專利名稱：姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥和天然藥物改性的新藥功能開發(fā)領(lǐng)域，特別涉及一種姜酚肟在制備抗血小板聚集(抗血栓)藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
當(dāng)前心腦血管系統(tǒng)疾病是嚴(yán)重危害人類健康并導(dǎo)致死亡的主要原因之一，血栓形成是血栓栓塞性疾病的主要病理過程，而血小板聚集在血栓形成和動脈粥樣硬化等過程中起重要作用。目前臨床采用小劑量阿司匹林(50～100mg/d)用于防止血栓形成，以治療缺血性心臟病和腦缺血病患者，但阿司匹林有胃腸道反應(yīng)，凝血障礙和過敏反應(yīng)等不良反應(yīng)，不利于患者長期服用；姜酚雖有抗血小板聚集(抗血栓)活性，但提取率低，不利于廣泛應(yīng)用。
干姜為姜科植物姜(Zingiber Officinale Roscoe)的干燥根莖，為傳統(tǒng)的溫里藥之一，現(xiàn)代藥理研究也表明干姜具有擴(kuò)張血管、抗血栓形成等作用，已有多篇文獻(xiàn)報道姜的醇提物、水提物具有抗ADP、乙醇誘導(dǎo)的血小板聚集作用，干姜中的辣味成分姜酚可以抑制凝血酶原激酶誘導(dǎo)的血小板聚集，抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集，效果優(yōu)于阿司匹林，無胃腸道副作用。
然而自生姜中獲得的天然粗姜酚穩(wěn)定性低，提取率低，不易獲得和保存；由于沒有可廣泛供工業(yè)生產(chǎn)使用的姜酚，目前無法將姜酚抗血小板聚集(抗血栓)的作用廣泛應(yīng)用起來。
姜酚肟是由干姜中提取姜酚合成的具有類似姜酚結(jié)構(gòu)的化合物，穩(wěn)定性及提取率均顯著高于姜酚(見發(fā)明專利“姜酚肟及其合成與應(yīng)用”，申請?zhí)枴?00510032975.3”)，可解決姜酚獲得難、保存難的問題，如姜酚肟具有與姜酚相似的抗血小板聚集(抗血栓)效應(yīng)，將會取得巨大的社會效應(yīng)和經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。目前，已報道姜酚肟具有較弱的消除超氧陰離子的能力。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種姜酚肟在制備抗血小板聚集(抗血栓)藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一種姜酚衍生物——姜酚肟，優(yōu)于姜酚的抗血小板聚集(抗血栓)的作用，可廣泛用于抗血小板聚集及血栓性疾病。
本發(fā)明所述的姜酚肟，是將姜酚粗提物或純姜酚通過肟反應(yīng)得到的姜酚衍生物，結(jié)構(gòu)通式如下 其中n＝4，為6-姜酚肟；n＝6，為8-姜酚肟；n＝8，為10-姜酚肟；n＝10，為12-姜酚肟。
本發(fā)明采用體內(nèi)、體外實驗證明姜酚肟有較好的抗血小板聚集效應(yīng)，表明姜酚肟具有與阿司匹林、姜酚相媲美的抗血小板聚集作用?？捎萌斯し椒ù罅亢铣?，有望開發(fā)出成本低廉的與阿司匹林的抗血小板聚集作用相媲美、無毒副作用的抗血小板聚集及抗血栓形成的新藥，產(chǎn)業(yè)化前景廣闊。
本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)一種姜酚肟在制備抗血小板聚集(抗血栓)藥物中的應(yīng)用，可用于治療各種血小板聚集功能過強和各種血栓性疾病，該藥物為治療和/或預(yù)防血小板聚集的藥物。
本發(fā)明的姜酚肟為口服型制劑或非口服型制劑，給藥量因藥物不同而各有不同，以3.3～6.6mg/kg劑量(60kg體重成人每天200～400mg)比較合適。經(jīng)口服給藥時，將姜酚肟與常規(guī)的藥用輔劑如賦形劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑等混合，將其制成顆粒劑、膠囊、片劑等形式給藥；非經(jīng)口給藥時可制成注射液、輸液劑或栓劑等。上述各制劑可采用常規(guī)的制劑方法制備。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點和有益效果1、姜酚肟是姜酚的肟化物，穩(wěn)定性及提取率均顯著高于姜酚。
2、姜酚肟不具有阿司匹林的胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)。
3、體內(nèi)外實驗結(jié)果均顯示，姜酚肟有較好的抗血小板聚集效應(yīng)，表明姜酚肟具有與阿司匹林、姜酚相媲美的抗血小板聚集(抗血栓)作用。


圖1為姜酚肟對家兔體外血小板聚集的影響實驗流程圖。
圖2為姜酚肟對小鼠血小板聚集性的影響實驗流程圖。
圖3為不同濃度阿司匹林和姜酚肟對ADP誘導(dǎo)的體外血小板聚集的影響比較圖。
圖4為各組藥物對小鼠血小板聚集性影響比較圖。
其中，圖4.1a為溶劑對照組，圖4.1b為溶劑對照組圓樹型，圖4.1c為溶劑對照組擴(kuò)大型；圖4.2a為阿司匹林組，圖4.2b為阿司匹林組圓樹型，圖4.2c為阿司匹林組擴(kuò)大型；圖4.3a為姜酚肟低劑量組，圖4.3b為姜酚肟低劑量組圓樹型，圖4.3c為姜酚肟低劑量組擴(kuò)大型；圖4.4a為姜酚肟高劑量組圖4.4b為姜酚肟高劑量組圓樹型，圖4.4c為姜酚肟高劑量組擴(kuò)大型。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
實施例1姜酚肟對家兔體外血小板聚集的影響如圖1所示，從家兔(新西蘭大耳白兔)心臟取血，用3.8％(3.8g/100ml)的枸櫞酸鈉(1∶9，V/V)抗凝，抗凝血以800r/min離心10min，吸出富含血小板血漿(PRP)；將余下的部分以3000r/min離心15min，吸出貧含血小板血漿(PPP)，以PPP為空白對照管對血小板聚集儀調(diào)零。按照Born氏比濁法，將盛有300μl PRP的比濁管置于血小板聚集儀中，37℃保溫1min，經(jīng)PPP標(biāo)定后，在一小磁棒攪拌情況下加入各藥物(各藥物濃度分別為0.4mmol/L、0.8mmol/L、1.6mmol/L、3.2mmol/L的姜酚肟)50μl(溶劑均為終濃度為2.6％(體積濃度)的二甲基亞砜(DMSO)，再加入誘導(dǎo)劑2mmol/L的二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)20μl誘導(dǎo)聚集，以終濃度2.6％的DMSO為溶劑對照，阿司匹林為陽性對照，根據(jù)聚集曲線及最大聚集率分析藥物對血小板聚集的影響，實驗的結(jié)果見表1、表2。
實施例2姜酚肟對小鼠血小板聚集性的影響如圖2所示，將昆明種小鼠隨機(jī)分為五組，分別為溶劑對照組、阿司匹林組(30mg/kg)、姜酚肟低劑量組(30mg/kg)、姜酚肟高劑量組(60mg/kg)(均以0.1％(0.1g/100ml)蔗糖脂溶液為溶劑，臨用時即配)，連續(xù)灌胃給藥5d，0.2ml/只，1次/d，末次給藥1h后眼球取血1ml(3.8％(3.8g/100ml)枸櫞酸鈉溶液按1∶9V/V抗凝)，4℃放置5min誘導(dǎo)聚集，吸取抗凝血300μl滴在已涂有火棉膠溶液的干燥玻片上，約2×2cm2；血片置37℃恒溫鼓風(fēng)干燥箱中溫育8min，用pH7.4PBS(磷酸鹽緩沖液)沖去紅細(xì)胞、白細(xì)胞，室溫風(fēng)干。用飽和高錳酸鉀溶液染色8min，取出血片，蒸餾水沖凈，自然風(fēng)干。10×40倍顯微鏡下觀察，表面光滑、外圍完整的血小板為圓型；邊緣不整，伸展出長短不一、粗細(xì)不勻、形態(tài)各異的樹突狀偽足的血小板為樹型；圓型和樹型合稱為圓樹型。樹型的血小板相互接觸，或與其他型的血小板接觸，極易發(fā)生聚集。這種由兩個或以上的血小板邊緣相互融合，由樹突狀偽足相互交連而成的血小板形態(tài)，稱為擴(kuò)大型，是血小板的細(xì)胞膜形狀或結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而形成的粘著聚集形態(tài)。分別計算一視野下，圓樹型、擴(kuò)大型血小板所占的百分比，擴(kuò)大型血小板的聚集個數(shù)。實驗的結(jié)果見表3。
表1姜酚肟對ADP誘導(dǎo)的體外血小板聚集的影響

注與溶劑對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，n＝6。
ADP誘導(dǎo)的阿司匹林組第3min、5min血小板聚集率以及最大聚集率均顯著低于溶劑對照組(P＜0.01)；姜酚肟組在1.6mmol/L劑量下第1min、3min、5min血小板聚集率以及最大聚集率均顯著低于溶劑組(P＜0.05～0.01)，提示姜酚肟有顯著抑制血小板聚集的作用，且效果與阿司匹林相同，在1min也有顯著作用。
表2不同濃度阿司匹林和姜酚肟對ADP誘導(dǎo)的體外血小板聚集的比較


注與溶劑對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，n＝6。
圖3(注與溶劑對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，n＝6)為不同濃度阿司匹林和姜酚肟對ADP誘導(dǎo)的體外血小板聚集的影響比較圖。在濃度為1.6mmol/L、3.2mmol/L時，阿司匹林、姜酚肟能顯著降低降低ADP誘導(dǎo)的第1min、3min、5min血小板聚集率以及最大血小板聚集率(P＜0.05～0.01)；表3姜酚肟對小鼠血小板聚集性的影響

注與溶劑對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與阿司匹林組比較，△P＜0.05，n＝11以上數(shù)據(jù)表明，阿司匹林組、姜酚肟低劑量組、姜酚肟高劑量組、圓樹型血小板的比例均大于溶劑對照組，而擴(kuò)大型血小板的比例、擴(kuò)大型血小板的聚集個數(shù)均少于溶劑對照組；姜酚肟低劑量組與阿司匹林組相比，圓樹型血小板比例較少，擴(kuò)大型血小板的比例、擴(kuò)大型血小板的聚集個數(shù)較多；姜酚肟高劑量組與阿司匹林組相比，圓樹型、擴(kuò)大型血小板的比例、擴(kuò)大型血小板的聚集個數(shù)均較為相近，無顯著性差異(P＞0.05)。說明姜酚肟高低劑量組均能增加圓樹型血小板的比例，減少擴(kuò)大型血小板的比例，但低劑量組不如阿司匹林組，高劑量組與阿司匹林組相當(dāng)。
圖4為各組藥物對小鼠血小板聚集性影響比較圖，其中圖4.1為溶劑對照組(10×40)倍血小板密集，聚集明顯，圓樹型較少；圖4.2為阿司匹林組(10×40)倍血小板密度降低，與溶劑對照組相比，圓樹型增多，擴(kuò)大型減少(P＜0.01)；圖4.3為姜酚肟低劑量組(10×40)倍血小板較溶劑對照組稀疏、圓樹型增多、擴(kuò)大型減少(P＜0.01)，與阿司匹林組比較，圓樹型減少，擴(kuò)大型以及其聚集個數(shù)增多(P＜0.05)；圖4.4為姜酚肟高劑量組(10×40)倍與溶劑對照組比較，圓樹型明顯增多，擴(kuò)大型、聚集數(shù)明顯減少(P＜0.01)；與阿司匹林組比較，圓樹型、擴(kuò)大型、聚集數(shù)相當(dāng)。
體外實驗結(jié)果表明，姜酚肟在1.6mmol/L及3.2mmol/L濃度下可分別顯著抑制ADP誘導(dǎo)的1min、3min、5min血小板聚集率以及最大血小板聚集率，呈劑量依賴性，而與同劑量阿司匹林組比較，均無顯著性差異，具有可重復(fù)性。說明姜酚肟對血小板聚集功能確實具有明顯的抑制作用，而且效應(yīng)與阿司匹林相似。體外實驗表明，姜酚肟能顯著抑制由ADP誘導(dǎo)的家兔體外血小板聚集，降低其聚集率，效果與陽性藥阿司匹林相似。
體內(nèi)實驗結(jié)果表明，姜酚肟能有效增多小鼠體內(nèi)圓樹型血小板數(shù)量，減少擴(kuò)大型血小板數(shù)量及其聚集個數(shù)，呈劑量依賴性，說明姜酚肟對血小板聚集功能確實具有明顯的抑制作用；姜酚肟高劑量組與阿司匹林組圓樹型、擴(kuò)大型血小板以及其聚集個數(shù)均較為接近，無顯著性差異，說明姜酚肟(60mg/kg)抗血小板聚集效應(yīng)與阿司匹林(30mg/kg)媲美。
從體內(nèi)、體外實驗結(jié)果均顯示出姜酚肟有較好的抗血小板聚集效應(yīng)，姜酚肟具有與阿司匹林、姜酚相媲美的抗血小板聚集(抗血栓)作用，制成口服或非口服制劑，劑量為3.3～6.6mg/kg(60kg體重成人每天200～400mg)。
權(quán)利要求
1.一種姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述姜酚肟制備成口服型制劑或非口服型制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述口服型制劑包括顆粒劑、膠囊或片劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述非口服型制劑包括注射液、輸液劑或栓劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種姜酚肟在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。姜酚肟是姜酚的肟化物，不具有阿司匹林的胃腸道反應(yīng)，穩(wěn)定性及提取率均顯著高于姜酚，而體內(nèi)、體外實驗結(jié)果均顯示出姜酚肟有較好的抗血小板聚集效應(yīng)，表明姜酚肟具有與阿司匹林、姜酚相媲美的抗血小板聚集作用?？蓮V泛用于治療各種血小板聚集功能過強及各種血栓性疾病。
文檔編號A61K9/16GK1899274SQ20061003660
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月20日
發(fā)明者聶紅, 孟蘭貞, 馮煒菁, 黃雪松 申請人:暨南大學(xué)