專利名稱：包括聚合物部分的多價vla－4拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制白細胞粘附、尤其是至少部分由VLA-4介導的白細胞粘附的共軛物。本發(fā)明的共軛物的特征在于含有多于一種共價連接到生物相容性聚合物(例如聚乙二醇)的VLA-4抑制性化合物(VLA-4 inhibiting compound)。
背景技術(shù)：
炎性白細胞相互之間、以及與其它體細胞之間的物理相互作用在調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應中扮演重要角色[Springer，T.A.Nature，346，425，(1990)；Springer，T.A.Cell 76，301，(1994)]。這些相互作用中的多種均是由統(tǒng)稱為細胞粘附分子的特異性細胞表面分子所介導的。這些粘附分子已經(jīng)根據(jù)其結(jié)構(gòu)被再分為不同組別。粘附分子中被認為在調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應中扮演重要角色的一族是整合素(integrin)族。該族細胞表面糖蛋白具有典型的非共價連接的異二聚體結(jié)構(gòu)。
這里所關(guān)注的具體的整合素亞類涉及阿爾法-4(α4)鏈，其可以與兩條不同的倍他鏈倍他-1(β1)和倍他-7(β7)配對[Sonnenberg，A.同上]。α4β1的配對出現(xiàn)在許多循環(huán)白細胞上(例如淋巴細胞、單核細胞和嗜酸性粒細胞)，盡管其在循環(huán)中性粒細胞上不存在或者僅以低水平存在。首先由Hemler和Takada1鑒定的VLA-4(極晚期抗原-4，也稱為α4β1整合素和CD49d/CD29)是細胞表面受體β1整合素族的一員。VLA-4由α4鏈和β1鏈組成。有至少9種β1整合素，它們均具有相同的β1鏈，并且各自具有不同的α鏈。這9種受體均可以與各種細胞基質(zhì)分子的不同補體(complement)相結(jié)合，例如，纖維連接蛋白、層粘蛋白和膠原。例如，VLA-4與纖維連接蛋白相結(jié)合。VLA-4也可以與內(nèi)皮細胞和其它細胞所表達的非基質(zhì)分子相結(jié)合。
VLA-4(α4β1整合素)可以與被稱為血管細胞粘附分子(或VCAM-1)的粘附分子相結(jié)合，該粘附分子在炎癥部位的內(nèi)皮細胞上經(jīng)常是上調(diào)(up-regulated)表達的[Osborne，L.Cell，62，3(1990)]。VCAM-1是一種作為被表達受體的非基質(zhì)分子，其被認為是造成白細胞向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)運輸?shù)脑?。?β1也已經(jīng)顯示可以與基質(zhì)分子纖維連接蛋白中的至少三個位點相結(jié)合[Humphries，M.J.等人，CibaFoundation Symposium，189，177，(1995)]。VLA-4的不同抗原表位對纖維連接蛋白和VCAM-1結(jié)合活性有決定作用，每一個抗原表位都已證明可以被單獨抑制。2基于使用單克隆抗體在動物模型中獲得的數(shù)據(jù)，有人認為在α4β1和其它細胞上的配體以及細胞外基質(zhì)之間的相互作用在白細胞遷移和活化中具有重要作用[Yednock，T.A.等人，Nature，356，63，(1992)。
α4和β7配對產(chǎn)生的整合素已經(jīng)象α4β1一樣被命名為LPAM-1[Holzmann，B和Weissman，I.EMBO J.8，1735，(1989)]，其可以與VCAM-1和纖維連接蛋白相結(jié)合。另外，α4β7能夠與被認為與白細胞向黏膜組織的歸巢有關(guān)的粘附分子(被稱為MAdCAM-1)相結(jié)合[Berlin，C.等人，Cell，74，185，(1993)]。α4β7和MAdCAM-1之間的相互作用在黏膜組織外的炎癥部位可能也是重要的[Yang，X-D.等人，PNAS，91，12604(1994)]。
由VLA-4和其它細胞表面受體介導的細胞間粘附與許多炎癥反應有關(guān)。在損傷或其它炎性刺激的部位，活化的血管內(nèi)皮細胞表達了可粘附白細胞的分子。白細胞與內(nèi)皮細胞的粘附機制部分涉及白細胞上的細胞表面受體與內(nèi)皮細胞上相應的細胞表面分子的識別和結(jié)合。一旦發(fā)生結(jié)合，白細胞透過血管壁遷移進入被損傷的部位，并釋放化學介質(zhì)以對抗感染。關(guān)于免疫系統(tǒng)粘附受體的綜述可見，例如，Springer3和Osborn4的文章。
炎性腦病，例如多發(fā)性硬化癥(MS)、腦膜炎、腦炎和被稱為實驗性自體免疫性腦脊髓炎(EAE)，是內(nèi)皮細胞/白細胞粘附機制導致對其它健康腦組織的破壞的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的例子。在患有這些炎性疾病的個體中，大量白細胞遷移透過血腦屏障(BBB)。白細胞釋放的毒性介質(zhì)引起大量的細胞損傷和死亡，從而導致神經(jīng)傳導受損和麻痹。在腦炎和腦膜炎中發(fā)生的類似情況表明，這些疾病可以使用合適的細胞粘附抑制劑治療。
在其它器官系統(tǒng)中，組織損傷也會通過引起白細胞遷移或活化的粘附機制而發(fā)生。例如，炎性腸病15(包括潰瘍性結(jié)腸炎和克隆氏病(Crohn’s disease))，至少部分是經(jīng)由α4β7和MadCAM的相互作用、以及可能的α4β1與該組織中表達的VCAM-1的相互作用，通過跨腸內(nèi)皮細胞的白細胞運輸引起的。哮喘6-8、類風濕性關(guān)節(jié)炎18-21和組織移植排斥22都被認為具有基于α4β1與VCAM-1和/或纖維連接蛋白的相互作用的成分，可能兩者都有。已經(jīng)顯示，心肌(心臟組織)缺血后的初期損傷能夠由于白細胞進入已損傷的組織引起進一步的損傷而進一步并發(fā)損傷(Vedder等人5)。其它由粘附分子機制介導的炎性疾病或醫(yī)學疾病的例子包括阿耳茨海姆氏病、動脈粥樣硬化9-10、AIDS癡呆癥11、糖尿病12-14(包括急性青少年型糖尿病、腫瘤轉(zhuǎn)移23-28、中風、以及其它腦外傷、腎炎、視網(wǎng)膜炎、異位性皮炎、銀屑病和白細胞介導的急性肺損傷(例如，成人呼吸窘迫綜合征中發(fā)生的肺損傷)。
一組希望用作抗炎劑的VLA-4拮抗劑是磺酰化-Pro-Phe化合物類，例如，美國專利第6,489,300號31中列出的化合物。這些化合物是VLA-4/VCAM-1結(jié)合的非常有效的拮抗劑。
由于基本上首先通過肝代謝，這些化合物口服的生物利用度很差。因為可以通過這些化合物治療的許多疾病是慢性病，所給藥的化合物的血清半衰期較長，將會使這些種類的化合物在治療哺乳動物疾病中的有效性提高。
藥物的半衰期是體內(nèi)的藥物量通過正常代謝和清除通路而減少一半所花費的時間的量度。VLA-4抑制劑(包括美國專利第6,489,300號中公開的那些化合物)的問題在于其半衰期很短，即使在藥物制劑中經(jīng)靜脈給藥，其半衰期為大約10到20分鐘。為了使患者在其系統(tǒng)中將有效量的藥物保持一段合理的時間，必須給予非常大量的藥物和/或必須在一天內(nèi)多次給藥。
半衰期這么短的VLA-4抑制劑是沒有商業(yè)前景的治療候選物。因此，需要血清半衰期顯著增長的VLA-4抑制劑；優(yōu)選血清半衰期在幾小時至幾天的范圍內(nèi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了顯示VLA-4拮抗特性的共軛物。本發(fā)明的共軛物的特征在于，含有多于一種的與聚合物共價連接的VLA-4拮抗劑。不受任何理論的限制，血清半衰期的增長被認為與活性化合物和聚合物的共價共軛(covalent conjugation)有關(guān)。另外，這些化合物的多個拷貝與聚合物的連接使生物效力的劣化最小化。
在一個方面，本發(fā)明提供了下式I的共軛物 B是生物相容性聚合物部分，其任選地共價連接到帶有支鏈臂的中心分子(hub molecule)；q為大約2至大約20；A在每次出現(xiàn)時均獨立地是式II的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，J選自a)式(a)的基團 其中R31是與任選地包括連接子(linker)的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R31選自-H、R31′、-NH2、-NHR31′、-N(R31′)2、-NC3-C6環(huán)、-OR31′和-SR31′，其中每一個R31′均獨立地為任選取代直鏈或支鏈C1-C6烷基、任選取代C3-C6環(huán)烷基、任選取代芳基或者任選取代雜芳基，并且，R32是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R32選自-H、-NO2、鹵代烷基和-N(MR41)R42，其中M是共價鍵、-C(O)-或-SO2-，并且R41是R41′、N(R41′)2或者-OR41′，其中，每一個R41′均獨立地為氫、任選取代直鏈或支鏈C1-C6烷基、任選取代環(huán)烷基、任選取代芳基、任選取代雜環(huán)基或任選取代雜芳基，其中任選的取代基為鹵素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基，并且，R42是氫、R41′、炔基或取代炔基；以及b)式(b)的基團 其中，R選自與聚合物部分相連接的共價鍵、氫、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、氨基、羥基、取代氨基、烷基、取代烷基、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、雜環(huán)氧基、巰基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基和取代烷基，其中每一個氨基、取代氨基、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基任選地與聚合物部分共價連接，其中，在每種情況下，該聚合物部分均任選地包括共價連接聚合物部分的連接子；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括共價連接聚合物部分與Ar1的連接子；Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、烷基、取代烷基、烷基氨基和取代烷基氨基，其中Ar2任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括共價連接聚合物部分與Ar2的連接子；X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-SO2和任選取代的-CH2-，其任選地共價連接到聚合物部分，其中，在每種情況下，該聚合物部分均任選地包括共價連接聚合物部分的連接子；在這里，R1選自氫和烷基；T選自a)式(c)的基團 其中，Y選自-O-和-NR1-，其中R1選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵和-NR2R3，其中R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基任選地與進一步任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；m是等于0、1或2的整數(shù)；n是等于0、1或2的整數(shù)；以及b)式(d)的基團 其中，G是任選取代的芳基或者任選取代的含有0到3個氮原子的雜芳基5元或6元環(huán)，其中所述的芳基或雜芳基任選地進一步包括與聚合物部分相連接的共價鍵，該聚合物部分任選地包括連接子；
R6是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R6是-H、烷基、取代烷基或-CH2C(O)R17，其中R17是-OH、-OR18或-NHR18，其中R18是烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、雜芳基或取代雜芳基；R55是-OH或可水解的酯，或者R55與聚合物部分任選地通過連接子形成可水解的聚合物酯；條件是A.Ar1、J、R55和T中的至少一個(更優(yōu)選J和T中的一個)包括與聚合物部分相連接的共價鍵；B.當X是-O-時，則m是2；和C.式I的共軛物的分子量不大于大約80,000。
本發(fā)明還提供了藥學組合物，該組合物包括，例如，藥學可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明的共軛物或其混合物。
本發(fā)明還提供了患者的至少部分由VLA-4介導的疾病的治療方法，該方法包括給予包括藥學可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明的共軛物或其混合物的藥學組合物。
本發(fā)明還包括本發(fā)明的共軛物及其藥學可接受的鹽在制造用于治療患者的至少部分由VLA-4介導的疾病的藥物中的應用。
共軛物和藥學組合物可以用于治療至少部分由VLA-4或白細胞粘附介導的疾病病癥。這些疾病病癥的例子包括哮喘、阿耳茨海姆氏病、動脈粥樣硬化、AIDS癡呆癥、糖尿病(包括急性青少年型糖尿病)、炎性腸病(包括潰瘍性結(jié)腸炎和克隆氏病)、多發(fā)性硬化癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎、組織移植、腫瘤轉(zhuǎn)移、腦膜炎、腦炎、中風、以及其它腦外傷、腎炎、視網(wǎng)膜炎、修格連氏干燥癥(Sjogren’s disease)、異位性皮炎、銀屑病、心肌缺血和白細胞介導的急性肺損傷(例如，發(fā)生在成人呼吸窘迫綜合征中的肺損傷)。
可以使用本發(fā)明的共軛物和組合物治療的其它疾病包括但不限于，炎性疾病，例如結(jié)節(jié)性紅斑、變應性結(jié)膜炎、視神經(jīng)炎、眼葡萄膜炎、變應性鼻炎、強制性脊柱炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、血管炎、萊特爾氏綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、進行性全身性硬化癥、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、Wegner氏肉芽腫、主動脈炎、類肉瘤病、淋巴細胞減少癥、顳動脈炎、心包炎、心肌炎、充血性心力衰竭、結(jié)節(jié)性多動脈炎、高敏反應綜合征、變態(tài)反應、嗜酸細胞過多綜合征、變應性肉芽腫性血管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性肺炎、慢性活動性肝炎、間質(zhì)性膀胱炎、自身免疫性內(nèi)分泌功能障礙、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性再生障礙性貧血、慢性遷延性肝炎和甲狀腺炎。
優(yōu)選本發(fā)明的共軛物和藥學組合物用于治療哮喘、類風濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化癥的方法。對于后面的這些疾病，本發(fā)明的共軛物不僅在體內(nèi)給藥時供抗炎作用，而且還發(fā)現(xiàn)在治療與脫髓鞘相關(guān)的病癥和疾病中的用途。
本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明的共軛物的方法和這些方法中使用的中間體。
具體實施例方式
如上所述，本發(fā)明涉及抑制白細胞粘附、尤其是至少部分由VLA-4介導的白細胞粘附的共軛物。
在一個優(yōu)選實施方式中，Ar1、J、Ar2和T中僅有一個包含與聚合物部分相連接的共價鍵。
在另一個優(yōu)選實施方式中，聚合物部分連接到-NR2R3基團。
在又一個優(yōu)選實施方式中，當本發(fā)明的共軛物中的X是NR1時，則m是2。
在再又一個優(yōu)選實施方式中，q是2至大約20的整數(shù)，更優(yōu)選2至大約8。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ia的化合物或其藥學可接受的鹽 其中B是二價、三價、四價或更高價的生物相容性聚合物部分或者任選地多于一個的生物相容性聚合物通過官能團連接和/或通過帶有分支臂的中心分子共價連接而形成的二價、三價、四價或更高價的聚合物部分；q為2至大約20；A在每次出現(xiàn)時均獨立地是式IIa的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，R選自與聚合物部分相連接的共價鍵、氨基、取代氨基、烷基和取代烷基，其中每一個氨基、取代氨基、烷基和取代烷基均任選地連接到聚合物部分，其中，在每種情況下，聚合物部分都任選地包括與聚合物部分共價連接的連接子；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括將聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-SO2和任選取代的-CH2-，其中R1選自氫和烷基；Y選自-O-和-NR1-，其中R1選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵和-NR2R3，其中R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基任選地通過連接子與聚合物部分任選地共價連接；m是等于0、1或2的整數(shù)；
n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是A.R、Ar2、W和-NR2R3中的至少一個包含與聚合物部分相連接的共價鍵；B.當R與聚合物部分共價連接時，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SO2-；C.當X是-O-或-NR1-時，則m是2；以及D.式Ia的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ib的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A均獨立地是下式IIb的化合物 其中，q為2至大約20；B如上所定義；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地與聚合物部分共價連接，其中該聚合物部分任選地包括將聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；Y選自-O-和-NR1-，其中R1選自氫和烷基；
W選自與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵和-NR2R3，其中R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基均任選地與聚合物部分共價連接，該聚合物部分還任選地包括連接子；條件是Ar2、W和-NR2R3中的至少一個與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；并且進一步的條件是式Ib的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ic的化合物 其中，每一個A都獨立地是下式IIc的化合物或其藥學可接受的鹽 且其中q為2至大約20；B如上所定義；R選自與聚合物部分相連接的共價鍵、氨基、取代氨基、烷基和取代烷基，其中每一個氨基、取代氨基、烷基和取代烷基均任選地與聚合物部分共價連接，其中，在每種情況下，聚合物部分都任選地包括共價連接聚合物部分的連接子；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；
Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括將聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；Y選自-O-和-NR1-，其中R1選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵和-NR2R3，其中R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基均任選地與聚合物部分共價連接，該聚合物部分進一步任選地包括連接子；n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是R、Ar2、W和-NR2R3中的至少一個與聚合物部分共價連接，該聚合物部分任選地包括連接子；并且進一步的條件是式Ic的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Id的化合物 其中，每一個A都獨立地是下式IId的化合物或其藥學可接受的鹽 且其中q為2至大約20；B如上所定義；R選自與聚合物部分相連接的共價鍵、氨基、取代氨基、烷基和取代烷基，其中每一個氨基、取代氨基、烷基和取代烷基均任選地與聚合物部分共價連接，其中，在每種情況下，聚合物部分都任選地包括共價連接聚合物部分的連接子；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括將聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基均任選地與聚合物部分共價連接，該聚合物部分進一步任選地包括連接子；n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是R、Ar2和-NR2R3中的至少一個與聚合物共價連接，該聚合物任選地包括連接子；并且進一步的條件是式Id的共軛物的分子量不大于80,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ie的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIe的化合物 且其中q為2至大約20；B如上所定義；Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；
Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基均任選地共價連接到聚合物部分，其中該聚合物部分任選地包括將聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基均任選地與聚合物部分共價連接，該聚合物部分進一步任選地包括連接子；條件是Ar2和-NR2R3中的至少一個與聚合物部分共價連接，該聚合物部分任選地包括連接子；并且進一步的條件是式Ie的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式If的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIf的化合物 且其中q為2至大約20；B如上所定義；R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；R5選自烷基和取代烷基；Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；
X選自-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-SO2和任選取代的-CH2-，其中R1選自氫和烷基；m是等于0、1或2的整數(shù)；n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是A.當R與聚合物部分共價連接時，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SO2-；B.當X是-O-或-NR1-時，則m是2；以及C.式If的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ig的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIg的化合物 且其中q為2至大約20；B如上所定義；R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；R5選自烷基和取代烷基；Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；n是等于0、1或2的整數(shù)；條件是
式Ig的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ih的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIh的化合物 且其中q為2至大約20；R4與聚合物部分共價連接，該聚合物部分任選地包括連接子；Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；條件是Ih的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ii的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIi的化合物 且其中q為2至大約20；
條件是式Ii的共軛物的分子量不大于60,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ij的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIj的化合物 且其中q為2至大約20；條件是式Ij的共軛物的分子量不大于80,000。
優(yōu)選的式I的共軛物包括下式Ik的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，每一個A都獨立地是下式IIk的化合物 優(yōu)選的式I的共軛物包括下式IL的化合物或其藥學可接受的鹽
其中，每一個A都獨立地是下式IIL的化合物 其中R4與聚合物部分共價連接，該聚合物部分任選地包括連接子。
優(yōu)選，式IIa-IIe中的Ar1和式IIf-IIh中的Ar3均單獨地選自苯基、4-甲基苯基、4-叔丁基苯基、2，4，6-三甲基苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2，4-二氟苯基、3，4-二氟苯基、3，5-二氟苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、3，4-二氯苯基、3，5-二氯苯基、3-氯-4-氟苯基、4-溴苯基、2-甲氧基苯基、
3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4-二甲氧基苯基、4-叔丁氧基苯基、4-(3′-二甲基氨基-正丙氧基)-苯基、2-羧基苯基、2-(甲氧基羰基)苯基、4-(H2NC(O)-)苯基、4-(H2NC(S)-)苯基、4-氰基苯基、4-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3，5-二-(三氟甲基)苯基、4-硝基苯基、4-氨基苯基、4-(CH3C(O)NH-)苯基、4-(苯基NHC(O)NH-)苯基、4-脒基苯基、4-甲基脒基苯基、4-[CH3SC(＝NH)-]苯基、4-氯-3-[H2NS(O)2-]苯基、1-萘基、2-萘基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、嘧啶-2-基、喹啉-8-基、2-(三氟乙酰基)-1，2，3，4-四氫異喹啉-7-基、2-噻吩基、5-氯-2-噻吩基、
2，5-二氯-4-噻吩基、1-N-甲基咪唑-4-基、1-N-甲基吡唑-3-基、1-N-甲基吡唑-4-基、1-N-丁基吡唑-4-基、1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑-4-基、1-N-甲基-5-甲基-3-氯吡唑-4-基、2-噻唑基、以及5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基。
優(yōu)選當A是式IIa、IIb、IIc、IId和IIe，且Ar1與聚合物部分相結(jié)合時，則Ar1為下式-Ar1-Z-(CH2CHR7O)pR8其中Ar1選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，Z選自共價鍵、1至40個原子的連接基團、-O-和-NR9-，其中R9選自氫和烷基，R7選自氫和甲基；R8選自-(L)w-A(當p大于大約300時)和(L)-B-(A)q-1，其中A代表上式IIa至IIh中的任何一個，L是1至40個原子的連接基團，且w是0或1；并且p是大約200至1360的整數(shù)。
當A是式IIa或IIf，且R不與聚合物部分相連接時，下式的取代基 (其中R5、X、m和n如上所定義)優(yōu)選自氮雜環(huán)丁烷基(azetidinyl)、噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、4-羥基吡咯烷基、4-氧代吡咯烷基、4-氟代吡咯烷基、4，4-二氟代吡咯烷基、4-(硫代嗎啉-4-基C(O)O-)吡咯烷基、4-[CH3S(O)2O-]吡咯烷基、3-苯基吡咯烷基、3-硫代苯基吡咯烷基、4-氨基-吡咯烷基、3-甲氧基吡咯烷基、4，4-二甲基吡咯烷基、4-N-Cbz-哌嗪基、4-[CH3S(O)2-]哌嗪基、5，5-二甲基噻唑啉-4-基、1，1-二氧代-噻唑烷基、1，1-二氧代-5，5-二甲基噻唑烷-2-基和1，1-二氧代硫代嗎啉基。
優(yōu)選，當A是式IIa，且下式的取代基與聚合物部分相連接時， 則優(yōu)選取代基是下式 其中，m是等于0、1或2的整數(shù)；Z選自共價鍵、1至40個原子的連接基團、-O-、-NR9-，其中R9選自氫和烷基，R7選自氫和甲基；p是0至大約1360的整數(shù)R8選-B-(A)q-1和A(當p大于大約300時)，且A代表上式IIa至IIh中的任何一個。
當A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe且當Ar2不與聚合物部分相連接時，則優(yōu)選Ar2選自苯基、取代苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和4-吡啶-2-酮基(4-pyridin-2-onyl)。
當A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe且當Ar2不與聚合物部分相連接時，則Ar2優(yōu)選表示為下式 其中，Ar2選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；Z選自共價鍵、1至40個原子的連接基團、-O-、-NR9-、酰胺、氨基甲酸酯和脲，其中R9選自氫和烷基；R7選自氫和甲基；p是0至大約1360的整數(shù)R8選自-B-(A)q-1和A(當p大于大約300時)，且A代表上式IIa至IIh中的任何一個。
在一個優(yōu)選實施方式中，-YC(O)W是-OC(O)NR2R3。
當A是式IIa、IIb或IIc，-YC(O)W是-OC(O)NR2R3且R2或R3都不與聚合物部分相連接時，則優(yōu)選-OC(O)NR2R3選自(CH3)2NC(O)O-、(哌啶-1-基)-C(O)O-、(哌啶-4-基)-C(O)O-、(1-甲基哌啶-4-基)-C(O)O-、(4-羥基哌啶-1-基)-C(O)O-、(4-甲酰氧基哌啶-1-基)-C(O)O-、(4-乙氧基羰基哌啶-1-基)-C(O)O-、(4-羧基哌啶-1-基)-C(O)O-、(3-羥甲基哌啶-1-基)-C(O)O-、(4-羥甲基哌啶-1-基)-C(O)O-、(4-苯基-1-Boc-哌啶-4-基)-C(O)O-、(4-哌啶酮-1-基乙烯縮酮)-C(O)O-、(哌嗪-4-基)-C(O)O-、(1-Boc-哌嗪-4-基)-C(O)O-、(4-甲基哌嗪-1-基)-C(O)O-、
(4-甲基高哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-苯基哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(4-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-乙酰基哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(苯基-C(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(吡啶-4′-基-C(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(苯基-NHC(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-(苯基-NHC(S)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-、(4-甲磺?；哙?1-基)-C(O)O-、(4-三氟甲磺?；哙?1-基)-C(O)O-、(嗎啉-4-基)-C(O)O-、(硫代嗎啉-4-基)-C(O)O-、(硫代嗎啉-4′-基砜)-C(O)O-、(吡咯烷-1-基)-C(O)O-、(2-甲基吡咯烷-1-基)-C(O)O-、(2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)-C(O)O-、(2-(羥甲基)吡咯烷-1-基)-C(O)O-、(2-(N，N-二甲基氨基)乙基)(CH3)NC(O)O-、(2-(N-甲基-N-甲苯-4-磺?；被?乙基)(CH3)N-C(O)O-、(2-(嗎啉-4-基)乙基)(CH3)NC(O)O-、(2-(羥基)乙基)(CH3)NC(O)O-、雙(2-(羥基)乙基)NC(O)O-、(2-(甲酰氧基)乙基)(CH3)NC(O)O-、(CH3OC(O)CH2)HNC(O)O-、以及2-(苯基NHC(O)O-)乙基-]HNC(O)O-。
當A是式IIa、IIb或IIc，-YC(O)W是-OC(O)NR2R3，且R2和/或R3與聚合物部分相連接時，聚合物部分優(yōu)選表示為下式
-Z’-(CH2CHR7O)pR8Z選自共價鍵、1至40個原子的連接基團、-O-、-NR9-、酰胺、氨基甲酸酯和脲，其中R9選自氫和烷基，R7選自氫和甲基；p是0至大約1360的整數(shù)R8選自-B-(A)q-1和A(當p大于大約300時)，且A代表上式IIa至IIh中的任何一個。
在式IIi和IIj的化合物中，優(yōu)選 為下式 其中R66是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R66是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基；R77是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R77是氫、鹵素或者直鏈或支鏈C1-C6烷氧基；并且R88是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R88是氫或者直鏈或支鏈C1-C6烷基。優(yōu)選R66、R77和R88中的一個是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵。
優(yōu)選式IIi的化合物也是式IIi-a的化合物及其藥學可接受的鹽
其中，Ar1選自烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基、雜芳基和取代雜芳基；并且R6是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵。
優(yōu)選的式IIi-a的化合物包括下述化合物在該化合物中，Ar1是苯基或者具有至少一個氮原子的5或6元雜芳基，它們中的每一個都任選地被下列基團取代鹵素、羥基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、硝基、三氟甲基、氨基、單或雙(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷基、C2-C6?；2-C6酰氨基、或者氨基(C1-C6)酰基。Ar1是任選地被下列基團所取代的吡啶基鹵素、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基、三氟甲基、氨基、單或雙(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷基、C2-C6?；?、C2-C6酰氨基、或氨基(C1-C6)?；Ｌ貏e優(yōu)選的式IIi-a的化合物包括其中的Ar1是任選地被下述基團所取代的吡啶基的化合物C1-C6烷基、羥基、鹵素、C1-C6烷氧基、硝基、三氟甲基、氨基、或者單或雙(C1-C6)烷基氨基。
優(yōu)選的式IIj的化合物也是式IIj-a的化合物及其藥學可接受的鹽 其中，
R6是與任選地包括連接子的聚合物部分(polymer moiety)相連接的共價鍵。
優(yōu)選的式IIj-a的化合物包括下述化合物在該化合物中，R31是氨基或者單或雙(C1-C6)烷基氨基；且R32是-H、-NO2或鹵代烷基，更優(yōu)選三氟甲基甲基。
另一種優(yōu)選的式IIj-a的化合物包括下述化合物在該化合物中，R31是氨基或者單或雙(C1-C6)烷基氨基；并且R32是-N(MR41)R42；其中M是-SO2-或-CO-；R41是任選地被下列基團所取代的(C1-C6)烷基鹵素、羥基、C1-C6烷氧基、氨基或者單或雙(C1-C6)烷基氨基；或者苯基或含有至少一個氮原子的5或6元雜芳基，它們中的每一個都任選地被下述基團所取代鹵素、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C7環(huán)烷基、氨基、硝基、三氟甲基、或者單或雙(C1-C6)烷基氨基；并且R42是鹵素、C1-C6烷基或C3-C7環(huán)烷基。
進一步優(yōu)選的式IIj-a的化合物包括下述化合物在該化合物中結(jié)構(gòu)式IIj-a中的R41基團是任選地被下列基團所取代的C1-C4烷基鹵素、羥基、C1-C6烷氧基、氨基、或者單或雙(C1-C6)烷基氨基；或者吡啶基或嘧啶基，它們中的每一個都任選地被下述基團所取代鹵素、羥基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氨基或者單或雙(C1-C4)烷基氨基；并且R42是鹵素、C1-C4烷基或C3-C7環(huán)烷基。
在一個實施例中，本發(fā)明的共軛物是二價的，并且由式III所表示 其中，每一個A都獨立地如上所定義，且B′是-Z′-(CH2CHR7O)p-Z′-，其中每一個Z′都獨立地是共價鍵或連接基團，R7是氫或甲基，并且p是大約100至1360的整數(shù)。
在另一個實施例中，本發(fā)明的共軛物是三價的，且優(yōu)選由式IV所表示 其中，每一個A都獨立地如上所定義，且t是3至10的整數(shù)。
定義如本文所使用的，“烷基”指的是具有1至5個碳原子的一價飽和脂肪烴基，更優(yōu)選具有1至3個碳原子。該術(shù)語所代表的基團例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基等。
“取代烷基”指的是具有1至3個取代基的烷基，優(yōu)選具有1至2個取代基，該取代基選自烷氧基、取代烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代氨基、氨基酰基、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、螺環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基。
“任選取代的烷基”包括如上所定義的“烷基”和“取代烷基”。
“任選取代的-CH2-”指的是未取代的、或者被1或2個取代基取代的基團，該取代基選自烷氧基、取代烷氧基、硫代烷氧基、取代硫代烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代氨基、氨基?；?、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、鹵素、羥基、巰基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、螺環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基。“任選取代的-CH2-”上的優(yōu)選的取代基是羥基、烷氧基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、巰基、硫代烷氧基和鹵素(優(yōu)選F)。優(yōu)選當“任選取代的-CH2-”被取代時，其被一個基團所取代。
“亞烷基”指的是優(yōu)選具有1至5個碳原子的直鏈或支鏈二價飽和脂肪烴基，更優(yōu)選具有1至3個碳原子。該術(shù)語所代表的例子例如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞正丙基(-CH2CH2CH2-)、亞異丙基(-CH2CH(CH3)-)等。
“烷氧基”指的是“烷基-O-”基團，其例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基等。
“取代烷氧基”指的是“取代烷基-O-”基團。
“?；敝傅氖窍率龌鶊FH-C(O)-、烷基-C(O)-、取代烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代炔基-C(O)-、環(huán)烷基-C(O)-、取代環(huán)烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-、取代雜芳基-C(O)-、雜環(huán)基-C(O)-和取代雜環(huán)基-C(O)-，其中的烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基如本文所定義。
“氨基酰基”指的是下述基團-C(O)NR10R10，其中的每一個R10均獨立地選自氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基，或者各個R10與氮原子連接在一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基如本文所定義。
“酰氧基”指的是下述基團-C(O)O-、取代烷基-C(O)O-、烯基-C(O)O-、取代烯基-C(O)O-、炔基-C(O)O-、取代炔基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、取代芳基-C(O)O-、環(huán)烷基-C(O)O-、取代環(huán)烷基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-、取代雜芳基-C(O)O-、雜環(huán)基-C(O)O-和取代雜環(huán)基-C(O)O-，其中的烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基如本文所定義。
“烯基”指的是具有2至6個碳原子(優(yōu)選2至4個碳原子)且具有至少1個(優(yōu)選1至2個)烯基不飽和位點(site of alkenylunsaturation)的烯基。這些基團的例子是乙烯基、烯丙基、丁-3-烯-1-基等。
“取代烯基”指的是具有1至3個取代基的烯基，優(yōu)選具有1至2個取代基，該取代基選自烷氧基、取代烷氧基、?；Ⅴ０被?、酰氧基、氨基、取代氨基、氨基?；?、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基，條件是任何羥基取代不與乙烯基(不飽和)碳原子相連接。
“炔基”指的是具有2至6個碳原子(優(yōu)選2至3個碳原子)且具有至少1個(優(yōu)選1至2個)炔基不飽和位點的炔基。
“取代炔基”指的是具有1至3個取代基的炔基，優(yōu)選1至2個取代基，該取代基選自烷氧基、取代烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代氨基、氨基?；?、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基。
“氨基”指的是基團-NH2。
“氰基”指的是基團-CN。
“取代氨基”指的是基團-NR′R″，其中的R′和R″均獨立地選自下述基團氫、烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基，或者R′和R″與它們所連接的氮連接在一起形成雜環(huán)基或取代雜環(huán)基，條件是R′和R″不都是氫。當R′是氫，R″是烷基時，在本文中取代氨基有時稱之為烷基氨基。當R′和R″是烷基時，在本文中取代氨基有時稱之為二烷基氨基。當提到單取代氨基時，表示R′或R″是氫但不同時是氫。當提到雙取代氨基時，表示R′或R″都不是氫。
“硝基”指的是基團-NO2。
“芳基”或“Ar”指的是具有6至14個碳原子且具有單環(huán)(例如，苯基)或多元稠環(huán)(例如，萘基或蒽基)的一價芳香族碳環(huán)基，其中的稠環(huán)可以是芳香族的或者不是芳香族的(例如，2-苯并噁唑酮、2H-1，4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)，條件是連接點是在芳香族碳原子處。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基。
“取代芳基”指的是具有1至3個取代基的芳基，優(yōu)選1至2個取代基，該取代基選自羥基、?；?、酰氨基、酰氧基、烷基、取代烷基、烷氧基、取代烷氧基、烯基、取代烯基、炔基、取代炔基、氨基、取代氨基、氨基?；?、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、羧基、羧基酯、氰基、巰基、烷硫基、取代烷硫基、芳硫基、取代芳硫基、雜芳硫基、取代雜芳硫基、環(huán)烷硫基、取代環(huán)烷硫基、雜環(huán)硫基、取代雜環(huán)硫基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、鹵素、硝基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基、雜芳氧基、取代雜芳氧基、雜環(huán)氧基、取代雜環(huán)氧基、氨基磺?；?NH2-SO2-)和取代氨基磺?；?。
“芳氧基”指的是下述基團芳基-O-，其例子包括苯氧基、萘氧基等。
“取代芳氧基”指的是取代的芳基-O-基團。
“羧基”指的是-COOH或其鹽。
“羧基酯”指的是-C(O)O-烷基、-C(O)O-取代烷基、-C(O)-芳基和-C(O)O-取代芳基，其中的烷基、取代烷基、芳基和取代芳基如本文所定義。
“環(huán)烷基”指的是3至10個碳原子的具有單環(huán)或多環(huán)的環(huán)狀烷基，其例子包括金剛烷基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)辛基等。
“環(huán)烯基”指的是4至10個碳原子的具有單環(huán)或多環(huán)且具有至少1個(優(yōu)選1至2個)烯鍵或乙烯基(＞C＝C＜)不飽和內(nèi)部位點的環(huán)狀烯基。
“取代環(huán)烷基”和“取代環(huán)烯基”指的是具有1至5個取代基的環(huán)烷基或環(huán)烯基，該取代基選自氧代(＝O)、硫代(＝S)、烷氧基、取代烷氧基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、取代氨基、氨基?；⒎蓟?、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、鹵素、羥基、硝基、羧基、羧基酯、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基。
“環(huán)烷氧基”指的是-O-環(huán)烷基。
“取代環(huán)烷氧基”指的是-O-取代環(huán)烷基。
“鹵代”或“鹵素”指的是氟、氯、溴和碘，優(yōu)選氟或氯。
“羥基”指的是-OH基團。
“雜芳基”指的是具有1至10個碳原子且在環(huán)內(nèi)具有1至4個選自氧、氮和硫的雜原子的芳香性基團。這種雜芳基可以具有單環(huán)(例如，吡啶基或呋喃基)或者多元稠環(huán)(例如，氮茚基(indolizinyl)或苯并噻吩基)，其中的稠環(huán)可以是或者不是芳香族的和/或含有雜原子，條件是連接點在芳香性雜芳基的原子上。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基和呋喃基。
“取代雜芳基”指的是被1至3個取代基所取代的雜芳基，該取代基選自與取代芳基所定義的相同取代基。
“雜芳氧基”指的是-O-雜芳基，且“取代雜芳氧基”指的是-O-取代雜芳基。
“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”或“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”指的是具有1至10個碳原子且在環(huán)內(nèi)具有1至4個選自氮、硫或氧的雜原子的具有單環(huán)或多元稠環(huán)的飽和或不飽和基團，其中在稠環(huán)系統(tǒng)中，一個或多個環(huán)可以是環(huán)烷基、芳基或雜芳基，條件是連接點在雜環(huán)上。
“取代雜環(huán)的”或“取代雜環(huán)烷基”或“取代雜環(huán)基”指的是被1至3個取代基所取代的雜環(huán)基，該取代基的定義與取代環(huán)烷基中相同。
雜環(huán)基和雜芳基的例子包括但不限于，氮雜環(huán)丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、吲嗪、異吲哚、吲哚、二氫吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶(phenanthridine)、氮蒽、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚啉、鄰苯二甲酰亞胺、1，2，3，4-四氫-異喹啉、4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、嗎啉基、硫代嗎啉基(也稱為硫嗎啉基)、哌啶基、吡咯烷、四氫呋喃基等。
“巰基”指的是基團-SH。
“烷硫基”或“烷基硫醚”或“硫代烷氧基”指的是基團-S-烷基。
“取代烷硫基”或“取代烷基硫醚”或“取代硫代烷氧基”指的是基團-S-取代烷基。
“芳硫基”指的是基團-S-芳基，其中芳基如上所定義。
“取代芳硫基”指的是-S-取代芳基，其中取代芳基如上所定義。
“雜芳硫基”指的是-S-雜芳基，其中雜芳基如上所定義。
“取代雜芳硫基”指的是-S-取代雜芳基，其中取代雜芳硫基如上所定義。
“雜環(huán)硫基”指的是-S-雜環(huán)基，“取代雜環(huán)硫基”指的是-S-取代雜環(huán)基，其中雜環(huán)基和取代雜環(huán)基如上所定義。
“雜環(huán)氧基”指的是雜環(huán)基-O-，“取代雜環(huán)基-O-”指的是取代雜環(huán)基-O-，其中雜環(huán)基和取代雜環(huán)基如上所定義。
“環(huán)烷硫基”指的是-S-環(huán)烷基，“取代環(huán)烷硫基”指的是-S-取代環(huán)烷基，其中環(huán)烷基和取代環(huán)烷基如上所定義。
“可水解的酯”指的是在活的有機體內(nèi)(in vivo)水解產(chǎn)生母體酸(parent acid)的基團。這種基團的例子包括烷氧基、取代烷氧基、環(huán)烷氧基、取代環(huán)烷氧基、芳氧基和取代芳氧基。優(yōu)選的可水解的酯是烷氧基。
“可水解的聚合物酯”指的是在活的有機體內(nèi)水解產(chǎn)生母體酸的生物相容性聚合物。優(yōu)選的可水解的聚合物酯是PEG。
術(shù)語“化合物”和“活性化合物”用于指本發(fā)明的共軛物的VLA-4拮抗劑部分或者在與聚合物共軛(conjugation)之前存在的VLA-4拮抗劑。
術(shù)語“連接子”、“連接基團”或“1至40個原子的連接子”指的是一個或多個下述基團(1)其將聚合物共價連接到活性化合物，和/或(2)其將包括聚合物部分的聚合物、低聚物和/或單體部分彼此共價連接；對于后者，其非限制性的說明包括聚合物-連接子-聚合物、低聚物-連接子-低聚物、單體-連接子-單體，低聚物-連接子-低聚物-連接子等。在任何特殊的共軛物內(nèi)，將聚合物、低聚物和/或聚合物的單體部分連接在一起的連接子，以及將聚合物部分與活性化合物連接的連接子可以是相同或不同的(即，可能具有相同或不同的化學結(jié)構(gòu))。
將聚合物、低聚物和/或聚合物部分的單體部分(例如，聚氧化烯部分)彼此共價連接的連接子也稱為“帶有分支臂的中心(hub)”或“帶有分支臂的中心分子”。帶有分支臂的中心是將三個或更多個聚合物、低聚物和/或單體部分共價連接到其上、從而為與活性化合物的共軛(conjugation)提供三價或更高價的聚合物部分。這種中心分子的非限制性例子是甘油(1，2，3-丙三醇)、季戊四醇、賴氨酸、1，2，4-苯三酚、葡萄糖(以其吡喃糖形式)、乙二胺四乙酸、氨基酸、3-或4-氨基水楊酸、1，3-二氨基-2-羥基丙烷、葡糖胺和唾液酸。
代表性的官能團連接(一個連接基團可能具有一個或多個這樣的官能團連接)是酰胺(-C(O)NR3-)、醚(-O-)、硫醚(-S-)、氨基甲酸酯(-OC(O)NR3-)、硫代氨基甲酸酯(-OC(S)NR3-)、脲(-NR3C(O)NR3-)、硫脲(-NR3C(S)NR3-)、氨基(-NR3-)、羰基(-C(O)-)、烷氧基(-O-烯基-)等。連接子在其所含有的原子方面可能是同源的或異源的(例如，僅含有碳原子的連接子或者含有碳原子和一個或多個存在于該連接子上的雜原子的連接子)。優(yōu)選，連接子含有1至25個碳原子和0至15個選自氧、NR3、硫、-S(O)-和-S(O)2-的雜原子，其中R3是氫、烷基或取代烷基。連接子也可以是手性的或非手性的、直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的。
為插入進官能團連接之間或連接子內(nèi)的鍵中，連接子可以進一步包含間隔基團(spacer linker)，該間隔基團包括但不限于選自烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基及其組合的間隔子(spacer)。間隔子在其所含有的原子方面可以是同源的或異源的(例如，僅含有碳原子的間隔子或者含有碳原子和一個或多個存在于該間隔子上的雜原子的間隔子)。優(yōu)選，間隔子含有1至25個碳原子和0至15個選自氧、NR3、硫、-S(O)-和-S(O)2-的雜原子，其中R3如上所定義。間隔子也可以是手性的或非手性的、直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的。
間隔子的非限制性例子是直鏈或支鏈亞烷基鏈、亞苯基、聯(lián)苯撐及其它環(huán)，它們所有都能攜帶一個以上能夠與活性化合物和一個或多個聚氧化烯部分形成連接的官能團。多官能性連接子-間隔子的一個特殊例子是賴氨酸，其可以經(jīng)由C4亞烷基鏈上取代的兩個氨基將任何活性化合物與兩個聚合物部分相連接。其它非限制性例子包括對氨基苯甲酸和3，5-二氨基苯甲酸，它們分別具有2和3個可用于形成連接的官能團。本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員很容易想到其它這樣的多官能性連接加間隔子。
術(shù)語“聚合物”和“聚合物部分”指的是生物相容的、水溶性的、基本上無免疫原性的、能夠與多于一個式II的VLA-4拮抗劑偶聯(lián)的聚合物。優(yōu)選該聚合物是非離子的和生物相容的，且在所使用的分子量和用量下測量是沒有毒性的。該術(shù)語還包括其中有三個或更多個聚合物與如上所討論的帶有分支臂的中心分子相連接的分子。該術(shù)語進一步包括其中聚合物、低聚物和/或其單體部分被一個或多個連接子連接的分子。
合適的聚合物的例子包括但不限于聚氧化烯聚合物，例如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、葡聚糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)(Kameda，Y.等人，Biomaterials 253259-3266，2004；Thanou，M.等人，Current Opinion inInvestigational Drugs 4(6)701-709，2003；Veronese，F(xiàn).M.等人，IIFarmaco 54497-516，1999)。
優(yōu)選的聚合物是聚氧化烯。“聚氧化烯”指的是包括至少一個任選地與一個或多個另外的聚氧化烯共價連接的聚氧化烯部分的大分子，其中的聚氧化烯是相同或不同的。非限制性例子包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚異丙二醇(PIPG)、PEG-PEG、PEG-PPG、PPG-PIPG等。聚氧化烯定義中還包括的聚合物是其中聚氧化烯部分任選地通過連接子相互連接的大分子。說明性的例子是PEG-連接子-PEG、PEG-連接子-PIPG等。更具體的例子包括市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯]、聚[二(乙二醇)鄰苯二甲酸酯二醇]等。其它例子是氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化的多元醇單元的嵌段共聚物。
在其至少一個末端，使用常規(guī)化學技術(shù)將聚合物任選地通過連接子共價連接到非聚合物取代的式II的化合物上，為聚合物與非聚合物取代的式II的化合物提供共價連接。
當使用連接子時，連接子共價連接到至少一個聚合物末端上，其另一端則共價連接到非聚合物取代的式II的化合物上。導致這種連接的反應化學在本領(lǐng)域中是公知的。這種反應化學涉及在連接子、非聚合物取代的式II的化合物和聚合物上使用互補官能團(complementaryfunctional group)。優(yōu)選，連接子上的互補官能團相對于聚合物上可用的官能團來進行選擇以便連接，或者相對于可以被導入至聚合物上的官能團來進行選擇以便連接。同樣，這種互補官能團在本領(lǐng)域也是公知的。例如，在適當?shù)摹⒐幕罨瘎┑拇嬖谙?，連接子或聚合物的羧酸與聚合物或連接子的伯胺或仲胺之間的反應導致形成將聚合物部分與連接子共價連接的酰胺鍵；連接子或聚合物基團的氨基與聚合物或連接子的磺酰鹵之間的反應導致形成將聚合物部分與連接子共價連接的磺酰胺鍵；連接子或聚合物的醇基或酚基與聚合物或連接子的烷基鹵或芳基鹵之間的反應導致形成將聚合物基團與連接子共價連接的醚鍵。
當然要理解的是，如果在非聚合物取代的式II的化合物上發(fā)現(xiàn)適當?shù)娜〈?，則可能不需要任選的連接子，因為聚合物可以與非聚合物取代的式II的化合物直接連接。
下表I描述了大量互補反應基團、以及其間反應得到的鍵。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠選擇適當?shù)娜軇┖头磻獥l件完成這些連接。
表I代表性的互補結(jié)合化學

優(yōu)選連接子的例子包括下述基團-O-、-NR3-、-NR3C(O)O-、-OC(O)NR3-、-NR3C(O)-、-C(O)NR3-、-NR3C(O)NR3-、-亞烷基-NR3C(O)O-、-亞烷基-NR3C(O)NR3-、-亞烷基-OC(O)NR3-、-亞烷基-NR3-、-亞烷基-O-、-亞烷基-NR3C(O)-、-亞烷基-C(O)NR3-、-NR3C(O)O-亞烷基-、-NR3C(O)NR3-亞烷基-、-OC(O)NR3-亞烷基、-NR3-亞烷基-、-O-亞烷基-、-NR3C(O)-亞烷基-、-C(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)O-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-OC(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-NR3-亞烷基-、亞烷基-O-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)-亞烷基-、-C(O)NR3-亞烷基-、-NR3C(O)O-亞烷氧基-、-NR3C(O)NR3-亞烷氧基-、-OC(O)NR3-亞烷氧基、-NR3-亞烷氧基-、-O-亞烷氧基-、-NR3C(O)-亞烷氧基-、-C(O)NR3-亞烷氧基-、-亞烷氧基-NR3C(O)O-亞烷氧基-，其中R3如上所定義，以及
其中， 選自芳基、取代芳基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、雜芳基、取代雜芳基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基，且D和E獨立地選自化學鍵、-O-、CO、-NR3-、-NR3C(O)O-、-OC(O)NR3-、-NR3C(O)-、-C(O)NR3-、-NR3C(O)NR3-、-亞烷基-NR3C(O)O-、-亞烷基-NR3C(O)NR3-、-亞烷基-OC(O)NR3-、-亞烷基-NR3-、-亞烷基-O-、-亞烷基-NR3C(O)-、亞烷基-C(O)NR3-、-NR3C(O)O-亞烷基-、-NR3C(O)NR3-亞烷基-、-OC(O)NR3-亞烷基-、-NR3-亞烷基-、-O-亞烷基-、-NR3C(O)-亞烷基-、-NR3C(O)O-亞烷氧基-、-NR3C(O)NR3-亞烷氧基-、-OC(O)NR3-亞烷氧基、-NR3-亞烷氧基-、-O-亞烷氧基-、-NR3C(O)-亞烷氧基-、-C(O)NR3-亞烷氧基-、-亞烷氧基-NR3C(O)O-亞烷氧基-、-C(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)O-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-OC(O)NR3-亞烷基-、-亞烷基-NR3-亞烷基-、亞烷基-O-亞烷基-、-亞烷基-NR3C(O)-亞烷基-和-C(O)NR3-亞烷基-，其中R3如上所定義。
上述連接子中優(yōu)選的亞烷基包括C1-C15亞烷基，更優(yōu)選C1-C6亞烷基，最優(yōu)選C1-C3亞烷基。優(yōu)選的雜環(huán)基包括哌嗪基、哌啶基、高哌嗪基、高哌啶基、吡咯烷基和咪唑烷基。優(yōu)選的烷氧基是-(CH2-CH2-O)1-15。
術(shù)語“氧化烯”指的是-OCH2CHRd-，其中Rd是烷基。聚合的氧化烯指的是聚氧化烯、聚鏈烷烯氧化物或聚烷撐二醇，其非限制性的例子包括PEG、聚丙二醇、聚丁二醇、聚異丙二醇等。
這些聚合物任選地用取代基單封端，如上所述該取代基優(yōu)選自烷基、芳基、取代烷基、取代芳基和帶有分支臂的中心分子。這些聚合物還包括二氨基封端的聚氧化烯聚合物，其在本領(lǐng)域稱為Jeffamines。通常，Jeffamines(得自Huntsman Performance Products，The Woodlands，Texas)含有連接到聚醚主鏈末端的伯胺基團。因此它們是“聚醚胺”。聚醚主鏈基于氧化丙烯(PO)、氧化乙烯(EO)或混合的EO/PO，或者其它主鏈鏈段。Jeffamines可以是一元胺類、二胺和三胺，并且其分子量范圍可以達到大約5,000。
此外，聚合的氧化烯可以任選地含有一個或多個非氧化烯單位，例如市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯]、聚[二(乙二醇)鄰苯二甲酸酯二醇]等。還包括氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化的多元醇單元的嵌段共聚物。
聚氧化烯，例如PEG，通常為水溶性的蠟狀固體。通常，當聚合物的分子量增大時，其粘度和凝固點也增加。市售制劑通常的特征在于聚合物組分的“平均分子量”。
來自本發(fā)明的共軛物中單個或多個聚合物部分的聚合物總量的平均分子量一般在大約100至100,00之間；優(yōu)選大約20,000至60,000；更優(yōu)選大約30,000至大約50,000。對于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員來說顯而易見的是，這種類型的聚合物是多分散性的。多分散性指的是對于聚合物分子來說，即使分子類型相同，其尺寸(直鏈或多臂聚合物的鏈長度)仍有不同。因此，平均分子量將取決于平均的方法。多分散性指數(shù)(測量分子量可變性(variability)的一種常用指標)是重均分子量與數(shù)均分子量的比例。它表示了一批聚合物中個體分子量的分布。數(shù)均分子量是確定聚合物分子量的一種方式。數(shù)均分子量是單個聚合物分子量的普通平均數(shù)。它是通過下述方法而確定的測量n個聚合物分子的分子量，計算分子量的總和，然后除以n。聚合物的數(shù)均分子量可以通過滲透壓力測定法、端基滴定法和依數(shù)性來測定。
重均分子量可以通過光散射、小角度中子散射(SANS)、X-射線散射和沉降速度來進行測定。重均分子量和數(shù)均分子量的比率稱為多分散性指數(shù)。不具有分散性的理論聚合物樣品的多分散性指數(shù)為1。對本發(fā)明來說，多分散性指數(shù)的優(yōu)選范圍是大約1.10至大約1.05。更優(yōu)選的范圍是大約1.05至商業(yè)可行的合成法的上限(目前為大約1.02)。
其它合適的聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、葡聚糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)在本領(lǐng)域中是公知的，其分子量為大約100至100,000；優(yōu)選大約10,000至80,000；更優(yōu)選大約20,000至大約70,000。
本發(fā)明中可以使用的PEG的非限制性例子包括下述化合物

其中，pp和亞烷基如本文所定義，Rbb優(yōu)選自烷基、取代烷基、芳基和取代芳基。
各種PEG例子如下所示

單封端的單羥基PEG(mPEG)

單封端的單氨基PEG

未封端的二羥基PEG帶支鏈的PEG得自NOF的PEG試劑(20kDa 4-臂)

20kDa 4-臂PEG四胺雙甘油核心Cat#Sunbright DG-200PA
得自Nektar的PEG試劑(40kDa 8-臂) 40kDa 8-臂PEG六甘油核心Cat#0J000T08樹枝狀PEG得自NOF的PEG試劑(40kDa 4-臂) 40kDa4-臂PEG醇40kDa 4-臂PEG四胺季戊四醇核心 季戊四醇核心cat.#Sunbright PTE-40000 cat.#Sunbright PTE-400PA得自NOF的PEG試劑(40kDa 3-臂) 40kDa3-臂PEG 40kDa 3-臂PEG三胺甘油核心甘油核心cat#Sunbright GL-40000 cat#Sunbright GL-400PA
得自SunBio的PEG試劑(40和20kDa)Y-PEG系列(天冬氨酸核心) Y-PEG胺(40kDa) Y-PEG氨基甲酸硝基苯酯(40kDa)Cat#PYAM-40 Cat#PYNPC-406-臂系列(山梨糖醇核心) 40kDa6-臂PEG定制產(chǎn)品山梨糖醇6-臂系列中可得的低分子量包括10、15和20kDa。醇之外的衍生物包括6-臂胺。例如，10kDa的6-臂胺(cat#P6AM-10)可以轉(zhuǎn)化為40kDa的6-臂六胺(具有Nektars的5kDa的BocNH-PEG-NHS酯)，然后與小分子進行共軛。
這些PEG聚合物可以通過下述方法進一步修飾用PEG二胺，通過適當?shù)倪B接子將鏈延長，例如通過氨基甲酸酯(氨基甲酸乙酯)或者脲。
PEG二胺 修飾的直鏈PEG
“藥學可接受的鹽”指的是保留了本發(fā)明化合物的生物學效力和特性、且不具有生物學或其它方面不希望出現(xiàn)的特性的鹽。在許多情況下，本發(fā)明的化合物由于存在氨基和/或羧基或類似基團，能夠形成酸性和/或堿性的鹽。
藥學可接受的堿加成鹽可以從無機堿和有機堿而制備。衍生自無機堿的鹽包括(僅作為例子)鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。衍生自有機堿的鹽包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺鹽，該伯胺、仲胺或叔胺例如烷胺、二烷胺、三烷胺、取代烷胺、二(取代烷基)胺、三(取代烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代烯基胺、二(取代烯基)胺、三(取代烯基)胺、環(huán)烷胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)烷基)胺、取代環(huán)烷胺、二取代環(huán)烷胺、三取代環(huán)烷胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代環(huán)烯基胺、二取代環(huán)烯基胺、三取代環(huán)烯基胺、芳胺、二芳胺、三芳胺、雜芳胺、二雜芳胺、三雜芳胺、雜環(huán)胺、二雜環(huán)胺、三雜環(huán)胺、混合的二和三胺，其中胺上的取代基中至少兩個是相同的，并且選自烷基、取代烷基、烯基、取代烯基、環(huán)烷基、取代環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基等。還包括其中兩個或三個取代基與氨基氮一起形成雜環(huán)或雜芳基的胺。
合適的胺的例子包括(僅作為例子)異丙胺、三甲胺、二乙胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、氨基丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、哈胺(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、N-乙基哌啶等。要理解的是，在實施本發(fā)明過程中也可以使用其它羧酸衍生物，例如羧酸酰胺，包括甲酰胺(carboxamide)、低級烷基甲酰胺、二烷基甲酰胺等。
藥學可接受的酸加成鹽可以從無機酸和有機酸制備。衍生自無機酸的鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽等。衍生自有機酸的鹽包括乙酸鹽、丙酸鹽、羥乙酸鹽、丙酮酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、肉桂酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、水楊酸鹽等。
術(shù)語“藥學可接受的陽離子”指的是藥學可接受的鹽的陽離子。
要理解的是，本文所定義的所有取代基中，并不包括用本身進一步取代取代基而定義的取代基(例如，具有取代芳基作為取代基的取代芳基，即芳基本身用取代芳基取代，等等)而獲得的聚合物。在這種情況下，這種取代基的最大數(shù)目為3。即，上述每一個定義都受到一定的限制，例如，取代芳基被限定為-取代芳基-(取代芳基)-(取代芳基)。
同樣要理解的是，上述定義并不包括不允許的取代方式(例如，甲基用5個氟基或羥基α取代而成為烯屬或炔屬不飽和烴)。這種不允許的取代方式對于專業(yè)技術(shù)人員是公知的。
化合物的制備本發(fā)明的共軛物能夠使用下述常用方法和步驟從容易獲得的起始原料制備。要理解的是，雖然給定了典型的或優(yōu)選的工藝條件(即，反應溫度、時間、反應物的摩爾比、溶劑、壓力等)，除非另外說明，也可以使用其它工藝條件。最佳反應條件可以根據(jù)所使用的特殊反應物或溶劑而變化，但是這些條件可以由本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化方法來確定。
另外，對于本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員顯而易見的是，可能必須使用一些常規(guī)保護基團以保護某些官能團免受不希望的反應。各種官能團的合適保護基團以及對特殊官能團保護和去保護的合適條件在本領(lǐng)域中是公知的。例如，T.W.Greene和G.M.Wuts的Protecting Groups inOrganic Synthesis(有機合成中的保護基團)，第二版，Wiley，New York，1991及其中引用的參考文獻中描述了大量保護基團。
而且，本發(fā)明的化合物典型地含有一個或多個手性中心。因此，如果需要，這些化合物可以制備或分離為純的立體異構(gòu)體，即，單獨的對映體或非對映體、或者立體異構(gòu)體過量的混合物(stereoisomer-enriched mixtures)。除非另外說明，所有這些立體異構(gòu)體(以及立體異構(gòu)體過量的混合物)都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。純的立體異構(gòu)體(或立體異構(gòu)體過量的混合物)可以使用，例如，本領(lǐng)域公知的任選活性起始原料或立體選擇性試劑制備?；蛘?，可以使用，例如，手性柱色譜、手性溶劑等對這些化合物的消旋混合物進行拆分。
本發(fā)明的共軛物優(yōu)選包括含有2至大約20個式II的取代基的聚合物部分/任選帶有分支臂的中心分子 具體的說，聚合物部分可以通過共價鍵與Ar1取代基、J取代基、Ar2取代基相連接和/或在T取代基中，其中聚合物部分直接地或者經(jīng)由連接子而連接。接著，聚合物部分可以任選地連接到帶有分支臂的中心分子。
在其最簡單的形式中，本發(fā)明的化合物是包括具有與兩個末端相連接的兩個式II的取代基的單個聚合物部分的二價結(jié)構(gòu)。在代表性的情況中，使用衍生自PEG的聚合物部分，該聚合物部分通過羰基連接基團與式II的化合物相連接，其中式II的化合物由下式表示 所得到的共軛物可以表示為下式 其中，p優(yōu)選為大約100至1360的整數(shù)。
在四價形式的一個例子中，共軛物包括4個聚合物部分。在代表性的情況中，每一個聚合物部分的一個末端連接到一個共用的(common)帶有分支臂的中心分子，而另一個末端任選地通過連接子連接到式II的化合物。為了進一步和再次進行說明，每一個聚合物部分均衍生自PEG，共用的帶有分支臂的中心分子是季戊四醇。在此例子中，PEG部分的另一個末端與式II的化合物通過羰基連接基團相連接，其中式II的化合物由下式表示 所得到的共軛物可以由下式所表示 其中，4個p的總和優(yōu)選為大約100至1360。
形成式I的共軛物的合成方案是使聚合物部分上的官能團通過連接基團或直接與式II的化合物反應，從而使聚合物部分與式II的化合物共價連接。
首先，非PEG取代的式IIb-IIh的化合物在本領(lǐng)域中是公知的，其例子可見許多已公布的專利，包括但不限于，美國專利第6,489,300號和第6,436,904號，兩者均全部引入作為參考。式II的化合物的非聚合物變體包括在Ar1、R、Ar2和T部分中的一個或多個上具有互補官能團或者可以衍生為互補官能團的基團的化合物。為說明的目的，下面陳述了在Ar2部分(例如，酪氨酸)上具有互補官能團(-OH)的化合物作為直接或通過連接子向分子中加入聚合物部分的合適起始點。
這些化合物可以通過下述方式制備首先，用適當?shù)姆蓟酋Ｂ冗B接雜環(huán)氨基酸1，如下述方案1所示 方案1
其中，R、Ar1、X、m和n如上所定義。
具體的說，在上述方案1中，雜環(huán)氨基酸1，與化學計量等量或過量(優(yōu)選大約1.1至大約2當量)的芳基磺酰鹵2，在合適的惰性稀釋劑(例如，二氯甲烷等)中結(jié)合。通常，反應在大約-70℃至大約40℃的溫度范圍內(nèi)進行，直至反應基本完成，反應時間一般在1至24小時內(nèi)。優(yōu)選，在合適的堿存在下反應以清除反應過程中生成的酸。合適的堿的例子包括叔胺，例如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基-嗎啉等。或者，反應可以在Schotten-Baumann-型條件下使用堿性水溶液進行，例如氫氧化鈉水溶液、緩沖至7.4的磷酸鹽水溶液等。所得到的產(chǎn)物3，可以通過常規(guī)方法回收，如色譜、過濾、蒸發(fā)、結(jié)晶和類似方法，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
上述反應中使用的雜環(huán)氨基酸1，是已知的化合物或者可以通過常規(guī)合成方法從已知的化合物制備的化合物。用于該反應的合適的氨基酸的例子包括但不限于L-脯氨酸、反式-4-羥基-L-脯氨酸、順式-4-羥基-L-脯氨酸、反式-3-苯基-L-脯氨酸、順式-3-苯基-L-脯氨酸、L-(2-甲基)脯氨酸、L-哌啶酸、L-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸、L-噻唑烷-4-羧酸、L-(5，5-二甲基)噻唑烷-4-羧酸、L-硫嗎啉-3-羧酸。如果需要，氨基酸1的相應的羧酸酯(例如，甲酯、乙酯、叔丁酯等)可以與芳基磺酰氯一起用于上述反應中。隨后，使用常規(guī)試劑和條件將酯基水解為羧酸，即，用堿金屬氫氧化物在惰性稀釋劑(例如，甲醇/水)中水解，然后得到N-磺酰氨基酸3。
同樣，上述反應中使用的芳基磺酰氯2是已知的化合物或者可以通過常規(guī)合成方法從已知的化合物制備的化合物。這種化合物典型地是從相應的磺酸，即式Ar1SO3H的化合物(其中Ar1如上所定義)，使用三氯化磷和五氯化磷制備的。該反應一般是通過下述條件下進行的將磺酸與大約2至5摩爾當量的三氯化磷和五氯化磷，在無溶劑的條件下或在惰性溶劑(例如，二氯甲烷)中，在大約0℃至大約80℃的溫度范圍內(nèi)，反應大約1至大約48小時，得到磺酰氯。或者，芳基磺酰氯2可以通過下述條件從相應的巰基化合物，即Ar1-SH化合物(其中Ar1如本文所定義)制備在常規(guī)反應條件下用氯(Cl2)和水處理巰基化合物。
或者，上述反應中使用的芳基磺酰氯2可以通過使用Cl-SO3H對取代苯或雜環(huán)烷基進行氯磺?；苽?。
適用于本發(fā)明的芳基磺酰氯的例子包括但不限于苯磺酰氯、1-萘磺酰氯、2-萘磺酰氯、對甲苯磺酰氯、鄰甲苯磺酰氯、4-乙?；交酋Ｂ?、4-叔丁基苯磺酰氯、4-溴苯磺酰氯、2-羧基苯磺酰氯、4-氰基苯磺酰氯、3，4-二氯苯磺酰氯、3，5-二氯苯磺酰氯、3，4-二甲氧基苯磺酰氯、3，5-三氟甲基苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、2-甲氧基羰基苯磺酰氯、4-甲基氨基-苯磺酰氯、4-硝基苯磺酰氯、4-三氟甲基-苯磺酰氯、4-三氟甲氧基苯磺酰氯、2，4，6-三甲基苯磺酰氯、2-噻吩磺酰氯、5-氯-2-噻吩磺酰氯、2，5-二氯-4-噻吩磺酰氯、2-噻唑磺酰氯、2-甲基-4-噻唑磺酰氯、1-甲基-4-咪唑磺酰氯、1-甲基-4-吡唑磺酰氯、5-氯-1，3-二甲基-4-吡唑磺酰氯、3-吡啶磺酰氯、2-嘧啶磺酰氯等。如果需要，磺酰氟、磺酰溴或磺酸酐可以替代磺酰氯用于上述反應中形成N-磺酰氨基酸3。
然后，如下述方案2所示，N-芳基磺酰氨基酸3與市售的酪氨酸酯進行偶聯(lián) 方案2其中R、Ar1、X、m和n如上所定義，Ra是氫或烷基，但優(yōu)選烷基(例如叔丁基)，Z代表芳環(huán)上的任選取代，o是0、1或2。
這種偶聯(lián)反應一般使用公知的偶聯(lián)劑進行，例如碳二酰亞胺、BOP試劑(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)-磷六氟膦酸酯)等。合適的碳二酰亞胺的例子包括二環(huán)己基碳二酰亞胺(DCC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺(EDC)等。如果需要，也可以使用碳二酰亞胺偶聯(lián)劑的聚合物負載形式，包括例如在Tetrahedron Letters，34(48)，7685(1993)中描述的那些。另外，例如N-羥基琥珀酰亞胺、1-羥基苯并三唑等的公知的偶聯(lián)助催化劑可以用于加速偶聯(lián)反應。
這種偶聯(lián)反應一般是通過下述方式進行的將N-磺酰氨基酸3與大約1至大約2當量的偶聯(lián)劑和至少1當量(優(yōu)選大約1至大約1.2當量)的酪氨酸衍生物在惰性稀釋劑(例如二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺等)中進行接觸。通常，這種反應在大約0℃至大約37℃的溫度范圍內(nèi)，進行大約12至大約24小時。在反應完成后，通過化合物5通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等。
或者，N-磺酰氨基酸3可以轉(zhuǎn)化為酸性鹵化物，然后與化合物4偶聯(lián)，得到化合物5。酸性鹵化物可以通過下述方法制備將化合物3與無機酸性鹵化物(例如，亞硫酰氯、三氯化磷、三溴化磷或五氯化磷)或者優(yōu)選與草酰氯在常規(guī)條件下接觸而制備。這種反應一般是使用大約1至5摩爾當量的無機酸性鹵化物或草酰氯，在無溶劑的條件下或在惰性溶劑(例如二氯甲烷或四氯化碳)中，在大約0℃至大約80℃的溫度范圍內(nèi)，進行大約1至大約48小時。在該反應中，也可以使用催化劑，例如DMF。
然后，N-磺酰氨基酸3的酸性鹵化物與至少1當量、優(yōu)選大約1.1至大約1.5當量的酪氨酸衍生物4，在惰性稀釋劑例如二氯甲烷中，在大約-70℃至大約40℃的溫度范圍內(nèi)接觸大約1至大約24小時。優(yōu)選，該反應在合適的堿的存在下進行以清除反應過程中生成的酸。合適的堿的例子包括叔胺，例如三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉等?；蛘撸磻梢栽赟chotten-Baumann型條件下使用例如氫氧化鈉等的堿的水溶液進行。反應完成后，化合物5通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等。
或者，化合物5可以通過下述方式制備如下述方案3所述，首先形成二氨基酸衍生物，然后將二氨基酸與芳基磺酰鹵化物2偶聯(lián)
方案3其中R、Ra、Ar1、X、Z、m、n和o如上所定義。
二氨基酸6可以容易地通過下述方法制備使用上述常規(guī)氨基酸偶聯(lián)技術(shù)和試劑(例如碳二酰亞胺、BOP試劑等)將氨基酸1與氨基酸4進行偶聯(lián)。然后，可以使用磺酰氯2并且使用上述合成步驟，將二氨基酸6磺化，得到化合物7。
上述反應中使用的酪氨酸衍生物4是已知化合物，或者是可以通過常規(guī)合成方法從已知化合物制備的化合物。例如，適用于上述反應的酪氨酸衍生物4包括但不限于L-酪氨酸甲酯、L-酪氨酸叔丁酯、L-3，5-二碘酪氨酸甲酯、L-3-碘酪氨酸甲酯、β-(4-羥基-1-萘基)-L-丙氨酸甲酯、β-(6-羥基-2-萘基)-L-丙氨酸甲酯等。如果需要，當然也可以使用上述化合物的其它酯或酰胺。
N-芳基磺?；?雜環(huán)氨基酸-酪氨酸衍生物7可以用作通過下述方案4-14所示的偶聯(lián)反應而將聚合物部分與Ar2基團連接的起始點，這些偶聯(lián)反應僅用于說明以證明如何導入聚合物部分。在這些方案中，PEG用作聚合物部分，僅僅是為了說明。要理解的是，可以使用其它合適的聚合物替代PEG，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員很容易對下述反應方案進行修改以加入其它聚合物。在某些情況下，PEG部分可以被直接地導入苯氧基上，在其它情況下，PEG部分可以經(jīng)由通過連接子部分的連接而導入。
具體的說，方案4如下所示
方案4其中Ar1、R、Ra、m、n、o、X和Z如上所定義；Pg是胺保護基團，例如CBZ、Boc等，與Ra羧基保護基團相比，其優(yōu)選可以被正交去除，且p是優(yōu)選大約100至1360的整數(shù)。
具體的說，在方案4中，如上制備的化合物7與至少等量、優(yōu)選過量的氯甲酸4-硝基苯酯8在合適的溶劑例如二氯甲烷、氯仿等中結(jié)合，優(yōu)選在惰性氣氛下進行。該反應優(yōu)選在大約-40℃至0℃的溫度范圍內(nèi)，在合適的堿的存在下進行以清除生成的酸。合適的堿的例子包括三乙胺、二異丙基乙胺等。在形成中間體混合碳酸酯(未顯示)后，將至少近似等摩爾量的N-Pg哌嗪8a加入至反應溶液中。使該反應在室溫下繼續(xù)進行大約1至24小時。反應完成后，化合物9可以通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾和類似方法，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一反應中。
常規(guī)地除去保護基團，得到游離的哌嗪衍生物10。根據(jù)所使用的保護基完成去除步驟。例如，三氟甲基羰基保護基團經(jīng)由碳酸鉀水溶液而被容易地去除。此外，各種官能團的合適保護基團和對特殊官能團進行保護和去保護的合適條件在本領(lǐng)域中是公知的。例如，參見T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Chemistry(有機化學中的保護基團)，第二版，Wiley，New York，1991，以及其中所引用的參考文獻。
然后，游離的哌嗪衍生物10與α，ω-聚氧乙烯二氯甲酸酯(α，ω-dichloroformate polyoxyethylene)(化合物11)在合適的惰性稀釋劑如二氯甲烷、氯仿等中，優(yōu)選在惰性氣氛中化合。一般在與化合物11的結(jié)合中，使用每氯甲酸酯實體(entity)至少2當量且優(yōu)選大約2.5至10當量的化合物10。反應任選地在催化量的DMAP和堿的存在下進行以清除反應中生成的酸。在環(huán)境條件下繼續(xù)進行反應，直至反應基本完成，一般在4至24小時內(nèi)。當Ra是烷基時，隨后的酯衍生物水解得到游離的羧基或其鹽。所得到的二聚體12通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法例如中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等。
α，ω-聚氧乙烯二氯甲酸酯(化合物11)可以通過與過量的碳酰氯(一般為至少2至大約20當量)在合適的惰性溶劑如二氯甲烷、氯仿等中的反應而容易地從市售聚氧乙烯制備。反應優(yōu)選在環(huán)境條件下在惰性氣氛中進行，直至反應基本完成，一般為大約2至24小時。之后，得到的α，ω-聚氧乙烯二氯甲酸酯(化合物11)通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法例如中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等。
直至形成哌嗪衍生物28的反應方案的具體例子見下述方案5
方案5具體的說，市售的3-吡啶磺酸21在常規(guī)條件下通過與POCl3/PCl5接觸，使用本領(lǐng)域公知的條件，被轉(zhuǎn)化為相應的磺酰氯22?；酋Ｂ?2與市售的S-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸23的偶聯(lián)在下述條件下完成在常規(guī)條件下，優(yōu)選在磷酸鹽緩沖液(pH7.4)的存在下使用過量的磺酰氯。該反應優(yōu)選在大約-10℃至20℃的溫度下進行直至反應基本完成，一般在0.5至5小時內(nèi)。得到的產(chǎn)物24可以通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法例如色譜、過濾、蒸發(fā)、結(jié)晶等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
接下來，N-吡啶基磺?；?5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸化合物23與酪氨酸叔丁酯使用常規(guī)氨基酸偶聯(lián)條件進行偶聯(lián)。具體的說，該偶聯(lián)反應使用公知的偶聯(lián)劑如1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亞胺(EDC)、1-羥基-苯并三唑(HOBt)和N-甲基嗎啉進行，以加速偶聯(lián)反應。
該偶聯(lián)反應一般是通過將N-磺酰氨基酸23與大約1至大約2當量的偶聯(lián)劑和至少1當量、優(yōu)選1至大約1.2當量的酪氨酸叔丁酯在惰性稀釋劑如二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺等中接觸而進行的。該反應一般在大約0℃至大約22℃的溫度范圍內(nèi)，進行大約12至大約24小時。反應完成后，化合物24通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
單-N-Boc-哌嗪25通過下述方法被單獨地轉(zhuǎn)化為對應的氨基甲酰氯26以上述方式與碳酰氯反應。反應完成后，化合物26通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
化合物24與化合物26偶聯(lián)以得到化合物27是在常規(guī)條件下在惰性稀釋劑如二氯甲烷中使用催化量的DMAP而進行的，優(yōu)選在堿的存在下進行以清除生成的酸。反應在大約-20至22℃的溫度下進行大約2至大約24小時。反應完成后，化合物27通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
在三氟乙酸的存在下去除氨基Boc保護基團和叔丁基酯以得到化合物28，該化合物可以通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等。
下述方案6說明了哌嗪化合物的制備，相對于在苯丙氨酸化合物上發(fā)現(xiàn)的羧基保護基團，該化合物在胺基之一上被正交保護，這樣在偶聯(lián)后，哌嗪保護基團可以與羧基保護基團以不同方式去除。如果在所得到的化合物上的后續(xù)反應需要羧基保護基團以避免不需要的副反應，則這種正交保護是必要的。
方案6具體的說，在方案6中，化合物24以上述方式制備。N-t-Boc-哌嗪25通過下述方式被轉(zhuǎn)化為N-t-Boc-N′-三氟甲基-羰基哌嗪29使其與過量的三氟乙酸酐在合適的溶劑例如二氯甲烷中接觸，在該過程中存在合適的胺例如三乙胺以清除反應中生成的酸。該反應通常在大約-20℃至大約22℃的溫度范圍內(nèi)，進行大約1至大約24小時。反應完成后，化合物29通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
接著，在常規(guī)條件下，使用通過惰性溶劑如二氯甲烷、EtOAc、EtO2等鼓泡的氣態(tài)HCl，在環(huán)境條件下去除N-t-Boc-N′-三氟甲基-羰基哌嗪29上的t-Boc保護基團，得到N′-三氟甲基羰基哌嗪的鹽酸鹽30。該反應通常是在大約-20℃至大約22℃的溫度范圍內(nèi)，進行大約0.5至大約4小時。反應完成后，化合物30通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
N′-三氟甲基羰基哌嗪30向N-氨基甲酰氯衍生物31的轉(zhuǎn)化通常是通過與碳酰氯以上述方式接觸而進行的。反應完成后，化合物31可以通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇和優(yōu)選不純化和/或分離就用于下一步驟中。
化合物31和24在與上述相似的條件下偶聯(lián)，得到化合物32，該化合物在哌嗪基團的氨基部分和苯丙氨酸基團的羧基部分被正交保護。在常規(guī)條件下，使用碳酸鉀水溶液選擇性地去除三氟甲基羰基氨基保護基團，得到化合物33。
下述方案7說明了在與式II的化合物共價連接之前對聚合物部分的修飾。僅僅為了說明的目的，聚合物部分是與季戊四醇相結(jié)合的四價PEG。方案7顯示，聚合物部分的長度可以通過常規(guī)化學容易地進行調(diào)整以得到最佳的長度。
方案7
其中四個r和s的總和為優(yōu)選大約100至1360的整數(shù)。
具體的說，市售的四-聚乙二醇化的季戊四醇(化合物34)(例如，總分子量為大約20kD的化合物，得自Sun Bio，Orinda，CA，USA，目錄號P40H-20)與過量的碳酰氯(一般為至少4至大約40當量)在合適的溶劑如二氯甲烷、氯仿等中進行反應。反應優(yōu)選在惰性氣氛中在環(huán)境條件下進行，直至反應基本完成，一般進行大約2至24小時。之后，所得到的聚氧乙烯四氯甲酸酯(化合物35)通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法例如中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者不純化和/或分離就用于下一反應步驟中。
然后，四氯甲酸酯(化合物35)與過量(一般為每氯甲酸酯實體2.5至10當量)的α，ω-二氨基聚氧乙烯化合物(例如，分子量為大約6kD的化合物，得自Sun Bio，目錄號P2AM-6)在常規(guī)條件下在惰性稀釋劑如二氯甲烷中化合，任選地存在催化量的DMAP和堿以清除生成的酸。該反應一般在大約-20至大約22℃的溫度下，進行大約2至大約4小時或者直至反應基本完成。反應完成后，化合物36通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
當具體使用得自Sun Bio的四聚乙二醇化的季戊四醇和得自SunBio的二胺時，所得到的產(chǎn)物(化合物36)的分子量為大約45kD。α，ω-二氨基聚氧乙烯可以從市場上獲得，商標為Jeffamines，一般其分子量可以達到10,000或更高。
要理解的是，在方案7中可以使用單氨基保護的α，ω-二氨基聚氧乙烯以盡量減小交聯(lián)和環(huán)化。反應完成后，單氨基保護基團通過本領(lǐng)域中公知的常規(guī)手段去除。
方案8說明了提供聚合物取代衍生作用的第二種途徑。在該方案中，哌嗪基團的氨基部分用作原位形成的α，ω-二羧酸聚合物活化羧基的互補官能團。再次僅為說明的目的，α，ω-二羧酸聚合物是一種α，ω-二羧酸聚氧乙烯。在本實施方式中，二羧基-PEG化合物由結(jié)構(gòu)式HOOCCH2(OCH2CH2)pOCH2COOH所表示，其中p如上所定義，且所得到的與PEG基團相連接的連接子由-C(O)CH2-表示。
方案8具體的說，在方案8中，過量的如上所制備的化合物33(例如每個羧基2.5至10當量的化合物33)加入至二羧基-PEG化合物中，該二羧基-PEG化合物通過與至少2當量、優(yōu)選過量的HATU[O-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-1，1，3，3，-四甲基uronium六氟磷酸鹽]在合適的胺如三乙胺的存在下接觸而原位轉(zhuǎn)化為活化的酯(未顯示)。二羧基-PEG化合物與化合物33的偶聯(lián)優(yōu)選在大約0至大約22℃的溫度下，進行大約2至大約24小時。反應完成后，化合物39通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
用過量的甲酸常規(guī)去除叔丁基羧基保護基團，得到本發(fā)明的式IA的化合物。
方案9描述了將聚合物添加至化合物A上的衍生作用的另一種途徑。在此方案中，哌嗪基團的氨基部分用作原位形成的包括α，ω-二醇的聚合物的氯甲酸酯的互補官能團。再次為了說明的目的，包括α，ω-二醇的聚合物是由下式表示的PEGHOCH2CH2(OCH2CH2)pOH，其中p如上所定義，且所得到的連接子由-C(O)-表示。
方案9具體的說，在方案9中，市售的二羥基PEG42的羥基通過與碳酰氯在甲苯(Fluka)中、在二氯甲烷中被轉(zhuǎn)化為相應的氯甲酸酯37。該產(chǎn)物通過蒸發(fā)分離，并且不需進一步純化而用于下一步驟中。
過量的化合物33(例如，每氯甲酸酯實體2.5至10當量的化合物33)與如上制備的二氯甲酸酯(化合物43)在合適的堿如三乙胺的存在下(以清除生成的酸)進行接觸。二氯甲酸酯-PEG化合物與化合物33的偶聯(lián)優(yōu)選在大約0至大約22℃的溫度下，進行大約2至大約4小時。反應完成后，化合物44通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
用過量的甲酸常規(guī)去除叔丁基羧基保護基團，得到本發(fā)明的式I的化合物。
方案8和9中說明的反應可以在二羧酸(方案8)或二氯甲酸酯(方案9)的任一端同時進行，從而提供了同二價或更高價的同多價共軛物的一鍋合成法。然而，要理解的是，這些反應可以通過使用保護基團而順序進行。
在二羧酸的情況下，羧基之一可以被保護，同時另一個基團與哌嗪的氨基進行偶聯(lián)。完成后，保護基團可以被去除，然后與相同或優(yōu)選不同的化合物A反應，得到異二價結(jié)構(gòu)。此外，還可以使用羧基官能團上的正交保護基團來制備異三價、異四價和更高的異多價結(jié)構(gòu)。在二醇(方案9)的情況下，羥基之一可以被保護，同時另一個羥基與碳酰氯反應，形成氯甲酸酯，隨后添加至哌嗪的氨基上。完成后，保護基團可以被去除，然后與碳酰氯反應，隨后與相同或優(yōu)選不同的化合物A反應，得到異二價結(jié)構(gòu)。而且，還可以通過使用醇官能團上的正交保護基團來制備異三價、異四價和更高的異多價結(jié)構(gòu)。
方案10說明了用于隨后的聚合物加成的N-氨基甲酰氯和異氰酸酯中間體的合成。在此方案中，哌嗪基團的氨基部分被衍生以進行隨后的聚合物加成。
方案10具體的說，在方案10中，化合物33的哌嗪基團的氨基部分轉(zhuǎn)化為相應的N-氨基甲酰氯(化合物33a)，這種轉(zhuǎn)化是通過是化合物33與過量的碳酰氯在合適的堿如碳酸氫鈉的存在下(為清除反應中生成的酸)接觸而進行的。反應結(jié)束后，化合物33a可以通過常規(guī)方法回收，例如中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇和優(yōu)選不純化和/或分離就用于下一步驟(在方案11中說明)中。
或者，化合物33的哌嗪基團的氨基部分可以通過與至少等量、優(yōu)選過量的4-硝基苯甲酰氯在堿例如吡啶(也可以用作溶劑)的存在下(以清除反應過程中生成的酸)反應而轉(zhuǎn)化為相應的酰胺(化合物45)。反應優(yōu)選在大約0至大約22℃的溫度下，進行大約1至大約24小時。反應完成后，化合物45通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇和優(yōu)選不純化和/或分離就用于下一步驟中。
隨后還原苯基的對硝基取代基，得到了化合物46中的胺取代基。還原作用通常是使用鈀/碳在氫氣氛中、通常在加壓的條件下在合適的稀釋劑如甲醇中進行的。反應一直進行到反應基本完成，一般在大約24至大約72小時內(nèi)。在反應過程中，如需要，則另外加入催化劑以影響反應的完成。反應完成后，化合物46通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇和優(yōu)選不純化和/或分離就用于下一步驟中。
化合物46的苯基的對氨基取代基轉(zhuǎn)化為相應的異氰酸酯47，這種轉(zhuǎn)化是通過與過量的碳酰氯在合適的堿如碳酸氫鈉的存在下(以清除生成的酸)反應而發(fā)生的。反應一直進行到反應基本完成，一般在大約0℃至大約22℃下，進行大約0.5至大約5小時。反應完成后，化合物47通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
方案11進一步說明了提供聚合物取代衍生作用的另一種路線。在此方案中，化合物33a的哌嗪基團的氨基甲酰氯部分用作互補官能團，以形成氨基甲酸酯或脲鍵。僅為了說明的目的，所使用的聚合物是PEG的α，ω-二醇或二胺，且由下式表示HQCH2CH2(OCH2CH2)pQH，其中Q是NH或O。
方案11具體的說，在方案11中，過量(例如，每HQ部分2.5至10當量的氨基甲酰氯)的化合物33a在惰性溶劑如二氯甲烷中與合適的二羥基-或二氨基-PEG化合物相接觸，優(yōu)選存在合適的堿如三乙胺和/或催化量的4-N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)。反應一直進行至反應基本完成，一般在大約4至大約48小時內(nèi)。反應完成后，化合物48通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
當Q是羥基時，產(chǎn)物含有將PEG基團與VLA-4拮抗劑通過由-C(O)-表示的連接子共價連接的氨基甲酸酯官能團。當Q是氨基時，產(chǎn)物含有將PEG與VLA-4拮抗劑通過由-C(O)-表示的連接子共價連接的脲官能團。用過量的甲酸常規(guī)去除叔丁基羧基保護基團，得到本發(fā)明的化合物。
方案12說明了提供聚合物取代衍生作用的另一種途徑。在此方案中，化合物47的異氰酸酯用作互補官能團，以形成氨基甲酸酯或脲鍵。僅僅為了說明的目的，所使用的聚合物是PEG的α，ω-二醇或二胺，且可以由下式表示HQCH2CH2(OCH2CH2)pQH，其中Q是NH或O。
方案12具體的說，在方案12中，過量的異氰酸酯47(例如，每HQ部分2.5至10當量的異氰酸酯47)與合適的二羥基-或二氨基-PEG化合物在合適的惰性稀釋劑如二氯甲烷或甲苯中接觸。反應優(yōu)選保持在大約0°至大約105℃的溫度下，直至反應基本完成，時間一般在大約1至大約24小時內(nèi)。反應完成后，化合物49通過常規(guī)方法回收，該常規(guī)方法包括中和、蒸發(fā)、萃取、沉淀、色譜、過濾等，或者可以選擇不純化和/或分離就用于下一步驟中。
當Q是羥基時，所得到的產(chǎn)物含有將PEG基團與VLA-4拮抗劑通過-C(O)-連接基團共價連接的氨基甲酸酯官能團。當Q是氨基時，所得到的產(chǎn)物含有將PEG基團與VLA-4拮抗劑通過-C(O)-連接基團共價連接的脲官能團。
用過量的甲酸常規(guī)去除叔丁基羧基保護基團，得到本發(fā)明的式I的單-PEG化合物47。
在方案11和12中描繪的反應可以在聚合物的兩端同時進行(形成二聚體)，從而提供了同二價或更高價的同多價共軛物的一鍋合成法。然而，要理解的是，這些反應可以通過使用保護基團而順序進行。
在二胺的情況下，胺基之一被保護，而另一個基團與化合物33a的氨基甲酰氯或化合物47的異氰酸酯偶聯(lián)。反應完成后，保護基團可以被去除，然后與相同或優(yōu)選不同的化合物A反應，得到異二價結(jié)構(gòu)。此外，還可以通過使用一個或多個胺官能團上的正交保護基團而制備異三價、異四價和更高的異多價結(jié)構(gòu)。
在二醇的情況下，羥基之一可以被保護，而另一個基團與化合物33a的氨基甲酰氯或化合物47的異氰酸酯偶聯(lián)。反應完成后，保護基團可以被去除，然后與相同的或優(yōu)選不同的化合物A反應得到異二價結(jié)構(gòu)。而且，還可以通過使用一個或多個羥基官能團上的正交保護基團而制備異三價、異四價和更高的異多價結(jié)構(gòu)。
在上述方案中，可以上述方式使用位于分子其它部分上的胺部分來共價連接聚合物基團與分子。例如，位于Ar1上、雜環(huán)氨基酸上或Ar2上的胺同樣可以被衍生以提供PEG取代。在合成中，胺部分可包含在這些取代基中，如果需要，適當?shù)剡M行保護。或者，可以使用胺前體。例如，如方案10中所示，還原硝基從而得到相應的胺。同樣，還原氰基從而得到H2NCH2-基團。作為氨基取代的Ar1基團，美國專利第6,489,300號中提供了硝基和氰基取代的Ar1基團。
而且，氨基取代可以被并入雜環(huán)氨基酸官能團中，然后被衍生以包含聚合物部分。例如，美國專利第6,489,300中描述了雜環(huán)氨基酸官能團可以是2-羧基哌嗪?；蛘?，市售的3-或4-羥脯氨酸可以被氧化為相應的酮，然后在氰基硼氫化鈉的存在下用氨水還原氨化形成相應的胺部分。此外，4-氰基脯氨酸可以被還原得到結(jié)構(gòu)式為-CH2NH2的取代烷基，其可以通過胺被衍生。
此外，胺部分可以被并入Ar2官能團中。優(yōu)選，胺部分以胺前體(例如與Ar2連接的硝基或氰基)而存在。
在上述方案中，胺與互補官能團的反應可以被逆轉(zhuǎn)，因此羧基或羥基位于式II的VLA-4拮抗劑(沒有任何聚合物取代基)上，且胺基可以是聚合物部分的一部分。在這種情況下，胺基(優(yōu)選是將聚合物部分封端的胺基)，可以使用碳酰氯和Et3N轉(zhuǎn)化為異氰酸酯，并與羥基反應形成氨基甲酸酯，如下述方案13所示
方案13具體的說，過量的化合物50(如美國專利第6,489,300號所述)以上述方式相接觸，得到相應的氨基甲酸酯51。優(yōu)選每異氰酸酯部分使用大約2.5至10當量的化合物50。然后，如上所述地去保護，得到相應的二酸(未顯示)。
或者，在方案13中，羥基官能團可以與碳酰氯反應得到氯羰氧基衍生物，它可以與二胺化合物的胺基反應得到氨基甲酸酯。
例如Ar1部分上的羧基官能團可以通過與二氨基聚合物或更多氨基聚合物以上述方案8中所述的方式反應而轉(zhuǎn)化為相應的酰胺?；蛘撸率龇桨?4說明了從Ar1部分上的相應氰基產(chǎn)生胺官能團的一種方法。
方案14具體的說，在方案14中，美國專利第6,489,300號中所述的已知化合物52在常規(guī)條件下用叔丁基保護，得到氰基化合物53，該化合物在常規(guī)條件下氫化，得到氨甲基化合物54?；衔?4的氨甲基可以在上述任何一個方案中用于與聚合物部分偶聯(lián)。
下述方案15說明了可以在上述任何一個方案中用于與聚合物部分偶聯(lián)的3-氨基吡咯烷基衍生物的可選合成方法。
方案15使用常規(guī)方法，將市售的順式-4-羥基L-脯氨酸57用氯化氫甲醇回流處理幾小時，然后蒸發(fā)，將由此得到的甲酯鹽酸化物用過量的甲苯磺酰氯/吡啶在室溫下處理兩天，得到產(chǎn)物58。用弱酸水溶液中和吡啶，并且用有機溶劑如EtOAc萃取產(chǎn)物，以分離化合物58。產(chǎn)物58可以通過結(jié)晶、快速色譜而純化，或者更優(yōu)選不純化用于隨后的步驟中。
58與過量疊氮化鈉在DMF中的飽和溶液，在室溫下反應15天，得到化合物59。反應混合物用水稀釋，然后用有機溶劑如EtOAc萃取，分離化合物59。產(chǎn)物59可以通過結(jié)晶、快速色譜而純化，更優(yōu)選不純化用于隨后的步驟中。
化合物59用氫氧化鈉在水和甲醇的混合物中處理，從而將甲酯水解并產(chǎn)生羧酸；羧酸通過酸化分離，用有機溶劑如EtOAc萃取。羧酸用L-酪氨酸叔丁酯[H-Tyr(H)-OtBu]、EDAC、HOBt和Et3N/DMF處理，得到二肽，jiang二肽用水稀釋并且用有機溶劑如EtOAc萃取。二肽用ClCONMe2、Et3N和DMAP/DCM回流處理24小時，得到氨基甲酸酯60；該氨基甲酸酯用下述方式分離用EtOAc稀釋，然后用弱酸和弱堿水溶液沖洗，然后蒸發(fā)。化合物60通過快速色譜嚴格純化。
最后，將60的甲醇溶液與Pd/C催化劑在氫氣中振蕩，制備化合物61。過濾并蒸發(fā)以去除催化劑分離產(chǎn)物61。
將式II的化合物與聚合物偶聯(lián)(任選地與帶有分支臂的中心分子相連接)的其它方法在本領(lǐng)域中是公知的。
適用于與式II的化合物共軛的其它聚合物包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、葡聚糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯馬來酸酐(SMA)、聚-N-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚馬來酸酐(DIVEMA)。作為例子，PVP、PAAm和PDAAm可以通過在自由基聚合過程中引入共聚單體而被官能化。PVA和葡聚糖都含有適合共軛的伯醇羥基(OH)。這些生物聚合物的合成方法和將其與生物材料共軛的方法在本領(lǐng)域中是公知的(參見，例如，已公開的美國專利申請第20040043030號；美國專利第5,177,059號；美國專利第6,716,821號；美國專利第5,824,701號；美國專利第6,664,331號；美國專利第5,880,131號；Kameda，Y.等人，Biomaterials 253259-3266，2004；Thanou，M.等人，Current Opinion in Investigational Drugs 4(6)701-709，2003；Veronese，F(xiàn).M.等人，II Farmaco 54497-516，1999，所有文獻均在此整體引入作為參考文獻)。
藥學制劑當用作藥品時，本發(fā)明的共軛物通常以藥學組合物的形式給藥。這些共軛物可以通過多種途徑給藥，包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、舌下、眼部或吸入給藥(包括鼻或口吸入)。優(yōu)選的給藥途徑包括皮下、靜脈內(nèi)和吸入。這些組合物可以通過制藥領(lǐng)域中公知的方式制備，并且包括至少一種共軛物。
本發(fā)明也提供了包括根據(jù)本發(fā)明的共軛物的藥學組合物，例如，式I的共軛物與一種作為α4β7抑制劑的獨立化合物組合在一起。這些組合物還包括藥學可接受的載體或賦形劑，并且可以如本文所討論地給藥。
本發(fā)明還包括含有一種或多種作為活性成分的式I的共軛物和藥學可接受的載體的藥學組合物。在制備本發(fā)明的組合物的過程中，活性成分通常與賦形劑相混合、用賦形劑稀釋或封入載體內(nèi)(該載體可以是在無菌注射溶液和無菌包裝的粉末中)。對于皮下給藥，簡單的載體可以包括水、Na2HPO4、NaH2PO4和NaCl的無菌水溶液，各種成分的比例提供了等滲條件和生理學可接受的pH，其被稱為PBS或磷酸鹽緩沖鹽水。另一種選擇是將化合物在無菌等滲鹽水中給藥，如果需要可以將鹽水調(diào)節(jié)至生理pH。其它選擇對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，包括能夠影響吸收速率和接觸總量的混合溶劑系統(tǒng)。這些選擇包括含有甘油、聚乙二醇400和棉籽油的混合溶劑系統(tǒng)。有可能使用的還有乙醇、N，N′-二甲基乙酰胺、丙二醇和苯甲醇，它們都可以用于提高通透性和高滲性。
在制備制劑的過程中，可能需要將活性化合物磨碎，以便使其在與其它成分混合之前得到合適的粒度。如果活性化合物基本上是不溶的，通常被磨碎至小于200目的粒度。如果活性化合物基本上是水溶性的，粒度通常通過研磨而被調(diào)節(jié)至例如大約40目，以便使其在制劑中基本上均勻分布。
合適的賦形劑的一些例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。制劑還可以包括潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鎂和礦物油；濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑，例如甲基苯甲酸鹽和丙基羥基苯甲酸鹽；甜味劑；以及調(diào)味劑。本發(fā)明的組合物可以調(diào)制為，通過使用本領(lǐng)域已知的方法對患者給藥后，活性成分快速地、持續(xù)地或緩慢地釋放的劑型。
通過皮下或靜脈給予治療劑的制劑在制藥工業(yè)中是公知的。除了組合物中的治療劑是可溶性的之外，皮下或靜脈制劑還應該具有某些特性。例如，該劑型應該能促進活性成分的總體穩(wěn)定性，制劑的制造還應該在成本上是經(jīng)濟的。所有這些因素最終決定了靜脈制劑的總體上的成功和實用性。
可以包含在本發(fā)明化合物的藥學制劑中的其它輔助添加劑如下溶劑乙醇、甘油、丙二醇；穩(wěn)定劑EDTA(乙二胺四乙酸)、檸檬酸；抗菌性防腐劑苯甲醇、對羥基苯甲酸甲酯；緩沖劑檸檬酸/檸檬酸鈉、酒石酸氫鉀、酒石酸氫鈉、乙酸/乙酸鈉、馬來酸/馬來酸鈉、鄰苯二甲酸氫鈉、磷酸/磷酸二氫鉀、磷酸/磷酸氫二鈉；以及滲透壓調(diào)節(jié)劑氯化鈉、甘露醇、右旋糖。
需要緩沖液的存在以便將水溶液的pH保持在大約4至大約8的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在大約4至大約6的范圍內(nèi)。緩沖系統(tǒng)通常是弱酸及其可溶性鹽的混合物，例如檸檬酸鈉/檸檬酸；或者二元酸的單陽離子或雙陽離子鹽，例如，酒石酸氫鉀、酒石酸氫鈉、磷酸/磷酸二氫鉀和磷酸/磷酸氫二鈉。
所使用的緩沖系統(tǒng)的量取決于(1)所需的pH；和(2)藥物的量。通常使用的緩沖液量為，制劑中緩沖液阿倫膦酸鹽(alendronate)(其中緩沖液的摩爾數(shù)取自合并的緩沖液成分的摩爾數(shù)，例如檸檬酸鈉和檸檬酸)的摩爾比例為0.5∶1至50∶1，以便將pH保持在4至8的范圍內(nèi)，通常所使用的緩沖液(合并的)與存在的藥物的摩爾比例為1∶1至10∶1。
在本發(fā)明中，有用的緩沖液是檸檬酸鈉/檸檬酸，其含量范圍為每毫升5-50毫克檸檬酸鈉/每毫升1-15毫克檸檬酸，這樣的含量足以將組合物水溶液的pH保持在4-6。
緩沖劑的存在也可以防止藥物與可溶性金屬離子(例如，Ca、Mg、Fe、Al、Ba)形成可溶性金屬復合體而沉淀，這些可溶性金屬離子可能是從玻璃容器中或橡皮塞中析出來的，或者存在于普通的自來水中。這種試劑的作用可能是藥物的競爭絡合劑并且產(chǎn)生可溶性金屬復合體，由此生成不需要的微粒。
另外，可能需要試劑(例如，量為大約1-8mg/ml的氯化鈉)以便將緊張性(tonicity)調(diào)整至與人血液相同的數(shù)值，以避免在靜脈制劑給藥過程中發(fā)生紅細胞腫脹或皺縮，從而避免產(chǎn)生不良反應如惡心或腹瀉以及可能發(fā)生的相關(guān)血液疾病。通常制劑的緊張性與人血液相匹配，其范圍是282至288mOsm/kg，通常為285mOsm/kg，這相當于0.9％氯化鈉溶液的滲透壓。
靜脈制劑可以通過直接靜脈內(nèi)注射、靜脈快速滴注來給藥，或者通過加入到合適的輸注溶液中而通過輸注給藥，例如0.9％氯化鈉注射液或其它相容的輸注溶液。
組合物可以單位劑型而配制，每單位劑量含有大約5至100mg活性成分，更普遍的是大約10至大約30mg活性成分。術(shù)語“單位劑量形式”指的是適合用作人類受試者和其它哺乳動物的單位劑量的物理上的單獨單位，每單位含有預定數(shù)量的計算能產(chǎn)生所需治療效應的活性原料以及合適的藥學賦形劑。
共軛物在寬的劑量范圍內(nèi)都是有效的，并且通常以藥學有效量給藥。但要理解的是，實際給予的共軛物的數(shù)量將由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)情況來確定，這些情況包括所處理的病情、選擇的給藥途徑、給予的實際化合物、每一個患者的年齡、體重和反應、患者癥狀的嚴重性等。
為制備固體組合物如片劑，主要的活性成分與藥學賦形劑混合形成固體預制劑組合物(solid preformalation composition)，該組合物含有本發(fā)明化合物的均勻混合物。當提到這些預制劑組合物是均勻的時，其含義是活性成分均勻地分散在組合物中，這樣組合物可以容易地再分為同樣有效的單位劑量形式如片劑、丸劑和膠囊。然后，該固體預制劑被再分成上述類型的單位劑量形式，該劑型含有例如0.1至大約500毫克的本發(fā)明的活性成分。
本發(fā)明的片劑或丸劑可以包上糖衣或者制成復合藥物以獲得具有長效優(yōu)勢的劑型。例如，片劑或丸劑可以包括內(nèi)用和外用組分，后者的形式是在前者上包上糖衣。兩種組分可以用腸溶層分隔，其作用是抵抗在胃內(nèi)的崩解，從而使內(nèi)用組分完整地進入十二指腸或延緩釋放。多種材料可以用作這種腸溶層或包衣，這些材料包括多種聚合酸、以及聚合酸與例如蟲膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素的材料的混合物。
可摻入本發(fā)明的新型組合物以口服給藥或注射給藥的液體劑型包括具有合適口味的糖漿水溶液、水性或油性懸液、以及具有食用油如棉籽油、椰子油或花生油的已調(diào)味乳劑、以及酏劑和類似的藥學載體。
吸入或吹入的組合物包括在藥學可接受的水性或有機溶劑或其混合物中的溶液和懸液、以及粉末。液體或固體組合物可以含有前述合適的藥學可接受的賦形劑。優(yōu)選，組合物經(jīng)口或鼻吸入途徑給藥發(fā)揮局部或全身效應。優(yōu)選在藥學可接受的溶劑中的組合物可以通過使用惰性氣氛噴霧給藥。噴霧溶液可以從噴霧裝置直接吸入，或者噴霧裝置可以被接在面罩通氣口或間歇正壓呼吸機上。溶液、懸液或粉末組合物可以從裝置給藥，優(yōu)選經(jīng)口或經(jīng)鼻，該裝置以適當方式對制劑進行傳遞。為進行吸入或吹入給藥，優(yōu)選共軛物的總分子量在大約10,000道爾頓至70,000道爾頓之間，更優(yōu)選大約20,000道爾頓至45,000道爾頓之間。
聚合物共軛物如上配制和給藥的本發(fā)明的化合物是聚合物共軛物。加入的聚合物共軛物相對于非共軛的聚合物具有很多優(yōu)勢，例如溶解性和體內(nèi)穩(wěn)定性提高。正是如此，可以使用單個聚合物分子與本發(fā)明的化合物共軛，盡管也考慮到通常通過載體還可以連接一個以上的聚合物分子。本發(fā)明的共軛化合物發(fā)現(xiàn)可以在體內(nèi)以及非體內(nèi)中的應用。另外，要認識到共軛聚合物可以使用其它基團、部分或共軛物種，如適合于終端應用。其例子是，在一些應用中使聚合物官能化以使其具有反應性，使其能夠與式II的化合物共軛，以增強被共軛的總物質(zhì)的多種特性或特征，這樣是有好處的。因此，聚合物可以含有任何官能團、重復基團、連接或其它成分結(jié)構(gòu)，它們不會影響本發(fā)明的共軛化合物的預期效力。
可用于達到這些所需特征的示例性的聚合物如前所述和PCT WO01/54690(Zheng等人)中所述，該專利在此全部引入作為參考文獻。聚合物可以與本發(fā)明的化合物相連接(優(yōu)選經(jīng)過連接子部分)形成穩(wěn)定的鍵，該鍵明顯不會被人類的酶切斷。通常對于“明顯”不會被切斷的鍵來說，需要將聚合物和該聚合物所連接的本發(fā)明化合物相連接的鍵在24小時內(nèi)被切斷的比例不超過20％，可以通過本領(lǐng)域中標準的技術(shù)測定，這些技術(shù)包括但不限于高壓液相色譜(HPLC)。
通常，本發(fā)明的化合物含有至少兩種與聚合物相連接的式II的化合物。最終的數(shù)量是在反應程度最大、同時產(chǎn)物的非特異性修飾最小之間達到平衡，規(guī)定化學實體要保持最佳的活性，同時優(yōu)化本發(fā)明的化合物的半衰期。優(yōu)選，保留了本發(fā)明化合物至少大約50％的生物學活性，更優(yōu)選保留100％的活性。
如上所述，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，在所關(guān)注的聚合物系統(tǒng)中有利地加入C2-C4烷基聚烷撐二醇的聚烷撐二醇殘基，優(yōu)選聚乙二醇(PEG)或這些二醇的聚(氧)烷撐二醇殘基。因此，本發(fā)明化合物所連接的聚合物可以是聚乙二醇(PEG)的均聚物或是聚氧乙烯多元醇，條件是所有情況下聚合物在室溫中都可溶解在水中。這些聚合物的非限制性例子包括聚氧化烯均聚物，例如PEG或聚丙二醇、聚氧乙烯二醇、其共聚物和嵌段共聚物，條件是保持嵌段共聚物的水溶性。
聚氧乙烯多元醇的例子包括但不限于聚氧乙烯丙三醇、聚氧乙烯山梨糖醇、聚氧乙烯葡萄糖或類似物。聚氧乙烯丙三醇的甘油主鏈與天然的主鏈是相同的，例如動物和人類的甘油單酯、雙酯和三酯中的主鏈。因此，這種分支在體內(nèi)不一定會被認為是外源物質(zhì)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員要理解的是，前面的列舉僅是說明性的，并且可以考慮具有本文所述性質(zhì)的所有聚合物材料。聚合物不需要具有特殊的分子量，但優(yōu)選分子量在大約100至100,000之間，優(yōu)選大約10,000至80,000之間；更優(yōu)選大約20,000至大約70,000之間。尤其是，大小為20,000或更大的化合物在防止由于腎臟過濾而引起的產(chǎn)物損失方面是最有效的。
PEG衍生物指的是其中聚乙二醇本身上的一個或兩個末端羥基被修飾的聚乙二醇聚合物。合適的修飾的例子包括用可選的官能團替換一個或兩個羥基，該官能團可以用低分子量的配基或其它大分子或聚合物來保護或不保護。通過將聚乙二醇與包括互補反應性官能團的化合物反應，可以完成聚乙二醇末端羥基的修飾，該互補反應性官能團包括能與聚乙二醇羥基發(fā)生反應的官能團。本發(fā)明的化合物的PEG衍生物可以含有一個或多個通過連接基團與其共價連接的聚乙二醇(PEG)取代基。
下述制劑實施方式舉例說明了本發(fā)明的藥學組合物。
制劑實施例1制備含有下列成分的硬明膠膠囊成分質(zhì)量(mg/膠囊)活性成分30.0淀粉305.0硬脂酸鎂5.0上述成分混合在一起，質(zhì)量為340mg，裝入硬明膠膠囊中。
制劑實施例2使用下述成分制備片劑成分質(zhì)量(mg/片)活性成分25.0微晶纖維素 200.0膠體二氧化硅10.0硬脂酸 5.0這些成分混合、壓片成為片劑，每片重240mg。
制劑實施例3制備含有下列成分的干粉吸入劑成分重量％活性成分5乳糖95將活性成分與乳糖混合，混合物加入至干粉吸入裝置中。
制劑實施例4如下制備每片含有30mg活性成分的片劑成分質(zhì)量(mg/片)活性成分30.0mg淀粉45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮 4.0mg(10％無菌水溶液)羧甲基淀粉鈉4.5mg硬脂酸鎂0.5mg滑石1.0mg總計120mg活性成分、淀粉和纖維素通過20目U.S.篩并充分混合。聚乙烯吡咯烷酮的溶液與所得到的粉末混合，然后通過16目U.S.篩。得到的顆粒在50℃至60℃進行干燥，并通過16目U.S.篩。然后，將前面已通過30目U.S.篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石加入至顆粒中，混合后，在壓片機上壓片，得到每片重120mg的片劑。
制劑實施例5如下制備每粒含有40mg藥物的膠囊成分質(zhì)量(mg/膠囊)活性成分40.0mg淀粉109.0mg硬脂酸鎂1.0mg總計150.0mg將活性成分、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，質(zhì)量為150mg，裝入硬明膠膠囊中。
制劑實施例6如下制備每粒含25mg活性成分的栓劑成分數(shù)量活性成分25mg飽和的脂肪酸甘油酯 達到2,000mg活性成分通過60目U.S.篩，懸浮在飽和的脂肪酸甘油酯(之前需要少量的熱量將其融化)中。然后混合物倒入至標稱2.0g容量的栓劑模中冷卻。
制劑實施例7如下制備每劑含有50mg藥物/5.0ml劑量的懸液成分數(shù)量活性成分50.0mg黃原膠 4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)微晶纖維素鈉(89％) 50.0mg蔗糖1.75g苯甲酸鈉10.0mg調(diào)味劑和顏料適量純水至5.0ml將活性成分、蔗糖和黃原膠混合，通過10目U.S.篩，然后與之前在水中制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的溶液混合。苯甲酸鈉、調(diào)味劑和顏料用一些水稀釋并攪拌。然后加入足夠的水，得到需要的容量。
制劑實施例8成分質(zhì)量(mg/膠囊)活性成分15.0mg
淀粉407.0mg硬脂酸鎂3.0mg總計425.0mg將活性成分、淀粉和硬脂酸鎂混合，通過20目U.S.篩，以425.0mg的質(zhì)量裝入硬明膠膠囊中。
制劑實施例9如下制備皮下制劑成分質(zhì)量活性成分50mg.mL mg磷酸鹽緩沖鹽水 1.0ml制劑實施例10如下制備局部制劑成分質(zhì)量活性成分1-10g乳化蠟 30g液體石蠟20g白凡士林100g將白凡士林加熱至熔化。加入液體石蠟和乳化蠟，攪拌至溶解。加入活性成分并繼續(xù)攪拌直至完全分散。然后混合物冷卻至成為固體。
制劑實施例11如下制備靜脈內(nèi)制劑成分質(zhì)量活性成分250mg等滲鹽水100ml
本發(fā)明的方法中使用的另一種優(yōu)選制劑使用了透皮給藥裝置(“貼片”)。這種透皮貼片可用來將本發(fā)明的化合物以可控的數(shù)量連續(xù)或非連續(xù)地輸入。用于遞送藥劑的透皮貼片的構(gòu)造和應用在本領(lǐng)域中是公知的。參見，例如，1991年7月11日公開的美國專利第5,023,252號，該專利在此引入作為參考文獻。這種貼片的構(gòu)造可以被制成連續(xù)、脈沖式或根據(jù)需要的遞送藥劑。
經(jīng)常需要或必須將藥物組合物直接或間接地導入進腦中。直接技術(shù)通常涉及將藥物遞送導管放置進接受者的腦室系統(tǒng)中以繞過血腦屏障。這類用于將生物學因子轉(zhuǎn)運至機體的特殊解剖部位的可植入遞送系統(tǒng)的其中一種如美國專利第5,011,472號所述，該專利在此引入作為參考文獻。
間接技術(shù)，通常優(yōu)選涉及通過將親水性藥物轉(zhuǎn)化為脂溶性藥物對組合物進行配制，從而提供藥物潛伏化。潛伏化通常是通過下述方法來達到的阻塞藥物上存在的羥基、羰基、硫酸根和伯胺基團，從而使藥物具有更大的脂溶性，使其能夠通過血腦屏障進行轉(zhuǎn)運?；蛘撸梢酝ㄟ^動脈內(nèi)輸注高滲溶液來增強親水性藥物的遞送，這種方法可暫時地使血腦屏障開放。
適用于本發(fā)明的其它劑型可見Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA，第17版(1985)。
如上所述，本文所述的化合物適用于上述多種藥物遞送系統(tǒng)中。另外，為延長給藥的化合物在體內(nèi)的血清半衰期，化合物可以包上糖衣、導入脂質(zhì)體腔內(nèi)、制備為膠體、或者可以使用其它常規(guī)技術(shù)使化合物的血清半衰期延長。有多種方法可以制備脂質(zhì)體，如Szoka等人的美國專利第4,235,871號、第4,501,728號和第4,837,028號中所述，這些專利均在此引入作為參考文獻。
工業(yè)應用性本發(fā)明的共軛物是α4β1(VLA-4)拮抗劑。一些共軛物也可以具有對α4β7整合素的部分親和性，使它們成為α4整合素的混合抑制劑。與非共軛的化合物相比，共軛物在體內(nèi)的保留時間延長。共軛物在體內(nèi)保留時間的延長使需要的藥物量降低，不良反應更少，并且發(fā)生毒性的可能性更小。另外，藥物制劑對患者給藥的次數(shù)較少，而達到相似或更大的治療效應。
通過抑制α4β1或α4β7與細胞受體如VCAM-1、纖維連接蛋白和MadCAM的結(jié)合，本發(fā)明的共軛物在體內(nèi)對所介導的白細胞與內(nèi)皮細胞粘附的抑制作用增強。優(yōu)選，本發(fā)明的共軛物可以通過，例如輸注或皮下注射或口服給藥，治療由α4β1和/或α4β7介導的疾病(通常稱為白細胞粘附)。本發(fā)明的共軛物可以用來治療多種炎性腦病，尤其是其中內(nèi)皮細胞/白細胞粘附機制引起健康腦組織破壞的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。因此，本發(fā)明的共軛物可以用于，例如，治療實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)、多發(fā)性硬化癥(MS)、腦膜炎和腦炎。
本發(fā)明的共軛物也可以用于治療其它器官系統(tǒng)中因組織損傷引起的功能障礙和疾病，其中組織損傷也是經(jīng)粘附機制導致白細胞遷移或活化而引起的。在哺乳動物患者中這些疾病的例子是炎性疾病如哮喘、阿耳茨海姆氏病、動脈粥樣硬化、AIDS癡呆癥、糖尿病(包括急性青少年型糖尿病)、炎性腸病(包括潰瘍性結(jié)腸炎和克隆氏病)、類風濕性關(guān)節(jié)炎、組織移植、腫瘤轉(zhuǎn)移、中風、以及其它腦外傷、腎炎、視網(wǎng)膜炎、異位性皮炎、銀屑病、心肌缺血和白細胞介導的急性肺損傷(如發(fā)生在成人呼吸窘迫綜合征中的急性肺損傷)。
使用本發(fā)明的共軛物可治療的其它疾病還包括結(jié)節(jié)性紅斑、變應性結(jié)膜炎、視神經(jīng)炎、眼葡萄膜炎、變應性鼻炎、強制性脊柱炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、血管炎、萊特爾氏綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、進行性全身性硬化癥、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、Wegner氏肉芽腫、主動脈炎、類肉瘤病、淋巴細胞減少癥、顳動脈炎、心包炎、心肌炎、充血性心力衰竭、結(jié)節(jié)性多動脈炎、高敏反應綜合征、變態(tài)反應、嗜酸細胞過多綜合征、變應性肉芽腫性血管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性肺炎、慢性活動性肝炎、間質(zhì)性膀胱炎、自身免疫性內(nèi)分泌功能障礙、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性再生障礙性貧血、慢性遷延性肝炎和甲狀腺炎。
本發(fā)明也提供了治療患者的至少部分由α4整合素介導的白細胞粘附引起或加重的疾病的方法，該方法包括將有效量的本發(fā)明共軛物例如式I的共軛物與有效量的作為α4β7抑制劑的獨立化合物共同給藥。共同給藥可同時進行或依次進行。例如，本發(fā)明的共軛物的給藥可以比α4β7抑制劑的給藥提前幾分鐘或幾小時?；蛘?，α4β7抑制劑在本發(fā)明的共軛物之前給藥。
證明有效治療炎性反應的合適體內(nèi)模型包括EAE(實驗性自身免疫性腦脊髓炎)的小鼠、大鼠、豚鼠或靈長類動物模型以及其它依賴于α4整合素的炎癥模型。
炎性腸病是兩種類似的疾病克隆氏病和潰瘍性結(jié)腸炎的總稱。克隆氏病是一種原發(fā)性的慢性潰瘍性縮窄性炎性疾病，其特征是邊界非常明確，一般累及腸壁所有層次的透壁肉芽腫性炎性反應。從口至肛門胃腸道的所有節(jié)段都可能被累及，盡管該病最常見的是侵犯回腸末端和/或結(jié)腸。潰瘍性結(jié)腸炎是主要局限在結(jié)腸粘膜和粘膜下層的炎性反應。在炎性腸病病變內(nèi)有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，這些細胞可引起炎性損傷。
哮喘的特征是氣管支氣管樹對多種刺激的反應性增加，引起支氣管氣道的發(fā)作性收縮。刺激物引起多種炎癥介質(zhì)從IgE包被的肥大細胞中釋放，這些介質(zhì)包括組織胺、嗜酸性和嗜中性細胞化學趨化因子、白三烯、前列腺素和血小板活化因子。這些因子的釋放使嗜酸性粒細胞和中性粒細胞歸巢，引起炎性損傷。
動脈粥樣硬化是一種動脈疾病(例如，冠狀動脈、頸動脈、主動脈和髂動脈)?；静∽儯鄻影呤怯蓛?nèi)膜內(nèi)隆起的局灶斑塊組成的，該斑塊有一個脂質(zhì)核心和外被的纖維帽。粥樣斑會阻斷動脈血流，使受累的動脈血流減少。心肌和腦梗塞是這種疾病的主要結(jié)局。巨噬細胞和白細胞被吸引至粥樣斑，并引起炎性損傷。
類風濕性關(guān)節(jié)炎是一種慢性、復發(fā)性炎性疾病，主要引起關(guān)節(jié)損害和破壞。類風濕性關(guān)節(jié)炎通常首先影響四肢的小關(guān)節(jié)，但然后可累及腕關(guān)節(jié)、皺關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)。關(guān)節(jié)炎是由滑膜細胞與從循環(huán)中浸潤至關(guān)節(jié)滑膜襯里中的白細胞相互作用引起的。參見，例如，Paul，Immunology(3d ed.，Raven Press，1993)。
本發(fā)明的共軛物的另一適應癥是治療由VLA-4介導的器官或移植物排斥。最近幾年，對于組織和器官如皮膚、腎臟、肝臟、肺、胰腺和骨髓移植的外科手術(shù)技術(shù)效率已經(jīng)得到了相當大的提高?？赡苤饕耐怀鰡栴}是缺少滿意的藥物誘導受者對移植的同種異體移植物或器官的免疫耐受。當同種異體細胞或器官被移植進宿主體內(nèi)(即，供體和受體是相同種屬的不同個體)時，宿主免疫系統(tǒng)可能會對移植物中的外來抗原發(fā)動免疫反應(宿主抗移植物病)，從而引起移植組織的破壞。CD8+細胞、CD4細胞和單核細胞都參與了移植組織的排斥反應。本發(fā)明的共軛物能與α4整合素結(jié)合，尤其可以用于阻斷同種異體抗原誘發(fā)的受體體內(nèi)的免疫反應，因而阻止了這些細胞參與破壞移植組織或器官。參見，例如Paul等人，Transplant International 9，420-425(1996)；Georczynski等人，Immunology 87，573-580(1996)；Georcyznski等人，Transplant.Immunol.3，55-61(1995)；Yang等人，Transplantation 60，71-76(1995)；Anderson等人，APMIS 102，23-27(1994)。
本發(fā)明的可以與VLA-4結(jié)合的共軛物的一種相關(guān)用途是調(diào)節(jié)參與“移植物抗宿主”病的免疫反應。參見，例如Schlegel等人，J.Immunol.155，3856-3865(1995)。GVHD是一種當免疫活性細胞轉(zhuǎn)移至同種異體的受體體內(nèi)時發(fā)生的有可能致死的疾病。在這種情況下，供體的免疫活性細胞可能會攻擊受體內(nèi)的組織。皮膚組織、腸上皮和肝臟都是經(jīng)常被攻擊的靶標，在GVHD過程中可能被破壞。當免疫組織被移植時，如骨髓移植，該疾病表現(xiàn)出尤其嚴重的問題；但也有報道在其它情況下，包括心臟和肝臟移植物中，GVHD不太嚴重。本發(fā)明的治療藥物尤其可以用于阻斷供體T細胞的活化，因而干擾了它們?nèi)芙馑拗靼屑毎哪芰Α?br> 本發(fā)明的制劑尤其可以用于治療多發(fā)性硬化癥、類風濕性關(guān)節(jié)炎和哮喘。
本發(fā)明的共軛物的進一步用途是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。已有報道幾種腫瘤細胞可表達VLA-4，與VLA-4結(jié)合的化合物可阻斷這些細胞與內(nèi)皮細胞的粘附。Steinback等人，Urol.Res.23，175-83(1995)；Orosz等人，Int.J.Cancer 60，867-71(1995)；Freedman等人，Leuk.Lymphoma13，47-52(1994)；Okahara等人，Cancer Res.54，3233-6(1994)。
具有所需生物學活性的化合物可以根據(jù)需要被修飾以提供所需的特性，如藥學特性提高(例如，體內(nèi)穩(wěn)定性，生物利用度)，或在診斷學應用中被檢測到的能力。穩(wěn)定性可以多種方式進行測定，如通過測定在與肽酶或人血漿或血清孵育過程中蛋白的半衰期。許多這種蛋白穩(wěn)定性測定法都已有描述(見，例如Verhoef等人，Eur.J.Drug Metab.Pharmacokinet，1990，15(2)83-93)。
本發(fā)明的共軛物的另一種用途是治療多發(fā)性硬化癥。多發(fā)性硬化癥是一種進行性神經(jīng)自身免疫性疾病，估計在美國有250,000至350,000個患者。多發(fā)性硬化癥被認為是特異性自身免疫反應的結(jié)果，其中某些白細胞攻擊和引起覆蓋在神經(jīng)纖維外面的絕緣鞘，髓鞘的破壞。在多發(fā)性硬化癥的動物模型中，針對VLA-4的鼠單克隆抗體已經(jīng)顯示能阻斷白細胞與內(nèi)皮細胞的粘附，并因此阻止中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和隨后動物的癱瘓16。
本發(fā)明的藥學組合物適用于多種藥物遞送系統(tǒng)中。用于本發(fā)明中的合適劑型可見Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mace PublishingCompany，Philadelphia，PA，第17版，(1985)。
給予患者的數(shù)量將取決于給藥的物質(zhì)、給藥的目的(例如預防或治療)、患者的狀態(tài)、給藥的方式等。在治療性應用中，組合物可以以足以治愈或至少部分解除疾病及其并發(fā)癥的癥狀的量給予已經(jīng)患有疾病的患者。足以達到此目的的量稱為“治療有效劑量”。有效用于此用途的量取決于所治療的病情以及主治醫(yī)生根據(jù)一些因素所做的判斷，這些因素例如炎癥的嚴重性、患者的年齡、體重和一般狀況和類似因素。
給予患者的組合物可以是以上述藥學組合物的形式。這些組合物可以通過常規(guī)滅菌技術(shù)進行滅菌，或者可以被無菌過濾。得到的水溶液可以被包裝備用；或被凍干，并且在給藥之前將凍干制劑與無菌水性載體混合。
本發(fā)明的共軛物的治療劑量將根據(jù)，例如，所治療的特殊用途、共軛物的給藥方式、患者的健康狀況和病情以及處方醫(yī)生的判斷進行變化。例如，對于靜脈內(nèi)給藥，劑量的范圍一般在大約20μg至大約2000μg/kg體重，優(yōu)選大約20μg至大約500μg/kg體重，更優(yōu)選大約100μg至大約300μg/kg體重。鼻內(nèi)給藥的合適劑量范圍通常在大約0.1pg至1mg/kg體重。有效劑量可以從來自體外或動物模型檢測系統(tǒng)的劑量反應曲線中推知。
本發(fā)明的共軛物也能結(jié)合或拮抗α6β1、α9β1、α4β7、αdβ2、αeβ7整合素的作用(盡管α4β1和α9β1在本發(fā)明中是優(yōu)選的)。因此，本發(fā)明的共軛物也可以用于預防或逆轉(zhuǎn)由這些整合素與其相應配體結(jié)合誘發(fā)的癥狀、功能紊亂或疾病。
例如，1998年12月3日公開的國際申請第WO 98/53817號(該申請的公開內(nèi)容在此全部引入作為參考文獻)和本文所引用的參考文獻描述了由α4β7介導的疾病。該參考文獻也描述了測定拮抗α4β7依賴性結(jié)合VCAM-1g融合蛋白的測定方法。
另外，與αdβ2、αeβ7整合素結(jié)合的化合物可特別用于治療哮喘和相關(guān)的肺部疾病。參見，例如M.H.Grayson等人，J.Exp.Med.1998，788(11)2187-2191。與αeβ7整合素結(jié)合的化合物也可以用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(參見，例如，M.Pang等人，Arthritis Rheum.1998，41(8)，1456-1463)；克隆氏病、潰瘍性結(jié)腸炎和炎性腸病(IBD)(參見，例如，D.Elewaut等人，Scand J.Gastroenterol 1998，33(7)743-748)；干燥綜合征(見，例如U.Kroneld等人，Scand J.Gastroenterol 1998，27(3)，215-218)；以及類風濕性關(guān)節(jié)炎(見，例如Scand J.Gastroenterol1996，44(3)，293-298)。而且，與α6β1結(jié)合的化合物可用于防止受精(參見，例如H.Chen等人，Chem.Biol.1999，6，1-10)。
在本發(fā)明另一方面，在例如多發(fā)性硬化癥的情況下，本文所述的共軛物和組合物可以用于抑制免疫細胞從血流中遷移至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，或者遷移至引起炎癥誘發(fā)破壞髓鞘的區(qū)域。優(yōu)選這些試劑抑制免疫細胞遷移的方式是抑制脫髓鞘作用，并可進一步促進髓鞘再生。對于先天性代謝疾病，這些試劑也可防止中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘和促進髓鞘再生，在這些疾病中，浸潤的免疫細胞主要在CNS中影響髓鞘的發(fā)育。當這些試劑給予由脫髓鞘疾病或病患誘發(fā)癱瘓的受者時，優(yōu)選也可使癱瘓復原。
包括由本文所公開的組合物、共軛物和方法治療的疾病中的炎性疾病通常包括與脫髓鞘相關(guān)的疾病。在組織學上，髓鞘異常是脫髓鞘或髓鞘形成障礙。脫髓鞘表示髓鞘的破壞。髓鞘形成障礙指的是由于少突膠質(zhì)細胞功能障礙引起的髓鞘形成或維持缺陷。優(yōu)選本文所公開的組合物和方法被考慮用來治療與脫髓鞘有關(guān)的疾病和病患，并輔助髓鞘再生?？紤]治療的其它疾病或病患包括腦膜炎、腦炎和脊髓損傷以及通常由于炎性反應誘發(fā)脫髓鞘的病患。本文所公開的共軛物、組合物和方法并不針對其中，例如是遺傳缺陷引起的不正常的髓鞘形成，例如髓鞘形成障礙的疾病和病患。
本文所公開的組合物、共軛物和雞尾酒化合物可考慮用于治療與脫髓鞘有關(guān)的病患和疾病。涉及脫髓鞘的疾病和病患包括但不限于多發(fā)性硬化癥、先天性代謝性疾病(例如，苯丙酮尿癥、泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)、高歇氏病(Gaucher′s disease)、赫爾勒氏綜合征(Hurler′s syndrome)、克臘比氏病(Krabbe′s disease)和其它腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)、具有異常髓鞘形成的神經(jīng)病變(例如，Guillain Barre、慢性免疫性脫髓鞘性多神經(jīng)病(CIDP)、多灶性CIDP、抗-MAG綜合征、GALOP綜合征、抗硫脂抗體綜合征、抗-GM2抗體綜合征、POEMS綜合征、神經(jīng)束膜炎、IgM抗-GD1b抗體綜合征)、藥物相關(guān)性脫髓鞘(例如，由氯喹、FK506、哌克昔林、普魯卡因胺和齊美定給藥引起)、其它遺傳性脫髓鞘疾病(例如，糖類缺陷性糖蛋白、科凱恩綜合征(Cockayne′s syndrome)、先天性髓鞘發(fā)育不良、先天性肌營養(yǎng)不良癥、法勃氏病(Farber′s disease)、Marinesco-Sjgren綜合征、異染性腦白質(zhì)不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、雷夫敘姆病(Refsum disease)、朊病毒相關(guān)疾病和Salla病)和其它脫髓鞘病患(例如，腦膜炎、腦炎或脊髓損傷)或疾病。
有許多疾病模型可用來在體內(nèi)研究這些疾病。例如，動物模型包括但不限于表III

多發(fā)性硬化癥最常見的脫髓鞘疾病是多發(fā)性硬化癥，但許多其它代謝性和炎性疾病能引起缺陷性或異常的髓鞘形成。MS是一種慢性神經(jīng)疾病，出現(xiàn)在早期成年期，在大多數(shù)病例會進展成為明顯的殘疾。單在美國就有大約350,000名MS病例。除了創(chuàng)傷以外，MS是成人早期至中期神經(jīng)殘疾的最常見病因。
MS的原因仍然需要進一步被確定。MS的特征是慢性炎癥、脫髓鞘和神經(jīng)膠質(zhì)增生(瘢痕形成)。脫髓鞘可引起軸突傳導的負性或正性作用。正性傳導異常包括軸突傳導延緩、可變的傳導阻滯(在有高頻但非低頻沖動序列存在時出現(xiàn))或完全傳導阻滯。正性傳導異常包括自發(fā)性或在機械應激后產(chǎn)生異位性沖動和在脫髓鞘的軸突之間產(chǎn)生異常的“通話”。
已經(jīng)觀察到T細胞對髓磷脂蛋白(髓磷脂堿性蛋白(MBP)或髓鞘蛋白脂蛋白(PLP))的反應性介導了實驗性變應性腦脊髓炎中的CNS炎癥。也已經(jīng)觀察到患者CNS免疫球蛋白(Ig)的水平升高。進一步有可能在MS中觀察到的一些組織損傷是由活化T細胞、巨噬細胞或星形膠質(zhì)細胞的細胞因子產(chǎn)物介導的。
目前，診斷有MS的患者80％在疾病發(fā)作后可生存20年。MS的治療包括(1)針對疾病病程的變化進行治療，包括治療急性惡化和針對長期抑制疾病進行治療；(2)治療MS的癥狀；(3)預防和治療醫(yī)療并發(fā)癥；和(4)處理繼發(fā)的人際和社會問題，MS的發(fā)作可能很劇烈或很緩和以至于不引起患者注意去看醫(yī)生。最常見的癥狀包括一個或多個肢體虛弱、由于視神經(jīng)炎引起的視力模糊、感覺障礙、復視和共濟失調(diào)。疾病的病程可分成三大類(1)復發(fā)性MS，(2)慢性進行性MS，和(3)不活動性MS。復發(fā)性MS的特征是神經(jīng)功能障礙反復發(fā)作。MS的發(fā)作通常進行幾天至幾周，緊接著可能完全、部分或不復原。發(fā)作后從癥狀的高峰期復原通常在幾周至幾月內(nèi)發(fā)生，盡管持續(xù)2年或2年以上的復原很少見。
慢性進行性MS可引起逐漸地進行性惡化，沒有穩(wěn)定期或緩解期。這種形式發(fā)生在有復發(fā)性MS既往史的患者中，盡管20％的患者回憶沒有復發(fā)。在進行性過程中也可發(fā)生急性復發(fā)。
第三種形式是不活動性MS。不活動性MS的特征是程度不同的穩(wěn)定不變的神經(jīng)缺陷。大多數(shù)不活動性MS患者都有較早的復發(fā)性MS既往史。
疾病的病程也取決于患者的年齡。例如，較佳的預后因素包括早發(fā)(兒童期除外)、發(fā)作后5年復發(fā)和很少的殘疾。相反，不良預后與發(fā)作年齡較晚(即40歲的年齡或更老)和進行性的病程有關(guān)。這些變量是相互獨立的，因為慢性進行性MS開始的年齡有比復發(fā)性MS晚的趨勢。慢性進行性MS患者的殘疾通常是進行性截癱或四肢癱瘓(癱瘓)引起的。在本發(fā)明的一個方面，優(yōu)選當患者在緩解期時而不是在疾病的復發(fā)階段進行治療。
短期使用促腎上腺皮質(zhì)激素或口服皮質(zhì)激素(例如，口服的強的松或靜脈給藥的甲基強的松龍)僅是治療MS急性惡化患者的特殊治療措施。對于MS較新的治療方法包括用干擾素β-1b、干擾素β-1a和Copaxone(以前稱為共聚物1)對患者進行治療。這三種藥物已經(jīng)顯示能顯著地降低疾病的復發(fā)率。這些藥物可經(jīng)肌肉內(nèi)或皮下自行給藥。
但，目前沒有一種治療方式能抑制脫髓鞘，能單獨促進或使自發(fā)髓鞘再生發(fā)生或使癱瘓復原。本發(fā)明的一個方面考慮了用在此公開的藥劑單獨或與其它標準的治療方式聯(lián)合治療MS。
先天性代謝性疾病先天性代謝性疾病包括苯丙酮尿癥(PKU)和其它氨基酸尿癥、泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)、高歇氏病(Gaucher′s disease)、赫爾勒氏綜合征(Hurler′s syndrome)、克臘比氏病(Krabbe′s disease)和其它腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，這些疾病可影響髓鞘的發(fā)育，下面將詳細進行描述。
PKU是由苯丙氨酸羥化酶缺陷引起的一種遺傳性代謝錯誤。該酶的丟失引起智力遲鈍、器官損害、不正常的姿勢，在孕婦發(fā)生PKU時，嚴重者可中止妊娠。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了研究PKU的小鼠模型。被鑒定有PKU的嬰兒要保持無或低苯丙氨酸飲食。本發(fā)明的一個方面將這種飲食與在此公開的共軛物和組合物聯(lián)合在一起應用以防止脫髓鞘和由于PKU而被損害的髓鞘再生細胞。
典型的泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)出現(xiàn)在大約6個月的受試者中，最后將引起受試者在5歲時死亡。該疾病是由于缺少己糖胺酶A(hex A)，該酶是在腦和神經(jīng)細胞中降解某種脂肪酸物質(zhì)所必需的。在缺少酶時，這些物質(zhì)積累，引起神經(jīng)細胞破壞。另一種形式的hex A酶缺陷在生命中發(fā)生的較晚，被稱為青少年慢性和成人發(fā)作型hex A缺陷。癥狀類似于典型泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)的特征。也有酶缺陷的成人發(fā)作形式。目前對于該疾病/缺陷沒有治愈的病例或治療方法，僅有在子宮內(nèi)檢測胎兒預防疾病的措施。因此，在此公開的共軛物和組合物可以用于改善或阻止這種患者中神經(jīng)細胞的破壞。
尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)分為三種類型急性嬰兒型、B型是一種較少見的慢性、非神經(jīng)型，C型是該疾病的一種生物化學和遺傳獨特型。在正常的個體中，細胞膽固醇輸送至溶酶體進行加工，之后被釋放。從患尼曼-皮克病受試者采集的細胞顯示在從溶酶體中釋放膽固醇的過程是有缺陷的。這引起膽固醇在溶酶體內(nèi)部的過量積聚，引起加工障礙。NPC1發(fā)現(xiàn)具有與其它蛋白類似的已知甾醇敏感區(qū)，該區(qū)被認為在調(diào)節(jié)膽固醇運輸中具有重要地位。對于尼曼-皮克病的A型和C型還沒有建立成功的治療方法。對于C型，推薦患者進低膽固醇飲食。因此，在此公開的共軛物和組合物可以用于改善或組織細胞的破壞。
高歇氏病(Gaucher′s disease)是一種由于基因突變引起的遺傳性疾病。正常該基因是編碼稱為葡萄糖腦苷脂酶的一種酶，機體需要該酶來分解脂肪，葡萄糖腦苷脂。在患有高歇氏病(Gaucher′s disease)的患者中，身體不能正常地產(chǎn)生該酶，該脂肪不能被分解。象泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)一樣，高歇氏病在來自東歐猶太人(德系猶太人)的后代中非常常見，盡管任何種屬的個體均可能被累及。在德系猶太人群體中，高歇氏病是最常見的遺傳病，發(fā)生率大約為1/450人。在公眾當中，高歇氏病發(fā)病率大約為1/100,000人。
1991年，酶替代治療成為高歇氏病的首個有效治療方法。該治療方法包括靜脈給予葡萄糖腦苷脂酶的修飾形式。要理解的是在此公開的組合物和共軛物可單獨使用或更優(yōu)選與葡萄糖腦苷脂酶聯(lián)合使用以治療患病的受試者。
赫爾勒氏綜合征(Hurler′s syndrome)也稱為I型粘多糖增多癥，是一種重疊性疾病。這些遺傳疾病的共同點是在粘多糖積聚在成纖維細胞中。這些疾病從遺傳學上是可區(qū)分的。成纖維細胞和骨髓移植似乎沒有什么幫助，因此需要改善疾病嚴重程度和延緩進展的共軛物和組合物。在此公開的共軛物和組合物可給予受試者以延緩疾病的進展和/或改善其嚴重性。
克臘比氏病(Krabbe′s disease)(也稱為球形細胞腦白質(zhì)不良)是一種由半乳糖神經(jīng)酰胺酶(或半乳糖腦苷脂酶)缺陷引起的常染色體隱性遺傳疾病，該溶酶體酶能分解髓磷脂的主要脂質(zhì)成分。在法國病的發(fā)生率估計為1∶150,000出生兒。該病引起中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的脫髓鞘。通常該病在出生的第一年內(nèi)就可發(fā)生，并迅速進展，但也有報道少年、青年或成人發(fā)作型，其進展的速度變化更大。從酶測定(半乳糖神經(jīng)酰胺酶)來建立診斷。有幾種天然的動物模型(鼠、狗、猴)?？伺D比氏病，象所有腦白質(zhì)營養(yǎng)不良一樣，尚沒有治愈的病例或有效的治療方法。本發(fā)明的一個實施例是使用在此公開的組合物和共軛物來治療或改善克臘比氏病和其它腦白質(zhì)營養(yǎng)不良。
腦白質(zhì)營養(yǎng)不良是一組遺傳上確定的進行性疾病，累及腦、脊髓和外周神經(jīng)。這些疾病包括腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥(ALD)、腎上腺髓質(zhì)神經(jīng)病變(AMN)、Aicardi-Goutiers綜合征、亞歷山大病(Alexander′sdisease)、CACH(即，伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓磷脂形成減少或白質(zhì)消失的嬰幼兒共濟失調(diào))、CADASIL(即，伴皮質(zhì)下梗死及白質(zhì)腦病的常染色體顯性遺傳性腦動脈病)、Canavan氏病(腦白質(zhì)海綿狀變性)、腦腱性黃瘤病(CTX)、克臘比氏病(Krabbe′s disease)(如上所述)、異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)、新生兒腦白質(zhì)腎上腺萎縮癥、卵巢腦白質(zhì)營養(yǎng)不良綜合征(ovarioleukodystrophy syndrome)、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)(X-連鎖的痙攣性截癱)、雷夫敘姆病(Refsum disease)、van der Knaap綜合征(伴皮層下囊腫的空泡腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)和澤爾韋格氏綜合征(Zellweger syndrome)。這些疾病沒有有效的治療方法，更不用說治愈的病例了。因此，需要治療或改善這些疾病癥狀的方法，如通過使用在此公開的組合物和共軛物。
伴有異常髓鞘形成的神經(jīng)病有多種慢性免疫多發(fā)性神經(jīng)病變可引起患者的脫髓鞘。這些疾病的發(fā)作年齡根據(jù)病情而變化。這些疾病有標準的治療方法，可以與在此公開的組合物和共軛物聯(lián)合使用?？蛇x的是，在此公開的組合物和共軛物可單獨使用?，F(xiàn)有的標準治療方法包括下列的方法表IV


藥物和放射線誘發(fā)的脫髓鞘某些藥物和放射線可誘發(fā)受試者發(fā)生脫髓鞘作用。引起脫髓鞘的藥物包括但不限于氯喹、FK506、哌克西林、普魯卡因胺和齊美定。
放射線也可誘發(fā)脫髓鞘。由放射線引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)毒性被認為是由下列原因引起的(1)對血管結(jié)構(gòu)的損害，(2)去除了少突膠質(zhì)細胞-2星形膠質(zhì)細胞的祖細胞和成熟的少突膠質(zhì)細胞，(3)去除了海馬、小腦和皮質(zhì)中的神經(jīng)干細胞群，廣泛地改變細胞因子的表達。大多數(shù)放射線損害是由在治療某些癌癥中進行的放療所引起的。見Belka等人的綜述，2001Br.J.Cancer 851233-9。但對于航天員，接觸放射線可能也是病因之一(Hopewell，1994Adv.Space Res.14433-42)，在接觸放射性物質(zhì)的情況下也是如此。
對于已經(jīng)接受了藥物或偶爾接觸或有意接觸放射線的患者，通過給予在此公開的共軛物或組合物之一可能對于防止脫髓鞘或促進髓鞘再生是有益處的。
涉及脫髓鞘的疾病其它引起脫髓鞘的遺傳性綜合征/疾病包括科凱恩綜合征(Cockayne′s syndrome)、先天性髓鞘發(fā)育不良、法勃氏病(Farber′sdisease)、異染性腦白質(zhì)不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、雷夫敘姆病(Refsum disease)、朊病毒相關(guān)疾病和Salla病。
科凱恩綜合征(Cockayne′s syndrome，CS)是一種很少見的遺傳性疾病，此病患者對陽光很敏感，身材矮小，外表過早衰老。在典型形式的科凱恩綜合征(Cockayne′s syndrome)(I型)中，癥狀是進行性的，通常在1歲后出現(xiàn)明顯的癥狀?？苿P恩綜合征(Cockayne′ssyndrome)的早期發(fā)作型或先天型(II型)在出生時就很明顯。有意思的是，不象其它DNA修復疾病，科凱恩綜合征與癌癥沒有關(guān)系。CS是一種多系統(tǒng)的疾病，該病引起軀體和腦完全的生長障礙，以及進行性的惡病質(zhì)，視網(wǎng)膜、耳蝸和神經(jīng)變性，伴有腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和脫髓鞘性神經(jīng)病，但不增加癌癥發(fā)生率。在與UV接觸后(例如，陽光)，科凱恩綜合征患者不再發(fā)生轉(zhuǎn)錄耦合修復?，F(xiàn)在已經(jīng)鑒定出來在科凱恩綜合征中有兩種基因缺陷，CSA和CSB。CSA基因在第5號染色體上發(fā)現(xiàn)。兩種基因都編碼與轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)組件和DNA修復蛋白相互作用的蛋白。
目前，還沒有發(fā)現(xiàn)該病患者的有效治療方法或治愈病例。因此，本發(fā)明的一個方面是用在此公開的共軛物和組合物治療該病。
先天性髓鞘發(fā)育不良有幾種名稱包括先天性髓鞘形成障礙性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良性多發(fā)性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良(洋蔥球樣)多發(fā)性神經(jīng)病、先天性髓鞘發(fā)育不良神經(jīng)病、由髓鞘發(fā)育不良引起的神經(jīng)病、髓鞘發(fā)育不良神經(jīng)病和CHN。在人類最常見的遺傳性疾病中，遺傳性外周神經(jīng)病是一組復雜的，臨床上和遺傳學上不同類的疾病，可產(chǎn)生外周神經(jīng)的進行性惡化。先天性髓鞘發(fā)育不良是該組疾病中之一。該組疾病包括易發(fā)生壓迫性麻痹的遺傳性神經(jīng)病、夏科-馬里-圖思病(Charcot-Marie-Tooth disease)、進行性肥大性間質(zhì)性神經(jīng)病(代-索二氏綜合征，Dejerine-Sottas syndrome)和先天性髓鞘發(fā)育不良性神經(jīng)病。對于這些疾病還沒有已知的治愈病例或有效的治療方法。
法勃氏病(Farber′s disease)有幾種名稱包括Farber脂肪肉芽腫病、神經(jīng)酰胺酶缺陷、酸性神經(jīng)酰胺酶缺陷、AC缺陷、N-月桂基神經(jīng)鞘氨醇(Laurylsphingosine)脫?；溉毕莺蚇-脂?；窠?jīng)鞘氨醇酰胺水解酶。如某些名稱所揭示的那樣，該疾病是由于酸性神經(jīng)酰胺酶(也稱為N-脂?；窠?jīng)鞘氨醇酰胺水解酶，ASAH)缺陷引起的。酶缺乏引起未磺化的酸性粘多糖在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞中積聚。患有該疾病的患者通常在2歲之前死亡。
異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(MLD)是由?；蛩嶂窤缺陷引起的遺傳性疾病。它是影響髓鞘生長的稱為腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的一組遺傳性疾病中的一種。MLD有三種形式晚期嬰兒型、青少年型、和成人型。在最常見的晚期嬰兒型中，在6個月之2年之間癥狀開始發(fā)作。嬰兒通常在出生時是正常的，但最終喪失以前獲得的能力。癥狀包括張力減退(肌張力低)、說話異常、心智能力喪失、失明、強直(即，不受控制的肌緊張)、驚厥、吞咽損害、癱瘓和癡呆。青少年型的癥狀從4至14歲之間開始出現(xiàn)，包括學校表現(xiàn)不佳、精神頹廢、共濟失調(diào)、癲癇發(fā)作和癡呆。在成人型中，癥狀在16歲以后開始發(fā)生，癥狀克包括注意力不集中、抑郁、精神病學障礙、共濟失調(diào)、震顫和癡呆。癲癇發(fā)作可出現(xiàn)在成人型中，但不如其它型多見。在所有三種形式中，精神頹廢通常是首先出現(xiàn)的體征。
佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher disease)(也稱為圍產(chǎn)期嗜蘇丹性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)是一種引起蛋白脂質(zhì)蛋白異常的X連鎖遺傳疾病。該異常通常在1歲前引起嬰兒死亡。對該疾病尚沒有已知的治療方法或治愈病例。
雷夫敘姆病(Refsum disease)(也稱為植烷酸氧化酶缺陷，多神經(jīng)炎型遺傳性運動失調(diào)或IV型遺傳性運動與感覺神經(jīng)病，HMSN IV)是由于基因突變引起的，該基因編碼植烷酸輔酶A羥化酶(PAHX或PHYH)。主要的臨床表現(xiàn)是色素性視網(wǎng)膜炎、慢性多發(fā)性神經(jīng)病和小腦體征。植烷酸，一種罕見的支鏈脂肪酸(3，7，11，15-四甲基-十六烷酸)積累在該種疾病患者的組織液和體液中，由于缺乏PAHX不能被代謝。每月進行一次或兩次血漿置換能有效地從體內(nèi)將該酸去除，并允許放寬對限制植烷酸攝取的飲食限制。
朊病毒相關(guān)疾病包括Gerstmann-Straussler病(GSD)、克洛伊茨費爾特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease，CJD)、家族性致命性失明，朊病毒蛋白異常亞型在這些疾病以及庫魯病和綿羊瘙癢病(在綿羊中發(fā)現(xiàn)的疾病)可作為傳染原。術(shù)語朊病毒來自“蛋白傳染因子”(Prusiner，Science 216136-44，1982)。朊病毒相關(guān)蛋白(PRP)蛋白水解裂解生成淀粉樣肽(amyloidogenic peptide)，該肽聚合成為不能溶解的纖維。
Salla病和其它類型的唾液酸尿癥(sialurias)是涉及唾液酸貯存問題的疾病。它們是常染色體隱性遺傳的神經(jīng)變性疾病，可以嚴重的嬰兒型(即，ISSD)或緩慢進行性的成人型(在芬蘭較常見)存在(即，Salla病)。主要的癥狀是張力減退、小腦性共濟失調(diào)和智力遲鈍。這些病患和疾病也要考慮姑息性或改善性治療方法。
引起脫髓鞘的其它病患包括傳染后腦炎(也稱為急性播散性腦脊髓炎，ADEM)、腦膜炎和對脊髓的損傷。在此公開的組合物和共軛物也考慮用于治療這些其它脫髓鞘疾患。下面提供了合成和生物學實施例來說明本發(fā)明，但這些實施例并不能被解釋為限制本發(fā)明的范圍。除非另外說明，所有溫度均是攝氏度。
實施例在下述實施例中，下述縮寫具有下述含義。如果縮寫沒有規(guī)定，則它具有普遍接受的含義。
ACN ＝乙腈bs ＝寬峰d＝雙重峰dd ＝雙組雙重峰Et3N＝三乙胺g＝克h和hr＝小時HPLC ＝高效(或高壓)液相色譜kg ＝千克kDa ＝千道爾頓L＝升m＝多重峰M＝摩爾mg ＝毫克
min ＝分鐘mL ＝毫升mm ＝毫米mM ＝毫摩爾mmol＝毫摩爾s ＝單峰sat.＝飽和的t ＝三重峰TFA ＝三氟乙酸TLC或tic＝薄層色譜Ts ＝甲苯磺酰基μL ＝微升μg ＝微克μm ＝微米一般方法使用Gemini 2000或Bruker Avance 300光譜儀獲得質(zhì)子(1H)和碳(13C)核磁共振譜(NMR)。通過在3.6ppm處寬峰檢測到聚乙二醇(PEG)的存在。該信號的積累(integration)可以根據(jù)PEG部分的大小而變化。共軛的VLA-4拮抗劑的存在也可以在共軛物的1H NMR譜上檢測到。在硅石60F254(EMD 15341-1)預包被的板或預包被的MKC18F硅石60(Whatman 4803-110)上進行薄層色譜。在Agilent質(zhì)譜儀(LC/MSD VL)上以陽離子單四級模式(single quadmode)進行質(zhì)譜測定。
PEG產(chǎn)物和PEG共軛物的HPLC方法使用帶有Varian UV檢測器的Varian Prep Star(SD-1型)組件設定在210nm進行制備性反相HPLC。方法A在Vydac C18，300孔徑柱(250mm×21.2mm)上使用反相HPLC純化PEG產(chǎn)物和PEG共軛物樣品，一般使用35-50％CAN+0.1％TFA的梯度，在100min內(nèi)以20mL/min的速度進行。方法B在Vydac C18，300孔徑柱(250mm×50mm)上使用反相HPLC純化PEG產(chǎn)物和PEG共軛物樣品，一般使用35-50％CAN+0.1％TFA的梯度，在100min內(nèi)以60mL/min的速度進行。
方法C經(jīng)反相分析性HPLC確認PEG產(chǎn)物和共軛物的純度，使用裝有Waters Symmtry 300孔徑，3.5μC18柱(150mm×4.6mm)的Agilent Series 1100四元系統(tǒng)，使用40-50％ACN w/0.1％TFA的梯度，以1.5mL/min的流速進行，該系統(tǒng)與設定在210nm的Agilent1100可變波長檢測器和Sedex 75蒸發(fā)光散射檢測器(40℃，增益＝5)連接。
PEG試劑通過NOF Corporation(Yebisu Garden Place Tower，20-3Ebisu 4-chome，Shibuya-ku，Tokyo 150-6019)或Nektar Therapeutics(150Industrial Road，San Carlos，CA 94070)獲得如下的PEG起始材料30kDa PEG二胺(NOF Cat.Sunbright DE-300PA)；5kDa Boc-NH-PEG-NHS酯(Nektar Cat.4M530H02)；20kDa四胺(NOF Cat.SunbrightPTE-200PA)；40kDa 4-臂PEG醇(NOF Cat.Sunbright PTE-40000)；40kDa 3-臂PEG醇(NOF Cat.Sunbright GL-400)。
實施例1 氫氧化鈉(10g，0.25m)溶解在水中(300ml)。向此溶液中加入4-硝基苯丙氨酸(50.3g，0.22m)，攪拌至完全溶解。向得到的溶液中加入碳酸鈉(28.8g，0.26m)，在冰浴中將攪拌的懸液冷卻至+8℃。逐滴加入氯甲酸芐酯(44.7g，0.26m)，劇烈攪拌，將內(nèi)部溫度保持在+6℃至+9℃的范圍內(nèi)?；旌衔镌?6℃另外攪拌1hr，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗，用醚沖洗(2×150ml)。將水相置于大錐形瓶(2L)中，小心地用HCl稀水溶液酸化至pH＝2，用乙酸乙酯萃取(4×500ml)。合并的萃取物用水沖洗，用MgSO4干燥。過濾溶液，蒸發(fā)過濾液，殘渣溶解在乙酸乙酯(150ml)中，并用己烷稀釋(500ml)。濾出晶體物質(zhì)，用冷溶劑漂洗，空氣干燥，得到Cbz-4-硝基苯丙氨酸，75g(99.5％產(chǎn)率)。1H-NMR，DMSO-d6，(δ)12.85(bs，1H)，8.12(d，2H，J＝9Hz)，7.52(d，2H，J＝9Hz)，7.30(m，5H)，4.95(s，2H)，4.28(m，1H)，3.32(bs，1H)，3.10(m，2H)。13C-NMR(δ)173.1，156.3，146.6，137.3，130.8，128.5，128.0，127.8，123.5，65.6，55.1，36.6。MS(m/z)367.1[M+23]。
Cbz-4-硝基苯丙氨酸(75g，0.22m)溶解在二噁烷(300ml)中。得到的攪拌溶液在干冰浴中冷卻至-20℃(內(nèi)部)。加入液化的異丁烯(大約290ml)，然后分別間隔30min加入三等分的濃硫酸(35ml)。酸的加入是一個很強烈的放熱過程，伴隨著主要的聚合作用。在此階段，有效的機械攪拌是很重要的。將得到的混合物攪拌20hr，然后加熱至室溫，小心地倒入進飽和的碳酸鈉水溶液(2L)中，并用乙酸乙酯(600ml)稀釋。分離有機層，用乙酸乙酯萃取水層(2×200ml)。合并的萃取物用水沖洗，用硫酸鈉干燥。過濾溶液，蒸發(fā)至干燥。殘渣投入乙酸乙酯/己烷混合物(500ml；1∶1)中，用硅膠填料(ca.2×2in)過濾。另外，用一定量的相同溶劑(總計2L)漂洗硅石，蒸發(fā)過濾液，得到粘稠油狀的完全保護的4-硝基苯丙氨酸73g(兩步后為83％)。1H-NMR，CDCl3，(δ)8.12(d，2H，J＝8.4Hz)，7.36(m，7H)，5.35(m，1H)，5.10(m，2H)，4.57(m，1H)，3.31(m，2H)，1.43(s，9H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)169.7，155.3，146.9，143.9，136.0，130.2，128.4，128.2，128.0，123.3，82.9，66.9，54.7，38.2，31.4，27.8，13.9。MS(m/z)423.1[M+23]。
保護的4-硝基苯丙氨酸(73g，0.18m)溶解在乙醇(500ml)中，加入氧化鉑催化劑(1.5g)。得到的溶液在氫氣(50-60psi)中在室溫下劇烈攪拌，直至氫吸附停止(3hr)。將催化劑濾出，濾液蒸發(fā)至干燥，殘渣投入乙酸乙酯(200ml)中，通過硅膠填料(2×2in)過濾，使用乙酸乙酯-己烷混合物(3∶2，2L)漂洗硅石。濾液濃縮至大約200ml，加入己烷(500ml)。過濾出結(jié)晶產(chǎn)物，用冷溶劑漂洗，風干。產(chǎn)率-56g，84％。1H-NMR，CDCl3，(δ)7.30(bs，5H)，6.92(d，2H，J＝8.1Hz)，6.58(d，2H，J＝8.1Hz)，5.21(m，1H)，5.10(d，2H，J＝2.1Hz)，4.46(m，1H)，3.59(bs，2H)，2.97(s，2H，J＝5.4Hz)，1.42(s，9H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)170.6，145.1，136.3，130.2，128.3，127.9，125.6，115.0，81.9，66.6，55.2，37.4，27.8MS(m/z)393.1[M+23]。
實施例2 將實施例1的產(chǎn)物，4-氨基苯丙氨酸(20g，0.054m)，溶解在乙醇(200ml)中，用Hunig’s堿(21g，0.162m，3當量)和2-氯-3-硝基吡啶(10.3g，0.65m，1.2當量)處理。得到的溶液在氮氣中攪拌，加熱回流24hr。LC分析表明，有少量未反應的胺存在。另外加入少量氯硝基吡啶(1.1g，0.13當量)，并繼續(xù)回流24hr。冷卻反應混合物，蒸發(fā)至干燥。殘渣溶解在乙酸乙酯(600ml)中，獲得的溶液用水(1×200ml)、檸檬酸稀水溶液(0.2N，2×200ml)、鹽水(1×200ml)沖洗，用硫酸鈉干燥。濾出固體，蒸發(fā)濾液，得到37g深紅色油狀、含有被過量的氯硝基吡啶污染的預期產(chǎn)物的物質(zhì)。不純的產(chǎn)物通過快速色譜(Biotage 75L系統(tǒng))純化，用乙酸乙酯∶己烷(3∶17)混合物洗脫。合并含有純產(chǎn)物的餾分，蒸發(fā)得到深紅色粘稠油狀的產(chǎn)物26g(99％)。1H-NMR，CDCl3，(δ)10.10(s，1H)，8.49(m，2H)，7.57(d，2H，J＝9Hz)，7.35(bs，5H)，7.19(d，2H，J＝9Hz)，6.84(m，1H)，5.30(m，1H)，5.13(d，2H，J＝3Hz)，4.57(m，1H)，3.11(m，2H)，1.45(s，9H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)170.4，155.5，155.1，150.0，136.7，136.3，135.4，132.4，129.9，128.5，128.3，128.0，127.9，122.2，113.7，82.2，66.7，55.1，37.7，27.8，20.9。MS(m/z)493.1[M+1]，515.1[M+23]。
紅色的硝基化合物(26g，0.054m)溶解在THF(350ml)中，加入氧化鉑催化劑(1.35g)。得到的混合物在氫氣(50-60psi)下劇烈攪拌，直至氫吸附停止(2hr)。濾出催化劑，濾液蒸發(fā)至干燥。殘渣溶解在乙酸乙酯(100ml)中，用己烷(50ml)稀釋，直至開始結(jié)晶?；旌衔镞M一步用乙酸乙酯/己烷(1∶1)混合物(300ml)稀釋，在冰箱中靜置3hr。濾出結(jié)晶固體，用冷溶劑漂洗，風干，得到產(chǎn)物，23g，94％。1H-NMR，CDCl3，(δ)7.81(dd，1H，J1＝1.5Hz，J2＝4.8Hz)，7.33(bs，5H)，7.17(d，2H，J＝8.4Hz)，7.03(d，2H，J＝8.4Hz)，6.96(dd，1H，J1＝1.5Hz，J2＝7.5Hz)，6.75(dd，1H，J1＝5.0Hz，J2＝7.7Hz)，6.22(s，1H)，5.31(m，1H)，5.09(bs，2H)，4.50(m，1H)，3.41(bs，2H)，3.02(m，2H)，1.43(s，9H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)170.6，155.6，145.5，140.21，138.8，136.3，130.8，129.9，128.5，128.3，127.9，123.4，118.2，117.0，82.0，66.6，55.2，37.4，27.9。MS(m/z)407.1[M-56]，463.1[M+1]，485.1[M+23]。
氨基吡啶(19g，0.041m)懸浮在二氯甲烷(200ml)中，并且加入CDI(12g，0.074m，1.8當量)。得到的混合物在室溫下攪拌20hr。反應混合物用飽和碳酸氫鹽水溶液(2×100ml)、鹽水(1×100ml)沖洗，用硫酸鈉干燥。濾出固體，濾液蒸發(fā)至干燥。殘渣溶解在乙酸乙酯(熱，300ml)中結(jié)晶。濾出結(jié)晶產(chǎn)物，用冷乙酸乙酯漂洗，風干，得到19.9g 81％的咪唑酮。1H-NMR，CDCl3，(δ)10.63(s，1H)，8.06(d，1H，J＝3Hz)，7.66(d，2H，J＝9Hz)，7.32(m，8H)，7.05(m，1H)，5.36(m，1H)，5.13(s，2H)，4.59(m，1H)，3.17(m，2H)，1.45(s，9H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)170.4，155.6，154.3，143.8，141.0，136.2，135.8，131.8，130.2，128.3，128.0，125.9，122.2，118.3，116.0，82.4，66.8，55.0，37.7，27.8。MS(m/z)433.1[M-56]，489.2[M+1]，511.2[M+23]。
實施例3 向?qū)嵤├?的產(chǎn)物(4.0g，8.19mmol)/DMF(40ml)溶液中加入碳酸鉀粉(1.58g，11.47mmol)，然后加入溴乙酸甲酯(1.0ml，11.47mmol)。反應混合物在氮氣氛中在室溫攪拌過夜。反應混合物真空濃縮，殘渣投入至乙酸乙酯(100ml)中。用H2O、鹽水沖洗有機相，在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮。粗原料通過柱色譜(100％乙酸乙酯)純化，得到4.5g(100％)白色泡沫狀的題述化合物。Rf＝0.42(5％MeOH/CH2Cl2)。MS m/z＝561，(M+H)+。1H NMR(CDCl3)δ8.10-8.08(d，1H)，δ7.67-7.65(d，2H)，δ7.37-7.30(m，7H)，δ7.20-7.17(m，1H)，δ7.10-7.05(m，1H)，δ5.30-5.27(d，1H)，δ5.11(s，2H)，δ4.58-4.55(q，1H)，δ3.81(s，3H)，δ3.16-3.14(d，2H)1δ1.42(s，9H)。
實施例4 將實施例3的產(chǎn)物(2.25g，4.01mmol)/MeOH(20ml)溶液與Degussa Pd/C催化劑(113mg)置于H2(55psi)中過夜。反應混合物通過Celite過濾，真空濃縮，得到1.65g(97％)褐色油狀的題述化合物。Rf＝0.32(5％MeOH/CH2Cl2)。MS m/z＝449，(M+Na)+。1H NMR(CDCl3)δ8.11-8.09(d，1H)，δ7.68-7.65(d，2H)，δ7.41-7.38(d，2H)，δ7.20-7.17(m，1H)，δ7.10-7.06(m，1H)，δ4.73(s，2H)，δ3.81(s，3H)，δ3.67-3.62(m，1H)，δ3.16-3.09(m，1H)，δ2.91-2.84(m，1H)，δ1.46(s，9H)。
實施例5
將吡啶-3-磺酸(125g，0.78m)置于1L裝有機械攪拌器、回流冷凝器、熱電偶和氮氣進氣口的3頸燒瓶中。接下來，加入五氯化磷(250g，1.19m，1.5當量)，然后立即加入三氯氧磷(330ml，3.8m，4.5當量)。首先，將燒瓶的內(nèi)容物在室溫下攪拌30min，然后緩慢地進行溫和回流(內(nèi)部溫度大約為110℃)1小時，在此溫度保持大約3.5hr，隨后用12hr將其冷卻至室溫。在此期間，觀察到有氣體放出。在減壓條件(12mmHg/40℃)下脫除揮發(fā)物，黃色的半固體殘渣用DCM(1L)稀釋。漿料緩慢地倒入攪拌的冰冷卻的飽和碳酸氫鹽水溶液中，保持pH＝7。觀察到有氣體放出。分離有機層，水層用DCM反相萃取。合并的萃取物用冷的飽和碳酸氫鹽水溶液、鹽水沖洗，用硫酸鎂干燥。濾出固體，蒸發(fā)濾液，得到淡黃色油狀液體，吡啶-3-磺酰氯，123g(93％純度；理論值的88％)。1H-NMR，CDCl3，(δ)9.26(d，1H)8.98(dd，1H)，8.34(m，1H)，7.62(m，1H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)155.3，147.4，140.9，134.6，124.2。
MS(m/z)178.0[M+1]。
L-青霉胺(150g，1.0m)溶解在DI水(1500ml)中攪拌，在冰浴中冷卻至+8℃，用福爾馬林(150ml，37％水溶液)處理。反應混合物在+8℃攪拌2hr，然后去掉冷卻浴，繼續(xù)攪拌12hr。在減壓條件(14mmHg/50°)下將清亮的溶液濃縮，得到白色殘渣。使固體重新懸浮，然后溶解在熱的MeOH(2500ml)中，并在室溫下靜置12hr。濾出白色的蓬松沉淀物，用冷甲醇漂洗。濃縮濾液，再次進行結(jié)晶。收集的沉淀物與首次收獲的產(chǎn)物合并，在真空干燥箱中，在55℃和45mmHg下干燥24hr。(R)-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸的產(chǎn)量為138g(純度＞99％；理論值的86％)。1H-NMR，DMSO-d6，(δ)4.25(d，1H)，4.05(d，1H)，3.33(s，1H)，1.57(s，3H)，1.19(s，3H)。13C-NMR，DMSO-d6，(δ)170.8，74.4，57.6，51.8，28.9，27.9。MS(m/z)162.3[M+1]。
在裝有機械攪拌器和熱電偶的4L反應器中，用磷酸二氫鉀(43g，0.31m)和磷酸氫二鉀(188.7g，1.08m)在DI水(2L)中制備緩沖溶液。加入(R)-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(107g，0.675m)，攪拌至完全溶解。在冰浴中將溶液冷卻至+8℃。將單獨制備的吡啶-3-磺酰氯(124g，0.695m)/DCM(125ml)溶液逐滴加入至反應器中，劇烈攪拌1hr。監(jiān)測反應混合物的pH，4hr后發(fā)現(xiàn)pH＝5，加入固體碳酸氫鹽調(diào)整至pH＝6。將混合物加熱至室溫，持續(xù)18hr。用硫酸稀水溶液將pH調(diào)整至2，攪拌1hr，將沉淀的黃色固體濾出，用水漂洗至中性。固體濾餅轉(zhuǎn)移至2L Erlenmayer燒瓶中，懸浮在DCM(500ml)中，偶爾振蕩5min，再次過濾。濾餅用DCM沖洗并風干。題述化合物(R)-5，5-二甲基-3-(吡啶-3-基磺?；?噻唑烷-4-羧酸的產(chǎn)量為148.9g(98％純度；理論值的73％)。1H-NMR，DMSO-d6，(δ)9.05(d，1H)，8.89(m，1H)，8.32(m，1H)，7.69(m，1H)，4.68(q，2H)，4.14(s，1H)，1.35(s，3H)，1.29(s，3H)。13C-NMR，DMSO-d6，(δ)170.0，154.3，147.9，135.8，134.1，124.8，72.6，54.3，50.2，29.4，25.0。MS(m/z)303.2[M+1]。
實施例6 向?qū)嵤├?的產(chǎn)物(1.65g，3.88mmol)/乙腈(35ml)溶液中加入實施例5的產(chǎn)物(1.06g，3.53mmol)、HATU(1.75g，3.88mmol)和三乙胺(5.3ml)。均勻的褐色溶液在氮氣中攪拌72小時。有機反應混合物在真空中濃縮，投入至乙酸乙酯(40ml)中，用1N HCl、飽和的NaHCO3水溶液和鹽水沖洗。有機層在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮得到橫黃色泡沫的2.67g(97％)3。Rf＝0.36(5％MeOH/CH2Cl2)。MS m/z＝711，(M+H)+。1H NMR(CDCI3)δ9.09-9.08(d，1H)，δ8.86-8.84(m，1H)，δ8.18-8.15(m，1H)，δ8.07-8.05(m，1H)，δ7.66-7.63(d，2H)，δ7.52-7.48(m，1H)，δ7.41-7.38(d，2H)，δ7.19-7.16(m，1H)，δ7.08-7.04(m，1H)，δ6.93-6.90(d，1H)，δ4.83-4.76(q，1H)，δ4.71(s，2H)，δ4.62-4.59(d，1H)，δ4.49-4.46(d，1H)，δ3.91(s，1H)，δ3.80(s，3H)，δ3.22-3.08(m，2H)，δ1.46(s，9H)，δ1.20-1.17(d，6H)。
實施例7 向?qū)嵤├?的產(chǎn)物(2.67g的3.75mmol)，/THF(12ml)溶液中加入LiOH H2O(245mg，5.97mmol)/H2O(3ml)溶液。將反應混合物在氮氣中在室溫攪拌過夜。反應結(jié)束后，反應混合物真空濃縮，在H2O(100ml)中溶解，用1M HCl溶液酸化至pH 4。所需的產(chǎn)物沉淀為白色的固體，將其過濾，用H2O漂洗得到1.87g(72％)的題述化合物。MS m/z＝697，(M+H)+。1H NMR(CD3OD)δ9.02(s，1H)，δ9.80(s，1H)，δ8.47-8.44(d，1H)，δ8.21-8.19(d，1H)，δ7.98-7.96(d，1H)，δ7.63-7.59(m，3H)，δ7.52-7.48(m，3H)，δ7.17-7.13(m，1H)，δ4.75(s，2H)，δ4.72-4.61(m，3H)，δ4.14(s，1H)，δ3.22-3.16(m，2H)，δ1.45(s，9H)，δ1.25-1.19(d，6H)。13C NMR(CD3OD)δ169.9，169.5，168.9，153.1，152.8，147.5，142.8，140.2，136.6，135.8，134.0，131.7，129.9，126.0，124.2，123.9，117.8，114.9，81.8，72.6，54.1，49.9，41.3，36.4，28.5，26.6，23.4。
實施例8
實施例2的產(chǎn)物(52g，0.106m)在MeOH(450ml)中混合，加入氫化催化劑(8.7g，5％Pd/C，Degussa)，混合物在氫氣(60psi)中攪拌，直至不再進一步吸附(大約2hr)。加入THF(150ml)，溶解沉淀的固體，溶液通過Celite填料過濾，使用DCM清洗濾器。濾液蒸發(fā)至干燥，再次溶解在DCM(300ml)中，并再次汽提(stripped)。該操作重復2次。泡沫狀的固體在高度真空中保持3hr。題述化合物的產(chǎn)量為38.3g(理論值的101％)。1H-NMR，CDCl3，(δ)8.08(m，1H)，7.56(AB q，4H)，7.37(m，1H)，7.06(m，1H)，3.68(m，1H)，2.03(m，2H)，1.49(s，9H)。13C-NMR，CDCI3，(δ)173.8，154.6，143.9，141.0，137.4，131.5，130.2，126.1，122.3，118.0，116.1，81.4，56.0，40.6，27.9。MS(m/z)299.3[M-56]，355.4[M+1]，377.4[M+23]。
實施例9 實施例8的產(chǎn)物(38.3g，假設0.106m)溶解在DCM(500ml)中，并依次用下列的化合物處理N-甲基嗎啉(27g，30ml，0.266m；2.5當量)、HOBt(17.3g，0.128m；1.2當量)和實施例5的產(chǎn)物(33.8g，0.112m；1.06當量)。得到的不均勻溶液在冰浴中冷卻至+4℃，一次性加入EDC(22.5g，0.117m；1.1當量)進行處理。攪拌反應混合物，使其在其后的4hr內(nèi)升溫至室溫，然后繼續(xù)保持18hr。將溶劑汽提，殘渣溶解在乙酸乙酯(1.2L)中，用飽和的碳酸氫鹽水溶液(2×250ml)、水(250ml)、鹽水(300ml)沖洗，用硫酸鎂干燥。溶液過濾，蒸發(fā)至干燥，得到淡橙黃色的粘稠油狀產(chǎn)物，76g(＞＞100％)。粗產(chǎn)物通過快速色譜在硅膠(Biotage 75L，在乙酸乙酯/甲醇(3％)混合物中)上進行純化。含有純產(chǎn)物的餾分合并，蒸發(fā)得到54g題述化合物(產(chǎn)率83％)。1H-NMR，CDCl3，(δ)10.37(s，1H)，9.11(s，1H)，8.87(m，1H)，8.19(m，1H)，8.05(m，1H)，7.56(AB q，4H)，7.52(m，1H)，7.36(m，1H)，7.06(m，2H)，4.83(m，1H)，4.58(AB a，2H)，3.96(s，1H)，3.19(m，2H)，1.49(s，9H)，1.22(s，3H)，1.18(s，3H)。13C-NMR，CDCl3，(δ)169.7，167.6，153.9，148.4，143.8，140.9，135.8，135.6，132.9，131.9，130.2，125.9，123.8，122.1，118.0，115.9，82.8，73.6，60.3，54.8，53.7，50.6，37.8，29.1，27.8，23.9，14.1。MS(m/z)583.3[M-5β]，639.4[M+1]，661.3[M+23]。
實施例10 向冰冷卻的三氟丁酸乙酯(15g，89mmol)和甲酸乙酯(36mL，444mmol)的THF(200mL)溶液中，在N2氣氛中在25分鐘內(nèi)加入1MKOtBu/THF(107mmol，107mL)。15分鐘后，去除冰浴，反應混合物在室溫下攪拌1小時。然后另外加入甲酸乙酯(18mL，222mmol)，反應混合物攪拌過夜。濃縮反應混合物，殘渣在冷乙醚(100mL)和冷水(300mL)之間萃取。水相的pH用濃HCl調(diào)整至2。產(chǎn)物用二氯甲烷(1×100mL，45×75mL)萃取，合并的有機萃取物用鹽水(1×100mL)沖洗，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮得到稠厚的油狀題述化合物，靜置固化，10.2g(58.5％)。MS(m/z)＝198(M+H)+。
實施例11 向?qū)嵤├?0的產(chǎn)物(10g，51mmol)和二乙胍硫酸鹽(8.3g，25.2mmol)的EtOH(60mL)溶液中，在N2氣氛中在10分鐘內(nèi)加入NaOEt的21％EtOH(20.7mL，55.5mmol)溶液。然后反應混合物加熱回流5小時。均勻的溶液冷卻，倒入冷水(100mL)中，得到均勻的溶液。溶液的pH用濃HCl和1N的HCl調(diào)整至大約3.5。從溶液中沉淀的固體通過過濾收集。淡褐色固體用水沖洗，風干，得到2.9g(23％)題述化合物。MS(m/z)＝250(M+H)+。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.65(br s，1H)，3.55(q，4H)，3.30(q，2H)，1.25(t，6H)。
實施例12 實施例11的產(chǎn)物(2.0g，8.02mmol)、DIEA(1.5mL，8.83mmol)、DMAP(.98g，0.8mmol)和二氯甲烷(30mL)投入燒瓶中?；旌衔锢鋮s至0℃，加入三氟乙酸酐(1.5mL，8.83mmol)。反應至均相(homogeneous)，在0℃攪拌3小時?；旌衔镉蔑柡偷腘aHCO3淬滅，用二氯甲烷萃取。有機相用0.2N檸檬酸沖洗，在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮得到2.87g(94％)褐色固體的題述化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.28(s，1H)，3.65-3.52(m，4H)，3.29-3.19(q，2H)，1.22-1.17(t，6H)。
實施例13 實施例12的產(chǎn)物(1.3g，3.5mmol)、H-Phe(p-NO2)OtBu(1.1g，4.2mmol)和DIEA(0.9mL，5.3mmol)的CH3CN(14mL)溶液在N2中加熱回流過夜。第二天，另外加入H-Phe(p-NO2)OtBu(0.8g，3mmol)，繼續(xù)回流3天。然后，將反應混合物冷卻和濃縮。殘渣投入至EtOAc(50mL)中，有機部分用0.5N KHSO4(3×50mL)、水(1×50mL)、鹽水(1×10mL)沖洗，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮為褐色的膠。粗原料通過快速色譜(5∶1己烷/EtOAc)純化，得到640mg(38％)金色膠狀的題述化合物。TLC3∶1己烷/EtOAc，Rf＝0.30，MS(m/z)＝498(M+H)+，1H NMR，(300MHz，CDCl3)δ8.19(d，2H)，7.80(s，1H)，7.25(d，2H)，5.19(br d，1H)，4.95(q，1H)，3.70-3.50(m，4H)，3.45-3.25(m，2H)，3.10(q，2H)，1.40(S19H)，1.05(t，6H)。
實施例14 實施例13的產(chǎn)物(635mg，1.27mmol)溶解在純EtOH(5mL)中，向其中加入35mg Pd/C，10wt％。反應氫化(45psi H2)2.5小時，期間加入50mg Pd/C，10wt％，反應混合物再次氫化(45psi H2)過夜。反應混合物通過Celite填料過濾，濃縮濾液得到452mg(76％)題述化合物。MS(m/z)＝468(M+H)+，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.75(s，1H)，6.90(d，2H)，6.60(d，2H)，5.05(br d，1H)，4.80(q，1H)，3.70-3.45(m，6H)，3.10-2.90(m，4H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H)。
實施例15 實施例14的產(chǎn)物(598mg，1.28mmol)、2-氯-3-硝基吡啶(243mg，1.53mmol)和DIEA(0.67mL，3.83mmol)的EtOH(5mL)溶液在N2中加熱回流。第二天，反應冷卻，另外加入2-氯-3-硝基吡啶(40mg，0.25mmol)和DIEA(0.11mL，0.60mmol)，反應加熱回流1天。然后濃縮反應混合物，殘渣投入至EtOAc(20mL)中。有機相用水(2×20mL)沖洗。合并的洗滌水溶液用EtOAc(2×10mL)反萃取。合并的有機萃取物用0.2N檸檬酸(3×20mL)、水(1×10mL)、飽和的NaHCO3(3×20mL)、鹽水(1×10mL)沖洗，干燥(MgSO4)，過濾，汽提為橙黃色的膠。粗產(chǎn)物通過快速色譜純化，用4∶1己烷/EtOAc(Rf＝0.14)洗脫得到610mg(81％)紅色油狀的題述化合物。MS(m/z)＝590(M+H)+，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.10(s，1H)，8.55(d，1H)，8.50(m，1H)，7.79(s，1H)，7.75(d，2H)，7.15(d，2H)，6.80(q，1H)，5.10(br d，1H)，4.90(m，1H)，3.70-3.45(m，4H)，3.25(m，2H)，3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.10(t，6H)。
實施例16 向?qū)嵤├?5的產(chǎn)物(610mg，1.03mmol)/純EtOH(5mL)溶液中加入60mg Pd/C，10wt％。混合物氫化(45psi H2)過夜。第二天，反應混合物通過Celite過濾，濾液濃縮得到500mg(87％)題述化合物。MS(m/z)＝560(M+H)+，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.85(d，2H)，7.80(s，1H)，7.20(d，2H)，7.05(d，2H)，7.00(d，1H)，7.75(m，1H)，6.20(br s 1H)，5.15(br s，1H)，4.85(m，1H)，3.75-3.45(m，4H)，3.40(br s，2H)，3.15(m，2H)，3.05(q，2H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H)。
實施例17 實施例16的產(chǎn)物(141mg，0.250mmol)和CDI(62mg，0.378mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液攪拌過夜。第二天，另外加入CDI(30mg，0.185mmol)，反應另外攪拌1天。然后將反應混合物濃縮，投入至EtOAc(10mL)中，有機部分用0.2N檸檬酸(3×5mL)、水(1×5mL)、飽和NaHCO3(3×5mL)、鹽水(1×5mL)沖洗，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到69mg(47％)泡沫狀的題述化合物，該化合物不需進一步純化就可以使用。MS(m/z)＝586(M+H)+，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.20(br s，1H)，8.05(d，1H)，7.80(s，1H)，7.65(d，2H)，7.90(m，3H)，7.05(m，1H)，5.15(br d，1H)，4.95(m，1H)，3.70-3.45(m，4H)，3.25(app d，2H)，3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H)。
實施例18 向4，6-二氯-5-氨基嘧啶(5.0g，30.7mmol)/DMSO(30mL)溶液中加入Na2S·9H2O(7.4g，30.8mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。然后向混合物中加入水(40mL)，溶液減壓蒸發(fā)至大約6mL。向此溶液中加入濃HCl(0.5mL)和水以沉淀產(chǎn)物。過濾溶液，用水沖洗橙黃色固體，干燥得到4.3g(86％)題述化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.84(2H，s)，7.79(1H，s)，14.37(1H，br s)；MS(m/z)MH+＝162。
實施例19 向溶解在濃NH4OH(4mL)中的實施例18的產(chǎn)物(4.3g，26mmol)中加入EtOH(40mL)。向此溶液中逐部分地(in portions)加入雷尼鎳(過量)。反應在室溫下攪拌過夜，然后在80℃加熱2hr?；旌衔锿ㄟ^Celite過濾，濃縮濾液。粗產(chǎn)物通過快速色譜在硅石上使用EtOAc/己烷純化，得到1.6g(47％)的黃色固體題述化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.90(2H，s)，8.20(2H，s)；MS(m/z)MH+＝130。
實施例20 向MeOH(20mL)和HOAc(0.5mL)中的實施例19的產(chǎn)物(0.51g，3.9mmol)中加入CH3CHO(0.52mL，9.2mmol)。然后一次性加入NaBH3CN(590mg，9.2mmol)。反應在室溫下攪拌過夜，另外加入HOAc、CH3CHO和NaBH3CN。反應攪拌過夜，濃縮，殘渣投入進EtOAc和飽和的NaHCO3中。分離的水層用EtOAc反萃取。合并的有機層干燥，濃縮成殘渣。殘渣溶解在MeOH中，如上所述用HOAc、CH3CHO和NaBH3CN處理。在上述步驟之后，粗產(chǎn)物通過快速色譜在硅石上使用EtOAc/己烷純化，得到0.35g(57％)黃色油狀的題述化合物。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.35(3H，q，J＝12Hz)，3.29(2H，m)，4.21(1H，bs)，8.04(1H，s)，8.36(1H，s)；MS(m/z)MH+＝158。
實施例21 向溶解在DMF(1mL)中的實施例20的產(chǎn)物(70mg，0.45mmol)中加入TEA(93μL)和異煙酰氯(0.12g，0.67mmol)。反應混合物在室溫下攪拌2天，然后在EtOAc和飽和的NaHCO3之間萃取。分離的水層用EtOAc反萃取。合并的有機層干燥，濃縮得到67mg(57％)的題述化合物，該化合物不需進一步純化就可以使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(3H)，3.65-3.69(1H)，4.21(1H)，7.17(2H)，8.43(1H)，8.54(2H)，8.86(1H)注意1H NMR顯示，所有峰都很寬大證明有旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體存在的證據(jù)；MS(m/z)MH+＝263。
實施例22 向含有實施例21的產(chǎn)物(0.11g，0.42mmol)和實施例8的產(chǎn)物(0.135g，0.38mmol)的IPA(2.5ml)中加入DIEA(0.35ml，1.9mmol)。反應混合物在密封管中在130℃攪拌2天。粗混合物濃縮，油通過快速柱色譜使用0-10％MeOH/CH2Cl2的溶劑梯度純化，得到油狀的題述化合物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.16(1.2H，m)，1.26-1.31(1.8H，m)，1.50-1.53(9H，d，J＝9Hz)，3.0(1H，m)，3.2(0.8H，m)，3.36(1.2H，m)，4.12-4.18(1.2H，m)，4.96-5.10(.8H，m)，5.80-5.95(1H，m)，6.93-6.96(1H，m)，7.07(1H，m)，7.31-7.45(5H，m)，7.66-7.75(3H，m)，8.06(1H，m)，8.44-8.51(2H，m)；HPLC/MS在1.29min的單峰，MH+＝581。
實施例23 在0℃下在N2中向2，4-二氯-5-硝基嘧啶(2.0g，10.3mmol)/MeOH(7mL)中逐滴加入NaOMe/MeOH(0.5M，25mL)。添加結(jié)束后，反應混合物在0℃攪拌15min。然后加入二乙胺(5mL)，混合物在室溫下攪拌過夜。反應混合物濃縮，殘渣在EtOAc和H2O之間萃取(partition)。干燥有機層，并濃縮成殘渣，通過快速色譜在硅石上使用EtOAc/己烷純化，得到米白色固體的題述化合物(1.1g，4.9mmol，47％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.26(6H，t，J＝6.6Hz)，3.70(4H，m)，4.08(3H，s)，9.01(1H，s)；HPLC/MSMH+＝227。
實施例24 實施例23的產(chǎn)物(1.1g，4.9mmol)/MeOH/EtOAc(1∶1，20mL)用Pd/C(5％degussa，0.5g)和H2(50psi)在Parr振蕩器中還原過夜。過濾反應混合物，濾液減壓濃縮，得到固體的題述化合物(0.85g，4.3mmol，88.5％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.18(6H，t，J＝6.9Hz)，3.03(2H，br)，3.57(6H，t，J＝6.9Hz)，3.96(3H1s)，7.71(1H，s)；HPLC/MSMH+＝197。
實施例25 向含有實施例24的產(chǎn)物(0.85g，4.3mmol)的CH2Cl2(15mL)和TEA(1.4mL，10mmol)中加入異煙酰氯鹽酸化物(1.13g，6.3mmol)。15min后，TLC顯示沒有起始原料?；旌衔镌贓tOAc和飽和的NaHCO3之間進行萃取。水層用EtOAc沖洗兩次。合并的有機層用飽和的NaHCO3和鹽水沖洗。在MgSO4上干燥并過濾。濾液濃縮，得到褐色固體的題述化合物(1.3g，4.3mmol，100％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.20(6H，t，J＝6.9Hz)，3.60(4H，q，J＝6.9Hz)，3.96(3H，s)，7.72(2H，d，J＝6.0Hz)，7.75(1H，bs)，8.80(2H，d，J＝6.0Hz)，8.89(1H，s)；HPLC/MSMH+＝302。
實施例26 向?qū)嵤├?5的產(chǎn)物(100mg，0.33mmol)/THF(1mL)中加入KOtBu/THF(1M，0.5mL)，然后緩慢地加入EtI(40μL，0.5mmol)。反應混合物在室溫下攪拌過夜。TLC顯示起始原料消失?；旌衔镌贓tOAc和H2O之間進行萃取。水層用EtOAc沖洗。合并的有機層用飽和的NaHCO3和鹽水沖洗。干燥濃縮，得到題述化合物(90mg，0.27mmol，83％)，該化合物不需進一步純化就可以使用。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.10(9H，m)，3.47(5H，m)，3.92(1H，m)，7.14(2H，d，J＝6.0Hz)，7.78(1H，bs)，8.44(2H，d，J＝6.0Hz)；HPLC/MSMH+＝330。
實施例27 向?qū)嵤├?6的產(chǎn)物(200mg，0.61mmol)/DMF(4mL)中加入EtSNa(66mg，0.79mmol)，反應混合物在100℃加熱1hr。LC/MS顯示仍有起始原料存在。加入另一部分NaSEt(66mg，0.79mmol)，反應繼續(xù)加熱2hr。LC/MS顯示僅有產(chǎn)物。減壓去除DMF，加入水(10mL)，然后加入濃HCl(0.132mL)。蒸發(fā)溶劑，得到殘渣。該殘渣溶解在EtOH中，并過濾。濃縮濾液，得到題述化合物(190mg，100％)，該化合物不需進一步純化就可以使用。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ1.24(9H，m)，3.60(4H，m)，3.60-4.00(2H，br)，8.12(3H，d，J＝5.7Hz)，8.92(2H，d，J＝5.7Hz)；HPLC/MSMH+＝316。
實施例28 向?qū)嵤├?7的產(chǎn)物(70mg，0.22mmol)/POCl3(3mL)中在室溫下加入二乙酰胺(30μL)。反應混合物加熱至100℃，持續(xù)30min。然后濃縮。殘渣在EtOAc和H2O之間進行萃取。有機層用H2O沖洗兩次，然后干燥，濃縮得到，題述化合物(50mg，0.15mmol，68％)，該化合物不需進一步純化就可以用于下一反應中。HPLC/MSMH+＝334。
實施例29 向含有實施例28的產(chǎn)物(50mg，0.15mmol)和實施例8的產(chǎn)物(60mg，0.17mmol)的IPA(0.75mL)溶液中加入DIEA(0.15mL，0.8mmol)。反應混合物在密封管中在130℃攪拌7天。將粗混合物濃縮，殘渣通過制備性HPLC和硅膠快速色譜純化，得到米白色的固體(10mg)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.10-1.30(9H，m)，1.48(4.5H，s)，1.51(4.5H，s)，2.80-3.38(3H，m)，3.53(4H，m)，4.05-4.30(1H，m)，4.83(0.5H，m)，4.96(0.5H，m)，5.15-5.50(1H，m)，6.95-7.10(2H，m)，7.25-7.50(5H，m)，7.69(0.5H，d，J＝8.4Hz)，7.76(0.5H，d，J＝8.4Hz)，8.08(1H，d，J＝5.1Hz)，8.51(2H，m)，8.83(0.5H，br)，8.95(0.5H，br)；HPLC/MSMH+＝652。
實施例30 化合物25(20g，0.11mol)在N2中溶解在CH2Cl2(500mL)中。反應混合物冷卻至0℃。加入三乙胺(18.12mL，0.13mol)，然后逐部分加入三氟乙酸酐(18.14mL，0.13mol)。反應加熱至室溫過夜。反應混合物真空濃縮，殘渣投入進乙酸乙酯(200mL)中。有機相用H2O、飽和的NaHCO3、鹽水沖洗，在Na2SO4上干燥、過濾，真空濃縮，得到29.7g(96％)黃色固體的29。1H NMR(CDCl3)δ3.64-3.60(m，2H)，3.55-3.53(m，2H)，3.49-3.45(m，4H)，1.44(s，9H)。13C NMR(CDCl3)δ155.7(JC-F＝36Hz)，154.3，116.4(JC-F＝288HZ)，80.8，45.7，43.3，28.3。
在0℃將化合物29(29.26g，0.10mol)逐部分地加入進500mL含有4N HCL/二噁烷(200mL)溶液的燒瓶中。反應在冰浴中攪拌4小時，直至TLC(3∶1的己烷∶乙酸乙酯)顯示100％轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。反應混合物真空濃縮，用乙醚(500mL)處理。過濾產(chǎn)物，干燥，得到22.5g(99％)的化合物30(白色單鹽酸鹽)。1H NMR(DMSO-d6)δ3.82-3.79(m，4H)，3.53(s，1H)，3.18-3.16(m，4H)。13C NMR(DMSOd6)δ154.3(JC-F＝35Hz)，115.9(JC-F＝289HZ)，66.1，42.0，41.9，41.5。
向250mL燒瓶中投入化合物30(1.0g，4.6mmol)、CH2Cl2(40mL)和飽和的NaHCO3(40mL)。反應混合物在0℃劇烈攪拌15分鐘。停止攪拌，使各層分離。2.0M碳酰氯/甲苯(9mL，18mmol)加入至反應混合物中，劇烈攪拌30分鐘，將溫度保持在0℃。分離各層，水相用CH2Cl2(15mL)沖洗。合并的有機層用鹽水沖洗，在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮。殘渣投入CH2Cl2中，再次真空濃縮，得到1.0g(92％)白色固體的化合物31。MS(m/z)245，(M+H)+。1H NMR(CDCl3)δ3.80-3.68(m，8H)。13C NMR(CDCl3)δ155.9(JC-F＝37HZ)，148.7(JC-F＝12HZ)，116.3(JC-F＝289Hz)，48.3，47.8，45.7，45.3，45.1，42.9，42.7。
向25mL燒瓶中投入化合物24(5.97g，0.011mol)、DMAP(1.34g，0.011mol)和CH2Cl2(22mL)。加入三乙胺(2.4mL，0.017mol)，然后加入31(4.2g，0.017mol)。反應混合物加熱回流20小時。反應混合物真空濃縮，殘渣投入至乙酸乙酯中。有機相用飽和的NaHCO3、H2O、鹽水沖洗，在Na2SO4干燥，過濾，真空濃縮，得到9.3g粉紅色泡沫。粗原料通過快速色譜(50％乙酸乙酯/己烷至75％乙酸乙酯/己烷的梯度)純化，得到6.1g(76％)淡粉紅色泡沫的化合物32。Rf＝0.14(1∶1己烷∶乙酸乙酯)。MS(m/z)730，(M+H)+。1H NMR(CDCl3)δ9.08-9.07(m，1H)，8.87-8.85(m，1H)，8.16-8.14(m，1H)，7.52-7.48(m，1H)，7.25-7.22(d，2H)，7.03-7.00(d，2H)，6.91-6.88(d，1H)，4.78-4.70(q，1H)，4.60-4.44(dd，2H)，3.88(s，1H)，3.75-3.60(m，8H)，3.09-3.06(m，2H)，1.42(s，9H)，1.18(s，3H)，1.16(s，3H)。
向溶解在MeOH(90mL)中的32(6.11g，8.4mmol)溶液中加入碳酸鉀(5.79g，42mmol)/H2O(10mL)溶液。反應在室溫下攪拌15分鐘，然后真空濃縮。過濾殘渣，用大量的水沖洗，得到4.65g(88％)白色固體的化合物33。Rf＝0.08(5％MeOH/CH2Cl2)。MS(m/z)634，(M+H)+。1H NMR(CDCl3)δ9.09-9.08(m，1H)，8.87-8.85(m，1H)，8.16-8.14(m，1H)，7.52-7.48(m，1H)，7.23-7.20(d，2H)，7.03-7.00(d，2H)，6.91-6.88(d，1H)，4.78-4.70(q，1H)，4.59-4.46(dd，2H)，3.89(s，1H)，3.65-3.50(m，4H)，3.09-3.06(m，2H)，2.92-2.88(m，4H)，1.43(s，9H)，1.19(s，3H)，1.17(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ170.1，167.9，154.5，153.9，150.7，148.8，136.0，133.4，133.2，130.6，124.1，121.9，83.0，73.9，55.0，53.7，50.7，46.0，45.7，45.0，37.9，29.3，28.0，24.0。
向250mL燒瓶中投入化合物33(2.5g，3.9mmol)、CH2Cl2(40mL)和飽和的NaHCO3(40mL)。反應混合物在0℃劇烈攪拌15分鐘。停止攪拌，使各層分離。2.0M碳酰氯/甲苯(7.9mL，16mmol)溶液迅速加入至反應混合物中，劇烈攪拌60分鐘，將溫度保持在0℃。分離各層，用CH2Cl2(30mL)沖洗水相。合并的有機層用0.2N檸檬酸、鹽水沖洗，在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮得到2.8g(100％)白色泡沫。粗原料通過硅石填料純化，用100％乙酸乙酯洗脫，得到2.2g(78％)白色泡沫的化合物40。Rf＝0.43(3∶1乙酸乙酯∶己烷)。1H NMR(CDCl3)δ9.09-9.08(m，1H)，8.87-8.85(m，1H)，8.16-8.14(d，1H)，7.52-7.48(m，1H)，7.25-7.22(d，2H)，7.03-7.01(d，2H)，6.90-6.88(d，1H)，4.78-4.70(q，1H)，4.60-4.45(dd，2H)，3.88(s，1H)，3.79-3.65(m，8H)，3.10-3.07(m，2H)，1.43(s，9H)，1.18(s，3H)，1.17(s，3H)。13C NMR(CDCl3)δ169.9，167.9，154.1，153.6，150.2，148.5，136.1，133.8，130.6，124.2，121.7，82.9，73.7，54.8，53.8，50.6，48.3，45.8，37.7，29.2，27.9，23.9。
實施例31A.氨基甲酸酯連接的雙-PEG共軛物叔丁酯的合成 方案16根據(jù)由WO 92/16555改良的方法制備氨基甲酸酯連接的共軛物，該專利申請在此引入作為參考文獻。因此，將6kDa PEG二醇(500mg，0.083mmol)溶解在最少量的CH2Cl2(0.1mL)中。向其中加入2.0M碳酰氯/甲苯(0.6mL，1.2mmol)溶液。反應混合物在室溫下攪拌18小時，然后真空濃縮，得到500mg(100％)白色固體6kDa PEG二氯甲酸酯。33(211mg，0.33mmol)/CH2Cl2(3mL)(參見實施例30)溶液加入至溶解在CH2Cl2(2mL)中的6kDa PEG二氯甲酸酯(500mg，0.08mmol)中。加入三乙胺(11μL，0.08mmol)，反應混合物在室溫下攪拌18小時。反應混合物真空濃縮，殘渣溶解在MeOH(10mL)中。加入2％交聯(lián)的聚苯乙烯磺酸樹脂(410mg)，反應容器渦流旋轉(zhuǎn)2小時。過濾混合物，濾液真空濃縮，得到500mg(87％)的白色固體。一部分原料(246mg)通過HPLC純化，得到156mg白色固體的6kDaPEG雙-共軛物叔丁酯。HPLC測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝9.655min)。1H NMR(CDCI3)δ9.07(bs，2H)，8.86-8.84(m，2H)，8.18-8.15(d，2H)，7.53-7.48(m，2H)，7.22-7.19(d，4H)，7.03-6.99(d，4H)，6.86-6.83(d，2H)，4.73-4.70(m，2H)4.58-4.44(dd，4H)，4.27-4.24(m，4H)，3.62(bs，621H)，3.40-3.37(m，6H)，3.07-3.05(m，4H)，1.41(s，18H)，1.20-1.16(d，12H)。
B.氨基甲酸酯連接的雙-PEG共軛物的合成純化的6kDa氨基甲酸酯連接的雙-PEG共軛物叔丁酯(100mg，0.01mmol)溶解在甲酸(5mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮。殘渣溶解在水中，真空濃縮，再次溶解在水中，凍干，得到100mg(100％)白色粉末的6kDa的氨基甲酸酯連接的雙-PEG共軛物羧酸。HPLC測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝7.63min)。1H NMR(CDCI3)δ9.06(bs，2H)，8.84-8.83(m，2H)，8.17-8.14(d，2H)，7.53-7.49(m，2H)，7.24-7.21(d，4H)，7.02-6.99(d，4H)，6.94-6.92(d，2H)，4.81-4.79(m，2H)，4.57-4.48(dd，4H)，4.28-4.25(m，4H)3.64(bs，621H)，3.41-3.38(m，6H)，3.23-3.08(m，4H)，1.23-1.18(d，12H)。
實施例32A.氨基甲酸酯連接的8-PEG共軛物叔丁酯的合成Nektar cat.no.0J00T08 8-臂PEGMW 40kDa 方案17使用上述實施例31中使用的方法，并使用8PEG化的中心分子制備題述化合物。
實施例33
硝基苯酯(101) 含有化合物100(100mg，0.14mmol)和4-硝基酚(24mg，0.17mmol)的THF(0.7mL)溶液在冰浴中冷卻。加入EDC(33mg，0.17mmol)在CH2Cl2(0.7mL)中的懸液，反應在0℃攪拌4小時。反應用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用0.2N檸檬酸沖洗。有機層用10％K2CO3、鹽水沖洗，在Na2SO4上干燥，過濾，真空濃縮，得到90mg(96％)的化合物101，該化合物可立即使用。1H NMR(CDCl3)δ9.07(bs，1H)，8.84-8.83(d，1H)，8.28-8.25(d，2H)，8.16-8.14(d，1H)，8.09-8.07(d，1H)，7.65-7.63(d，2H)，7.51-7.47(dd，1H)，7.41-7.39(d，2H)，7.36-7.35(d，2H)，7.12-7.07(m，1H)，6.95-6.92(d，1H)，5.00(s，2H)，4.82-4.76(m，1H)，4.62-4.45(dd，2H)，3.91(s，1H)，3.18-3.12(m，2H)，1.44(s，9H)，1.18-1.16(d，6H)。
40kDa Boc-保護的PEG二胺30kDa PEG二胺(1g，0.033mmol)和5kDa Boc-NH-PEG-NHS酯(0.67g，0.13mmol)溶解在CH2Cl2(10mL)中。加入二異丙基乙胺(0.116mL，0.67mmol)，反應在室溫下攪拌8小時。反應物真空濃縮，得到粗產(chǎn)物。殘渣根據(jù)HPLC B法純化，得到0.46g白色固體的40kDa Boc-保護的PEG二胺。HPLC C法測定產(chǎn)物純度＞96％(保留時間＝7.6分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ6.75(bs，2H)，5.15(bs，2H)3.64(s，2940H，PEG)，3.33-3.31(m，10H)，2.47-2.43(m，4H)，1.44(s，18H)。
40kDa PEG二胺40kDa Boc-保護的PEG二胺(0.2g，0.005mmol)溶解在TFA(4mL)中，并在室溫下攪拌2小時。反應物真空濃縮，得到200mg(100％)米色的粗40kDa PEG二胺殘渣。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞96％(保留時間＝6.5分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ7.85(bs，1H)，6.75(bs，1H)，3.64(s，2432H，PEG)，3.34-3.32(m，10H)，2.47-2.45(m，4H)。
叔丁酯(102)40kDa PEG二胺(0.2g，0.005mmol)溶解在CH2Cl2(4mL)中。加入二異丙基乙胺(17μL，0.1mmol)，然后加入化合物101(0.082g，0.1mmol)。加入另一部分二異丙基乙胺(17μL)，反應在室溫下攪拌18小時。反應物真空濃縮，得到300mg(150％)白色固體的粗化合物102。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞70％(保留時間＝8.9分鐘)。粗產(chǎn)物就可以使用。
共軛物103化合物102(0.3g，0.007mmol)溶解在甲酸(5mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化，得到0.14g(68％)白色固體的化合物103。HPLC C法測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝7.3分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.05(bs，2H)，8.82-8.81(m，2H)，8.17-8.14(d，2H)，8.05-8.04(d，2H)，7.65-7.58(m，4H)，7.54-7.48(m，2H)，7.41-7.34(d，4H)，7.10-7.05(m，2H)6.95-6.93(d，2H)，4.90(m，2H)，4.63-4.49(m，6H)，3.64(bs，3042H，PEG)，3.35-3.29(m，6H)，3.22(m，5H)，2.45-2.41(t，4H)，1.79-1.74(m，4H)11.29-1.27(d，12H)。
實施例34

聚合物的合成 40kDa Boc-保護的PEG四胺20kDa PEG四胺(0.5g，0.025mmol)和5kDa Boc-NH-PEG-NHS酯(1g，0.2mmol)溶解在CH2Cl2(5mL)。加入二異丙基乙胺(0.087mL，0.5mmol)，反應在室溫下攪拌18小時。反應物真空濃縮，投入MeOH(10mL)中。加入2％交聯(lián)的苯乙烯磺酸樹脂(1.17g)，反應容器渦流旋轉(zhuǎn)2小時。混合物過濾，真空濃縮，得到1.4g米色固體的粗產(chǎn)物。殘渣根據(jù)HPLC B法純化，得到0.44g(44％)白色固體的40kDa Boc-保護的PEG四胺。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞96％(保留時間＝8.4分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ6.75(bs，1H)，5.15(bs，1H)，3.64(s，2970H，PEG)，3.33-3.29(m，15H)，2.46-2.42(t，8H)，1.79-1.75(m，8H)，1.44(s，36H)。
40kDa PEG四胺40kDa Boc-保護的PEG四胺(0.1g，0.0025mmol)溶解在TFA(4mL)中，在室溫下攪拌1.5小時。反應物真空濃縮，得到120mg 40kDa透明的PEG四胺殘渣。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞96％(保留時間＝6.2分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ7.39(bs，1H)，6.75(bs，1H)，4.49-4.48(m，4H)，3.64(s，3253H，PEG)，3.35-3.33(m，15H)，2.49-2.46(m，8H)，1.80-1.75(m，8H)。
叔丁酯(104)40kDa PEG四胺(0.1g，0.0025mmol)溶解在CH2Cl2(2mL)中。加入二異丙基乙胺(9μL，0.05mmol)，然后加入化合物101(82mg，0.1mmol)。加入另一部分二異丙基乙胺(9μL)，反應在室溫下攪拌48小時。反應物真空濃縮，得到110mg白色固體的粗化合物104。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞80％(保留時間＝10.9分鐘)。
共軛物105化合物104(0.1g，0.0024mmol)溶解在甲酸(5mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化，得到0.05g(48％)白色固體的化合物105。HPLC C法測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝7.6分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.06(bs，4H)，8.83-8.82(m，4H)，8.20-8.17(d，4H)，8.05-8.03(d，4H)，7.63-7.61(m，8H)，7.53-7.49(m，4H)，7.42-7.33(m，8H)，7.09-7.05(m，4H)6.70(m，4H)，4.84(m，4H)，4.62-4.50(m，12H)，3.64(bs，2357H，PEG)，3.36-3.29(m，12H)，2.46-2.42(t，8H)，1.79-1.74(m，8H)，1.30-1.25(m，24H)。
實施例35
叔丁酯(106)40kDa PEG四胺(37mg，0.000925mmol)和DMAP(0.5mg，0.0037mmol)溶解在CH2Cl2(0.5mL)中。加入三乙胺(3μL，0.019mmol)，然后加入化合物40(26mg，0.037mmol)。加入另一部分三乙胺(3μL)，反應在室溫下攪拌18小時。反應物真空濃縮，得到34mg白色固體的粗化合物106。HPLC C法測定產(chǎn)物的純度＞80％(保留時間＝10.9分鐘)。
共軛物107化合物106(34mg，0.0008mmol)溶解在甲酸(4mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化，得到17mg(50％)白色固體的化合物107。HPLC C法測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝7.6分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.06(bs，4H)，8.86(bs，4H)，8.17-8.15(d，4H)，7.52(d，4H)，7.26-7.23(d，8H)，7.02-6.99(d，8H)，6.72(m，4H)，5.69(m，4H)14.80(m，4H)，4.60-4.47(dd，8H)，3.64(bs，1602H，PEG)，3.36-3.30(dd，8H)，3.16(m，8H)，2.46-2.42(t，8H)，1.24(bs 24H)。
實施例36
40kDa PEG四氯甲酸酯40kDa 4-臂PEG醇(0.2g，0.005mmol)溶解在CH2Cl2(1mL)中。向其中加入2.0M碳酰氯/甲苯(0.15mL，0.3mmol)溶液。反應在室溫下攪拌18小時。反應物真空濃縮，得到200mg 40kDa白色固體的PEG四氯甲酸酯。
叔丁酯(108)40kDa PEG四氯甲酸酯(0.2g，0.005mmol)溶解在CH2Cl2(2mL)中。向其中加入化合物33(63mg，0.1mmol)，然后加入三乙胺(3.5μL，0.025mmol)。反應在室溫下攪拌72小時。反應物真空濃縮，得到270mg白色固體的化合物108。
共軛物109化合物108(0.26g，0.006mmol)溶解在甲酸(5mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化，得到0.105g(42％)白色固體的化合物109。HPLC C法測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝8.3分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.06(bs，4H)，8.85-8.84(m，4H)，8.17-8.14(d，4H)，7.53-7.49(m，4H)，7.26-7.22(d，8H)，7.01-6.98(d，8H)，4.81-4.78(m，4H)，4.59-4.46(dd，8H)，4.28-4.35(m，8H)，3.64(bs，3872H，PEG)，3.15-3.13(m，8H)，1.24-1.19(m，24H)。
實施例37 叔丁酯(111)40kDa 3-臂PEG醇(0.25g，0.00625mmol)、化合物110(0.04g，0.056mmol)和三苯基膦(0.025g，0.094mmol)通過共沸蒸餾從甲苯(5mL)中干燥。一半體積被蒸餾掉(2.5mL)，混合物冷卻至室溫。加入CH2Cl2(0.5mL)使反應物成為均相的混合物。逐滴加入偶氮二甲酸二乙酯(Diethylazodicarboxylate)(0.015mL，0.094mmol)，反應攪拌48小時。HPLC C法顯示初始PEG醇完全消失。反應物真空濃縮得到白色固體的叔丁酯111。
共軛物112化合物111(0.2g，0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化，得到0.1g(48％)白色固體的化合物112。HPLC C法測定共軛物的純度＞99％(保留時間＝8.1分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.08(bs，3H)，8.84(bs，3H)，8.18-8.16(d，3H)，8.02-8.00(d，3H)，7.67-7.61(m，6H)，7.47-7.38(m，9H)，7.08-7.04(m，3H)，6.91(m，3H)，4.88(m，3H)，4.62-4.49(dd，6H)，4.13(m，6H)，3.64(bs，5919H PEG)，3.23(m，6H)，1.25-1.24(d，18H)。
類似的方法用于合成下述共軛物實施例38 40kDa 4-臂PEG醇與化合物110偶聯(lián)，并使用與化合物112相似的方法去保護成為終產(chǎn)物。根據(jù)HPLC A法純化產(chǎn)物。HPLC C法測定共軛物的純度＞95％(保留時間＝7.5-8.1分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ9.08(bs，4H)，8.84(bs，4H)，8.18-8.16(d，4H)，8.02-8.00(d，4H)，7.67-7.61(m，8H)，7.47-7.38(m，12H)，7.08-7.04(m，4H)，6.91(m，4H)，4.88(m，4H)，4.62-4.49(dd，8H)，4.13(m，8H)，3.64(bs，10101H PEG)，3.23(m，8H)，1.25-1.24(d，24H)。
實施例39 40kDa 3-臂PEG醇與叔丁酯114(如下所示)偶聯(lián)，使用與化合物112相似的方法去保護成為終產(chǎn)物。根據(jù)HPLC A法純化產(chǎn)物。HPLCC法測定共軛物的純度＞95％(保留時間＝7.3分鐘)。1H NMR(CDCl3)δ8.66(bs，3H)，8.44(bs，3H)，8.04-8.02(d，3H)，7.75-7.30(m，24H)，7.10-7.06(m，3H)，6.93(s，3H)，5.60-5.50(m，3H)，4.15(m，6H)，3.66(bs，4270H PEG)，3.00(m，3H)，3.40-3.20(m，6H)，1.27(d，9H)。

實施例40 叔丁酯(117)40kDa 3-臂PEG醇(0.00625mmol)、化合物116(0.056mmol)和三苯基膦(0.094mmol)通過共沸蒸餾從甲苯(5mL)中干燥。一半體積被蒸餾掉(2.5mL)，混合物冷卻至室溫。加入CH2Cl2(0.5mL)，使反應物成為均相的混合物。逐滴加入偶氮二甲酸二乙酯(0.094mmol)，反應攪拌48小時。反應物真空濃縮得到叔丁酯111。
共軛物118化合物118(0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40℃加熱24小時。反應物真空濃縮，根據(jù)HPLC A法純化得到化合物112。
實施例41使用實施例的29產(chǎn)物和在實施例38和39中使用的PEG聚合物，制備下述共軛物 下表V和VI中的共軛物是根據(jù)本文所述的實施例和制備方案制備的。
表V

其中，在每一個結(jié)構(gòu)中，所有p的總和為200至1360。
表VI

生物學實施例實施例A測定候選化合物效力的體外測定在Jurkat TM(15/7LIBS)上的15/7抗原表位對數(shù)生長期的Jurkat TM細胞在下述條件下在96孔Flexiplate板中孵育(incubate)105個細胞/100μl/孔，在含有10μg/ml的15/7(Elan)和一定濃度范圍的化合物的測定緩沖液(20mM Hepes、140mM NaCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2和0.3％BSA)中。孵育在室溫下進行30分鐘。然后將細胞用測量緩沖液沖洗2次，并與1∶200的羊Fab′2抗Ms IgG(Fc)-PE(Immunotech cat#PN IM0551)在測定緩沖液中在暗處冰上孵育30分鐘。然后將細胞沖洗一次，重新懸浮在300μl的冷測定緩沖液中，進行FACS分析(Becton-Dickinson)。
多價配體競爭測定(MVCOMP)方法整合素受體通過與其特異配體的多價作用介導細胞粘附——多重整合素受體與粘附性基質(zhì)內(nèi)的多個配體分子同時結(jié)合。為在高度敏感的定量測定中模擬這種生理學作用，開發(fā)了多價配體探針，該探針可以與淋巴細胞上的a4整合素特異地結(jié)合。該探針由a4整合素的小分子配體、化合物200(結(jié)構(gòu)如下所示)組成，以6-10倍的過量摩爾數(shù)與鼠IgG共軛結(jié)合(6-10小分子1 IgG)。這種結(jié)合可以被21/6和a4抗體抑制。一旦與細胞表面結(jié)合，通過FACS分析可以通過熒光素標記的鼠IgG二抗測定到共軛物。在本測定中，使用了兩種不同的鼠單克隆IgG載體分子，TM2a和27/1，除非與a4配體共軛結(jié)合，否則這兩種抗體都不與人淋巴細胞結(jié)合。
小分子-抗體試劑的共軛作用大約1mg TM2a或27/1(Elan)抗體與1∶6或1∶10過量摩爾數(shù)的化合物200在50倍過量摩爾數(shù)的[雙(磺基琥珀酰亞胺)辛二酸酯](Pierce)的存在下以總體積1.0ml在室溫下孵育60分鐘，并攪拌。然后用含胺緩沖液TRIS-Cl(pH 7.5)中止反應20分鐘。產(chǎn)物在4,000體積的PBS中在4℃下在10KD截斷MW(cutoff)膜盒透析2次以去除未結(jié)合的小分子和連接試劑。
競爭結(jié)合測定Jurkat細胞(亞系TM，亞克隆#15，Elan)與滴定的多種檢測化合物在以1∶100在測定緩沖液中稀釋的TM2a或27/1共軛物的存在下室溫孵育30分鐘。然后通過幾次沖洗步驟去除未結(jié)合的試劑，其中在Beckman臺式離心機中以300×g將細胞沉淀5分鐘，然后重新懸浮在新鮮的緩沖液中。將細胞與羊F(ab)′2抗鼠IgG(Fc)-藻紅蛋白(BeckmanCoulter)在4℃孵育30分鐘檢測剩余的結(jié)合抗體，然后沖洗，進行FACS分析。
在8866細胞上的2G3抗原表位誘導(2G3配體誘導的結(jié)合位點)對數(shù)生長期的8866細胞在下列條件下在96孔Flexiplate板中孵育105個細胞/100μl/孔，在含有10μg/ml 2G3(Elan)和一定濃度化合物的測定緩沖液(PBS、1mM CaCl2、1mM MgCl2和5％FBS)中。在室溫下孵育30分鐘。然后細胞用測定緩沖液沖洗2次，與1∶200測定緩沖液稀釋的羊Fab′2抗Ms IgG(Fc)-PE(Immunotech cat#PNIM0551)在暗處冰上孵育30分鐘。然后沖洗細胞1次，重新懸浮在300μl冷測定緩沖液中以進行FACS分析(Becton-Dickinson)。
權(quán)利要求
1.一種式I的共軛物 B是生物相容性聚合物部分，其任選地共價連接到帶有支鏈臂的中心分子；q為大約2至大約100；A在每次出現(xiàn)時均獨立地為式II的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，J選自a)式(a)的基團 其中R31是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R31選自下述基團-H、R31′、-NH2、-NHR31′、-N(R31′)2、-NC3-C6環(huán)烷基、-OR31′和-SR31′，其中每一個R31′都獨立地是任選取代的直鏈或支鏈C1-C6烷基、任選取代的C3-C6環(huán)烷基、任選取代的芳基或者任選取代的雜芳基，且R32是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R32選自下述基團-H、-NO2、鹵代烷基和-N(MR41)R42，其中M是共價鍵、-C(O)-或-SO2-，且R41是R41′、N(R41′)2或-OR41′，其中每一個R41′都獨立地是氫、任選取代的直鏈或支鏈C1-C6烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳基，其中任選的取代基為鹵素、C1-C6烷基或-OC1-C6烷基，且R42是氫、R41′、炔基，或取代炔基；以及b)式(b)的基團 其中R選自下述基團氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；Ar1選自下述基團芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基，其中每一個芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基任選地共價連接到聚合物部分，其中所述的聚合物部分任選地包括將該聚合物部分與Ar1共價連接的連接子；Ar2選自下述基團芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、烷基、取代烷基、烷基氨基和取代烷基氨基，其中Ar2任選地共價連接到聚合物部分，其中所述的聚合物部分任選地包括將該聚合物部分與Ar2共價連接的連接子；X選自下述基團-NR1-、-O-、-S-、-SO-、-SO2和任選取代的-CH2-，其任選地共價連接到聚合物部分，其中，在每種情況下，所述的聚合物部分均任選地包括共價連接該聚合物部分的連接子；其中R1選自氫和烷基；T選自a)式(c)的基團 其中，Y選自-O-和-NR1-，其中R1選自氫和烷基；W選自與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵和-NR2R3，其中R2和R3獨立地選自氫、烷基、取代烷基，或者R2和R3與它們所連接的氮原子一起形成雜環(huán)或取代雜環(huán)，其中每一個烷基、取代烷基、雜環(huán)基和取代雜環(huán)基任選地與聚合物部分共價連接，該聚合物部分進一步任選地包括連接子；m是等于0、1或2的整數(shù)；n是等于0、1或2的整數(shù)；以及b)式(d)的基團 其中G是任選取代的芳基或任選取代的含有0至3個氮原子的雜芳基5或6元環(huán)，其中所述的芳基或雜芳基任選地進一步包括與聚合物部分相連接的共價鍵，該聚合物部分任選地包括連接子；R6是與任選地包括連接子的聚合物部分相連接的共價鍵，或者R6是-H、烷基、取代烷基或-CH2C(O)R17，其中R17是-OH、-OR18或-NHR18，其中R18是烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、雜芳基或取代雜芳基；R55是-OH或可水解的酯，或者R55與聚合物部分任選地通過連接子形成可水解的聚合物酯；條件是A.J、R55和T中的至少一個包含與聚合物部分相連接的共價鍵；B.當X是-O-，則m是2；和C.式I的共軛物的分子量不大于大約80,000。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中J、R55和T中僅有一個包含與聚合物部分相連接的共價鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中n是2，R在每次出現(xiàn)時都是C1-C3烷基，且兩個R基團都在相同的碳原子上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中q是2至大約20的整數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中q是2至大約8的整數(shù)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIa的化合物或其藥學可接受的鹽
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIb的化合物或其藥學可接受的鹽
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIc的化合物或其藥學可接受的鹽
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IId的化合物或其藥學可接受的鹽
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIe的化合物或其藥學可接受的鹽
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIf的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；R5選自烷基和取代烷基；且Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是下述化合物或其藥學可接受的鹽 R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接R5選自烷基和取代烷基；且Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基；且n是等于0、1或2的整數(shù)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是下式IIh的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接；且Ar3選自芳基、取代芳基、雜芳基和取代雜芳基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是式IIi的化合物或其藥學可接受的鹽
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的共軛物，其中m是1，X是S，且R在每次出現(xiàn)時都獨立地選自羥基、烷氧基、烷基或與聚合物部分相連接的共價鍵。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的共軛物，其中n是2，且R在兩次出現(xiàn)時都是甲基。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是下式IIj的化合物或其藥學可接受的鹽
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是下式IIk的化合物或其藥學可接受的鹽
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A在每次出現(xiàn)時都獨立地是下式IIL的化合物或其藥學可接受的鹽 其中，R4與任選地包括連接子的聚合物部分共價連接。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的共軛物，其中G是吡啶基，R31是氫或二烷基氨基，且R32是磺酰胺、酰胺或脲。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其中A和B如下所示 其中，Z是 ZZ是 ZZZ是 其中，所有p的總和為100至1360。
22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物，其選自下述化合物及其藥學可接受的鹽
23.一種藥學組合物，其包括藥學可接受的載體和治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物或其混合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于胃腸外給藥。
25.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受載體適用于皮下給藥。
26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于輸注給藥。
27.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于注射給藥。
28.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于口服給藥。
29.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于直腸給藥。
30.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于使用貼片給藥。
31.根據(jù)權(quán)利要求23所述的藥學組合物，其中所述的藥學可接受的載體適用于通過吸入給藥。
32.一種治療患者由于α4整合素-介導的白細胞粘附而引起或者至少部分由于上述原因而加重的疾病狀態(tài)的方法，該方法包括給予有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的被抑制的a4-結(jié)合作用是與VCAM-1的結(jié)合作用。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的被抑制的a4結(jié)合作用是與纖維連接蛋白的結(jié)合作用。
35.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的被抑制的a4結(jié)合作用是與MadCAM的結(jié)合作用。
36.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是自體免疫性疾病狀態(tài)。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的方法，其中所述的通過權(quán)利要求1的共軛物進行的治療，減輕了自體免疫反應引起的炎癥和隨之發(fā)生的組織損害。
38.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是多發(fā)性硬化癥、腦膜炎、腦炎、中風和其它腦外傷。
39.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是多發(fā)性硬化癥。
40.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)選自哮喘、成人呼吸窘迫綜合征和白細胞介導的急性肺損傷。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是哮喘。
42.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是類風濕性關(guān)節(jié)炎。
43.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是選自下述疾病的炎性疾病狀態(tài)結(jié)節(jié)性紅斑、變應性結(jié)膜炎、視神經(jīng)炎、眼葡萄膜炎、變應性鼻炎、強制性脊柱炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、血管炎、萊特爾氏綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、進行性全身性硬化癥、多發(fā)性肌炎、皮肌炎、Wegner氏肉芽腫、主動脈炎、類肉瘤病、淋巴細胞減少癥、顳動脈炎、心包炎、心肌炎、充血性心力衰竭、結(jié)節(jié)性多動脈炎、高敏反應綜合征、變態(tài)反應、嗜酸細胞過多綜合征、變應性肉芽腫性血管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性肺炎、慢性活動性肝炎、間質(zhì)性膀胱炎、自身免疫性內(nèi)分泌功能障礙、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性再生障礙性貧血、慢性遷延性肝炎和甲狀腺炎、AIDS癡呆癥、糖尿病、阿耳茨海姆氏病、癡呆癥、動脈粥樣硬化、腫瘤轉(zhuǎn)移和移植排斥。
44.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是干燥綜合征。
45.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是克隆氏病。
46.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是炎性腸病。
47.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的疾病狀態(tài)是潰瘍性結(jié)腸炎。
48.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的共軛物是α4β1和α4β7抑制劑。
49.一種藥學組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物和α4β7抑制劑。
50.一種治療患者由于α4整合素-介導的白細胞粘附而引起或至少部分由于上述原因而加重的疾病狀態(tài)的方法，該方法包括將有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的共軛物和有效量的α4β7抑制劑共同給藥。
全文摘要
本發(fā)明公開了與VLA－4結(jié)合的共軛物。這些共軛物中的某些化合物還能抑制白細胞的粘附，尤其是，VLA－4介導的白細胞粘附。這種共軛物可以用于治療哺乳動物患者(例如人)的炎性疾病，例如哮喘、阿耳茨海姆氏病、動脈粥樣硬化、AIDS癡呆癥、糖尿病、炎性腸病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、組織移植、腫瘤轉(zhuǎn)移和心肌缺血。這些共軛物還可以用于治療炎型腦病，例如多發(fā)性硬化癥。
文檔編號A61P37/00GK101035563SQ200580029853
公開日2007年9月12日 申請日期2005年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月8日
發(fā)明者A·W·康拉迪, M·A·普萊斯, C·M·謝姆科, T·耶德諾克, J·L·史密斯 申請人:艾倫藥物公司