專利名稱：穩(wěn)定的dotap氯化物晶形的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對映體純的DOTAP氯化物和外消旋和對映體純DOTAP氯化物的晶形(crystal modification)、其制備方法及其制備藥物組合物的用途。
上下文中的DOTAP氯化物表示N，N，N-三甲基-2，3-雙[[(9Z)-1-氧代-9-十八碳烯基]氧基]-1-丙烷銨氯化物，也稱(Z，Z)-N，N，N-三甲基-2，3-雙[(1-氧代-9-十八碳烯基)氧基]-1-丙銨氯化物或1，2-二油酰氧基-3-三甲基銨丙烷氯化物，及其水合物。
C42H80ClNO4， Mw698.54CAS編號132172-61-3和477274-39-8(外消旋物)、197974-73-58(外消旋物，一水合物)、428506-51-8(2S型)、328250-28-8(2R型)。
脂質(zhì)體是合成的多層囊(球狀自含膜)，包含兩親性物質(zhì)，通常為天然脂質(zhì)，其中親水性物質(zhì)可以包封在水性內(nèi)層中，并且親脂性物質(zhì)可以摻入到脂質(zhì)膜內(nèi)部。
它們特別被用在化妝品和藥物中，尤其是皮膚病學(xué)科。特別是將維生素、輔酶、皮膚護(hù)理劑和防曬劑進(jìn)行包埋。脂質(zhì)體一般是局部應(yīng)用的。
不過，脂質(zhì)體在藥物技術(shù)中逐漸發(fā)揮更多的重要性，因為脂質(zhì)體的腸胃外應(yīng)用能夠?qū)崿F(xiàn)比以自由溶解形式使用的活性化合物更加特異性的器官分布。
如果摻入DNA、RNA或蛋白質(zhì)，則得到脂質(zhì)體復(fù)合物(lipoplexes)。
油類的加入和高壓均質(zhì)化器的使用能夠迫使脂質(zhì)體形成所謂的納米粒子(納米粒)。這些粒子的大小與脂質(zhì)體大致相同，但是在其內(nèi)部不具有水相，而代之以油相。它們特別適合于包封親脂性物質(zhì)。
微乳是膠態(tài)分散的單相系統(tǒng)，其包含水性、脂質(zhì)樣和表面活性劑組分。它們的粒徑為1-500nm，并且行為方式與液體相似。
尤其關(guān)于肽類活性化合物、核苷酸、疫苗和其它生物藥物，它們在正常情況下的溶解性較差，增溶效應(yīng)在上述應(yīng)用的情況下具有非常巨大的重要性。
另外，以這種方式能夠延緩活性化合物在體內(nèi)的降解并實現(xiàn)持續(xù)釋放效應(yīng)。
DOTAP氯化物屬于陽離子脂質(zhì)類。與天然存在的磷脂相反，它們不具有兩性離子特征。包含陽離子脂質(zhì)、無論單獨(dú)還是組合有磷脂或其它脂質(zhì)樣化合物的脂質(zhì)體都具有帶正電的表面。這對于具有帶負(fù)電的外部表面的細(xì)胞、例如內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生很高的親和性。
不過，特別重要的是DOTAP類與其它陽離子脂質(zhì)體和脂質(zhì)體復(fù)合物穿透細(xì)胞、并由此向細(xì)胞內(nèi)部運(yùn)輸其中所摻入的活性化合物(轉(zhuǎn)染)的能力。
所有這些性質(zhì)都使DOTAP氯化物也非常受關(guān)注于癌癥療法。這些性質(zhì)為應(yīng)用摻入在陽離子DOTAP脂質(zhì)體中的常規(guī)細(xì)胞抑制劑提供可能性。
從文獻(xiàn)中可以充分知曉DOTAP氯化物和其它DOTAP鹽的轉(zhuǎn)染性質(zhì)，例如乙酸鹽、溴化物、磷酸二氫鹽、硫酸氫鹽、碘化物、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、三氟乙酸鹽、硫酸鹽或二硫酸鹽和三氟甲磺酸鹽。
DOTAP磷酸二氫鹽和DOTAP甲磺酸鹽僅作為外消旋物在文獻(xiàn)中被提及。所有其它上述鹽各自作為外消旋物和2S-對映體被提及，另外提到氯化物和甲基硫酸鹽的2R-對映體。
在一些體外研究中，其它的鹽、例如DOTAP甲基硫酸鹽已經(jīng)達(dá)到比DOTAP氯化物更好的轉(zhuǎn)染率。
不過在體內(nèi)使用中，在活體內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)體表面上的陰離子交換，這意味著這里不出現(xiàn)其它鹽的優(yōu)點(diǎn)。尤其在人類醫(yī)藥用途中，特別是腸胃外應(yīng)用，具有生理學(xué)上可接收的陰離子的DOTAP鹽、例如相應(yīng)的氯化物或乙酸鹽因此是優(yōu)選的。
醫(yī)藥、特別是腸胃外應(yīng)用對于所用活性化合物和助劑的質(zhì)量和純度有最高的要求。因此，主管部門關(guān)于這些化合物的制備、制備再現(xiàn)性和副產(chǎn)物情況有非常嚴(yán)格的規(guī)定。在腸胃外用物質(zhì)的情況下，必須另外嚴(yán)格避免和控制病原性微生物和內(nèi)毒素帶來的微生物污染。
DOTAP氯化物和其它DOTAP鹽是極其不穩(wěn)定的，因此本身難以以可接受的純度進(jìn)行制備以使它們適合用于藥物制備。
象所有攜帶油酸原子團(tuán)的脂質(zhì)一樣，例如天然磷脂DOPC和DOPE，所有DOTAP鹽對于氧化作用非常敏感。不過，不飽和脂肪酸衍生物的氧化產(chǎn)物一般具有很高的毒性。
這里需要適合的制備和純化方法。例如，DOTAP乙酸鹽為高沸點(diǎn)油的形式，因此在工業(yè)上以足夠的質(zhì)量獲得它是非常困難的。
克服所述不穩(wěn)定性的常規(guī)方法、例如加入抗壞血酸或還原L-谷胱苷肽形式的抗氧化劑大大限制了DOTAP氯化物的普遍可用性，因為不能排除與后來被包埋的活性化合物的相互作用。在制備、貯存和使用期間完全排除氧實際上是不可能的，或者僅在非常巨大的努力下才有促進(jìn)作用。
DOTAP氯化物在商業(yè)上僅可獲得氯仿溶液或無定形固體。
除了它的氧化敏感性以外，無定形DOTAP氯化物在極短時間內(nèi)、在正常大氣濕度水平下也是極其吸濕和潮解的，得到油膩的薄膜。這使這種化合物的處理更加困難。
因而，無定形DOTAP氯化物的制造商一般推薦在-20℃保護(hù)性氣體下貯存，并且僅保證約6個月的貨架壽命。
文獻(xiàn)僅披露過制備無定形、外消旋DOTAP氯化物的各種合成途徑Eibel和Unger在DE4013632A1中概述了DOTAP氯化物的合成，在氯仿/甲醇/含水HCl溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行DOTAP溴化物的離子交換，繼之借助色譜純化。DOTAP溴化物是預(yù)先從1-溴-2，3-二油酰氧基丙烷就地制得的。
Leventis和Silvius在Biochim.Biophys.Acta，1023(1990)124-132中報道了DOTAP氯化物的合成，在兩相溶劑/NaCl溶液系統(tǒng)中進(jìn)行DOTAP碘化物的離子交換。DOTAP碘化物是預(yù)先借助甲基碘甲基化相應(yīng)的二甲氨基化合物而制得的。
Nantz等在Biochim.Biophys.Acta，1299(1996)281-283，J.Med.Chem.40(1997)4069-4078中描述了DOTAP氯化物的非水性離子交換色譜合成。蒸發(fā)洗脫液，得到所需化合物。
Felgner等在US 5,264,618中借助氯甲烷進(jìn)行相應(yīng)二甲氨基化合物的甲基化，直接得到DOTAP氯化物。他們通過從-20℃乙腈中結(jié)晶，表面上得到了黃色的蠟。不過，DOTAP氯化物事實上在室溫下是不溶于乙腈的。再現(xiàn)這種所謂結(jié)晶的嘗試僅僅通過熱溶液冷卻所得油性物質(zhì)的固化得到無定形材料。作者明顯沒有實現(xiàn)純化效果并且不得不借助色譜純化該物質(zhì)的事實也證明了這不是結(jié)晶的事實。
所以，制備兩種對映體DOTAP氯化物的合成途徑和其特有性質(zhì)迄今都不是已知的。盡管化學(xué)文摘已經(jīng)為兩種對映體指定了編號，不過相應(yīng)的出版物僅僅描述對于外消旋DOTAP氯化物所進(jìn)行的工作。
特別是如果這些化合物旨在腸胃外使用，包括用離子交換樹脂處理在內(nèi)的制備鑒于可能的微生物污染是極其成問題的，因為相應(yīng)的樹脂是細(xì)菌的理想營養(yǎng)介質(zhì)，即使在它們已被殺死之后，被內(nèi)毒素污染的風(fēng)險仍然存在。
本發(fā)明的目的因此是提供高純度并具有足夠的化學(xué)和物理穩(wěn)定性的DOTAP氯化物鹽和水合物。本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供貨架壽命長的這些鹽，使它們能夠用于制備藥物制劑。對于能夠在工業(yè)規(guī)模上進(jìn)行的穩(wěn)定形式的DOTAP氯化物鹽和水合物的可再現(xiàn)制備方法仍然存在巨大的需求。
對映體純的DOTAP氯化物能夠用類似于外消旋物所述方法從對映體純的原料制得，也就是經(jīng)由(R或S)-1-氯-2，3-二油酰氧基丙烷，
經(jīng)由(R或S)-1-LG-2，3-二油酰氧基丙烷和離子交換(LG＝離去基團(tuán))或者經(jīng)由(R或S)-1-二甲氨基-2，3-二油酰氧基丙烷。
進(jìn)一步可以提到的制備方法是外消旋DOTAP氯化物的外消旋化合物拆分。
借助實驗已經(jīng)驚人地發(fā)現(xiàn)，以簡單的方式能夠制得外消旋的和對映體純的結(jié)晶性DOTAP氯化物，其具有較高的化學(xué)純度和優(yōu)異的穩(wěn)定性。以這種方式制得的結(jié)晶性產(chǎn)物在室溫和保護(hù)性氣體下具有實際上無限的穩(wěn)定性。它們因此適合作為藥物形式制備的成分或原料。
本發(fā)明因此涉及對映體純的DOTAP氯化物和穩(wěn)定的外消旋和對映體純DOTAP氯化物的晶形。
穩(wěn)定的晶形可以是結(jié)晶性和部分結(jié)晶性形式。它們具有迄今從未實現(xiàn)過的＞98％純度，并且在25℃和60％相對大氣濕度下且排除空氣貯存12個月后，具有迄今從未實現(xiàn)過的＞98％穩(wěn)定性，相對于起始值而言(這一點(diǎn)參見表1)。所述DOTAP氯化物晶形每當(dāng)量DOTAP氯化物具有小于1當(dāng)量的水或結(jié)晶溶劑。
外消旋DOTAP氯化物晶形例如存在三種不同的晶形(I型、II型和III型)，在粉末X-射線衍射測量中表現(xiàn)適中尖銳的峰帶(這一點(diǎn)參見

圖1至圖3和表2)。
各種晶形的選定2θ值為12.6、19.5、20.2、21.5和25.2(I型)；或者3.3、4.9、19.3、20.0和23.5(II型)；或者2.8、5.8、20.0、21.2和25.1(III型)。
同樣以結(jié)晶形式制得對映體純的DOTAP氯化物。晶形的選定2θ值為12.8、19.4、19.8、20.2和21.5(IV型，這一點(diǎn)參見圖4)。
對映體是旋光活性的。因而，(2S)-DOTAP氯化物的旋光度為-2.12°，(2R)-DOTAP氯化物的旋光度為+2.12°([α]D20℃，1％二氯甲烷溶液)。
本發(fā)明此外涉及制備DOTAP氯化物晶形的方法，其特征在于從質(zhì)子惰性介質(zhì)中結(jié)晶DOTAP氯化物。用于這種目的的質(zhì)子惰性介質(zhì)可以是質(zhì)子惰性溶劑或其混合物。
質(zhì)子惰性介質(zhì)也可以包含少量質(zhì)子溶劑，例如水。在例外情況下，在適合的條件下也可以存在25重量％的質(zhì)子溶劑。這里，DOTAP氯化物的結(jié)晶可以直接從反應(yīng)溶液進(jìn)行，無需在先純化。同樣，借助無定形、部分結(jié)晶性或結(jié)晶性材料的重結(jié)晶，可以制得結(jié)晶性DOTAP氯化物。
適合的質(zhì)子惰性溶劑特別是醚類，例如四氫呋喃、甲基四氫呋喃、二烷、二乙醚、二丙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚，酮類，例如丙酮、2-丁酮、甲基異丁基酮、甲基異丙基酮，腈類，例如乙腈，和酯類，例如甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯和1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-酮。
這些溶劑在每種情況下可以使用純凈形式或混合物形式，也就是說有可能以混合物形式使用同一組的各種質(zhì)子惰性溶劑，也有可能以彼此混合物形式采用不同類型的質(zhì)子惰性溶劑。上文已經(jīng)指出，在所用質(zhì)子惰性溶劑或溶劑混合物中可以存在質(zhì)子溶劑添加劑。
這種類型的質(zhì)子溶劑添加劑通常可以由下列溶劑組成醇類，例如甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、2-丁醇、叔丁醇、3-甲基-1-丁醇、乙二醇、甲氧基乙醇、乙氧基乙醇，或水。
質(zhì)子溶劑添加劑繼而可以是純?nèi)軇┗蜻@些質(zhì)子溶劑的混合物的添加劑。
DOTAP氯化物晶形的結(jié)晶一般是如下具體實現(xiàn)的，緩慢冷卻所制備的溶液至低于30℃的溫度。晶體的形成是自發(fā)進(jìn)行的或者通過接種相應(yīng)的DOTAP氯化物晶形。
各種DOTAP氯化物晶形可以彼此轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化可以如下實現(xiàn)，在升高的溫度下熱處理所分離的晶形，或者在結(jié)晶條件下延長攪拌它們的懸浮液。
使用無定形或部分結(jié)晶性DOTAP氯化物作為重結(jié)晶原料，由所述方法得到本質(zhì)上結(jié)晶性的DOTAP氯化物，其具有迄今從未實現(xiàn)的純度以及迄今從未實現(xiàn)的穩(wěn)定性。
本發(fā)明也涉及結(jié)晶性DOTAP氯化物制備藥劑的用途，因為結(jié)晶性DOTAP氯化物在規(guī)定條件下以固體形式具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，并且具有恒定的和非常良好的質(zhì)量達(dá)實際上無限的時間。
另外，對映體純的DOTAP氯化物具有不同于外消旋物的物理性質(zhì)，特別是與手性化合物、例如磷脂或膽固醇的組合。
對映體純的DOTAP氯化物所發(fā)現(xiàn)的新穎性質(zhì)、無論單獨(dú)還是組合有適合的磷脂、膽固醇及其衍生物都可以有利地用于提供新穎的脂質(zhì)體級別，與常規(guī)形式相比，一方面更緊密地包裝脂質(zhì)，另一方面具有更均勻的結(jié)構(gòu)。因而，從純對映體制備的脂質(zhì)體與包含外消旋DOTAP氯化物的脂質(zhì)體相比，表現(xiàn)高出5℃的主相變溫度(principal phasetransition temperature)。這是包裝密度的量度。包含DOTAP氯化物對映體的脂質(zhì)體因此也減少摻入其中的化合物的泄漏。
這樣的結(jié)果是填充有藥學(xué)活性化合物的脂質(zhì)體將隨著人或動物體內(nèi)代謝作用而以延遲方式釋放活性化合物。特別是敏感性活性化合物因而能夠有利地以更加特異性的方式被運(yùn)輸至需要藥劑發(fā)揮作用的所需部位或器官。
DOTAP氯化物對映體也表現(xiàn)因細(xì)胞系而異的轉(zhuǎn)染性質(zhì)，特別是組合有手性脂質(zhì)，例如磷脂、膽固醇及其衍生物。
就這些新穎脂質(zhì)體的制備而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員有可能特別選擇如此提供的一種形式或一定混合比例的DOTAP氯化物，目的是制備具有某些新穎性質(zhì)的脂質(zhì)體。
因此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及使用所要求保護(hù)的DOTAP氯化物形式所得藥物組合物。這種類型的藥物組合物可以包含(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形以及其它藥物活性化合物和已知常用于藥物制備的助劑，以及一種或多種溶劑。
這些藥物組合物例如可以是脂質(zhì)體、脂質(zhì)體復(fù)合物、微乳和納米粒子的形式，例如包括來自肽、核苷酸、疫苗或細(xì)胞抑制劑的活性化合物。
本文的說明能夠使本領(lǐng)域技術(shù)人員以廣泛的方式應(yīng)用本發(fā)明。另外，下列實施例起到更好地理解發(fā)明和闡述可能的發(fā)明變化的作用。這些實施例因此決不應(yīng)當(dāng)被視為限制性的。
在下列實施例中提及的所有溫度均以攝氏度表示。除非另有規(guī)定，含量數(shù)據(jù)以重量％給出。
闡述本發(fā)明的實施例實施例1穩(wěn)定性為了測定結(jié)晶性DOTAP氯化物的穩(wěn)定性，將這些物質(zhì)和對比樣品一起貯存在25℃和60％相對濕度下，并排除空氣。定期測量DOTAP氯化物的剩余含量，并與初始值比較。
借助HPLC測定DOTAP氯化物的純度和含量。就I型而言，得到下列數(shù)值穩(wěn)定性測定可以在任意所需時間重復(fù)，表1所示數(shù)值是可再現(xiàn)的。
表1
實施例2粉末X-射線圖就結(jié)晶性DOTAP氯化物的結(jié)構(gòu)性質(zhì)(晶形)的表征而言，記錄這些物質(zhì)的粉末X-射線圖(衍射光譜)。
結(jié)晶性DOTAP氯化物的光譜具有適中尖銳的峰帶，具有相對良好的脂質(zhì)分辨。光譜反映了高結(jié)晶性含量。在極化顯微鏡下沒有無定形級分可見。
光譜的實例如圖1(I型)、圖2(II型)、圖3(III型)和圖4(IV型)所示。
為了對比，商業(yè)上可獲得的無定形樣品的光譜如圖5(無定形)所示。
表2列舉了外消旋和對映體純的DOTAP氯化物的各種晶形的選定2θ值表2
實施例3主相變溫度在水中對多層脂質(zhì)體進(jìn)行示差掃描量熱(DSC)測量。借助薄膜法從計算量的外消旋或?qū)τ丑w純DOTAP氯化物制備脂質(zhì)體。這里的脂質(zhì)濃度在每種情況下均為0.1g/ml。然后向可密封的鋁坩鍋引入適量這些分散體，利用204Phoenix量熱計(Netzsch，Selb，Germany)測量。在每種情況下，進(jìn)行三個連續(xù)的加熱/冷卻循環(huán)，從-50℃到+20℃，1℃/min。
就所有三種DOTAP氯化物變體而言，發(fā)現(xiàn)相變溫度低于0℃。就冷卻循環(huán)而言，在每種情況下為-23℃至-24℃。外消旋與對映體純DOTAP氯化物之間的差異在每種情況下在加熱循環(huán)中很明顯。(2R)-DOTAP氯化物和(2S)-DOTAP氯化物都在-12.5℃左右表現(xiàn)吸熱相變，而外消旋物的相變在-17.5℃(參見圖6)。
實施例4
對于COS-7細(xì)胞的轉(zhuǎn)染性質(zhì)將外消旋和對映體純DOTAP氯化物以及外消旋DOTAP甲基硫酸鹽各自用等量膽固醇分散在轉(zhuǎn)染介質(zhì)中，用超聲波處理?；旌现|(zhì)體和GFP質(zhì)粒溶液，溫育15分鐘，每6孔的量為2μg質(zhì)粒/8μg脂質(zhì)。
溫育5小時后，在37℃/5％CO2下抽吸除去上清液，加入2ml新鮮介質(zhì)，混合物溫育另外20小時。處理后，F(xiàn)ACS分析顯示所有脂質(zhì)體復(fù)合物均有效轉(zhuǎn)染。各個脂質(zhì)混合物的轉(zhuǎn)染率之間的顯著性差異是明顯的(R)-DOTAP氯化物/膽固醇復(fù)合物32.4％(S)-DOTAP氯化物/膽固醇復(fù)合物11.0％(R，S)-DOTAP氯化物/膽固醇復(fù)合物25.9％(R，S)-DOTAP甲基硫酸鹽/膽固醇復(fù)合物20.2％。
權(quán)利要求
1.結(jié)晶性(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物。
2.結(jié)晶性(2R，S)-DOTAP氯化物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為12.6、19.5、20.2、21.5和25.2。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為6.5、12.6、13.4、19.5、20.2、21.5、25.2和29.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其光譜如圖1所示(I型)。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為3.3、4.9、19.3、20.0和23.5。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為3.3、4.9、15.1、16.2、19.3、20.0、23.5和24.3。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其光譜如圖2所示(II型)。
9.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為2.8、5.8、20.0、21.2和25.1。
10.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其2θ值為2.8、5.8、12.9、15.9、20.0、21.2、25.1和29.4。
11.根據(jù)權(quán)利要求2的(2R，S)-DOTAP氯化物，其光譜如圖3所示(III型)。
12.(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物。
13.結(jié)晶性(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物，其2θ值為12.8、19.4、19.8、20.2和21.5。
15.根據(jù)權(quán)利要求13的(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物，其2θ值為6.5、12.8、19.4、19.8、20.2、20.7、21.5和25.3。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物，其光譜如圖4所示(IV型)。
17.制備(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形的方法，其特征在于從一種或多種質(zhì)子惰性溶劑中進(jìn)行結(jié)晶。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的制備(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形的方法，其特征在于所采用的質(zhì)子惰性溶劑是醚，選自四氫呋喃、甲基四氫呋喃、二烷、二乙醚、二丙醚、二異丙醚和甲基叔丁基醚，或者這些醚的混合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求17的制備(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形的方法，其特征在于所采用的質(zhì)子惰性溶劑是酮，選自丙酮、2-丁酮、甲基異丁基酮和甲基異丙基酮，或者這些酮的混合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求17的制備(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形的方法，其特征在于所采用的質(zhì)子惰性溶劑是乙腈。
21.根據(jù)權(quán)利要求17的制備(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形的方法，其特征在于所采用的溶劑是酯，選自甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯和1，3-二氧雜環(huán)戊烷-2-酮，或者這些酯的混合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求17至21一項或多項的方法，其特征在于以與醇的混合物形式使用質(zhì)子惰性介質(zhì)，所述醇選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、2-丁醇、叔丁醇、3-甲基-1-丁醇、乙二醇、甲氧基乙醇和乙氧基乙醇或者其混合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于直接從反應(yīng)溶液進(jìn)行結(jié)晶，無需在先純化。
24.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于進(jìn)行無定形或結(jié)晶性(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的重結(jié)晶。
25.(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形作為藥物制備的成分的用途。
26.(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物作為藥物制備的成分的用途。
27.藥物組合物，其包含(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的晶形以及藥物活性化合物、助劑或溶劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的包含(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的藥物組合物，其特征在于所采用的藥物活性化合物是選自肽、核苷酸、疫苗和細(xì)胞抑制劑的活性化合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求27的包含(2R，S)-、(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物晶形的藥物組合物，其特征在于它具有脂質(zhì)體、脂質(zhì)體復(fù)合物、納米粒子或微乳。
30.藥物組合物，其包含(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物以及藥物活性化合物、助劑或溶劑。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的包含(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的藥物組合物，其特征在于所采用的藥物活性化合物是選自肽、核苷酸、疫苗和細(xì)胞抑制劑的活性化合物。
32.根據(jù)權(quán)利要求30的包含(2S)-和(2R)-DOTAP氯化物的藥物組合物，其特征在于它具有脂質(zhì)體、脂質(zhì)體復(fù)合物、納米粒子或微乳。
全文摘要
本發(fā)明涉及對映體純的DOTAP氯化物和穩(wěn)定的(2R，S)－、(2S)－與(2R)－DOTAP氯化物晶形、這些晶形的制備方法以及其作為藥物制備的成分的用途。
文檔編號A61K47/16GK101065350SQ200580040515
公開日2007年10月31日 申請日期2005年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月26日
發(fā)明者M·普拉切爾, A·赫丁格 申請人:默克專利股份有限公司