Terreumol B在制備治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物TerreumolB的新用途，具體涉及TerreumolB在制備治療胰 腺癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] XiaYin等人首次分離純化出化合物TerreumolB，并將成果發(fā)表在著名天然 產(chǎn)物雜志JournalofNaturalProduct上（HighlyOxygenatedMeroterpenoidsfrom FruitingBodiesoftheMushroomTricholomaterreum，J.Nat.Prod.，2013,76， 1365-1368)。
[0003]目前尚未有該化合物關(guān)于胰腺癌的活性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種TerreumolB的醫(yī)藥用途。
[0005] 上述目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006]TerreumolB在制備治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用，所述TerreumolB化學(xué)結(jié)構(gòu)式如 下，
[0007]
[0008] 進(jìn)一步地，所述胰腺癌為人胰腺癌MiaPaCa-2。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容。
[0010] 實(shí)施例I:TerreumolB的分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0011] TerreumolB的制備方法同文獻(xiàn)報(bào)道的制備方法（HighlyOxygenated MeroterpenoidsfromFruitingBodiesoftheMushroomTricholomaterreum,J.Nat. Prod. ，2013,76,1365-1368)。
[0012] 結(jié)構(gòu)確證：黃色粉末，分子式為C17HmO7，不飽和度為8。化合物在362和286nm 有紫外吸收。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)Sh (ppm，DMS0-d6,600MHz) :H-2 (6.42,s)，H-5 (3.58,d， J= 15. 8)，H-5(3. 01，d，J= 15. 8)，H-7(2. 82,d，J= 8. 0)，H-8(3. 75,m)，H-9(2. 44，m)，H-9(l. 80,t，J= 13. 0)，78,s)，H-15(l. 33,s)，H-16(l. 43,s)，1-0H(11. 93， s)，4-0H(5.60,s)，8-0H(5.42,s)，3-0CH3(3.97,s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，DMS0-d6， 600Hz) : 159. 3 (Ca-C)，99.I(CH，2-C)，153. 7 (C，3-C)，138. 3 (C，4-C)，30.I(CH2, 5-C)， 61. 5 (C，6-C)，70. 0 (CH，7-C)，68. 8 (CH，8-C)，43.I(CH2, 9-C)，61. 9 (C，10-C)，63. 8 (CH， 11-C)，198. 1(C，12-C)，114. 5(C，13-C)，120. 8(C，14-C)，21. 2(CH3,15-C)，17. 3(CH3,16-C)， 56. 6 (CH3,3-0CH3)。結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，因此可以確定本發(fā)明制備的化合物即為 文獻(xiàn)報(bào)道的TerreumolB。
[0013] 實(shí)施例2:TerreumolB的藥理作用試驗(yàn)
[0014] -、材料和儀器
[0015] 人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞由天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所惠贈。 TerreumoIB自制，HPLC歸一化純度大于98 %。FBS、胰蛋白酶-EDTA消化液購于美國 Hyclone公司。PBS粉購于天津潤泰科技發(fā)展有限公司。DMEM低糖培養(yǎng)液購于美國Gibco 公司。MTT購于美國Sigam公司。DMSO購于北京化工廠。注射用青霉素鈉購于哈藥集團(tuán)制 藥總廠。注射用硫酸鏈霉素購于大連美羅大藥廠。
[0016] 超凈工作臺、細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國Thermo公司），4°C冰箱、_20°C冰箱（山東青島海 爾公司），-80°C冰箱（FormaScientific)，電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津?qū)嶒?yàn)儀器廠），光學(xué)顯微 鏡（日本Olympus公司），倒置相差顯微鏡（德國Ieica公司），超速低溫離心機(jī)（日本日 立公司），酶標(biāo)儀（上?？迫A生物工程股份有限公司），E-Centrifuge(Wealtec)，微量加樣 器（德國Eppendorf)，電子恒溫水浴鍋（余姚市東方電工儀器廠），高壓滅菌鍋（山東新華 醫(yī)療器械有限公司），電子天平（上海天平儀器廠）。
[0017] 二、試驗(yàn)方法
[0018] 1、細(xì)胞培養(yǎng)：
[0019] (1)常氧培養(yǎng)：將人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞放入5 %C02、37°C、飽和濕度的CO2孵 箱中貼壁培養(yǎng)，適時(shí)換培養(yǎng)液，細(xì)胞貼壁生長融合至80 %~90 %時(shí)傳代。
[0020] (2)缺氧培養(yǎng)：將人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞放在5%C02、94%N2、l% 02、37°C、飽 和濕度的缺氧小室中培養(yǎng)。缺氧小室建立：缺氧裝置為可調(diào)式培養(yǎng)容器，有一進(jìn)氣孔和一 出氣孔。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將缺氧培養(yǎng)的細(xì)胞放入可調(diào)式培養(yǎng)容器內(nèi)，由進(jìn)氣孔充入低氧混合氣體 (5%C02+95%N2+l%O2)，測得小室內(nèi)氧氣濃度維持在1%后密閉，移入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37°C 培養(yǎng)。每24h再沖氣和換氣一次后置37°C培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)，分別在24h、48h、72h后收集各 組細(xì)胞，用于MTT實(shí)驗(yàn)。
[0021] 2、細(xì)胞增殖的檢測
[0022] (1)收集對數(shù)生長期MiaPaCa-2細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度以每 孔5XIO3個(gè)細(xì)胞接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔總體積100yL(邊緣孔用同體積的無菌PBS 填充），于5%C02、37°C、飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞形成單層后棄上清給予不同 濃度TerreumolB處理。
[0023] (2)分空白對照組（不加藥物處理的等體積培養(yǎng)液）和TerreumoIB藥物 20ymol/L、40ymol/L、80ymol/L)，每組設(shè)6個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，置入37°C，5%C02、 94%N2、l%O2的缺氧小室中分別培養(yǎng)24h、48h、72h。
[0024] (3)用PBS輕輕沖洗96孔細(xì)胞培養(yǎng)板2次后，每孔加入10yLMTT(5mg/mL)，繼續(xù) 培養(yǎng)4h后離心棄上清，每孔加入15yL的DMS0,放在搖床上振蕩15min，使結(jié)晶物充分溶 解。
[0025] (4)酶聯(lián)免疫檢測儀于570nm處測量各孔的吸光度值（A值），計(jì)算細(xì)胞增殖抑制 率。
[0026] (5)抑制率（％) =(空白對照組平均A值-藥物組平均A值）/空白對照組平均 A值X100% 〇
[0027] (6)以濃度為橫軸，抑制率（％)為縱軸繪制抑制率直方圖。
[0028] 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0029] 采用SPSS17. 0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料計(jì)量資料符合正態(tài)分布的，以均數(shù)士標(biāo) 準(zhǔn)差（S±S)表示，均數(shù)間比較采用單因素方差分析或t檢驗(yàn)，以P〈0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義。
[0030] 三、結(jié)果及結(jié)論
[0031] MTT結(jié)果顯示：（I)TerreumolB干預(yù)人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞同等時(shí)間（24h、48h、 72h)時(shí)，隨著TerreumolB濃度（在實(shí)驗(yàn)濃度范圍間內(nèi)）的增加，其所對應(yīng)的OD值越小， 表明在缺氧條件下TerreumolB對人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞干預(yù)時(shí)間相同時(shí)，隨著藥物濃 度的增加，細(xì)胞存活率降低。結(jié)果見表1 (注：aP〈〇.OlVS對照組；bP〈0. 01VS20ymol/L組； CP〈0.01VS40ymol/L組）。
[0032] (2)不同濃度的（20ymol/L、40ymol/L、80ymol/L)TerreumolB干預(yù)人胰腺 癌MiaPaCa-2細(xì)胞48h后，不同濃度作用下細(xì)胞增殖抑制率分別為（20. 13±0. 80) %、 (34. 83±0. 66) %、（45. 68±1. 45) %，抑制率隨藥物濃度增加呈上升趨勢，組間差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈〇. 05)。80ymol/L的TerreumolB干預(yù)胰腺癌MiaPaCa-2 細(xì)胞 24h、 48h、72h后，MiaPaCa-2 細(xì)胞生長抑制率分別為（38. 78±0. 92) %、（45. 68±1. 45) %、 (55. 95±2. 20) %，呈時(shí)間依賴性增高，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0. 05)。結(jié)果見表2(注： aP〈0.OlVS對照組；bP〈0. 01VS20ymol/L組；。P〈0.OlVS40ymol/L組）。
[0033] 結(jié)論，TerreumolB對缺氧培養(yǎng)條件下人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞有明顯的增殖抑 制作用，隨著TerreumolB濃度的增加和作用時(shí)間的延長，抑制作用愈明顯，S卩在一定濃度 范圍內(nèi)存在時(shí)間-劑量依賴性。這可能成為胰腺癌治療的另一新思路。
[0034] 表ITerreumolB對人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞生長的影響（n= 6, _x±s:)
[0035]
[0036] 表2TerreumolB對人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞生長抑制率的影響（n= 6,X土s)
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. TerreumolB在制備治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用，所述TerreumolB化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下，2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的TerreumolB在制備治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于： 所述胰腺癌為人胰腺癌MiaPaCa-2。
【專利摘要】本發(fā)明公開了Terreumol？B在制備治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用，屬于藥物領(lǐng)域。Terreumol？B對缺氧培養(yǎng)條件下人胰腺癌MiaPaCa-2細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用，隨著Terreumol？B濃度的增加和作用時(shí)間的延長，抑制作用愈明顯，即在一定濃度范圍內(nèi)存在時(shí)間-劑量依賴性，可以進(jìn)一步研究開發(fā)成制備治療胰腺癌的藥物。
【IPC分類】A61K31/336, A61P35/00
【公開號】CN105030751
【申請?zhí)枴緾N201510579848
【發(fā)明人】趙東順
【申請人】趙東順
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年9月13日