專利名稱：：可口服給藥的抗瘧藥組合制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種可口服給藥的抗瘧藥組合制劑及其制備方法，所述制劑包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽作為活性成分，和藥學(xué)可接受的載體。
背景技術(shù)：
：根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)的報(bào)告，全世界每年會(huì)產(chǎn)生約300到500萬(wàn)瘧疾患者，他們中90％集中在非洲。每年約有150到270萬(wàn)人死于瘧疾，特別是他們中至少有100萬(wàn)是5歲以下的非洲兒童。特別地，撒哈拉南部地區(qū)顯示出最高的感染率、患病率和死亡率。如今，由于戰(zhàn)爭(zhēng)、環(huán)境破壞、再度移民、氣候變化等對(duì)抗瘧藥產(chǎn)生了耐藥性，而使瘧疾變得更加嚴(yán)重，特別是對(duì)氯喹和乙胺嘧啶/磺胺多辛的耐藥性增強(qiáng)。治療和預(yù)防瘧疾必須依賴WHO提供的氯喹類藥物。但是，由于對(duì)氯喹的耐藥性增強(qiáng)，急切地需要開(kāi)發(fā)新的藥物來(lái)有效對(duì)抗對(duì)氯喹耐藥的惡性瘧原蟲(chóng)(P.falciparum)和間日瘧原蟲(chóng)(sulfadoxine)。在開(kāi)發(fā)出新藥物以后，必須考慮將藥物制備成什么形式。取代氯喹的首選是可口服的形式，因?yàn)樗鼘?duì)于公共醫(yī)療機(jī)構(gòu)組織(例如WHO)或者邊遠(yuǎn)地區(qū)的居民是容易接受的，易于給藥，有效，并且比其它形式更為安全。但是，不幸的是，并沒(méi)有很多新開(kāi)發(fā)出來(lái)的藥物可以用于人體試驗(yàn)。其中之一是咯萘啶，它是1970年在中國(guó)合成用作血中裂殖體殺滅劑的。它具有與現(xiàn)有藥物共同的化學(xué)性質(zhì)，但是曼尼希堿包括喹啉型例如阿莫地喹和阿莫吡喹；吖啶型例如咯萘啶和pyraquine在活性、耐藥率和對(duì)耐藥的穩(wěn)定性方面具有顯著的益處(Basco和LeBras，1992；Peters和Robinson，1992)?，F(xiàn)在，在中國(guó)藥典中列出了咯萘啶(可口服形式和注射形式)，在市場(chǎng)上的名稱為Malaridine(咯萘啶)。但是它僅在中國(guó)銷售，在給藥的開(kāi)始階段并不能很快顯示它的作用，而且非常昂貴。因此，在發(fā)展中國(guó)家對(duì)公眾是不適當(dāng)?shù)?。在青蒿素衍生物中，青蒿酯在中?guó)和越南的應(yīng)用最廣。它可以有效對(duì)抗對(duì)其他抗瘧劑耐藥的惡性瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)。現(xiàn)在，50mg的青蒿酯片劑在越南(Mediplantex和KhanhHoa)和中國(guó)的市場(chǎng)上銷售，同時(shí)以ArsumaxR的名稱在非洲的一些地區(qū)限制性地銷售。然而，其體內(nèi)半衰期較短，因此對(duì)于完全消除瘧疾的感染有局限性。當(dāng)給感染了對(duì)一些氯喹耐藥的約氏瘧原蟲(chóng)(posmodiumyoelii)的小鼠聯(lián)合給藥咯萘啶和青蒿素時(shí)，證明了其具有協(xié)同作用。同時(shí)，當(dāng)治療對(duì)許多抗瘧劑耐藥的惡性瘧原蟲(chóng)時(shí)，聯(lián)合給藥咯萘啶和青蒿素衍生物來(lái)進(jìn)行臨床試驗(yàn)性研究。結(jié)果，當(dāng)咯萘啶與二氫青蒿素或蒿甲醚(artemether)聯(lián)合給藥時(shí)，在7天和28天的隨訪研究中沒(méi)有發(fā)生復(fù)發(fā)情況，盡管每組的患者數(shù)量有限(40人，包括成人和兒童)。并且，在分別給藥二氫青蒿素和咯萘啶與二者聯(lián)合給藥的比較效果的研究中，據(jù)報(bào)道單獨(dú)給藥32mg/kg的咯萘啶或聯(lián)合給藥16mg/kg的咯萘啶和6mg/kg的二氫青蒿素是非常有效的，并具有較高的耐藥性(Lit等人，2002)。但是，該聯(lián)合給藥僅僅是證明了在一起給藥每個(gè)單體藥物中的治療效果。因此，特別需要對(duì)耐藥株有效但幾乎沒(méi)有經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的全新抗瘧藥，因?yàn)閷?duì)現(xiàn)有的抗瘧劑的耐藥性一直在增加，而且爆發(fā)區(qū)主要是不發(fā)達(dá)國(guó)家例如非洲。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人已經(jīng)尋找出安全、有效、優(yōu)質(zhì)、價(jià)廉的抗瘧劑，通過(guò)口服給藥治療非洲和亞洲非復(fù)雜性的惡性瘧原蟲(chóng)和間日瘧原蟲(chóng)。本發(fā)明人已經(jīng)試驗(yàn)了咯萘啶或其鹽和青蒿素或其衍生物的各種組合，其對(duì)于耐藥性株具有最大效果，最后，證明了重量比6∶1到1∶1，特別是3∶1的組合在效力和毒性方面是最為有效的。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)兩種藥物簡(jiǎn)單混合在一起時(shí)，通過(guò)直接接觸將青蒿素或其衍生物溶解，因?yàn)榭┹拎}具有酸性鹽的理化性質(zhì)。因此，本發(fā)明人使用藥學(xué)可接受的載體，通過(guò)主要與青蒿素或其衍生物配制(例如將它們制備成微囊或低共熔混合物，或用包衣劑將它們包被，然后將它們與咯萘啶酸性鹽混合以制備組合制劑)解決了制劑穩(wěn)定性、溶解性和溶解速率的問(wèn)題。本發(fā)明完全是以上述發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)的。因此，發(fā)明的目的是提供可口服給藥的抗瘧組合制劑及其制備方法，所述制劑包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽作為活性成分，和藥學(xué)可接受的載體。附圖1顯示的是實(shí)施例1的組合制劑中青蒿酯在模擬腸液、水和pH4.0的磷酸鹽緩沖液中的溶出試驗(yàn)結(jié)果；和附圖2顯示的是實(shí)施例1的組合制劑中四磷酸咯萘啶在模擬胃液、模擬腸液、水和pH4.0的磷酸鹽緩沖液中的溶出試驗(yàn)結(jié)果。具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及可口服給藥的抗瘧組合制劑及其制備方法，所述制劑包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽作為活性成分，和藥學(xué)可接受的載體。在本發(fā)明中，青蒿素衍生物包括但不限于二氫青蒿素、青蒿酯、蒿甲醚和蒿乙醚(arteether)。優(yōu)選地，青蒿素衍生物是青蒿酯。同時(shí)，咯萘啶鹽包括但不限于與磷酸、硫酸、鹽酸、乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來(lái)酸或延胡索酸的酸加成鹽。優(yōu)選地，咯萘啶鹽是磷酸咯萘啶。本發(fā)明的組合物包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽，優(yōu)選重量比是1∶1到1∶6，更優(yōu)選1∶3。進(jìn)一步地，在本發(fā)明中，優(yōu)選將青蒿素或其衍生物配制時(shí)不與咯萘啶或其鹽接觸。為實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，配制青蒿素或其衍生物時(shí)，可以通過(guò)將它們用藥學(xué)可接受的載體基本配制成微囊、低共熔混合物的顆粒形式、或包衣制劑，然后將它們與加入其中的與青蒿素或其衍生物成一定比例的咯萘啶或其鹽混合。這樣做可以解決與酸形式的咯萘啶鹽組合期間這兩種藥物直接接觸導(dǎo)致的那些問(wèn)題，包括制劑不穩(wěn)定性、溶解性較低和溶解速率較低，因此提供了抗瘧劑，其顯示了對(duì)耐藥性株的顯著治療效果，并獲得了藥物穩(wěn)定性并且具有這兩種藥物的協(xié)同作用?？梢允褂盟帉W(xué)領(lǐng)域使用的任意常規(guī)載體作為本發(fā)明的藥學(xué)可接受的載體。其一些代表性的例子是乳糖、糊精、糖、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素、甲基纖維素、聚乙二醇、二氧化硅、鋁碳酸鎂、硅酸鎂鋁、氫氧化鋁、硅酸鋁、偏硅酸鎂鋁、膨潤(rùn)土及它們的混合物。對(duì)于本發(fā)明，優(yōu)選的熔化分散載體是聚乙二醇，青蒿素或其衍生物與聚乙二醇的優(yōu)選重量比是1∶0.1到1∶2。特別地，青蒿酯與聚乙二醇的重量比是1∶1。同時(shí)，除了載體外，本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含表面活性劑，以使得這些組分可以在體內(nèi)給藥期間與水性介質(zhì)接觸時(shí)快速崩解和溶解。表面活性劑的代表性例子包括但不限于，月桂硫酸鈉及其衍生物；泊洛沙姆及其衍生物；飽和的polyglycorizedglyceride(gelucire，單硬脂酸甘油酯)；labrasol；所有的聚山梨酯例如聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯(下文稱作吐溫20)、聚氧乙烯脫水山梨醇單棕酸酯(下文稱作吐溫40)、聚氧乙烯脫水山梨醇單硬脂酸酯(下文稱作吐溫60)、和聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(下文稱作吐溫80)；脫水山梨糖醇酯例如脫水山梨醇單月桂酸酯(下文稱作司盤20)、脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯(下文稱作司盤40)、脫水山梨糖醇單硬脂酸酯(下文稱作司盤60)、脫水山梨糖醇單油酸酯(下文稱作司盤80)、脫水山梨糖醇三月桂酸酯(下文稱作司盤25)、脫水山梨糖醇三油酸酯(下文稱作司盤85)、和脫水山梨糖醇三硬脂酸酯(下文稱作司盤65)；克列莫佛；PET-60氫化蓖麻油；PET-40氫化蓖麻油；disodiumcocoamphodiacetate；等等。本組合物可以配制成粉末、顆粒、片劑、膠囊、干糖漿、包衣劑等等形式。下列的實(shí)施例是解釋說(shuō)明本發(fā)明；但并不是打算以任何方式限制本發(fā)明的范圍。制備實(shí)施例1青蒿酯微囊(1)的制備成分含量青蒿酯3g聚乙二醇100003g液狀石蠟396g吐溫804g取3g的青蒿酯和3g的聚乙二醇溶解于9g的乙腈中。將該有機(jī)溶液分散在396g的液狀石蠟(包含1％吐溫80)中，并用數(shù)字?jǐn)嚢杵?IKA，EUROSTAR)攪拌。在由此制備成適當(dāng)?shù)娜閯┖螅舭l(fā)溶劑直至從其中完全除去40到60％的乙腈。因此，將得到的微囊混懸液以41xg離心分離10分鐘。倒出上清液，然后將微囊用50到100ml的洗滌水再懸浮，緩慢濾除。在過(guò)濾期間，微囊保持在混懸液中，并緩慢攪拌，連續(xù)向其中加入洗滌水以除去保持在微囊中的乙腈，并形成較硬的微囊。制備實(shí)施例2青蒿酯微囊(2)的制備成分含量青蒿酯3g聚乙二醇100001.5g液狀石蠟396g吐溫804g使用上述成分，根據(jù)與制備實(shí)施例1相同的方法制備該微囊。制備實(shí)施例3青蒿酯微囊(3)的制備成分含量青蒿酯3g聚乙二醇100006g液狀石蠟396g吐溫804g使用上述成分，根據(jù)與制備實(shí)施例1相同的方法制備該微囊。制備實(shí)施例4青蒿酯低共熔混合物顆粒(1)的制備成分含量(mg/制劑)青蒿酯40聚乙二醇1000040微晶纖維素140取作為熔化分散載體的聚乙二醇和作為活性成分的青蒿酯混合，向其中加入約20mg的乙醇，在室溫下懸浮該混合物。在加熱混合物到約80℃熔化后，快速冷凍并精細(xì)地磨碎。向其中加入微晶纖維素并混合。以干法制粒使混合物聚集，制備成希望的包含青蒿酯的低共熔混合物顆粒。制備實(shí)施例5青蒿酯低共熔混合物顆粒(2)的制備成分含量(mg/制劑)青蒿酯40聚乙二醇1000040泊洛沙姆F12715微晶纖維素125取作為熔化分散載體的聚乙二醇和作為活性成分的青蒿酯混合，然后向其中加入約20mg的乙醇，在室溫下懸浮該混合物。在加熱混合物到約80℃熔化后，向其中加入泊洛沙姆，快速冷凍并固化。在精細(xì)磨碎該混合物后，向其中加入微晶纖維素，以干法制粒使混合物聚集，制備成希望的包含青蒿酯的低共熔混合物顆粒。制備實(shí)施例6青蒿酯低共熔混合物顆粒(3)的制備成分含量(mg/制劑)青蒿酯40聚乙二醇1000040泊洛沙姆F12715羥丙基甲基纖維素20微晶纖維素105取作為熔化分散載體的聚乙二醇和作為活性成分的青蒿酯混合，然后向其中加入約20mg的乙醇，在室溫下懸浮該混合物。在加熱混合物到約80℃熔化后，向其中加入泊洛沙姆和羥丙基甲基纖維素，快速冷凍并固化。在精細(xì)磨碎該混合物后，向其中加入微晶纖維素，以干法制粒使混合物聚集，制備成希望的包含青蒿酯的低共熔混合物顆粒。制備實(shí)施例7青蒿酯低共熔混合物顆粒(4)的制備成分含量(mg/制劑)青蒿酯40聚乙二醇1000040泊洛沙姆F12715乙基纖維素20微晶纖維素105取作為熔化分散載體的聚乙二醇和作為活性成分的青蒿酯混合，然后向其中加入約20mg的乙醇，在室溫下懸浮該混合物。在加熱混合物到約80℃熔化后，向其中加入泊洛沙姆和乙基纖維素，快速冷凍并固化。在精細(xì)磨碎該混合物后，向其中加入微晶纖維素，以干法制粒使混合物聚集，制備成希望的包含青蒿酯的低共熔混合物顆粒。實(shí)施例1青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶3)組合片劑(1)的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶120交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3取在乙醇中的羥丙基纖維素與四磷酸咯萘啶混合，以濕法制粒法聚集，干燥，過(guò)篩，然后向其中加入制備實(shí)施例4的低共熔混合物顆粒、低取代羥丙基纖維素、交聚維酮、月桂硫酸鈉、和二氧化硅，并均勻混合得到上述的組合物。向其中加入硬脂酸鎂，制備成片劑。實(shí)施例2青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶3)組合片劑(2)的制備成分含量(mg/制劑)制備例5的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶120羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例3青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶3)組合片劑(3)的制備成分含量(mg/制劑)制備例6的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶120羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例4青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶3)組合片劑(4)的制備成分含量(mg/制劑)制備例6的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶120羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例5青蒿酯/四磷酸咯萘啶(2∶3)組合片劑的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶60羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例6青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶4)組合片劑的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶160羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例7青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶7)組合片劑的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶240羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。實(shí)施例8青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶3)組合硬膠囊的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶120羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3取溶解在乙醇中的羥丙基纖維素與四磷酸咯萘啶混合，以濕法制粒法聚集，干燥，并過(guò)篩。然后向其中加入制備例4的低共熔混合物顆粒、低取代羥丙基纖維素、交聚維酮、月桂硫酸鈉、和二氧化硅，均勻混合，得到上述的組合物。向其中加入硬脂酸鎂，混合，填充到硬膠囊中，制備成膠囊。實(shí)施例9青蒿酯/四磷酸咯萘啶(2∶3)組合硬膠囊的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶60羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例8相同的方法制備該膠囊。實(shí)施例10青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶4)組合硬膠囊的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶160羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例8相同的方法制備該膠囊。實(shí)施例11青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶6)組合硬膠囊的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶240羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例8相同的方法制備該膠囊。實(shí)施例12青蒿酯/四磷酸咯萘啶(1∶1)組合片劑的制備成分含量(mg/制劑)制備例4的低共熔混合物顆粒220低取代羥丙基纖維素25四磷酸咯萘啶40羥丙基纖維素4交聚維酮30月桂硫酸鈉15二氧化硅3硬脂酸鎂3使用上述成分，根據(jù)與實(shí)施例1相同的方法制備該片劑。試驗(yàn)實(shí)施例試驗(yàn)實(shí)施例1溶出試驗(yàn)(1)組合片劑中青蒿酯的溶出試驗(yàn)根據(jù)美國(guó)藥典(USP)所述的槳式法(裝置2)測(cè)試根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的片劑。30分鐘后，根據(jù)下列的分析方法用試驗(yàn)中溶液的濾過(guò)部分確定青蒿酯的量。溶出設(shè)備SR8PLUS(HANSON)介質(zhì)溫度37℃±0.5℃介質(zhì)模擬腸液、水、pH4.0的磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)速100RPM分析方法液相色譜法柱4.6mm×25cm，ODS，直徑5-10μm柱溫40℃流動(dòng)相-pH3.0緩沖液∶乙腈(50∶50)流速0.2ml/分鐘。pH3.0緩沖液取1.36g的磷酸二氫鉀溶解于1L的水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.05。附圖1顯示的是上述溶出試驗(yàn)的結(jié)果。(2)組合片劑中四磷酸咯萘啶的溶出試驗(yàn)根據(jù)美國(guó)藥典(USP)所述的槳式法(裝置2)測(cè)試根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的片劑。30分鐘后，根據(jù)下列的分析方法用試驗(yàn)中溶液的濾過(guò)部分確定青蒿酯的量。溶出設(shè)備SR8PLUS(HANSON)介質(zhì)溫度37℃±0.5℃介質(zhì)模擬胃液、模擬腸液、水、pH4.0的磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)速100RPM檢測(cè)器紫外吸收分光計(jì)(波長(zhǎng)278nm)柱4.6mm×25cm，ODS，直徑5-10μm柱溫40℃流動(dòng)相用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.15的10％乙腈溶液流速1.0ml/分鐘。附圖2顯示的是上述溶出試驗(yàn)的結(jié)果。試驗(yàn)實(shí)施例2儲(chǔ)存穩(wěn)定性試驗(yàn)使用根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的片劑，在40℃±2℃的溫度和75％±5％RH的相對(duì)濕度的條件下進(jìn)行儲(chǔ)存穩(wěn)定性試驗(yàn)。即，從開(kāi)始時(shí)以規(guī)律性的間期取樣48周，觀測(cè)片劑的性質(zhì)。根據(jù)下列方法進(jìn)行組合制劑中青蒿酯和咯萘啶的分析，根據(jù)上述試驗(yàn)實(shí)施例1進(jìn)行溶出試驗(yàn)。(1)組合制劑中青蒿酯的分析取根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的約20個(gè)片劑，精密稱重，并粉末化。準(zhǔn)確測(cè)定部分的粉末，相當(dāng)于約4.0mg青蒿酯，在2ml的丙酮中混合，適當(dāng)溶解該混合物，過(guò)濾，蒸發(fā)并干燥。向該殘留物中加入1mL的乙腈并溶解。用所得到的產(chǎn)物作為試驗(yàn)溶液。另一方面，取1mL的乙腈加入到4.0mg的青蒿酯RS中，并溶解，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液。對(duì)20μL的試驗(yàn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)行色譜法。根據(jù)USP所述的一般性原則進(jìn)行該方法，來(lái)評(píng)價(jià)青蒿酯的峰面積，AT和As青蒿酯(C19H29O8)的量(mg)＝轉(zhuǎn)換成酸酐的青蒿酯標(biāo)準(zhǔn)制劑的量(mg)×AT/As操作條件檢測(cè)器紫外吸收分光計(jì)(波長(zhǎng)216nm)柱4.6mm×25cm，ODS，直徑5-10μm柱溫40℃流動(dòng)相-pH3.0緩沖液∶乙腈(50∶50)流速1.0ml/分鐘pH3.0緩沖液取1.36g的磷酸二氫鉀溶解于1L的水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0±0.05(2)組合制劑中四磷酸咯萘啶的分析取根據(jù)實(shí)施例1的方法制備的約20個(gè)片劑，精密稱重，并粉末化。準(zhǔn)確測(cè)定部分的粉末，相當(dāng)于約10mg四磷酸咯萘啶，準(zhǔn)確測(cè)定，置于黃褐色燒瓶中。向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，使混合物達(dá)到100ml并適當(dāng)混合。迅速濾出該混合物，排出第一濾液，取5ml的次濾液，向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0)使其成為50ml的測(cè)試溶液。另一方面，取在105℃干燥獲得恒量的約10mg的四磷酸咯萘啶RS，準(zhǔn)確測(cè)定，置于黃褐色燒瓶中。向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0)使混合物達(dá)到100ml并溶解。從其中取出5ml的混合物，向其中加入磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，得到50ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。根據(jù)在USP中所述的一般性方法的紫外吸收分光光度法，對(duì)試驗(yàn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液在260nm處進(jìn)行吸光度AT和As試驗(yàn)來(lái)測(cè)定吸光度AT和As。四磷酸咯萘啶(C29H32ClN5O2∶4H3PO4)的量(mg)＝轉(zhuǎn)變成干燥產(chǎn)物的四磷酸咯萘啶標(biāo)準(zhǔn)制劑的量(mg)×AT/As操作條件檢測(cè)器紫外吸收分光計(jì)(波長(zhǎng)278nm)柱4.6mm×25cm，ODS，直徑5-10μm柱溫40℃流動(dòng)相用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.15的10％乙腈溶液流速1.0ml/分鐘。其結(jié)果如表1所示。表1組合制劑中青蒿酯和四磷酸咯萘啶的貯存穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(實(shí)施例1)表1所示的結(jié)果表明，儲(chǔ)存48周后組合制劑中青蒿酯的含量降低了1.3％，四磷酸咯萘啶的含量降低了2.2％。因此，由于咯萘啶和青蒿酯在48-周的含量和溶出試驗(yàn)中顯示的改變小于5％，它們證明了組合制劑中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性是非常好的。試驗(yàn)實(shí)施例3體外抗瘧活性試驗(yàn)在本試驗(yàn)中使用的是惡性瘧原蟲(chóng)，MR4(MalariaResearch和ReferenceReagentResourceCenter，Virginia，USA)[3D7(Netherlands)；藥物敏感性克隆，K1(Thailand)；對(duì)氯喹/乙胺嘧啶/環(huán)脒耐藥的亞種，VS1(Vietnam)；對(duì)氯喹/乙胺嘧啶-耐藥的亞種，F(xiàn)CR3(Gambia)；氯喹/乙胺嘧啶-耐藥的亞種，F(xiàn)CB(Colombia)；對(duì)氯喹-耐藥的亞種，Tm90C2A(Thailand)；對(duì)氯喹/乙胺嘧啶/甲氟喹耐藥]。取原蟲(chóng)置于包含培養(yǎng)基(RPMI-1640Rh+紅細(xì)胞，5％的紅細(xì)胞比容，25mM的HEPES，24mM的NaHCO3，0.2％的葡萄糖，0.03％的L-谷氨酰胺，150μM的次黃嘌呤，和0.5％的albumaxII)的組織培養(yǎng)燒瓶中，并在組織培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37℃并供應(yīng)5％CO2/95％空氣)。根據(jù)Deszardin等人(Antimicorb.AgentsChemother.1979，16，710)的修改后的方法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)。即，取藥物溶解于100％的DMSO中，在96-孔板中用培養(yǎng)基(RPMI-16400.5％的albumaxII，0.2％的葡萄糖，0.03％的L-谷氨酰胺，和150μM的次黃嘌呤)反復(fù)稀釋。兩種藥物的比例固定為1∶0，4∶1，3∶2，2∶3，1∶4，和0∶1，以用于組合試驗(yàn)。向其中加入相同量的惡性瘧原蟲(chóng)寄生蟲(chóng)混懸液(包含0.5％的寄生蟲(chóng)和1.5％的紅細(xì)胞比容)或未感染的紅細(xì)胞溶液。將該板在培養(yǎng)箱(37℃和5％的CO2)中培養(yǎng)24小時(shí)，向每個(gè)孔中加入10μl的[3H]次黃嘌呤(3.7Bq/孔)，將該板再培養(yǎng)24小時(shí)，然后置于-80℃的冰箱中完成該反應(yīng)。將該板再次去冷凍，離心收集顆粒狀的產(chǎn)物。用閃爍分光計(jì)測(cè)定放射性。由濃縮反應(yīng)數(shù)據(jù)得到回歸曲線，計(jì)算每種產(chǎn)物的50％抑制濃度(IC50)。獲得如下FIC50(FIC＝分級(jí)抑制濃度)值總FIC50＝組合劑中藥物A的IC50/組合劑中藥物A的IC50+藥物B的IC50/藥物B的IC50結(jié)果如表2和3所示。表2咯萘啶、青蒿酯、二氫青蒿素和氯喹的抗瘧活性每個(gè)數(shù)值代表的是3次試驗(yàn)的平均值。nd未確定如表2所示，在6個(gè)亞種中咯萘啶的IC50與青蒿酯類似，為1.2～4.1mg/ml，二氫青蒿素更為有效，為0.2～0.9mg/ml。表3咯萘啶和青蒿酯的組合對(duì)各種瘧原蟲(chóng)的藥物敏感性<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="817">寄生蟲(chóng)FIC藥物的固定比率(咯萘啶∶青蒿酯)4∶13∶22∶31∶4377克隆FIC501.061.262.241.77FIC901.071.222.112.13K1株FIC501.191.41.591.22FIC901.241.541.751.37VS1株FIC501.070.961.251.37FIC901.030.931.041.42FCB株FIC501.351.661.791.43FIC901.451.851.631.61Tm90C2A株FIC501.491.852.111.63FIC901.472.392.071.49FCR3株FIC501.571.932.061.33FIC902.012.252.511.78</table></tables>如表3所示，當(dāng)給藥咯萘啶和青蒿酯的混合物時(shí)，大多數(shù)FIC值是1～2，表明具有一些拮抗活性。然而，這是不考慮藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的體外試驗(yàn)。因此，需要與體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果相關(guān)的進(jìn)一步的分析。試驗(yàn)實(shí)施例4體內(nèi)抗瘧活性試驗(yàn)(1)劑量響應(yīng)分析為了觀測(cè)實(shí)施例1得到的咯萘啶和青蒿酯的組合制劑的劑量響應(yīng)，通過(guò)使用P.chabaudiASS原蟲(chóng)比較高劑量(咯萘啶+青蒿酯12mg/kg+4mg/此)和低劑量(咯萘啶+青蒿酯0.9mg/kg+0.3mg/kg)的組合制劑的抑制/治療活性與每種藥物的活性。簡(jiǎn)言之，用2×106P.chabaudiASS寄生的紅細(xì)胞靜脈內(nèi)接種于(即“沒(méi)有給藥”)的TFW小鼠，然后通過(guò)在感染后2天開(kāi)始療程為3-天的治療來(lái)進(jìn)行治療試驗(yàn)，如下用P.chabaudi原蟲(chóng)感染該小鼠；皮下給藥實(shí)施例1得到的咯萘啶/青蒿酯(3∶1)；觀測(cè)感染過(guò)程28天；每天，給每只動(dòng)物取血，并制備起薄血膜；使用吉姆薩染液后，用顯微鏡檢查動(dòng)物是否被感染；把28天后顯示陰性反應(yīng)的小鼠的血混合，繼代接種到小鼠中；用0.9％鹽水溶液將混合血稀釋成2倍體積；將0.2mL的上述物質(zhì)靜脈給藥于5只小鼠以再感染它們；繼續(xù)再觀測(cè)28天。結(jié)果，當(dāng)以低劑量0.3mg/kg或高劑量4mg/kg單獨(dú)給藥青蒿酯時(shí)，它們不會(huì)影響感染過(guò)程。同時(shí)，單獨(dú)給藥0.9mg/kg劑量的咯萘啶，也沒(méi)有作用。但是12mg/kg的劑量在28天里完全抑制了寄生蟲(chóng)病。當(dāng)通過(guò)從到那時(shí)仍未顯示任何感染的小鼠中取的血再感染小鼠后再觀測(cè)它們28天時(shí)，感染沒(méi)有復(fù)發(fā)。當(dāng)以低劑量4mg/kg，中劑量8mg/kg，或高劑量16mg/kg給藥咯萘啶/青蒿酯(3∶1)的組合時(shí)，它們都顯示了優(yōu)秀和有效的治療效果。特別地，當(dāng)劑量超過(guò)8mg/kg(咯萘啶+青蒿酯6+2)時(shí)，它在28天里完全抑制了寄生蟲(chóng)，顯示了非常好的治療效果。當(dāng)通過(guò)從到那時(shí)仍未顯示任何感染的小鼠中取的血再感染小鼠后再觀測(cè)它們28天時(shí)，感染沒(méi)有復(fù)發(fā)。這些結(jié)果提示，通過(guò)聯(lián)合給藥，可以降低顯示抗瘧活性的青蒿酯的劑量。(2)完全抑制試驗(yàn)(4-天試驗(yàn))在第0天，用2×106的被感染紅細(xì)胞靜脈感染小鼠。感染后2小時(shí)，治療組接受特定劑量的首次治療。在第1到3天每日一次對(duì)小鼠給藥。在第4天，從它們的尾靜脈取血，由其制備薄血膜。使用吉姆薩染劑后，用顯微鏡檢查動(dòng)物是否被感染。其中使用的一系列物質(zhì)是P.bergheiNY-藥物敏感性，P.bergheiPNY-咯萘啶耐藥，和P.bergheiSANA-青蒿酯耐藥。在完成給藥后第2天，取血，由其制備薄血膜，通過(guò)顯微鏡觀測(cè)發(fā)生的頻率來(lái)觀測(cè)抑菌效果。通過(guò)比較藥物治療組和對(duì)照組之間寄生蟲(chóng)的水平來(lái)評(píng)價(jià)抑菌活性。由log-藥物濃度和抑菌活性圖計(jì)算50％和90％的有效水平(ED50，ED90)，如下計(jì)算ED90水平時(shí)的耐藥因子耐藥因子，I90＝ED90耐藥性/ED90藥物敏感性結(jié)果如下表4～6所示。表4青蒿酯對(duì)血中瘧疾原蟲(chóng)的抑菌活性表5咯萘啶對(duì)血中瘧疾原蟲(chóng)的抑菌活性表6咯萘啶/青蒿酯對(duì)血中瘧疾原蟲(chóng)的抑菌活性如表4到6所示，咯萘啶的給藥，和咯萘啶/青蒿酯(3∶1)的聯(lián)合給藥對(duì)于P.berghei是非常有效的。當(dāng)咯萘啶單獨(dú)給藥于咯萘啶耐藥株時(shí)，ED90是18mg/kg/天。但是，在聯(lián)合給藥中，ED90降低到11mg/kg/天。同時(shí)，當(dāng)青蒿酯單獨(dú)給藥于咯萘啶耐藥株時(shí)，ED90是60mg/kg/天。但是，在聯(lián)合給藥中，ED90降低到11mg/kg/天。這些結(jié)果證明了聯(lián)合給藥能以較低劑量使用咯萘啶和青蒿酯來(lái)對(duì)抗咯萘啶耐藥株的可能性。試驗(yàn)實(shí)施例5重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)根據(jù)韓國(guó)毒物學(xué)協(xié)會(huì)的毒性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)在大鼠中進(jìn)行4周的重復(fù)劑量毒性試驗(yàn)，其中韓國(guó)毒物學(xué)協(xié)會(huì)是經(jīng)OECD認(rèn)可的毒性試驗(yàn)GLP組織。結(jié)果在雄性和雌性大鼠中，咯萘啶的NOAEL(非觀測(cè)到不良作用的水平)是23mg/kg，清除效果水平是210mg/kg。在雄性和雌性大鼠中青蒿酯的NOAEL是30mg/kg。但是，在實(shí)施例1的聯(lián)合給藥時(shí)，在雄性和雌性大鼠中，NOAEL是40mg/kg，清除效果水平是360mg/kg。這些結(jié)果表明聯(lián)合給藥可以降低4周的重復(fù)劑量毒性。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明的藥物組合物提供了抗瘧劑，其顯示了對(duì)耐藥性菌株的顯著治療效果，并獲得了藥物穩(wěn)定性并且這兩種藥物具有協(xié)同作用。權(quán)利要求1.一種預(yù)防或治療瘧疾的口服藥物組合物，包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽作為活性成分，和藥學(xué)可接受的載體。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述青蒿素或其衍生物和所述咯萘啶或其鹽的重量比為1∶1到1∶6。3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述青蒿素或其衍生物和所述咯萘啶或其鹽的重量比為1∶1到1∶3。4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中將其配制為所述青蒿素或其衍生物不與所述咯萘啶或其鹽接觸的形式。5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中所述青蒿素或其衍生物用藥學(xué)可接受的載體配制成微囊、低共熔混合物顆粒、或包衣制劑的形式。6.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述藥學(xué)可接受的載體是選自聚乙二醇、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素和乙基纖維素的熔化分散載體。7.根據(jù)權(quán)利要求6的組合物，其中所述熔化分散載體是聚乙二醇。8.權(quán)利要求7的組合物，其中青蒿素或其衍生物與聚乙二醇的重量比是1∶0.1～1∶2。9.權(quán)利要求8的組合物，其中青蒿素或其衍生物與聚乙二醇的重量比是1∶1。10.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，進(jìn)一步包含表面活性劑。11.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述青蒿素衍生物選自二氫青蒿素、青蒿酯、蒿甲醚和蒿乙醚。12.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述咯萘啶鹽是與磷酸、硫酸、鹽酸、乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、馬來(lái)酸或延胡索酸的酸加成鹽。全文摘要本發(fā)明涉及一種可口服的抗瘧藥組合制劑及其制備方法，所述制劑包含青蒿素或其衍生物和咯萘啶或其鹽作為活性成分，和藥學(xué)可接受的載體。文檔編號(hào)A61P33/06GK101052392SQ200580037422公開(kāi)日2007年10月10日申請(qǐng)日期2005年10月14日優(yōu)先權(quán)日2004年11月2日發(fā)明者李星泰,樸雨逸,魯政烈,鄭賢根,李哲規(guī),全圣賢,鄭顯圭申請(qǐng)人:新豐制藥株式會(huì)社