專利名稱：：改進(jìn)的n4螯合劑綴合物的制作方法改進(jìn)的N4螯合劑綴合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及改進(jìn)的具有生物靶向分子的四胺螯合劑綴合物，該綴合物適于與放射性金屬99mTc形成金屬絡(luò)合物。該放射性金屬絡(luò)合物可用作""Tc放射性藥物。也提供了藥盒和前體。發(fā)明背景US5489425(DowChemical)公開了各種開鏈和大環(huán)官能化四胺螯合劑，其可用于絡(luò)合金屬，特別是放射性和非放射性銠絡(luò)合物，尤其是1G5Rh或1DlmRh放射性金屬絡(luò)合物。所公開的具體四胺包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>已經(jīng)描述了可用于與單克隆抗體或其片段綴合的雙官能螯合劑，供治療或診斷用。US5489425公開了(實(shí)施例21、22a和23)抗體-放射性金屬絡(luò)合螯合劑綴合物的制備方法先形成^Rh金屬絡(luò)合物，再與抗體反應(yīng)，最后進(jìn)行純化。US5489425沒有公開非絡(luò)合的抗體-螯合劑綴合物，即沒有配位的放射性金屬。US5489425沒有教導(dǎo)如何區(qū)別這樣的抗體綴合反應(yīng)中螯合劑的側(cè)鏈胺(pendantamine)與四個胺。US5489425聲稱雙官能螯合劑"也可用于絡(luò)合锝和錸，，，但沒有公開如何進(jìn)行，也沒有公開任何實(shí)際的锝絡(luò)合物。US$650134公開了一系列螯合劑的促生長素抑制素肽-螯合劑綴合物。實(shí)施例1描述了6-(對異硫氰酸基千基)-l，4,8,ll-四氮雜十一烷與奧曲肽(octreotide)的綴合。EP1181936Al公開了四胺螯合劑的鈴蟾肽(即十四肽)綴合物(是用雙官能螯合劑BBN-1和BBN-2制備的)及其99mTc絡(luò)合物B跳2BBN-1其中Boc=叔丁氧羰基保護(hù)基。據(jù)說99mTc絡(luò)合物能夠從鼠體內(nèi)經(jīng)腎臟和泌尿系統(tǒng)快速清除。然而，EP1181936Al對BBN-1或BBN-2的合成并未提供任何說明或參考，僅僅提供了將它們與鈴蟾肽N-端綴合的步驟。Nock等[Eur.丄Nucl.Med.,1Q(2),247-258(2003)]也已介紹了將BBN-2與鈴蟾肽綴合并用99mTc標(biāo)記，得到潛在的腫瘤造影用放射性藥物。與現(xiàn)有的鈴蟾肽-螯合物綴合物相比，據(jù)說99mTc絡(luò)合物能得到改進(jìn)的親水性，因此有望促進(jìn)經(jīng)腎臟和泌尿系統(tǒng)的排泄。Maina等介紹了將BBN-1與奧曲肽綴合并用99mTc標(biāo)記，得到潛在的腫瘤造影用放射性藥物，用于人類患者[Eur.J.Nucl.Med.,2^(9),1211-1219(2003)]。上述BBN-l或BBN-2的出版物都未能提供BBN-1或BBN-2的任何合成方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了具有生物靶向部分并通過連接基團(tuán)連接的四胺螯合劑綴合物及其锝絡(luò)合物，它們用作放射性藥物。連接基團(tuán)是使得螯合劑在橋頭位置單官能化并且提供柔韌性和芳基缺乏，使親脂性和空間體積最小化。提供了螯合劑的合適保護(hù)形式，使其可以與各種各樣的耙向分子綴合，而不干擾與四胺螯合劑的胺氮反應(yīng)。描述了官能化螯合劑的合成以及雙官能螯合物前體。描述了包含本發(fā)明的锝金屬絡(luò)合物的放射性藥物組合物，以及用于制備這類放射性藥物的非放射性藥盒。發(fā)明詳述在第一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式(I)的陽離子""Tc锝絡(luò)合其中X為-NR-、-C02-、-CO國、-NR(C=S)-、-NR(C=0)-、-CONR國或Q基團(tuán)；每個Y獨(dú)立地為D-氨基酸、丄-氨基酸、-CH2-、-(^120012-或-OCH2CH20-或X基團(tuán)；Z為合成生物靶向部分；(CH2)n-X-(Y)m-Zn為1-8的整凄史；m為0-30的整數(shù)；R為H、Cw烷基、C^烷氧基烷基、CM羥基烷基或C,4氟代烷基；Q為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>A為抗衡離子；前提條件是XL(Y)m鏈中的原子缺乏鍵，其中一個雜原子直接與另一個雜原子鍵合。锝放射性同位素可以是適于PET造影的Y-發(fā)射體(例如""Tc)或正電子發(fā)射體(例如94mTc)。優(yōu)選的锝放射性同位素是99mTc或94mTc，最優(yōu)選""Tc。X優(yōu)選為-CONR-、-NR(C-O)-或Q基團(tuán)。X最優(yōu)選為-CONR-或-NR(C=0)-，其中特別優(yōu)選-CONH-和-NH0X3)-。選擇式I的連接基團(tuán)-(CH2VX-(Y)m-,使得義-(Y)m鏈中的原子缺乏鍵，其中一個雜原子直接與另一個雜原子鍵合，其中術(shù)語"雜原子"是指非碳原子，例如氮、氧或硫。這意味著鏈中缺乏O-O、N-N或O-N等鍵。人們認(rèn)為，式I的連接基團(tuán)-(CH2)n-X-(Y)m-的作用是將锝絡(luò)合物與體內(nèi)生物靶向部分(z)的活性結(jié)合部位間隔開。這有助于確保相對龐大的锝絡(luò)合物在空間上不會阻礙與體內(nèi)活性部位的結(jié)合。亞烷基-(CH2)n-的優(yōu)勢是與綴合的生物靶向部分(Z)沒有明顯的氫鍵相互作用，使得連接基不會包裹在Z上。優(yōu)選的亞烷基的n=1-6，最優(yōu)選2-4,其中特別優(yōu)選2。本發(fā)明的連接基團(tuán)缺乏芳環(huán)。這有助于盡量降低锝絡(luò)合物+連接基團(tuán)的親脂性，該連接基團(tuán)與綴合物的生物耙向部分(z)結(jié)合。連接基團(tuán)(以及锝絡(luò)合物)的空間體積和分子量也要最小化，同時保持鍵的柔韌性。連接基團(tuán)的特性也可用于改變造影劑的生物分布。因此，例如將醚基團(tuán)引入-(Y)m-將有助于使血漿蛋白結(jié)合最小化。當(dāng)-(Y)m-包括聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)單元或1-10個氨基酸殘基的肽鏈時，連接基團(tuán)可起到在體內(nèi)改變造影劑的藥代動力學(xué)和血液清除率的作用。這類"生物改性劑，，連接基團(tuán)有助于將锝造影劑從背景組織(例如肌肉或肝臟)和/或從血液中清除出去，因而得到更好的診斷影像，因?yàn)榻档土吮尘案蓴_。生物改性劑連接基團(tuán)也可用于促進(jìn)特定的排泄途徑，例如通過腎臟，而不是肝臟?；蛘撸鼈兛裳娱L血液滯留時間，允許更多造影劑在體內(nèi)靶部位蓄積。當(dāng)-(Y)f包含氨基酸殘基肽鏈時，這些氨基酸殘基優(yōu)選選自甘氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或絲氨酸。肽鏈中氨基酸的數(shù)量優(yōu)選為1-10，最優(yōu)選l-3。當(dāng)-(Y)m-包含PEG部分時，它優(yōu)選包含式(-0(^20"120-、的基團(tuán)，其中w為3-25的整數(shù)。整數(shù)w優(yōu)選為6-22。一個特別優(yōu)選的含PEG的-(Y)m-基團(tuán)是衍生自單分散性PEG樣結(jié)構(gòu)聚合的單元，即下式IV的17-氨基-5-氧代-6-氮雜-3,9,12，15-四氧雜十七烷酸0o(IV)其中p為1-10的整數(shù)。術(shù)語"氟代烷基"是指具有至少一個氟取代基的烷基，即該術(shù)語包括從一氟代烷基(例如-CH2F)至全氟代烷基(例如CF3)的基團(tuán)。-(Y)m-基團(tuán)優(yōu)選包括二乙醇酸部分、馬來酰亞胺部分、戊二酸、琥珀酸、基于聚乙二醇的單元或式IV的PEG樣單元。術(shù)語"合成"是指該術(shù)語的常規(guī)含義，即人造的，而不是從天然來源(例如哺乳動物體內(nèi))分離得到的。這類化合物的優(yōu)勢是可以完全控制它們的制備和雜質(zhì)分布型。因此，單克隆抗體及其片段未落入本發(fā)明權(quán)利要求書的范圍。術(shù)語"生物靶向部分"是指3-100聚體肽或肽類似物，其寸以是線狀肽或環(huán)狀肽或其組合；或酶底物、酶拮抗劑或酶抑制劑；合成受體-結(jié)合化合物；寡核苷酸或寡DNA或寡RNA片段。術(shù)語"環(huán)肽"是指兩個末端氨基酸通過共價鍵連接在一起的5-15個氨基酸的序列，該共價鍵可以是肽鍵或二硫鍵或合成非肽鍵(例如硫醚鍵、磷酸二酯鍵、二曱硅醚鍵或尿烷鍵)。術(shù)語"氨基酸"是指丄-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸類似物或氨基酸模擬物，它們可以任選是旋光純的(即為單一對映體，因此為手性的)或?yàn)閷τ丑w的混合物。優(yōu)選的本發(fā)明氨基酸是旋光純的。術(shù)語"氨基酸模擬物"是指天然存在氨基酸的合成類似物，它們是等構(gòu)物，即經(jīng)設(shè)計以模擬天然化合物的空間和電子結(jié)構(gòu)。這類等構(gòu)物是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，包括但不限于縮肽類、逆-倒位肽類(retro-inversopeptides),硫代酰胺類、環(huán)烷烴類或1,5-二取代的四峻[參見M.Goodman,Biopolymers，24,137,(1985)]。用于本發(fā)明的合適肽包括-促生長素抑制素、奧曲肽和類似物。-與ST受體結(jié)合的肽，其中ST是指由大腸桿菌(5.co/Z)和其它^(敬生物產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素；-層粘連蛋白片段，例如YIGSR、PDSGR、IKVAV、LRE和KCQAGTFALRGDPQG，-輩巴向白細(xì)胞累積部位的N-曱?；模?血小板因子4(PF4)及其片段，-含有RGD(Arg-Gly-Asp)的肽，其可以例如耙向血管生成[R.Pasqualini等，NatBiotechnol.1997年6月;15(6):542-6];[E.Ruoslahti,KidneyInt.1997年5月；51(5):1413-7]。-062-抗纖溶酶、纖連蛋白或j3-酪蛋白的肽片段、血纖蛋白原或凝血栓蛋白。(X2-抗纖溶酶、纖連蛋白、(3-酪蛋白、血纖蛋白原和凝血栓蛋白的氨基酸序列可在以下文獻(xiàn)中找到a2-抗纖溶酶前體[M.Tone等，J.Biochem,巡，1033,(1987)];|3-酪蛋白[L.Hansson等，Gene,IiS，193,(1994)];纖連蛋白[A.Gutman等，F(xiàn)EBSLett,202,145,(1996)];凝血栓蛋白-1前體[V.Dixit等，Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，Sl，5449,(1986)];R.F.Doolittle,Ann.Rev.Biochem.,51,195,(1984);-作為血管緊張素的底物或抑制劑的肽，所述血管緊張素例如血管緊張素IIAsp國Arg-Val-Tyr誦Ile誦His曙Pro畫Phe(E.C.Jorgensen等，丄MMC/復(fù),1979,第22巻，9,1038-1044)[Sar，Ile]血管緊張素II:Sar-Arg-Val畫Tyr國Ile-His-Pro-Ile(R.K.Turker等，Sd證，1972,ill,簡)。誦血管緊張素I:Asp畫Arg-Val畫Tyr-Ile隱His-Pro-Phe畫His-Leu。優(yōu)選本發(fā)明的肽包括抗纖溶酶或血管緊張素II肽?？估w溶酶肽包括取自以下的N端的氨基酸序列(i)012-抗纖溶酶，即NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH或其變異體，其中一個或多個氨基酸已經(jīng)替換、添加或去除，例如NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH，NH2-Asn-Gln-Glu-Ala-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH,NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Gly-OH;或(ii)酪蛋白即Ac-Leu-Gly-Pro-Gly畫Gln-Ser醫(yī)Lys-Val-Ile-Gly。本發(fā)明的合成肽可通過常規(guī)固相合成而得到，參見P.Lloyd-Williams,F.Albericio和E.Girald;C72em,'ca/，praac/^to5^威w'so/尸e/f/6fes_Prc^ez>w,CRCPress,1997。合適的酶底物、酶拮抗劑或酶抑制劑包括葡萄糖和葡萄糖類似物(例如氟代脫氧葡萄糖)；脂肪酸或彈性蛋白酶，血管緊張素II或金屬蛋白酶抑制劑。優(yōu)選的非肽血管緊張素II拮抗劑是氯沙坦。合適的合成受體-結(jié)合化合物包括雌二醇、雌激素、黃體激素、黃體酮和其它甾體激素；多巴胺D-1或D-2受體的配體，或多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，例如托品烷；和5-羥色胺受體的配體。生物耙向部分(Z)的優(yōu)選分子量小于5000,最優(yōu)選小于4000,理想的是小于3000。它的優(yōu)勢在于本發(fā)明四胺锝絡(luò)合物的改進(jìn)的生物特性可影響式I綴合物锝絡(luò)合物體內(nèi)總體分布，尤其是清除率。當(dāng)n為3,X包括直接與(CH2)n基團(tuán)鍵合的氮原子時，則選擇Z為合成的，分子量小于4000。優(yōu)選的生物靶向部分是3-20聚體肽或酶底物、酶拮抗劑或酶抑制劑?？购怆x子(A-)代表等摩爾量存在的陰離子，因此可與式I的Tc(V)二氧代锝絡(luò)合物上的正電荷平衡。陰離子(A)適宜帶一個電荷或多個電荷，只要是電荷平衡量。陰離子適宜來自無機(jī)酸或有機(jī)酸。合適的陰離子的實(shí)例包括卣素離子(例如氯離子或溴離子)、硫酸根、硝酸根、檸檬酸根、乙酸根、磷酸根和硼酸根。優(yōu)選的陰離子是氯離子。式I的锝絡(luò)合物的優(yōu)勢在于它們在絡(luò)合物形成后是穩(wěn)定的，并包含一個優(yōu)先將锝與生物耙向部分結(jié)合的活性螯合配體(avidcheland)。因此，锝絡(luò)合物在體內(nèi)不會經(jīng)歷與生物大分子或竟?fàn)幮耘潴w的螯合轉(zhuǎn)移反應(yīng)(transchelationreaction)。锝絡(luò)合物體積小且結(jié)構(gòu)緊密，可用于對綴合的生物靶向部分(Z)具有最小的空間影響。永久性的陽離子變化和Tc(V)二氧代核心意味著絡(luò)合物也是親水性的，因此在胞內(nèi)不會分布到其它區(qū)室中，所以在體內(nèi)可從背景器官和組織中更快地清除出去，例如從血流中清除出去。按照下面第二個實(shí)施方案所述，可通過將合適來源的锝與式II螯合劑綴合物反應(yīng)而制備式I的锝絡(luò)合物。在第二個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式II的螯合劑綴合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中X、Y、Z、n和m如上定義；QLQS獨(dú)立地為Q基團(tuán)，其中Q為H或氨基保護(hù)基。螫合劑綴合物可用于制備第一個實(shí)施方案中的式I锝絡(luò)合物。術(shù)語"保護(hù)基"是指這樣的基團(tuán)它能抑制或阻止不需要的化學(xué)反應(yīng)，但又具有足夠的反應(yīng)性，能夠在不修飾分子的其余部分的足夠溫和的條件下從所述官能團(tuán)上切割下來。脫保護(hù)后，得到想要的產(chǎn)物。氨基保護(hù)基是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，適宜選自Boc(其中Boc為叔丁氧羰基)、Fmoc(其中Fmoc為芴基曱氧基羰基)、三氟乙?；?、烯丙氧基羰基、Dde[即l-(4，4-二曱基-2,6-二氧代亞環(huán)己基)乙基]或Npys(即3-硝基-2-吡啶亞磺?；?。在某些情況下，保護(hù)基的性質(zhì)可以是QVQ2或Q5/Q6基團(tuán)，即在相連胺氮原子上沒有NH鍵。更多的保護(hù)基的用途參見"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis",TheorodoraW.Greene和PeterG.M.Wuts,(JohnWiley&Sons,1991)。優(yōu)選的氨基保護(hù)基是Boc和Fmoc,最優(yōu)選Boc。當(dāng)采用Boc時，Q'和Q6均為H,而Q2、Q3、Q4和Q5各自為叔丁氧羰基。在式II中，在與锝絡(luò)合之前的合成化學(xué)反應(yīng)過程中，氨基保護(hù)基主要用于保護(hù)四胺螯合劑的胺官能團(tuán)。盡管生物靶向基團(tuán)(Z)易于與伯胺和/或仲胺發(fā)生反應(yīng)，但是這些保護(hù)基也可用于與锝絡(luò)合之前防止在螯合劑胺與z之間發(fā)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。優(yōu)選的式II綴合物具有至少一個未保護(hù)的胺氮(即03或Q"之一為H,或者QV(^或Q5/Q6同時為H)。一個或多個游離胺基意味著綴合物更易溶于水性介質(zhì)，這樣的介質(zhì)是制備式I锝絡(luò)合物的優(yōu)選溶劑。游離胺基也意味著與锝的絡(luò)合反應(yīng)更快速，因?yàn)榻j(luò)合不依賴于先前保護(hù)基的脫除，所述保護(hù)基也會阻止金屬絡(luò)合。當(dāng)綴合的生物靶向基團(tuán)(Z)不容易與胺發(fā)生進(jìn)一步反應(yīng)時，使用完全脫保護(hù)形式的式II綴合物(即Q'-QS各自為H)是很方便的，特別優(yōu)選式II的螯合劑綴合物。完全脫保護(hù)形式優(yōu)選用于絡(luò)合反應(yīng)，以得到式I的锝絡(luò)合物。在合適的pH下，使合適的氧化態(tài)放射性金屬的溶液與式II螯合劑綴合物發(fā)生反應(yīng)，可制備本發(fā)明的式I锝絡(luò)合物。溶液可任選含有與锝微弱絡(luò)合的配體(例如葡萄糖酸鹽或檸檬酸鹽)，即通過配體交換或螯合轉(zhuǎn)移來制備锝絡(luò)合物。這樣的條件常用于防止不需要的副反應(yīng)(例如锝離子水解)，但是對本發(fā)明的螯合劑并不重要，因?yàn)樗鼈兣c锝快速絡(luò)合。盡管放射性同位素是""Tc,但是通常原料是來自"Mo發(fā)生器的高锝酸鈉。在Tc(VII)氧化態(tài)下，锝以""Tc-高锝酸鹽形式存在，該鹽相對來說不活潑。因此，較低氧化態(tài)Tc(I)-Tc(V)的锝絡(luò)合物的制備通常需要添加合適的藥學(xué)上可接受的還原劑，例如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氬鈉、抗壞血酸、曱脒基亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I),以促進(jìn)絡(luò)合。藥學(xué)上可接受的還原劑優(yōu)選為亞錫鹽，最優(yōu)選氯化亞錫、氟化亞錫或酒石酸亞錫。按照下面第五個實(shí)施方案所述，使生物耙向分子(Z)與式III的雙官能螯合劑綴合，可制備式II螯合劑綴合物。在第三個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供放射性藥物，所述藥物包含第一個實(shí)施方案中的锝絡(luò)合物(其中A為藥學(xué)上可接受的抗衡離子)以及適于人體給藥形式的生物相容性載體。短語"適于人體給藥形式"是指無菌、無熱原、不含產(chǎn)生毒性或副作用的化合物的組合物，并且所述組合物配制成生物相容的pH(約pH4.0-10.5)。這類組合物不含可能在體內(nèi)引起栓子的顆粒，并且將其配制成當(dāng)與生物流體(例如血液)接觸時不會產(chǎn)生沉淀。這類組合物也含有生物相容性賦形劑，優(yōu)選等滲賦形劑。"生物相容性載體"是放射性藥物懸浮或優(yōu)選溶于其中的流體，尤其是液體，使得組合物是生理上耐受的，即可以給予哺乳動物體內(nèi)，而沒有毒性或過度不適。生物相容性載體適宜為注射用載體液體，例如無菌、無熱原的注射用水；水溶液，例如鹽水(其可容易達(dá)到平衡，使得注射用終產(chǎn)物是等滲而不是低滲的)；一種或多種張力調(diào)節(jié)物質(zhì)的水溶液(例如具有生物相容性抗衡離子的血漿陽離子鹽)，糖(例如葡萄糖或蔗糖)，糖醇(例如山梨醇或甘露醇)，醇類(例如甘油)或其它非離子型多元醇物質(zhì)(例如聚乙二醇、丙二醇等)。術(shù)語"藥學(xué)上可接受的抗衡離子"是指當(dāng)給予哺乳動物體內(nèi)時不產(chǎn)生毒性或副作用、并且與藥物組合物的其它成分具有化學(xué)和/或毒理學(xué)相容性的陰離子(即負(fù)電性離子)。本發(fā)明的锝放射性藥物的化學(xué)相容性，是指陰離子不能有效地與四胺螯合劑竟?fàn)庯?。合適的這類陰離子包括但不限于囟素離子(例如氯離子、碘離子和溴離子)；Cw烷基磺酸根(例如曱磺酸根或乙磺酸根)；芳基磺酸根(例如苯磺酸根或曱苯磺酸根)；C,.2烷基膦酸根；二(C,.2)烷基磷酸根(例如二曱基磷酸根、二乙基磷酸根或二甘油磷酸根)；芳基膦酸根；芳基磷酸根；烷基芳基膦酸根；烷基芳基磷酸根；Cw烷基羧酸根(例如乙酸根、丙酸根、谷氨酸根或甘油酸根)；芳基羧酸根(例如苯曱酸根)等。優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的抗衡離子為氯離子、氟離子、乙酸根、酒石酸根、氫氧根和磷酸根。這類放射性藥物適于裝在容器中，所述容器是密封的，適于用皮下針頭(例如crimped-onseptumsealclosure(隔片密封閉合裝置》單次或多次刺扎，同時保持絕對無菌。這類容器可裝有單次或多次患者劑量。優(yōu)選的多劑量容器包:fe—個整裝瓶(例如體積10-30cm3),其中裝有多次患者劑量，因此在不同的時間間隔，在制劑的有效期內(nèi)，可以抽取單次患者劑量灌裝到臨床級注射器中，以適合臨床情況。預(yù)灌裝注射器被設(shè)計成裝有單次人用劑量，因此優(yōu)選是適于臨床使用的一次性注射器或其它注射器。預(yù)灌裝注射器可任選和注射器防護(hù)罩一起提供，以保護(hù)操作人員免遭放射性。合適的這類放射性藥物的注射器防護(hù)罩是本領(lǐng)域已知的，優(yōu)選包含鉛或鴒。優(yōu)選的本發(fā)明放射性藥物包含锝放射性同位素99mTc或94mTc,最優(yōu)選99mTc。當(dāng)锝同位素是99mTc時，適于診斷造影用放射性藥物的放射性含量范圍為180-1500MBq99mTc,這取決于體內(nèi)造影的部位、攝取量和目標(biāo)/本底比。本發(fā)明的锝放射性藥物可通過下述各方法來制備(i)無菌制備技術(shù)，其中按照上述第二個實(shí)施方案，在無菌室環(huán)境下制備锝絡(luò)合物；(ii)最終滅菌，其中不用無菌制備技術(shù)來制備锝絡(luò)合物，然后在最后的步驟進(jìn)行滅菌(例如通過Y輻射或高壓滅菌)；(ui)藥盒方法，其中凍干的無菌非放射性藥盒制劑包含式II螯合劑綴合物和藥學(xué)上可接受的還原劑以及其它任選的賦形劑，使其與來自""Tc發(fā)生器的無菌""Tc-高锝酸鹽發(fā)生反應(yīng)。優(yōu)選方法(iii),用于該方法的藥盒在下面第四個實(shí)施方案中有描述。在第四個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供非放射性藥盒，用于上述放射性藥物組合物的制備，所述組合物包含式(n)的綴合物以及生物相容性還原劑。設(shè)計這類藥盒，以得到適于人用的無菌放射性藥物產(chǎn)品，例如通過直接注射到血流中。配體綴合物及其優(yōu)選方面在以上第二個實(shí)施方案中有描述。對于99mTc，藥盒優(yōu)選為凍干藥盒，將其用來自99mTc放射性同位素發(fā)生器的無菌""Tc-高锝酸鹽(Tc(V)重建，得到無需進(jìn)一步操作的適于人用的溶液。合適的藥盒包括容器(例如隔片密封瓶(septum-sealedvial))，其中裝有呈游離石威或酸式鹽形式的螯合劑綴合物以及生物相容性還原劑(例如連二亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、抗壞血酸、曱瞇基亞磺酸、亞錫離子、Fe(II)或Cu(I)。生物相容性還原劑優(yōu)選為亞錫鹽，例如氯化亞錫或酒石酸亞錫?；蛘撸幒锌扇芜x裝有非放射性金屬絡(luò)合物，所述絡(luò)合物中一旦加入锝時，會經(jīng)歷金屬轉(zhuǎn)移作用(即金屬交換)，得到所需產(chǎn)物。非放射性藥盒可任選還包括額外的成分，例如轉(zhuǎn)移螯合劑、輻射防護(hù)劑、抗微生物防腐劑、pH調(diào)節(jié)劑或填充劑。"轉(zhuǎn)移螯合劑"是這樣的化合物它與锝快速反應(yīng)，形成弱絡(luò)合物，再被螯合劑置換。這使還原型水解锝(RHT)的形成風(fēng)險最小化，因?yàn)楦唢剿猁}快速還原與锝絡(luò)合竟?fàn)?。合適的這類轉(zhuǎn)移螯合劑是帶有生物相容性陽離子的弱有機(jī)酸(即有機(jī)酸的pKa范圍為3-7)的鹽。術(shù)語"生物相容性陽離子，，是指帶正電荷的抗衡離子，它可與電離的帶負(fù)電荷的陰離子基團(tuán)成鹽，其中所述帶正電荷的抗衡離子也是無毒的，因而適于給予哺乳動物體內(nèi)，尤其適于人用。合適的生物相容性陽離子的實(shí)例包括鈉或鉀等堿金屬；4丐和鎂等堿土金屬；和銨離子。優(yōu)選的生物相容性陽離子是鈉和鉀，最優(yōu)選鈉。合適的這類弱有機(jī)酸是乙酸、檸檬酸、酒石酸、葡糖酸、葡庚糖酸、苯曱酸、苯酚或膦酸。因此，合適的鹽為乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸鹽、苯曱酸鹽、苯酚鹽或膦酸鹽。優(yōu)選的這類鹽為酒石酸鹽、葡糖酸鹽、葡庚糖酸、苯甲酸鹽或膦酸鹽，最優(yōu)選膦酸鹽，最最優(yōu)選二膦酸鹽。優(yōu)選的這類轉(zhuǎn)移螯合劑是MDP鹽，即亞曱基二磷酸與生物相容性陽離子的鹽。術(shù)語"輻射防護(hù)劑"是指這樣的化合物它抑制降解反應(yīng)，例如氧化還原過程(redoxprocess),即通過捕獲高活性自由基，例如水的輻解所產(chǎn)生的含氧自由基。本發(fā)明的輻射防護(hù)劑適宜選自抗壞血酸、對氨基苯曱酸(即4-氨基苯曱酸)、龍膽酸(即2,5-二羥基苯曱酸)及其與如上所述的生物相容性陽離子的鹽。術(shù)語"抗微生物防腐劑"是指抑制細(xì)菌、酵母或霉菌等潛在有害微生物的生長的試劑?？刮⑸锓栏瘎┮部杀憩F(xiàn)出某些殺菌特性，這取決于劑量大小。本發(fā)明的抗微生物防腐劑的主要作用是在放射性藥物組合物重建后(即在放射性診斷用產(chǎn)品中)抑制這些微生物的生長。然而，抗孩1生物防腐劑也4壬選用于在重建之前、在本發(fā)明的非放射性藥盒的一種或多種成分中抑制潛在有害微生物的生長。合適的抗微生物防腐劑包括對幾基苯曱酸酯類，即對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯或?qū)αu基苯曱酸丁酯或其混合物；苯曱醇；苯酚；曱酚；溴化十六烷基三曱銨和硫柳汞。優(yōu)選的抗微生物防腐劑是對羥基苯甲酸酯類。術(shù)語"pH調(diào)節(jié)劑"是指用于確保給予人或哺乳動物的重建藥盒的pH在可接受限度內(nèi)(約pH4.0-10.5)的化合物或化合物的混合物。合適的這類pH調(diào)節(jié)劑包括藥學(xué)上可接受的緩沖劑，例如W-三(羥曱基)氨基甘氨酸、磷酸鹽或TRIS[即三(羥曱基)氨基曱烷];以及藥學(xué)上可接受的44,例如碳酸鈉、石友酸氫鈉或其混合物。當(dāng)綴合物以酸式鹽形式使用時，可任選提供裝在單獨(dú)小瓶或容器中的pH調(diào)節(jié)劑，使得藥盒的使用者可調(diào)節(jié)pH,作為多步驟程序中的組成部分。術(shù)語"填充劑"是指藥學(xué)上可接受的增量劑，其可在生產(chǎn)和凍干過程中有助于材料的處理。合適的這類填充劑包括無機(jī)鹽(例如氯化鈉)和水溶性糖或糖醇(例如蔗糖、麥芽糖、甘露醇或海藻糖)。在第五個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式m的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>其中Q^QS和n如上式I和n中定義;E是適于與第一個實(shí)施方案中的生物靶向部分(Z)綴合的官能團(tuán)；前提條件是(i)當(dāng)11=3時，Q'-Q6中的至少一個為氨基保護(hù)基；(ii)當(dāng)n=3或5時，E不為OH。式m化合物是"雙官能螯合劑"，即帶有一個或多個官能團(tuán)(E)的螯合劑。官能團(tuán)E適于與生物靶向部分(Z)綴合。合適的這類官能團(tuán)(E)包括胺、硫氰酸酯、馬來酰亞胺和活性酯。E優(yōu)選不包括未活化的羥基(-OH)。術(shù)語"活性酯"是指羧酸的酯衍生物，它可以是良好的離去基團(tuán)，因而使其更容易與生物靶向部分上存在的親核試劑(例如胺)發(fā)生反應(yīng)。合適的活性酯的實(shí)例是N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、五氟苯酚、五氟苯硫酚、對硝基苯酚、羥基苯并三唑和PyBOP(即六氟磷酸O-苯并三唑-l-基-氧基三吡咯烷基轔)。優(yōu)選的活性酯是N-羥基琥珀酰亞胺或五氟苯酚酯。E優(yōu)選為伯胺(-NH2)、-C〇2M、-NCS、-NCO、馬來酰亞胺或丙烯酰胺，其中M為H、陽離子、保護(hù)基或活性酯。E最優(yōu)選為-NH2、-C02M或馬來酰亞胺，理想的是-NH2或-C02M。使式III化合物與生物靶向分子(Z)上合適的相應(yīng)官能團(tuán)反應(yīng)，生成所需的式II綴合物。生物靶向分子上的這類合適官能團(tuán)包括羧基(用于與胺官能化雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；氨基(用于與羧基官能化雙官能螯合劑或活性酯官能化雙官能螯合劑形成酰胺鍵)；卣素、曱磺酰氧基和曱苯磺酰氧基(用于胺官能化雙官能螯合劑的N-烷基化)和巰基(用于與馬來酰亞胺官能化雙官能螯合劑進(jìn)行反應(yīng))。當(dāng)E為與生物靶向分子(Z)的氨基反應(yīng)的基團(tuán)(例如活性酯)時，顯然可能會與螯合劑的胺發(fā)生不需要的副反應(yīng)。對于這類E基團(tuán)，優(yōu)選選擇式III中的QL(^為氮保護(hù)基，使得四胺螯合劑的4個氮原子都被保護(hù)起來。當(dāng)E為氨基時，與生物靶向分子(Z)的反應(yīng)僅在E胺上發(fā)生，而不在四胺螯合劑的胺氮原子上發(fā)生，這一點(diǎn)顯然很重要。因此，在這種情況下，式III中的Q^(/優(yōu)選為氮保護(hù)基。氮保護(hù)基及其優(yōu)選實(shí)例如以上笫二個實(shí)施方案所述。式III化合物可按流程1和2所述來制備。流程1提供羧基-官能化的N-保護(hù)的四胺螯合劑的一個靈活的合成路線，該路線可適合式III中的不同n值。帶有-(012)5011橋頭取代基的Boc-保護(hù)的四胺類似物的合成參見Turpin等，J.Lab.Comp.Radiopharm.,41,379-393(2002)。流程2提供胺-官能化的N-保護(hù)的四胺螯合劑的一個靈活的合成路線，該路線可適合不同n值。可以按照Nock等[Eur.J.Nucl.Med.，10(2),247-258(2003)]和Maina等[Eur.J.Nucl.Med.,2Q(9),1211-1219(2003)]所描述的類似方法，進(jìn)行生物靶向肽的綴合反應(yīng)。流程1:化合物1的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>化合物1其中BOC=叔丁氧羰基保護(hù)基IBX=l-羥基-l，2-苯并石輿雜氧雜環(huán)戊烯-3(lH)-酮-l-氧化物NHS=N-羥基琥珀酰亞胺Bz=節(jié)基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>下面的非限制性實(shí)例用于說明本發(fā)明。實(shí)施例1提供化合物1的合成，化合物1是本發(fā)明的羧基-官能化N-保護(hù)的四胺螯合劑。實(shí)施例2提供化合物2的合成，化合物2是本發(fā)明的胺-官能化N-保護(hù)的四胺螯合劑。實(shí)施例3提供化合物3的合成，化合物3是化合物1與胺(卡胺)綴合的化合物。實(shí)施例4描述化合物6的合成，舉例說明化合物2與羧酸活性酯的綴合。實(shí)施例5描述化合物4的合成，化合物4是本發(fā)明的螯合劑與氯沙坦(losaratan)衍生物的綴合物。實(shí)施例6提供包含PEG連接基團(tuán)的氯沙坦(losartan)螯合劑綴合物的合成。實(shí)施例7描述化合物8的合成，化合物8是本發(fā)明的螯合劑的血管緊張素肽綴合物。實(shí)施例8描述本發(fā)明的幾種螯合劑的""Tc放射性標(biāo)記。實(shí)施例9描述本發(fā)明的不同99mTc絡(luò)合物的親脂(logP)值的測定法，表明絡(luò)合物相對親水。實(shí)施例10描述本發(fā)明的幾種99mTc絡(luò)合物的生物分布結(jié)果，表明中等肝臟背景和高的泌尿系統(tǒng)清除率。實(shí)施例11提供化合物1的較高產(chǎn)量合成。實(shí)施例12提供綴合有活性酯的本發(fā)明受保護(hù)的四胺螯合劑(化合物9)的合成。實(shí)施例1:化合物1的合成步驟(a):『2-(芳?xì)饣?乙基l丙二酸二乙酯按照Ramalingam等，r"ra/je^o",57,2875-2894(1995)的改進(jìn)方法制備標(biāo)題化合物。因此，在氬氣氛下，將鈉(l.20g)溶于無水乙醇(25ml)中。加入丙二酸二乙酯(14.00g)，將混合物回流30分鐘。加入卡基溴乙基醚(10g),將混合物回流攪拌16小時。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，殘余物在乙醚(100ml)和水(50ml)之間分配。乙醚層用水(3x50ml)洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醚，殘余物真空蒸餾。棄去在40-55°C蒸餾的部分(未反應(yīng)的丙二酸二乙酯)。產(chǎn)物在140-150。C(lmm)餾出，[lit.bp138-140。C(lmm)]。產(chǎn)量為12.60g無色油狀物。'HNMR(270MHz,CDC13,25°C，IMS)S=7.28.(m5HCH5),4.47(s,2H,CH2-Ph),4.16(m,4H,COOCH2)，3.58(t,1H,CH),3.50(t'2H,0-C//2-CH2),2.21(t,2H,0-CH2-C&)，1.20(t,6H,CO0CH2-C迅).13CNMR(67.5MHz,CDC13，250C,麗)5=169.20(CO),138.10，128.60，127.80(芳族),73.00(CH2Ph),67.30(0-CH2-CH2),61.70(COOCH2)，49.10(CH),28》0(0-CHrCH2),14.10(COOCH2CH3).歩驟(b):N,N'-雙(2-氨基乙基)-2-(2-芐氯基-乙基〗丙二酰胺將[2-(千氧基)乙基]丙二酸二乙酯(4.00g)加入到乙二胺(30ml)中，所得溶液在室溫下攪拌2天。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去過量乙二胺，殘余物經(jīng)高真空度干燥2天，得到黃色油狀物(4.28g)，靜置結(jié)晶。經(jīng)NMR譜檢測，產(chǎn)物仍含有痕量乙二胺。lHNMR(270MHz,CDC13,25。C,TMS)S=7.74(brt,2H，CO-卿，7.32(m,5H，C6H5),4.46(s，2H，CH2-Ph),3.50(t,2H,OC&-CH2-),3.33(t1H,CH),3.23(m,4H,CO-NH-卿，2.74(t,4H,C迅-卿2.18(q,2H,0-CH2-Cifr)1.55(brs4H,NH2).'3CNMR(67.5MHz,CDC13，25°C,TMS)5=171.10(CO),138.20,128.30,127.70(芳族),73.00(CH2-Ph),67.80(0-CH2-CH2),51.40(CH),42.40(CO-NH-CH2)，41.20(CH2-NH2)，31.卯(0-CH2-CH2-).步驟(c):^『雙(2-氨基-乙基)-2-(2-爺氣基乙基)-1,3-二氨基丙烷將N,N'-雙(2-氨基乙基)J-(2-千氧基-乙基)丙二酰胺p.S0g)溶于THF(20ml)中，將燒瓶浸入冰浴中。燒瓶用氬氣吹掃，通過注射器加入THF硼烷絡(luò)合物(80ml，1MTHF溶液)。讓反應(yīng)混合物升至室溫，在40。C攪拌2天，回流1小時。滴加曱醇(50ml)，將溶液在4CTC攪拌過夜。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，殘余物溶于曱醇(20ml)中。加入氫氧化鈉(10g/15ml水)，將曱醇蒸發(fā)掉。由此分離得到的無色油狀物用CH2C12(3x50ml)萃取。溶液經(jīng)Na2S04干燥。除去溶劑，得到3.40g無色油狀物。lHNMR(270MHz,CDC13,25°C,TMS)5=7.34(m,5H,C6H5),4.49(s,2H,CH2-Ph),3.55(t,2H,OC&-CH2-),2.76(t,4H,N-CH2),2.63(m,8H,N-CH2),1.84(m,1H,CH),1.58(ra,2H，CH-C私-CH2-0),1.41(brs,6H，NH).UCNMR(67.5MHz,CDC13,25。C,TMS)5=138.60,128.30,127.60(芳族),72.80(CH2-Ph),68.70(0-CH2-CH2),53.50(N-CH2),52.80(N-CH2)，41.60(N-CH2)36.40(CH),31.30(CH-CH2-CH2-O).MS-EI:295[M+H]+,(計算值295.2).歩驟(d):N,N'-雙(2-叔丁氣羰基氨基-乙基V2-(2-芐氣基乙基)-l,3-二(叔丁氣羰基氨基)丙烷將N,N'-雙(2-氨基乙基)-2-(2-千氧基-乙基)-l,3-二氨基丙烷(3.30g)溶于CH2C12(100ml)和三乙胺(5.40g)中，加入二碳酸叔丁酯(10.30g)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天?；旌衔镉盟?100ml)、檸檬酸溶液(100ml，10%的水溶液)和水(2x100ml)洗滌。有機(jī)層經(jīng)Na2S04干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到黃色油狀物，在高真空度下干燥至恒重。粗產(chǎn)物(7.70g)在硅膠柱上純化(250g，230-400目，CH2C12，CHA-E^O1:1),得到6.10g(78.3%,透明油狀物)。'HNMR(270MHz,CDC13,25。C,TMS)5=7.32(m,5H,CsH5),5.12(brd,2H,NH),4,47(s,2H,CH2-Ph),3.49(t,2H'OCHrCHr),3.24(br,12H，N-CH2),2.14(br,1H,CH),1.59(m,2H,CH-C/7rCH2-。)1.45(s'18H,t-Bu),1.42(s,18H,t隱Bu).13CNMR(67.5MHz,CDC13,25。C,TMS)S=155.90(NH-CO),138.20,128.30127.60,127.50(芳族),79.卯,78.90(CMe3)，72.80(CHrPh),68,00(0-CH2-CH2),50.00(br，N-CH2)，46.卯(br,N-CH，)，39.20(N-CH2),34.40(br,CH)，29.80(CH-CH2-CHrO),28.30(t-Bu).MS-EI:695[M+H]+,(計算值695.5)歩驟(e):N,N'-雙(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-2-(2-羥乙基)-l,3-二(叔丁氣羰基氨基)丙烷將N,N'-雙(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-2-(2-千氧基-乙基)-l，3-二(叔丁氧羰基氨基)丙烷(3.16g)溶于無水乙醇(100ml)中，加入披鈀活性炭(l.OOg,無水，10%)。將混合物在Parr氫化裝置(35psi)中氫化2天。濾出催化劑，用乙醇(3x20ml)洗滌。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，得到無色油狀物，在高真空度下干燥至恒重(2.67g,97.1%)。'HNMR(270MHz,CDC13,25°C,TMS)5=5.25(brd,2H,NH),3.69(t,2H,OC私-CHrO,3.28(br,12H,N-CH2),2.71(br,OH)'2.23(br,1H,CH)'1.56(肩峰，m,2H,CH-Cft-CH2-0)1.48(s,18H,t-Bu),1.44(s,18H,t-Bu).l3CNMR(67.5MHz,CDC13,25°C，TMS)S=156.10(NHCO),80.00,79.20(CMe3),59.60(0-CH2-CH2),49.90(br,N-CH2),47.00(br,N-CH2),39.34(N-CH2)，33.80(CH),32.30(CH-CH"CH2-0),28.30(t-Bu).MS-EI:605[M+H]+,(計算值605.4).步驟ffl:凡^-雙(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-2-(2-羧基甲基)-l,3-二(叔丁氣羰基氨基)丙烷(化合物1)采用Mazitschek等[j"g.C72，.M.仏4059-4061(2Q02)]的方法。因此，將N,N'國雙(2-叔丁氧羰基氨基腸乙基)-2-(2-羥乙基)-l,3國二(叔丁氧羰基氨基)丙烷(2.60g)溶于DMSO(15ml)中，加入1-羥基-1，2-苯并碘雜氧雜環(huán)戊烯-3(lH)-酮-l-氧化物(IBX,3.50g)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，再加入N-羥基琥珀酰亞胺(2.50g)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。加入氫氧化鈉溶液(2M,40ml),將混合物在室溫下攪拌4小時。將溶液浸入水浴中，用2M鹽酸酸化至pH2。水層用乙醚(4xl00ml)萃取，合并的乙醚萃取液用水PxSOml)洗滌。乙醚層經(jīng)Na^S04干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到黃色固體殘余物，其中含有產(chǎn)物和2-亞碘?；綍跛帷穆确?己烷(l:3)(80ml)結(jié)晶除去大部分亞碘?；綍跛?2.1g)。蒸發(fā)氯仿-己烷母液，得到黃色油狀物(3g)，上樣到硅膠柱(300g,CH2C12-Et20,1:1)上。剩余亞碘?；綍跛嵊靡颐严疵摗．a(chǎn)物用乙醚-曱醇(9:l)洗脫。合并含有產(chǎn)物的流分，除去溶劑，得到淺黃色油狀物(1.5g)。將其在硅膠柱上再次進(jìn)行色譜純化(50g,Et20)。產(chǎn)物用乙醚-乙酸(95:5)洗脫。合并含有產(chǎn)物的流分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，得到油狀物，在高真空度下干燥。產(chǎn)量為1.10g(41.3%)。'HNMR(270MHz'CDC3,25°C，TMS)5=7.61(brs,1H，COOH),5.19(brd，2H,卿，3.22(br,12H,N-CH2),2.47(brm,1H,CH),2.26(br，2H,CH偶-COOH),1.41(s，18H,t-Bu)，1.37(s,認(rèn)，t-Bu).13CNMR(67.5固z,CDC13，25°C,TMS)5=175.90(COOH),156.10(NHCO),80.40,79.10(CMe3)，49.50(N-CH2),46.80(N-CH2),39.00(N-CH2)，34.70(CH-CHrCOOH),34.20(CH-CH2-COOH),28.30,28.20(t-Bu).MS-EI:619[M+H]+,(計算值619.4).實(shí)施例2:(8-氨基-2爿叔丁氣羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-甲基卜辛基)-(2-叔丁氣羰基#^-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(化合物2)的合成步驟(a):2-(6-氯-己氣基)四氫吡喃將6-氯己醇(6.85g,10mmol)和對曱苯磺酸(500mg)溶于無水乙醚(75ml)中,在冰浴中冷卻至0-5。C。滴加二氫吡喃(4.3g，10mmol)的無水乙醚(25ml)溶液，同時持續(xù)攪拌30分鐘。滴加完成后，除去冷卻浴，繼續(xù)攪拌16小時。溶液用水(50mlx2)萃取，干燥(MgSCg,過濾，減壓蒸發(fā)除去溶劑，得到淺黃色油狀物。該油狀物經(jīng)13CNMR語顯示足夠純，無需純化就可用于后續(xù)反應(yīng)。產(chǎn)量10.1g(91%)。"CNMR(CDC13):519.7(CH2),25.5(CHz),25.6(CH2),26.7(CHz)，29.6(CHa),30.8(CH2)，32.6(CH2),45.0(CH2C1),62.3(OCH2),67.4(OCHz),98.8(OCHO).'HNMR(CDC13):51.30-1.71(14H,m,CH2x7),3.24-3,32(1H3.41-3.48(3H,mCH和CH2),3.60-3.67(1H,m，CH),3.72-3.82(1H,bm,CH)，4.44-4.49(1H,OCHO).步驟(b):2-[6-(四氫-吡喃-2-基氣基)-己基l-丙二酸二乙酯在干燥氮?dú)夥障拢瑢⑸倭库c(U3g,49mmol)溶于無水乙醇(100ml)中，同時持續(xù)攪拌。一次性加入丙二酸二乙酯(8.0g,50mmol),將溶液在60。C加熱1小時。一次性加入2-(6-氯-己氧基)-四氫吡喃(9.3g，42.2mmo1),溫度上升至75-80。C并在此水平保持24小時。冷卻后，過濾除去無機(jī)固體，從濾液中蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于CH2C12(50ml)中，用水(30mlx2)萃取，干燥(MgS04),過濾，除去揮發(fā)物，得到淺黃色油狀物。該油狀物進(jìn)行硅膠色譜，用石油醚(petether)40:60/乙醚(200:40)作為洗脫液。洗脫的所需產(chǎn)物的rf=0.15,經(jīng)分離得到無色油狀物。產(chǎn)量8.7g,(60。/。)。13CNMR(CDCI3):514.0(CH3x2),19.6(CH2),25.5(CH2)，27.2(CH2),28.6(CH2),29.0(CH2)，29.6((CH2)，30.0(CH2)，30.8(CH2)，52.0(CH),61.2(OCH2x2)，62.2(OCH2),67.4(OCH2),98.8(OCHO),169.4(C=0x2).'HNMR(CDC13):5U0-1.25(14H,m,CH3x2,CH2x4),1.36-1.50(6H,bm,CH2x3),1.70-1.81(2H,bm,CH2),3.17-3.28(2H,m,CH2),3,56-3.66(1H,m,CH),3.70-3.80(1H,m,OCH),4.04-4.16(4H,m,OCH2x2),4.03-4.08(1H，m,OCHO).歩驟(c):N,N'-雙-(2-氨基-乙基)-2-『6-(四氫-敗喃-2-基氣基)-己基l-丙二酰胺將2-[6-(四氫-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酸二乙酯(5.1g,14.8mmol)溶于1,2-二氨基乙烷(10g,167mmol)中，在室溫下攪拌16小時。真空除去揮發(fā)物(40-50。C,0.01mmHg)，得到淺綠色粘稠殘余物，將其進(jìn)行柱色譜，用CH2Cl2/MeOH/NH4OH(50:50:5)洗脫。洗脫的標(biāo)題化合物的rf=0.2，經(jīng)收集得到淺綠色粘稠油狀物，靜置時固化。(產(chǎn)量3.9g，7P/0)。13CNMR(CDC13):519.8(CH2),25.5(CH2),26.0(CH2)，27.5(CH2),29.2(CHz),29.7(CH2),30.8(CH2)，31.9(CH2)，41.0(NCH2x2)，41.9(NCH2x2)，54.6(CH),位.5(OCH，),67.5(OCH2),98.9(OCHO)，171.6(C-Ox2).NMR(CDC13):SU5-1.28(6H,bs,CH2x3),1.39-1.44(6H,CH2x3),1.69-1.74(4H，bm,CH2x2),2,64(4H，bs，NH2x2),2.734H,t,J-6Hz,CH2x2),3.08-3.29(6Hn%CH2x3),3.35-3.41(1H,mCH)3.55-3.63(IH，m,CH)，3.70-3.78(1H，m,CH)，4.43(1H,HJ=4Hz,OCHO)，7.78(2H,bt,J=5Hz>OCNHx2)IR(薄膜)cm'1:-3417，3082,2936,2862，1663，1558,1439,1354,1323,1261,1200,1189，1076，1026,956,卯7,867,810.歩驟(d):N,N'-雙(2-氨基乙基)-2-(6-羥基-己基)-丙二酰胺將N,N'-雙(2-氨基乙基)-2-[6-(四氫-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酰胺(3.9g，10.6mmol)、對曱苯磺酸一水合物(8.5g,3mmol)和乙醇(50ml)在70-75。C回流加熱16小時。冷卻后，滴加濃氫氧化銨(.880)，直到pH穩(wěn)定為9。經(jīng)硅藻土過濾除去析出的白色固體，濾餅用乙醇(30ml)洗滌。減壓除去乙醇(15mmHg,40。C),得到半固體蠟。該殘余物進(jìn)行硅膠色譜，用CH2Cl2/MeOH/NH4OH(100:50:10)洗脫，標(biāo)題化合物的^=0.2。收集該產(chǎn)物，與乙醇(100mlx3)共蒸發(fā)，除去殘余水分。得到淡綠色粘稠殘余物，靜置時固化。(產(chǎn)量2.1g,69。/。)。13CNMR(CD3OD):525.4(CH，),27.3(CH2)，28.9(CH2),30.4(CH2),32.2(CH2),40.6(NCH2x2)，41.7(NCH2x2),5i.l(CH),61.6(CH卿，171.7(C=0x2).'HNMR(CD3OD):S1.28-1.38(6H,bs,CH2x3)，1.46-1.55(2H,bm,CH2),1.79-1.87(2H'bm,CH2),2.73(4H,t'J=6Hz'H2NCH2x2),3.13(1Ht,J=7Hz,CH),3.27(4H,dt,J-6and2Hz,HNCH2x2),3.53(2Ht,J=7HzOCH2).IR(薄膜)cm.':-3364,2932,28(52,2527，1663,1558,1462,1327'1223,1192,1034.質(zhì)譜(Fabs)m/e:C3H29N403(M+H)的計算值289,實(shí)測值289。步驟(e):(2-叔丁氣羰基氨基-乙基-2-H叔丁氣羰基-(2-叔丁氣羰基氨基-乙基V氨基l-甲基V8-羥基-辛基)-碳酸叔丁酯在干燥氮?dú)夥障拢ㄟ^注射器將純凈曱硼烷-二曱硫加合物(15ml，150mmol)滴加到N，N'-雙(2-氨基乙基)-2-(6-羥基己基)丙二酰胺(2.1g，7.3mmol)和二嚼烷(50ml)的攪拌混合物中。完成加入后，將混合物在回流下在ll(TC緩慢加熱5天。在此期間，生成一些白色固體。冷卻后，減壓除去揮發(fā)物，得到白色固體，向其中滴加曱醇(50ml)，得到無色溶液。溶液在回流下加熱3小時，冷卻，加入濃HC1(5ml),在回流下在70-75。C繼續(xù)加熱48小時。除去溶劑，得到綠色粘稠殘余物，將其與甲醇(100mlx3)共蒸發(fā)，得到淺綠色固體。該固體再溶于無水曱醇和無水碳酸鉀(4.0g,30mmol)中，再加入二碳酸二叔丁酯(7.0g,32mmo1)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?8小時。通過硅藻土過濾除去無機(jī)固體，從濾液中蒸發(fā)掉溶劑，得到粘稠殘余物。該殘余物與水(50ml)混合，用CH2C12(50mlx3)萃取。合并有機(jī)部分，干燥(MgS04)，過濾并蒸發(fā)溶劑，得到淺黃色殘余物。注意:此時用"CNMR監(jiān)測反應(yīng)很方便。殘余物進(jìn)行硅膠色譜，用CH2Cl2/MeOH(95:5)作為洗脫液。洗脫的標(biāo)題化合物的rf=0.41,分離出無色粘稠油狀物(產(chǎn)量2.5&52%)。13CNMR(CDC13):525.6(CH2),26.4(CH2)，28.4(CH3x12),29.8(CH2x2)，32.6(CH2),36.5(極寬峰，CH),39.2(NCH2x2,相鄰CH),46.9(寬單蜂，HNCH2x2),50.0(寬單蜂,NCH2x2),62.4(HOCH2),79.0(OCx2),79.9(OCx2)，156.4(寬單蜂C=0x4)'HNMR(CDC13):51.05-1.18(8H，bs,CH2x4),1.27(18h,s,CH3x6,叔丁基),1.31(18H,s,CH3x6,叔丁基)，1.41(2H,m,CH2),1.81(1Hbs,CH),2.63(1H,bs,OH),2.98(4H,bs,NCH2x2),3.11(8H,bs,NCH2x4),3.44隅t,J=8Hz，CH20),5.2(2H,bs,NHx2)IR(薄膜)crrf1:3350,2976,2931,2859,1674，1516,1455,1418,1393,1260,1250,1165,1069,965,871,775。質(zhì)譜(Fabs)m/e:C33H65N409(M+H)的計算值:661,實(shí)測值661。歩驟ffl:甲苯-4-磺酸84叔丁氡羰基-(2-叔丁氣羰基氨基-乙基-氨基1-7-{「叔丁氣羰基-(2-叔丁氣羰基氨基-乙基)-氨基l-甲基}-辛酯在室溫下，將(2-叔丁氧羰基氨基-乙基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基)氨基]-曱基卜8-羥基辛基)-碳酸叔丁酯(2.52g,3.82mmo1)、對曱苯磺酰氯(1.0g,5.2mmo1)、三乙胺(1.3g,12.8mmol)和CH2C12(30ml)進(jìn)行攪拌，同時緩慢蒸發(fā)溶劑。用碳NMR監(jiān)測反應(yīng)，3天后，殘留極少量原料。用CH2Cl2將反應(yīng)體積補(bǔ)充到30ml,用水(50mlx3)萃取，干燥(MgSCg，過濾并蒸發(fā)溶劑，得到褐色殘余物。該殘余物進(jìn)行硅膠色譜，用CH2Cl2/MeOH(100:5)作為洗脫液。洗脫下來的第一化合物為未反應(yīng)的曱苯磺酰氯，其^=0.95。洗脫下來的標(biāo)題化合物的1>=0.2,將其分離出來，為淺黃色粘稠油狀物。產(chǎn)量(1.20g,39%)。13CNMR(CDC13):S21.7(CH3甲笨磺酰基)，25.3(CH2),26.3(CH2),28.5(CH3x12),28.8(CH2),29.5(CH2),29.9(CH2),36.5(CH極寬峰)，39.4(NCH2x2),47.0(寬峰，NCH2x2),50.5(寬峰,NCH2x2),70.6(TsOCH2),79.1(OCx2),80.0(OCx2),127.9(CHx2),129.9(CHx2),133.2(C),144.7(C-STs)，156.1(寬峰，C=Ox4)。)HNMR(CDC13):S1■16(8H,bs,CH2x4),1.35(18&s,CH3x6),1.39s,CH3x6),1.88(1&bs,CH),2.38(3H,s,CH3曱苯磺?；?，3.10-3.12(4Hbs,NCH2x2)，3.19(8H,bs,NCH2x4),3.93(2H,t,J=7Hz,CH2OTs),5.0(IH，bs,NH),5.08(1H,bs,NH),7.29(2H,d,J=8Hz,CHx2,Ar)，7.72(2H,d,J=8HzCHx2,Ar)IR(薄膜)cur':3360,2974，2932,2862,1693,1516,1479,1418,1391,1366,1250,1177,1069,959,816,775。質(zhì)i普(Fabs)m/e:C40H71N4OS(M+H)的計算值815,實(shí)測值815。歩驟(g):(8-疊氮基-2-U叔丁氣羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基)-辛基>(2-叔丁氧羰基氨基-乙基V氨基曱酸叔丁酯將曱苯-4-磺酸8-[叔丁氧基羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基-氨基]-7-U叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基)氨基]曱基卜辛酯(U05g,1.36mmo1)、疊氮化鈉(350mg,5.4mmol)和曱醇(10ml)在70-75。C回流加熱16小時。冷卻后，在室溫下減壓除去甲醇，直到殘留約l-2ml。該殘余物用水(25ml)稀釋，用CH2C12(25mlx4)萃取。合并有機(jī)萃取液，干燥(MgSCg，過濾，在室溫下使揮發(fā)物蒸發(fā)(注意疊氮化物具有潛在爆炸性，該步驟應(yīng)在安全罩后面進(jìn)行)，得到淺黃色粘稠殘余物，是純凈狀態(tài)的所需化合物。(產(chǎn)量820mg,88%)。l3CNMR(CDCU):S26.3(CH2)，26.5(CH2),28.3(CH3x12),28.7(CH2),29.6(CH2)，29.8(CH2),36.8(寬峰，CH)，39.3(NCH2x2)，46.9(寬峰，NCH2x2),50.0(寬峰,NCH2x2),51.3(CH2N3),79.0(OCx2),79.8(OCx2)，156.0(OOx4).'HNMR(CDC13):51.16(8H,bs,CH2x4),1.29(,sCH3x6)，1.33(18H,s,CH3x6),1.47(2H，bt,J=6,5HzCH2相鄰CH),1.86(1H,bs,CH),2.95-3.05(4H,bs,:NCH2x2),3.05-3.20(IOH，bs，NCH2x4和CH2N3),5.09(2H，bs,NHx2)IR(薄膜)on-1:-3350,2974,2932,2860,2097(強(qiáng)帶N3)，1694,1520,1470,1418,1391,線1250,1167，1069,870,777.歩驟0i):(8-氨基-2-{『叔丁氣羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基卜辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基曱酸叔丁酯(化合物2)在30個大氣壓下，在室溫下，將(8-疊氮基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基]-曱基}-辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基曱酸叔丁酯(820mg,1.20mmo1)、10。/。披鈀碳(100mg)和曱醇(10ml)用氫氣處理16小時。通過硅藻土過濾除去固體，濾餅用甲醇(50ml)洗滌。從濾液中除去揮發(fā)物，得到粘稠油狀物，為純凈狀態(tài)的所需物質(zhì)。(產(chǎn)量700mg,89%)。"CNMR(CDC13):526.4(CH2)，26.6(CH2),28,4(CH3x12),32.9(CH2x2),36.8(寬峰'CH).39.2(NCH2x2),41.8(H2NCH2),46.9(寬峰，NCH2x2)'49.8(寬峰'NCH2x2),78.9(OCx2),79.7(OCx2),156.0(COx4).tHNMR(CDC13):51.08(8H,bs，CH2x4),1.23(18H,s,CH3x6)，1.27(20H,bs,CH3x6和CH2),1.77(1H,bs，CH),2.40(2H,bs，NH2),2.50(2H,t,J=7Hz，CH2NH2),2.97(4H,bm,NCH2x2),3,00-3.16(8H，bm,NCH2x4),5.21(1H,bs，NH),5.30(IH，bs,NH).IR(薄膜)cmT1:-3360,1693,1520,1459,1418,1392，1367,1250,1170,1068，964,922,871,775,733.質(zhì)謙(Fabs)m/e:C^H^NsOs(M+H)的計算值660,實(shí)測值660。實(shí)施例3:化合物3的合成步驟(a):化合物l與芐胺偶聯(lián)在一個(50ml)圓底燒瓶中，將化合物1(61.8mg,O.lmmol)的CH2C12(5ml)用千胺(10.7mmo1)、二苯基次膦酰氯(25.9mg)和二異丙酰胺(29mg0.22mmol)在20。C處理18小時。再將反應(yīng)物用CH2C12(20ml)稀釋，用1N鹽酸(5ml)和飽和碳酸鉀水溶液(5ml)洗滌。分離CH2C12層，干燥(Na2S04)和真空濃縮，得到膠狀物(50mg)。粗產(chǎn)物進(jìn)行硅膠色譜，用乙酸乙酯/石油梯度(各100ml,50%、70%和90%)洗脫。收集少量快速流出的雜質(zhì)，緊接著是主要流分。和13CNMR語在CDC13中進(jìn)行。這表明主要流分是所需的純化合物。歩驟(b〗Boc保護(hù)基的脫保護(hù)將步驟(a)的產(chǎn)物(27.8mg,0.039mmol)的CH2C12(0.5ml)用三氟乙酸(0.5ml)處理，讓反應(yīng)物在室溫下靜置3小時。再將反應(yīng)混合物真空濃縮成膠狀物，以除去過量的酸，并稱重(53mg)。和13CNMR(CDC1。表明Boc基團(tuán)已經(jīng)完全脫除。將稱重的化合物2樣品溶于水中，得到10mM的TFA鹽溶液，用于放射性標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例4:化合物6的合成歩驟(a):(8-苯甲酰基氨基-2-{「叔丁氣羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基l-曱基l-辛基)-(2-叔丁氣羰基氨基-乙基)-氨基曱酸叔丁酯將苯曱酸2,5-二氧代-吡咯烷-l-基酯(20mg,0.091mmol)的無水(^2(312—次性加入到化合物2(50mg，0.08mmol)的CH2C12(lml)溶液中，將所得溶液在室溫下攪拌16小時。反應(yīng)物用CH2C12(10ml)稀釋，用水(15mlx2)萃取，干燥(MgS04),過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。剩下的殘余物用硅膠色譜法純化，用CH2CV曱醇94:6(rf=0.23)作為洗脫液，得到無色粘稠油狀物。(產(chǎn)量25mg,41。/c))。13CNMR(CDC13):526.4(CH2),26.8(CH2)，28.5(CH3x12),29.6(CH2x2),29.7(CH2),29.9(CH2),36.6(寬峰,CH)，39.4(NCH2x2),40.0(0=CNCH2x2),47.0(寬峰，NCH2x2),49.8(NCH2x2),79.7(OCx2),80.0(OCx2),127.0(ArCHx2)，128.5(ArCHx2),131.3(ArCH)，134.9(ArC),156.1(00x4)，167.6(ArC=0)。'HNMR(CDC13):51.28(8H,bs,CH2x4),1.38(18H,s,CH3x6),1.42(20H,bs，CH3x6和CH2),1.95(1H,bs,CH),3.1(4H,bs，NCH2x2)3.22(8H,bs,NCH2x4),3.42(2H,bq，,J=6Hz,01^-苯曱?；?,5.08(2H,bs,NHx2),6.18(1H,bs,HN-苯曱?；?，7.38-7.45(3H,m,ArCHx3),7.74(2H,bd,J=7Hz，ArCHx2),IR(薄膜)cm.1:3350,2976,2932,2859,1693(寬峰)，1652,1520,1419，1391，1367,1251，1166,732質(zhì)譜(Fabs)m/e:C40H7。N5O9(M+H)的計算值764，實(shí)測值764。歩驟(b):Boc保護(hù)基的脫保護(hù)將步驟(a)的Boc四胺苯曱酰胺(42mg,0.056mmol)的CH2C12(0.5ml)用三氟乙酸(0.5ml)處理，讓反應(yīng)物在室溫下靜置3小時。再將反應(yīng)物真空濃縮，以除去過量酸，得到膠狀物。預(yù)期重量(45mg)，實(shí)測重量(45.7mg)。和13CNMR(。0300)表明Boc基團(tuán)已經(jīng)完全脫除，它含有所需化合物。將稱重的化合物溶于水中，得到10mM的TFA鹽溶液(56pmol/5.6ml)，用于放射性標(biāo)記。實(shí)施例5:化合物4的合成所有反應(yīng)均在人工氮?dú)獍l(fā)生器(bubblerapparatus)中進(jìn)行。步驟(a):氯沙坦與三苯甲基衍生化固體支持物的連接將氯沙坦(MSD,0.236g,0.558mmol)和三乙胺(Fluka,0.233ml,1.67mmol)力。入到三苯曱基氯樹月旨(Novabiochem,susbstitution1.24mmol/g,0.300g)的DMF(5ml)懸浮液中。4天后，排干樹脂并洗滌。裂解一份樹脂(二氯曱烷/TFA/三異丙基硅烷，92.5:5.0:2.5,15min)。HPLC分析(柱子PhenomenexLunaC18(2)3pm4.6x50mm,溶劑A-水/0.1。/oTFA,B=乙腈/0.1%TFA;梯度10-40%B,10min;流速2.0ml/min,UV檢測214nm和254nm)，得到一個對應(yīng)于氯沙坦的峰,其^為6.7分鐘。樹脂用二氯曱烷/曱醇/二異丙基乙胺溶液(17:2:1,20ml,l小時)處理，用二氯曱烷洗滌并干燥。歩驟(b):用疊氮基置換羥基將二苯氧基磷酰疊氮(Aldrich,0.481ml,2.23mmol)和DBU(0.611ml,4.09mmol)加入到步驟(a)的連接樹脂的氯沙坦(0.372mmol)的THF(10ml)懸浮液中。讓反應(yīng)物過夜。如步驟(a)所述，裂解一份樹脂。經(jīng)LC-MS分析(柱子PhenomenexLunaCI8(2)3pm50x4.60mm,溶劑A"Jc/0.1%TFA，B=乙腈/0.1%TFA;梯度20-80%B，lOmin;流速lml/min,UV檢測214nrn,ESI-MS)，得到一個峰，^為7.3分鐘，對應(yīng)于該結(jié)構(gòu)的m/z為448.1(MH+)。歩驟(c):將疊氮基團(tuán)還原成胺向步驟(b)的樹脂的THF(4ml)的懸浮液中，加入氯化錫(II)(Acros,0.141g,0.744mmol)、苯硫酚(Fluka,0.304ml,2.976mmol)和三乙胺(Fluka,0.311ml,2.23mmol)。1.5小時后，如a)所述裂解一份樹脂。LC畫MS分析(柱子PhenomenexLunaCI8(2)350x4.60mm,溶劑A"jc/0.1%TFA,B二乙腈/O.P/oTFA;梯度20-80%B,10mm;流速lml/min,UV檢測214nm,ESI-MS),在1.9分鐘得到一個峰，其m/z422.2(MH+),正如所預(yù)期的胺。步驟(d):氯沙坦-Leu-四胺螯合劑(化合物4)用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)劑(HATU和DIEA)和標(biāo)準(zhǔn)Fmoc-裂解方案(20。/。旅咬/DMF),將Fmoc畫Leu-OH(Novabiochem,0.030g,0.084mmol)與一份步驟(c)的結(jié)合樹脂的氨基-氯沙坦(0.042mmol)的DMF偶聯(lián)。用標(biāo)準(zhǔn)Kaiser試驗(yàn)檢查偶聯(lián)是否完成。再用同樣的偶聯(lián)劑(HATU和DIEA)的DMF,將化合物1(0.026g,0.042mmol)偶聯(lián)到樹脂上。4小時后，裂解產(chǎn)物，在同一步驟(二氯曱烷/TFA/三異丙基硅烷，47.5:50:2.5溶液，1小時)中除去樹脂和Boc基團(tuán)。過濾溶液，濃縮并通過制備型HPLC純化(柱子PhenomenexLunaCI8(2)5pm21.2x250mm,溶劑A"JC/0.1%TFA,B-乙腈/0.1。/oTFA;梯度20-40%B,60min;流速10.0ml/min,UV檢測214nm),凍干后得到5mg產(chǎn)物。LC-MS分析(柱子PhenomenexLunaCI8(2)350x4.60mm,溶劑A=水/0.1%TFA，B二乙腈/O.P/。TFA;梯度10-80%B,10min;流速0.3ml/min,UV檢測214nm和254nm,ESI-MS)^5.1分鐘，m/z735.4(MH+》證實(shí)其結(jié)構(gòu)。實(shí)施例6:化合物5的合成按照實(shí)施例4所述，在固體支持物上合成該化合物。用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)劑(HATU和D正A)和標(biāo)準(zhǔn)Fmoc-裂解方案(20。/。哌啶/DMF)，將Fmoc-Leu-OH(Novabiochem,0.033g,0.092mmol)和Fmoc誦氨基PEG二乙醇酸(Polypure,0.049mg,0.092mmol)相繼與一份實(shí)施例4(c)的連接樹脂的氨基-氯沙坦(0.046mmol)的DMF偶聯(lián)。用標(biāo)準(zhǔn)Kaiser試驗(yàn)檢查偶聯(lián)是否完成。再用同樣的偶聯(lián)劑(HATU和DIEA)的DMF，將化合物1(0.029g,0.046mmol)偶聯(lián)到樹脂上。讓反應(yīng)物過夜，再將產(chǎn)物從樹脂上裂解，在同一步驟(二氯曱烷/TFA/三異丙基硅烷,47.5:50:2.5溶液，1小時)中除去Boc基團(tuán)。過濾溶液，濃縮并用制備型HPLC純化(柱子PhenomenexLunaC18(2)5pm21.2x250mm,溶劑A"Jc/0.1%HCOOH,B=乙腈/0.1%HCOOH;梯度10-40。/oB,60min;流速10.0ml/min,UV檢測214nrn)，凍干后得到3.5mg產(chǎn)物。LC-MS分析(柱子PhenomenexLunaCI8(2)350x4.60mm,溶劑A=7jc/0.1%HCOOH，B^乙腈/0.1o/oHCOOH;梯度10-40o/oB，10min;流速0.3ml/min,UV檢測214nm和254nm,ESI誦MS)^4.7分鐘，m/z1025.4(MH+))證實(shí)其結(jié)構(gòu)。實(shí)施例7:化合物8的合成步驟(a):N-Boc-N-fFmocNH-CH，CH2l-Gly-OH的合成將lgN-[FmocNH-CH2CH2]-Gly-OtBu.HCl(Fluka09660)用20ml50。/。三氟乙酸(TFA)的二氯曱烷(含有0.5ml三異丙基硅烷)處理60min。真空蒸發(fā)所得混合物，殘余物再溶于20ml50%四氬吹喃/水中。加入2.6g叔丁氧羰基酐和1.2mlW-曱基嗎啉，將所得混合物撹拌4天。然后真空蒸發(fā)四氫呋喃，將殘余物再溶于二氯甲烷中。有機(jī)層用水洗滌，用MgSC^干燥。真空蒸發(fā)二氯曱烷，殘余物再溶于5ml二曱基曱酰胺中。二甲基甲酰胺溶液用400ml60%乙腈/水稀釋，再泵入制備型RP-HPLC柱中進(jìn)行純化(30-80%B,40min,其中A=H2O/0.1%TFA，B=CH3CN/0.1%TFA,流速50ml/min,在PhenomenexLunalOfiC18(2)250x50mm柱上)，得到450mg純產(chǎn)物。產(chǎn)物用分析型HPLC分析(梯度20-70%B,10min，其中A=H2O/0.1%TFA，B=CH3CN/0.1%TFA;流速0.3ml/min;柱子PhenomenexLuna3pCI8(2)50x2mm;檢測UV214nm;產(chǎn)物保留時間8.66min)。產(chǎn)物用電噴霧質(zhì)譜法進(jìn)一步表征(MH+計算值441.2;MH+實(shí)測值440.8)。步艱"b):N-((CHA-麗COCH,-四胺)-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH(化合物8)的合成在AppliedBiosystems433A肽合成儀上，從O.lmmolFmoc-Ile-Wang樹脂開始，合成血管緊張素II的肽類似物。過量的lmmol預(yù)先活化的氨基酸[用六氟磷酸O-苯并三唑-l-基-N,N,N',N'-四曱基脲輸(HBTU)]用于偶聯(lián)步驟，加到精氨酸上。將123mgN-Boc-N-[FmocNH-CH2CH2]-Gly-OH、114mg六氟磷酸7\4(二曱氨基)畫1//-1，2,3-三唑并[4,5-Z)]吡啶-l-基亞甲基]-A^-曱銨/Z-氧化物(HATU)和60nLN-曱基嗎啉溶于二曱基曱酰胺中，攪拌5min,然后在氮?dú)獍l(fā)生器中加入到樹脂中。2小時后除去試劑，樹脂用二曱基甲酰胺和二氯曱烷洗滌。樹脂用20%哌啶/二曱基曱酰胺(3x10ml)處理，再用二曱基曱酰胺洗滌。將23mg化合物l、14mgHATU和7.5pLN-曱基嗎啉溶于二曱基曱酰胺中長達(dá)10min,加入到樹脂中。4小時后除去試劑，樹脂用二曱基曱酰胺和二氯曱烷洗滌。在10ml三氟乙酸(含有2.5%三異丙基硅烷和2.5%水)中，同時脫除側(cè)鏈保護(hù)基并從樹脂上裂解肽達(dá)90分鐘。真空除去三氟乙酸，將乙醚加入到殘余物中，沉淀的產(chǎn)物用乙醚洗滌并風(fēng)干。用制備型RP畫HPLC純化(0國30%B,40min,其中A=H2O/0.1%TFA,B=CH3CN/0.1%TFA,流速10ml/min,在PhenomenexLuna10pC18(2)250x21.20mm柱上)產(chǎn)物，得到32mg純的螯合物-肽綴合物。產(chǎn)物通過分析型HPLC分析(梯度，5-50%B,20min，其中A=H2O/0.1%TFA，B=CH3CN/0.1%TFA;流速1ml/min;柱子，PhenomenexLunaCI8(2)50x2mm;檢測，UV214nm;產(chǎn)物保留時間5.22min)。產(chǎn)物用電噴霧質(zhì)譜法進(jìn)一步表征(MH+計算值，1197.8;MH+實(shí)測值1197.8)。實(shí)施例8:化合物3-7的""Tc放射性標(biāo)記制備含有下列成分的凍干藥盒("ChelakitAplus"):<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>將2S50|iig待標(biāo)記化合物(溶于25-50溶劑)依次加入到CHELAKIT-Aplus、發(fā)生器洗出液(generatoreluate)(""Tc047鹽水,l.Oml)中。將溶液混合，讓其在室溫下放置20-30分鐘。在室溫下，在pH9,給化合物3和化合物6用锝進(jìn)行標(biāo)記，得到高產(chǎn)量的相應(yīng)陽離子99mTc絡(luò)合物(RCP>90%)。四胺絡(luò)合物用HPLC純化(流動相0.1%TFA/水，0.1%TFA/乙腈；XTERRARP183.5^im4.6x150mm柱)，在50mM磷酸緩沖液中，在37。C穩(wěn)定2小時(2小時后經(jīng)HPLC,RCP〉95%)。實(shí)施例9:""Tc絡(luò)合物親脂性(LogP)的測定實(shí)施例8的99mTc絡(luò)合物的辛醇-水分配系數(shù)(LogP)測定如下在離心管中，將10pL實(shí)施例8的經(jīng)HPLC純化的99mTc絡(luò)合物與l-辛醇(2ml)和50mM磷酸緩沖液(pH=7.4,2.0ml)混合在一起。將該管在室溫下渦旋振蕩1分鐘，然后高速離心60min。將兩相各0.1ml樣品移入其它試管中，小心避免兩相間交叉污染，然后在WallacWizzardy計數(shù)器上計數(shù)。測定重復(fù)3次。分配系數(shù)P計算如下P=(辛醇中的cpm-背景cpm)/(水中的cpm-背景cpm)。通常最終分配系數(shù)值用logP表示。結(jié)果見表1:表l:锝絡(luò)合物四胺化合物的LogP值化合物編號的LogP(辛醇/50mM99mTc絡(luò)合物磷酸緩沖液)3<-24+0.6-0.16-1.87<國2實(shí)施例10:""Tc絡(luò)合物的生物分布按照實(shí)施例8,制備化合物4、5和7的99mTc絡(luò)合物。在正常雄性Wistar大鼠(180-220g)中，注射(p丄)試驗(yàn)品后，在兩個預(yù)定時間點(diǎn)(2分鐘和120分鐘)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動物用氟烷(6%氧)麻醉，注射0.1ml(500MBq/ml)試驗(yàn)品(TestItem),處死，解剖，測定樣品的放射性。結(jié)果見表l:表l:""Tc絡(luò)合物的生物分布<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>實(shí)施例11:化合物1的替代制備方法將實(shí)施例1步驟(e)的N，N'-雙(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-2-(2-羥乙基)-l,3-二(叔丁氧羰基氨基)丙烷溶于四氯化碳(14ml)和乙腈(14ml)中。加入水(21ml),得到兩相混合物，再加入高碘酸鈉(4.5g,21mmo1)和氯化釕水合物(35mg,0.026mmo1)。所得深褐色溶液在室溫下攪拌1小時，再用CH2C12(40ml)稀釋。分離有機(jī)層，水相用更多CH2C12(40mlx3)萃取。合并所有有機(jī)萃取液，干燥(MgSO》，過濾，減壓蒸發(fā)揮發(fā)物，得到化合物1的鈉鹽，為黑色粘稠殘余物，無需進(jìn)一步純化就可使用(4.15g,96%)。l3CNMR(CDC13):3C28_2(xl2)(CH3)，34.1(CH2),34.4(CH),38.6(x2)(NCH2),46.8(x2)(NCH2),49.3(x2)(NCH2),79.0(x2)(OC),肌2(x2)(OC),155.9(x4)(C=0),175.4(COOH).'HNMR(CDC13):SH1.29(l膽,s,CH3x6),1.35(18H，s'CH3x6),2.19(1H，br,CH)，2.40(2H,br,CH2)，3.05-3.23(12H,br'NCH2x6)>5.10-5.24(2H,br，NHx2)質(zhì)譜(ESI)m/e:(M+Na)C29H540'。N4Na的計算值641.3738，實(shí)測值641.3787。實(shí)施例12:化合物9的制備將1,3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC;2.16g,10.5mmol)—次性加入到化合物1(4.15g,6.90mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(1.81g，15.7mmol)的無水THF(30ml)的攪拌溶液中。所得混合物在室溫下攪拌16小時，過濾除去沉淀的DCU(1,3-二環(huán)己基脲)。從濾液中蒸發(fā)揮發(fā)物，得到蠟狀殘余物，向其中加入無水乙醚(50ml)，沉淀更多DCU,并用過濾除去。乙醚溶液用水(25mlx2)洗滌，干燥(MgS04)，過濾并減壓蒸發(fā)溶劑，得到蠟狀固體。該固體用硅膠色譜法純化，用CH2cy乙醚混合物(l:l)洗脫，直到除去未反應(yīng)的DCC。洗脫液換成乙醚，分離得到所需產(chǎn)物(rf=0.4,DCM/Et201:1)，為無色固體(2.7g,57%)。mp66-68。C。'3CNMR(CDC13):Sc25.6(x2)(CH2)，28.4(x12)(CH3),31.8(CH2),35.2(CH),39.3(x2)(NCH2),47.1(x2)(NCH2),49.1(x2)(NCH2)，79.9(x2)(OC),80.5(x2)(OC),156.1(x4)(C=0),167.7(C=0),169.1(x2)(C=0).'HNMR(CDC13):SH1.35(18H,s，CH3x6)，1.41(18H,s,CH3x6),2.52(3H,brs,CH&CH2),2.77(4H,s,CH2x2),3.10-3.35(12H'brs,NCH2x6),5.08(2H,brsNHx2)質(zhì)譜(ESI)m/e:(M+Na)C33H54N5012Na的計算值738.3896,實(shí)測值738.3893。權(quán)利要求1.一種下式(I)的锝絡(luò)合物其中X為-NR-、-CO2-、-CO-、-NR(C＝S)-、-NR(C＝O)-、-CONR-或Q基團(tuán)；每個Y獨(dú)立地為D-氨基酸、L-氨基酸、-CH2-、-CH2OCH2-或-OCH2CH2O-或X基團(tuán)；Z為合成生物靶向部分；n為1-8的整數(shù)；m為0-30的整數(shù)；R為H、C1-4烷基、C2-4烷氧基烷基、C1-4羥基烷基或C1-4氟代烷基；Q為A為抗衡離子；前提條件是X1-(Y)m鏈中的原子缺乏鍵，其中一個雜原子直接與另一個雜原子鍵合。2.權(quán)利要求1的锝絡(luò)合物，其中所述锝放射性同位素是99mTc或94mTc。3.權(quán)利要求1或2的锝絡(luò)合物，其中n為1-6,X為-CONR-或-NR(C=0)-。4.權(quán)利要求3的锝絡(luò)合物，其中X為-CONH-或-NH(C-O)-。5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的锝絡(luò)合物，其中-(Y)m-包括式(-OCH2CH20-)J々PEG基團(tuán)，其中w為3-25的整數(shù)。6.權(quán)利要求5的锝絡(luò)合物，其中w為6-22。7.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的锝絡(luò)合物，其中-(Y)z包含1-10個氨基酸。8.權(quán)利要求7的锝絡(luò)合物，其中所述氨基酸獨(dú)立選自甘氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或絲氨酸。9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的锝絡(luò)合物，其中Z選自(i)3-30聚體肽；(ii)酶底物、酶拮抗劑或酶抑制劑。10.—種螯合劑綴合物，所述螯合劑綴合物用于制備權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的锝絡(luò)合物，所述綴合物為下式II:其中X、Y、Z、n和m如權(quán)利要求1中定義；QLQ4蟲立地為Q基團(tuán)，其中Q為H或氨基保護(hù)基。11.權(quán)利要求10的螯合劑綴合物，其中Q'-QS都為H。12.權(quán)利要求10的螫合劑綴合物，其中Qi和(^都為H，Q2、Q3、Q4和Q5各自為叔丁氧羰基。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>13.—種放射性藥物，所迷藥物包含適于人體給藥形式的權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的式I锝絡(luò)合物以及生物相容性載體，其中所述式I锝絡(luò)合物中的A為藥學(xué)上可接受的抗衡離子。14.權(quán)利要求13的放射性藥物，其中所述锝放射性同位素是""Tc或94mTc。15.—種藥盒，所述藥盒用于制備權(quán)利要求13或14的放射性藥物，所述藥盒包括(i)權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)的螯合劑綴合物；(ii)生物相容性還原劑。16.權(quán)利要求15的藥盒，其中所述生物相容性還原劑包括亞錫離子。17.權(quán)利要求15或16的藥盒，其中QL(/都為H。18.權(quán)利要求15-17中任一項(xiàng)的藥盒，其中Z如權(quán)利要求9中定義。19.一種下式III的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中QJ-(^和n如權(quán)利要求10中定義;E為適于與權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的生物耙向部分Z綴合的官能(CH2)n-E前提條件是a.當(dāng)11=3時，QLQS中的至少一個為氨基保護(hù)基;b.當(dāng)n=3或5時，E不為OH。20.權(quán)利要求19的化合物，其中E為-NH2、-C02M、-NCS、-NCO、馬來酰亞胺或丙烯酰胺，其中M為H、陽離子、保護(hù)基或活性酯。21.權(quán)利要求20的化合物，其中E為-NH2或-C02M。22.權(quán)利要求19-21中任一項(xiàng)的化合物，其中n為1-6。全文摘要本發(fā)明提供了具有生物靶向部分并通過連接基團(tuán)連接的四胺螯合劑綴合物及其锝絡(luò)合物，它們用作放射性藥物。連接基團(tuán)是使得螯合劑在橋頭位置單官能化并且提供柔韌性和芳基缺乏，使親脂性和空間體積最小化。提供了螯合劑的保護(hù)形式，使其可以與各種各樣的靶向分子綴合，而不干擾與四胺螯合劑的胺氮反應(yīng)。描述了官能化螯合劑的合成以及雙官能螯合物前體。描述了包含本發(fā)明的锝金屬絡(luò)合物的放射性藥物組合物，以及用于制備這類放射性藥物的非放射性藥盒。文檔編號A61K103/10GK101128219SQ200580029736公開日2008年2月20日申請日期2005年7月19日優(yōu)先權(quán)日2004年7月19日發(fā)明者A·E·斯托里,H·沃茲沃思,N·A·鮑威爾,P·鄧坎森申請人:通用電氣健康護(hù)理有限公司