專利名稱：：血小板衍生生長因子組合物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及骨和結(jié)締組織的愈合。
背景技術(shù)：
：生長因子是結(jié)合細(xì)胞表面上的受體的蛋白，主要結(jié)果是活化細(xì)胞增殖和/或分化。許多生長因子是相當(dāng)多能的，在眾多不同細(xì)胞類型中刺激細(xì)胞分裂；而其余的生長因子對(duì)特定細(xì)胞類型是特異性的。生長因子的實(shí)例包括血小板衍生生長因子(PDGF)、胰島素樣生長因子IGF-I和II、轉(zhuǎn)化生長因子(3(TGF-p)、表皮生長因子(EGF)和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)。PDGF是一種存在于多種細(xì)胞類型(包括循環(huán)血小板粒細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞)中的陽離子熱穩(wěn)定蛋白，已知其刺激成纖維細(xì)胞在體外合成蛋白和生產(chǎn)肢原蛋白。還已知其用作成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的體外有絲分裂原和趨化劑。業(yè)已表明，重組人PDGF-BB(rhPDGF-BB)在動(dòng)物和人中均可刺激傷口愈合和骨再生。其在美國和歐洲均已獲準(zhǔn)以局部施用用于人類用途，以加速慢性糖尿病足潰瘍的痊愈。還已表明，重組hPDGF-BB單獨(dú)或者與其它生長因子組合，有效改善牙周再生，即牙周圍的骨、牙骨質(zhì)和韌帶的再生長(參見例如美國專利第5,124,316號(hào)，其通過引用結(jié)合到本文中)。發(fā)明概述我們現(xiàn)在已證實(shí)，低劑量的rhPDGF(約0.1-1.0mg/mL)促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶和軟骨的修復(fù)。少量rhPDGF可吸附至可在修復(fù)部位植入的P-TCP,使得rhPDGF在體內(nèi)被釋放。業(yè)已表明，和未處理的P-TCP相比，向P-TCP加入rhPDGF增強(qiáng)成骨細(xì)胞附著和增殖。在第一個(gè)方面，本發(fā)明的特征為一種在哺乳動(dòng)物(例如人)中促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的方法，該方法給予含低于約1.0mg/ml濃度的血小板衍生生長因子(PDGF)的植入材料，使得植入材料促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以低于或等于0.3mg/ml的量給予。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1至約1.0mg/ml范圍的量給予。在幾個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.2至約0.75mg/ml之間的量、約0.25至約0.6mg/ml之間的量和約0.25至約0.5mg/ml之間的量給予。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1mg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml的量給予，優(yōu)選以0.3mg/mL的量給予。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF是部分或基本純化的。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF由其它雜質(zhì)中分離或純化出來。在又一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF在給予時(shí)由植入材料以0.3mg/天的平均速率釋放。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF在給予時(shí)由植入材料以300)Lig/天的平均速率釋放。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于100pg/天、低于50pg/天、低于10^g/天或低于1嗎/天的平均速率釋放。優(yōu)選地，PDGF在幾天(例如1、2、5、10、15、20或25天，或直到28天或更多天)內(nèi)傳遞。本發(fā)明的第二個(gè)方面的特征在于一種在哺乳動(dòng)物(例如人)中促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的方法，該方法給予含低于約1.0mg/ml量的血小板衍生生長因子(PDGF)和藥物可接受載體的植入材料，使得植入材料促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長，并使骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長。優(yōu)選地，PDGF等于或低于約0.3mg/ml。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1-1.0mg/ml的范圍給予。在其它實(shí)施方案中，PDGF的量為約0.1mg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml，優(yōu)選為0.3mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF是部分或基本純化的。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF由其它雜質(zhì)中分離或純化出來。在將植入材料給予哺乳動(dòng)物之前，所述方法可另外包括產(chǎn)生皮膚外科瓣的步驟，以暴露骨、牙周組織、韌帶或軟骨，在給予步驟后，放回外科瓣。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，在產(chǎn)生外科瓣之后但在將植入材料給予骨、牙周組織、韌帶或軟骨之前，所述方法可另外包括平整骨或牙周組織的步驟，以去除骨或牙周組織中的有機(jī)物質(zhì)。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法促進(jìn)受損傷或患病的骨、牙周組織、韌帶或軟骨的生長。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法促進(jìn)由于外科手術(shù)(例如拔牙、牙槽脊增強(qiáng)術(shù)、美容移植和竇底提升)而需要新骨形成的位置中的骨生長。本發(fā)明第三個(gè)方面的特征在于一種在哺乳動(dòng)物(例如人)中促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的植入材料。所述植入材料包含藥物可接受載體(例如生物相容性粘合劑、骨置換物、液體或凝膠)和以低于約1.0mg/mL濃度存在的血小板衍生生長因子(PDGF)。優(yōu)選地，PDGF以等于或低于約0.3mg/ml的濃度存在于植入材料中。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1-1.0mg/ml的范圍給予。在其它實(shí)施方案中，PDGF的量為約0.1mg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml,優(yōu)選為0.3mg/mL。在一個(gè)實(shí)施方案中，植入材料的藥物可接受載體包括由生物相容性粘合劑(例如羧甲基纖維素)或骨置換物(P-TCP)組成的支架或基質(zhì)，其能夠吸收含PDGF的溶液(例如含約O.lmg/mL至約1.0mg/mL范圍濃度的PDGF的溶液)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物可接受載體能夠吸收的PDGF溶液的量等于其自身重量的至少約25%。在其它實(shí)施方案中，藥物可接受載體能夠吸收的PDGF溶液的量等于其自身重量的至少約50%、75%、100%、200%、250%或300%。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過將藥物可接受載體浸在含PDGF的溶液中，使PDGF被植入材料的藥物可接受載體吸收。優(yōu)選地，PDGF以低于約1.0mg/mL的濃度存在于溶液中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以等于或低于約0.3mg/mL的濃度存在于溶液中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1-1.0mg/mL范圍的濃度存在于溶液中。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF存在于溶液中的量為約0.1mg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml,優(yōu)選為0.3mg/mL。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF是部分或基本純化的。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF由其它雜質(zhì)中分離或純化出來。本發(fā)明的第四個(gè)方面的特征在于一種制備在哺乳動(dòng)物(例如人)中促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的植入材料的方法。該方法包括將低于約1.0mg/mL量的部分純化或純化的血小板衍生生長因子(PDGF)與藥物可接受載體物質(zhì)混合的步驟。優(yōu)選地，PDGF以等于或低于約0.3mg/ml的濃度與藥物可接受載體物質(zhì)組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以約0.1-1.0mg/ml范圍的量與藥物可接受栽體物質(zhì)組合。在其它實(shí)施方案中，PDGF以0.1mg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml的量混合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF以0.3mg/ml的量混合。在再另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF被藥物可接受載體吸收，以產(chǎn)生植入材料。本發(fā)明的第五個(gè)方面的特征在于一種在藥物可接受液體中具有約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子(PDGF)的小瓶。在本發(fā)明該方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述液體為無菌乙酸鈉緩沖液。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述小瓶含約0.3mg/mL濃度的PDGF。在再另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，PDGF為PD，GF-BB。在再其它實(shí)施方案中，PDGF在儲(chǔ)存于約2'C-8(TC范圍的溫度時(shí)，其在乙酸鈉緩沖液中穩(wěn)定至少約12個(gè)月，優(yōu)選至少約18個(gè)月，更優(yōu)選至少約24個(gè)月，最優(yōu)選至少約36個(gè)月。本發(fā)明的笫六個(gè)方面的特征在于一種含多孔磷酸鈣的植入材料，在多孔磷酸鈣中吸收了含約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子(PDGF)的液體。在幾個(gè)實(shí)施方案中，PDGF的濃度為約0.3mg/mL,磷酸鈣選自磷酸三鈣、羥磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸鈣、偏磷酸4丐、二水磷酸二鈞、磷酸七4丐、焦磷酸鉤二水合物、焦磷酸鉤和磷酸八鉤，PDGF在無菌液體例如乙酸鈉緩沖液中提供。本發(fā)明的第七個(gè)方面的特征在于一種制備植入材料的方法，該方法將磷酸鈣材料飽和在含約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血d、板衍生生長因子(PDGF)的無菌液體中。在幾個(gè)實(shí)施方案中，PDGF的濃度為約0.3mg/mL,磷酸鈣選自磷酸三鈣、羥磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸鈣、偏磷酸鈣、二水磷酸二鉤、磷酸七鉤、焦磷酸鉤二7jc合物、焦磷酸鉤和》舞酸八鉤。在本發(fā)明所有方面的實(shí)施方案中，PDGF包括PDGF同二聚體和異二聚體，例如PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD及其組合和衍生物。在本發(fā)明所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，植入材料的藥物可接受載體物質(zhì)是或者另外包括以下的一種或多種生物相容性粘合劑(例如天然或合成聚合物)、骨置換物、液體和凝膠。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，植入材料包括存在于藥物可接受固體載體吸收的藥物可接受液體載體中的PDGF。在本發(fā)明所有方面的另一個(gè)實(shí)施方案中，通過將分離的、部分純化的、基本純化的或純化的PDGF與藥物可接受載體物質(zhì)混合制備植入材料，所述PDGF的量在0.1-1.0mg/ml的范圍內(nèi)，更優(yōu)選O.lmg/ml、0.3mg/ml或1.0mg/ml，最優(yōu)選0.3mg/ml，乃至低于0.1mg/ml,所述藥物可接受載體物質(zhì)例如為生物相容性粘合劑(例如天然或合成聚合物(例如膠原蛋白、聚乙醇酸和聚乳酸))、骨置換物(例如磷酸鈣(例如磷酸三鈣或羥磷灰石)、硫酸鉀或去礦質(zhì)骨(例如去礦質(zhì)凍干皮層骨或松質(zhì)骨))或市售可得的凝膠或液體(即粘性或惰性凝膠或液體)。在幾個(gè)實(shí)施方案中，植入材料的載體物質(zhì)是或另外包括一種或多種生物相容性粘合劑。生物相容性粘合劑是在混合物質(zhì)之間產(chǎn)生或促進(jìn)粘結(jié)的物質(zhì)。合適的生物相容性粘合劑的非限制性實(shí)例包括選自以下的聚合物多糖、核酸、糖、蛋白、多肽、聚(a-羥酸)、聚(內(nèi)酯)、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(原酸酯)、聚(酐-亞胺共聚物)、聚(原碳酸酯)、聚(a-羥基烷酸酯)、聚(二嗨酮)、聚(磷酸酯)、聚乳酸、聚(L-丙交酉旨)(PLLA)、聚(D,L-丙交酯)(PDLLA)、聚乙交酯(PGA)、丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)、L-丙交酯-D,L-丙交酯共聚物、D，L-丙交酯-碳酸丙二醇酯共聚物、聚乙醇酸、聚羥基丁酸酯(PHB)、聚(s-已內(nèi)酯)、聚(5-戊內(nèi)酯)、聚(，丁內(nèi)酯)、聚(已內(nèi)酯)、聚丙烯酸、聚羧酸、聚(鹽酸烯丙胺)、聚(氯化二烯丙基二曱基銨)、聚(乙烯亞胺)、聚富馬酸丙二醇酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯、聚曱基丙烯酸曱酯、碳纖維、聚(乙二醇)、聚(環(huán)氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙基嗨唑啉)、聚(環(huán)氧乙烷)-聚(環(huán)氧丙烷)嵌段共聚物、聚(對(duì)苯二曱酸乙二醇酯)聚酰胺以及其共聚物和混合物。其余的粘合劑包括藻酸、阿拉伯膠、瓜爾豆膠、黃原膠、明膠、幾丁質(zhì)、殼聚糖、乙酸殼聚糖、乳酸殼聚糖、硫酸軟骨素、N,O-羧曱基殼聚糖、葡聚糖(例如a-環(huán)糊精、P-環(huán)糊精、，環(huán)糊精或葡聚糖硫酸鈉)、纖維蛋白膠、甘油、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鈉、纖維素(例如曱基纖維素、羧曱基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羥乙基纖維素)、葡糖胺、蛋白聚糖、淀粉(例如羥乙基淀粉或可溶性淀粉)、乳酸、Pluronic、甘油磷酸鈉、膠原蛋白、糖原、角蛋白、絲蛋白及其衍生物和混合物。在某些實(shí)施方案中，生物相容性粘合劑是水溶性的。水溶性粘合劑在其體內(nèi)植入后立即由植入材料中溶解出來，由此向植入材料中引入大孔性。這種大孔性通過增強(qiáng)植入部位的破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的進(jìn)入并由此增強(qiáng)其重建活性，增加了植入材料的骨傳導(dǎo)性。生物相容性粘合劑可以不同量和在組合物制備過程中的不同階段加入到植入材料中。本領(lǐng)域才支術(shù)人員能夠確定給定用途要求的粘合劑的量和納入方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體物質(zhì)是或包括選自水、緩沖液和細(xì)胞培養(yǎng)基的液體。所述液體可以任意pH范圍使用，但最經(jīng)常在pH5.0至pH8.0的范圍內(nèi)使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，pH與存在于植入材料中的PDGF的延長穩(wěn)定性和效力相適，或與另一種需要的生物活性劑的延長穩(wěn)定性和效力相適。在大部分實(shí)施方案中，液體的pH在pH5.5至pH7.4的范圍內(nèi)。合適的緩沖液包括但不限于碳酸鹽、磷酸鹽(例如磷酸緩沖鹽水)和有機(jī)緩沖液，例如Tris、HEPES和MOPS。最經(jīng)常根據(jù)所述緩沖液與宿主組織的生物相容性及其與生物活性劑的相容性對(duì)緩沖液進(jìn)行選擇。對(duì)于其中植入材料含核酸、肽或抗生素的大部分應(yīng)用來說，簡單的磷酸鹽緩沖鹽水足矣。在本發(fā)明所有方面的另一個(gè)實(shí)施方案中，植入材料的載體物質(zhì)是或者另外包括一種或多種骨置換物。骨置換物是一種可用于永久地或臨時(shí)地置換骨的物質(zhì)。在植入后，骨置換物可由機(jī)體保留，或者可由機(jī)體再吸收并用骨替代。示例性的骨置換物包括例如磷酸鉀(例如磷酸三鈣(例如(3-TCP)、鋒磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸釣、偏磷酸鉤、二水磷酸二銬、磷酸七鉤、焦磷酸釣二水合物、焦磷酸鉤和磷酸八鉤)、硫酸鉤或去礦質(zhì)骨(例如去礦質(zhì)凍干皮層骨或松質(zhì)骨)。在一個(gè)實(shí)施方案中，栽體物質(zhì)是可生物再吸收的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，骨置換物作為孩t米或亞孩史米大小顆粒(例如納米大小的顆粒)的基質(zhì)提供。顆粒大小可在約100拜至約5000|um的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在約200pm至約3000pm的范圍內(nèi)，最優(yōu)選在約250|um至約2000pin的范圍內(nèi)，或者顆粒可在約1nm至約1000nm的范圍內(nèi)，優(yōu)選低于約500nm,更優(yōu)選低于約250nm。在另一個(gè)實(shí)施方案中，骨置換物具有多孔組合物。組合物的多孔性是令人期望的特征，因?yàn)槠溆欣诩?xì)胞遷移和浸潤入組合物中，使得細(xì)胞可分泌胞外骨基質(zhì)。其還提供'了血管化途徑。多孔性還提供了用于增強(qiáng)活性物質(zhì)的吸收和釋放以及增加細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的高表面積。優(yōu)選地，所述組合物具有的孔隙率大于40%，更優(yōu)選大于65%，最優(yōu)選大于90%。所述組合物可以適于植入的形狀(例如球形、圓柱形或塊狀)提供，或者可在使用前定大小和定型。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，骨置換物為磷酸釣(例如P-TCP)。骨置換物還可作為可流動(dòng)的、可塑的糊或膏提供。優(yōu)選地，骨置換物是在體內(nèi)植入之前或之后自硬化形成硬化磷酸鈣的磷酸鈣糊膏。本發(fā)明的磷酸鈣組分可為本領(lǐng)域已知的任意生物可相容磷酸鈣材料?？赏ㄟ^各種方法中的任一種并使用任何合適的起始組分生產(chǎn)磷酸鉤材料。例如，磷酸釣材^1"可包括無定形磷灰石磷酸鈞。磷酸鈣材料可通過結(jié)晶磷酸鈣反應(yīng)物的固態(tài)酸堿反應(yīng)產(chǎn)生，以形成結(jié)晶羥磷灰石固體。其它制備磷酸鈣材料的方法是本領(lǐng)域知曉的，其中一些在下文描述。磷酸鈣材料可為弱結(jié)晶態(tài)磷灰石(PCA)磷酸鈣或羥磷灰石(HA)。PCA材料描述于美國專利申請(qǐng)第5，650,176、5,783,217、6,027,742、6,214,368、6,287,341、6,331,312和6,541,037號(hào)，所有這些專利都通過引用結(jié)合到本文中。HA描述于例如美國專利Re.33,221和Re.33,161號(hào)。這些專利教導(dǎo)了磷酸鈣再礦化組合物的制備以及基于相同磷酸鈣組合物的細(xì)晶質(zhì)、非陶瓷型、可逐漸再吸收的羥磷灰石載體材料的制備。由磷酸四鈣(TTCP)和單磷酸鈣(MCP)或其一水合物形式(MCPM)組成的相似磷酸4丐系統(tǒng)描述于美國專利第5,053,212和5,129,905號(hào)。該磷酸鉤材料通過結(jié)晶磷酸鉤反應(yīng)物的固態(tài)酸堿反應(yīng)產(chǎn)生，以形成結(jié)晶幾磷灰石固體?？芍苽浣Y(jié)晶HA材料(通常稱為碼酸磷灰石)，使其可流動(dòng)、可塑并能夠原位硬化(參見美國專利第5,962,028號(hào))。這些HA材料(通常稱為碳酸化羥磷灰石)可如下形成將反應(yīng)物與非水性液體混合，以提供基本均一的混合物，按需要將混合物定型，并使混合物在存在水的情況下硬化(例如在植入前或植入后)。在石更化過程中，混合物結(jié)晶成固體和基本整塊的磷灰石結(jié)構(gòu)。反應(yīng)物一般由磷酸鹽源(例如基本沒有水、堿土金屬(具體地說是鈞)的磷酸或磷酸鹽源)、任選的晶核(具體地說是羥磷灰石或磷酸釣晶體、碳酸鈣)和生理可接受的潤滑劑(例如本文描述的非水性液體中的任一種)組成。干的成分可預(yù)先制備為混合物，隨后在其中發(fā)生基本均一混合的條件下與非水性液體成分混合。磷酸釣材料的特征在于其生物可再吸收性、生物相容性及其最小結(jié)晶性。其結(jié)晶特征基本與天然骨相同。優(yōu)選地，在生理?xiàng)l件下，磷酸4丐材料在不足5小時(shí)內(nèi)硬化，在約1-5小時(shí)內(nèi)基4^更化。優(yōu)選地，所述材料在約10-30分鐘內(nèi)基本石更化。在生理?xiàng)l件下的硬化率可根據(jù)治療需要通過改變?nèi)缑绹鴮＠?,027,742號(hào)所述的幾個(gè)簡單參數(shù)而變化，所述專利通過引用結(jié)合到本文中。在一個(gè)實(shí)施方案中，獲得的生物可再吸收磷酸鈣材料將是"鉀缺乏的"，鈣對(duì)磷酸根的摩爾比率低于約1.6,相比之下羥磷灰石的理想化學(xué)計(jì)量值為約1.67。期望的^l.酸鉀能夠在潮濕環(huán)境中于體溫或體溫附近在不足5小時(shí)內(nèi)硬化，優(yōu)選在10-30分鐘以內(nèi)硬化。期望的材料是以1-5g顆粒植入時(shí)在1年內(nèi)至少80%被再吸收的材料。優(yōu)選地，所述材料可被完全再吸收。在本發(fā)明所有方面的幾個(gè)實(shí)施方案中，植入材料可另外包含一種或多種生物活性劑。可摻入到本發(fā)明植入材料中的生物活性劑包括但不限于有機(jī)分子、無機(jī)材料、蛋白、肽、核酸(例如基因、基因片段、基因調(diào)節(jié)序列和反義分子)、核蛋白、多糖、糖蛋白和脂蛋白?？蓳饺氲奖景l(fā)明植入材料中的生物活性化合物的類別包括但不限于抗癌劑、抗生素、鎮(zhèn)痛藥、抗炎劑、免疫抑制劑、酶抑制劑、抗組胺劑、抗驚闕劑、激素、肌弛緩藥、抗痙攣藥、眼用藥、前列腺素、抗抑郁藥、抗精神病物質(zhì)、營養(yǎng)因子、骨誘導(dǎo)蛋白、生長因子和疫苗。抗癌藥物包括烷基化劑、鉑劑、抗代謝藥、拓樸異構(gòu)酶抑制劑、抗腫瘤抗生素、抗有絲分裂劑、芳香酶抑制劑、胸苷酸合酶抑制劑、DNA拮抗劑、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、質(zhì)子泵抑制劑、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑、金屬蛋白酶抑制劑、核糖核苷酸還原酶抑制劑、TNFoc激動(dòng)劑/拮抗劑、內(nèi)皮縮血管肽A受體拮抗劑、視黃酸受體激動(dòng)劑、免疫調(diào)節(jié)劑、激素和抗激素藥、光動(dòng)力藥和酪氨酸激酶抑制劑?？墒褂帽韑中列出的任何生物活性劑。表l.<table>complextableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>complextableseeoriginalpage22</column></row><table>抗生素包括氨基糖苷(例如慶大霉素、妥布霉素、奈替米星、鏈霉素、氨丁卡霉素、新霉素)、桿菌肽、corbapenems(例如伊米配能/cislastatin)、頭孢菌素、粘菌素、烏洛托品、單菌霉素(例如氨曲南)、青霉素(例如青霉素G、青霉素V、2,6-二曱氧基苯青霉素、natcillin、苯唑青霉素、鄰氯青霉素、二鄰氯青霉素、氨千青霉素、羥氨千青霉素、羧千青霉素、羧噻吩青霉素、哌拉西林、美洛西林、阿洛西才木)、多粘菌素B、喹諾酮和萬古霉素；以及抑菌劑，例如氯霉素、clindanyan、大環(huán)內(nèi)酯(例如紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素)、林可霉素、呋喃妥因、磺胺、四環(huán)素(例如四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、二曱胺四環(huán)素、去曱金霉素)和曱氧千啶。還包括曱硝唑、氟會(huì)諾酮和ritampin。酶抑制劑是抑制酶反應(yīng)的物質(zhì)。酶抑制劑的實(shí)例包括依酚氯銨、N-曱基毒扁豆堿、溴新斯的明、硫酸毒扁豆堿、他克林、1-幾基馬來酸、碘殺結(jié)核菌素、對(duì)溴四咪哇、10-(a-二乙基氨基丙酰基)-鹽酸吩噻噪、氯化卡米達(dá)佐、密膽堿-3、3,5-二硝基兒茶酚、二?；视图っ敢种苿㊣、二酰基甘油激酶抑制劑II、3-苯基丙炔胺、N6-—T1-L-乙酸精氨酸、卡比多巴、3-羥芐基肼、肼苯鈦溱、氯吉蘭、鹽酸司立吉林、羥胺、磷酸異丙煙肼、6-曱氧基-四氫-9H-吡啶并吲哚、煙肼酰胺、帕吉林、喹吖因、氨基脲、反苯環(huán)丙胺、N,N-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基戊酸鹽酸鹽、3-異丁基-l-曱基咕噸、罌粟堿、吲咮美辛、2-環(huán)辛基-2-鹽酸羥乙胺、2,3-二氯-a-曱基千胺(DCMB)、8,9-二氯國2，3,4,5-四氫-lH-2-鹽酸苯氮雜簞、對(duì)-氨基苯乙哌啶酮、對(duì)-氨基酒石酸苯乙哌啶酮、3-碘酪氨酸、a-曱基酪氨酸、乙酰唑胺、二氯苯磺胺、6-羥基-2-苯并瘞峻磺酰胺和別嘌呤醇?？菇M胺藥包括p比拉明、氯苯吡胺和四氬唑啉等?？寡讋┌ㄆべ|(zhì)類固醇、非甾族抗炎劑(例如阿司匹林、保泰松、吲咮美辛、舒林酸、托麥汀、布洛芬、吡羅昔康和芬那酸)、對(duì)乙氨基酚、非那西汀、金鹽、氯喹、D-青霉胺、甲氨蝶呤秋水仙堿、別噪呤醇、丙石黃舒和苯磺唑酮。肌弛緩藥包括麥酚生、methocarbomal、鹽酸環(huán)苯扎才木、鹽酸苯海索、左旋多巴/卡比多巴和吡哌立登。抗痙攣藥包括阿托品、東莨菪堿、羥苯乙銨和巽粟堿。鎮(zhèn)痛藥包括阿司匹林、保秦松、吲咮美辛、舒林酸、托麥汀、布洛芬、吡羅昔康、芬那酸、醋氨酚、非那西汀、硫酸嗎啡、硫酸可待因、美吡利啶、納洛酚、嗎啡藥物(例如硫酸可待因、枸櫞酸芬太尼、重酒石酸二氬可待因酮、洛哌丁胺、硫酸嗎啡、那可汀、去曱可待因、去曱嗎啡、蒂巴因、nor-binaltorphimine、似普羅啡、chlornaltrexamine、fiinaltrexamione、納布叫卜、納洛酚、納洛酉同、naloxonazine、納曲酮和naltrindole)、普魯卡因、利多卡因、丁卡因和二丁卡因。眼用藥包括熒光素鈉、玫瑰紅、乙酰曱膽堿、腎上腺素、可卡因、阿托品、a-胰凝乳蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、betaxalol、匹魯卡品、遙嗎咯爾、逸嗎咯爾鹽及其組合。前列腺素是本領(lǐng)域公知的，是一類天然化學(xué)相關(guān)的、具有各種生物作用的長鏈羥基脂肪酸?？挂钟魟┦悄軌蚍乐够驕p輕抑郁的物質(zhì)?？挂钟魟┑膶?shí)例包括丙咪嗪、阿米替林、去曱替林、普羅替林、去曱丙咪嗪、阿莫沙平、多塞平、麥普替林、反苯環(huán)丙胺、苯乙肼和異唑肼。生長因子是其持續(xù)存在提升細(xì)胞的存活力或壽命的因子。營養(yǎng)因子包括但不限于嗜中性白細(xì)胞活化蛋白、單核細(xì)胞趨化蛋白、巨噬細(xì)胞炎性蛋白、血小板因子、血小板堿性蛋白和黑素瘤生長刺激活性；表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子(ot)、成纖維細(xì)胞生長因子、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、胰島素樣生長因子(IGF,例如IGF-I或IGF-II)、神經(jīng)膠質(zhì)衍生生長營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)生長因子、骨生長/軟骨誘導(dǎo)因子(a和(3)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)、白介素(例如白介素抑制劑或白介素受體，包括白介素1至白介素10)、干擾素(例如干擾素a、p和y)、造血因子(包括促紅細(xì)胞生成素、粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子)；腫瘤壞死因子、轉(zhuǎn)化生長因子(P)，包括(3-l、p-2、p-3，轉(zhuǎn)化生長因子(a)、抑制素和活化素；以及骨形態(tài)發(fā)生蛋白，例如OP-l、BMP-2和BMP-7。激素包括雌激素(例如雌二醇、雌酮、雌三醇、二乙基己烯雌酚、炔雌醚、氯烯雌醚、乙炔雌二醇、雌醇曱醚)、抗雌激素(例如氯米芬、他莫昔芬)、黃體酮(例如曱孕酮、炔諾酮、雍孕酮、曱基炔諾酮)、抗黃體酮(米非司酮)、雄激素(例如環(huán)戊丙酸睪酮、氟羥曱睪酮、炔羥雄烯異唑、睪內(nèi)酯)、抗雄激素(例如醋酸環(huán)丙孕酮、氟他米特)、曱狀腺激素(例如三碘曱狀腺素、曱狀腺素、丙硫氧嘧啶、.曱硫咪唑和iodixode)和垂體激素(例如促腎上腺皮質(zhì)激素、sumutotropin、催產(chǎn)素和抗利尿素)。激素通常用于^t素替代療法和/或用于節(jié)育用途。甾類激素如強(qiáng)的松也用作免疫抑制劑和抗炎劑。期望生物活性劑也選自已知為轉(zhuǎn)化生長因子-P(TGF-p)超家族蛋白的蛋白家族，其包括活化素、抑制素和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述活性劑包括選自一般稱為BMP的蛋白亞類的至少一種蛋白，業(yè)已^^開BMP具有成骨活性和其它生長和分化類型的活性。這些BMP包括BMP蛋白BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP畫6和BMP-7,例如公開于美國專利笫5,108,922、5,013,649、5,116,738、5,106,748、5，187，076和5,141,905號(hào);BMP-8，公開于PCT申請(qǐng)WO91/18098;和BMP-9,公開于PCT申請(qǐng)WO93/00432;BMP-10,公開于PCT申請(qǐng)W094/26893;BMP-ll，公開于PCT申請(qǐng)W094/26892;或BMP-12或BMP-13，公開于PCT申請(qǐng)WO95/16035;BMP-14;BMP-15，公開于美國專利第5,635,372號(hào)；或BMP-16,公開于美國專利笫5,965,403號(hào)。其它可在本發(fā)明的磷酸鉤組合物中用作活性劑的TGF-(3蛋白包括Vgr-2，Jones等，Mo/,五mfoch"o/.6:1961(1992)以及生長和分化因子(GDF)中的任一種，包括描述于PCT申請(qǐng)W094/15965、W094/15949、WO95/01801、WO95/01802、W094/21681、W094/15966、WO95/10539、WO96/01845、WO96/02559等中的那些。本發(fā)明還可使用/>開于WO94/01557的BIP、公開于JP公開號(hào)7-250688的HP00269以及公開于PCT申請(qǐng)WO93/16099的MP52。所有以上申請(qǐng)的公開內(nèi)容都通過引用結(jié)合到本文中?？捎糜诒景l(fā)明的一部分BMP包括BMP-2、BMP-4、BMP國5、BMP-6、BMP-7、BMP-IO、BMP-12、BMP-13、BMP-14和MP52。所述活性劑最優(yōu)選為BMP-2,其序列公開于美國專利第5,013,649號(hào)，其公開內(nèi)容都通過引用結(jié)合到本文中。還可使用本領(lǐng)域已知的其它成骨物質(zhì)，例如特立帕肽(ForteoTM)、Chrysalin、前列腺素E2、LIM蛋白、成骨蛋白或去礦質(zhì)骨基質(zhì)(DBM)等。所述生物活性劑可為化學(xué)合成的、重組生產(chǎn)的或由所述生物活性劑天然存在于其中的來源純化。所述活性劑如果是TGF-P，例如BMP或其它二聚化蛋白，則其可為同二聚化的，或者可與其它BMP異二聚化(例如由BMP-2和BMP-6各自的一個(gè)單體組成的異二聚體)，或者可與TGF-p超家族的其它成員(例如活化素、抑制素和TGF-p)異二聚化(例如由BMP和TGF-(3超家族相關(guān)成員各自的一個(gè)單體組成的異二聚體)。這種異二聚化蛋白的實(shí)例例如描述于公開的PCT專利申請(qǐng)WO93/09229,其說明書通過引用結(jié)合到本文中。其余的生物活性劑包括Hedgehog、Frizzled、Chordin、Noggin、Cerberus和卵泡抑制素蛋白。這些蛋白家族一般描述于Sasai等，Cell79:779-790(1994)(Chordin);PCT專利申請(qǐng)WO94/05800(Noggin);和Fukui等，Deve/.編.159:131(1993)(卵泡抑制素)。Hedgehog蛋白描述于W096/16668、W096/17924和W095/18856。Frazzled蛋白家族是近來發(fā)現(xiàn)的蛋白家族，與稱為巻曲蛋白的受體蛋白家族的胞外結(jié)合域具有高同源性。巻曲蛋白家族的基因和蛋白描述于Wang等，說o/.CAem.271:4468-4476(1996)。所迷活性劑還可包括其它可溶性受體，例如描述于PCT專利申請(qǐng)WO95/07982的截短可溶性受體。根據(jù)WO95/07982的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，可制備眾多其它受體蛋白的截短可溶性受體。上述出版物通過引用結(jié)合到本文中。有效刺激目標(biāo)活性(例如增加現(xiàn)有或浸潤的祖細(xì)胞或其它細(xì)胞的成骨活性)的生物活性蛋白(例如成骨蛋白)量將取決于待治療缺陷的大小和特性以及所使用載體。一般來說，要傳遞的蛋白量在約0.1至約100mg的范圍內(nèi)；優(yōu)選約1至約100mg;最優(yōu)選約10至約80mg。傳遞上列物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法和方案是本領(lǐng)域已知的。將生物活性劑以允許傳遞合適劑量的物質(zhì)至植入部位的量導(dǎo)入植入材料中。在大多數(shù)情況下，使用操作者已知的且適用于所述具體物質(zhì)的指引確定劑量。包含在本發(fā)明植入材料中的生物活性劑的代表量可能取決于以下變量，例如病癥類型和程度、具體患者的整體健康狀態(tài)、活性劑的成分和使用的傳遞載體的生物再吸收能力?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn)優(yōu)化任何具體生物活性劑的劑量和給藥頻率。在本發(fā)明所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可另外包含自體骨髓或自體血小板提取物。在上述所有方面的另一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF和/或其它生長因子可得自天然來源(例如血小板)，或者更優(yōu)選地通過重組DNA技術(shù)生產(chǎn)。當(dāng)?shù)米蕴烊粊碓磿r(shí)，PDGF和/或其它生長因子可得自生物流體。生物流體包括與活體生物體相關(guān)的任何處理或未處理的流體(包括懸浮液)，具體地說是血液，包括全血，溫血或冷血，以及儲(chǔ)存血或新鮮血；處理的血液，例如用至少一種生理溶液稀釋的血液，包括但不限于鹽水、營養(yǎng)液和/或抗凝結(jié)溶液；血液組分，，例如血小板濃縮物(PC)、機(jī)a小板、富血小板血漿(PRP)、貧血小板血漿(PPP)、無血小板血漿、血漿、血清、新鮮冷凍血漿(FFP)、得自血漿的組分、壓積紅細(xì)胞(PRC)、血沉棕黃層(BC);得自血液或血液組分或得自骨髓的血制品；分離自血漿并重懸浮在生理性液體中的紅細(xì)胞；以及分離自血漿并重懸浮在生理性液體中的血小板?？商幚砩锪黧w，以在按照本發(fā)明處理前去除某些白細(xì)胞。本文使用的血制品或生物流體指上述組分，以及指通過其它方法獲得并具有相似特性的類似血制品或生物流體。在一個(gè)實(shí)施方案中，PDGF得自富血小板血漿(PRP)。PRP的制備描述于例如美國專利笫6,649,072、6,641,552、6,613,566、6,592,507、6,558,307、6,398,972和5,599,558號(hào)，這些專利通過引用結(jié)合到本文中。在本發(fā)明所有方面的一個(gè)實(shí)施方案中，植入材料在至少1天以上的時(shí)間段內(nèi)于植入部位傳遞PDGF。在幾個(gè)實(shí)施方案中，植入材料在至少7、14、21或28內(nèi)于植入部位傳遞PDGF。優(yōu)選地，植入材料在約1天至7、14、21或28天之間的時(shí)間內(nèi)于植入部位傳遞PDGF。在另一個(gè)實(shí)施方案中，植入材料在超過約1天但少于約14天的時(shí)間內(nèi)于才直入部位傳遞PDGF。所述"可生物再吸收的"指植入材料在體內(nèi)被吸收或重塑的能力。吸收過程包括通過體液、酶或細(xì)胞的作用降解和消除最初的植入材料。再吸收的材料可由宿主用于形成新組織，或者可由宿主以其它方式再利用，或者可排泄出來。所述"分化因子"指含至少6個(gè)氨基酸的鏈的多肽，其刺激一種或多種靶細(xì)胞分化為具有軟骨或骨形成潛力的細(xì)胞。所述"納米大小的顆粒"指亞孩i米大小的顆粒，一般定義為1000納米以下的顆粒。納米大小的顆粒是介于分子和宏觀物質(zhì)之間的中間態(tài)的固體顆粒材料。納米顆粒定義為一朱的十億分之一(l納米=l(T9m)。納米材料已知為具有毫微叉度的粉末、纖維、薄膜或塊。所述"牙周組織"指牙齒周圍和支持牙齒的組織。牙周組織支持、保護(hù)牙齒并為牙齒提供營養(yǎng)。牙周組織由骨、牙骨質(zhì)、上頜骨和下頜骨的牙槽突、牙周韌帶和齒齦組成。牙骨質(zhì)是一層薄的鈣化組織，完全覆蓋牙根的牙質(zhì)。牙骨質(zhì)在牙根的發(fā)育過程中形成，貫穿牙齒終生，起牙周韌帶纖維的附著區(qū)域的作用。牙槽突是上頜骨和下頜骨的骨質(zhì)部分，牙齒包埋在這里，牙根在其中得到支持。牙槽是牙槽突中的空穴，其中牙根由牙周韌帶保持。分開一個(gè)槽與另一個(gè)槽的骨叫做牙間隔膜。當(dāng)存在多根牙時(shí)，所述骨叫做根間隔膜。牙槽突包括皮質(zhì)板、牙槽嵴、骨小梁和固有牙槽骨。所述"促進(jìn)生長"指骨、牙周組織、韌帶或軟骨的痊愈和這種組織和結(jié)構(gòu)的再生。優(yōu)選地，骨、牙周組織、韌帶或軟骨受損或受傷，需要再生或痊愈。所述"促進(jìn)牙周組織生長"指已被疾病或外傷損壞的牙齒支持組織(包括牙槽骨、牙骨質(zhì)和插入的牙周韌帶)的再生或康復(fù)。所述"純化的"指生長因子或分化因子(例如PDGF)在與載體物質(zhì)混合前為95%重量或以上，即所述因子基本無與其天然結(jié)合的其它蛋白、脂質(zhì)和糖。術(shù)語"基本純化的"指較低純度的因子，具有例如僅5%-95%重量的所述因子，優(yōu)選65-95%。純化的蛋白制品一般在聚丙烯酰胺凝膠上產(chǎn)生單一主帶。最優(yōu)選地，根據(jù)氨基末端的氨基酸序列分析來判斷，用于本發(fā)明植入材料的純化因子是純的。術(shù)語"部分純化的"指在PRP、PPP、FFP或需要例如通過離心收集和分離來生產(chǎn)的任何其它血制品背景中提供的PDGF。作為實(shí)例，當(dāng)PDGF約為50%純時(shí)，具有約1.0mg/mLPDGF的溶液等同于約2.0mg/mL總蛋白。本發(fā)明的植入材料至少部分地通過促進(jìn)結(jié)締組織、骨和牙骨質(zhì)的生長幫助牙周組織再生?？芍苽渲踩氩牧?，使得它們直接促進(jìn)產(chǎn)生結(jié)締組織、骨和牙骨質(zhì)的細(xì)胞的生長和分化?；蛘撸芍苽渲踩氩牧?，使得它們通過例如吸引促進(jìn)結(jié)締組織、骨和牙骨質(zhì)生長必需的細(xì)胞間接起作用。和使用系統(tǒng)抗生素或單獨(dú)的手術(shù)清創(chuàng)術(shù)獲得的效果相比，使用本發(fā)明組合物的再生治療牙周疾病或骨損傷更有效。PDGF、多肽生長因子和分化因子可通過固相肽合成或通過重組DNA技術(shù)由人組織或細(xì)胞(例如血小板)獲得。因此，就術(shù)語"多肽生長因子"或"分化因子"而言，我們指組織或細(xì)胞源的、重組或合成的材料。如果所述因子是二聚體，例如PDGF,則重組因子可為重組異二聚體，其如下制備將編碼所迷因子的兩個(gè)亞單位的DNA序列插入到培養(yǎng)的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中，然后讓翻譯的亞單位被細(xì)胞加工，以形成異二聚體(例如PDGF-AB)?；蛘?，可將僅編碼其中一個(gè)亞單位(例如pdgf&鏈或a-鏈)的dna插入細(xì)胞中，然后培養(yǎng)細(xì)胞，以生產(chǎn)同二聚化因子(例如PDGF-BB或PDGF-AA同二聚體)。用于本發(fā)明方法的PDGF包括PDGF同二聚體和異二聚體，例如PDGF-AA、PDGF-BB、PDGF-AB、PDGF-CC和PDGF-DD及其組合和;f汙生物?？赏ㄟ^使用如例如美國專利笫6,221,625、5,747,273和5,290,708號(hào)(這些專利通過引用結(jié)合到本文中)描述的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定或本領(lǐng)域已知用于測(cè)定蛋白濃度的任意其它實(shí)驗(yàn)，測(cè)定本發(fā)明的PDGF或其它生長因子的濃度。當(dāng)在本文中提供時(shí)，基于PDGF二聚體分子量(PDGF-BB;MW-約25kDa)測(cè)定PDGF的摩爾濃度。本發(fā)明的方法和植入材料可用于治愈哺乳動(dòng)物的骨損傷，例如骨折、植入體容納部位和牙周疾病部位。相比于天然愈合(即沒有外源物質(zhì))或通過加入系統(tǒng)抗生素補(bǔ)充的愈合，植入材料促進(jìn)結(jié)締組織生長以及修復(fù)和增強(qiáng)骨形成。與天然愈合、常規(guī)外科治療或抗生素不同，本發(fā)明的植入材料當(dāng)施用于受損或患病組織或牙周疾病侵襲部位時(shí)，迅速增加骨、結(jié)締組織(例如軟骨和韌帶)和牙骨質(zhì)形成。這些組織的恢復(fù)導(dǎo)致受侵襲區(qū)域的預(yù)后改善。這些因子刺激新骨形成的能力還使其可適用于治療由其它類型的感染或手術(shù)或意外損傷引起的骨缺損。由以下的本發(fā)明實(shí)施方案的描述和權(quán)利要求書顯而易見本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)。附圖筒述圖1A-1G是顯微照片，顯示了治療后8周時(shí)對(duì)骨形成的作用。圖1A是顯樣史照片，顯示了單獨(dú)的手術(shù)對(duì)骨形成的作用。圖IB是顯微照片，顯示了單獨(dú)的P-TCP對(duì)骨形成的作用。圖1C是顯微照片，顯示了(3-TCP+0.3mg/mLPDGF對(duì)骨形成的作用。圖ID是顯微照片，顯示了(3-TCP+1.0mg/mLPDGF對(duì)骨形成的作用。圖IE是顯微照片，顯示了單獨(dú)的去礦質(zhì)凍干骨同種異體移植物(DFDBA)對(duì)骨形成的作用。圖1F是顯^:照片，顯示了去礦質(zhì)凍干骨同種異體移植物(DFDBA)+0.3mg/mLPDGF對(duì)骨形成的作用。圖1G是顯微照片，顯示了去礦質(zhì)凍干骨同種異體移植物(008入)+1.0mg/mL對(duì)骨形成的作用。圖2A-2C是顯微照片，顯示了治療后16周時(shí)對(duì)骨形成的作用。圖2A是顯;^照片，顯示了單獨(dú)的p-TCP對(duì)骨形成的作用。圖2B是顯樣t晤片，顯示了P-TCP+0.3mg/mLPDGF對(duì)骨形成的作用。圖2C是顯孩t照片，顯示了P-TCP十1.0mg/mLPDGF對(duì)骨形成的作用。發(fā)明詳述我們現(xiàn)在描述了本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方案。以下列出了兩個(gè)實(shí)例，其表明了PDGF作為骨和牙周組織愈合劑的用途。實(shí)施例按照本發(fā)明，通過組合部分純化或純化的PDGF與上述任何藥物可接受的載體物質(zhì)，治療骨傷口，例如牙周疾病或創(chuàng)傷之后的骨傷口，并再生牙周組織，包括骨、牙骨質(zhì)和結(jié)締組織。純化的PDGF可得自重組來源或人血小板。市售重組PDGF可得自R&DSystemsInc.(Minneapolis,MN)、BDBiosciences(SanJose,CA)和Chemicon，International(Temecula，CA)。部分純4匕和純4匕的PDGF也可如下制備'.將500-1000單位的清洗過的人血小板沉淀懸浮在1MNaCl(2ml/血小板單位)中，并加熱至10(TC達(dá)15分鐘。然后通過離心分離上清液，用1MNaCl提取沉淀兩次?；旌咸崛∥?，并對(duì)0.08MNaCl/0.01M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)透析，于4。C與用該緩沖液平衡的CM-SephadexC-50混合過夜。然后將混合物傾入柱(5x100cm)中，用0.08MNaCl/0.01M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)徹底清洗，用1MNaCl洗脫，同時(shí)收集10ml各級(jí)分。合并活性級(jí)分，對(duì)0.3MNaC1/0.01M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)透析，離心，并于4。C通過用0.3MNaC1/0.01M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)平衡的2.5x25cmBluesepharose(Pharmacia)柱。然后用所述纟爰沖液流洗該柱，用1MNaCl和乙二醇的1:1溶液洗脫部分純化的PDGF。部分純化的PDGF級(jí)分與1MNaCl稀釋(l:l),對(duì)1M乙酸透析，并凍干。凍干樣品溶解在0.8MNaCl/0.01M磷酸鈉緩沖液(pH7.4)中，并通過用所述緩沖液平衡的1.2x40cmCM-SephadexC-50柱。然后用NaCl梯度(0.08-lM)洗脫P(yáng)DGF。合并活性級(jí)分，對(duì)1M乙酸透析，凍干，并溶解在少量1M乙酸中。0.5ml部分上樣至用1M乙酸平衡的1.2x100cmBiogelP-150(100-200目)柱。然后用1M乙酸洗脫P(yáng)DGF,同時(shí)收集2mL各級(jí)分。凍干含100-200mg蛋白的各個(gè)活性級(jí)分，溶解在100mL0.4%三氟乙酸中，在苯基Bondapak柱(Waters)上進(jìn)行反相高效液相層析。用線性乙腈梯度(0-60%)洗脫獲得純PDGF。y>戎術(shù)時(shí)PZX7F.'來源于人血小板的血小板衍生生長因子(PDGF)包含兩個(gè)多肽序列(PDGF-B和PDGF-A多肽；Antoniades,H.N.和Hunkapiller,M.,S"'e"ce220:963-965,1983)。PDGF-B由位于染色體7的基因編碼(Betsholtz，C.等，Atoi/M320:695-699),PDGF-A由位于染色體22(Dalla-Favera,R.,Sdewce218:686-688,1982)的sis癌基因編碼(Doolittle:R.等，ScZe"ce221:275-277，1983)。sis基因編碼與PDGF-2多肽密切相關(guān)的猿猴肉瘤病毒(SSV)轉(zhuǎn)化蛋白。人細(xì)胞c-sis也編碼PDGF-A鏈(Rao,C.D.等，尸roc.A^/.OSL483:2392-2396,1986)。因?yàn)镻DGF的兩條多肽鏈由位于單獨(dú)染色體中的兩種不同基因編碼，所以存在以下可能性人PDGF由二硫鍵合的PDGF-B和PDGF-A的異二聚體組成，或由兩種同二聚體(PDGF-BB同二聚體和PDGF-AA同二聚體)的混合物組成，或由異二聚體和兩種同二聚體的混合物組成。已表明，在用含PDGF-A鏈編碼基因的猿猴肉瘤病毒感染的培養(yǎng)物中哺乳動(dòng)物細(xì)胞合成PDGF-A多肽，并將其加工成二硫鍵合的同二聚體(Robbins等，305:605-608,1983)。另外，PDGF-A同二聚體與針對(duì)人PDGF產(chǎn)生的抗血清反應(yīng)。而且，分泌的PDGF-A同二聚體的功能特性類似于血小板衍生的PDGF的功能特性，因?yàn)槠湓谂囵B(yǎng)的成纖維細(xì)胞中刺激DNA合成，在185kD細(xì)胞膜蛋白的酪氨酸殘基處誘導(dǎo)磷酸化，并能夠與人0"I)-PDGF竟?fàn)幗Y(jié)合特異性細(xì)胞表面PDGF受體(Owen,A.等，225:54-56,1984)。來源于惡性細(xì)胞(Antoniades，H.等，Ca"c^Ceto3:145-151，1985)的sis/PDGF-A基因產(chǎn)物顯示出相似特性。使用表達(dá)載體通過將c-sis/PDGF-B基因的cDNA克隆導(dǎo)入小鼠細(xì)胞中獲得重組PDGF-B同二聚體。用于表達(dá)的c-sis/PDGF-B克隆得自正常人培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞(Collins,T.等，A^加216:748-750,1985)。尸ZXFW,途單獨(dú)的或與其它生長因子組合的PDGF可用于促進(jìn)骨愈合、骨生長和再生或者創(chuàng)傷或疾病損傷的牙齒支持結(jié)構(gòu)的愈合。其還可用于促進(jìn)拔牙部位、下頜脊增高或植牙部位的愈合。在骨折部位或感染區(qū)域(例如骨髓炎)或腫瘤部位的骨愈合也應(yīng)增強(qiáng)。PDGF還可用于促進(jìn)韌帶(例如牙周韌帶)和牙骨質(zhì)的生長和愈合。在使用時(shí)，PDGF或其它生長或分化因子直接應(yīng)用于需要愈合或再生的區(qū)域。一般來說，其應(yīng)用在為液體或固體的可再吸收或不可再吸收載體中，然后用繃帶或4妄近的薄紗包裹該部位。對(duì)于lcn^面積，足以促進(jìn)骨生長的量一般在500ng至5mg之間，但1cm2面積的上限事實(shí)上為1mg，優(yōu)選的PDGF施用量為0.3mg/mL。^^r/2尸ZX7F-萬萬^理的^f傳^^i:來的f^岸iPDGF促進(jìn)牙周組織和骨生長的有效性由以下研究證實(shí)。狗體內(nèi)研究獵犬是用于測(cè)試推定的牙周再生材料和方法的最廣泛使用的動(dòng)物模型(Wikesjo等，■/C7/".尸enodowto/.15:73-78,1988;Wikesjo等，J.尸er/c^owto/.16:116-119,1999;Cho等，《/.尸ehodowto/.66:522-530,1995;Giannobile等，JPenc^o"to/.69:129-137,1998;和Clergeau等,《7尸enocfo"to/.67:140-149,1996)。菌斑和結(jié)石累積可豫發(fā)可導(dǎo)致周邊骨質(zhì)流失的齒齦炎，狗和人中的牙周炎病原學(xué)是可比較的。但是，在天然疾病中，缺損之間沒有一致性。另外，由于已對(duì)犬育種群中的口部健康給予了更多關(guān)注，所以獲得具有天然牙周疾病的動(dòng)物已變得不切實(shí)際。因此，手術(shù)誘發(fā)的橫向III型分叉模型已變成研究牙周愈合和再生的最常用模型之一。使用本發(fā)明的PDGF組合物治療具有橫向III型分叉缺損的獵犬。15只成年獵犬提供了60處處理過的缺損。治療后2個(gè)月活檢42處缺損，在治療后4個(gè)月活檢15處缺損。絲《鍵使用如眾多研究者描述的"極限"牙周缺損模型(參見例如Wikesjo，1988和1999,出處同上；Giannobile,出處同上；Cho，出處同上；和Park等，《/.尸eno必"to/66:462-477,1995)。使用沒有全身和口部健康問題的16只雄性獵犬(2-3歲)的左右兩個(gè)下頜骨。在給藥前1個(gè)月，在用IV注射戊巴比妥鈉(25mg/kg)麻醉前約30分鐘，皮下注射阿托品(0.02mg/kg)和乙酰丙嗪(0.2mg/kg)使動(dòng)物鎮(zhèn)靜。在用鹽酸利多卡因加腎上腺素1:100,000局部浸潤手術(shù)部位后，翻開全厚瓣，拔出第一和第三前臼齒(P1和P"。另外，切除第一臼齒牙冠的近中部分。的P2和P4整個(gè)周緣附近的牙槽骨。建立橫向骨缺損，使得分叉f窿距骨嵴的距離為5mm。所述缺損約1cm寬，這取決于牙齒寬度。用刮匙和超聲設(shè)備平整所有實(shí)驗(yàn)牙齒的根，并用錐形金鋼砂鉆處理，以去除牙骨質(zhì)。在建立標(biāo)準(zhǔn)化骨缺損后，縫合齦瓣，以實(shí)現(xiàn)一期縫合。動(dòng)物喂飼軟食，在研究過程中每日接受洗必泰淋洗。隨機(jī)化15只動(dòng)物左右下頜骨每一個(gè)中的P2和P4的牙周缺損，然后使用封膜處理。在創(chuàng)建缺損后約4周，如上所述再麻醉動(dòng)物，翻開左右兩個(gè)下頜骨中的全厚瓣。使用1/2球鉆在余下骨峰處的牙根表面4故一個(gè)切跡，以用作以后的組織參照點(diǎn)。該部位用無菌鹽水沖洗，為了凈化和去除涂層，如前所述用檸檬酸處理牙根(參見例如Cho,出處同上，和Park,出處同上)。在此階段中，用rhPDGF-BB溶液(0.3或1.0mg/ml)飽和其量足以填補(bǔ)牙周缺損的p-TCP或DFDBA,令rhPDGF-BB/移植混合物在無菌手術(shù)臺(tái)上靜置約10分鐘。然后以輕孩t壓力將rhPDGF-BB飽和的移植物擠入缺損中，達(dá)到理想的骨再生水平。在植入移植材料后，^吏用鄰間(interproximal)間斷(interrupted)的4.0膨體聚四氟乙烯(ePTFE)縫線與牙骨質(zhì)牙釉質(zhì)交界(CEJ)近似水平地縫合全厚瓣。在縫瓣后，輕輕地將葡糖酸洗必泰膠敷在牙齒和齒齦周圍。缺損接受以下的任一種1.p-TCP2.J3-TCP+rhPDGF-BB(0.3mg/mlrhPDGF-BB)3.P-TCP+rhPDGF-BB(1.0mg/mlrhPDGF-BB)4.狗DFDBA5.狗DFDBA+rhPDGF國BB(0.3mg/mlrhPDGF-BB)6.狗DFDBA+rhPDGF-BB(1.0mg/mlrhPDGF-BB)7.假手術(shù)(僅通過開瓣清創(chuàng)術(shù)處理，無移植物)在兩個(gè)月時(shí)活檢每個(gè)治療組的6處缺損(共42個(gè)部位)。另夕卜，在4個(gè)月時(shí)活檢治療組1、2和3中的5處缺損(共15個(gè)部位)。表2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)<table>complextableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>因此，在8周時(shí)，將11只狗中的42個(gè)部位分為7組。在16周時(shí)，將4只狗中的15個(gè)部位分為3組(l只狗相距8周交^t^接受兩種治療手術(shù)，因此為8周和16周時(shí)間點(diǎn)各自提供了兩個(gè)部位)。通過在術(shù)后前4周當(dāng)中喂祠狗軟食保護(hù)手術(shù)部位。為確保最佳愈合，前2周提供采用千星青霉素G的全身抗生素治療，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，通過每日用2%葡糖酸洗必泰沖洗維持菌斑對(duì)照。在3周后去除縫線。數(shù)據(jù)收集炎凝僅桌^的差本^理選擇8周的時(shí)間點(diǎn)，因?yàn)檫@是文獻(xiàn)中針對(duì)該模型報(bào)告的最常見時(shí)間點(diǎn)，因此有豐富的歷史數(shù)據(jù)。例如Wikesjo等，出處同上和Giannobile等，出處同上也在相同模型中選擇8周時(shí)間點(diǎn)分別評(píng)價(jià)BMP-2和OP-l的再生作用。另夕卜，Park等，出處同上在8周時(shí)于獵犬模型中評(píng)價(jià)了直接應(yīng)用于有和沒有GTR膜的病態(tài)根表面的rhPDGF-BB作用。這些研究強(qiáng)有力地表明，8周周期對(duì)表明不同治療模式中的潛在重要作用應(yīng)是最優(yōu)的。選擇16周時(shí)間點(diǎn)，以評(píng)價(jià)生長因子治療的長期作用。先前的研究(Park等，出處同上)表明，至該時(shí)間時(shí)存在顯著的骨缺損自發(fā)愈合。不過，有可能評(píng)價(jià)rhPDGF-BB治療是否導(dǎo)致任何不常見或不正常的組織反應(yīng)，例如改變的骨重建、胂瘤發(fā)生或根再吸收?；?"和治^伊#在活檢時(shí)，動(dòng)物用4%多聚甲醛灌注并處死。然后取出下頜骨并置于固定劑中。對(duì)根尖周進(jìn)行放射照相，使用金剛石鋸將治療部位切成單獨(dú)的塊。以紗布纏繞編;馬的(盲的)塊，浸入到4°/。多聚甲醛溶液中、處理并分析。在處理過程中，活檢品在乙醇中脫水，在曱基丙烯酸曱酯中浸潤和包埋。用低速金剛石鋸和冷卻劑獲得約300Mm厚度的未脫鉀切片。將切片粘合在乳光丙烯酸玻璃上，研磨至約80jjm的最終厚度，用曱苯胺藍(lán)和堿性品紅染色。獲得近遠(yuǎn)中徑平面的分步連續(xù)切片。對(duì)覆蓋載玻片進(jìn)行組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析。評(píng)價(jià)以下參數(shù)1.全新附著物的長度(CNAA):以舊骨牙冠高度和新骨牙冠高度之間的距離檢測(cè)牙周再生，僅包括鄰接新牙骨質(zhì)的新骨以及在新骨和新牙骨質(zhì)之間具有功能定向的牙周韌帶。2.新骨填充(NB):檢測(cè)分叉中形成的新骨的橫切片區(qū)域。3.結(jié)締組織填充(CT):檢測(cè)分叉中由齒齦結(jié)締組織占據(jù)的區(qū)域。4.空隙(VO):其中沒有組織的退縮區(qū)域。結(jié)果A録應(yīng)#在臨床上，所有部位都愈合良好。根據(jù)術(shù)后1周內(nèi)存在健壯的粉紅齒齦的指示，有一個(gè)印象是rhPDGF-BB治療的部位愈合得更快速。根據(jù)治療部位目檢評(píng)價(jià)，任何治療組都未經(jīng)歷不利事件。似乎在接受單獨(dú)的P-TCP或DFDBA的組別中的齒齦退縮增加。萬.^e身,銀初應(yīng)蔡經(jīng)放射照相觀察，其它組相比，根據(jù)組2、3(f3-TCP+rhPDGF-BB，分別為0.3和1.0mg/ml)和6(DFDBA+rhPDGF-BB1.0mg/ml)中射線不透性增加來判斷，有證據(jù)表明在2個(gè)月時(shí)骨形成增加(圖1A-G)。在4個(gè)月時(shí)，與兩個(gè)月的時(shí)間點(diǎn)相比，有證據(jù)表明所有組中的骨形成都增加。沒有放射照相證據(jù)表明在任何組中存在任何異常的骨重建、牙^L吸收或關(guān)節(jié)強(qiáng)石更。表3.放射照相結(jié)果。等級(jí)次序<table>complextableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>c逾欽教杏對(duì)新牙骨質(zhì)、新骨和新牙周韌帶(CNAA)的長度進(jìn)行組織形態(tài)計(jì)量學(xué)評(píng)價(jià)，以及評(píng)價(jià)新骨填充、結(jié)締組織填充和空隙空間，并以百分率表示。就CNAA而言，各個(gè)測(cè)試組的值代表CNAA檢測(cè)結(jié)果(mm長度)/可用的CNAA總長度(mm)x100。/。。評(píng)價(jià)骨填充、結(jié)締組織填充和空隙空間，并以總分叉缺損區(qū)域的百分率表示。單因素方差分析(ANOVA)用于測(cè)試治療組中的整體差異，使用Student'st檢驗(yàn)進(jìn)行成對(duì)對(duì)比。在分析編碼載玻片時(shí)發(fā)現(xiàn)組間的顯著差異。表4顯示了兩個(gè)月時(shí)的結(jié)果。表4.兩個(gè)月時(shí)的組織計(jì)量學(xué)分析<formula>complextableseeoriginaldocumentpage39</formula>*組2和3顯著高于(p<0.05)組4和7。**組1顯著高于(p<0.05)組4。卞組2顯著高于(p〈0.05)組5。J組2和3顯著高于組l、4和7。承組6顯著高于組4。在無移植物的手術(shù)組和手術(shù)+單獨(dú)的P-TCP組中的平均牙周再生百分率(CNAA)分別為27%和37%。相反，含rhPDGF-BB的(3-TCP組表現(xiàn)出的牙周再生顯著高于(p<0.05)無移植物的手術(shù)或單獨(dú)的DFDBA(對(duì)于0.3和1.0mg/ml濃度分別為59%和46%,相比之下對(duì)于單獨(dú)的手術(shù)為27%,對(duì)單獨(dú)的DFDBA為13%)。最后，含0.3mg/mlrhPDGF-BB的P-TCP組表現(xiàn)出的牙周再生顯著高于(p<0.05)與同種異體移植組合的相同濃度rhPDGF-BB(59%對(duì)21%)。在P國TCP+0.3mg/mlrhPDGF-BB(84.C)o/o)和p-TCP+1.0mg/mlrhPDGF-BB(74.2%)組中的骨填充顯著高于(p<0.05)單獨(dú)的(3-TCP(28.0%)、單獨(dú)的手術(shù)(34%)或單獨(dú)的DFDBA(6。/。)治療組。與DFDBA+0.3mg/mlrhPDGF-BB組相比，(3-TCP+0.3mg/mlrhPDGF國BB組的骨填充顯著較高(p<0.05)(分別為84%和20%)。檢查DFDBA組和單獨(dú)的手術(shù)組的8周數(shù)據(jù)的分析組(組4、5、6和7)表明，就牙周再生而言(CNAA),在DFDBA組和單獨(dú)的手術(shù)組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。存在著以下趨勢(shì)和單獨(dú)的DFDBA相比，用1.0mg/mlrhPDGF-BB增強(qiáng)的DFDBA治療的部位再生較高。與單獨(dú)的DFDBA相比，用DFDBA+1.0mg/mlrhPDGF-BB治療的部位的骨填充顯著較高(p<0.05)(分別為46和6%)。存在著以下趨勢(shì)和單獨(dú)的DFDBA或單獨(dú)的手術(shù)相比，含0.3mg/mlrhPDGF-BB的DFDBA治療的部位的骨填充較高。但是，和單獨(dú)的手術(shù)相比，用單獨(dú)的DFDBA治療的部位表現(xiàn)出進(jìn)入缺損的骨填充較少(分別為6和34%)，大部分缺損沒有任何填充或由齒齦(軟)結(jié)締組織組成的填充。在治療后的4個(gè)月，牙周再生仍有顯著差異。由于廣泛的關(guān)節(jié)強(qiáng)硬，單獨(dú)的(3-TCP產(chǎn)生36%再生，而用含rhPDGF-BB的p-TCP治療的部位在0.3和1.0mg/mlrhPDGF-BB濃度具有58%和49%的平均再生。在全部3個(gè)治療組中都存在顯著的骨填充。單獨(dú)的P-TCP產(chǎn)生70%骨填充，P-TCP+0.3mg/mlrhPDGF獲得100%填充，而1.0mg/mlrhPDGF組具有75%填充。D組織學(xué)評(píng)價(jià)除了一個(gè)由于處理過程中遇到困難而不能評(píng)價(jià)以外，對(duì)其余的所有活檢品進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。示例性顯孩i照片示于圖1A-G和2A-C。圖1A顯示了用單獨(dú)的手術(shù)(無移植物)治療的部位的結(jié)果。該樣本顯示了在切跡區(qū)域中顯現(xiàn)出來的有限的牙周再生(新骨(NB)、新牙骨質(zhì)(NC)和牙周韌帶(PDL)),并僅向牙冠方向伸出短距離。分叉區(qū)主要由密集的軟結(jié)締組織(CT)占據(jù)，新骨(NB)形成最少。對(duì)于用單獨(dú)的P-TCP治療的部位(圖1B)，存在的牙周再生類似于對(duì)單獨(dú)手術(shù)樣本所觀察到的，其由切跡底部向牙冠方向伸出短距離。如在單獨(dú)手術(shù)樣本中所觀察到的，新骨形成非常少，最大的分叉區(qū)由軟結(jié)締組織占據(jù)。相反，圖1C顯示了對(duì)用(3-TCP+0.3mg/mlrhPDGF-BB治療的部位所獲得的結(jié)果。顯示出顯著的牙周再生，新骨、新牙骨質(zhì)和牙周韌帶沿著分叉區(qū)的整個(gè)表面延伸。另外，分叉區(qū)被新骨填充，新骨將分叉的完整高度延伸至官窿。(3-TCP+1.0mg/mlrhPDGF-BB治療的部位的示例性結(jié)果示于圖1D。盡管在分叉中有顯著的牙周再生，但其沒有沿著分叉的整個(gè)表面延伸。存在新骨形成連同在缺損的牙冠部分觀察到的軟結(jié)締組織，以及在分叉官窿處沒有任何組織的小空間(VO)。圖2A、2B和2C表明了對(duì)同種異體移植治療組所獲得的結(jié)果。單獨(dú)的DFDBA組(圖2A)的示例性結(jié)果顯示出非常差的牙周再生，其局限于切跡區(qū)域，僅在牙冠方向上稍孩t延伸。新骨形成有限，沿著剩余的DFDBA移植材料表面由少量骨形成組成(沿著較亮的粉色島的黑紅色染色)。另外，新骨#1在牙冠方向上延伸以填充分叉內(nèi)明顯區(qū)域的大量軟結(jié)締組織包圍。最后，大空隙空間由軟結(jié)締組織的牙冠范圍延伸至分叉官窿。DFDBA+0.3和1.0mg/mlrhPDGF-BB的組織學(xué)結(jié)果分別示于圖2B和2C。相比于單獨(dú)的DFDBA,兩組都表現(xiàn)出較高的牙周再生，全新附著物(新骨、新牙骨質(zhì)和牙周韌帶)由根中的切跡底部向牙冠方向延伸短距離(箭頭)。它們還在分叉區(qū)中具有更大的骨填充，盡管存在軟結(jié)締組織對(duì)分叉的顯著填充。結(jié)論基于研究結(jié)果，使用0.3mg/mL或1.0mg/mL的rhPDGF-BB與合適載體物質(zhì)(例如P-TCP)組合治療牙周缺損，產(chǎn)生的牙周再生高于現(xiàn)有產(chǎn)品或方法，例如采用單獨(dú)的(3-TCP或骨同種異體移植物的移植或沒有移植物的牙周手術(shù)。用0.3mg/mL和1.0mg/mL濃度的rhPDGF治療引起牙周再生。與1.0mg/ml濃度的rhPDGF相比，0.3mg/ml濃度的rhPDGF在與卩-TCP混合時(shí)表現(xiàn)出更好的牙周再生和骨填充百分率。P-TCP在與任何濃度的rhPDGF-BB混合時(shí)都比同種異體移植更有效。在所有組中新骨一般隨時(shí)間(0、8和16周)成熟(重建)。在rhPDGF組中，關(guān)節(jié)強(qiáng)硬或牙根吸收沒有增加。實(shí)際上，接受rhPDGF-BB的部位出現(xiàn)的關(guān)節(jié)強(qiáng)硬往往少于對(duì)照部位。該觀察結(jié)果可能由4下事實(shí)引起rhPDGF-BB對(duì)牙周韌帶細(xì)胞是促有絲分裂的和趨化性的。材料和方法使用的P-TCP具有為牙周用途而優(yōu)化的顆粒大小(0.25mm-l.Omm)?；谑褂萌Ｐ偷难芯?，給予的p-TCP在3個(gè)月內(nèi)約80%被再吸收，并在愈合過程中被自體骨置換。DFDBA由MusculoskeletalTransplantFoundation(MTF)提供。該材料是狗同種異體移植物，由在完成了另一個(gè)研究后被處死的狗的骨制備，所述另一個(gè)研究被檢驗(yàn)為對(duì)骨骼組織沒有作用的手術(shù)方法。重組hPDGF-BB由BioMimeticPharmaceuticals提供，由FDA批準(zhǔn)的人用rhPDGF-BB的唯一供應(yīng)商Chiron,Inc生產(chǎn)。該rhPDGF-BB由FDA批準(zhǔn)為傷口愈合制品，商標(biāo)名稱為Regranex。含兩個(gè)單獨(dú)濃度的0.5ml無菌rhPDGF-BB的1ml注射器依照FDA的人用材料標(biāo)準(zhǔn)并按照現(xiàn)行適用的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(cGMP)制備。測(cè)試濃度包括0.3mg/ml和1.0mg/ml。(3-TCP在含0.5cc無菌顆粒的小瓶中提供。DFDBA在含l.Occ無菌、去礦質(zhì)的凍干狗骨同種異體移植物的2.0ml注射器中提供。#賴務(wù)在手術(shù)過程中，通過將rhPDGF-BB溶液與J^質(zhì)材料混合制備最終植入的移植物。簡單地講，將其量足以完全填充骨缺損的TCP或同種異體移植物置于無菌皿中。然后加入足以完全飽和基質(zhì)的rhPDGF-BB溶液，混合材料，使其于室溫在手術(shù)盤上靜置約10分鐘，然后填于骨缺損中。與P-TCP材料的10分鐘溫育時(shí)間足以荻得生長因子的最大吸收(參見附件A)。這對(duì)臨床部門外科醫(yī)生也是將制品填入牙周缺損之前擁有的適宜時(shí)間量。同樣，在商品市場(chǎng)中，rhPDGF-BB和基質(zhì)材料可在試劑盒的單獨(dú)容器中提供，所述材料可在填入前直接混合。該試劑盒理念應(yīng)極大地簡化了制品有效期/穩(wěn)定性因素。尸ZXF浴#乂^的f^矛凝撈的^途測(cè)試重組人PDGF-BB(rhPDGF-BB)在人受試者中對(duì)牙周骨再生的作用。給予兩個(gè)測(cè)試組0.3mg/mL(組I)或1.0mg/mL(組II)的rhPDGF-BB。rhPDGF-BB在乙酸鈉緩沖液中制備，在|3-磷酸三鉤((3-TCP)載體中給予。對(duì)照組組III僅給予在乙酸鈉緩沖液中的P-TCP。臨床研究的目標(biāo)是評(píng)價(jià)含(3-TCP和0.3mg/mL或1.0mg/mL的rhPDGF-BB的移植材料在1-3壁骨內(nèi)牙周缺損管理中的安全性和有效性，以及評(píng)價(jià)其在骨和軟組織中的再生能力。^f^:談^"和浴^^蕃研究是在需要手術(shù)治療鄰近自然牙列的骨缺損的受試者中進(jìn)行的雙盲、受控、前瞻、隨機(jī)、平行設(shè)計(jì)、多中心臨床實(shí)驗(yàn)。所述受試者以相等比例隨機(jī)化，產(chǎn)生3個(gè)治療組，每組約60名受試者(共180名)。研究時(shí)程為植入研究裝置后6個(gè)月。研究招募了180名受試者。夢(mèng)脊弄J^入^赤雀在至少一個(gè)部位具有需要手術(shù)治療以修正骨缺損的晚期牙周疾病的25-75歲男性和女性受試者被許可進(jìn)入研究。其它入選標(biāo)準(zhǔn)包括l)在篩查隨訪時(shí)檢測(cè)出7mm或以上的牙周袋探診深度；2)在手術(shù)清創(chuàng)后，具有至少1骨壁的4mm或以上的垂直骨缺損(BD);3)足量的角化組織，以使組織完全覆蓋缺損；和4)根據(jù)放射照片，缺損底部在牙冠方向距牙齒頂部至少3mm。明確允許1天吸煙達(dá)1包并具有I型和II型分叉病變的受試者入選。發(fā)f的浙量和才4所有的治療試劑盒都包含0.25gp-TCP(陽性對(duì)照)，各治療組還包含單獨(dú)的0.5mL乙酸鈉緩沖溶液(組m)、0.3mg/mLrhPDGF-BB(組I)或1.0mg/mLrhPDGF-BB(組11)。在整個(gè)清創(chuàng)術(shù)和根面平整術(shù)之后，測(cè)試溶液與(3-TCP在無菌容器中混合，使得(3-TCP被完全飽和。使用四環(huán)素、EDTA或檸檬酸使牙根表面病態(tài)化。然后將水合的移植物擠入骨缺損中，組織瓣用牙間縫合保護(hù)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)手術(shù)部位的完整覆蓋。才放遂檢承/主要的有效性檢測(cè)包括基線和術(shù)后6個(gè)月之間臨床附著水平(CAL)的變化(組I對(duì)組m)。次要的有效性檢測(cè)包括以下結(jié)果l)基于放射照片評(píng)價(jià)，由基線至術(shù)后6個(gè)月的線性骨生長(LBG)和骨填充%(。/oBF)(組I和組II對(duì)組III);2)基線和術(shù)后6個(gè)月之間的CAL變化(組II對(duì)組III);3)基線和術(shù)后6個(gè)月之間的牙周袋探診深度減少(PDR)(組I和組II對(duì)組III);4)基線和術(shù)后6個(gè)月之間的齒齦退縮(GR)(組I和組II對(duì)組III);5)在術(shù)后前3周當(dāng)中手術(shù)部位的傷口愈合(WH)(組I和組II對(duì)組III);6)基線與3和6個(gè)月之間的CAL變化的曲線下面積(組I和組II對(duì)組III);7)在術(shù)后6個(gè)月時(shí)n/。BF的95%置信下限(LCB)(組I、II和III對(duì)如在文獻(xiàn)Parashis等，J.Periodontal.69:751-758,1998中公開的去礦質(zhì)凍干骨同種異體移植物(DFDBA));8)在術(shù)后6個(gè)月時(shí)的線性骨生長的95%LCB(組I、II和III對(duì)如在文獻(xiàn)Persson等，J.Clin.Periodontal.27:104-108,2000中公開的去礦質(zhì)凍干骨同種異體移植物(DFDBA));9)基線和6個(gè)月之間的CAL史化的95%LCB(組I、II和III對(duì)EMDOGAIN-PMAP930021,1996);和10)基線和6個(gè)月之間的CAL變化的95%LCB(組I、II和III對(duì)PEPGENP-15-PMAP990033,1999)。通過描述性統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)和總結(jié)安全性和有效性數(shù)據(jù)。分類檢測(cè)表示為數(shù)字和百分率，連續(xù)變量表示為平均值、中值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和范圍。測(cè)試物治療組(組i和n)和對(duì)照(組m)之間的統(tǒng)計(jì)對(duì)比使用針對(duì)分類變量的卡方和Fisher精確檢驗(yàn)以及針對(duì)連續(xù)變量的t檢驗(yàn)或方差分析法(ANOVA)進(jìn)行。治療組間順序變量的對(duì)比使用Cochran-Mantel-Haenszel法進(jìn)行。對(duì)于CAL、LBG和。/。BF,P<0.05(單側(cè))被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。通過以臨床和放射照相評(píng)〗介的不利事件的頻率和嚴(yán)重性評(píng)價(jià)安全性數(shù)據(jù)。3個(gè)治療組在基線時(shí)沒有顯著差異。在3個(gè)治療組中，在不利事件(AE;全因)發(fā)生率方面也沒有觀察到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。安全性分析未鑒別出由于移植材料植入而引起的任何受試者風(fēng)險(xiǎn)增加。有效性結(jié)果的總結(jié)與陽性對(duì)照單獨(dú)的(3-TCP(組III)和歷史對(duì)照(包括DFDBA、EMDOGAIN⑧和PEPGENP-15])相比，兩個(gè)治療組(組I和II)的統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果在臨床上和統(tǒng)計(jì)學(xué)上均顯示出顯著的利益。在術(shù)后3個(gè)月，觀察到由基線開始的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的CAL增加，組I大于組III(p=0.041)，表明PDGF對(duì)CAL增加有顯著的早期利益。在術(shù)后6個(gè)月時(shí)，這種趨勢(shì)繼續(xù)是組I超過組III,盡管這種差異不是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(p=0.200)。代表基線和6個(gè)月之間CAL增加的累積作用(即速度)的曲線下面積分析(AUC)接近統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p=0.054)，組I比組m大。此外，相比于在6個(gè)月時(shí)對(duì)EMDOGAIN㊣和PEPGENP-15TM觀察到的CAL增加，所有治療組的95%置信下限(LCB)分析都證實(shí)了組I和II的有效性。除了觀察到的CAL臨床利益之外，包括線性骨生長(LBG)和骨填充百分率(。/。BF)的放射照相分析揭示了組I和II相對(duì)于組III在骨量增加方面的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著改善。％BF定義為根據(jù)放射照相檢測(cè)的新骨填充原骨缺損的百分率。與組III(0.9mm,p〈0.001)相比，LBG在組I中顯示出顯著改善(2.5mm)。與組III相比，LBG對(duì)組II(1.5mm)也是顯著的(p-0.021)。與組III(18%)相比，術(shù)后6個(gè)月時(shí)組I(56%)和組II(34%)中的骨填充百分率(o/oBF)顯著增加，分別為p<0.001和p=0.019。與最廣泛使用的牙周移植法材料DFDBA的公開放射照片結(jié)果相比，在術(shù)后6個(gè)月時(shí)線性骨生長和％骨填充的95%置信區(qū)間下限支持了組I和II的有效性。在3個(gè)月時(shí)，與組III相比，組I有顯著較少的牙齦退縮(GR)(p=0.041)，這與用CAL觀察到的有益作用一致。在6個(gè)月時(shí)未觀察頁到PDR和GR方面的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。在3周時(shí)表現(xiàn)出完全傷口愈合(WH)的部位數(shù)目的描迷性分析揭示，相對(duì)于組II(60%)和組III(55%),組1(72%)有改善，表明愈合改善的趨勢(shì)。為評(píng)價(jià)臨床和放射照相結(jié)果的累積有益作用，進(jìn)行綜合有效性分析，以確定具有成功結(jié)果的患者的百分率，成功結(jié)果定義為在6個(gè)月時(shí)CAL〉2.7mm和LBG〉1.1mm。CAL和LBG成功基準(zhǔn)由所植入移植物達(dá)到的這些參數(shù)的平均水平來確立，所述參數(shù)在以上的"有效性檢測(cè)"章節(jié)中確定。結(jié)果表明，相比于組III患者的30.4%，61.7%的組I患者和37.9%的組II患者滿足或超過成功的綜合基準(zhǔn)，產(chǎn)生組I相對(duì)于組III的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著利益(p〈0.001)。％BF揭示了組I(70.0%)相對(duì)于組111(44.6%)的相似利益，p值為0.003?？傊?，相比于單獨(dú)的(3-TCP陽性對(duì)照組(組III),組I在3個(gè)月時(shí)實(shí)現(xiàn)了CAL和GR的統(tǒng)計(jì)學(xué)有益結(jié)果，以及在6個(gè)月時(shí)實(shí)現(xiàn)了LBG和n/。BF的統(tǒng)計(jì)學(xué)有益結(jié)果。這些結(jié)果的臨床顯著性由與歷史對(duì)照的對(duì)比進(jìn)一步證實(shí)。由此斷定，含PDGF的移植材料至6個(gè)月時(shí)顯示出獲得了治療牙周骨缺損的臨床和放射照相有效性。表5:PDGF移植有效性的總結(jié)<table>complextableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>在研究達(dá)6個(gè)月、包含180名受試者的大型隨機(jī)化臨床實(shí)驗(yàn)中，含0.3mg/mL和1.0mg/mLPDGF的移植材料(即卩-TCP)表明在患有中度至晚期牙周炎的牙齒周圍的牙槽骨和臨床附著水平恢復(fù)方面是安全和有效的。這些結(jié)論基于下文概述的經(jīng)驗(yàn)證的放射照片和臨床檢測(cè)結(jié)果。與上文論述的含PDGF的移植材料的生物相容性數(shù)據(jù)和各個(gè)單獨(dú)組分(即單獨(dú)的p-TCP或單獨(dú)的PDGF)的歷史性安全應(yīng)用相一致，該研究揭示了沒有局部或全身不利作用的證據(jù)。沒有可歸因于移植材料的不利結(jié)果，發(fā)現(xiàn)所述遺傳材料是安全的。潛論據(jù)3個(gè)月時(shí)與陽性對(duì)照相比顯著改善的CAL所示，對(duì)于軟組織附著水平和骨的恢復(fù)而言，發(fā)現(xiàn)植入含0.3mg/mL或1.0mg/mLPDGF的P-TCP是有效治療。我們的觀察結(jié)果還與表明基線和6個(gè)月之間的CAL增加改善的AUC分析一致。基于和陽性對(duì)照相比的LBG和。/oBF的顯著改善，還發(fā)現(xiàn)植入含0.3mg/mL或1.0mg/mLPDGF的(3-TCP是有效治療。與單獨(dú)的P-TCP陽性對(duì)照相比，軟組織和硬組織檢測(cè)這二者的綜合分析所表明的臨床結(jié)果顯著改善也證實(shí)了上述治療方法的有效性。最后，發(fā)現(xiàn)給予含0.3mg/mL或1.0mg/mLPDGF的(3-TCP的結(jié)果超過了既有的在臨床和放射照相這二個(gè)方面的有效性基準(zhǔn)。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果連同體外、動(dòng)物和人體研究的廣泛切實(shí)數(shù)據(jù)一起表明，含PDGF的移植材料在牙周缺損中刺激軟組織和硬組織再生，當(dāng)在移植材料中給予0.1-1.0mg/mL(例如O.lmg/mL、0.3mg/mL或1.0mg/mL)范圍的PDGF時(shí)作用更顯著。而且，在移植材料中以0.3mg/mL的量給予的PDGF有效再生軟組織和骨。其它實(shí)施方案在以下的權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種促進(jìn)哺乳動(dòng)物的骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的方法，所述方法包括給予所述哺乳動(dòng)物植入材料，所述植入材料在藥物可接受的液體載體和藥物可接受的固體載體中包含約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子(PDGF)，其中所述植入材料促進(jìn)所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨的生長。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述PDGF具有約0.3mg/mL的濃度。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述PDGF具有0.3mg/mL的濃度。4.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物可接受的固體載體包括以下的一種或多種生物相容性粘合劑、骨置換物或凝膠。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物相容性粘合劑為天然或合成的聚合物。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述天然或合成的聚合物選自多糖、核酸、糖、蛋白、多肽、膠原蛋白、聚(a-羥酸)、聚(內(nèi)酯)、聚(氨基酸)、聚(酐)、聚(原酸酯)、聚(酐-亞胺共聚物)、聚(原碳酸酯)、聚(a-羥基烷酸酯)、聚(二嗯酮)、聚(磷酸酯)、聚乳酸、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(D,L-丙交酉旨)(PDLLA)、聚乙醇酸、聚乙交酯(PGA)、丙交酯-乙交酯共聚物(PLGA)、L-丙交酯-D,L-丙交酯共聚物、D,L-丙交酯-碳酸丙二醇酯共聚物、聚羥基丁酸酯(PHB)、聚(s-已內(nèi)酯)、聚(S-戊內(nèi)酯)、聚Cr-丁內(nèi)酯)、聚(已內(nèi)酯)、聚丙烯酸、聚羧酸、聚(鹽酸烯丙胺)、聚(氯化二烯丙基二曱基銨)、聚(乙烯亞胺)、聚富馬酸丙二醇酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯、聚曱基丙烯酸曱酯、碳纖維、聚(乙二醇)、聚(環(huán)氧乙烷)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(乙基嗨唑啉)、聚(環(huán)氧乙烷)-聚(環(huán)氧丙烷)嵌段共聚物、聚(對(duì)苯二曱酸乙二醇酯)聚酰胺以及其共聚物和混合物。7.權(quán)利要求5的方法，其中所迷天然或合成聚合物選自膠原蛋白、聚乙醇酸、聚乳酸和聚曱基丙烯酸曱酯。8.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物相容性粘合劑選自藻酸、阿拉伯膠、瓜爾豆膠、黃原膠、明膠、幾丁質(zhì)、殼聚糖、乙酸殼聚糖、乳酸殼聚糖、硫酸軟骨素、N,O-羧曱基殼聚糖、葡聚糖、纖維蛋白膠、甘油、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鈉、纖維素、葡糖胺、蛋白聚糖、淀粉、乳酸、Pluronic、甘油磷酸鈉、膠原蛋白、糖原、角蛋白、絲蛋白及其衍生物和混合物。9.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物相容性粘合劑是透明質(zhì)酸鈉或其衍生物。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述生物相容性粘合劑是透明質(zhì)酸。11.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物相容性粘合劑選自曱基纖維素、羧曱基纖維素、羥丙基甲基纖維素或雍乙基纖維素。12.權(quán)利要求10的方法，其中所述生物相容性粘合劑為羧曱基纖維素。13.權(quán)利要求8的方法，其中所述葡聚糖是a-環(huán)糊精、P-環(huán)糊精、了-環(huán)糊精或葡聚糖硫酸鈉。14.權(quán)利要求8的方法，其中所述淀粉是羥乙基淀粉或可溶性淀粉。15.權(quán)利要求4的方法，其中所述骨置換物選自磷酸鉤、硫酸鉤或去礦質(zhì)骨。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述磷酸鉀選自磷酸三鈣、羥磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸鈣、偏磷酸鈣、二水磷酸二4丐、磷酸七鈣、焦磷酸鈣二水合物、焦磷酸鉤和磷酸八釣。17.權(quán)利要求15的方法，其中所述磷酸鉀作為在體內(nèi)給予時(shí)形成石更化磷酸鉀的糊或膏提供。18.權(quán)利要求15的方法，其中所述磷酸鈣作為硬化磷酸釣提供。19.權(quán)利要求15的方法，其中所述磷酸鈣是生物可再吸收的。20.權(quán)利要求16的方法，其中所述磷酸三鉤是P-磷酸三鉤(P-TCP)。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述(3-TCP包含孩么米或亞微米大小顆粒的基質(zhì)。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述(3-TCP顆粒具有小于約5000Mm的大小。23.權(quán)利要求21的方法，其中所述P-TCP顆粒具有約100至約5000pm范圍內(nèi)的大小。24.權(quán)利要求23的方法，其中所述(3-TCP顆粒具有約100至約3000ium范圍內(nèi)的大小。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述P-TCP顆粒具有約250至約2000fim范圍內(nèi)的大小。26.權(quán)利要求21的方法，其中所述P-TCP顆粒是多孔的。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述p-TCP顆粒的孔隙率大于40%。28.權(quán)利要求27的方法，其中所述P-TCP顆粒的孔隙率大于65%。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述(3-TCP顆粒的孔隙率大于90%。30.權(quán)利要求20的方法，其中所述P-TCP以適于植入的形狀提供。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述形狀選自球形、圓柱形和塊狀。32.權(quán)利要求15的方法，其中所述去礦質(zhì)骨是皮層骨或松質(zhì)骨。33.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物可接受的液體載體選自水、生理可接受的緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述生理可接受的緩沖液是乙酸鈉緩沖液。35.權(quán)利要求l的方法，其中所述組合物還包含生物活性劑。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述生物活性劑選自抗體、抗生素、多核苷酸、多肽、蛋白、抗癌劑、生長因子、抗炎劑和疫苗。37.權(quán)利要求36的方法，其中所述蛋白是成骨蛋白。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述成骨蛋白選自胰島素樣生長因子I(IGF-I)、胰島素樣生長因子II(IGF-II)、轉(zhuǎn)化生長因子-pi(TGF-pi)、轉(zhuǎn)化生長因子-P2(TGF-(32)、轉(zhuǎn)化生長因子-a(TGF-ot)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)或成骨蛋白。39.權(quán)利要求l的方法，其中所述植入材料還包含自體骨髓或自體血小板提取物。40.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF是部分或基本純化的。41.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF得自天然來源或重組來源。42.權(quán)利要求41的方法，其中所述天然來源包括血液、血小板、血清、血小板濃縮物、富血小板血漿(PRP)或骨髓。43.權(quán)利要求41的方法，其中所述天然來源為富血小板血漿(PRP)。44.權(quán)利要求.1的方法，其中所述植入材料在給予后傳遞所述PDGF至所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨，持續(xù)至少1天。45.權(quán)利要求1的方法，其中所述植入材料在給予后傳遞所迷PDGF至所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨，持續(xù)少于約28天。46.權(quán)利要求1的方法，其中所述植入材料在給予后傳遞所述PDGF至所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨，持續(xù)少于約21天。47.權(quán)利要求1的方法，其中所迷植入材料在給予后傳遞所述PDGF至所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨，持續(xù)少于約14天。48.權(quán)利要求1的方法，其中所述植入材料在給予后傳遞所述PDGF至所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨，持續(xù)約1天至約14天。49.權(quán)利要求l的方法，其中所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨受損傷。50.權(quán)利要求l的方法，所述方法還包括使所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的步驟。51.權(quán)利要求50的方法，所述方法還包括以下步驟在給予所述植入材料前通過產(chǎn)生皮膚外科瓣使所迷骨、牙周組織、輛帶或軟骨暴露，在給予所述植入材料后放回所述外科瓣。52.權(quán)利要求51的方法，所述方法在產(chǎn)生皮膚外科瓣以暴露所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨的步驟之后、但在步驟(a)之前還包括以下步驟平整所述骨或牙周組織，以由所述骨或牙周組織去除有機(jī)物質(zhì)。53.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于或等于300pg/天的平均速率釋放。54.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于100ng/天的平均速率釋放。55.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于50iLig/天的平均速率釋放。56.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于10ILlg/天的平均速率釋放。，57.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF在給予時(shí)由植入材料以低于1pg/天的平均速率釋放。58.權(quán)利要求l的方法，其中所述藥物可接受的液體載體是無菌的。59.權(quán)利要求l的方法，其中所述PDGF是PDGFAA、PDGFBB、PDGFCC或PDGFDD或其組合或衍生物。60.權(quán)利要求59的方法，其中所述PDGF是PDGF-BB。61.權(quán)利要求59的方法，其中所述PDGF是PDGF-AB。62.—種促進(jìn)哺乳動(dòng)物中的骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的方法，所述方法包括(a)給予所述哺乳動(dòng)物植入材料，所述植入材料在藥物可接受的液體栽體和藥物可接受的固體載體中包含低于或等于0.3mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子(PDGF),其中所述植入材料促進(jìn)所述骨、牙周組織、韌帶或軟骨的生長。63.—種小瓶，所述小瓶在藥物可接受的液體中含約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子(PDGF)。64.權(quán)利要求63的小瓶，其中所述液體是無菌乙酸鈉緩沖液。65.權(quán)利要求63的小瓶，所述小瓶含約0.3mg/mL濃度的PDGF。66.權(quán)利要求63的小瓶，其中所述PDGF為PDGF-BB。67.權(quán)利要求64的小瓶，其中所述PDGF當(dāng)儲(chǔ)存于2'C-80'C范圍的溫度時(shí)在所述緩沖液中穩(wěn)定至少36個(gè)月。68.權(quán)利要求64的小瓶，其中所述PDGF當(dāng)儲(chǔ)存于2。C-80。C范圍的溫度時(shí)穩(wěn)定至少24個(gè)月。69.權(quán)利要求64的小瓶，其中所述PDGF當(dāng)儲(chǔ)存于2'C-80。C范圍的溫度時(shí)穩(wěn)定至少18個(gè)月。70.權(quán)利要求64的小瓶，其中所述PDGF當(dāng)儲(chǔ)存于2'C-80。C范圍的溫度時(shí)穩(wěn)定至少12個(gè)月。71.—種植入材料，所述植入材料包含其中吸收有液體的多孔磷酸鈣，所述液體包含在約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍內(nèi)的血小板衍生生長因子(PDGF)。72.權(quán)利要求71的a7v材料，其中所述PDGF的濃度為約0.3mg/mL。73.權(quán)利要求71的植入材料，其中所述磷酸鉤選自磷酸三鈞、羥磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸鉤、偏磷酸鉤、二水磷酸二鈣、磷酸七鉤、焦磷酸鉤二水合物、焦磷酸鉤和磷酸八鉤。74.權(quán)利要求71的植入材料，其中所述PDGF在無菌液體中提供。75.權(quán)利要求74的植入材料，其中所述液體是乙酸鈉緩沖液。76.—種制備植入材料的方法，所述方法包括在無菌液體中飽和磷酸鈣材料，所述液體包含在約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍內(nèi)的血小板衍生生長因子(PDGF)。77.權(quán)利要求76的方法，其中所述PDGF的濃度為約0.3mg/mL。78.權(quán)利要求76的方法，其中所述磷酸鈣選自磷酸三4丐、羥磷灰石、弱結(jié)晶態(tài)羥磷灰石、無定形磷酸鉤、偏磷酸鉀、二水磷酸二鉤、磷酸七4丐、焦磷酸鉤二水合物、焦磷酸鉤和磷酸八銅。全文摘要一種在哺乳動(dòng)物中促進(jìn)骨、牙周組織、韌帶或軟骨生長的方法，該方法通過對(duì)骨、牙周組織、韌帶或軟骨施用組合物，所述組合物在藥物可接受的液體載體和藥物可接受的固體載體中包含約0.1mg/mL至約1.0mg/mL濃度范圍的血小板衍生生長因子。文檔編號(hào)A61K38/00GK101198343SQ200580042385公開日2008年6月11日申請(qǐng)日期2005年10月12日優(yōu)先權(quán)日2004年10月14日發(fā)明者S·E·林奇申請(qǐng)人:生物模擬治療公司