專利名稱：口服鹿瓜多肽組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種口服藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前鹿瓜多肽組合物制備過(guò)程中蛋白質(zhì)流失過(guò)多，如專利CN1579542A(申請(qǐng)?zhí)枮?00410013602.7)和CN1742778A(申請(qǐng)?zhí)枮?00510108157.7)，其制備過(guò)程中分子量10KD以上的蛋白質(zhì)及多肽絕大部分被丟棄；而且，現(xiàn)有鹿瓜多肽組合物多為注射用針劑，都存在不適合口服，口服療效差的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有鹿瓜多肽組合物制備過(guò)程中10KD以上的蛋白質(zhì)及多肽絕大部分被丟棄、浪費(fèi)嚴(yán)重和現(xiàn)有鹿瓜多肽組合物不適合口服、口服療效差的問(wèn)題，而提供的一種口服鹿瓜多肽組合物及其制備方法。口服鹿瓜多肽組合物按重量份數(shù)比包括5～95份多肽和5～95份賦形劑，其中多肽為鹿骨多肽和甜瓜籽多肽，鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為4∶1～1∶4，鹿骨多肽和甜瓜籽多肽分子量≤6KD?？诜构隙嚯慕M合物的制備方法按以下步驟進(jìn)行(A)制備鹿骨多肽提取液1.清洗新鮮鹿骨，并將鹿骨粉粹，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到鹿骨粗提液；4.測(cè)定鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)鹿骨粗提液pH值為6～7，然后按鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到鹿骨多肽提取液；(B)制備甜瓜籽多肽提取液1.清洗新鮮甜瓜籽，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到甜瓜籽粗提液；4.測(cè)定甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)甜瓜籽粗提液pH值為6～7，然后按甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到甜瓜籽多肽提取液；(C)制備口服多肽組合物1.鹿骨多肽提取液中的多肽與甜瓜籽多肽提取液中的多肽按4∶1～1∶4的重量比混合；2.按5～95份多肽加5～95份賦形劑的重量份數(shù)比加入賦形劑，即得到口服鹿瓜多肽組合物。本發(fā)明以鹿骨多肽和甜瓜籽多肽的重量為計(jì)算單位，避免了因產(chǎn)地、采集期、原料個(gè)體和提取工藝的差異而造成的各批次藥物中有效成分的不同，各批次藥物中有效成分差異小，藥效穩(wěn)定。本發(fā)明采用較為緩和的反應(yīng)條件，降低了高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿對(duì)蛋白質(zhì)的破壞，同時(shí)還可充分去除提取物中非活性成分，從而充分的利用鹿骨及甜瓜籽中的有效成分及有效成分的前體成分。本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)，有序的對(duì)鹿骨及甜瓜籽中的高分子量的蛋白質(zhì)和多肽(≥10KD)進(jìn)行酶水解，從而得到分子量≤6KD，且分子量分布集中，利于口服吸收的鹿骨多肽和甜瓜籽多肽。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式口服鹿瓜多肽組合物按重量份數(shù)比由5～95份多肽和5～95份賦形劑制成，其中多肽為鹿骨多肽和甜瓜籽多肽，鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為4∶1～1∶4，鹿骨多肽和甜瓜籽多肽分子量≤6KD。
具體實(shí)施例方式
二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是賦形劑由甘草、蔗糖、單糖漿、糖精鈉、羧甲基纖維素鈉、糊精、吐溫-80、硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉、羥丙纖維素、磷酸氫鈣、淀粉中的一種或幾種組成。其它與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施例方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二的不同點(diǎn)是賦形劑由甘草、蔗糖、單糖漿中的一種或幾種組成。其它與實(shí)施方式一或二相同。
本實(shí)施方式被制成鹿瓜多肽口服液。
具體實(shí)施例方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二的不同點(diǎn)是賦形劑由糖精鈉、羧甲基纖維素鈉、糊精、吐溫-80、硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉、羥丙纖維素、磷酸氫鈣、淀粉中的一種或幾種組成。其它與實(shí)施方式一或二相同。
本實(shí)施方式被制成鹿瓜多肽片劑、膠囊、分散片劑或混懸劑。
具體實(shí)施例方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為3∶1～1∶3。其它與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施例方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為2∶1～1∶2。其它與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施例方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是口服鹿瓜多肽組合物按重量份數(shù)比由10～90份多肽和10～90份賦形劑制成。其它與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施例方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一的不同點(diǎn)是口服鹿瓜多肽組合物按重量份數(shù)比由20～80份多肽和20～80份賦形劑制成。其它與實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施例方式
九本實(shí)施方式口服鹿瓜多肽組合物的制備方法按以下步驟進(jìn)行(A)制備鹿骨多肽提取液1.清洗新鮮鹿骨，并將鹿骨粉粹，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到鹿骨粗提液；4.測(cè)定鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)鹿骨粗提液pH值為6～7，然后按鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到鹿骨多肽提取液；(B)制備甜瓜籽多肽提取液1.清洗新鮮甜瓜籽，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到甜瓜籽粗提液；4.測(cè)定甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)甜瓜籽粗提液pH值為6～7，然后按甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到甜瓜籽多肽提取液；(C)制備口服多肽組合物1.鹿骨多肽提取液中的多肽與甜瓜籽多肽提取液中的多肽按4∶1～1∶4的重量比混合；2.按5～95份多肽加5～95份賦形劑的重量份數(shù)比加入賦形劑，即得到口服鹿瓜多肽組合物。
本實(shí)施方式用鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值。多肽分子量集中于4KD～6KD，占多肽物總質(zhì)量的65％～80％。本實(shí)施方式選擇的酶解條件可以充分的酶解大分子量的蛋白質(zhì)及多肽，使多肽分子量集中分布于4KD～6KD，而不會(huì)將蛋白質(zhì)及多肽酶解的過(guò)小或酶解成氨基酸，并且分子量≤6KD的鹿瓜多肽組合物又具有良好的口服治療效果。
根據(jù)世界著名多肽科學(xué)家鄒遠(yuǎn)東專著的《酶法多肽論》，可知人體吸收蛋白質(zhì)的主要形式不是氨基酸，而是以多肽的形式吸收的；多肽的吸收具有以下特點(diǎn)1.不需消化，直接吸收。人體自身合成的多肽是人體將蛋白質(zhì)進(jìn)行酶促水解所得(由促酶、消化酶、胰酶、胃蛋白酶、胃酸、消化道堿性物質(zhì)進(jìn)行分解，有的被分解為小肽，有的被分解為氨基酸殘基，有的被分解為游離氨基酸，小肽最終通過(guò)小腸進(jìn)行吸收，然后經(jīng)人體細(xì)胞、組織、器官及血液大循環(huán))。而體外人工合成的小肽表面有一層保護(hù)膜，被人體服食后不會(huì)受到人體的各種酶及酸堿物質(zhì)二次水解，它和人體合成的肽一樣直接進(jìn)入小腸，被小腸所吸收，進(jìn)入人體循環(huán)系統(tǒng)，發(fā)揮生物學(xué)功能。
2.吸收快速。人工體外合成的多肽，口服進(jìn)入人體，它較氨基酸快70％的速度，快速地穿過(guò)人的口腔、胃，直接進(jìn)入小腸，被小腸吸收，最終進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)、器官及細(xì)胞組織，迅速發(fā)揮其生理作用和生物學(xué)功能。
3.以完整的形式吸收。多肽是以完整的形式被人體吸收和利用的。
4.多肽具有100％被人體吸收的特點(diǎn)。吸收后，不會(huì)有任何排泄物，而且是全部被人體吸收和利用。
5.多肽具有主動(dòng)被人體吸收的特點(diǎn)。對(duì)于因消化系統(tǒng)缺陷、障礙、損傷，而不能吸收營(yíng)養(yǎng)者，多肽具有主動(dòng)讓人體吸收或迫使人體吸收的特點(diǎn)。這對(duì)于那些消化能力差、營(yíng)養(yǎng)缺乏、身體虛弱者，有著重要的意義。
6.多肽具有優(yōu)先被人體吸收的特點(diǎn)。人們平常所食的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及人體降解的氨基酸殘基和氨基酸，與多肽的吸收競(jìng)爭(zhēng)中，多肽具有優(yōu)先吸收的特點(diǎn)。這與其被主動(dòng)吸收的特點(diǎn)是分不開的。
7.人體對(duì)多肽的吸收，具有不需耗費(fèi)人體能量，不需增加消化道，特別是胃腸功能負(fù)擔(dān)的特點(diǎn)。多肽自身具有極強(qiáng)的活性和能量，它的主動(dòng)吸收、迫使吸收，就是自身的活性和能量在起作用。因此，它在被人體吸收時(shí)，不是人體耗費(fèi)自身的能量去吸收它，而是多肽以自身的能量讓人體吸收。它的這一顯著特點(diǎn)對(duì)消化系統(tǒng)未發(fā)育成熟的嬰幼兒，對(duì)消化系統(tǒng)開始退化的老年人以及因過(guò)度運(yùn)動(dòng)急需氮源，而又不能增加胃腸功能負(fù)擔(dān)的運(yùn)動(dòng)員、體力勞動(dòng)者有著重要意義。
8.多肽在人體中表現(xiàn)出載體作用，可將平常人所食的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，特別是鈣等對(duì)人體有益的微量元素，吸附、粘貼、裝載在本體上。
9.多肽可在人體中起運(yùn)輸工具的作用。可將各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸附在本體上后運(yùn)送到人體各個(gè)細(xì)胞、器官、組織，同本體一起被人體吸收和利用，發(fā)揮各自不同的功能作用。這就是目前世界上人們把多肽原料中間體作為藥品和食品配方的原因，其目的是要加強(qiáng)藥效和強(qiáng)化營(yíng)養(yǎng)，增強(qiáng)人體對(duì)其吸收率。
10.多肽被人體吸收后，可在人體中起信使作用。它作為神經(jīng)遞質(zhì)傳遞信息的信使，指揮神經(jīng)，發(fā)揮自身作用，維護(hù)人體神經(jīng)的團(tuán)隊(duì)精神和整體效應(yīng)，使人體變得更加靈活、靈敏、聰慧。
說(shuō)明口服方式攝取多肽及多肽組合物具有其它攝取途徑不可比擬的優(yōu)勢(shì)。
具體實(shí)施例方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是新鮮鹿骨粉碎成粒徑小于1cm的骨顆粒。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是蛋白酶由木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、大豆蛋白酶中的一種或幾種組成，酶活為8×105～11×105U/g。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是加入的注射用水的重量是鹿骨重量的1.5～3倍。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是加入的注射用水的重量是甜瓜籽重量的1.5～3倍。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是低溫靜置的溫度為0～20℃。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是采用微量凱氏定氮法、雙縮脲法、福林酚試劑法或考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定鹿骨多肽粗提取液和甜瓜籽多肽粗提取液中蛋白質(zhì)及多肽的含量。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是蛋白酶為木瓜蛋白酶，酶活為9×105～10×105U/g。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是將制備的口服鹿瓜多肽組合物制成口服液、片劑、膠囊、分散片劑或混懸劑。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是是以甘草和蔗糖為賦形劑，再向制成的口服鹿瓜多肽組合物中加入其自身質(zhì)量2～10倍的蒸餾水制成鹿瓜多肽口服液。其它與實(shí)施方式九相同。
具體實(shí)施例方式
十九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
九的不同點(diǎn)是是以糖精鈉、糊精和磷酸氫鈣為賦形劑，將制成的口服鹿瓜多肽組合物在＜10Pa、-40～20℃的條件下冷凍干燥10～30h。其它與實(shí)施方式九相同。
本實(shí)施方式可用于制備鹿瓜多肽片劑、膠囊、分散片劑或混懸劑。
具體實(shí)施例方式
二十用實(shí)施方式九制備的口服鹿瓜多肽組合物進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)(一)不同分子量的口服鹿瓜多肽組合物治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)對(duì)比實(shí)驗(yàn)選擇佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠為動(dòng)物模型，本實(shí)驗(yàn)分5組進(jìn)行，每組大白鼠12只第1組正常大白鼠；第2組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，不給藥；第3組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，口服通過(guò)10KD濾膜的鹿瓜多肽組合物；第4組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，口服通過(guò)6KD濾膜的鹿瓜多肽組合物；第5組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，口服通過(guò)3KD濾膜的鹿瓜多肽組合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
表1

通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)(一)表明第4組(口服通過(guò)6KD濾膜的鹿瓜多肽組合物)的效果最為理想，與第2組相比具有極顯著差異P＜0.01。不存在停藥后病情反彈、無(wú)效的情況。
(二)不同劑型或藥物治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫脹度實(shí)驗(yàn)選擇佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠為動(dòng)物模型，本實(shí)驗(yàn)分9組進(jìn)行，每組大白鼠12只第1組正常大白鼠；第2組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，不給藥；第3組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠注射2.0mL的劑量注射針劑鹿瓜多肽組合物(現(xiàn)已公開的鹿瓜多肽制品)；第4組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，在第3組用藥量的基礎(chǔ)上每次注射加5mg強(qiáng)的松；第5組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服2.5mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)；第6組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服10mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)，并在每次服藥時(shí)加入5mg強(qiáng)的松；第7組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥5mg強(qiáng)的松；第8組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥200mg阿司匹林；第9組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥10mg強(qiáng)的松。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。
表2

通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)(二)表明第5組(按每1kg大白鼠口服2.5mL鹿瓜多肽口服液)的效果理想，與第2組相比具有極顯著差異P＜0.01。不存在停藥后病情反彈、無(wú)效的情況。
(三)不同劑型或藥物治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的白介素-2對(duì)比實(shí)驗(yàn)選擇佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠為動(dòng)物模型，本實(shí)驗(yàn)分9組進(jìn)行，每組大白鼠12只第1組正常大白鼠；第2組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，不給藥；第3組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠注射2.0mL的劑量注射針劑鹿瓜多肽組合物(現(xiàn)己公開的鹿瓜多肽制品)；第4組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，在第3組用藥量的基礎(chǔ)上每次注射加5mg強(qiáng)的松；第5組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服2.5mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)；第6組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服10mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)，并在每次服藥時(shí)加入5mg強(qiáng)的松；第7組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥5mg強(qiáng)的松；第8組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥200mg阿司匹林；第9組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥10mg強(qiáng)的松。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。
表3

通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)(三)說(shuō)明服用鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽組合物)白介素-2的數(shù)值明顯的升高，與第2組相比具有顯著差異P＜0.05。
(四)不同劑型或藥物治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的腫瘤壞死因子實(shí)驗(yàn)選擇佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠為動(dòng)物模型，本實(shí)驗(yàn)分9組進(jìn)行，每組大白鼠12只第1組正常大白鼠；第2組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，不給藥；第3組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠注射2.0mL的劑量注射針劑鹿瓜多肽組合物(現(xiàn)已公開的鹿瓜多肽制品)；第4組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，在第3組用藥量的基礎(chǔ)上每次注射加5mg強(qiáng)的松；第5組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服2.5mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)；第6組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，按每1kg大白鼠口服10mL鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽加蒸餾水稀釋3倍制成)，并在每次服藥時(shí)加入5mg強(qiáng)的松；第7組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥5mg強(qiáng)的松；第8組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥200mg阿司匹林；第9組佐劑性關(guān)節(jié)炎大白鼠，每次用藥10mg強(qiáng)的松。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表4所示。
表4

通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)(四)說(shuō)明鹿瓜多肽口服液(口服鹿瓜多肽組合物)明顯有抗腫瘤壞死因子的作用，與第2組相比具有顯著差異P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明實(shí)施方式九制備的口服鹿瓜多肽組合物治療關(guān)節(jié)炎等骨科疾病的效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有鹿瓜多肽藥物。
權(quán)利要求
1.口服鹿瓜多肽組合物，其特征在于口服鹿瓜多肽組合物按重量份數(shù)比包括5～95份多肽和5～95份賦形劑，其中多肽為鹿骨多肽和甜瓜籽多肽，鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為4∶1～1∶4，鹿骨多肽和甜瓜籽多肽分子量≤6KD。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口服鹿瓜多肽組合物，其特征在于賦形劑由甘草、蔗糖、單糖漿、糖精鈉、羧甲基纖維素鈉、糊精、吐溫-80、硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉、羥丙纖維素、磷酸氫鈣、淀粉中的一種或幾種組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口服鹿瓜多肽組合物，其特征在于鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為3∶1～1∶3。
4.口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于口服鹿瓜多肽組合物的制備方法按以下步驟進(jìn)行(A)制備鹿骨多肽提取液1.清洗新鮮鹿骨，并將鹿骨粉粹，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到鹿骨粗提液；4.測(cè)定鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)鹿骨粗提液pH值為6～7，然后按鹿骨粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到鹿骨多肽提取液；(B)制備甜瓜籽多肽提取液1.清洗新鮮甜瓜籽，加入注射用水后在90～105℃、0.05～0.5MPa的條件下提取3～5次；2.合并提取液后調(diào)節(jié)pH值為4～5，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心；3.收集上清液后調(diào)節(jié)pH值為8～9，再在低溫條件下靜置15～30h，然后過(guò)濾、離心，收集上清液得到甜瓜籽粗提液；4.測(cè)定甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽的含量，調(diào)節(jié)甜瓜籽粗提液pH值為6～7，然后按甜瓜籽粗提液中蛋白質(zhì)及多肽與蛋白酶1∶1的重量比加入蛋白酶；5.在55±0.5℃、1500～1800r/min的條件下攪拌上一步驟的反應(yīng)液1±0.1h，攪拌過(guò)程中保持反應(yīng)液pH值為6～7；6.反應(yīng)液100±5℃加熱3～5min后過(guò)濾、離心，收集的上清液依次進(jìn)行10KD、6KD過(guò)濾，得到甜瓜籽多肽提取液；(C)制備口服多肽組合物1.鹿骨多肽提取液中的多肽與甜瓜籽多肽提取液中的多肽按4∶1～1∶4的重量比混合；2.按5～95份多肽加5～95份賦形劑的重量份數(shù)比加入賦形劑，即得到口服鹿瓜多肽組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于新鮮鹿骨粉碎成粒徑小于1cm的骨顆粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于蛋白酶由木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無(wú)花果蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、大豆蛋白酶中的一種或幾種組成，酶活為8×105～11×105U/g。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于采用鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于采用微量凱氏定氮法、雙縮脲法、福林酚試劑法或考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定鹿骨多肽粗提取液和甜瓜籽多肽粗提取液中蛋白質(zhì)及多肽的含量。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于蛋白酶為木瓜蛋白酶，酶活為9×105～10×105U/g。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服鹿瓜多肽組合物的制備方法，其特征在于將制備的口服鹿瓜多肽組合物制成口服液、片劑、膠囊、分散片劑或混懸劑。
全文摘要
口服鹿瓜多肽組合物及其制備方法，它涉及一種口服藥物及其制備方法。它解決了現(xiàn)有鹿瓜多肽組合物制備過(guò)程中10KD以上的蛋白質(zhì)及多肽絕大部分被丟棄和現(xiàn)有鹿瓜多肽組合物不適合口服、口服療效差的問(wèn)題?？诜构隙嚯慕M合物按重量份數(shù)比包括5～95份多肽和5～95份賦形劑，其中多肽為鹿骨多肽和甜瓜籽多肽，鹿骨多肽與甜瓜籽多肽的重量比為4∶1～1∶4，鹿骨多肽和甜瓜籽多肽分子量≤6KD。制備方法(A)制備鹿骨多肽提取液；(B)制備甜瓜籽多肽提取液；(C)制備口服多肽組合物。本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)，對(duì)鹿骨及甜瓜籽中的高分子量的蛋白質(zhì)和多肽進(jìn)行酶水解，從而得到分子量≤6KD，且分子量分布集中，利于口服吸收的鹿骨多肽和甜瓜籽多肽。
文檔編號(hào)A61P19/02GK1883536SQ20061001010
公開日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2006年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者徐俊, 王東緒, 何利群, 王禹 申請(qǐng)人:哈爾濱吉爾生物科技有限公司