專利名稱：治療癌癥的n－(3－甲氧基－5－甲基吡嗪－2－基)－2－(4－[1,3,4－二唑－2－基]苯 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含N-(3-甲氧基-5-甲基吡嗪-2-基)-2-(4-[1，3，4-二唑-2-基]苯基)吡啶-3-磺酰胺或其藥學(xué)可接受的鹽(下文稱作“化合物I”)，和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合。這些組合對(duì)于治療或預(yù)防癌癥是有用的。本發(fā)明也涉及一種包含該組合的藥物組合物，和其在制備用于治療或預(yù)防癌癥，特別是前列腺癌的藥物中的應(yīng)用。
癌癥估計(jì)影響了全世界1000萬人。數(shù)據(jù)包括發(fā)病數(shù)、患病數(shù)和死亡數(shù)。據(jù)報(bào)道在亞洲有超過440萬個(gè)癌癥病例，包括東亞有250萬個(gè)病例，在世界上的發(fā)病數(shù)最高。作為比較，歐洲有280萬個(gè)病例，北美有140萬個(gè)病例，非洲有62,7000個(gè)病例。
在英國(guó)和美國(guó)，例如有超過三分之一的人將會(huì)在其生命的某個(gè)點(diǎn)時(shí)發(fā)展出癌癥。據(jù)估計(jì)，認(rèn)為在美國(guó)癌癥的死亡數(shù)為每年約600,000，每4名死者中就約有1名是死于癌癥，而在所有的死亡百分比中僅次于死于心臟疾病的，而在1-14歲的兒童中是次于因事故而死亡的第二死因。據(jù)估計(jì)，現(xiàn)在美國(guó)的癌癥發(fā)病數(shù)是每年約1,380,000個(gè)新病例，但不計(jì)約900,000個(gè)的非-黑素沉著病(基細(xì)胞和扁平細(xì)胞)皮膚癌病例。
癌癥在英國(guó)也是主要的死亡原因，1997年共記錄了將近260,000個(gè)新病例(除了非-黑素沉著病皮膚癌)。癌癥是一種主要影響老年人的疾病，約65％的發(fā)病數(shù)發(fā)生在65歲以上的人中。盡管在英國(guó)平均預(yù)期壽命從19世紀(jì)中期已經(jīng)接近翻番，但有患癌癥風(fēng)險(xiǎn)的人群卻在增長(zhǎng)。其他致死原因，例如心臟疾病的死亡率近年來已經(jīng)降低，而因癌癥的死亡卻保持相對(duì)穩(wěn)定。結(jié)果是，在他們一生中有三分之一的人被診斷患有癌癥，而四分之一的人將會(huì)死于癌癥。在75歲以下的人中，癌癥的死亡數(shù)量超過了循環(huán)系統(tǒng)包括缺血性心臟病和中風(fēng)的疾病的死亡數(shù)量。在2000年，有151,200人死于癌癥。其中有超過五分之一(22％)是死于肺癌，四分之一(26％)是死于大腸癌、乳腺癌和前列腺癌。
在世界范圍內(nèi)，某些類型的癌癥(胃癌、乳腺癌、前列腺癌、皮膚癌等等)的發(fā)病率和死亡率具有廣泛的地理性差異，這是由于種族、文化、特別是環(huán)境的影響造成的。有超過200種不同類型的癌癥，但主要是4種類型肺癌、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸直腸癌，它們占了英國(guó)和美國(guó)已診斷所有病例的一半以上。在全世界的男子中，前列腺是第四最常見的惡性腫瘤，據(jù)估計(jì)每年診斷400,000個(gè)新病例，占了所有新癌癥病例的3.9％。
治療癌癥的當(dāng)前選擇包括手術(shù)切除、放射療法和/或全身性化學(xué)療法。它們?cè)谝恍┬问降陌┌Y中取得了部分的成功，而在其他形式中則是不成功的。仍然迫切地需要新的治療性療法。
近來，已經(jīng)鑒別出內(nèi)皮縮血管肽A受體拮抗體在治療癌癥中可能有價(jià)值(Cancer Research，56，663-668，F(xiàn)ebruary 15th，1996和NatureMedicine，Volume 1，Number 9，September 1999，944-949)內(nèi)皮縮血管肽是一種內(nèi)源性21氨基酸肽家族，包含三種亞型—內(nèi)皮縮血管肽-1、內(nèi)皮縮血管肽-2和內(nèi)皮縮血管肽-3。通過內(nèi)皮縮血管肽轉(zhuǎn)換酶在它們相應(yīng)的內(nèi)皮縮血管肽原(proendothelin)上分裂Trp21-Val22鍵來形成內(nèi)皮縮血管肽。內(nèi)皮縮血管肽是已知最有效的血管收縮藥。它們顯示了廣泛的其他活性，包括刺激細(xì)胞增殖和發(fā)生有絲分裂，抑制細(xì)胞凋亡、外滲和趨化作用，也與很多的其他血管活性劑相互作用。
內(nèi)皮縮血管肽從很多的組織或細(xì)胞源包括血管內(nèi)皮、血管平滑肌、腎、肝、子宮、氣管、腸和白細(xì)胞中釋放。可以通過缺氧、剪切應(yīng)力、物理性損傷和廣泛范圍的激素和細(xì)胞因子刺激釋放。在人的很多疾病情況包括癌癥中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮縮血管肽水平升高。
化合物(I)是一種特異性的內(nèi)皮縮血管肽A拮抗劑，具有特別適合治療癌癥的性質(zhì)(見WO 2004/018044)。
與微管蛋白(一種與細(xì)胞分裂密切相關(guān)的蛋白質(zhì)，因此與癌癥細(xì)胞和腫瘤生長(zhǎng)也密切相關(guān))結(jié)合的抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑通過干擾細(xì)胞分裂而抑制了哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。在分子水平上，在有絲分裂期間它們可以導(dǎo)致與染色體分離有關(guān)的微管穩(wěn)定(埃博霉素(epothilones)和紫杉烷類)或去穩(wěn)定(長(zhǎng)春花堿)。用這些藥物處理的細(xì)胞保留在有絲分裂中，即它們作用于有絲分裂過程，由于不成功的有絲分裂，這最終可以導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合在癌癥的治療中具有特別的有益和/或協(xié)同作用。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供一種組合，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑。
此處，當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑”時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解為，是指通過與細(xì)胞分裂有關(guān)的微管蛋白微管的穩(wěn)定或去穩(wěn)定顯示其抗癌作用的任意化學(xué)類似物。
“抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑”的例子包括紫杉烷類、埃博霉素和長(zhǎng)春花堿?！翱褂薪z分裂細(xì)胞毒素劑”的具體例子是·紫杉烷類例如(2aR，3aR，4aR，6R，9S，11S，12S，12aR，12bS)-6，12b-雙乙酸基-9-[3(S)-(叔丁氧羰基氨基)-2(R)-羥基-3-苯基丙酰氧基]-12-苯甲酰氧基-11-羥基-8，13，13-三甲基-2a，3，3a，4，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氫-1H-7，11-亞甲基環(huán)十[3，4]-環(huán)丙[4，5]苯[1，2-b]氧雜丁環(huán)-5-酮二水合物；紫杉醇(Taxol)、BMS 184476(7-甲基硫代甲基紫杉醇)；BMS188797；BMS 275183；CYC-3204(穿膜肽-紫杉醇共軛物)；Taxoprexin；DJ-927；多西他賽(Taxotere)；XRP9881(RPR-109881A)；XRP6258(RPRl 12658)；Milataxel；MST 997；MBT-206；NBT-287；ortataxel；Protax-3；PG-TXL；PNU-166945；106258；BMS-188797；109881；BAY 598862(IDN 5109；半合成紫杉烷類)；Protaxel和MAC-321(Taxalog)；·埃博霉素S其衍生物和類似物°埃博霉素A；°埃博霉素B，例如ABJ879；BMS247550(伊沙匹隆(ixabepilone))；EPO906哌突匹隆(patupilone)；ZK EPO；°埃博霉素C；和°埃博霉素D，例如KOS 862；·長(zhǎng)春花堿類似物和衍生物長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春堿；長(zhǎng)春瑞濱；長(zhǎng)春氟寧；根霉素·其他微管蛋白類似物°β-微管蛋白結(jié)合劑/拮抗劑，例如T-138067；T 900607；D24851；STA5312°抗微管劑，例如HTI-286(hemiasterlin類衍生物)多拉司他汀衍生物(ILX-651)；軟海綿素類似物例如E7389；cryptophycin
類似物；和discodermolides(NVP-XAA296)。
在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及化合物(I)和上述任一化合物的組合。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和紫杉烷類。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和埃博霉素。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和埃博霉素A衍生物或其類似物。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和埃博霉素B衍生物或其類似物。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和埃博霉素C衍生物或其類似物。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和埃博霉素D衍生物或其類似物。
在本發(fā)明進(jìn)一步的一個(gè)方面，提供化合物(I)和長(zhǎng)春花生物堿衍生物或其類似物。
此處，當(dāng)使用術(shù)語(yǔ)“組合”時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解為是指同時(shí)、分別或連續(xù)施用。在本發(fā)明的一個(gè)方面，“組合”是指同時(shí)施用。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，“組合”是指分別施用。在本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，“組合”是指順序施用。當(dāng)順序或分別施用時(shí)，施用第二組分的延遲不應(yīng)當(dāng)會(huì)喪失該組合的有益和/或協(xié)同作用。
在一個(gè)方面，當(dāng)施用的是化合物或其藥學(xué)可接受的鹽時(shí)，其僅是指該化合物。在另一個(gè)方面，這是指該化合物的藥學(xué)可接受的鹽。
當(dāng)涉及癌癥時(shí)，其特別是指食管癌、骨髓瘤、肝細(xì)胞癌，胰腺癌，子宮頸癌、尤因氏肉瘤(ewings tumour)、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、黑素瘤、肺癌—非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)、胃癌、頭和頸癌、腦癌、腎癌、淋巴瘤和白血病。更特別地，它是指前列腺癌。此外，更特別地它是指SCLC、NSCLC、結(jié)腸直腸癌、卵巢癌和/或乳腺癌。此外，更特別地它是指SCLC。此外，更特別地它是指NSCLC。此外，更特別地它是指結(jié)腸直腸癌。此外，更特別地它是指卵巢癌。此外，更特別地它是指乳腺癌。此外，更特別地它是指膀胱癌、食管癌、胃癌、黑素瘤、子宮頸癌和/或腎癌。此外，它是指子宮內(nèi)膜、肝、胃、甲狀腺、直腸和/或腦癌。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，該癌癥不是黑素瘤。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，特別地該癌癥是處于轉(zhuǎn)移狀態(tài)，更特別地，該癌癥產(chǎn)生了向骨的轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，特別地該癌癥是處于轉(zhuǎn)移狀態(tài)，更特別地，該癌癥產(chǎn)生了皮膚轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，特別地該癌癥是處于轉(zhuǎn)移狀態(tài)，更特別地，該癌癥產(chǎn)生了淋巴的轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該癌癥是處于非轉(zhuǎn)移狀態(tài)。
當(dāng)特別地涉及治療的癌癥時(shí)，治療的是表達(dá)內(nèi)皮縮血管肽A的癌性腫瘤。該治療涉及一種或多種的應(yīng)答程度、應(yīng)答速率、疾病發(fā)展時(shí)間和存活率。本發(fā)明的特別組合包括·化合物(I)和紫杉醇；·化合物(I)和多西他賽；·化合物(I)和伊沙匹??；·化合物(I)和哌突匹隆；·化合物(I)和長(zhǎng)春瑞濱；·化合物(I)和XAA296；和·化合物(I)和T-138067。
適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的鹽包括，例如與堿金屬(例如鈉、鉀或鋰)、堿土金屬(例如鈣或鎂)形成的鹽、銨鹽和與有機(jī)堿形成的提供生理可接受的陽(yáng)離子的鹽，例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶和嗎啉形成的鹽。此外，對(duì)于有足夠堿性的化合物，適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的鹽包括，與鹽酸、硫酸、磷酸以及有機(jī)酸例如檸檬酸、馬來酸、甲磺酸和對(duì)甲苯磺酸形成的鹽?？商娲兀摶衔镆詢尚噪x子的形式存在。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供一種用作藥物的組合，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種藥物組合物，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，與藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種藥物組合物，包含化合物(I)與藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合，和包含抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑與藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合的藥物組合物組合。
因此，根據(jù)本發(fā)明，提供一種在需要治療的溫血?jiǎng)游锢缛酥兄委煱┌Y的方法，包括給所述動(dòng)物施用有效量的化合物(I)與有效量的抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合。
為了避免懷疑，當(dāng)指示治療癌癥時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解為是指預(yù)防轉(zhuǎn)移和治療轉(zhuǎn)移，即癌癥發(fā)展。因此，本發(fā)明的組合可以用于治療沒有轉(zhuǎn)移的患者以阻止它們發(fā)生，或延長(zhǎng)它們發(fā)生前的時(shí)間，和用于治療已經(jīng)轉(zhuǎn)移的患者以治療它們本身的轉(zhuǎn)移。此外，癌癥的治療也是指治療確定的一種或多種初級(jí)腫瘤或發(fā)展的一種或多種初級(jí)腫瘤。在本發(fā)明的一個(gè)方面，癌癥的治療涉及預(yù)防轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，癌癥的治療涉及治療轉(zhuǎn)移。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，癌癥的治療是指涉及治療確定的一種或多種初級(jí)腫瘤或發(fā)展的一種或多種初級(jí)腫瘤。在本文中，癌癥的治療也是指預(yù)防癌癥本身。
此外，癌癥的治療也是指在溫血?jiǎng)游镏挟a(chǎn)生抗血管生成效果。
此外，癌癥的治療也是指在溫血?jiǎng)游镏挟a(chǎn)生抗增殖效果。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑；任選帶有使用說明書。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含a)化合物(I)，在第一單位劑型中；b)抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，在第二單位劑型中；和c)包含所述第一和第二劑型的容器裝置；和任選地d)使用說明書。
化合物(I)的單位劑型的例子可以是用于口服制劑的片劑，參見下文所述。對(duì)于抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的單位劑型的例子，參見下文。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含a)化合物(I)，和藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體，在第一單位劑型中；b)抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，在第二單位劑型中；和c)包含所述第一和第二劑型的容器裝置；和任選地d)使用說明書。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供一種用于治療癌癥的藥物組合物，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，和藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供一種用于治療癌癥的藥物組合物，包含化合物(I)與藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合，和包含抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑與藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體結(jié)合的藥物組合物組合。
該藥物組合物可以是適合口服的劑型例如片劑或膠囊，作為無菌溶液、混懸液或乳劑用于腸胃外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)，作為軟膏或乳膏用于局部施用或作為栓劑用于直腸施用。一般地，上述組合物可以以常規(guī)方式用常規(guī)的賦形劑來制備。
例如，用下列的賦形劑可以把化合物(I)配制成片劑化合物(I)；乳糖一水合物(填充劑)；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉(崩解劑)；聚維酮(粘合劑)；硬脂酸鎂(潤(rùn)滑劑)；羥丙甲纖維素(薄膜包衣組分)；聚乙二醇300(薄膜包衣組分)；和二氧化鈦(薄膜包衣組分)。
抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑可以根據(jù)已知的方法來配制。例如，各種紫杉醇的制劑是已知的。這包括Abraxane；Acusphere；AI-850；DO/NDR/02(不含克列莫佛的紫杉醇制劑)；EndoTag-1；脂質(zhì)體包囊的紫杉醇；LPE/PLP紫杉醇；MPI-5019；NK-105；OncoGel；Paclimer微球；S-8184；ABI-007；NOVA-12005；SP-1010C-O；Pacligel；SP-1010C；Paxoral，Xorane；Genexol；Tocosol；PacoExtra；Yewtaxan；Taxosomes；Atrigel；Xyotax(紫杉醇polyglumex；聚谷氨酸化的紫杉醇)和SP 1010C。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑；任選帶有使用說明書；用于治療癌癥。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含a)化合物(I)，在第一單位劑型中；b)抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，在第二單位劑型中；和c)包含所述第一和第二劑型的容器裝置；和任選地d)使用說明書，用于治療癌癥。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種試劑盒，包含
a)化合物(I)，和藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體，在第一單位劑型中；b)抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，在第二單位劑型中；和c)包含所述第一和第二劑型的容器裝置；和任選地d)使用說明書；用于治療癌癥。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)特征，提供化合物(I)與抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合在制備用于在溫血?jiǎng)游锢缛酥兄委煱┌Y的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)特征，提供化合物(I)與抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合在溫血?jiǎng)游锢缛酥兄委煱┌Y的應(yīng)用。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種用于治療癌癥的組合，包含化合物(I)和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的方面，提供一種組合治療，包括給需要這種治療的溫血?jiǎng)游锢缛耸┯糜行Я康幕衔?I)，任選與藥學(xué)可接受稀釋劑或載體一起，和有效量的抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，任選與藥學(xué)可接受稀釋劑或載體一起組合，用于治療癌癥。
化合物(I)或其藥學(xué)可接受的鹽的量將會(huì)足以提供期望的藥學(xué)效果。例如，化合物(I)可以按每日小于1g但大于2.5mg的單位劑量口服施用于溫血?jiǎng)游铩Ｌ貏e地，化合物(I)可以按每日小于250mg的單位劑量施用于溫血?jiǎng)游?。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，化合物(I)可以按每日小于130mg的單位劑量施用于溫血?jiǎng)游铩Ｔ诒景l(fā)明一個(gè)進(jìn)一步的方面，化合物(I)可以按每日小于50mg的單位劑量施用于溫血?jiǎng)游铩?br> 抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑可以根據(jù)批準(zhǔn)的指導(dǎo)方針來施用。它們的最大耐受劑量是種類和方案依賴性的。
必須構(gòu)成每種藥物的劑型和它們的各部分，以滿足國(guó)家或國(guó)際指導(dǎo)方針(周期性的回顧和再定義)定義的最好的可能的治療效果。


附圖1描述的條形圖顯示的是化合物(I)和紫杉醇單獨(dú)或組合在卵巢癌細(xì)胞系HEY和OVCA 433中對(duì)細(xì)胞凋亡的作用。
附圖2描述的條形圖顯示的是化合物(I)和紫杉醇單獨(dú)或組合在體內(nèi)對(duì)HEY卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
附圖3描述的條形圖顯示的是兩種提高劑量的細(xì)胞毒素(紫杉醇和多西他賽)單獨(dú)或與內(nèi)皮縮血管肽1或內(nèi)皮縮血管肽1+化合物(I)的組合在體外培養(yǎng)系統(tǒng)中對(duì)于存活的前列腺細(xì)胞(PPC-1)數(shù)量的作用(吸光值的提高反映的是存活細(xì)胞的數(shù)量增加)。
本發(fā)明將通過下列的實(shí)施例進(jìn)一步說明，其用于詳細(xì)地描述本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方案。這些實(shí)施例并不意圖，而且也不能把它們解釋成限制本發(fā)明的范圍。清楚的是，本發(fā)明可以不同于本文特別描述的方式實(shí)施。根據(jù)本文的技術(shù)可能有很多本發(fā)明的改變和變更，因此，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
實(shí)施例表明化合物(I)與抗有絲分裂細(xì)胞毒素(紫杉醇和多西他賽)的組合的活性增強(qiáng)的試驗(yàn)介紹為了評(píng)價(jià)化合物(I)與抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑(紫杉醇)對(duì)于不同的癌細(xì)胞的作用，我們使用兩種確定的人卵巢細(xì)胞系(HEY和OVCA433**)，其表達(dá)功能性的內(nèi)皮縮血管肽A(ETa)受體和分泌高水平的內(nèi)皮縮血管肽-1(ET-1)。ET-1在很多細(xì)胞類型中是抗細(xì)胞凋亡因子，通過Eta受體具有該效果。
**OVCA 433確認(rèn)是在得自患非常嚴(yán)重卵巢腺癌的患者的腹水中(Tsa，SW等人，(1995)Exp.Cell Res.218499-507)，HEY是來自卵巢的cystoadeonocarcinoma的腹膜沉積物的異種移植物(Buick，R.N.等人，(1985)Cancer Research 453668-3676)。PPC-1細(xì)胞最初來自人前列腺腫瘤，并得自Dr.J.Kelson，University of Pittsburgh的實(shí)驗(yàn)室。
材料和方法在卵巢細(xì)胞中的體外研究將人卵巢腫瘤細(xì)胞系(OVCA 433和HEY)保持在含有血清的培養(yǎng)基中直至有足夠數(shù)量可以用于實(shí)驗(yàn)。此時(shí)，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到?jīng)]有血清的培養(yǎng)基中。斷絕血清24小時(shí)后，用化合物(I)(1lμM)或紫杉醇(60nM)，或化合物(I)+紫杉醇處理細(xì)胞。在處理24小時(shí)后，通過標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞收集ELISA Plus試劑盒(BoehringerManheim)測(cè)定細(xì)胞凋亡。
在前列腺細(xì)胞中的體外研究將人前列腺腫瘤細(xì)胞系(PPC-1)保持在含有血清的培養(yǎng)基中直至有足夠數(shù)量可以用于實(shí)驗(yàn)。此后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到?jīng)]有血清的培養(yǎng)基中。斷絕血清23小時(shí)后，用內(nèi)皮縮血管肽-1(10-7M)或內(nèi)皮縮血管肽-1+化合物(I)(10-7M)處理細(xì)胞。另外一組的細(xì)胞只接受載體對(duì)照。一小時(shí)后用10-6M、10-8M或10-10M的紫杉醇或多西他賽處理細(xì)胞24小時(shí)。在24小時(shí)結(jié)束時(shí)，通過標(biāo)準(zhǔn)MTT分析(Mossman，J Immunol Methods.(1983)65，55-63)測(cè)定存活細(xì)胞的數(shù)量。
體內(nèi)研究給無胸腺的小鼠皮下注射1.5×10-6個(gè)HEY細(xì)胞到腹側(cè)面。7天后，當(dāng)形成確定的腫瘤時(shí)，隨機(jī)把小鼠分成4個(gè)治療組，每組10只小鼠。一組通過每日腹腔內(nèi)注射(10mg/kg/天)給予化合物(I)來治療21天。第二組每4天接受靜脈注射的紫杉醇(20mg/kg)，共3劑量。第三組接受紫杉醇和化合物(I)，第四組以相同方法用載體單獨(dú)注射。將實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
結(jié)果在卵巢細(xì)胞中的體外研究加入化合物(I)或紫杉醇對(duì)于細(xì)胞凋亡沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的作用。但是，當(dāng)化合物(I)與紫杉醇組合時(shí)，與載體治療的對(duì)照細(xì)胞或單獨(dú)給予化合物相比，細(xì)胞凋亡有明顯的顯著增加。結(jié)果如附圖1所示，其中“*”是指與對(duì)照相比的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的增加。
在前列腺細(xì)胞中的體外研究加入增加劑量的紫杉醇或多西他賽在治療24小時(shí)后顯著減少了保留在培養(yǎng)基中存活前列腺細(xì)胞的數(shù)量。該存活細(xì)胞數(shù)量的減少可以通過伴隨施用內(nèi)皮縮血管肽-1來逆轉(zhuǎn)，而化合物(I)阻斷了該作用。見附圖3。
體內(nèi)研究作為單一治療物的化合物(I)導(dǎo)致了對(duì)HEY卵巢細(xì)胞異種移植物的顯著抑制。抑制的程度與紫杉醇作為單一治療物時(shí)達(dá)到的程度類似。聯(lián)合施用化合物(I)和紫杉醇導(dǎo)致了化合物(I)對(duì)紫杉醇抗腫瘤細(xì)胞作用的可能作用，使得腫瘤部分或完全消退。結(jié)果見附圖2。
結(jié)論這些發(fā)現(xiàn)表明，特異性的內(nèi)皮縮血管肽受體拮抗劑—化合物(I)，使得紫杉醇對(duì)體外卵巢細(xì)胞的細(xì)胞凋亡具有效果，和對(duì)體內(nèi)卵巢腫瘤具有抑制生長(zhǎng)的性質(zhì)。此外，化合物(I)逆轉(zhuǎn)了內(nèi)皮縮血管肽-1對(duì)細(xì)胞毒素-誘導(dǎo)(紫杉醇或多西他賽)的細(xì)胞死亡的抑制作用。這樣，化合物(I)和紫杉醇或多西他賽的組合潛在地可用于治療癌癥。
權(quán)利要求
1.一種組合，包含N-(3-甲氧基-5-甲基吡嗪-2-基)-2-(4-[1，3，4-二唑-2-基]苯基)吡啶-3-磺酰胺和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是紫杉烷類。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是埃博霉素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是埃博霉素A衍生物或其類似物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是埃博霉素B衍生物或其類似物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或3的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是埃博霉素C衍生物或其類似物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或3的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是埃博霉素D衍生物或其類似物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是長(zhǎng)春花生物堿衍生物或其類似物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是紫杉醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是多西他賽。
11.根據(jù)權(quán)利要求1，3或5的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是伊沙匹隆。
12.根據(jù)權(quán)利要求1，3或5的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是哌突匹隆。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或8的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是長(zhǎng)春瑞濱。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是XAA296。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的組合，其中抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑是T-138067。
14.一種如權(quán)利要求1-13任一所要求的用作藥物的組合。
15一種藥物組合物，其中如權(quán)利要求1-13任一所要求的組合與一種或多種藥學(xué)可接受的稀釋劑或載體相結(jié)合。
16.一種在需要治療的溫血?jiǎng)游锢缛酥兄委煱┌Y的方法，包括給所述動(dòng)物施用有效量的如權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所要求的組合。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述癌癥是食管癌、骨髓瘤、肝細(xì)胞癌，胰腺癌，子宮頸癌、尤因氏肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、黑素瘤、肺癌一非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)、胃癌、頭和頸癌、腦癌、腎癌、淋巴瘤或白血病。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17的方法，其中所述癌癥是前列腺癌。
19.一種試劑盒，包含a)化合物(I)，在第一單位劑型中；b)抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑，在第二單位劑型中；和c)包含所述第一和第二劑型的容器裝置；和任選地d)使用說明書。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-13任一的組合在制備用于在溫血?jiǎng)游锢缛酥兄委煱┌Y的藥物中的應(yīng)用。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中所述癌癥是食管癌、骨髓瘤、肝細(xì)胞癌，胰腺癌，子宮頸癌、尤因氏肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、黑素瘤、肺癌一非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)、胃癌、頭和頸癌、腦癌、腎癌、淋巴瘤或白血病。
22.根據(jù)權(quán)利要求20或權(quán)利要求21的應(yīng)用，其中所述癌癥是前列腺癌。
23.一種如權(quán)利要求1-13任一所要求的用于治療癌癥的組合。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的組合，其中所述癌癥是食管癌、骨髓瘤、肝細(xì)胞癌，胰腺癌，子宮頸癌、尤因氏肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、卡波西肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、前列腺癌、膀胱癌、黑素瘤、肺癌-非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)、胃癌、頭和頸癌、腦癌、腎癌、淋巴瘤或白血病。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的組合，其中所述癌癥是前列腺癌。
全文摘要
一種包含N－(3－甲氧基－5－甲基吡嗪－2－基)－2－(4－[1，3，4－二唑－2－基]苯基)吡啶－3－磺酰胺和抗有絲分裂細(xì)胞毒素劑的組合。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101065129SQ200580040430
公開日2007年10月31日 申請(qǐng)日期2005年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月25日
發(fā)明者F·T·博伊爾, J·柯溫, A·休斯, D·約翰斯頓 申請(qǐng)人:阿斯利康(瑞典)有限公司