公開技術方案包含載體基質和摻在載體基質中的蛋白藥物的緩釋組合物，所述載體基質基本上由(a)透明質酸或其鹽，(b)聚烷基氧化物，和(c)氨基酸組成，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚烷基氧化物的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:10。本發(fā)明涉及包含載體基質和摻在載體基質中的生理活性蛋白藥物的緩釋組合物，所述載體基質基本上由透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物和氨基酸組成，其中各組分的量足以產(chǎn)生蛋白藥物的緩釋。在本發(fā)明的組合物中，蛋白藥物的分子量(Da)與聚烷基氧化物的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:10。優(yōu)選組合物緩釋有效量或更高量的蛋白藥物至少7天。優(yōu)選地，載體基質和蛋白藥物可形成至微顆粒。所述微顆粒的平均直徑為1-500/mi。附圖簡述圖1顯示實施例1(--),對比例1(-o-)和對照(-T-)的干擾素-a微顆粒的體內(大鼠)釋放圖。圖2顯示實施例20促紅細胞生成素的微顆粒的體內釋放圖。圖3顯示實施例21FSH的微顆粒的體內釋放圖。圖4顯示實施例22促紅細胞生成素的微顆粒的體內釋放圖。圖5顯示實施例23FSH的微顆粒的體內釋放圖。圖6顯示實施例1的干擾素-a的微顆粒(猴子)體內釋放圖，由ELISA(--)禾BCPE(-□-)測定。發(fā)明詳述本發(fā)明緩釋組合物所含的載體基質基本上由透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物和氨基酸組成。在此采用的術語"載體基質"表示允許捕獲和緩釋藥物的底材或基質。載體基質可占組合物干重的約50-99.95%重量，優(yōu)選約70-99.95%重量。根據(jù)本發(fā)明，透明質酸或其鹽，氨基酸和聚烷基氧化物之間的物理相互作用或范得華力形成載體基質。形成自透明質酸或其鹽，氨基酸和聚烷基氧化物的微顆粒的致密結構或致密質地使得摻在其中的蛋白藥物緩釋延長的時間段。微顆?？稍诟鞒煞珠g形成交聯(lián)鍵或化學鍵。在此情形下，如果需要，可使用交聯(lián)劑。交聯(lián)劑對本領域技術人員而言是公知的。在此采用的術語"基本由。。。組成"表示載體基質含有透明質酸或其鹽，聚烷基氧化物和氨基酸作為必要成分。載體基質可含有其他不會明顯影響其緩釋效果的非必要成分。用于本發(fā)明中的透明質酸可以是游離酸或鹽。鹽包括但不限于透明質酸鈉，透明質酸鉀，透明質酸銨，透明質酸鈣，透明質酸鎂，透明質酸鋅，和透明質酸鈷。優(yōu)選使用透明質酸鈉?？蓡为毣蚪M合使用透明質酸或鹽。多種提取，純化和測量方法可用于生產(chǎn)不同分子量的透明質酸。用于本發(fā)明中的透明質酸或其鹽可具有1,000,000Da或更大，和優(yōu)選3,000,000Da或更大的分子量。盡管透明質酸或其鹽的分子量沒有上限，但當前商業(yè)上可得到的透明質酸多達4,000,000-6,000，000Da?；诮M合物的干重，透明質酸或其鹽可以5-90%重量，優(yōu)選10-60%重量，以及更優(yōu)選20-50%重量的量摻在本發(fā)明組合物中。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明組合物含有分子量約3,000,000Da的透明質酸鈉，其量以組合物干重計為20-50°/。重量。在此使用的術語"干重"表示通過例如蒸發(fā)或過濾從組合物去除液體后獲得的固體重量。本申請中所用術語"聚垸基氧化物"包括聚垸基氧化物和聚環(huán)氧烷。其例子有，但不限于，聚乙二醇(PEG)，聚丙二醇，以及聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物(例如，poloxamers)。它們可單獨或組合使用。聚垸基氧化物優(yōu)選為聚乙二醇。如上所述，PEGs已用于藥物組合物，尤其是緩釋組合物。然而，未報道利用分子量類似于或大于蛋白藥物的聚烷基氧化物，尤其是聚乙二醇，組合透明質酸和氨基酸以增強蛋白藥物的緩釋。蛋白藥物與聚垸基氧化物的分子量之比通常為約1:0.5-1:10，優(yōu)選約1:0.8-1:5，以及更優(yōu)選約l:l。當PEG8000，PEG20,000，和PEG35,000各自用于干擾素-a(M.W.20,000Da)的緩釋組合物時，組合物的干擾素-a血液水平維持100pg/ml5天以上(實施例3-5)。具體而言，實施例4的組合物采用PEG20,000，顯示最長的緩釋效果。聚烷基氧化物以組合物干重計，可以1-90%重量，優(yōu)選5-60%重量，以及更優(yōu)選10-40%重量的量，摻在本發(fā)明組合物。氨基酸單獨或與其他公知藥物賦形劑組合，己用作蛋白穩(wěn)定劑。InternationalJournalofPharmaceuticals,185，129-188(1999)。在本發(fā)明中，氨基酸為載體基質組分之一，并以組合物干重計，其用量為約5%重量或更多，優(yōu)選約10-80%重量或更多，以及更優(yōu)選約20-60%重量。根據(jù)本發(fā)明，疏水氨基酸優(yōu)選用于增強蛋白藥物的緩釋(參見實驗實施例5)。本申請中所用的術語"疏水氨基酸"包括天冬氨酸，天冬酰胺，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，絲氨酸，色氨酸，酪氨酸，或纈氨酸。異亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸或纈氨酸是優(yōu)選使用的。亮氨酸是尤其優(yōu)選的。氨基酸可具有一個或多個取代基，只要取代不負面影響疏水性或組合物的緩釋特征。氨基酸可單獨或組合使用。當透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物，和氨基酸各自以恰當?shù)牧恳黄鹗褂脮r，與單獨或兩種成分組合使用相比，提高了蛋白藥物的緩釋(參見實驗實施例2)。透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物和氨基酸的總量以組合物干重計，范圍為約50-99.95%重量，以及優(yōu)選約70-99.95%。在一個實施方案中，本發(fā)明組合物包括載體物質，該載體物質基本上由分子量約3，000，000Da的透明質酸鈉，分子量與組合物中所含的蛋白藥物近乎一樣的聚乙二醇，諸如亮氨酸的疏水氨基酸，和蛋白藥物組成，其中透明質酸鈉的量以組合物干重計為20-50%重量，聚乙二醇的量以組合物干重計為10-40%重量，氨基酸的量以組合物干重計為20-60%重量，以及蛋白藥物的量以組合物干重計為0.05-5%重量。本發(fā)明組合物包含生理活性蛋白藥物。本申請所用的術語"生理活性蛋白藥物"表示對多種生理現(xiàn)象顯示拮抗作用并且以活性形式存在的蛋白或(多)肽?？捎糜诒景l(fā)明組合物中的蛋白藥物的例子包括但不限于，人生長激素，牛生長激素，豬生長激素，生長激素釋放激素，生長激素釋放肽，干擾素和干擾素受體(例如，干擾素-a，-/3和-7，I型可溶性干擾素受體)，粒細胞-集落刺激因子(G-CSFs)，粒細胞-巨噬細胞-集落刺激因子(GM-CSFs)，胰高血糖素(glucacon)樣肽(GLP-1等)，骨形態(tài)發(fā)生蛋白，濾泡刺激激素，exendins，G-蛋白-偶合受體，白介素(例如，白介素_1，-2，-3，-4，-5，-6，-7，-8，-9，-10，-11，-12，-13，-14，-15，-16，-17,-18，-19，-20，-21，-22，-23，-24，-25，-26，-27，-28，-29，-30等)，白介素受體(例如，IL-1受體，IL-4受體等)，酶(例如，葡糖腦苷脂酶，艾杜糖醛酸-2-硫酸脂酶，a-半乳糖苷酶-A，agalsidasealpha,jS-或a-L-艾杜糖醛酸酶(iduronidase)，丁酰膽堿脂酶，幾丁質酶，谷氨酸脫羧酶，imiglucerase，脂肪酶，尿酸酶，血小板激活因子乙?；饷福行詢入拿福柽^氧化物酶等)，白介素-或細胞因子-結合蛋白(例如，IL-18bp，TNF-結合蛋白)，巨噬細胞激活因子，巨噬細胞肽，B細胞因子，T細胞因子，蛋白A，過敏抑制劑，細胞壞死糖蛋白，免疫毒素，淋巴毒素，腫瘤壞死因子，腫瘤抑制因子，移行性生長因子，a-l抗胰蛋白酶，白蛋白，O!-乳清蛋白，載脂蛋白-E，促紅細胞生成素，高糖基化促紅細胞生成素，血管生成素(angiopoietin)，血紅蛋白，凝血酶，凝血酶受體激活肽，凝血調節(jié)蛋白，血因子vn，血因子viia,血因子vni，血因子k，血因子xin，纖溶酶原激活因子，纖維蛋白-結合肽，尿激酶，鏈激酶，水蛭素，蛋白C，C-反應蛋白，凝乳酶抑制劑，膠原酶抑制劑，過氧化物歧化酶，leptin，血小板源生長因子，上皮生長因子，表皮生長因子，制管張素，血管緊張肽，成髓生長因子，成髓刺激因子，降鈣素，胰島素，atriopeptin，軟骨誘導劑，elcatonin，關節(jié)組織激活因子，組織因子途徑抑制劑，濾泡刺激激素，孕酮形成激素，孕酮形成激素釋放激素，神經(jīng)生長因子(例如，神經(jīng)生長因子，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，axogenesisfactor-l，腦-促尿鈉排泄肽，膠質衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子，netrin，neurophilinhibitorfactor,神經(jīng)營養(yǎng)因子，neuturin等)，甲狀旁腺素，松弛肽，cycretin,生長調節(jié)素，胰島素樣生長因子，腎上腺皮質激素，胰高血糖素，縮膽囊素，胰腺多肽，促胃液素釋放肽，促腎上腺皮質激素釋放因子，甲狀腺刺激激素，autotaxin，乳鐵傳遞蛋白，myostatin，受體(例如，TNFR(P75)，TNFR(P55)，IL-1受體，VEGF受體，B細胞激活因子受體等)，受體拮抗劑(例如，IL1-Ra等)，細胞表面抗原(例如，CD2，3，4，5，7，lla，lib,18，19，20，23，25，33，38，40，45，69等)，病毒疫苗抗原，單克隆抗體，多克隆抗體，抗體片段(例如，scFv，F(xiàn)ab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)(ab')2和Fd)，病毒源疫苗抗原，生長因子(例如，EGF，PDGF，F(xiàn)GF等)，抗體融合蛋白，抗體片段融合蛋白等。需要經(jīng)常給患者施用的蛋白藥物，諸如干擾素，促紅細胞生成素，粒細胞-集落剌激因子，以及濾泡-刺激激素(FSHs)，可有利地用于本發(fā)明中。本發(fā)明制備的含有上述其中之一的蛋白藥物的緩釋組合物在其有效血清水平產(chǎn)生蛋白藥物的緩釋，歷時7天以上。(試驗實施例7和8)在此采用的術語"有效血清水平"或"有效濃度"表示藥物在對象血液中的濃度，該濃度或更高濃度時在生物系統(tǒng)中出現(xiàn)所需的生理變化。有效血清水平隨所用藥物和對象的種類而變化。包含載體基質和摻在載體基質中的蛋白藥物的本發(fā)明組合物，可由生產(chǎn)固體藥物組合物的多種公知方法制備。例如，它可以膜，丸，絲，筒，棒或微顆粒的形式生產(chǎn)。如果需要，藥物可接受賦形劑可用于生產(chǎn)組合物。藥物可接受賦形劑的類型和用量對本領域技術人員而言是公知的。組合物優(yōu)選被配制成微顆粒。微顆粒可以為球形，非球形或不規(guī)則形狀。微顆粒的平均大小范圍為約1/mi至約500pm。為注射目的，微顆粒的平均大小優(yōu)選為約100/mi或更小。微顆粒可通過對本領域技術人員而言公知的多種方法生產(chǎn)。可采用冷凍千燥或噴霧干燥。例如，透明質酸或其鹽，氨基酸和聚垸基氧化物的水溶液與蛋白藥物的水溶液混合，并將所得混合物進行冷凍干燥或噴霧干燥以生產(chǎn)微顆粒，其中蛋白藥物摻在載體基質中。蛋白藥物，透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物和氨基酸的均一溶液混合物可施加至噴霧干燥器，以從噴霧的均一溶液細滴中蒸發(fā)水。干燥的微顆粒具有與原始溶液相同的組成，但藥物分子捕獲在所得微顆粒中。優(yōu)選采用噴霧干燥，這是因為它產(chǎn)生均一的球形微顆粒，容易分散于分散劑。均一球形微顆粒還容易通過各種注射方法，諸如皮下，肌內，intraleseional或靜脈內給藥至對象。在此使用的與本發(fā)明組合物結構有關的術語"摻入"或"摻在載體基質"，表示蛋白藥物捕獲在所得載體基質中，該載體基質例如優(yōu)選以微顆粒的形式存在。術語"捕獲"表示分子通過諸如載體基質基質本身或藥物與基質之間的離子/非離子鍵合等任何手段被限制在三維空間內。本發(fā)明緩釋組合物可以多種途徑給藥。在此采用的術語"給藥"表示通過不同途徑導入或遞送特定材料給患者?？刹捎萌魏瓮緩剑灰鼈冊试S遞送藥物至靶組織。例如，可釆用腹膜內，靜脈內，肌內，皮下，皮內，局部，鼻內，肺部和直腸給藥。優(yōu)選注射給藥。優(yōu)選皮下給藥。本發(fā)明組合物還通過其他途徑給藥，諸如，吸入，內窺鏡或腹腔鏡途徑。依賴于劑型或給藥途徑，本發(fā)明組合物可進一步包括其他載體?？刹捎玫鞍姿幬锏姆€(wěn)定劑。穩(wěn)定劑與蛋白藥物形成共價鍵或配位鍵，并且包括但不限于糖，諸如蔗糖、乳糖或葡萄糖，多醇，諸如甘露醇或甘油，表明活性劑，諸如吐溫，卵磷脂，磷酸酯，和無機鹽。穩(wěn)定劑可單獨或組合使用。確定穩(wěn)定劑的類型和用量是本領域技術人員的技術技能。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的干擾素-a組合物不含穩(wěn)定劑比含穩(wěn)定劑時顯示更長時間段的緩釋。在利用包含卵磷脂作為穩(wěn)定劑的組合物和另一無卵磷脂的組合物的一個實驗中，兩種組合物緩釋干擾素-a7天以上。有趣的是，無卵磷脂組合物產(chǎn)生更長的緩釋。(試驗實施例6)該結果與現(xiàn)有技術出版物的教導相反。例如，U.S.申請公開2003/0064105描述了透明質酸微顆粒的緩釋組合物，其中微顆粒涂布以親脂材料，諸如卵磷脂，以增強透明質酸微顆粒的可分散性和隨后的緩釋。本發(fā)明組合物可通過不同注射途徑給藥。為此目的，組合物被分散至可注射溶液載體?？勺⑸淙芤狠d體可包括但不限于，水注射溶液，諸如蒸餾水或可注射緩沖液；非水注射溶液，諸如玉米油，芝麻油，棉籽油，豆油，花生油，單-，二-，和三-甘油酯，礦物油，鯊烯或其混合物。如果需要，注射制劑可進一步包括分散劑，殺菌劑，麻醉劑，緩沖劑，或防腐劑。施用組合物的精確劑量和方案必須取決于在治療個體對象的需要，治療類型，給藥途徑，個體對象的年齡、性別和體重，疾患或需要程度，醫(yī)師的判斷以及藥物種類。本發(fā)明通過下列實施例進一步加以說明，這些實施例并不解釋為限制發(fā)明的范圍或實質至在此描述的具體步驟和組合物。實施例l:干擾素-a微顆粒的制備干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。亮氨酸(3mg/ml)，甲硫氨酸(1.5mg/ml)，和PEG20,000(1.5mg/ml)溶解于純水。透明質酸鈉(MW3，000，000Da)(3mg/ml)溶解于所得溶液。干擾素-a溶液添加至亮氨酸，甲硫氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至終濃度為0.015mg/ml，得到溶液。該溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，產(chǎn)生微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2^m和200jim之間。實施例2:干擾素-a微顆粒的制備干擾素-a溶液的制備是將干擾素-a溶解于lOmM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。亮氨酸(3mg/ml)和PEG20,000(1.5mg/ml)溶解于純水。分子量為3,000，000Da的透明質酸鈉(3mg/ml)溶解于所得溶液。卵磷脂分散液添加至如上所得的含有亮氨酸，PEG20，000和透明質酸鈉的溶液至濃度0.525mg/ml，并混合均勻。加入干擾素-o;溶液至終濃度0.075mg/ml，得到溶液。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2nm和200jim之間。比較例l:無PEG和氨基酸的干擾素-a微顆粒的制備干擾素-ce溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation),產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)溶解于純水至濃度3mg/ml。卵磷脂分散液添加至透明質酸鈉溶液至濃度0.51mg/ml，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至終濃度0.15mg/ml，得到溶液。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100。C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2)Lim和200)iim之間。比較例2:無PEG的干擾素-o;微顆粒的制備干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于lOmM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。亮氨酸溶解于純水至濃度3mg/ml，向其中溶解透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)至濃度3mg/ml。卵磷脂分散液添加至含有亮氨酸和透明質酸鈉的溶液至濃度0.5025mg/ml，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至終濃度0.075mg/ml，得到溶液。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2|im和200(im之間。比較例3:無氨基酸的干擾素-a微顆粒的制備干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于lOniM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation),產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。PEG20,000溶解于純水至濃度1.5mg/ml，向其中溶解透明質酸鈉(分子量3，000，000Da)至濃度3mg/ml。卵磷脂分散液添加至含有PEG和透明質酸鈉的溶液至濃度0.5025mg/ml，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至終濃度0.075mg/ml，得到溶液。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinorTM，Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2和200fim之間。實施例3-5:具有不同分子量PEGs的干擾素-a微顆粒的制備干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-ce溶解于lOmM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。卵磷脂和PEGs(分子量8,000(實施例3)，20,000(實施例4),或35,000(實施例5))溶解于純水至下表1所示的濃度。透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)溶解于所得溶液至下表1所示的濃度。卵磷脂分散液添加至含有亮氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至濃度0.5025mg/ml，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至表1所示的終濃度。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2pm和200pm之間。[表l](<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>實施例6-10:具有不同用量PEGs的干擾素-a微顆粒的制備卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100mn。干擾素-O!溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于lOmM乙酸緩沖液至濃度l-2mg/ml。亮氨酸和PEG20，000溶解于純水至下表2所示濃度。透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)溶解于所得溶液至表2所示的濃度。卵磷脂分散液添加至含有亮氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至表2所示的濃度，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至表2所示的終濃度。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinorTM，Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2pm和200fim之間。[表2](單位mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*:PEG的量基于組合物的干重。實施例11-14:帶有不同氨基酸的干擾素-a微顆粒的制備卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml,然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。表3所示的不同氨基酸和PEG20,000溶解于純水至下表3所示濃度。透明質酸鈉(分子量3，000，000Da)溶解于所得溶液至表3所示的濃度。卵磷脂分散液添加至含有氨基酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至表3所示的濃度，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至表3所示的終濃度。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2)im和200(im之間。(單位mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實施例15-19:千擾素-Q!微顆粒的制備卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。干擾素-a溶液的制備方法是將干擾素-a溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。氨基酸(亮氨酸或甲硫氨酸)和PEG20,000溶解于純水至下表4所示濃度。透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)溶解于所得溶液至表4所示的濃度。卵磷脂分散液添加至含有氨基酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至表4所示的濃度，并混合均勻。加入干擾素-a溶液至表4所示的終濃度。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2nm和200iim之間。表4顯示所得微顆粒中各成分的用量，以微顆粒的干重計。[表4](單位Wt%)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>*:在實施例15中，釆用異亮氨酸代替亮氨酸。實施例20:促紅細胞生成素微顆粒的制備卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷脂分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。人重組促紅細胞生成素溶液的制備方法是將人重組促紅細胞生成素溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。亮氨酸和PEG20,000分別溶解于純水至濃度3mg/ml和1.5mg/ml。透明質酸鈉(分子量3,000,000Da)溶解于所得溶液至濃度3mg/ml。卵磷脂分散液添加至含有亮氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至濃度0.5025mg/ml，并混合均勻。加入人重組促紅細胞生成素溶液至濃度0.075mg/ml。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2和200|im之間。實施例2h濾泡刺激激素(FSH)微顆粒的制備卵磷脂與純水水合至濃度5mg/ml，然后通過微流化器(Microfluidizer,MicrofluidicsCorporation)，產(chǎn)生卵磷月旨分散液。卵磷脂顆粒的大小范圍為50nm—100nm。亮氨酸和PEG35,000分別溶解于純水至濃度3mg/ml和1.5mg/ml。透明質酸鈉(分子量3,000，000Da)溶解于所得溶液至濃度3mg/ml。卵磷脂分散液添加至含有亮氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液至濃度0.51mg/ml，并混合均勻。加入尿源FSH(MW40,000)至濃度0.01mg/ml。所得溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100。C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2|Lim和200(im之間。實施例22:促紅細胞生成素微顆粒的制備人重組促紅細胞生成素溶液的制備方法是將人重組促紅細胞生成素溶解于10mM乙酸緩沖液至濃度1-2mg/ml。亮氨酸，甲硫氨酸和PEG20,000分別溶解于純水至濃度3mg/ml，1.5mg/ml和1.5mg/ml。透明質酸鈉(分子量3，000，000Da)溶解于所得溶液至濃度3mg/ml。上述得到的人重組促紅細胞生成素溶液添加至亮氨酸，甲硫氨酸和PEG20,000的溶液至濃度0.015mg/ml。終溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2nm和200^im之間。實施例23:濾泡刺激激素(FSH)微顆粒的制備亮氨酸，甲硫氨酸和PEG35,000分別溶解于純水至濃度3mg/ml，1.5mg/ml和1.5mg/ml。透明質酸鈉(分子量3，000，000Da)溶解于所得溶液至濃度3mg/ml。向含有亮氨酸，甲硫氨酸，PEG和透明質酸鈉的溶液，加入人重組FSH(MW約40,000)至濃度0.015mg/ml。終溶液以20ml/min的速率導入噴霧干燥器(MobileMinor,Niro)，生產(chǎn)微顆粒。進口的空氣溫度為100°C。產(chǎn)生的微顆粒的直徑介于2(im和200nm之間。試驗實施例l:本發(fā)明微顆粒的緩釋通過利用大鼠測試干擾素-a微顆粒的干擾素-a的緩釋。實施例1或比較例1的干擾素-a微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT)(Myglyol812，Sasol)至濃度336(iglFNa/ml，給出注射分散液。包含干擾素-a(24jig/ml)的10mM乙酸緩沖液用作對照。微顆粒分散液和對照各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。注射后8小時采集血樣，然后每天采樣，歷時一周。從血樣分離血清，并利用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)測量干擾素-a的血液水平(BiotrakELISASystem(RPN2789)，AmershamBiosciences)。結果示于圖1。如圖1所示，注射以實施例1微顆粒的分散液的大鼠中干擾素-a的血液水平在第7天高于1x102pg/ml。注射以比較例1微顆粒的分散液的大鼠中干擾素-a的血液水平在第2天急劇降低，并在第4天變成檢測不到。對照在第1天釋放大多數(shù)干擾素-a。試驗實施例2:本發(fā)明微顆粒的緩釋實施例2或比較例1，2或3的干擾素-a微顆粒分散至中鏈甘油三酉旨(Myglyo1812，Sasol)至濃度336ngIFNa/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA測量干擾素-a水平(pg/ml)。結果示于表5。[表5]第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天實施例21157627411707964523300179比較例111250370284ND*NDND比較例22446655122381332011比較例319108689194228664234*ND=未檢測。如表5所示，注射以實施例2微顆粒的分散液的大鼠中血干擾素-a水平在第7天高于lxl(^pg/ml。注射以比較例l微顆粒的分散液的大鼠中干擾素-a的血液水平在第2天急劇降低，并從第3天起低于1x102pg/ml。以包含透明質酸鈉和氨基酸而無PEG的比較例2微顆粒的分散液給藥的大鼠中干擾素-a的血液水平，直至第3天維持高于1x102pg/ml。以包含透明質酸鈉和PEG但無氨基酸的比較例3微顆粒的分散液給藥的大鼠中千擾素-a的血液水平維持高于lx102pg/ml,歷時約5天。試驗實施例3:PEGs的分子量對緩釋的影響評價了微顆粒中PEG的分子量對微顆粒緩釋特征的影響。實施例3，4或5的干擾素-ce微顆粒分散至中鏈甘油三酯(Myglyol812，Sasol)至濃度336pgIFNa/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。每天采集血樣，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA測量干擾素-a水平(pg/ml)。結果示于表6。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>如表6所示，注射以實施例3微顆粒的分散液的大鼠中血干擾素-o！水平高于lxl0g/ml直到約第5天。與之對比，注射以比較例4和5微顆粒的分散液的大鼠中血干擾素-a水平給藥后維持在或高于1x102pg/ml7天或更長時間。實施例4微顆粒包含PEG20,000，顯示干擾素-a最長的緩釋。這表明，當采用分子量與蛋白藥物類似或基本相同的PEG時，本發(fā)明組合物顯示蛋白藥物最優(yōu)選的緩釋。表6結果顯示，當聚垸基氧化物的分子量類似于或大于蛋白藥物，更優(yōu)選約l:l時，組合物產(chǎn)生蛋白藥物的最長釋放。實驗實施例4:PEGs的量對緩釋的影響評價了微顆粒中PEG的量對微顆粒緩釋特征的影響。實施例6-10的干擾素-a微顆粒分散至中鏈甘油三酯(Myglyol812，Sasol)至濃度336pgIFNa/ml,給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。每天一次采集血樣，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA測量干擾素-a水平(pg/ml)。表7顯示第7天血干擾素-a水平(C7)以及注射時微顆粒中PEGs的量。[表7]<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>如表7所示，當PEG在微顆粒中的含量約10。/。(w/w)或更高時，大鼠中血干擾素-a水平在第7天高于1x102pg/ml。試驗實施例5:氨基酸種類的影響該實驗測試本發(fā)明微顆粒中所含的氨基酸類型對緩釋的影響。實施例11-14的干擾素-a微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyol812，Sasol)至濃度336ngIFNa/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA測量干擾素-a水平(pg/ml)。表8顯示第7天的血干擾素-a水平(C7)。[表8]實施例11實施例12實施例13實施例14氨基酸組氨酸天冬氨酸蘇氨酸甲硫氨酸C7(pg/ml)23620813115如表8可見，以包含組氨酸，天冬氨酸，或甲硫氨酸的微顆粒分散液給藥的大鼠在第l-7天維持其血干擾素-a水平高于lxl02pg/ml。注射以包含蘇氨酸微顆粒的分散液的大鼠中血水平在第7天為大約13pg/ml干擾素-a。蘇氨酸是高度水溶性的。推測包含蘇氨酸的微顆?？焖傥諏ο篌w內的體液，并與含有疏水氨基酸，諸如組氨酸，天冬氨酸或甲硫氨酸的微顆粒相比，更快釋放干擾素-a。試驗實施例6:帶有或不帶有卵磷脂的干擾素-a的微顆粒該實驗測試本發(fā)明微顆粒中所含的賦形劑(卵磷脂)對干擾素-ce的緩釋的影響。實施例15-19的干擾素-a微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyo1812，Sasol)至濃度336嗎IFNa/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA測量干擾素-a水平(pg/ml)。表9顯示第7天的血干擾素-a水平(C7)。[表9]實施例15實施例16實施例17實施例18實施例19C7(pg/ml)253518136120128實施例15-19的所有分散液以30%重量或更高的量在微顆粒中包含氨基酸。如表9可見，所有測試的分散液在第7天以高于1x102pg/ml的濃度釋放干擾素-a。有趣的是，實施例15和16的分散液不含有卵磷脂，在第7天比含有卵磷脂的實施例17-19的分散液釋放更多量的干擾素-O!o試驗實施例7:促紅細胞生成素的微顆粒測試了本發(fā)明微顆粒中促紅細胞生成素的緩釋。實施例20的促紅細胞生成素微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyo1812，Sasol)至濃度85(igEP0/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA(Catalog#DEP00，R&DSystems,TheELISAGuidebook,HumanaPress,JohnR.Crowther，2001)測量促紅細胞生成素水平(mIU/ml)。結果示于圖2。試驗實施例8:FSH的微顆粒測試了本發(fā)明微顆粒中FSH的緩釋。實施例21的濾泡刺激激素(FSH)微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyo1812，Sasol)至濃度53嗎FSH/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液各自(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA(ELISA，catalog#RE52121，IBL，TheELISAGuidebook,HumanaPress,JohnR.Crowther，2001)測量FSH水平(mIU/ml)。結果示于圖3。如圖3可見，第7天在大鼠中檢測到FSH。試驗實施例9:干擾素-a的微顆粒利用猴子測試了干擾素-a微顆粒的干擾素-a的緩釋。實施例l干擾素-a微顆粒分散至中鏈甘油三酯(MCT，Myglyo1812，Sasol)至濃度110|agIFNa/ml，給出注射分散液。微顆粒分散液(1.5ml)皮下注射至獼猴(cynomolgusmonkey)(雄性)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，利用CPE(細胞病理效應抑制)分析和ELISA(高靈敏度IFN-aELISA系統(tǒng)(Amersham，RPN2789)，TheELISAGuidebook,HumanaPress,JohnR.Crowther，2001)，測量血干擾素-a水平(pg/ml)。第5，6和7天血干擾素-a水平(分別Cs，Q和C7)示于表10和圖6。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>CPE為測量蛋白活性的分析。通過攻擊VSV(水泡性口炎病毒)殺死MDBK細胞系。該現(xiàn)象稱作"細胞病理效應"。當病毒攻擊細胞之時細胞含有干擾素-a，則細胞病理效應受到抑制，S卩，保護細胞免于病毒致死攻擊。干擾素-a的生理學活性通過測量抑制而確定。MDBK細胞培育在96孔微量滴定板24小時。預定濃度的干擾素-o;稀釋溶液添加至孔中，并進行培育24小時。以D-PBS洗滌孔，去除干擾素-o:并接受VSV。細胞進一步生長和染色，接著測量其光學密度(OD)。歐洲藥物典"干擾素a-2濃縮溶液"(EuropeanPharmacopoeia"InterferonAlfa-2ConcentratedSolution")ppl812~1815，2005，JournalofVirology,37(2)，pp755-758(1981)。如表10所示，ELISA顯示，血干擾素-o;水平在第5,6和7天維持在100pg/ml以上。CPE結果基本上與ELISA結果相同，表明猴體內的干擾素-a在第7天維持其生理活性。結果顯示本發(fā)明組合物產(chǎn)生生理活性干擾素-a的緩釋延長時間段，例如7天以上。因此，本發(fā)明干擾素-a組合物的緩釋適合于7-天緩釋干擾素-a制劑。試驗實施例10:促紅細胞生成素的緩釋實施例22的促紅細胞生成素微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyo1812，Sasol)至濃度336jigEPO/ml，給出注射分散液。分散液(0.5ml)皮下注射至SpragueDawley大鼠(雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA(Catalog#DEP00，R&DSystems,TheELISAGuidebook,HumanaPress'JohnR.Crowther,2001)測量促紅細胞生成素水平(mlU/ml)。結果示于圖4。圖4結果表明，本發(fā)明組合物適用于促紅細胞生成素緩釋制劑。試驗實施例11:FSH的緩釋根據(jù)本發(fā)明，含有FSH的組合物的緩釋在大鼠中確定。實施例23的FSH微顆粒分散在中鏈甘油三酯(MCT，Myglyol812，Sasol)至濃度336jigFSH/ml，給出注射分散液。分散液(0.5ml)皮下注射至大鼠(SpragueDawley大鼠，雄性，7-8周齡)。采集血樣，每天一次，歷時一周。從血樣分離血清，并利用ELISA(Catalog#RE52121，IBL，TheELISAGuidebook,HumanaPress,JohnR.Crowther，2001)測量FSH水平(mIU/ml)。結果示于圖5。圖5結果表明，本發(fā)明組合物適用于FSH緩釋制劑。工業(yè)實用性盡管本發(fā)明結合上述具體實施方案得以描述，但其許多替代，修飾和變體對本領域技術人員而言是顯而易見的。所有此類替代，修飾和變體皆落入本發(fā)明的實質和范圍之內。權利要求1.包含載體基質和摻在載體基質中的蛋白藥物的緩釋組合物，所述載體基質基本上由(a)透明質酸或其鹽，(b)聚垸基氧化物，和(c)氨基酸組成，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚烷基氧化物的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:10。2.權利要求l的組合物，其中透明質酸或其鹽，聚烷基氧化物和氨基酸的總量以組合物干重計為約50-99.95%重量。3.權利要求2的組合物，其中透明質酸或其鹽，聚垸基氧化物和氨基酸的總量以組合物干重計為約70-99.95%重量。4.權利要求1的組合物，其中透明質酸或其鹽的分子量至少為1,000,000Da。5.權利要求4的組合物，其中透明質酸或其鹽的分子量至少為3,000,000Da。6.權利要求l的組合物，其中氨基酸為疏水氨基酸。7.權利要求6的組合物，其中氨基酸選自單獨的天冬氨酸，天冬酰胺，組氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，.甲硫氨酸，苯丙氨酸，絲氨酸，色氨酸，酪氨酸和纈氨酸，或其混合物。8.權利要求l的組合物，其中聚烷基氧化物為聚乙二醇，聚丙二醇，其共聚物，或其混合物。9.權利要求8的組合物，其中聚烷基氧化物為聚乙二醇。10.權利要求9的組合物，其中聚烷基氧化物的分子量至少為1,000Da。11.權利要求1的組合物，其中蛋白藥物為干擾素，促紅細胞生成素，或濾泡刺激激素。12.權利要求l的組合物，其進一步包含穩(wěn)定劑。13.權利要求1的組合物，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚烷基氧化物的分子量(Da)之比為約l:l。14.權利要求1的組合物，其被配制成微顆粒，丸，棒，絲，筒或膜。15.注射用藥物制劑，其包含分散在注射介質中的權利要求1-14任一項的組合物。16.權利要求15的藥物制劑，其中注射介質選自注射用蒸餾水；注射用緩沖劑；和玉米油，芝麻油，棉籽油，豆油，花生油，單、二和三甘油酯，礦物油，鯊烯，及其混合物。17.氣溶膠制劑，包含權利要求1-14任一項的組合物。18.包含載體基質和摻在載體基質中的蛋白藥物的緩釋組合物，所述載體基質基本上由(a)分子量至少為1，000，000Da的透明質酸或其鹽，(b)聚乙二醇，和(c)疏水氨基酸組成，其中蛋白藥物的分子量(Da)與聚乙二醇的分子量(Da)之比為約1:0.5-1:5，以及聚乙二醇的分子量至少為1,000Da。19.權利要求1的組合物，其中蛋白藥物的含量以組合物干重計為0.05-5%重量。20.權利要求1的組合物，其中透明質酸或其鹽的含量以組合物干重計為20-50%重量。21.權利要求1的組合物，其中聚垸基氧化物的含量以組合物干重計為5-60%重量。22.權利要求1的組合物，其中氨基酸的含量以組合物干重計為10-80%重量。全文摘要本發(fā)明公開蛋白藥物的緩釋組合物。所述組合物包含載體基質和摻在載體基質的蛋白藥物。載體基質基本上由透明質酸或其鹽，氨基酸，和聚烷基氧化物組成。文檔編號A61K38/00GK101123988SQ200680005430公開日2008年2月13日申請日期2006年2月21日優(yōu)先權日2005年2月21日發(fā)明者崔淑榮,齊勛升申請人:株式會社Lg生命科學