專利名稱：改善胰腺功能的藥物和食品或飲料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的改善胰腺功能的藥物和食品或飲料。
背景技術(shù)：
已知4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇是植物中存在的一種物質(zhì)(非專利文獻(xiàn)1)。但是在該化合物的現(xiàn)有技術(shù)中，只有關(guān)于具有與上述化合物相似結(jié)構(gòu)的4-甲基-7-烯膽甾烷醇(4-甲基-膽甾-7-烯-3-醇)的生物合成系統(tǒng)的參考(非專利文獻(xiàn)2)，而具有4-甲基-7-烯膽甾烷醇骨架的這些化合物包括4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的用途完全是未知的。
百合科蘆薈屬是一組植物，包括庫(kù)拉索蘆薈(翠葉蘆薈(Aloebarbadensis Miller))，木蘆薈(大蘆薈(Aloe arborescens Miller var.natalensis Berger))等，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)知道它們有各種功效。關(guān)于蘆薈屬植物用途的現(xiàn)有技術(shù)包括免疫調(diào)節(jié)多糖(專利文獻(xiàn)1)。含有蘆薈提取物的丁醇級(jí)分或蘆薈素的免疫抑制改善劑(專利文獻(xiàn)2)，含有蘆薈素衍生物的HSP60家族蛋白質(zhì)合成抑制劑(專利文獻(xiàn)3-5)，來(lái)自蘆薈葉表層的具有外源凝集素活性的蛋白質(zhì)(專利文獻(xiàn)6)，改善血液葡萄糖水平的用途(非專利文獻(xiàn)3-7，專利文獻(xiàn)7-10)等等。
胰腺是由被稱作胰小島的內(nèi)分泌腺組織(胰島)和分泌消化酶的外分泌腺組織組成的器官。胰島中存在β細(xì)胞，α細(xì)胞，δ細(xì)胞，胰多肽細(xì)胞等，它們極大影響血液葡萄糖的控制和代謝。其中，β細(xì)胞作為產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞起著特別重要的作用。
糖尿病是代謝失調(diào)高發(fā)病，日本成年人中10％患有此病。根據(jù)胰腺β細(xì)胞功能障礙的流行病學(xué)，認(rèn)為它是引發(fā)糖尿病的原因之一，而β細(xì)胞功能障礙是非典型高血糖個(gè)體，表現(xiàn)出正常葡萄糖耐受性個(gè)體觀察到的病程，也包括30％發(fā)生率的表現(xiàn)出清楚地降低β細(xì)胞功能的個(gè)體。此外，據(jù)報(bào)道，現(xiàn)在日本平均社會(huì)壽命的成人高頻率引起或多或少胰島素抗性，據(jù)認(rèn)為，患有胰島素抗性的人們，其中沒(méi)有β細(xì)胞功能障礙的那些，血液葡萄糖水平不升高，而有β細(xì)胞功能障礙的那些，血液葡萄糖水平從相應(yīng)于正常葡萄糖耐受水平升高至相應(yīng)于非典型高血糖水平(非專利文獻(xiàn)8)。
當(dāng)前，雖然以去除誘因病理學(xué)條件或因素為基礎(chǔ)促進(jìn)胰腺功能自發(fā)性恢復(fù)的療法被用于胰腺功能失調(diào)，但是迄今為止還沒(méi)有使用積極恢復(fù)曾退化的胰腺功能的治療方法或藥物的，臨床上需求用于保護(hù)胰腺細(xì)胞的藥物或用于改善受損胰腺細(xì)胞的藥物。
胰腺功能失調(diào)意思是胰腺的內(nèi)分泌或外分泌腺功能降低或異常升高的病理學(xué)癥狀。
作為用于治愈胰腺功能失調(diào)的藥物的現(xiàn)有技術(shù)，有含有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子例如BDNF作為活性成分的那些(專利文獻(xiàn)11)，含有丙三醇衍生物作為活性成分的那些(專利文獻(xiàn)12)，含有β動(dòng)物纖維素蛋白質(zhì)或者其突變蛋白的改善胰腺功能的藥物(專利文獻(xiàn)13)，等等。迄今為止認(rèn)為，炎癥或神經(jīng)損傷時(shí)，BDNF和其它遞質(zhì)從小DRG神經(jīng)原的中樞末端釋放，并且在通過(guò)背角質(zhì)細(xì)胞上NMDA受體的酪氨酸磷酸化作用而促進(jìn)疼痛信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中涉及(非專利文獻(xiàn)9)，因此認(rèn)為在實(shí)際應(yīng)用中受到限制。
此外，專利文獻(xiàn)12中公開(kāi)的丙三醇衍生物是專利文獻(xiàn)14中描述的化合物，是具有用于治療和預(yù)防DIC，中風(fēng)，過(guò)敏，急性胰腺炎，蛛網(wǎng)膜下出血時(shí)腦顫搐等的抗血小板-激活因子(PAF)活性的藥物，并且還發(fā)現(xiàn)它們具有預(yù)防、治療和改善局部貧血癥狀中保存器官的過(guò)程中引起的器官病，移植后血液再灌注或手術(shù)等引起的血液流動(dòng)梗阻等的預(yù)防、治療和改善效果。但是很難說(shuō)這些藥物適合沒(méi)有這些癥狀的慢性胰腺疾病。
此外，專利文獻(xiàn)13中公開(kāi)的含有β動(dòng)物纖維素蛋白質(zhì)或者其突變蛋白的改善胰腺功能的藥物還有對(duì)未分化胰腺干細(xì)胞起作用的作用，從而促進(jìn)它們分化為產(chǎn)生胰島素的胰腺β細(xì)胞，以及誘導(dǎo)未分化干細(xì)胞分化為胰腺的其他細(xì)胞例如產(chǎn)生胰腺多肽的F細(xì)胞的作用，并且在未成熟細(xì)胞減少的條件下這種作用是不能預(yù)期的。另外，在除了腦的其他各種器官中，例如肝臟，腎臟，胰腺等，檢測(cè)到這些蛋白質(zhì)的mRNA，但是其功能的詳細(xì)情況還幾乎沒(méi)有澄清，因此不能說(shuō)它們能立即被用于臨床。
此外，專利文獻(xiàn)15中公開(kāi)的具有羊毛甾烷骨架或3，4-斷羊毛甾烷骨架的化合物具有增強(qiáng)胰島素作用活性的作用。這些化合物的作用是增強(qiáng)胰島素在脂肪細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)中的作用，其對(duì)胰腺疾病的作用是未知的。
關(guān)于具有來(lái)自植物的4-甲基-7-烯膽甾烷醇骨架的苷，有報(bào)道葫蘆科(Cucurbitaceae)植物瀉根(白瀉根(Bryonia alba))中含有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-豆甾-7-烯-3-醇(非專利文獻(xiàn)10)。但是，這不是一般可食用植物，沒(méi)有報(bào)道過(guò)其完全合成。
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為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人勤奮地進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。作為結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)，3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇，一種從庫(kù)拉索蘆薈(翠葉蘆薈(Aloe barbadensis Miller))的葉肉(澄清的凝膠部分)提取和純化的新的糖苷，能被安全地吸取并且具有保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能的活性。本發(fā)明是在上述發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上完成的。
也就是說(shuō)，本發(fā)明提供了含有下面化學(xué)式(1)代表的化合物作為活性成分的改善胰腺功能的藥物。根據(jù)本發(fā)明藥物的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能
根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物含有0.001％至10％干重的上述化合物。
本發(fā)明還提供改善胰腺功能的藥物，其含有含有0.001％至10％干重的上述化學(xué)式(1)代表的化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分作為活性成分。根據(jù)本發(fā)明藥物的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于改善胰腺功能的含有上述化學(xué)式(1)代表的化合物的食品或飲料。根據(jù)本發(fā)明藥物的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能。
進(jìn)一步地，根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的食品或飲料含有0.0001％至1％干重的上述化合物。
此外，本發(fā)明提供改善胰腺功能的食品或飲料，其含有含有0.0001％至1％干重的上述化學(xué)式(1)代表的化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。根據(jù)本發(fā)明食品或飲料的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能。根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的食品或飲料帶有說(shuō)明，即該食品或飲料用于改善胰腺功能。
本發(fā)明進(jìn)一步提供上述化學(xué)式(1)代表的化合物或者含有該化合物的組合物在制備用于改善胰腺功能的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明用途的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能。此外，根據(jù)本發(fā)明用途的優(yōu)選實(shí)施方案，上述組合物含有含有0.001％干重或更多的上述化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。
本發(fā)明進(jìn)一步提供保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善所述細(xì)胞的功能的方法，包括對(duì)其胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞需要保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能需要改進(jìn)的受試者施用上述化學(xué)式(1)代表的化合物或者含有該化合物的組合物。根據(jù)本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案，胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能。進(jìn)一步地，根據(jù)本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案，上述組合物含有含有0.001％干重或更多的上述化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。
附圖的簡(jiǎn)要描述

圖1給出本發(fā)明糖苷的乙?；赵糠值腉C-MS譜圖(照片代替圖顯示半色調(diào)圖像)。
圖2給出本發(fā)明糖苷的乙?；赵糠值?3C-NMR譜圖(照片代替圖顯示半色調(diào)圖像)。
圖3給出顯示給與了本發(fā)明化合物的隨機(jī)小鼠的血葡萄糖水平隨時(shí)間的變化的圖。
圖4給出顯示給與了本發(fā)明化合物的禁食小鼠的血葡萄糖水平隨時(shí)間的變化的圖。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式下面將詳細(xì)解釋本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。但是本發(fā)明不局限于下面的優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明在本發(fā)明要求保護(hù)的范圍內(nèi)能自由改變。
用作本發(fā)明藥物和食品或飲料的活性成分的化合物(下文也稱作“本發(fā)明的化合物”)是具有上述化學(xué)式(1)代表的結(jié)構(gòu)的化合物，即，3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇。也就是說(shuō)，本發(fā)明的化合物具有4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的3位上的羥基與D-葡萄糖1位上的羥基脫水縮合形成的結(jié)構(gòu)。
此外，用作本發(fā)明藥物和食品或飲料的活性成分的組合物(下文也稱作“本發(fā)明的組合物”)是，當(dāng)用作藥物活性成分時(shí)，含有0.001％干重或更多的，優(yōu)選0.01％干重或更多的，更優(yōu)選0.1％干重或更多的上述本發(fā)明化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分；或者當(dāng)用作食品或飲料活性成分時(shí)，含有0.0001％干重或更多的，優(yōu)選0.001％干重或更多的，更優(yōu)選0.1％干重或更多的上述本發(fā)明化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。本發(fā)明的組合物中含有的本發(fā)明的化合物的上限沒(méi)有特別限定，可以是，例如50，70或90％質(zhì)量比。
本發(fā)明的化合物或者含有該化合物的組合物能通過(guò)例如下面的方法制備用有機(jī)溶劑或熱水從屬于百合科并含有本發(fā)明的化合物的植物，其部分，或者其破碎產(chǎn)物提取含有本發(fā)明的化合物的級(jí)分，并濃縮該級(jí)分。
上述屬于百合科的植物包括屬于蘆薈屬或蔥屬的植物。蘆薈屬植物包括翠葉蘆薈(Aloe barbadensis Miller)，好望角蘆薈(Aloe feroxMiller)，非洲蘆薈(Aloe africana Miller)，大蘆薈(Aloe arborescensMiller var.natalensis Berger)，穗花蘆薈(Aloe spicata Baker)等等。本發(fā)明的化合物或者含有該化合物的組合物的制備中，雖然可以使用上述植物整體，但是優(yōu)選使用其葉肉(清澈凝膠部分)。優(yōu)選使用勻漿器或類似儀器將這樣的植物或者其部分破碎從而液化。通過(guò)使用有機(jī)溶劑或熱水從破碎產(chǎn)物提取本發(fā)明的化合物或者含有該化合物的組合物。有機(jī)溶劑的例子包括醇類例如甲醇，乙醇和丁醇等；酯類例如乙酸甲酯，乙酸乙酯，乙酸丙酯和乙酸丁酯等等；酮類例如丙酮和甲基異丁基酮等；醚類例如乙醚和石油醚等；烴類例如己烷，環(huán)己烷，甲苯和苯等；鹵代烴例如四氯甲烷，二氯甲烷和氯仿等；雜環(huán)化合物例如吡啶等；二元醇例如乙二醇等；多元醇例如聚乙二醇等；腈類例如乙腈等，這些溶劑的混合物等。此外，這些溶劑可以是無(wú)水的或含水的。這些溶劑中，乙酸乙酯/丁醇(3∶1)的混合物和氯仿/甲醇(2∶1)的混合物是特別優(yōu)選的。
作為提取方法，能使用通常用于提取植物成分的方法。通常使用的是，例如，1-300份質(zhì)量比的有機(jī)溶劑和1份質(zhì)量比的新鮮植物或干植物在溶劑的沸點(diǎn)溫度或者低于該沸點(diǎn)溫度下加熱回流并攪拌或搖動(dòng)的方法，或者室溫下進(jìn)行超聲萃取的方法。通過(guò)利用合適的方法例如過(guò)濾或離心從提取液中分離不溶物質(zhì)，能獲得粗提物。
通過(guò)各種類型的色譜法能將粗提物純化，例如正相或反相硅膠柱色譜法。當(dāng)在正相硅膠柱色譜法中使用氯仿/甲醇混合物的梯度作為洗脫劑時(shí)，用氯仿∶甲醇大約等于5∶1的混合比例洗脫本發(fā)明的化合物。此外，當(dāng)在反相硅膠柱色譜法中使用甲醇/水混合物的梯度作為洗脫劑時(shí)，用大約95％濃度的甲醇洗脫本發(fā)明的化合物。
獲得的級(jí)份能通過(guò)HPLC或類似方法進(jìn)一步加以純化。
通過(guò)例如下文實(shí)施例中所述方法能證實(shí)如上所述獲得的化合物或者含有該化合物的混合物確實(shí)含有本發(fā)明的化合物。通過(guò)例如13C-NMR或類似方法能證實(shí)所述化合物是在苷元部分與葡萄糖鍵合的糖苷，或者苷元部分是4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇。
本發(fā)明人先前還發(fā)現(xiàn)3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇還具有血液葡萄糖水平改善作用，并且在下文提到的制備實(shí)施例1中純化庫(kù)拉索蘆薈的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇，使用參考實(shí)施例1中所示血液葡萄糖水平改善作用的評(píng)估作為指標(biāo)。但是，也可以通過(guò)使用胰腺功能改善作用，特別是胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能改善作用作為指標(biāo)進(jìn)行純化。
通過(guò)縮合D-葡萄糖和4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇也能制備本發(fā)明的化合物。4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇能通過(guò)從植物提取并純化來(lái)獲得。通過(guò)例如Jikken Kagaku Koza(實(shí)驗(yàn)化學(xué)報(bào)告)，第四版，vol.26，1992(p.272，p.297和p.342所述)描述的方法的組合。能將D-葡萄糖和4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇縮合。也就是說(shuō)，將D-葡萄糖完全乙?；缓髮悩?gòu)位置轉(zhuǎn)化為α-溴化物。接著，4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇和α-溴化物在乙醚中反應(yīng)得到β-糖基化產(chǎn)物。然后在甲醇鈉/甲醇混合物中將乙酰基水解，獲得目的產(chǎn)物。
本發(fā)明的化合物具有胰腺功能改善作用，特別是胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能改善作用。它能被用作用于改善胰腺功能，特別是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的藥物和食品或飲料的活性成分。在本發(fā)明中，胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)作用意思是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞不會(huì)因?yàn)楦鞣N原因而變性，或者防止胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞產(chǎn)生胰島素能力的降低。此外，胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善意思是加強(qiáng)其中產(chǎn)生胰島素能力降低的胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的產(chǎn)生胰島素的能力。通過(guò)顯微鏡觀察動(dòng)物的胰腺組織切片或者測(cè)定血清胰島素含量，能評(píng)價(jià)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的變性，或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善。
通過(guò)上述作用，本發(fā)明的化合物能防止胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞產(chǎn)生胰島素能力的降低，或者加強(qiáng)其中產(chǎn)生胰島素能力降低的胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的產(chǎn)生胰島素的能力。
作為下面提到的實(shí)施例中使用的db/db小鼠，隨著周齡老化而觀察到胰腺病變(Science，153，1127-1128，1966)。雖然有人報(bào)道過(guò)，如果聯(lián)合對(duì)這些小鼠施用N-乙?；?L-半胱氨酸，維生素C和維生素E作為具有抗氧化作用的化合物，能部分防止胰腺中β細(xì)胞數(shù)目的減少(Diabetes，48，2398-2406，1999)，即使單有N-乙?；?L-半胱氨酸的劑量是100克/60千克，預(yù)計(jì)需要非常大劑量的給藥。與此相反，根據(jù)本發(fā)明，預(yù)計(jì)用小劑量就能獲得胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能改善作用。
本發(fā)明的藥物能用作藥物的有效成分用于預(yù)防或治療胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞機(jī)能減退引起的疾病，例如，急性胰腺炎，慢性胰腺炎，I型糖尿病，和II型糖尿病中的胰腺功能失調(diào)，與胰島素分泌老年減退相關(guān)的胰腺機(jī)能減退，等等。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的化合物表現(xiàn)出低毒性，它也能與治療胰腺癌的抗腫瘤藥物一起使用。優(yōu)選地，用于改善伴隨胰島素產(chǎn)生能力降低的疾病中的高血糖的藥物不包括在本發(fā)明的藥物的范圍內(nèi)。
此外，因?yàn)閹?kù)拉索蘆薈的葉皮含有蘆薈甙和具有緩瀉藥活性的蘆薈-大黃素，一般認(rèn)為它是不適合作為不期望緩瀉藥活性的藥物和食品或飲料。另一方面，通過(guò)從庫(kù)拉索蘆薈的葉肉(清澈凝膠部分)提取和分級(jí)分離能獲得根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案的本發(fā)明的組合物，從食品的實(shí)驗(yàn)角度其能被安全攝取，因此它不含有蘆薈甙和蘆薈-大黃素，但是含有有效量的本發(fā)明的化合物。因此，本發(fā)明的組合物也是優(yōu)選的用于保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或者改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的藥物的活性成分。
本發(fā)明的化合物或組合物本身能用作本發(fā)明的藥物和食品或飲料的活性成分。因此，本發(fā)明的組合物可以是溶液，并且在以常規(guī)方法凍干或噴霧干燥之后能被貯存并且以粉末使用。
作為本發(fā)明的藥物，本發(fā)明的化合物或組合物或者與藥學(xué)可接受載體混合的那些產(chǎn)品能以口服或腸胃外方式對(duì)包括人的哺乳動(dòng)物給藥。在本發(fā)明的藥物中，本發(fā)明的化合物可以是藥學(xué)可接受鹽。藥學(xué)可接受鹽的例子包括金屬鹽(無(wú)機(jī)鹽)和有機(jī)鹽，包括，例如，“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，17版，p.1418，1985中列出的那些。具體的例子包括但不限于，無(wú)機(jī)酸鹽，例如，鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，磷酸氫鹽，和氫溴酸鹽，和有機(jī)酸鹽，例如，蘋果酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽，琥珀酸鹽，檸檬酸鹽，乙酸鹽，乳酸鹽，甲磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，撲酸鹽，水楊酸鹽和硬脂酸鹽。此外，所述鹽可以是金屬鹽，例如，鈉鹽，鉀鹽，鈣鹽，鎂鹽，鋁鹽等，或者與氨基酸的鹽，例如賴氨酸鹽。此外，上述化合物或者其藥學(xué)可接受鹽的溶劑合物例如水合物等也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的藥物的劑型沒(méi)有特別限制并且能根據(jù)目的適當(dāng)?shù)剡x擇。其具體的例子包括片劑，丸劑，粉末，溶液，混懸劑，乳劑，顆粒劑，膠囊劑，糖漿，栓劑，注射劑，膏劑，貼劑，滴眼劑，滴鼻劑等等。制備時(shí)，可以使用用于內(nèi)部器官例如胰腺的疾病的通常的治療性或預(yù)防性藥物中一般使用的添加劑作為藥學(xué)載體，例如，賦形劑，粘合劑，崩解劑，潤(rùn)滑劑，穩(wěn)定劑，矯味劑，稀釋劑，表面活性劑和注射用溶劑等等。此外，只有不降低本發(fā)明的效果，本發(fā)明的化合物或組合物能與具有胰腺病改善或預(yù)防作用的其它藥物聯(lián)合使用。
雖然本發(fā)明的藥物中含有的本發(fā)明的化合物或組合物的量沒(méi)有特別限制并且能適當(dāng)?shù)剡x擇，所述量可以是，例如，以本發(fā)明的化合物計(jì)，0.001％至10％質(zhì)量比，優(yōu)選0.01％至1％質(zhì)量比，特別優(yōu)選0.05％至1％質(zhì)量比。
此外，本發(fā)明的藥物能防止胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能減退引起的各種疾病，并發(fā)癥等等，并且能減小這些疾病，并發(fā)癥等的危險(xiǎn)。
胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能減退引起的這樣的各種疾病和并發(fā)癥的例子包括神經(jīng)失調(diào)，腎病，視網(wǎng)膜病，白內(nèi)障，大血管病，糖尿病等。
本發(fā)明的藥物的給藥時(shí)間沒(méi)有特別限制并且能根據(jù)治療目標(biāo)疾病的方法適當(dāng)?shù)剡x擇。此外，優(yōu)選根據(jù)劑型，患者的年齡，性別和其它情況，患者癥狀的嚴(yán)重程度等確定給藥途徑。
根據(jù)給藥方案，患者的年齡和性別，疾病的嚴(yán)重程度，患者的其它條件等適當(dāng)選擇本發(fā)明的藥物中活性成分的劑量。作為暫定劑量，作為活性成分的本發(fā)明的化合物的量通常選自優(yōu)選0.01至10毫克/千克/天，更優(yōu)選0.1至1毫克/千克/天的范圍。此外，當(dāng)使用本發(fā)明的組合物時(shí)，作為暫定劑量，組合物的干重選自優(yōu)選0.1至1000毫克/千克/天，更優(yōu)選1至100毫克/千克/天的范圍。在任何情況下，可以每天一次或者分為幾部分幾次給藥。
本發(fā)明的化合物或組合物可以加給食品或飲料。食品或飲料的形式和性質(zhì)沒(méi)有特別限定，只要不降低活性成分的作用。食品或飲料可以口攝取，并且可以通過(guò)使用食品或飲料通常使用的原料以常規(guī)方法來(lái)制備，除了加入上述活性成分。
本發(fā)明的食品或飲料中含有的本發(fā)明的化合物或組合物的量沒(méi)有限制并且能適當(dāng)?shù)剡x擇。例如，食品或飲料中含有的本發(fā)明的化合物或組合物的量可以是以的本發(fā)明的化合物的量計(jì)，0.0001％至1％質(zhì)量比，優(yōu)選0.001％至1％質(zhì)量比，特別優(yōu)選0.005％至1％質(zhì)量比。
本發(fā)明的食品或飲料能用于應(yīng)用胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善作用的各種應(yīng)用。例如，其能用作適合“胰島素產(chǎn)量低的那些人群”，“胰島素功能低的那些人群”，“開(kāi)始關(guān)心他們的胰腺功能的那些人群”的食品或飲料，用作用于降低或減少胰腺功能減退引起的與生活方式相關(guān)的疾病例如糖尿病和過(guò)量攝入酒和壓抑引起的胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)因素的食品或飲料。
關(guān)于本發(fā)明的食品或飲料，“胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善”的表達(dá)方式意思是，改善或防止胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的功能減退引起的各種健康損害。說(shuō)明書中例舉的“胰島功能的保護(hù)”，“胰島功能的改善”，“β細(xì)胞功能的保護(hù)”，“β細(xì)胞功能的改善”，“胰島素產(chǎn)生的增強(qiáng)”，“胰島素產(chǎn)生降低的防止”，“胰島素活性的增強(qiáng)”，“胰島素活性降低的防止”等視為與上述“胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善”具有相似含義的術(shù)語(yǔ)。
此外，本發(fā)明的食品或飲料用于預(yù)防胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能減退引起的疾病，例如，急性胰腺炎，慢性胰腺炎，I型糖尿病，和II型糖尿病中的胰腺功能失調(diào)，與胰島素分泌老年減退相關(guān)的胰腺機(jī)能減退，等等。此外，本發(fā)明的食品或飲料能用于預(yù)防胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能減退引起的各種疾病，并發(fā)癥等等，并且能減小這些疾病，并發(fā)癥等的危險(xiǎn)。此外，因?yàn)楸景l(fā)明的化合物表現(xiàn)出低毒性，本發(fā)明的食品或飲料也能與治療胰腺癌的抗腫瘤藥物一起使用。
胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能減退引起的這樣的各種疾病和并發(fā)癥的例子包括神經(jīng)失調(diào)，腎病，視網(wǎng)膜病，白內(nèi)障，大血管病，糖尿病等。
本發(fā)明的食品或飲料優(yōu)選附加本食品或飲料用于胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善這樣的說(shuō)明作為食品或飲料在市場(chǎng)上出售。例如，“含有具有胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善作用的化合物的食品或飲料指示是‘用于胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善’”，“含有植物提取物的食品或飲料指示是‘用于胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善’”，“含有蘆薈提取物的食品或飲料指示是‘用于胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善’”等等。
如上所述用于這樣的說(shuō)明的語(yǔ)言不必須限制于“用于胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善”這樣的表述，表達(dá)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善作用的其他表達(dá)方式都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，作為這樣的語(yǔ)言，也可以是使消費(fèi)者認(rèn)識(shí)到胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞的保護(hù)作用或者胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的改善作用的各種用途為基礎(chǔ)的說(shuō)明。例子包括“適合具有低胰島素產(chǎn)生能力的那些人群”，“適合具有低胰島素功能的那些人群”，“用于降低或減少胰島素活性或產(chǎn)生減小引起的與生活方式相關(guān)的疾病例如糖尿病和過(guò)量攝入酒和壓抑引起的胰腺炎的風(fēng)險(xiǎn)因素”等的說(shuō)明。
上述術(shù)語(yǔ)“指示”包括提醒消費(fèi)者上述用途的所有作用，不管指示的目的，內(nèi)容，實(shí)物物品，介質(zhì)等，提醒或類推上述用途的任何說(shuō)明都落在本發(fā)明的“指示”的范圍內(nèi)。然而，優(yōu)選以使消費(fèi)者直接認(rèn)識(shí)到上述用途的表達(dá)作出說(shuō)明。具體的例子包括指示對(duì)與本發(fā)明的食品或飲料相關(guān)的貨品或貨品包裝上的上述應(yīng)用的作用，以分配或運(yùn)輸或進(jìn)口說(shuō)明有上述用途的貨物或包裝的目的的分配或運(yùn)輸或進(jìn)口的作用，展示或散布與指示有上述用途的貨物相關(guān)的廣告，價(jià)目表或商業(yè)文件，或者通過(guò)電子方法(互聯(lián)網(wǎng)等)提供包括指示有上述用途的那些內(nèi)容的信息等等。
所述指示優(yōu)選是行政核準(zhǔn)等的指示(例如以核準(zhǔn)為基礎(chǔ)形式的指示，在行政部門提供的各種合法體系的基礎(chǔ)上定性的)，特別優(yōu)選是銷售點(diǎn)廣告材料上的說(shuō)明，例如包裝，容器，目錄，小冊(cè)子和POP，其它文件等。
指示的例子進(jìn)一步包括健康食品，功能食品，腸道營(yíng)養(yǎng)食品，特殊節(jié)食用途的食品，有營(yíng)養(yǎng)功能要求的食品，準(zhǔn)藥物指示等以及健康、勞動(dòng)和福利部準(zhǔn)許的指示，例如特殊健康用途食品體系和類似體系基礎(chǔ)上準(zhǔn)許的指示。后者的例子包括作為特殊健康用途食品的說(shuō)明，作為有定性健康要求的特殊健康用途食品的說(shuō)明，影響身體結(jié)構(gòu)和功能的說(shuō)明，減小疾病風(fēng)險(xiǎn)聲明的說(shuō)明等第，更精確地，典型的例子包括作為健康促進(jìn)法(Japan Ministry of Health，Labor andWelfare，Ministerial ordinance No.86，2003年4月30日)實(shí)施細(xì)則中提供的特殊健康用途的食品的說(shuō)明(健康用途的具體說(shuō)明)和類似說(shuō)明。
實(shí)施例本發(fā)明將參照下面的實(shí)施例更具體地加以解釋。但是，本發(fā)明的范圍不局限于下面的實(shí)施例。
下面描述從庫(kù)拉索蘆薈制備3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的例子。
如下所述從庫(kù)拉索蘆薈提取3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇并純化。
使用勻漿器，加入100升乙酸乙酯/丁醇混合物(3∶1)并攪拌，將100千克庫(kù)拉索蘆薈的葉肉(清凝膠部分)的量液化。
將混合物靜置過(guò)夜，分離乙酸乙酯/丁醇混合物和含水層，并回收乙酸乙酯/丁醇混合物。減壓下將乙酸乙酯/丁醇混合物濃縮獲得的來(lái)自這種乙酸乙酯/丁醇混合物的提取物重13.5克。
對(duì)下文參考實(shí)施例1中所述葡萄糖小鼠模型評(píng)價(jià)上述含水層和乙酸乙酯/丁醇混合物提取物的高血糖改善作用，對(duì)乙酸乙酯/丁醇混合物提取物觀察到該作用。因此，試圖分離和純化提取物中的成分。首先，通過(guò)薄層色譜法(Merck Ltd.，Silica gel 60F254和RP-18F2543)檢查上述提取物。結(jié)果是，證明在正相硅膠柱色譜上使用氯仿/甲醇混合物的分離方法是合適的。因此，在裝填有400克硅膠60(Merck Ltd.)的柱子上加載溶解于1毫升氯仿/甲醇混合物(1∶1)中的13克上述提取物的溶液，使成分吸附到柱子上，然后，用梯度法用氯仿/甲醇混合物洗脫成分，其中洗脫液中甲醇濃度是梯度遞增的(氯仿∶甲醇的混合比例＝100∶1，25∶1，10∶1，5∶1和1∶1)，并且對(duì)于上述混合物的每一個(gè)混合比例都將洗出液分級(jí)分離。去除溶劑之后從級(jí)分獲得的粗純化產(chǎn)物產(chǎn)率分別是1.44，3.0，1.17，1.28，2.27克。利用上述動(dòng)物模型的方法證實(shí)，這些級(jí)分中，用氯仿∶甲醇＝5∶1的混合物洗脫的級(jí)分中含有活性成分(粗純化產(chǎn)物A)。薄層色譜分析證明沒(méi)有蘆薈甙或蘆薈-大黃素存在。
此外，為了從上述粗純化產(chǎn)物A分離和純化活性成分，利用薄層色譜檢查這種粗純化產(chǎn)物A(Merck Ltd.，Silica gel 60F254和RP-18F2543)。結(jié)果是，證明在反相硅膠柱色譜上使用甲醇的分離方法是合適的。因此，將上述粗純化產(chǎn)物A溶解于1毫升氯仿/甲醇混合物(1∶1)中，并且加載到裝填有180克COSMOSIL140(Nacalai Tesque，Inc.)的柱子上，使成分吸附到柱子上。然后，依次用600毫升85％甲醇溶液，600毫升95％甲醇溶液，和100毫升100％甲醇進(jìn)行洗脫。在用95％甲醇洗脫出的級(jí)分中濃縮并分離3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇，去除溶劑之后重370毫克。此后，將該產(chǎn)物稱作化合物1。
因?yàn)樵谝员由V分析為基礎(chǔ)的測(cè)定中化合物1的Rf值非常接近于β-谷甾醇糖苷的Rf，預(yù)計(jì)它是其中一分子的糖與苷元部分鍵合的糖苷。此外，為了測(cè)定化合物1的糖成分，使化合物1進(jìn)行甲醇醇解，然后制備成TMS衍生物并且進(jìn)行GC-MS測(cè)定。結(jié)果在對(duì)化合物1的糖部分的TMS衍生物的測(cè)定中，在14.28，14.61，和16.34分鐘的滯留時(shí)間出現(xiàn)主峰，這基本上與樣品葡萄糖(Nacalai Tesque，Inc.)14.27，14.60，和16.33分鐘主峰的滯留時(shí)間相吻合。此外，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相應(yīng)于樣品半乳糖(Kishida Chemical Co.，Ltd.)和樣品木糖(Kishida ChemicalCo.，Ltd.)的主峰的峰。因此，證明化合物1這包含的糖的類型是葡萄糖。
從上述結(jié)果估計(jì)，化合物1是其中一分子的葡萄糖與苷元部分鍵合的糖苷。但是當(dāng)通過(guò)13C-NMR(125MHz，CDCl3)測(cè)定化合物1時(shí)，證實(shí)存在污染物。因此，考慮到應(yīng)該要求進(jìn)一步純化來(lái)測(cè)定其結(jié)構(gòu)。因此，將化合物1甲醇化后乙?；缓笞C實(shí)苷元部分的結(jié)構(gòu)以及苷元部分和糖的結(jié)合位點(diǎn)。下面描述其方法。
將50毫克量的化合物1溶解于含有5％鹽酸的甲醇(50毫升)中，該溶液在加熱下回流6小時(shí)甲醇醇解，干燥，得到殘余物(大約30毫克)。通過(guò)硅膠柱色譜法(己烷∶氯仿＝9∶1)將殘余物純化，得到化合物2(10毫克)。向這種化合物2(5毫克)加乙酸酐和吡啶(各2滴)，并且在70℃下加熱0分鐘乙?；?，然后蒸發(fā)反應(yīng)混合物的溶劑，得到化合物3。圖1和圖2分別給出GC-MS和13C-NMR(125MHz，CDCl3)對(duì)該化合物分析的結(jié)果。測(cè)定條件和結(jié)果如下。從蘆薈提取制備用作參考物質(zhì)的3-乙酰氧基-4-甲基-麥角甾-7-烯，將提取物純化，通過(guò)13C-NMR證實(shí)純化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)并且將其乙?；?。
；C-136.8，C-227.3，C-378.7，C-437.0，C-546.9，C-626.8，C-7117.4，C-8139.4，C-949.7，C-1034.9，C-1121.6，C-1239.7，C-1343.6，C-1455.1，C-1523.1，C-1628.2，C-1756.3，C-1812.0，C-1914.2，C-2036.5，C-2119.0，C-2233.9，C-2330.6，C-2439.1，C-2532.6，C-2620.4，C-2718.4，C-2815.6，C-2915.3[GC-MS]儀器GC-17A/GCMS5050A(SHIMADZU)GC柱NEUTRA BOND-5(GL Scienses)柱溫100℃(2min)→(10℃/min)→300℃(28min)注樣溫度250℃載體氣體He(1.3mL/min)界面溫度300℃MS型EI離子化能量70eV[結(jié)果]參考物質(zhì)3-乙酰氧-4-甲基-麥角甾-7-烯tR[min]＝39.4；m/z 456[M]+，441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+，381[M-CH3-AcOH]+化合物3tR[min]＝39.2；m/z 456[M]+，441[M-CH3]+，396[M-AcOH]+，381[M-CH3-AcOH]+化合物3的NMR測(cè)定結(jié)果與文獻(xiàn)中給出的3-乙酰氧基-4-甲基-麥角甾-7-烯的值相吻合(Yukagaku(Oil Chemistry)，Vol.36，No.5，pp.301-319，1987)。這些結(jié)果表明化合物2是4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇。此外，作為FAB-MS測(cè)定的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)化合物1的分子量是576。當(dāng)化合物2(苷元部分)與葡萄糖縮合時(shí)，得到的化合物的分子量是414(化合物2)+180(葡萄糖)-18(水)＝576，這與化合物1的分子量相吻合。
上面的結(jié)果表明化合物1具有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的結(jié)構(gòu)。
下面給出化合物的分子式，分子量和化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
(化合物1)
分子式C35H60O6分子量576化學(xué)結(jié)構(gòu)式下面的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(1) (化合物2)分子式C29H50O分子量414化學(xué)結(jié)構(gòu)式下面的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(2) (化合物3)分子式C31H52O2分子量456化學(xué)結(jié)構(gòu)式下面的化學(xué)結(jié)構(gòu)式(3)
[制備實(shí)施例2]將庫(kù)拉索蘆薈的葉肉(清凝膠部分)加熱干燥，對(duì)0.3克破碎的干庫(kù)拉索蘆薈粉末加60毫升60％，80％或100％乙醇，混合物在60℃下加熱回流1小時(shí)。將提取物以1500rpm離心20分鐘，并將上清液減壓濃縮完全去除乙醇，從而得到粗提物。用60％，80％或100％乙醇提取獲得的粗提物的干重分別是65，42和8毫克。薄層色譜法證實(shí)這些粗提物含有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇。
將庫(kù)拉索蘆薈的葉肉(清凝膠部分)加熱干燥，對(duì)0.3克破碎的干庫(kù)拉索蘆薈粉末加60毫升水，混合物在95℃下加熱回流5小時(shí)。將提取物以1500rpm離心20分鐘，并將上清液凍干，得到75毫克粗提物。薄層色譜法證實(shí)該粗提物含有3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇。
將庫(kù)拉索蘆薈的葉肉(清凝膠部分)加熱，破碎并干燥，對(duì)21千克這樣制備的庫(kù)拉索蘆薈粉末加90升氯仿/甲醇混合物(2∶1)，然后在室溫下在混合物中浸漬過(guò)夜并過(guò)濾收集，向過(guò)濾得到的殘余物再加90升氯仿/甲醇混合物(2∶1)。該過(guò)程共重復(fù)四次。將得到的濾液(350升)在28℃下濃縮最后得到784克粗提物。向780克量的這種粗提物加2升氯仿/甲醇混合物(2∶1)，攪拌1小時(shí)并過(guò)濾回收氯仿/甲醇混合物層(A)。向過(guò)濾得到的殘余物依次加2.5升水和2升乙酸乙酯并攪拌小時(shí)，并且回收乙酸乙酯層(B)。向剩下的含水層再加5升氯仿并攪拌1小時(shí)，并且回收氯仿層(C)。
將回收的有機(jī)溶劑提取物A，B，和C混合，在23℃下濃縮，并加載到硅膠柱(玻璃柱52mm×350mm，裝填材料IR-63/210-W(DaisoCO.，Ltd.))上。接著，通過(guò)薄層色譜法監(jiān)測(cè)洗出液，10升己烷/氯仿混合物(1∶1)，10升氯仿，20升氯仿/甲醇混合物(10∶1)，和20升氯仿/甲醇混合物(5∶1)順序通過(guò)柱子，以使用的洗脫溶劑的順序回收級(jí)分1(大約1升)，級(jí)分2(大約1.5升)，級(jí)分3(大約1.5升)，和級(jí)分4(大約1.5升)。
薄層色譜證實(shí)，在這些級(jí)分中，級(jí)分3含有目標(biāo)糖苷，然后去除級(jí)分3的溶劑，得到131.6克粗提物。將130克量的粗提物加載到硅膠柱(玻璃柱70mm×500mm，裝填材料SP-60-40/60(Daiso CO.，Ltd.))上，并且在10kgf.cm-2壓力和40毫升/分鐘流速條件下，用10升氯仿/甲醇混合物(30∶1)，50升氯仿/甲醇混合物(20∶1)，10升氯仿/甲醇混合物(10∶1)和10升氯仿/甲醇混合物(1∶1)作為洗脫溶劑順序洗脫。使用級(jí)分收集器以100毫升為一級(jí)分將洗出液分級(jí)分離，收集到級(jí)分1-8。
通過(guò)薄層色譜法檢查收集到的級(jí)分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)目標(biāo)糖苷和污染物存在于級(jí)分7中。因此，將該級(jí)分濃縮，再次加載到硅膠柱(玻璃柱70mm×500mm，裝填材料SP-60-40/60(Daiso CO.，Ltd.))上，并且在10kgf.cm-2壓力和40毫升/分鐘流速條件下，用10升氯仿/甲醇混合物(20∶1)和10升氯仿/甲醇混合物(10∶1)作為洗脫溶劑順序洗脫。結(jié)果制備出25.3克3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇，這是用氯仿/甲醇混合物(10∶1)洗出的級(jí)分中含有的目標(biāo)糖苷。
為了評(píng)價(jià)3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的高血糖癥狀改善作用進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。
(1)樣品的制備使用上述制備實(shí)施例1中制得的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇作為試驗(yàn)樣品。
(2)試驗(yàn)方法使用6周齡雄性db/db小鼠(從Clea Japan，Inc.購(gòu)得)作為II型糖尿病小鼠模型。將這些小鼠分成小組，每組7只小鼠。將試驗(yàn)樣品溶解于DMSO，用生理鹽水將3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的濃度調(diào)節(jié)至15微克/毫升。將最終DMSO濃度調(diào)節(jié)至0.2％。用探棒對(duì)II型糖尿病小鼠模型口服給與1毫升試驗(yàn)樣品，每天一次。不含有試驗(yàn)樣品的溶液用作陰性樣品。使用Antsense II(Bayer-SankyoCo.，Ltd.)隨時(shí)間測(cè)定禁食血糖水平和隨機(jī)血糖水平。在禁食15小時(shí)后測(cè)定禁食血糖水平。
(3)高血糖改善作用圖3和4給出了施用試驗(yàn)樣品期間隨機(jī)血糖水平和禁食血糖水平隨時(shí)間的變化。在給與陰性樣品的小鼠中，對(duì)隨機(jī)血糖水平和禁食血糖水平都觀察到葡萄糖水平快速升高，而反復(fù)施用試驗(yàn)樣品的小鼠清楚地觀察到血葡萄糖水平升高的抑制作用。
為了評(píng)價(jià)3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能(胰島素產(chǎn)生能力)保護(hù)作用而進(jìn)行該試驗(yàn)，使用已知是胰腺功能減退或胰腺組織功能障礙的動(dòng)物模型的db/db小鼠。
(1)樣品的制備使用上述制備實(shí)施例1中制得的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇作為試驗(yàn)樣品。
(2)試驗(yàn)方法在該試驗(yàn)中，使用6周齡雄性db/db小鼠(從Clea Japan，Inc.購(gòu)得)。將這些小鼠分成小組，每組7只小鼠。將各試驗(yàn)樣品溶解于DMSO，用生理鹽水將濃度調(diào)節(jié)至0.1或1微克/毫升。將最終DMSO濃度調(diào)節(jié)至0.2％。用探棒對(duì)小鼠模型口服給與1毫升試驗(yàn)樣品，每天一次，給藥42天。在連續(xù)給藥的第43天用Lbis胰島素小鼠ELISA試劑盒(Shibayagi Co.，Ltd)測(cè)定血清胰島素含量。
(3)試驗(yàn)結(jié)果表1給出連續(xù)給藥樣品的第43天的血清胰島素含量。當(dāng)以1微克/動(dòng)物的濃度給與試驗(yàn)樣品1時(shí)，血清胰島素含量是用陰性試驗(yàn)品觀察到的216％這樣高，因此清楚地觀察到胰腺功能(胰島素產(chǎn)生能力)保護(hù)作用。另一方面，當(dāng)以0.1微克/動(dòng)物的濃度給藥時(shí)，沒(méi)有觀察到任何顯著效果。給藥期間，就體重和生理學(xué)觀察角度沒(méi)有發(fā)現(xiàn)副作用。
表1連續(xù)給藥第43天的血清胰島素含量

*指示存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。
在該試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇的胰腺組織保護(hù)作用而進(jìn)行該試驗(yàn)，使用已知是胰腺功能減退或胰腺組織功能障礙的動(dòng)物模型的db/db小鼠。
(1)樣品的制備使用上述制備實(shí)施例1中制得的3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇作為試驗(yàn)樣品。
(2)試驗(yàn)方法在該試驗(yàn)中，使用6周齡雄性db/db小鼠(從Clea Japan，Inc.購(gòu)得)。將這些小鼠分成小組，每組7只小鼠。將各試驗(yàn)樣品溶解于DMSO，用生理鹽水將濃度調(diào)節(jié)至0.1或1微克/毫升。將最終DMSO濃度調(diào)節(jié)至0.2％。用探棒對(duì)小鼠模型口服給與1毫升試驗(yàn)樣品，每天一次，給藥42天。在連續(xù)給藥的第43天，提取胰腺，從十二指腸分為上游，中游和下游三部分，用福爾馬林溶液固定，然后用常規(guī)方法制備石蠟塊。從石蠟塊制備切片并進(jìn)行蘇木精-伊紅染色。在顯微鏡(“ECLIPSE E600”，NIKON CORP)上使用目鏡測(cè)微尺測(cè)定胰腺三個(gè)位置的切片上存在的胰島數(shù)目，每個(gè)切片上具有最大面積胰島的面積。
(3)試驗(yàn)結(jié)果表2給出連續(xù)給藥樣品的第43天的胰腺切片上存在的胰島數(shù)目，表3給出同一天胰島的最大面積。施用試驗(yàn)樣品的小鼠的胰島數(shù)目是施用陰性樣品小鼠的胰島數(shù)目的188％，發(fā)現(xiàn)這個(gè)數(shù)目很大。類似地，施用試驗(yàn)樣品的小鼠的胰島的最大面積是施用陰性樣品小鼠的3.6倍這樣大，因此發(fā)現(xiàn)防止了由于胰腺功能障礙的胰島減少。從這些結(jié)果揭示，3-O-β-D-吡喃葡糖基-4-甲基-麥角甾-7-烯-3-醇具有保護(hù)胰腺組織特別是內(nèi)分泌腺細(xì)胞的作用。
表2受治療小鼠胰腺病理學(xué)切片中胰島的數(shù)目

*指示存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。
表3受治療小鼠胰腺病理學(xué)切片中胰島的最大面積

*指示存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。
工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的藥物和食品或飲料能安全地施用或攝入，并且具有保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞和改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能的作用。此外，根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的藥物和食品或飲料不含有不適合藥物和食品或飲料的不適合成分的蘆薈甙和蘆薈-大黃素。
權(quán)利要求
1.一種用于改善胰腺功能的藥物，其含有下面化學(xué)式(1)代表的化合物作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物，其中所述胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其含有0.001％至10％干重的所述化合物。
4.一種改善胰腺功能的藥物，其含有含有0.001％至10％干重的下面化學(xué)式(1)代表的化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分作為活性成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的藥物，其中通過(guò)保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能來(lái)改善所述胰腺功能。
6.一種用于改善胰腺功能的食品或飲料，其含有下面化學(xué)式(1)代表的化合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的食品或飲料，其中所述胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的食品或飲料，其含有0.0001％至1％干重的所述化合物。
9.一種改善胰腺功能的食品或飲料，其含有含有0.0001％至1％干重的下面化學(xué)式(1)代表的化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的食品或飲料，其中所述胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能。
11.根據(jù)權(quán)利要求6-10任一項(xiàng)的食品或飲料，其附有該食品或飲料用于改善胰腺功能的指示。
12.具有下面化學(xué)式(1)代表的結(jié)構(gòu)的化合物或者含有該化合物的組合物在制備改善胰腺功能的藥物中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13的用途，其中所述組合物是含有0.001％干重或更多的所述化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。
15.一種改善胰腺功能的方法，包括對(duì)其胰腺功能需要改善的受試者施用具有下述化學(xué)式(1)代表的結(jié)構(gòu)的化合物或者含有該化合物的組合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中所述胰腺功能的改善是保護(hù)胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞或改善胰腺內(nèi)分泌腺細(xì)胞功能。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16的用途，其中所述組合物是含有0.001％干重或更多的所述化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分。
全文摘要
3－O－β－D－吡喃葡糖基－4－甲基－麥角甾－7－烯－3－醇或者含有0.001％至10％干重的上述化合物的組合物，其是含有該化合物的百合科植物的提取物或者其級(jí)分，被用作改善胰腺功能的藥物的活性成分。
文檔編號(hào)A61K36/896GK101060850SQ20068000122
公開(kāi)日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2006年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月17日
發(fā)明者田中美順, 三澤江里子, 羽原式子, 山田宗夫 申請(qǐng)人:森永乳業(yè)株式會(huì)社