專利名稱：超臨界co的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種超臨界CO2提取雷公藤有效成分萜類化合物的方法及組成，屬于中藥雷公藤藥效成分的提取分離技術(shù)。
背景技術(shù)：
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook f.)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，中藥大辭典記載，具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛、消腫止痛、解毒殺蟲的功效，臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎和紅斑狼瘡等自身免疫性疾病，近年來(lái)用于器官移植的抗排斥反應(yīng)治療，均取得了較好療效?，F(xiàn)代研究相繼發(fā)現(xiàn)雷公藤有抗炎、抗免疫、抗生育、抗腫瘤、抗菌活性等作用。至今從雷公藤中已分離出200多種化學(xué)單體，其中二萜類、倍半萜生物堿類、三萜類為主要活性成分。
在雷公藤制劑研究方面，有市售雷公藤多甙片及雷藤片；90年代以后，雷公藤制劑研究發(fā)展迅猛，特別在緩釋、控釋方面的研究，對(duì)提高雷公藤療效、降低毒副作用將產(chǎn)生重要作用。目前雷公藤制劑有雷公藤總萜片、雷公藤微囊片、雷公藤滴丸、雷公藤雙層栓、雷公藤巴布劑。
雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜，藥理作用廣泛，有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。但由于雷公藤毒副作用較大，限制了臨床應(yīng)用的推廣。應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)雷公藤的藥物化學(xué)和藥理作用及臨床應(yīng)用的研究，提取、純化、合成出高效低毒的有效成分或衍生物，提高其安全性和應(yīng)用價(jià)值，為雷公藤的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。
傳統(tǒng)雷公藤有效成分提取的方法主要有水提醇沉法、水提氯仿萃取法、醇提醋酸乙酯萃取法等，依據(jù)物質(zhì)的極性“相似相溶”原理以不同極性的溶劑去溶解提取極性與其相似的成分。傳統(tǒng)提取方法存在明顯的缺點(diǎn)(1)提取效率低很多有效成分有時(shí)只提取出來(lái)一部分，剩余部分卻隨藥渣倒掉，造成中草藥資源的浪費(fèi)；(2)生產(chǎn)周期長(zhǎng)，生產(chǎn)效率較低；(3)選擇性不好許多無(wú)效雜質(zhì)和毒性成分隨有效成分一同提取出來(lái)，有效成分的濃度低，毒性成分含量較高，多種溶劑提取工藝均無(wú)法克服毒性大的缺點(diǎn)；(4)有效成分易被破壞由于溫度高、與空氣接觸等，使藥物中熱敏性成分、易氧化成分受到破壞；
(5)藥品質(zhì)量和檔次較低親脂性有效成分提取后有機(jī)溶劑有殘留。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種超臨界CO2提取雷公藤有效成分萜類化合物的方法及組成，該方法提取的雷公藤有效成分萜類化合物的藥效高而毒副作用低。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的，一種超臨界CO2提取雷公藤有效成分萜類化合物的方法，其特征在于包括以下過(guò)程將雷公藤粉碎至10～200目，按雷公藤與乙醇質(zhì)量比2∶1-1.5浸于質(zhì)量濃度55～85％的乙醇夾帶劑中，在萃取釜以超臨界CO2為溶劑進(jìn)行萃取，其操作條件為溫度為30～50℃，壓力為20-40MPa，CO2流速為10-30kg/h，進(jìn)行萃取60～150min。
以上述方法提取雷公藤有效成分萜類化合物的組成，其特征在于包括倍半萜生物堿、松香烷型二萜和三萜羧酸類，三類化合物的質(zhì)量比為倍半萜生物堿30-50％，松香烷型二萜25-45％，三萜羧酸類5-15％；另外，雷公藤甲素的質(zhì)量含量為0.05-0.15％，雷公藤紅素質(zhì)量含量為0.1-0.5％。
本發(fā)明與其他提取方法相比較，工藝過(guò)程簡(jiǎn)單，有效地調(diào)節(jié)萃取物中三類有效化學(xué)成分的比例，明顯區(qū)別于傳統(tǒng)工藝的提?。挥行С煞痔崛÷矢撸坠偌姿靥崛÷蕿?00-400％。藥效為市售產(chǎn)品的3-4倍，而毒性為市售產(chǎn)品的20-50％。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1超臨界CO2萃取物的高效液相色譜分析圖。
圖中△生物堿類；○松香烷型二萜類；*三萜羧酸類。
三類化合物占指紋圖譜總峰面積90.15％，其中倍半萜生物堿45.65％，松香烷型二萜類35.5％，三萜羧酸類9.0％具體實(shí)施方式
下列實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的主旨和原則的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落如本發(fā)明的待批權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1用超臨界二氧化碳萃取循環(huán)裝置完成萃取，取10-120目產(chǎn)于湖南岳陽(yáng)的雷公藤藥材粉末180.53克裝于萃取器里，以CO2為溶劑，設(shè)定萃取柱、分離器的溫度分別為40-45℃和35℃、壓力分別為25MPa和5MPa、CO2用量與原料比約為100，夾帶劑加入質(zhì)量75％乙醇108毫升，萃取時(shí)間1.67h，得到萃取物1.95克，萃取率1.08％。
以雷公藤生藥中雷公藤甲素、雷公藤紅素含量測(cè)定方法-索氏甲醇提取法，雷公藤生物總堿索氏95％乙醇提取法得到的雷公藤甲素、雷公藤生物總堿、雷公藤紅素的量為基準(zhǔn)，與超臨界萃取得到的雷公藤甲素、雷公藤生物總堿、雷公藤紅素的量作比較，定義提取率為提取率(％)＝(超臨界流體萃取量/索氏提取量)×100％。
本實(shí)施例有效成分萃取物的各項(xiàng)性能檢測(cè)結(jié)果如下(1)超臨界萃取物各項(xiàng)參數(shù)和各成分的萃取效率指標(biāo)

由此得出，超臨界流體萃取工藝可以有效的增加松香烷型二萜類成分的提取率，同時(shí)降低主要毒性成分之一雷公藤紅素的提取率，針對(duì)性地將三類有效成分比例控制在合理的范圍，從而達(dá)到協(xié)同增效和減毒的作用。
(2)超臨界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤總生物堿以及雷公藤紅素的含量采用本實(shí)驗(yàn)室建立的高效液相色譜法測(cè)定本工藝條件下的萃取物中雷公藤甲素質(zhì)量含量0.090％，雷公藤紅素質(zhì)量含量0.348％，總生物堿的質(zhì)量含量為30.42％。
實(shí)施例2用超臨界二氧化碳萃取循環(huán)裝置進(jìn)行萃取，取10-120目產(chǎn)于湖南岳陽(yáng)的雷公藤藥材粉末180.78克裝于萃取器里，以CO2為溶劑，設(shè)定萃取柱、分離器的溫度分別為40-45℃和35℃、壓力分別為25MPa和5MPa、CO2用量與原料約為100，夾帶劑加入質(zhì)量80％乙醇108毫升，萃取時(shí)間1.67h，得到萃取物1.70克，出膏率0.94％。
本實(shí)施例有效成分萃取物的各項(xiàng)性能檢測(cè)結(jié)果如下(1)超臨界萃取物各項(xiàng)參數(shù)和各成分的萃取效率指標(biāo)

(2)超臨界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤總生物堿以及雷公藤紅素的含量采用本實(shí)驗(yàn)室建立的高效液相色譜法測(cè)定本工藝條件下的萃取物中雷公藤甲素質(zhì)量含量0.079％，雷公藤紅素質(zhì)量含量0.213％，總生物堿的質(zhì)量含量為23.04％。
實(shí)施例3用超臨界二氧化碳萃取循環(huán)裝置進(jìn)行萃取，取10-120目的湖南岳陽(yáng)產(chǎn)的雷公藤藥材粉末180.65克裝于萃取器里，以CO2為溶劑，設(shè)定萃取柱、分離器的溫度分別為40-45℃和35℃、壓力分別為25MPa和5MPa、CO2用量與原料約為100，夾帶劑加入質(zhì)量60％乙醇108毫升，萃取時(shí)間1.67h，得到萃取物1.31克，出膏率0.72％。
本實(shí)施例有效成分萃取物的各項(xiàng)性能檢測(cè)結(jié)果如下(1)超臨界萃取物各項(xiàng)參數(shù)和各成分的萃取效率指標(biāo)

(2)超臨界萃取物中雷公藤甲素、雷公藤總生物堿以及雷公藤紅素的含量采用本實(shí)驗(yàn)室建立的高效液相色譜法測(cè)定本工藝條件下的萃取物中雷公藤甲素質(zhì)量含量0.077％，雷公藤紅素質(zhì)量含量0.197％，總生物堿的質(zhì)量含量為24.42％。有效成分萃取物(實(shí)施例1)的有關(guān)藥效和毒性實(shí)驗(yàn)雷公藤超臨界萃取物對(duì)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的抑制作用Control(ConA)＝0.248±0.010，無(wú)ConA＝0.111±0.012刺激指數(shù)2.23地塞米松(OD)＝0.093±0.017；抑制率＝62.5％

ED50＝5.08μg/mL，細(xì)胞數(shù)為5×106個(gè)/mL
A廠家產(chǎn)雷公藤片淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)Control(ConA)＝0.476±0.021

ED50＝19.94μg/mLB廠家產(chǎn)雷公藤片淋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)Control(ConA)＝0.476±0.021

ED50＝14.6μg/mL體外淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)計(jì)算得出雷公藤超臨界萃取物的ED50為5.08μg/mL，A雷公藤片的ED50為19.94μg/mL，B雷公藤片的ED50為14.60μg/mL.達(dá)到了提高藥效的目的。
毒性實(shí)驗(yàn)取本法雷公藤有效成分萃取物，以昆明種小鼠的半數(shù)致死量作為毒性考察指標(biāo)，測(cè)定半數(shù)致死量(LD50)值。實(shí)驗(yàn)共分五組，每組10只小鼠。應(yīng)用簡(jiǎn)化幾率法計(jì)算得出LD50。
雷公藤有效成分萃取物的LD50為312.54±34.21mg/kg；A廠家產(chǎn)雷公藤片中雷公藤多甙的LD50為159.7±14.3mg/kg。降低毒性約1倍。
權(quán)利要求
1.一種超臨界CO2提取雷公藤有效成分萜類化合物的方法，其特征在于包括以下過(guò)程將雷公藤粉碎至10～200目，按雷公藤與乙醇質(zhì)量比2∶1-1.5浸于質(zhì)量濃度55～85％的乙醇夾帶劑中，在萃取釜以超臨界CO2為溶劑進(jìn)行萃取，其操作條件為溫度為30～50℃，壓力為20-40MPa，CO2流速為10-30kg/h，進(jìn)行萃取60～150min。
2.一種按權(quán)利要求1所述的超臨界CO2提取雷公藤有效成分萜類化合物方法提取的化合物的組成，其特征在于包括倍半萜生物堿、松香烷型二萜和三萜羧酸類，三類化合物的質(zhì)量比為倍半萜生物堿30-50％，松香烷型二萜25-45％，三萜羧酸類5-15％；另外，雷公藤甲素的質(zhì)量含量為0.05-0.15％，雷公藤紅素質(zhì)量含量為0.1-0.5％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超臨界CO
文檔編號(hào)A61P37/00GK1915280SQ20061001559
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2006年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月6日
發(fā)明者段宏泉, 李淑芬, 周雯, 李紅茹, 滕杰, 張彥文 申請(qǐng)人:天津醫(yī)科大學(xué)