專利名稱：治療自身炎性疾病的ice抑制劑的制作方法
相關(guān)申請的交叉參考本申請根據(jù)35 U.S.C.119(e)要求2004年5月27日提交的美國臨時專利申請No.60/574,993的利益，其公開內(nèi)容引用在此作為參考。
背景技術(shù)：
自身炎性疾病是一組相關(guān)的病癥，包括Muckle-Wells綜合征(MWS)、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、家族性地中海熱(FMF)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(CINCAS)、a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超lgD周期熱綜合征(HIDS)和Blau氏綜合征(Gumucio等人，Clin.Exp.Rheumatol.20S-45-S-53，2002)。
這些病癥具有不同的遺傳和表型特征，但是都具有一些臨床表現(xiàn)特性，包括發(fā)熱、蕁麻疹、關(guān)節(jié)痛、漿膜炎、系統(tǒng)性淀粉樣變性作為共同的并發(fā)癥、強(qiáng)烈的急性期響應(yīng)和病患組織中突出的中性白細(xì)胞增多。
這些病癥是由編碼各種參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)的蛋白質(zhì)的基因的突變所導(dǎo)致的，主要是參與白介素-1β轉(zhuǎn)化酶(ICE，a.k.a.天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1)活化調(diào)節(jié)的那些。ICE是轉(zhuǎn)化無活性前體白介素-1β原(pro-IL-1β)為活性細(xì)胞因子白介素-1β(IL-1β)以及pro-IL-18為成熟活性IL-18的蛋白酶。在這些調(diào)控性基因和蛋白質(zhì)中，例如有基因CAIS1，它編碼蛋白質(zhì)cryopyrin。這種基因的突變和cryopyrin的變化改變ICE活化、隨后pro-IL-1β原加工為IL-1β，導(dǎo)致MWS和FCAS(Hoffman等人，Nat.Genet.29301-305，2001)。
IL-1β在MWS(根據(jù)推斷，以及FCAS、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS和其他自身炎性疾病與病癥)病因中的關(guān)鍵作用得到MWS患者對重組人白介素-1受體拮抗劑(rhuIL-1Ra，anakinra)治療的應(yīng)答的證明，戲劇性地、迅速而持續(xù)地減少臨床炎性癥狀、減少血清淀粉樣蛋白A(急性期炎性反應(yīng)物)和淀粉樣蛋白的尿排泄。這種治療盡管有效，不過其應(yīng)用有限，因?yàn)樗枰咳兆⑸渲委焺?br> 響應(yīng)于阿那白滯素(anakinra)的深刻臨床改善可能表明IL-1是作為疾病狀態(tài)基礎(chǔ)的關(guān)鍵炎性細(xì)胞因子，而且的確這類疾病狀態(tài)在事實(shí)上是其遺傳基礎(chǔ)尚未被確定的自身炎性綜合征。實(shí)例包括全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎(soJIA)，也被稱為斯提爾氏病，和巨噬細(xì)胞活化綜合征。本發(fā)明也涵蓋這些適應(yīng)癥。
本發(fā)明描述ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase)抑制劑的用途，無論是ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1選擇性的還是對一些其他天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(2-14)有廣泛活性。這種治療通過抑制ICE和抑制IL-1β產(chǎn)生，將減少M(fèi)WS、FCAS、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS和其他自身炎性疾病、病癥或綜合征的癥狀和其他疾病條件。
盡管阿那白滯素已經(jīng)顯示在治療Muckle-Wells綜合征、家族性寒性自身炎性綜合征、超IgD綜合征和全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎上是有效的，不過阿那白滯素是一種蛋白質(zhì)，因此不具備理想的藥學(xué)性質(zhì)。因此，需要治療某些疾病的小分子、口服活性ICE抑制劑。這類化合物將極為有用于治療ICE在其中起作用的上述疾病狀態(tài)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及治療某些與自身炎性疾病(有時稱之為自身炎性發(fā)熱綜合征)有關(guān)的疾病、cryopyrin-有關(guān)的周期綜合征和相關(guān)綜合征的化合物，例如Muckle-Wells綜合征(MWS)、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、家族性地中海熱(FMF)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(CINCAS)、a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超IgD周期熱綜合征(HIDS)和Blau氏綜合征。本發(fā)明也涉及治療某些表現(xiàn)響應(yīng)于阿那白滯素的深刻臨床改善的疾病的化合物。本發(fā)明也涉及治療上述疾病的方法。
本發(fā)明也涉及鑒定可用于治療這些疾病的成分的方法。


圖1A-1C描繪化合物7對FCAS患者全血產(chǎn)生IL-1β和IL-18的體外抑制作用，與健康志愿者比較。參見實(shí)施例18。
圖2描繪化合物7對MWS患者全血產(chǎn)生IL-1β的體外抑制作用，與健康志愿者比較。參見實(shí)施例19。
圖3A-3C描繪MWS患者對900mg化合物7治療14天的臨床響應(yīng)，每天給藥三次。圖3A中，血清白介素-18在第14天平均減少55％。圖3B中，血清急性期反應(yīng)物蛋白質(zhì)血清淀粉樣蛋白A(SAA)和C-反應(yīng)性蛋白(CRP)分別平均減少75％和65％。圖3C中，自我報(bào)告的患者總體癥狀在治療期間平均減少60％。參見實(shí)施例21。
發(fā)明詳細(xì)說明本發(fā)明提供本文公開的化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物，它們特別有效地改善、治療和/或預(yù)防某些與自身炎性綜合征和相關(guān)綜合征有關(guān)的疾病，包括但不限于Muckle-Wells綜合征(MWS)、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、家族性地中海熱(FMF)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(CINCAS)、a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超IgD周期熱綜合征(HIDS)和Blau氏綜合征，以及全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎(也被稱為斯提爾氏病)和巨噬細(xì)胞活化綜合征。與這些疾病有關(guān)的癥狀包括但不限于發(fā)熱、蕁麻疹、關(guān)節(jié)炎、漿膜炎、系統(tǒng)性淀粉樣變性、強(qiáng)烈的急性期響應(yīng)和病患組織中突出的中性白細(xì)胞增多。
根據(jù)本發(fā)明的化合物可以用于治療哺乳動物的這些疾病狀態(tài)。任何抑制ICE的化合物都可以用在本發(fā)明的方法和組合物中。這類化合物包括選擇性抑制ICE的那些化合物和抑制天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶或ICE/CED-3家族中的一種或多種酶的那些。
本發(fā)明的化合物抑制ICE和/或降低IL-1、特別是IL-1β和IL-18水平。這些化合物能夠測定例如它們抑制ICE、IL-1β和/或IL-18產(chǎn)生、調(diào)節(jié)IL-1和/或IL-18水平和/或影響IL-1β和/或IL-18活性的能力。測試每種這些活性的測定法是本領(lǐng)域已知的(參見本文實(shí)施例、WO 95/35308、WO 97/22619、WO 99/47545或WO 01/90063)。因此，這些化合物能夠靶向和抑制本文所述ICE和/或IL-1介導(dǎo)疾病中的事件。
可以用于本發(fā)明的化合物包括但不限于下列文獻(xiàn)的化合物WO04/058718，WO 04/002961，WO 03/088917，WO 03/068242，WO03/042169，WO 98/16505，WO 93/09135，WO 03/106460，WO 03/103677，WO 03/104231，WO 02/085899，WO 00/55114，WO 00/55127，WO00/61542，WO 01/05772，WO 01/10383，WO 01/16093，WO 01/42216，WO 01/72707，WO 01/90070，WO 01/94351，WO 02/094263，WO 02/42278，美國專利6,184,210，美國專利6,184,244，美國專利6,187,771，美國專利6,197,750，美國專利6,242,422，April 2001 AmericanChemical Society(ACS)meeting in San Diego，California，USA，WO 02/22611，US 2002/0058630，WO 02/12638，WO 95/35308，美國專利5,716,929，WO 97/22619，美國專利6,204,261，WO 99/47545，WO 01/90063，美國專利公報(bào)2004/0014753，美國專利公報(bào)2004/0009966，美國專利公報(bào)2003/0236296，美國專利公報(bào)2003/0096737，美國專利公報(bào)2003/0092703，美國專利公報(bào)2002/0169177，美國專利6,693,096，美國專利6,610,683，美國專利6,531,467，美國專利6,528,506，美國專利6,200,969，WO2003/072528，WO 2003/032918，WO 01/00658，WO 98/10778，美國專利6,716,818，美國專利6,620,782，美國專利6,566,338，美國專利6,495,522，美國專利6,355,618,6，153,591，WO 2005/003100，WO2004/002401，WO 00/61542，WO 00/55114，WO 99/47154，美國專利6,083,981，美國專利5,932,549，美國專利5,919,790，美國專利5,744,451，WO 2002/089749，WO 99/36426，WO 98/16505，WO98/16504，WO 98/16502，美國專利6,316,415，美國專利5,932,549，美國專利5,919,790，美國專利5,744,451，EP 1082127，EP 1049703，EP 0932600，EP 0932598，WO 99/56765，WO 93/05071，EP 0600880和EP 1378573(如本文所述，它們都引用在此作為參考)。在一種實(shí)施方式中，用在本發(fā)明中的化合物包括下列那些WO 00/55114，W000/55127，WO 00/61542，W0 00/61542，WO 01/05772，WO 01/10383，WO 01/16093，WO 01/42216，WO 01/72707，WO 01/90070，WO 01/94351，美國公報(bào)2003/0092703，WO 02/094263，美國公報(bào)2002/0169177，美國專利6,184,210，美國專利6,184,244，美國專利6,187,771，美國專利6,197,750，美國專利6,242,422，April 2001 AmericanChemical Society(ACS)meeting in San Diego，California USA，WO 02/22611，美國公報(bào)2002/0058630，美國公報(bào)2003/0096737，WO95/35308，WO 97/22619，WO 99/47545和WO 01/90063。在另一種實(shí)施方式中，用在本發(fā)明中的化合物包括下列那些WO 04/058718，WO04/002961，WO 95/35308，WO 97/22619，WO 99/47545和WO 01/90063。或者，用在本發(fā)明中的化合物包括下列那些WO 95/35308，WO97/22619，WO 99/47545和WO 01/90063。優(yōu)選的化合物是在本文權(quán)利要求書中引用的那些。這些化合物可以借助技術(shù)人員已知的方法和在本文引用文獻(xiàn)中公開的方法獲得。
本發(fā)明的藥物組合物和方法因此將可用于體外或體內(nèi)控制IL-1β、IL-18和其它生物標(biāo)志物的水平和/或活性。本發(fā)明的組合物和方法因而將可用于體內(nèi)控制IL-1β、IL-18和其它生物標(biāo)志物的水平，治療某些病癥或者減少其進(jìn)展、嚴(yán)重性或后果，包括本文所述疾病、病癥或后果。
按照另一種實(shí)施方式，本發(fā)明提供組合物，包含如上所述本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物(例如鹽)和藥學(xué)上可接受的載體。
按照另一種實(shí)施方式，本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含另一種治療劑。這類成分包括但不限于溶栓劑，例如組織纖溶酶原激活物和鏈激酶；抗炎劑；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；脂氧合酶抑制劑；細(xì)胞因子拮抗劑(包括但不限于對抗TNF、IL-1、IL-6、IL-1 2、IL-18或它們受體的抗體或結(jié)合蛋白)；趨化因子拮抗劑；免疫抑制劑；抗癌劑；抗病毒劑；細(xì)胞因子(包括但不限于白介素-1受體拮抗劑或阿那白滯素)；生長因子；免疫調(diào)控劑(例如溴隱亭、抗人α干擾素抗體、IL-2、GM-CSF、甲硫氨酸腦啡肽、干擾素α、二硫代氨基甲酸二乙酯、腫瘤壞死因子、納曲酮和rEPO)；前列腺素；或抗血管過度增殖化合物。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”表示無毒性載體，它可以與本發(fā)明化合物一起對患者給藥，并且不會破壞其藥理活性。
可以用在這些組合物中的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白質(zhì)(例如人血清白蛋白)、緩沖物質(zhì)(例如磷酸鹽)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)(例如硫酸魚精蛋白)、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟類、聚乙烯-聚丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
在僅包含本發(fā)明化合物作為活性組分的藥物組合物中，給予這些組合物的方法可以另外包含對受治療者給予附加成分的步驟。這類成分包括但不限于溶栓劑，例如組織纖溶酶原激活物和鏈激酶；抗炎劑；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑；脂氧合酶抑制劑；細(xì)胞因子拮抗劑，包括但不限于對抗TNF、IL-1、IL-6、IL-12、IL-18或它們受體的抗體或結(jié)合蛋白；趨化因子拮抗劑；免疫抑制劑；抗癌劑；抗病毒劑；細(xì)胞因子，包括但不限于白介素-1受體拮抗劑或阿那白滯素；生長因子；免疫調(diào)控劑，例如溴隱亭、抗人α干擾素抗體、IL-2、GM-CSF、甲硫氨酸腦啡肽、干擾素α、二硫代氨基甲酸二乙酯、腫瘤壞死因子、納曲酮和rEPO；前列腺素；或抗血管過度增殖化合物。當(dāng)使用第二成分時，該第二成分可以以單獨(dú)的劑型或者作為單一劑型的一部分與本發(fā)明化合物或組合物一起給藥。
化合物在上述組合物中的含量應(yīng)當(dāng)足以導(dǎo)致疾病的嚴(yán)重性或者ICE抑制、IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的水平或者IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的活性有可檢測的降低。
如果在這些組合物中采用本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，這些鹽優(yōu)選地是從無機(jī)或有機(jī)酸和堿衍生的。這樣的酸式鹽包括如下乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。堿鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(例如鈉和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣和鎂鹽)、有機(jī)堿的鹽(例如二環(huán)己胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺鹽)和氨基酸(例如精氨酸、賴氨酸)的鹽等。
而且，堿性含氮基團(tuán)可以用下列試劑季銨化，例如低級烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸的二甲基、二乙基、二丁基和二戊基酯；長鏈鹵化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物，例如芐基和苯乙基的溴化物和其他。由此得到水-或油-可溶性或可分散性產(chǎn)物。
用在本發(fā)明組合物和方法中的化合物也可以通過附加適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)加以修飾，以增強(qiáng)選擇性生物性質(zhì)。這類修飾是本領(lǐng)域已知的，包括增加進(jìn)入給定生物系統(tǒng)(例如血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))的生物滲透性、增加口服可利用性、增加溶解度以便注射給藥、改變代謝和/或改變排泄速率。
按照優(yōu)選的實(shí)施方式，可以將本發(fā)明的組合物配制成對受治療者給藥，例如哺乳動物，優(yōu)選人類。這類藥物組合物用于改善、治療或預(yù)防受治療者的自身炎性疾病，包含抑制ICE的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的這類藥物組合物可以被口服、腸胃外、通過吸入噴霧、局部、直腸、鼻、口腔、陰道或經(jīng)由植入藥庫給藥。本文所用的術(shù)語“腸胃外”包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、傷口內(nèi)與顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，組合物是口服或靜脈內(nèi)給藥的。
本發(fā)明組合物的無菌可注射形式可以是水性或油性混懸劑。這些混懸劑可以按照本領(lǐng)域已知的技術(shù)、利用適合的分散或潤濕劑和懸浮劑加以配制。無菌的可注射制劑還可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液劑或混懸劑，例如在1，3-丁二醇中的溶液?？梢圆捎玫目山邮艿妮d體和溶劑有水、林格氏溶液和等滲的氯化鈉溶液。另外，無菌的不揮發(fā)油也經(jīng)常被用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以采用任何溫和的不揮發(fā)油，包括合成的單-或二-甘油酯。脂肪酸、例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制備注射劑，它們是天然的藥學(xué)上可接受的油，例如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化形式。這些油溶液劑或混懸劑還可以含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，例如羧甲基纖維素或相似的分散劑，它們普遍用于配制藥學(xué)上可接受的劑型，包括乳劑和混懸劑。出于制劑的目的，還可以使用其他常用的表面活性劑，例如吐溫類、司盤類，和其他乳化劑或生物利用度增強(qiáng)劑，它們普遍用在藥學(xué)上可接受的固體、液體或其他劑型的制造中。
如果使用固體載體，制劑可以被壓片，放置在硬明膠膠囊中，為粉末或顆粒的形式，或者為片劑或錠劑的形式。固體載體的量例如將從約25mg至800mg，優(yōu)選25mg至400mg。當(dāng)使用液體載體時，制劑例如可以是糖漿、乳液、軟明膠膠囊、無菌可注射液體的形式，例如安瓿或非水性液體懸液。若組合物為膠囊的形式，任何常規(guī)的包封法都是適合的，例如在硬明膠膠囊外殼中使用上述載體。
糖漿制劑可以由化合物在液體載體中的懸液或溶液組成，所述液體載體例如乙醇、甘油或水，含有矯味劑或著色劑。氣霧劑制劑可以由化合物在液體載體中的溶液或懸液組成，所述液體載體例如水、乙醇或甘油；在干粉氣霧劑中，制劑可以包括例如濕潤劑。
本發(fā)明的制劑包含活性成分以及一種或多種可接受的載體和可選的任何其他治療成分。在與制劑其他成分相容并且對其接受者無害的意義上，載體必須是“可接受的”。
本發(fā)明的藥物組合物可以按任意口服可接受的劑型口服給藥，包括但不限于膠囊劑、片劑、水性混懸劑或溶液劑。在口服用片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。就按膠囊劑型口服給藥而言，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)口服用需要水性混懸劑時，活性成分是與乳化和懸浮劑聯(lián)用的。如果需要的話，還可以加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。
或者，本發(fā)明藥物組合物可以按栓劑形式直腸給藥。它們可以如下制備，將藥物與適合的無刺激性賦形劑混合，所述賦形劑在室溫下是固體，但是在直腸溫度下是液體，因此將在直腸內(nèi)融化，釋放藥物。這類材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
本發(fā)明藥物組合物還可以被局部給藥，尤其當(dāng)治療靶包括容易為局部用藥接近的區(qū)域或器官時，包括眼、皮膚或下部腸道的疾病。適合的局部制劑容易根據(jù)每種這些區(qū)域或器官加以制備。
下部腸道的局部用藥可以按直腸栓劑(見上)或適合的灌腸劑進(jìn)行。還可以使用局部透皮貼劑。
就局部用藥而言，可以將藥物組合物配制成適合的軟膏劑，其中含有懸浮或溶解在一種或多種載體中的活性組分。用于本發(fā)明化合物局部給藥的載體包括但不限于礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水?；蛘撸梢詫⑺幬锝M合物配制成適合的洗劑或霜劑，其中含有懸浮或溶解在一種或多種藥學(xué)上可接受的載體中的活性組分。適合的載體包括但不限于礦物油、脫水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鯨蠟酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
就眼用而言，可以將藥物組合物配制成在等滲的經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的微粉化混懸劑，或者優(yōu)選為在等滲的經(jīng)過pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的溶液，其中含有或沒有防腐劑，例如苯扎氯銨?；蛘?，就眼用而言，可以將藥物組合物配制成軟膏劑，例如凡士林。
本發(fā)明藥物組合物還可以借助鼻氣霧劑或吸入給藥。這類組合物是按照藥物制劑領(lǐng)域熟知的技術(shù)制備的，可以制成在鹽水中的溶液劑，其中采用苯甲醇或其他適合的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收增強(qiáng)劑、碳氟化合物和/或其他常規(guī)的增溶或分散劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的形式和特征取決于與之組合的活性成分的量、給藥的途徑和其他熟知的變量。
上述化合物和組合物也可用于涉及某些疾病的治療應(yīng)用。
這類某些疾病包括自身炎性綜合征，例如cryopyrin-有關(guān)的周期綜合征(包括Muckle-Wells綜合征、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病))、家族性地中海熱、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超IgD周期熱綜合征(HIDS)和Blau氏綜合征。其他遺傳基礎(chǔ)尚未被確定的自身炎性綜合征可以包括全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎(soJIA)，也被稱為斯提爾氏病，和巨噬細(xì)胞活化綜合征。
本發(fā)明的化合物能夠抑制IL-1、特別是IL-1β和/或IL-18的釋放，因而能夠用于抑制或阻滯本文所述某些疾病的若干病理生理學(xué)后果。
本發(fā)明也涉及治療某些疾病的治療方法，該方法(1)抑制IL-1、特別是IL-1β和IL-18從細(xì)胞中釋放，和/或(2)預(yù)防IL-1、特別是IL-1β和IL-18在哺乳動物(包括人類)中的過高組織水平的不希望的、有毒的或致命的后果。這種方法包含對哺乳動物給予有效的ICE抑制量的一種或多種ICE/CED-3抑制劑。這種方法也能夠用于某些適用于此的疾病的預(yù)防性處置或預(yù)防，包括Muckle-Wells綜合征(MWS)、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、家族性地中海熱(FMF)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(CINCAS)、a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超IgD周期熱綜合征(HIDS)、Blau氏綜合征、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯提爾氏病和巨噬細(xì)胞活化綜合征。本發(fā)明提供治療這些病癥的方法，該方法對有需要的哺乳動物(包括人類)給予有效量的這類化合物。
這些化合物通過抑制ICE和阻滯IL-1、特別是IL-1β和IL-18的釋放或者降低IL-1、特別是IL-1β和IL-18水平和活性，以及在每種這些環(huán)境中過量IL-1、特別是IL-1β和IL-18水平的病理生理學(xué)作用，直接促進(jìn)某些疾病的停止或消散，促進(jìn)正常功能的恢復(fù)。總之，這些作用涉及它們在治療某些疾病中的新用途。
ICE抑制作用可以借助本領(lǐng)域已知的方法加以測量，本文有更充分的描述。
術(shù)語“抑制I L-1、特別是IL-1β和IL-18的釋放”表示a)降低哺乳動物、例如人類的體內(nèi)IL-1β和/或IL-18水平；b)減量調(diào)節(jié)體外或體內(nèi)IL-1、特別是IL-1β和IL-18水平；或者c)通過直接抑制體內(nèi)或體外IL-1β和IL-18合成或轉(zhuǎn)譯后事件，以及間接抑制IL-1α，減量調(diào)節(jié)IL-1、特別是IL-1β和IL-18活性。
這些化合物可以用于抑制IL-1、特別是IL-1β和IL-18被單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞(例如成纖維細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞)和很多其他細(xì)胞類型所釋放。
術(shù)語“病癥”或“狀態(tài)”表示在受治療者中產(chǎn)生有害生物學(xué)后果的任何疾病、病癥或效應(yīng)。
患者血液或細(xì)胞或者細(xì)胞培養(yǎng)物中(也就是細(xì)胞或細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi))IL-1、特別是IL-1β和IL-18蛋白的水平可以如下測定，例如測定與IL-1β或IL-18或者其他已知作為活性IL-1β和IL-18存在的結(jié)果而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、包括但不限于IL-1α的免疫特異性結(jié)合。這類方法是本領(lǐng)域已知的。例如，可以使用的免疫測定法包括但不限于競爭性與非競爭性測定系統(tǒng)、蛋白質(zhì)印跡、放射性免疫測定法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)、“三明治”免疫測定法、免疫沉淀測定法、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀素反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測定法、凝集作用測定法、補(bǔ)體-固定測定法、免疫放射測定法、熒光免疫測定法、A蛋白免疫測定法和帶有標(biāo)記抗體的FACS分析。這類測定法是本領(lǐng)域熟知的(例如參見Ausubel et al，eds.，1994，Current Protocols in MolecularBiology，Vol.1，John Wiley&Sons，Inc.，New York，其全文引用在此作為參考)。
也可以利用競爭性結(jié)合測定法測定IL-1、特別是IL-1β和IL-18的水平。競爭性結(jié)合測定法的一個實(shí)例是放射性免疫測定法，包含在遞增量未標(biāo)記IL-1β或IL-18的存在下溫育來自表達(dá)IL-1、特別是IL-1β和IL-18的細(xì)胞的帶標(biāo)記蛋白(例如3H或125I)與IL-1β或IL-18抗體，再檢測與帶標(biāo)記IL-1β或IL-18結(jié)合的IL-1β或IL-18抗體。借助Scatchard圖分析可以從該數(shù)據(jù)測定有關(guān)抗體對特完抗原的親和性和結(jié)合率。利用放射性免疫測定法也可以測定第二抗體的競爭性。在這種情況下，在遞增量未標(biāo)記第二抗體的存在下將抗原與有關(guān)抗體溫育，所述抗體與帶標(biāo)記化合物(例如3H或125I)綴合。
也可以借助活性測定IL-1β或IL-18水平，例如，借助能夠檢測細(xì)胞因子、象IL-1β或IL-18或者生長因子的生物活性水平的細(xì)胞系可以測定IL-1水平。按照一種實(shí)施方式，通過溫育用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷遺傳加工的細(xì)胞系，檢測生物樣品中生物活性IL-1β的水平。將細(xì)胞系與供試樣品溫育，通過測定藍(lán)色的強(qiáng)度監(jiān)測細(xì)胞系中的細(xì)胞死亡，藍(lán)色是所測試樣品中生物活性細(xì)胞因子或生長因子的指征。例如另見Burns(1994)20(1)40-44關(guān)于患者血清的IL-1活性測定法。
可用于單一療法的活性成分化合物的劑量水平為約0.01與約100mg/kg體重每天之間，優(yōu)選約0.5與約75mg/kg體重每天之間，最優(yōu)選約1與約50mmg/kg體重每天之間。
在另一種實(shí)施方式中，可用于單一療法的活性成分化合物的劑量水平為約2與約200mg/kg體重每天之間，優(yōu)選約6與約100mg/kg體重每天之間，最優(yōu)選約25與約100mg/kg體重每天之間。
按照本發(fā)明的一種實(shí)施方式，本發(fā)明的活性成分化合物對受治療者給藥的劑量為約20mg至約10,000mg每次給藥之間。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的活性成分化合物對受治療者給藥的劑量為約300mg至約2,400mg每次給藥之間。在另一種實(shí)施方式中，本發(fā)明的活性成分化合物對受治療者給藥的劑量為約600mg至約1,800mg每次給藥之間。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物對受治療者給藥的劑量為約900mg每次給藥。
通常，本發(fā)明的藥物組合物將以每天約1至5次給藥，或者，作為連續(xù)輸注給藥。這類給藥可以用作慢性或急性療法?；钚猿煞挚梢耘c載體材料組合形成單一劑型的量將因所治療的宿主和特定的給藥模式而異。典型的制劑將含有約5％至約95％活性化合物(w/w)。優(yōu)選地，這類制劑含有約20％至約80％活性化合物。
當(dāng)本發(fā)明組合物包含本發(fā)明化合物與一種或多種附加治療劑的組合時，該化合物和該附加成分都應(yīng)當(dāng)以在單一療法方案中正常給予劑量的約10％至約80％存在。
一旦患者的狀態(tài)有所改進(jìn)，可以給予本發(fā)明的化合物、組合物或組合的維持劑量，如果必要的話。隨后，給藥的劑量或頻率或此二者可以作為癥狀的函數(shù)減少至保持已改善的條件的水平，當(dāng)癥狀已經(jīng)減輕至所需水平時，治療可以停止。不過，一旦疾病癥狀有任何復(fù)發(fā)，患者可能需要在長期基礎(chǔ)上的間歇性治療。
也應(yīng)當(dāng)理解，就任意特定患者而言的具體劑量和治療制度將依賴于多種因素，包括所采用的具體化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、藥物組合、特定疾病的嚴(yán)重性與過程、患者對所治療疾病的素因和主治醫(yī)師的判斷?；钚猿煞值牧恳矊⒁蕾囉谔囟ǖ幕衔锖徒M合物中的其他治療劑，如果有的話。
因此，在受治療者中治療或預(yù)防本發(fā)明疾病的方法包含對該受治療者給予本文所述任何化合物、藥物組合物或組合的步驟。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療患有上述疾病之一的哺乳動物的方法，包含對所述哺乳動物給予上述藥學(xué)上可接受的組合物的步驟。在這種實(shí)施方式中，如果患者也被給予另一種治療劑，它可以與本發(fā)明化合物一起在單一劑型中被遞送，或者作為分開的劑型被遞送。當(dāng)作為分開的劑型給藥時，該另一種治療劑可以在包含本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的組合物的給藥之前、同時或之后給藥。
鑒定化合物或組合物治療根據(jù)本發(fā)明的疾病的方法包括篩選大量化合物或組合物改善某些疾病后果和改進(jìn)患有本發(fā)明某些疾病的患者條件的能力。按照本發(fā)明的一種實(shí)施方式，高通量篩選可以如下實(shí)現(xiàn)，在微量滴定平板的大量小孔中放入細(xì)胞培養(yǎng)物，向每孔加入不同的化合物或組合物，對比每一細(xì)胞培養(yǎng)物中的ICE抑制作用和/或IL-1水平和/或活性與對照孔細(xì)胞培養(yǎng)基中的水平或活性。對照可用于根據(jù)本發(fā)明的對比步驟，包括沒有用化合物或組合物處理的細(xì)胞或受試材料和已經(jīng)用已知對ICE抑制作用或活性沒有影響的化合物或組合物處理的細(xì)胞或受試材料。按照本發(fā)明的一種實(shí)施方式，高通量篩選是自動化的，以便包括向平板加入細(xì)胞直到化合物或組合物加入后的數(shù)據(jù)收集和分析步驟都是由機(jī)器進(jìn)行的?？捎糜诒景l(fā)明對比步驟的儀器、例如能夠檢測帶標(biāo)記對象(例如放射性標(biāo)記、熒光或有色對象)或者本身是可檢測的對象的儀器是商業(yè)上可獲得的和/或本領(lǐng)域已知的。因此，能夠快速和高效地篩選可用于治療本文公開的某些疾病的根據(jù)本發(fā)明的化合物和組合物。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，鑒定改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的化合物或組合物的方法包含對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含該化合物的藥物組合物，再比較用該化合物治療前后該受治療者的ICE抑制作用。在替代的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供鑒定改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的化合物或組合物的方法，包含對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含該化合物的藥物組合物，再比較用所述化合物治療前后所述受治療者的自身炎性疾病生物標(biāo)志。
術(shù)語“生物標(biāo)志(biomarker)”是生理或疾病過程的物理、功能或生化指標(biāo)，例如特定代謝產(chǎn)物的存在。按照本發(fā)明，炎癥的某些生物標(biāo)志可以用于評價患有本文所列自身炎性疾病的患者對于抑制ICE的化合物的響應(yīng)。這些炎性生物標(biāo)志包括但不限于白介素-1、白介素-6(全自身炎性疾病)、白介素-8(全自身炎性疾病)、白介素-18、血清淀粉樣蛋白A、C-反應(yīng)性蛋白、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、結(jié)合珠蛋白、TNFα、免疫球蛋白(特別是IgD)、鐵蛋白、白細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白。
因此，本發(fā)明也提供減少自身炎性疾病受治療者中IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的方法，包含對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物的步驟。在一種實(shí)施方式中，化合物或組合物在受治療者中的血漿濃度大約等于或大于按照本發(fā)明所教導(dǎo)的IC50值(例如參見實(shí)施例18和19)。在另一種實(shí)施方式中，化合物或組合物在受治療者中的血漿濃度為約0.2μM至約50μM之間，或者約0.8μM至約6μM。在另一種實(shí)施方式中，受治療者中IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的減少是如下測量的，比較(a)用所述化合物或組合物治療前后所述受治療者中的IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志濃度，與(b)用所述化合物或組合物治療期間所述受治療者中的IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志濃度。按照本發(fā)明，受治療者中IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的減少百分比選自下組(a)減少至少約50％至約100％；(b)減少至少約50％至約90％；和(c)減少至少約60％至約90％。
本文公開的所有申請、專利和參考文獻(xiàn)都引用在此作為參考。為了更加充分地理解本發(fā)明，陳述下列制備和測試實(shí)施例。這些實(shí)施例僅供闡述的目的，不被解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1[3S/R，(2S)-5-氟-4-氧代-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸 方法A(S)-(1-吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羧酸甲基酯 向攪拌著的哌可酸甲酯鹽酸鹽(1g，5.57mmol)的THF(10ml)溶液加入吩噻嗪碳酰氯(1.457g，5.57mmol)，繼之以二異丙基乙胺(2.02ml，11.68mmol)。將所得溶液攪拌16h(小時)，然后在乙酸乙酯與NH4Cl飽和水溶液之間分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(15％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為無色的油，放置后結(jié)晶(1.823g，89％)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.13-1.48(3H，m)，2.57-2.69(2H，m)，2.16(1H，m)，3.00(1H，m)，3.74(4H，s+m)，5.00(1H，m)，7.11(2H，t)，7.22-7.34(4H，m)，7.76(2H，d)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ21.3(CH2)，24.8(CH2)，27.3(CH2)，44.9(CH2)，52.5(CH3)，55.9(CH)，122.8(CH)，125.5(CH)，127.8(CH)，128.0(CH)，129.2(C)，141.7(C)，158.4(C)，172.2(C).
方法B(S)-(1-吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羧酸
向攪拌著的(S)-(1-吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羧酸甲基酯(0.912g)的THF(15ml)與水(8ml)溶液加入2M NaOH(3.71ml)，將反應(yīng)混合物攪拌16小時。將反應(yīng)混合物倒入碳酸氫鈉溶液(50ml)中，用乙酸乙酯(40ml)萃取。調(diào)節(jié)水相為酸性，用乙酸乙酯萃取(2×75ml)。合并有機(jī)萃取液，干燥(MgSO4)，濃縮，得到小標(biāo)題化合物，為白色固體(0.709g，81％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.9 9-1.72(5H，m)，2.23(1H，m)，2.97(1H，m)，3.58(1H，m)，4.93(1H，m)，7.16(2H，t)，7.28(2H，t)，7.37(2H，d)，7.78(2H，d)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ21.0(CH2)，24.2(CH2)，26.7(CH2)，45.7(CH2)，56.0(CH)，123.8(CH)，126.0(CH)，127.9(CH)，128.1(CH)，130.3(C)，141.2(C)，160.1(C)，175.9(C).
方法C[3S/R，4S/R(2S)]-5-氟-4-羥基-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸叔丁基酯 將攪拌著的(S)-(1-吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羧酸(233mg，0.658mmol)、3-氨基-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(150mg，0.724mmol)、HOBt(98mg，0.724mmol)、DMAP(88mg，0.724mmol)與無水THF(10ml)的混合物冷卻至0℃，然后加入EDC(139mg，0.724mmol)。使混合物在16h內(nèi)升溫至室溫，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(50％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為淡粉紅色泡沫(294mg，82％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.96(1H，m)，1.18-1.60(13H，m)，2.10-2.25(1H，m)，2.48-2.70(2H，m)，2.78-2.94(1H，m)，3.51-4.72(7H，m)，7.03-7.36(7H，m)，7.71-7.76(2H，m)；19F(376MHz，CDCl3)δ-228.9(t)，-229.3(t)，-230.1(t)，-230.2(t).
方法D[3S/R，(2S)]-5-氟-4-氧代-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸叔丁基酯 在0℃下，將攪拌著的[3S/R，4S/R(2S)]-5-氟-4-羥基-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸叔丁基酯(294mg，0.541mmol)的無水DCM(10mL)溶液用1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氫-1，2-benziodoxol-3(1H)-酮(344mg，0.812mmol)處理。使所得混合物歷經(jīng)2h升溫至室溫，用乙酸乙酯稀釋，然后倒入飽和碳酸氫鈉水溶液與飽和硫代硫酸鈉水溶液的1∶1混合物中。除去有機(jī)層，水層用乙酸乙酯反萃取。合并有機(jī)萃取液，干燥(Na2SO4)，濃縮。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為淡粉紅色泡沫(220mg，75％)1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.84-0.96(1H，m)，1.20-1.40(10H，m+2s)，1.51-1.56(3H，m)，2.20-2.27(1H，m)，2.70-2.98(3H，m)，3.49-3.63(1H，m)，4.74-5.24(4H，m)，7.14-7.18(2H，m)，7.28-7.38(4H，m)，7.48-7.79(3H，m)；13C(100MHz，CDCl3)δ20.8/21.0(CH2)，23.7/23.9(CH2)，25.8/25.9(CH2)，28.2/28.3(CH3)，36.8/36.9(CH2)，46.0/46.1(CH2)，52.9(CH)，56.8(CH)，82.6(C)，84.4/84.5(2d，J 184.0/183.3，CH2F)，123.7/123.8(CH)，126.1(CH)，128.0/128.1(CH)，128.2/128.3(CH)，130.4/130.5(C)，141.4(C)，160.0(C)，170.0(C)，171.7(C)，202.9(C)；19F(376MHz，CDCl3)δ-231.9(t)，-232.2(t).
方法E[3S/R，(2S)]-5-氟-4-氧代-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸
將三氟乙酸(5mL)加入到攪拌著的冰冷卻的[3S/R，(2S)]-5-氟-4-氧代-3-{[1-(吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸叔丁基酯(130mg，0.24mmol)的無水DCM(5mL)溶液中。將混合物在0℃下攪拌0.5h，然后在室溫下攪拌0.5h。在減壓下濃縮混合物，然后將殘余物溶于無水DCM。這種過程重復(fù)若干次，目的是除去過量三氟乙酸。將膠狀物從HPLC級水中凍干兩次，得到標(biāo)題化合物，為白色粉末(77mg，66％)IR(固體)1670，1716，1782cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.96-0.99(1H，m)，1.23-1.26(2H，m)，1.42-1.44(1H，m)，1.60(1H，m)，1.91-1.98(1H，m)，2.51-2.89(2H，m)，3.11-3.22(1H，m)，3.57-3.60(1H，m)，4.30-4.72 and5.05-5.29(4H，2m)，7.11-7.17(2H，m)，7.24-7.30(2H，m)，7.34-7.38(2H，m)，7.57-7.63(2H，m)，8.07-8.61(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ(DMSO+TFA)18.8/18.9(CH2)，22.2/22.3(CH2)，25.8/26.1(CH2)，31.5/33.2(CH2)，43.2(CH2)，50.6/51.1(CH)，54.4/54.5(CH)，82.8/82.9(2d，J 178.6/178.1，CH2F)，119.9/120.0(CH)，120.4/120.5(CH)，124.0/124.1m(CH)，125.9/126.0(C)，126.4/126.5(CH)，139.6/139.7(C)，156.0/156.4(CO)，170.3(CO)，170.7/170.8(CO)，202.2/202.3(2d，J 14.6/15.1，CO).；19F(376MHz，DMSO)δ化學(xué)漂移(多態(tài)性，相對強(qiáng)度)-226.7(t，3)，-22 6.9(t，3)，-230.4(t，1)，-231.2(t，1)，-232.7(t，10)，-233.0(t，10).
實(shí)施例2[3S/R，(2S)]-3-{[-1-(2-氯吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-4-氟-4-氧代-戊酸
利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從2-氯吩噻嗪碳酰氯制備之(73mg，69％) IR(固體，cm-1)1738，1660，1555，1363，1224；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ0.98-1.61(4H，m)，1.94-2.03(1H，m)，2.53-2.89(2H，m)，3.12-3.24(1H，m)，3.51-3.61(1H，m)，4.31-4.73 and 5.10-5.24(4H，2m)，7.15-7.49(6H，m)，7.77-7.81(1H，m)，8.13-8.64(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ18.7/18.8(CH2)，22.3/22.6(CH2)，25.9/26.2(CH2)，31.5/33.2(CH2)，43.0/43.2(CH2)，50.6/51.1(CH)，54.4/54.5(CH)，82.8/82.9(2d，J 178.7/178.3，CH2F)，119.3/119.8(CH)，120.2/120.3(CH)，123.6/123.7(CH)，124.4/124.5(CH)，124.6/124.8(C)，126.6(CH)，126.9(CH)，127.5(CH)，131.0(C)，139.2/139.2(C)，140.7/140.7(C)，155.5/155.9(C)，170.1/170.2(C)，170.7/170.8(C)，201.2/201.3(2d，J 14.3/13.9，CO)；19FNMR(376MHz，DMSO+TFA)δ-226.7(t)，-226.9(t)，-230.3(t)，-232.7(t)，-233.0(t).
實(shí)施例3[3S/R，(2S)]-3-{[1-(3-氯吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-4-氟-4-氧代-戊酸 利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從3-氯吩噻嗪碳酰氯制備之(108mg，65％)
IR(固體，cm-1)1737，1655，1455，1373，1224；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ0.99-1.61(5H，m)，1.91-2.04(1H，m)，2.54-2.90(2H，m)，3.12-3.24(1H，m)，3.48-3.60(1H，m)，4.26-5.28(4H，m)，7.15-7.68(7H，m)，8.10-8.62(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ18.8(CH2)，22.2/22.3(CH2)，25.8(CH2)，33.1/33.2(CH2)，43.2(CH2)，50.6/51.0(CH)，54.3/54.4(CH)，82.7/82.8(2d，CH2F)，120.2/120.3(CH)，121.3/121.4(CH)，124.2/124.3(CH)，124.8/125.0(C)，125.7(CH)，126.3(CH)，126.6(CH)，126.8(CH)，127.7/127.9(C)，127.9/128.0(C)，138.5(C)，139.3(C)，156.0(CO)，170.1(CO)，170.6/170.7(CO)，201.1/201.2(2d，CO)；19F NMR(376MHz，DMSO+TFA)δ-226.6(t)，-226.9(t)，-232.6(t)，-232.9(t).
實(shí)施例4[3S/R，(2S)]-3-{[1-(3，4-二氯吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-4-氟-4-氧代-戊酸 利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從3，4-二氯吩噻嗪碳酰氯制備之(91mg，66％)IR(固體，cm-1)1737，1439，1363，1219；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ1.03-1.62(5H，m)，1.97-2.06(1H，m)，2.54-2.86(2H，m)，3.14-3.28(1H，m)，3.59-3.66(1H，m)，4.30-5.26(4H，m)，7.15-7.68(6H，m)，8.14-8.96(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ20.2(CH2)，23.8(CH2)，27.3(CH2)，34.6/34.7(CH2)，44.5(CH2)，52.1/52.5(CH)，55.7/55.9(CH)，84.2/84.3(2d，CH2F)，120.2/120.3(CH)，120.8/120.9(CH)，124.2/124.4(C)，125.9(CH)，127.7/127.8(C)，128.2(CH)，128.4/128.5(C)，128.8(CH)，128.9(CH)，140.0(C)，140.1(C)，140.6(C)，156.8/156.8(CO)，171.5(CO)，172.1/172.1(CO)，202.6/202.7(2d，CO)；19F NMR(376MHz，DMSO+TFA)δ-226.6(t)，-226.8(t)，-232.6(t)，-232.9(t).
實(shí)施例5[3S/R，(2S)]-3-{[1-(2，6-二氯吩噻嗪-10-羰基)哌啶-2-羰基]氨基)-4-氟-4-氧代-戊酸 利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從2.7g二氯吩噻嗪碳酰氯制備之(91mg，70％)IR(固體，cm-1)1737，1660，15551363，1224；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ1.02-1.62(5H，m)，1.91-2.02(1H，m)，2.53-2.90(2H，m)，3.13-3.25(1H，m)，3.51-3.62(1H，m)，4.31-5.29(4H，m)，7.22-7.75(6H，m)，8.18-8.65(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ20.2(CH2)，23.8(CH2)，27.3(CH2)，34.6(CH2)，44.7(CH2)，52.5(CH)，55.8(CH)，84.3(d，J178.2，CH2F)，120.7/121.2(CH)，122.7/122.8(CH)，124.7/125.1(C)，125.3/125.4(CH)，127.4(CH)，128.1(CH)，128.7/128.9(C)，129.1(CH)，129.8(C)，132.7(C)，139.5/139.6(C)，141.8/141.9(C)，157.0(CO)，171.5(CO)，172.1(CO)，202.6(d，J 14.3，CO)；19FNMR(376MHz，DMSO+TFA)δ-226.6(t)，-226.9(t)，-232.6(t)，-232.9(t).
實(shí)施例6[3S/R，(2S)]-3-{1-(咔唑-9-羰基)哌啶-2-羰基]氨基}-4-氟-4-氧代-戊酸
利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從9-咔唑碳酰氯制備之(180mmg，75％) IR(固體，cm-1)1737，1655，1419，1373，1224；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ1.36-1.65(6H，m)，1.94-1.99(1H，m)，2.12-2.21(1H，m)，2.59-2.89(2H，m)，4.32-5.27(4H，m)，7.30-7.36(2H，m)，7.48-7.54(2H，m)，7.63-7.76(2H，m)，8.17-8.72(3H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ19.0(CH2)，23.7/23.8(CH2)，26.5/26.8(CH2)，33.3/33.5(CH2)，44.1(br，CH2)，50.9/51.4(CH)，54.5(br，CH)，82.9/83.1(2d，J 178.7/178.7，CH2F)，111.0/111.1(CH)，111.9(CH)，119.5/119.7(CH)，120.6/120.7(CH)，122.5/122.7(C)，125.8/125.9(CH)，137.1/137.4(C)，153.2/153.3(C)，170.3/170.4(C)，170.8/170.9(C)，201.4/201.5(2d，J 14.6/14.6，CO)；19F NMR(376MHz，DMSO+TFA)δ d(J，％I)-226.6(t，3)，-22 6.8(t，3)，-230.0(t，1)，-232.7(t，10)，-232.7(t，10).
實(shí)施例7[3S/R，(2S)]-5-氟-4-氧代-3-{[1-(6H-菲啶-5-羰基)-哌啶-2-羰基]氨基}-戊酸 利用與上文方法A-E所述那些相似的工藝，從9，10-二氫菲啶碳酰氯制備之(115mg，61％)IR(固體，cm-1)1731，1419，1363，H NMR(1219；1H NMR(400MHz，d6-DMSO+TFA)δ1.27-1.69(5H，m)，1.90-2.06(1H，m)，2.55-2.87(2H，m)，3.13-3.21(2H，m)，4.31-5.26(6H，m)，7.12-7.48(6H，m)，7.84-7.86(2H，m)，8.08-8.58(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO+TFA)δ20.5(CH2)，24.2(CH2)，27.73(CH2)，34.6/34.8(CH2)，44.9(CH2)，48.5/48.7(CH)，52.1/52.5(CH)，55.4/55.7(CH)，84.2(d，CH2F)，120.2(CH)，123.3(CH)，123.6(CH)，124.7(CH)，126.1(C)，126.3(CH)，128.0(CH)，128.3(CH)，128.7(CH)，131.6(C)，134.6(C)，140.2(C)，172.1/172.2(CO)，172.4/172.4(CO)，203.0(d，CO)；19F NMR(376MHz，DMSO+TFA)δ-226.8(t)，-226.9(t)，-232.7(t)，-232.9(t).
實(shí)施例8[3S/R，(2S)]-5-氟-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酰氨基}-4-氧代-戊酸，三氟乙酸鹽(化合物1) 方法A(2S)-2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酸叔丁基酯 向1H-咪唑-2-羧酸(0.17g)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(3mL)溶液加入丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽(0.22g)、二異丙基乙胺(0.27mL)和HOBT(0.41g)，然后冷卻至0℃，然后將反應(yīng)混合物用EDC HCl(0.32g)處理。除去冷卻浴，將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18hr(小時)，然后用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜純化(30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為無色的油(0.263g，73％)
1H NMR 400MHz CDCl31.50(9H，s)，1.51(3H，d，J 7.2)，3.70(1H，m)，7.28(2H，s)，7.78(1H，d，J 7.6)，11.49(1H，br s).
方法B[3S/R，4S/R，(2S)]-5-氟-4-羥基-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酰氨基}-戊酸叔丁基酯 將(2S)-2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酸叔丁基酯(0.257g)的二氯甲烷(2ml)溶液冷卻至0℃，然后滴加三氟乙酸，將反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌2hr，然后在減壓下蒸發(fā)。使殘余物與二氯甲烷(兩次)和甲苯(兩次)共蒸發(fā)，留下所需的(2S)-2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酸，無需進(jìn)一步純化即可使用(0.40g)。
將(2S)-2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酸與3-氨基-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(0.254g)的THF(7mL)溶液冷卻至0℃，然后加入DMAP(0.151g)、二異丙基乙胺(0.56mL)、HOBT(0.16g)和EDC HCl(0.23g)。將反應(yīng)混合物在環(huán)境溫度下攪拌18hr，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過硅膠色譜純化(5％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為無色固體(0.386g，97％)1H NMR 400MHzCDCl3/CD3OD 1.40(12H，m)，3.92(1H，m)，4.20-4.55(4H，m)，7.11(2H，d，J 15)；19F NMR CDCl3-229.74(m)， -229.84(m)，-230.54(m)，-230.87(m).
方法C[3S/R，(2S)]-5-氟-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)氨基]-丙酰氨基}-4-氧代-戊酸叔丁基酯
將[3S/R，(2S)]-5-氟-4-羥基-3-(2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酰氨基}-戊酸叔丁基酯(0.381g)的二氯甲烷溶液冷卻至0℃，然后加入1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氫-1，2-benziodoxol-3(1H)-酮(0.476g)。將混合物在室溫下攪拌2h，然后加入另一部分1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氫-1，2-benziodoxo1-3(1H)-酮(0.05g)，然后將反應(yīng)混合物攪拌90min(分鐘)，然后在減壓下濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯，用NaHSO4水溶液與Na2S2O3水溶液的1∶1混合物洗滌。收集有機(jī)層，干燥(MgSO4)，濃縮。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(5％甲醇的二氯甲烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為無色泡沫(319mg，84％)1H NMR 400MHz CDCl31.37+1.43(9H，2xs)，1.54(3H，m)，2.85(1H，m)，3.03(1H，m)，4.85-5.30(4H，m)，7.18(2H，d，J 16)，7.90(1H，m)，7.98(1H，m)，11.37+11.45(1H，2xs)；19F NMR 376MHz CDCl3-231.85(t，J 48)，-232.12(t，J 48).
方法D化合物1 將[3S/R，(2S)]-5-氟-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酰氨基}-4-氧代-戊酸叔丁基酯(0.31g)的二氯甲烷(2ml)溶液冷卻至0℃，然后滴加三氟乙酸，將反應(yīng)混合物升溫至室溫，攪拌2hr，然后在減壓下蒸發(fā)。使殘余物與二氯甲烷共蒸發(fā)(兩次)，在醚中研制，得到標(biāo)題化合物，為無色固體(0.35g)IR 1785.7，1730.1，1653.7，1538.1，1458.2，1384.2，1268.7，1188.4，1150.9，1053.3，992.13，931.8，867.9，847.0，768.5cm-1；1H NMR 400MHz DMSO-d61.37(3H，d)，2.40-2.85(2H，m，asp CH2)，4.34-4.75(2.5H，m，2xCH+0.5CH2F)，5.13-5.41(1.5H，m，CH2F)，7.50(2H，s，咪唑 CHs)，8.58-8，79(2H，m，NHs)，13C NMR 100MHz DMSO-d618.13，18.85(alaCH3)；33.13，34.75(asp CH2)，48.68，52.41(CHs)，83.46，85.21(CH2F)，123.67(CH 咪唑)，139.57，158.86，172.35(m)(C＝Os)，202.70(5峰酮)；19F NMR 376MHz DMSO-d6解偶聯(lián)-75.19(3F，s，CF3COOH)，-(226.89，226.96，230.80，231.59，232.95，233.06(1F，6xs，COCH2F打開的環(huán)和閉合的環(huán)).
實(shí)施例9[3S/R，(2S)]-3-{2-[(1 H-苯并咪唑-2-羰基)-氨基]-丙酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸，三氟乙酸鹽(化合物2) 利用與上文方法A-D所述那些相似的工藝，從1H-苯并咪唑-2-羧酸制備之(142mg，90％最后一步收率)(作為TFA鹽所分離的化合物)灰白色固體；IR(固體，cm-1)3277.9，1654.6，1526.6，1188.6，1142.5，1050.4，927.5，748.2，712.4 ；1H NMR(DMSO-d6)1.42(3H，d)，2.51-2.95(2H，m)，4.21-4.75(2H，m)，4.76-5.60(3H，brm)，7.41(2H，m)，7.65(2H，m)，8.21-9.05(2H，m)；13C NMR(DMSO-d6)18.0，18.7，18.8(AlaCH3)，37.2，34.6，34.7(Asp CH2)，47.6，48.8，48.85，49.1(Asp CH)，52.0，52.5(Ala CH)，83.5，85.2，85.3，103.8，106.0(CH2F)，116.6，123.9(芳基CH)，145.3，145.4，(Aryl C)，158.4，158.7，158.8，172.1，172.2，172.4，172.5，172.6，172.7，173.2(NC＝O)，202.6，202.7，202.8，202.9(C＝O)；實(shí)測值M+364.1177.C16H17FN4O5計(jì)算值M+364.1183(1.8ppm).
實(shí)施例10[3S/R，(2S)]-5-氟-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-丁酰氨基}-4-氧代-戊酸，三氟乙酸鹽(化合物3) 利用與上文方法A-D所述那些相似的工藝，從1H-苯并咪唑-2-羧酸制備之(147mg，64％最后一步收率)IR(cm-1)3280.0，1659.5，157.9，1192.5，1141.6，784.7，721.1；1H NMR 400MHz DMSO-d60.95(3H，m)，1.78(2H，m)，2.58-2.98(2H，m)，4.30-4.78(2.5H，m)，5.10-5.42(1.5H，m)，7.41(2H，s)，8.44+8.75(2H，2xm)；13CNMR 100MHz DMSO-d610.19，10.29，15.52(CH3)，25.42，25.49，26.03，33.06，33.13，34.65，34.80(CH2)，47.45，47.53，52.0，53.96，54.13(CH)65.27(CH2)，84.36(d，J177，CH2F)，103.81，104.00(C)，123.89(CH)，139.74(C＝O)，156.90，158.39，158.74，171.51，171.80，171.83，172.02，173.11(C＝O)，202.51，202.66，202.76，202.90(CH2FC＝O)；19F NMR 376MHz DMSO-d6-226.82(t，J 45)，-226.84(t，J 45)，-230.67(t，J 45)，-231.43(t，J 45)，-232.79(t，J 45)，-232.82(t，J 45).
實(shí)施例11[3S/R，(2S)]-5-氟-3-{2-[(1H-咪唑-2-羰基)-氨基]-3-甲基-丁酰氨基}-4-氧代-戊酸(化合物4) 利用與上文方法A-D所述那些相似的工藝，從1H-苯并咪唑-2-羧酸制備之(80g，85％最后一步收率)白色粉末，IR(固體，cm-1)
IR(固體，cm-1)1736，1649，1557，1511，1455，1434，1393；1H NMR(DMSO+TFA)0.92-0.95(6H，m)，2.06-2.15(1H，m)，2.56-2.90(2H，m)，4.33-5.36(4H，m)，7.79(2H，s)，8.58-8.90(2H，m)；19FNMR(DMSO+TFA)-226.8(t)，-230.6(t)，-231.0(t)，-232.5(t)，-232.6(t)；13C NMR(DMSO+TFA)18.1/18.4(CH3)，19.2/19.3(CH3)，34.5/34.8(CH2)，51.9/52.2(CH)，58.5/58.8(CH)，84.3/84.4(2d，J 178.7/178.7，CH2F)，122.0(CH)，137.5(C)，153.7(C)，170.6(C)，171.9/172.0(C)，202.5/202.8(2d，J 14.6/14.6，CO).
實(shí)施例12[3S/R，(2S)]-3-{2-[(1H-苯并咪唑-2-羰基)-氨基]-3-甲基丁酰氨基}-5-氟-4-氧代-戊酸(化合物5) 利用與上文方法A-D所述那些相似的工藝，從1H-苯并咪唑-2-羧酸制備之(90mg，87％最后一步收率)白色粉末，IR(固體，cm-1)1737，1665，1527，1373，1194，1137；1H NMR(DMSO-d6)0.90-0.95(6H，m)，2.15-2.18(1H，m)，2.59-2.92(2H，m)，4.33-4.76 and5.12-5.38(4H，2m)，7.31-7.35(2H，m)，7.66-7.68(2H，m)，8.3 6-8.82(2H，m)；19FNMR(DMSO+TFA)-226.7(t)，-226.9(t)，-232.4(t)，-23 2.6(t)；13C NMR(DMSO-d6)18.3/18.4/18.5/18.7(CH3)，19.4/19.5(CH3)，31.0/31.1/31.6(CH)，34.7/34.8(CH2)，51.8/52.1(CH)，57.9/58.3/58.6(CH)，84.3/84.4(2d，J 178.7/178.7，CH2F)，124.0(CH)，145.2/145.2(C)，158.4/158.5/1 58.7/158.8(C)，170.9/171.1/171.2(C)，172.0/172.0(C)，173.1(C)，173.9(C)，202.06/202.6(2d，J 13.8，CO).
實(shí)施例13 [3S/R(2S)]-3-[2-(咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸方法A(4S)-芐基-3-戊酰基-唑烷-2-酮 在-78℃下，將4(S)-(-)-芐基-2-唑烷酮(10g，56.43mmol)的無水THF(200ml)溶液用2.5M正丁基鋰的己烷溶液(23.70ml，59.26mmol)處理，同時攪拌。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌30min，然后加入戊酰氯(7.57ml，62.10mmol)。然后使反應(yīng)混合物歷經(jīng)15h升溫至環(huán)境溫度，然后用NH4Cl溶液稀釋，用乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，濃縮得到膠狀物。經(jīng)過快速色譜純化(10％EtOAc的40/60己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物(14.61g，99％)，為無色的油1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.94-1.20(3H，m)，1.35-1.50(2H，m)，1.62-1.80(2H，m)，2.74-2.84(1H，m)，2.86-3.08(2H，m)，3.27-3.39(1H，m)，4.11-4.26(2H，m)，4.62-4.76(1H，m)，7.18-7.40(5H，m).
方法B[4S(3R)]-3-(4-芐基-2-氧代-唑烷-3羰基)-己酶叔丁基酯
在-78℃下，將(4S)-芐基-3-戊酰基-唑烷-2-酮(14.20g，54.34mmol)的THF(100ml)溶液用1M雙(三甲基甲硅烷基)氨基鈉的THF溶液(59.80ml，59.77mmol)處理10min，同時攪拌。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌30min，然后加入溴乙酸叔丁酯(10.43ml，70.64mmol)。然后將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌另外3.5h，然后用NH4Cl溶液稀釋，用乙酸乙酯稀釋，先后用NaHCO3溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，濃縮得到膠狀物。放置后生成白色固體，從40/60DCM/己烷中重結(jié)晶，得到小標(biāo)題化合物(14.62g，72％)，為白色固體1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.81-1.20(3H，m)，1.21-1.76(13H，m)，2.41-2.55(1H，m)，2.66-2.92(2H，m)，3.27-3.40(1H，m)，4.05-4.26(2H，m)，4.61-4.72(1H，m)，7.12-7.40(5H，m).
方法C(2R)-2-丙基-琥珀酸1-芐基酯4-叔丁基酯 在-20℃下，將芐醇(4.62ml，44.64mmol)的THF(80ml)溶液用2.5M正丁基鋰的己烷溶液(13.36ml，33.48mmol)處理，同時攪拌。使反應(yīng)混合物歷經(jīng)40min升溫至-5℃，然后加入[4S(3R)]-3-(4-芐基-2-氧代-唑烷-3-羰基)-己酸叔丁基酯(8.38g，22.32mmol)的THF(20ml)溶液。使反應(yīng)混合物歷經(jīng)15h升溫至環(huán)境溫度，然后用NH4Cl溶液和乙酸乙酯稀釋，用鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，濃縮得到膠狀物。經(jīng)過快速色譜純化(11％EtOAc的40/60己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物(4.56g，67％)，為無色的油1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.83-1.00(3H，m)，1.21-1.71(13H，m)，2.34-2.45(1H，m)，2.75-2.95(1H，m)，5.09-5.25(2H，m)，7.30-7.43(5H，m).
方法D(2R)-2-丙基-琥珀酸1-芐基酯
在0℃下，將攪拌著的(2R)-2-丙基-琥珀酸1-芐基酯4-叔丁基酯(4.56g，14.88mmol)的無水DCM(20ml)溶液用三氟乙酸(10ml)的無水DCM(10ml)溶液處理。使反應(yīng)混合物歷經(jīng)3h升溫至環(huán)境溫度，然后在減壓下濃縮。將殘余物溶于無水DCM，然后再次濃縮。這種過程重復(fù)若干次，目的是除去過量三氟乙酸，留下小標(biāo)題化合物(3.70g，99％)，為膠狀物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.82-0.99(3H，m)，1.21-1.76(4H，m)，2.45-2.60(1H，m)，2.76-3.00(2H，m)，5.10-5.21(2H，m)，7.28-7.43(5H，m)，7.83-8.18(1H，m).
方法E(2R)-2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酸芐基酯 在-78℃下，將攪拌著的咔唑(2.49g，14.88mmol)的無水THF(30ml)溶液用1.0M雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰的THF溶液(14.88ml，14.88mmol)處理。使反應(yīng)混合物歷經(jīng)2h升溫至環(huán)境溫度，然后重新冷卻至-78℃。
將在0℃下攪拌著的(2R)-2-丙基-琥珀酸1-芐基酯(3.70g，14.78mmol)的無水DCM(20ml)溶液用草酰氯(1.43ml，16.37mmol)和DMF(14滴)處理。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌1h，然后在真空中濃縮。將殘余物溶于無水THF(10mL)，在-78℃下加入到預(yù)先制備的咔唑的鋰陰離子中。使反應(yīng)混合物歷經(jīng)40h升溫至環(huán)境溫度，然后用NH4Cl溶液和乙酸乙酯稀釋，先后用2N HCl、NaHCO3溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，濃縮，得到膠狀物，經(jīng)過快速色譜純化(10％EtOAc的40/60己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物(4.50g，76％)，為半固體/油，也含有咔唑1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.82-1.05(3H，m)，1.11-1.99(4H，m)，3.18-3.38(2H，m)，3.56-3.71(1H，m)，5.10-5.30(2H，m)，7.11-7.60(9H，m)，7.92-8.29(4H，m).
方法F(2R)-2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酸 將攪拌著的(2R)-2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酸芐基酯(4.50g，11.26mmol)的EtOAc(60ml)溶液用10％披鈀碳(～400mg)處理，然后將反應(yīng)混合物置于氫氣氛下。1h后加入另外的10％披鈀碳(～300mg)，將反應(yīng)混合物置于氫下另外3H，同時攪拌，然后通過C鹽墊過濾反應(yīng)混合物，濃縮，得到小標(biāo)題化合物(2.94g，84％)，為白色固體，也含有咔唑1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.92-1.04(3H，m)，1.32-2.00(4H，m)，3.19-3.34(2H，m)，3.58-3.70(1H，m)，7.30-7.53(4H，m)，8.00-8.30(4H，m).
方法G[3S/R，4S/R，(2R)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯 將攪拌著的(2R)-2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酸(2.94g，9.50mmol)、3-氨基-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(2.07g，9.99mmol)、HOBT(1.41g，10.43mmol)、DMAP(1.34g，10.97mmol)與無水THF(40ml)的混合物冷卻至0℃，然后加入EDC(2.00g，10.43mmol)。使混合物在16h內(nèi)升溫至室溫，然后在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(33％EtOAc的40/60己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物(2.51g，53％)，為泡沫1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.90-1.03(3H，m)，1.20-1.90(13H，m)，2.50-3.00(3H，m)，3.12-3.26(1H，m)，3.59-3.80(2H，m)，4.00-4.68(3H，m)，6.53-6.89(1H，m)，7.30-7.52(4H，m)，7.95-8.05(2H，m)，8.15-8.26(2H，m)；19F NMR(376MHz，CDCl3)-229.10，-229.34，-230.95，-231.09.
方法H[3S/R，(2R)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯 在0℃下，將攪拌著的[3S/R，4S/R，(2R)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-羥基-戊酸叔丁基酯(2.51g，5.03mmol)的無水DCM(60ml)溶液用1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氫-1，2-benziodoxol-3(1H)-酮(2.35g，5.53mmol)處理。將所得混合物在0℃下保持3h，用DCM稀釋，然后先后用飽和硫代硫酸鈉水溶液、NaHCO3溶液和鹽水洗滌。將有機(jī)相干燥(Na2SO4)，濃縮。殘余物經(jīng)過快速色譜純化(25％乙酸乙酯的40/60己烷溶液)，得到小標(biāo)題化合物，為灰白色固體(1.437g，57％)IR(固體，cm-1)1722，1689，1636，1531，1441，1365，1279，1155；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.85-1.50(3H，m)，1.35-1.54(11H，m)，1.55-1.69(1H，m)，1.78-1.95(1H，m)，2.67-3.28(4H，m)，3.60-3.79(1H，m)，4.80-5.59(3H，m)，6.89-7.04(1H，m)，7.33-7.54(4H，m)，7.98-8.04(2H，m)，8.15-8.28(2H，m)；13C(100MHz，CDCl3)δ14.12，14.40，14.47，14.60，20.78，20.84，21.47，28.32，28.42，28.48，29.77，33.63，34.58，34.91，40.05，43.05，43.26，43.29，52.60，53.00，53.64，66.90，66.99，82.62，82.69，85.53，116.88，116.94，120.28，120.31，124.2，127.76，127.86，128.69，128.77，128.99，138.80，171.21，171.29，172.21，172.25，175.53，176.03，203.04，203.20，203.30，203.46；19F(376MHz，CDCl3)δ-232.12，-233.24.
方法I[3S/R，(2R)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸 將[3S/R，(2R)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-戊酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸叔丁基酯(1.43g，2.88mmol)的無水DCM(20ml)溶液用TFA(10ml)的無水DCM(10ml)溶液處理，同時攪拌。將混合物在0℃下攪拌2h，然后在室溫下攪拌2h。在減壓下濃縮混合物，然后將殘余物溶于無水DCM。這種過程重復(fù)若干次，目的是除去過量三氟乙酸。使灰白色固體從Et2O/40/60己烷中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物，為白色粉末(71mg)IR(固體，cm-1)1746，1689，1641，1541，1436，1374，1284，1207，1160cm-1；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ0.80-1.00(3H，m)，1.20-1.76(4H，m)，2.30-2.90(2H，m)，2.95-3.24(1H，m)，3.26-3.59(2H，m)，4.25-4.79(1.5H，m)，5.02-5.43(1.5H，m)，7.36-7.58(4H，m)，8.10-8.30(4H，m)，8.54-8.91(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ14.31，20.03，20.13，21.92，22.51，34.36，34.77，41.20，41.62，44.06，51.77，52.84，83.45，85.22，116.70，120.54，123.91，124.01，127.85，126.01，138.20，172.15，172.36，172.96，173.00，175.32，175.48，202.60，203.10；19F(376MHz，DMSO)δ-226.68，-226.73，-231.21，-232.95，-233.38，-233.52.
實(shí)施例14 [3S/R(2S)]-3-[2-(2-咔唑-9-基-2-氧代-乙基)-3-甲基-丁酰氨基]-5-氟-4-氧代-戊酸利用與上文方法A-I所述那些相似的工藝制備之。分離產(chǎn)物，為白色固體(71％最后一步收率) IR(固體，cm-1)1739，1682，1646，1545，1447，1381，1290，1209，1170cm-1；1H NMR(400MHz，DMSO+TFA)δ0.79-1.08(6H，m)，1.89-2.15(1H，m)，2.31-3.60(5H，m)，4.21-4.78(1.25H，m)，4.98-5.45(1.75H，m)，7.38-7.60(4H，m)，8.14-8.35(4H，m)，8.56-8.90(1H，m)；13C NMR(100MHz，DMSO)δ20.46，20.84，21.04，21.21，30.77，30.85，33.37，34.83，35.24，38.16，38.89，47.67，48.23，52.19，53.43，83.96，84.01，85.72，85.77，117.16，121.02，124.43，126.42，126.52，128.42，138.75，172.64，172.90，173.85，173.90，174.74，174.93，175.16，202.91，203.04，203.51，203.65；19F(376MHz，DMSO)δ-226.63，-226.68，-231.24，-233.16，-233.38，-233.55.
生物學(xué)方法實(shí)施例15借助本領(lǐng)域已知的方法可以測量ICE抑制作用。
借助兩項(xiàng)研究可以證明ICE抑制劑有效治療MWS、FCU、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯提爾氏病和巨噬細(xì)胞活化綜合征以及其他自身炎性疾病、病癥或綜合征實(shí)施例16從MWS、FCU、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯提爾氏病和巨噬細(xì)胞活化綜合征或者其他自身炎性疾病或病癥患者收集血樣，體外培養(yǎng)全血或者加工為外周血單核細(xì)胞(PBMC)制備物。在正常未受刺激的條件下或者在刺激物(例如脂多糖、金黃色葡萄球菌、尼日利亞菌素或佛波醇肉豆蔻酸酯)的存在下，評價IL-1β的產(chǎn)生。向培養(yǎng)物加入濃度1-100,000nM的ICE抑制劑，以證明它們抑制MWS、FCU、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯提爾氏病和巨噬細(xì)胞活化綜合征或者其他自身炎性疾病、病癥或綜合征患者細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β和/或IL-18的能力。
實(shí)施例17MWS、FCU、FMF、CINCAS、NOMID、TRAPS、HIDS、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎、斯提爾氏病和巨噬細(xì)胞活化綜合征或者其他自身炎性疾病或病癥患者參加接受ICE抑制劑治療的臨床試驗(yàn)。借助適當(dāng)?shù)耐緩?口服、靜脈內(nèi)、皮下等)以10-10,000mg的劑量給予藥物，給藥頻率為1-4次/天或者根據(jù)需要，以控制該疾病、病癥或綜合征的癥狀和其他表現(xiàn)。治療持續(xù)時間可以從每一天或多天定期使用直到在患者生命期間每天使用。借助它們減少臨床指征和癥狀的能力來證明功效，例如發(fā)熱、蕁麻疹、關(guān)節(jié)痛、漿膜炎、全身淀粉樣變性、強(qiáng)烈的急性期響應(yīng)和病患組織的突出的中性白細(xì)胞增多。
實(shí)施例18化合物7對LPS-刺激的FCAS患者PBMC釋放IL-1β和IL-18的抑制作用，與健康對照相比CAIS1基因在FCAS中突變，由該基因編碼的蛋白質(zhì)cryopyrin調(diào)控ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1活化和其加工pro-IL-1β為活性IL-1β以及加工pro-IL-18為活性IL-18。可以預(yù)期突變的cryopyrin蛋白將以不同方式干擾ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1，可能以改變ICE抑制劑化合物與ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1相互作用的方式改變ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1構(gòu)型，從而減少該化合物抑制ICE活化和IL-1β與IL-18加工的能力。因此，進(jìn)行本例實(shí)驗(yàn)以證實(shí)化合物7能夠抑制FCAS患者細(xì)胞中的ICE。
研究了來自3個家族的FCAS患者以及健康對照。FCAS患者表達(dá)3種不同的CIAS1基因突變。五名有親屬關(guān)系的患者(母親、兩名女兒、孫女和男性遠(yuǎn)親)在cryopyrin中具備共同的L353P祖?zhèn)魍蛔?，這在以前已有描述(Johnstone RF，Dolen WK，Hoffman HM.A largekindred with familial cold autoinflammatory syndrome.AnnAllergy Asthma Immunol.2003；90(2)233-7)。其他患者具備尚未報(bào)道過的新穎突變。兩名患者(母親和女兒)在CIAS1基因的核苷酸1976上具有T到A的轉(zhuǎn)變，引起cryopyrin中的M659K取代。一名患者在CIAS1基因的核苷酸1573上具有G到A的轉(zhuǎn)變，生成尚未報(bào)道過的E525K氨基酸取代，以及V198M變化，這在以前若干具有不同表型的患者中已有描述，但是在正常對照中也是如此。所有突變都位于外顯子3中，它編碼NBS(NACHT)結(jié)構(gòu)域或NBS有關(guān)的結(jié)構(gòu)域，并且都在其他已報(bào)道過的突變的3種氨基酸內(nèi)，與提示突變熱點(diǎn)的研究是一致的(Neven B，Callebaut I，Prieur AM，F(xiàn)eldmann J，Bodemer C，Lepore L，Derfalvi B，Benjaponpitak S，Vesely R，Sauvain MJ，Oertle S，Allen R，Morgan G，Borkhardt A，Hill C，Gardner-MedwinJ，F(xiàn)ischer A，de Saint Basile G.Molecular basis of the spectralexpression of CIAS1 mutations associated with phagocyticcell-mediated autoinflammatory disorders CINCA/NOMID，MWS，andFCU.Blood.2004；103(7)2809-15)。
從FCAS患者和健康志愿者對照收集全血樣品，體外培養(yǎng)。在正常未受刺激的條件下和在濃度為10-10,000ng/mL的脂多糖的存在下評價IL-1β的產(chǎn)生。向培養(yǎng)物加入濃度為30-30,000nM的化合物7，以觀察其抑制FCAS患者或健康志愿者細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β和IL-18的能力。圖1闡述這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
具體而言，在圖1A中，在遞增濃度化合物7(0.03-30μM)的存在下，將來自FCAS患者和正常對照的PBMC與10ng/mL LPS溫育24小時。借助ELISA測量細(xì)胞培養(yǎng)基中的IL-1β，使每名受試者的結(jié)果正?；癁樵跊]有化合物7存在下的IL-1β釋放水平。結(jié)果以平均±SEM報(bào)道，就3名FCAS患者和5名對照患者而言?；衔?抑制LPS-刺激的IL-1β的效力非常相似于來自正常受試者的PBMC(IC50值～1μM)。
圖1B闡述在有或沒有10μM化合物7的存在下、在暴露于LPS達(dá)24小時后來自FCAS患者或?qū)φ帐茉囌叩腜BMC中IL-1β的釋放。結(jié)果以平均±SEM報(bào)道，就7名FCAS患者和5名對照患者而言。LPS刺激FCAS患者PBMC比正常受試者釋放更大量的IL-1β，F(xiàn)CAS PBMC響應(yīng)于更低濃度的LPS。盡管如此，10μM化合物7抑制LPS-刺激的IL-1β，相似于來自正常受試者的PBMC。
圖1C闡述在有或沒有10μM化合物7的存在下、在暴露于LPS達(dá)24小時后來自FCAS患者或?qū)φ帐茉囌叩腜BMC中IL-18的釋放。結(jié)果以平均±SEM報(bào)道，就3名FCAS患者和3名對照患者而言。LPS刺激FCAS患者PBMC比正常受試者釋放更大量的IL-18，F(xiàn)CAS PBMC響應(yīng)于更低濃度的LPS。盡管如此，10μM化合物7抑制LPS-刺激的IL-18到相似于來自正常受試者的PBMC的程度。
這些數(shù)據(jù)證明，F(xiàn)CAS患者表現(xiàn)出明顯的IL-1β和IL-18分泌對LPS刺激的響應(yīng)性過高，但是沒有證據(jù)表明這些細(xì)胞因子的基礎(chǔ)分泌增加或者基礎(chǔ)性或受刺激的βro-IL-1β水平改變。化合物7阻滯IL-1β和IL-18分泌(圖1)，在來自FCAS和對照受試者的LPS-刺激細(xì)胞中的效力相等。此外，本文所列FCAS患者數(shù)據(jù)提示，F(xiàn)CAS患者中的CAIS1基因突變及其所編碼的cryopyrin蛋白不改變ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1對ICE抑制劑(如化合物7)的敏感性。
實(shí)施例19化合物7對LPS-刺激的來自4名MWS患者的PBMC釋放IL-1β的抑制作用，該P(yáng)BMC在遞增濃度化合物7(0.03-10μM)的存在下與10ng/mL LPS溫育24小時如實(shí)施例18所述，可以預(yù)見突變的cryopyrin蛋白將以不同方式干擾ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1，并且可能以改變ICE抑制劑化合物與ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1相互作用的方式改變ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1構(gòu)型，從而減少該化合物抑制ICE活化和IL-1β與IL-18加工的能力。因此，進(jìn)行本例實(shí)驗(yàn)，以證實(shí)化合物7能夠抑制MWS患者細(xì)胞中的ICE。
研究四名MWS患者，其中三名具備262位精氨酸對色氨酸的替換(R262W)，一名具備350位蘇氨酸對甲硫氨酸的替換(T350M)。
從MWS患者收集全血樣品，體外培養(yǎng)。在正常未受刺激的條件下和在濃度為10-10,000ng/mL的脂多糖的存在下評價IL-1β的產(chǎn)生。向培養(yǎng)物加入濃度為30-10,000nM的化合物7，以觀察其抑制MWS患者或健康志愿者細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β的能力。圖2闡述這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
具體而言，在圖2中，借助ELISA測量細(xì)胞培養(yǎng)基中的IL-1β，使每名受試者的結(jié)果正?；癁樵跊]有化合物7存在下的IL-1β釋放水平。結(jié)果以平均±SEM報(bào)道，就4名MWS患者的每一名而言?；衔?抑制LPS-刺激的MWS患者PBMC釋放IL-1β的效力相似于來自正常受試者的PBMC(正如在實(shí)施例18中所觀察到的)。這表明三名MWS患者中的cryopyrin突變不以其改變化合物7的活性代謝產(chǎn)物(化合物8)與ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1相互作用的效力的方式改變ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1活化。
實(shí)施例20片劑制備表1提供用在下文實(shí)施例21中的化合物7片劑的組成。配制藥物產(chǎn)品，得到每片300mg化合物7。
表1化合物7 300mg片的組成

實(shí)施例214名MWS患者對每天口服給予900mg化合物7達(dá)14天的臨床響應(yīng)四名MWS患者參加開放標(biāo)記的臨床試驗(yàn)，接受化合物7治療。三名患者具備262位精氨酸對色氨酸的替換(R262W)，一名患者具備350位蘇氨酸對甲硫氨酸的突變(T350M)。
每天3次口服給予劑量900mg的化合物7達(dá)14天。在治療階段血清白介素-18、淀粉樣蛋白A和C-反應(yīng)性蛋白水平的明顯減少證明化合物7在MWS患者中的抗炎活性(參見圖3)。由患者報(bào)告的臨床癥狀減少證明化合物7的臨床功效，在圖3中被闡述為癥狀總和，包括皮疹、發(fā)熱/發(fā)冷、關(guān)節(jié)痛/肌痛、眼不適、疲勞(參見圖3)。在14天的治療階段化合物7也被四名患者所良好耐受。
具體而言，在圖3A中，在用化合物7治療之前(第-9天和第0天(第一點(diǎn)))、期間(第0天(第二點(diǎn))、第7天和第14天(第三點(diǎn)))和之后(第14天(第二點(diǎn))和第21天)測量血清白介素-18(IL-18)。平均而言，血清IL-18水平在第14天減少55％。數(shù)據(jù)以來自4名患者的平均±SEM報(bào)道。血清IL-18的基線水平為170-370pg/mL，相對于健康對照受試者觀測值而言僅有略微升高。
在圖3B中，在用化合物7治療之前、期間和之后測量血清淀粉樣蛋白A(SAA)和C-反應(yīng)性蛋白(CRP)，SAA和CRP的量分別平均減少75％和65％。SAA的基線水平為150-650mg/L，CRP的基線水平為20-90mg/L，相對于健康對照受試者而言都有明顯升高。
圖3C闡述自我報(bào)告的患者總體癥狀得分在治療期間平均減少60％。患者每天評價單個癥狀(皮疹、發(fā)熱/發(fā)冷、關(guān)節(jié)痛/肌痛、眼不適、疲勞)為不存在(0)、微小(1)、輕微(2)、中等(3)或嚴(yán)重(4)，計(jì)算總分，為單個癥狀得分之和(0-20)?；颊咴谥委熤踅?jīng)歷輕微-中等的癥狀(10-15分)，在用化合物7治療期間減少至微小水平(約5分)。
因而，在本例中我們證明，ICE/天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-1抑制劑化合物7在自身炎性疾病、特別是Muckle-Wells綜合征的治療中是有效的和有益的，因?yàn)榛衔?的給藥降低炎癥的標(biāo)志，包括血清白介素-18、血清淀粉樣蛋白A和血清C-反應(yīng)性蛋白，并且減少由患者所經(jīng)歷的MWS癥狀。
盡管我們已經(jīng)描述了本發(fā)明的大量實(shí)施方式，不過顯然可以改變我們的基本實(shí)施例，以提供其他采用本發(fā)明化合物和方法的實(shí)施方式。因此將領(lǐng)會到，本發(fā)明的范圍受到權(quán)利要求書、而非具體實(shí)施方式
的限定，后者僅供舉例說明。
權(quán)利要求
1.改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的方法，包含對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物。
2.改善、治療或預(yù)防受治療者cryopyrin-有關(guān)的周期綜合征。Muckle-Wells綜合征(MWS)、家族性寒性自身炎性綜合征(FCAS)(也被稱為家族性冷性蕁麻疹或FCU)、家族性地中海熱(FMF)、慢性嬰兒神經(jīng)性皮膚與關(guān)節(jié)綜合征(CINCAS)、a.k.a.始于新生期的多系統(tǒng)炎性疾病(NOMID)、TNFR1-有關(guān)的周期綜合征(TRAPS)、超IgD周期熱綜合征(HIDS)、Blau氏綜合征、全身起始性青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎(斯提爾氏病)或巨噬細(xì)胞活化綜合征的方法，包含對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述化合物是根據(jù)任意WO00/55114，WO00/55127，WO00/61542，WO00/61542，WO01/05772，WO01/10383，WO01/16093，WO01/42216，WO01/72707，WO01/90070，WO01/94351，美國公報(bào)2003/0092703，WO02/094263，美國公報(bào)2002/0169177，美國專利6,184,210，美國專利6,184,244，美國專利6,187,771，美國專利6,197,750，美國專利6,242,422，April2001 American Chemical Society (ACS) meeting in San Diego，California，USA，WO02/22611，美國公報(bào)2002/0058630，美國公報(bào)2003/0096737，WO95/35308，WO97/22619，WO99/47545和WO01/90063的。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述化合物是根據(jù)任意WO95/35308，WO97/22619，WO99/47545和WO01/90063的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是 及其每種立體異構(gòu)體，包括 (化合物6)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是 及其每種立體異構(gòu)體，包括
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是 及其每種立體異構(gòu)體，包括 (化合物7)
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是 及其每種立體異構(gòu)體，包括 (化合物8)
9.鑒定改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的化合物的方法，包括給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物，并且比較該受治療者用所述化合物治療前后的ICE抑制作用。
10.鑒定改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的化合物的方法，包括給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物，并且比較所述受治療者用所述化合物治療前后的所述自身炎性疾病的生物標(biāo)志。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述生物標(biāo)志選自白介素-1β、白介素-6、白介素-8、白介素-18、血清淀粉樣蛋白A、C-反應(yīng)性蛋白、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、結(jié)合珠蛋白、TNFα、免疫球蛋白、鐵蛋白、白細(xì)胞數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白。
12.改善、治療或預(yù)防受治療者自身炎性疾病的藥物組合物，包含抑制ICE的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物或者根據(jù)權(quán)利要求9-11任意一項(xiàng)的方法，其中所述化合物是如權(quán)利要求3-8任意一項(xiàng)所引用的。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中對受治療者給予化合物的劑量選自(a)每次給藥約300mg至約2,400mg之間；(b)每次給藥約600mg至約1,800mg之間；和(c)每次給藥約900mg。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中對受治療者給予化合物的劑量選自(a)每天約2mg/kg體重至約200mg/kg體重之間；(b)每天約6mg/kg體重至約100mg/kg體重之間；和(c)每天約25mg/kg體重至約75mg/kg體重之間。
16.減少患有自身炎性疾病的受治療者中IL-1β、IL-18或其他生物標(biāo)志的方法，包括對所述受治療者給予抑制ICE的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物的步驟。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療自身炎性疾病的方法和組合物。本發(fā)明也涉及評價ICE抑制劑治療自身炎性疾病的能力的測定法。
文檔編號A61K31/5513GK1980658SQ200580022887
公開日2007年6月13日 申請日期2005年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月27日
發(fā)明者J·C·R·蘭德爾 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司