專利名稱：槭樹科槭樹屬植物的提取物及其提取方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物提取物及其提取方法與應用；特別是涉及槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物及其提取方法，以及該提取物在醫(yī)藥領(lǐng)域的用途。
背景技術(shù)：
脂肪酸合酶，原稱脂肪酸合成酶，(EC 2.3.1.85，fatty acid synthase，縮寫為FAS)，動物體內(nèi)的脂肪酸合酶稱為I型FAS，原核生物及植物中的脂肪酸合酶稱為II型FAS。國內(nèi)外基礎(chǔ)研究表明，脂肪酸合酶是可以用于治療目的的潛在靶位。
目前為止，已報道的脂肪酸合酶抑制劑較少，只有合成的C75(Kuhaida F.P.，PizerE.S.，Li J.N.，et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，97，3450-3454(2000))，較早發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)物淺藍菌素(cerulenin)(Vance D.，Goldberg I.，Mitsuhashi O.et al.Biochem BiophysRes Commun.48，649-656(1972))和綠茶中的酯型兒茶素EGCG(Wang X.，Tian W.X.Biochem.Biophys.Res.Commun，288(5)1200-1206(2001))和ECG(Wang X.，SongK.S.，Guo Q.X.，et al.Biochem Pharmacol，662039-2047(2003))。這些抑制劑所具有的共同缺點是抑制活性不夠高，應用價值受到局限，因此尋找到抑制活性高的脂肪酸合酶抑制劑具有重要的實際應用價值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種對脂肪酸合酶抑制活性高的槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物及其提取方法。
本發(fā)明所提供的槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物，是將槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物以水-乙醇或水-丙酮為溶劑，采用微波提取方法得到的。
優(yōu)選的槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物為韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭或歐亞槭。
該提取物的提取方法，包括如下步驟1)以水-乙醇或水-丙酮為溶劑，將溶劑與槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的葉子或翅果混合，溶劑與葉子或翅果的重量比為8-30∶1。
2)輸入微波進行提取，收集提取液，去除溶劑得到所述提取物。
其中，在水-乙醇或水-丙酮中，乙醇或丙酮的體積百分數(shù)為50-70％。
微波提取的微波頻率為2450-2500MHz；微波功率≥700W。微波提取的時間為8-60秒；占空比3-5％；微波提取的次數(shù)為2-4次。
上述微波提取后進行過濾，保留濾液并濃縮；濃縮的方法為減壓下低溫蒸發(fā)，目的是除去其中的有機溶劑。
為得到更好的純化效果，還可對經(jīng)過濾和濃縮得到的有效物進一步處理，方法為將提取物用乙酸乙酯進行萃取，除去有機溶劑后經(jīng)干燥得到固態(tài)槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供本發(fā)明提取物的用途。
經(jīng)發(fā)明人實驗證實，本發(fā)明槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物對脂肪酸合酶具有很高的抑制活性，可以應用在以脂肪酸合酶為靶點的相關(guān)疾病的預防及輔助治療等方面，作為控制體重、防治與肥胖相關(guān)的疾病等方面藥物的活性成分，在制備減肥藥物中得到應用。
同時，本發(fā)明人還證實，本發(fā)明槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物對多種腫瘤細胞均具有較強的抑制生長的作用，可在制備防治癌癥的藥物中發(fā)揮巨大作用。
本發(fā)明采用微波協(xié)助萃取法從槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物中提取得到一種具有較高的脂肪酸合酶抑制活性的提取物，該提取物可在制備減肥藥物、防治癌癥的藥物中得到廣泛應用，具有很高的藥用價值。同時，本發(fā)明通過選擇適當?shù)奶崛∪軇⒉üβ?、微波頻率、微波處理時間，占空比等因素將槭樹屬植物葉中有效物的提取時間縮短到10-16秒，提取方法簡單、效率高，充分體現(xiàn)了微波工藝的巨大優(yōu)勢，極具應用價值。
具體實施例方式
下述實施例中，所用的脂肪酸合酶均為用常規(guī)方法(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996，不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系，生物化學雜志，12(2)234-236)自新鮮鴨肝中分離提純的，并經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測為單一帶。
脂肪酸合酶活性采用乙酰輔酶A、丙二酸單酰輔酶A、NADPH為底物的標準測活方法測定(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學雜志，12(2)234-236)。
實施例1、韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉中有效物質(zhì)的提取將10月份采集的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉洗凈，自然晾干或低溫烘干(＜50℃)后將其粉碎，用下述方法提取有效物用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百份數(shù)為70％)分別與上述粉碎的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭，歐亞槭的干葉按重量份數(shù)比20∶1混合，經(jīng)微波處理提取16秒。采用的微波頻率2450MHz，微波輸出功率700W，占空比4％。將得到的提取液過濾，在同樣條件下再提取3次，過濾后，將三次濾液合并，(減壓)低溫蒸發(fā)濃縮，除去其中的溶劑，得到有效物質(zhì)浸膏，即脂肪酸合酶抑制劑。
實施例2、韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉中有效物質(zhì)的提取將10月份采集的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉洗凈，自然晾干或低溫烘干(＜50℃)后將其粉碎，用下述方法提取有效物用丙酮-水混合溶劑(丙酮的體積百份數(shù)為60％)分別與上述粉碎的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭干葉按重量份數(shù)比25∶1昆合，轉(zhuǎn)入玻璃容器，微波提取12秒。微波輸出功率為800W，微波頻率同上，占空比5％。將處理溶液過濾，在同樣條件下再加入丙酮-水混合溶劑對殘渣再提取，反復3次，過濾后，將三次濾液合并，(減壓)低溫蒸發(fā)濃縮，除去其中的有機溶劑，得到有效物質(zhì)水相。
可對水相中的有效物進一步濃縮，具體方法為先用等體積的石油醚分3-4次進行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)和色素，再用乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯提取液(減壓)低溫蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將此浸膏進一步(真空)干燥可得到固態(tài)物質(zhì)。
實施例3、韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭翅果中有效物質(zhì)的提取將10月份采集的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭翅果洗凈，自然晾干或低溫烘干(＜50℃)后將其粉碎，用下述方法提取有效物用乙醇-水混合溶劑(乙醇與水的體積份數(shù)比為60∶40)分別與上述粉碎的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭翅果按重量份數(shù)比10∶1混合，轉(zhuǎn)入玻璃容器，微波提取20秒，微波輸出功率為700W，微波頻率2500MHz，占空比3.6％。溶液過濾，在同樣條件下再提取3次，過濾后，將三次濾液合并，(減壓)低溫蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑，得到含有效物質(zhì)的水相，可對水相中的有效物進一步濃縮。具體方法為用乙酸乙酯進行萃取3次，將合并的乙酸乙酯提取液(減壓)低溫蒸發(fā)濃縮，除去有機溶劑得到經(jīng)濃縮的有效物浸膏，將此浸膏進一步(真空)干燥可得到固態(tài)物質(zhì)。
實施例4、槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物對脂肪酸合酶抑制活性的檢測37℃下，在2毫升石英比色皿中加入該酶底物0.2mM乙酰輔酶A溶液25微升，0.4mM，丙二酸單酰輔酶A溶液50微升和1.3mM NADPH溶液50微升，再加入0.1M，pH 7.0磷酸鹽緩沖液1.85毫升及FAS溶液30微升混勻，啟動酶促反應。用分光光度計監(jiān)測單位時間內(nèi)340nm波長處吸光值A(chǔ)的變化，以(ΔA/min)來表示FAS的活力。在一定濃度槭葉提取物存在下，F(xiàn)AS全酶反應的活力下降，當其活力下降一半時所需槭葉提取物的濃度即IC50值，用該數(shù)值表示韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉提取物對FAS的抑制能力，上述測活體系中FAS的終濃度為7微克/毫升。
測定結(jié)果表明在上述測活條件下，韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉乙酸乙酯提取物的IC50分別為0.4-2.5微克/毫升，折合成干葉重，約為8-60微克/毫升。
實施例5、槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物抑制腫瘤細胞實驗細胞培養(yǎng)將食道癌CAES-17、胃癌BGC-823、乳腺癌MCF-7、前列腺癌PC-3M和肝癌BEL-7402五種癌細胞株(均購自醫(yī)科院藥物研究所)培養(yǎng)于含10％小牛血清、青霉素(100μg/ml)和鏈霉素(100μg/ml)的RPMI-1640培養(yǎng)液中，在適當濕度，含5％CO2的培養(yǎng)箱中37℃單層貼壁傳代培養(yǎng)。
收集對數(shù)生長期的五種腫瘤細胞，分別接種于96孔板中，2×104個/孔，貼壁培養(yǎng)24小時換成分別含有按照實施例1、實施例2和實施例3方法獲得的韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭，歐亞槭提取物的培養(yǎng)液，按不同韃靼槭、挪威械、細柄槭、田園槭，歐亞槭提取物濃度分成7組(設(shè)0、5、10、20、40、60、80μg/ml共7個實驗組，每個濃度設(shè)3個復孔，實驗結(jié)果取平均值)。
繼續(xù)培養(yǎng)24小時，換成不含提取物的培養(yǎng)液，同時加入20μl MTT(四甲基偶氮唑藍，5mg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)4小時。棄上清液，每孔加入200μl二甲基亞砜(DMSO)(對照組加入等量培養(yǎng)液和二甲基亞砜)，水平震蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。用酶標儀測定吸光值(A)，波長570nm，并按下述公式計算提取物對癌細胞生長的抑制作用，結(jié)果如表1、表2、表3、表4、表5所示，細胞生長抑制率(％)＝(1-實驗組A570/對照組A570)×100％表1不同濃度韃靼槭提取物(作用24小時)對腫瘤細胞生長的抑制率(％)

表2不同濃度挪威槭提取物(作用24小時)對腫瘤細胞生長的抑制率(％)

表3不同濃度細柄槭提取物(作用24小時)對腫瘤細胞生長的抑制率(％)

表4不同濃度田園槭提取物(作用24小時)對腫瘤細胞生長的抑制率(％)

表5不同濃度歐亞槭提取物(作用24小時)對腫瘤細胞生長的抑制率(％)

注上述抑癌實驗所用韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭、歐亞槭葉提取物已經(jīng)乙酸乙酯進行萃取濃縮。
權(quán)利要求
1.槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物，是將槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物以水-乙醇或水-丙酮為溶劑，采用微波提取方法得到的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于所述槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物為韃靼槭、挪威槭、細柄槭、田園槭或歐亞槭。
3.權(quán)利要求1所述提取物的提取方法，包括如下步驟1)以水-乙醇或水-丙酮為溶劑，將溶劑與槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的葉子或翅果混合，溶劑與葉子或翅果的重量比為8-30∶1。2)輸入微波進行提取，收集提取液，去除溶劑得到所述提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于在水-乙醇或水-丙酮中，乙醇或丙酮的體積百分數(shù)為50-70％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于所述微波提取的微波頻率為2450-2500MHz；微波功率≥700W。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于所述微波提取的時間為8-60秒；占空比3-5％；微波提取的次數(shù)為2-4次。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一所述的提取方法，其特征在于所述得到的提取物還可以乙酸乙酯進行萃取，除去有機溶劑，經(jīng)干燥得到固態(tài)槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物。
8.權(quán)利要求1所述槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物在制備抑制癌癥藥物中的應用。
9.權(quán)利要求1所述的槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物的提取物在制備減肥藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種槭樹科槭樹屬植物的提取物及其提取方法與應用。本發(fā)明提取物是將槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物以水－乙醇或水－丙酮為溶劑，采用微波提取方法得到的。本發(fā)明采用微波協(xié)助萃取法從槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(Acer Linn)植物中提取得到一種具有較高的脂肪酸合酶抑制活性的提取物，該提取物可在制備減肥藥物、防治癌癥的藥物中得到廣泛應用，具有很高的藥用價值。同時，本發(fā)明通過選擇適當?shù)奶崛∪軇?，微波功率、微波頻率、微波處理時間，占空比等因素將槭樹屬植物葉中有效物的提取時間縮短到10－16秒，提取方法簡單、效率高，充分體現(xiàn)了微波工藝的巨大優(yōu)勢，極具應用價值。
文檔編號A61P3/00GK1899331SQ20061008890
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月25日
發(fā)明者趙文華, 高春春, 田維熙, 張英俠, 董凌月, 陽志成, 黎金龍, 王耀楠 申請人:首都醫(yī)科大學