專利名稱：雌激素受體調(diào)節(jié)劑的制作方法
背景技術(shù)：
天然存在和合成的雌激素具有廣泛的治療作用，包括緩解更年期癥狀、治療痤瘡、治療痛經(jīng)和功能失調(diào)性子宮出血、治療骨質(zhì)疏松、治療多毛癥、治療前列腺癌、治療熱潮紅以及預防心血管疾病。由于雌激素極具治療價值，因此發(fā)現(xiàn)在雌激素響應(yīng)性組織中模擬雌激素樣作用的化合物是十分令人感興趣的。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)雌激素受體具有兩種形式ERα和ERβ。配體不同地結(jié)合到這兩種形式，并且各種形式具有對結(jié)合配體的不同組織特異性。因此，有可能存在對ERα或ERβ具有選擇性的化合物，由此賦予對特定配體的一定程度的組織特異性。
本領(lǐng)域需要的是可產(chǎn)生如同雌激素替代療法一樣的積極反應(yīng)但不具有其副作用的化合物。還需要對機體的不同組織表現(xiàn)出選擇性作用的雌激素樣化合物。
本發(fā)明化合物是雌激素受體的配體，因此可用于治療或預防各種與雌激素功能有關(guān)的適應(yīng)癥，包括骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏(Paget`s)疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、認知功能損害、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、焦慮、由雌激素不足引起的抑郁、炎癥、炎癥性腸病、性功能失調(diào)、高血壓、視網(wǎng)膜變性，和癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌和前列腺癌。
發(fā)明概要本發(fā)明涉及通過δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇治療或預防與雌激素功能相關(guān)的各種病況的方法。
附圖簡述附

圖1通過17β-雌二醇(E2、0.2mg/kg)、Δ5-雄烯-3β，17β-二醇(A、5或10mg/kg)或賦形劑(麻油)處理后的野生型和雌激素受體β敲除(βERKO)小鼠的背縫神經(jīng)核中的孕酮受體(PR)蛋白。動物(n＝5/組)被治療3天，并且在最后一次治療之后24小時收集大腦和子宮并且處理用于免疫組織化學。盡管ERα和ERβ均在背縫神經(jīng)核中表達，但是ERβ更加充分且該大腦區(qū)域中通過E2的PR誘導主要由ERβ調(diào)節(jié)。注意在缺乏功能性ERβ的βERKO小鼠中通過E2的PR誘導的衰減和通過A的PR誘導的完全損失。對海馬(其中PR完全由ERα調(diào)節(jié))中PR免疫反應(yīng)性細胞的檢查顯示了在E2-治療的野生型和βERKO小鼠中的顯著表達，在賦形劑或者A(5mg/kg)治療組中沒有PR免疫反應(yīng)性，且在高劑量A(10mg/kg)組中輕微染色的細胞。這些數(shù)據(jù)共同顯示了以該試驗中測試劑量的A的作用由ERβ介導。
附圖2通過17β-雌二醇(E2、0.2mg/kg)、Δ5-雄烯-3 β，17β-二醇(A、5或10mg/kg)或賦形劑(麻油)處理后的野生型和雌激素受體β敲除(βERKO)小鼠的子宮重量。動物(n＝5/組)被治療3天，并且在最后一次治療之后24小時收集大腦和子宮。在野生型和βERKO小鼠中，E2均顯著增加子宮重量，因為該響應(yīng)通過ERα介導；然而，A僅有適度作用。共同地，在測試劑量下，A證明了在大腦中充分的ER-β活性，且在末梢中對ERα僅有適度活性。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及通過δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇治療或預防與雌激素功能相關(guān)的各種病況的方法。
本發(fā)明的范圍還包括由δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇和藥學可接受載體組成的藥物組合物。本發(fā)明還意圖包括由藥學上可接受的載體和本申請中任意明確公開的化合物組成的藥物組合物。本發(fā)明還涉及用于制造本發(fā)明藥物組合物的方法。本發(fā)明還涉及用于制造本發(fā)明化合物和藥物組合物的方法和中間體。本發(fā)明的這些和其它方面將從本文含有的教導變得顯而易見。
δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇是雌激素受體的選擇性調(diào)節(jié)劑，且因此適用于治療或預防與哺乳動物中雌激素受體功能相關(guān)的各種疾病和病況。具體而言，δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇是ERβ的選擇性調(diào)節(jié)劑且由此適用于治療或預防與哺乳動物(優(yōu)選人類)中ERβ功能相關(guān)的各種疾病和病況。
各種與雌激素受體功能相關(guān)的疾病和病況包括但不限于骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、認知功能損害、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、焦慮、由雌激素不足引起的抑郁、炎癥、炎癥性腸病、性功能失調(diào)、高血壓、視網(wǎng)膜變性和癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌和前列腺癌。在使用當前要求保護的化合物治療這些病況時，所需治療量將根據(jù)特定疾病變化并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易確定。雖然治療和預防都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，優(yōu)選使用這些疾病的治療。
本發(fā)明還涉及通過在有需要的哺乳動物中給藥δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇產(chǎn)生雌激素受體調(diào)節(jié)作用的方法。本發(fā)明還涉及通過在有需要的哺乳動物中給藥δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇產(chǎn)生雌激素受體激動作用的方法。具體而言，雌激素受體激動作用為ERβ激動作用。
本發(fā)明還涉及通過在有需要的哺乳動物中給藥本發(fā)明化合物和藥物組合物治療或預防與雌激素功能相關(guān)的疾病、骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、認知功能損害、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、焦慮、由雌激素不足引起的抑郁、炎癥、炎癥性腸病、性功能失調(diào)、高血壓、視網(wǎng)膜變性，和癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌和前列腺癌。本發(fā)明實例為治療或預防抑郁的方法。本發(fā)明實例為治療或預防焦慮的方法。本發(fā)明實例為治療或預防熱潮紅的方法。本發(fā)明實例為治療或預防癌癥的方法。本發(fā)明實例為治療或預防心血管疾病的方法。
本發(fā)明的一個實施方案為通過在有需要的哺乳動物中給藥本發(fā)明化合物和藥物組合物治療或預防癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌或前列腺癌的方法。SERMs治療乳腺癌、子宮癌或前列腺癌的用途在文獻中已知，參見T.J.Powles，“Breast cancer prevention”，Oncologist 2002；7(1)60-4；Park，W.C.和Jordan，V.C.，“Selective estrogen receptormodulators(SERMS)and their roles in breast cancer prevention.”Trends Mol Med.2002Feb；8(2)82-8；Wolff，A.C.等人，“Use of SERMsfor the adjuvant therapy of early-stage breast cancer，”Ann N Y AcadSci.2001 Dec；94980-8；Steiner，M.S.等人，“Selective estrogen receptormodulators for the chemoprevention of prostate cancer，”Urology 2001Apr；57(4Suppl 1)68-72。
本發(fā)明的另一實施方案為通過在向需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物來治療或預防該哺乳動物中轉(zhuǎn)移性骨疾病的方法。SERMS治療轉(zhuǎn)移性骨疾病的用途在文獻中已知，參見Campisi，C.等人，“Complete resoultion of breast cancer bone metastasisthrough the use of beta-interferon and tamoxifen，”Eur J GynaecolOncol 1993；14(6)479-83。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物來治療或預防該哺乳動物中男子乳腺發(fā)育的方法。SERMS治療男子乳腺發(fā)育的用途在文獻中已知，參見Ribeiro，G.和Swindell R.，“Adjuvant tamoxifen for male breastcancer.”Br J Cancer 1992；65252-254；Donegan，W.，“Cancer of theMale Breast，”JGSM Vol.3，Issue 4，2000。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防更年期后骨質(zhì)疏松、糖皮質(zhì)激素骨質(zhì)疏松、惡性高鈣血癥、骨損失和骨折的方法。SERMs治療或預防骨質(zhì)疏松、惡性高鈣血癥、骨損失和骨折的用途在文獻中已知，參見Jordan，V.C.等人，“Selective estrogen receptor modulation andreduction in risk of breast cancer，osteoporosis and coronary heartdisease，”Natl Cancer Inst 2001 Oct；93(19)1449-57；Bjarnason，NH等人，“Six and twelve month changes in bone turnover are realted toreduction in vertebral fracture risk during 3 years of raloxifenetreatment in postemenopausal osteoporosis，”O(jiān)steoporosis Int 2001；12(11)922-3；FentimanI.S.，“Tamoxifen protects against steroid-inducedbone loss，”Eur J Cancer 28684-685(1992)；Rodan，G.A.等人，“Therapeutic Approaches to Bone Diseases，”Science Vol 289，1 Sept.2000。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中牙周病或牙損失的方法。SERMs在哺乳動物中治療牙周病或牙損失的用途在文獻中已知，參見Rodan，G.A.等人，“Therapeutic Approaches to BoneDiseases，”Science Vol 289，1 Sept.2000 pp.1508-14。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中佩吉特氏疾病的方法。SERMs在哺乳動物中治療佩吉特氏疾病的用途在文獻中已知，參見Rodan，G.A.等人，“Therapeutic Approaches to BoneDiseases，”Science；Vol 289，1 Sept.2000 pp.1508-14。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中子宮纖維性疾病的方法。SERMs治療子宮纖維性疾病或子宮平滑肌瘤的用途在文獻中已知，參見Palomba，S.等人，“Effects of raloxifene treatment onuterine leiomyomas in postmenopausal women，”Fertil Steril.2001 Jul；76(l)38-43。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物肥胖的方法。SERMs治療肥胖的用途在文獻中已知，參見Picard，F(xiàn).等人，“Effectsof the estrogen antagonist EM-652.HCl on energy balance and lipidmetabolism in ovariectomized rats，”Int J Obes Relat Metab Disord.2000Jul；24(7)830-40。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中軟骨變性、類風濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的方法。SERMs治療軟骨變性、類風濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎的用途在文獻中已知，參見Badger，A.M.等人，“Idoxifene，a novel selective estrogen receptor modulator，is effective ina rat model of adjuvant-induced arthritis.”J Pharmacol Exp Ther.1999Dec；291(3)1380-6。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中子宮內(nèi)膜異位的方法。SERMs治療子宮內(nèi)膜異位的用途在文獻中已知，參見Steven R.Goldstein，“The Effect of SERMs on the Endometrium，”Annals of the New York Academy of Sciences 949237-242(2001)。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中尿失禁的方法。SERMs治療尿失禁的用途在文獻中已知，參見Goldstein，S.R.，“Raloxifene effect on frequency of surgery for pelvic floorrelaxation，”O(jiān)bstet Gynecol.2001Jul；98(l)91-6。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中心血管疾病、再狹窄、降低LDL膽固醇水平和抑制血管平滑肌細胞增生的方法。雌激素對膽固醇的生物合成和心血管健康具有影響。統(tǒng)計上來講，絕經(jīng)后婦女和男人中心血管疾病的發(fā)病率大致相等；然而，絕經(jīng)前婦女具有比男人低得多的心血管疾病發(fā)病率。由于絕經(jīng)后婦女缺少雌激素，人們相信雌激素在預防心血管疾病中扮演有益的角色。這種機理還沒有被清楚理解，不過證據(jù)表明雌激素可增加肝臟中低密度脂質(zhì)(LDL)膽固醇受體以除去過量的膽固醇。SERMs治療或預防心血管疾病、再狹窄、降低LDL膽固醇水平和抑制血管平滑肌細胞增生的用途在文獻中已知，參見Nuttall，ME等人，“Idoxifenea novel selectiveestrogen receptor modulator prevents bone loss and lowers cholesterollevels in ovariectomized rats and decreases uterine weight in intactrats，”Endocrinology 1998 Dec；139(12)5224-34；Jordan，V.C.等人，“Selective estrogen receptor modulation and reduction in risk of breastcancer，osteoporosis and coronary heart disease，”Natl Cancer Inst 2001Oct；93(19)1449-57；Guzzo JA.，“Selective estrogen receptormodulators--a new age of estrogens in cardiovascular disease？，”ClinCardiol 2000 Jan；23(1)15-7；Simoncini T，Genazzani AR.，“Directvascular effects of estrogens and selective estrogen receptormodulators，”Curr Opin Obstet Gynecol 2000 Jun；12(3)181-7。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中認知功能損害或腦變性疾病的方法。在模型中雌激素已經(jīng)表明對認知作用具有有利影響，例如減輕焦慮和抑郁以及治療或預防阿爾茨海默氏病。通過增加膽堿能功能、神經(jīng)營養(yǎng)蛋白和神經(jīng)營養(yǎng)蛋白受體表達，雌激素影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)。雌激素還增加glutamergic突觸傳遞，改變淀粉樣前體蛋白加工并提供神經(jīng)保護。因此，本發(fā)明雌激素受體調(diào)節(jié)劑對于改善認知作用或治療輕度認知損傷、注意力缺陷障礙、睡眠障礙、易怒、沖動、憤怒管理、多發(fā)性硬化和帕金森氏病有利。參見Sawada，H和Shimohama，S，“Estrogens and Parkinson diseasenovel approachfor neuroprotection，”Endocrine.2003 Jun；21(1)77-9；McCullough LD和Hum，PD，“Estrogen and ischemic neuroprotectionan integratedview，”TrendsEndocrinol Metab.2003 Jul；14(5)228-35；以其全文并入此處作為參考。SERMs預防認知作用損傷的用途在文獻中已知，參見Yaffe，K.，K.Krueger，S.Sarkar等人，2001.Cognitive function inpostmenopausal women treated with raloxifene.N.Eng.J.Med.3441207-1213。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中抑郁的方法。雌激素預防抑郁的用途已經(jīng)在本領(lǐng)域公開，參見Carranza-Liram S.，Valentino-Figueroa ML，“Estrogen therapy for depression inpostmenopausal women.”Int J Gynnaecol Obstet 1999 Apr；65(1)35-8。特別地，作為單獨的藥物或與其它藥物組合使用，雌激素受體β(ERβ)選擇性激動劑將可用于治療焦慮或抑郁疾病，包括抑郁、經(jīng)前抑郁、產(chǎn)后抑郁、經(jīng)前綜合癥、狂躁抑郁、焦慮、癡呆、和強迫型行為。臨床研究已經(jīng)表明了天然雌激素17β-雌二醇用于治療多種抑郁疾病的功效，參見Schmidt PJ，Nieman L，Danaceau MA，Tobin MB，RocaCA，Murphy JH，Rubinow DR.Estrogen replacement inperimenopause-related depressiona preliminary report.Am J ObstetGynecol 183414-20，2000；和Soares CN，Almeida OP，Joffe H，CohenLS.Efficacy of estradiol for the treatment of depressive disorders inperimenopausal womena double-blind，randomized，placebo-controlledtrial.Arch Gen Psychiatry.58537-8，2001；并入本文作為參考。Bethea等人(Lu NZ，Shlaes TA，Gundlah C，Dziennis SE，Lyle RE，Bethea CL.Ovarian steroid action on tryptophan hydroxylase protein and serotonincompared to localization of ovarian steroid receptors in midbrain ofguinea pigs.Endocrine 11257-67，1999，并入本文作為參考)已經(jīng)建議雌激素的抗抑郁活性可通過在含有5-羥色胺的細胞中控制5-羥色胺合成來介導，所述含有5-羥色胺的細胞富集在背縫神經(jīng)核。
本發(fā)明的另一實施方案為通過向有需要的哺乳動物給藥治療有效量的任意上述化合物或藥物組合物治療或預防該哺乳動物中焦慮的方法。雌激素受體在調(diào)節(jié)情緒過程，例如焦慮中的作用已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中公開，參見Krezel，w.等人，“Increased anxiety and synaptic plasticityin estrogen receptor beta-deficient mice.”Proc Natl Acad Sci USA 2001Oct 9；98(21)12278-82。
本發(fā)明的另一實施方案為治療或預防炎癥或炎癥性腸病的方法。包括克羅恩氏病和ulceratie結(jié)腸炎的炎癥性腸病為腸部發(fā)炎的慢性疾病，通常產(chǎn)生反復的腹部抽筋和腹瀉。雌激素受體調(diào)節(jié)劑治療炎癥或炎癥性腸病的作用已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中公開，參見Harris，H.A.等人，“Evaluation of an Estrogen Receptor-β Agonist in Animal Models ofHuman Disease，”Endocrinology，Vol.144，No.10 4241-4249。
本發(fā)明的另一實施方案為治療或預防高血壓的方法。已經(jīng)報道了雌激素受體β具有調(diào)節(jié)血管功能和血壓的作用，參見Zhu等人，“Abnormal Vacular Function and Hypertension in Mice Deficient inEstrgoen Receptorβ，”Science，Vol 295，Issue 5554，505-508，18 January2002。
本發(fā)明的另一實施方案為在雄性和雌性中治療或預防性功能失調(diào)的方法。雌激素受體調(diào)節(jié)劑治療性功能失調(diào)的作用已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中公開，參見Baulieu，E.等人，“Dehydroepiandrosterone(DHEA)，DHEAsulfate，and agingContribution of the DHEAge Study to ascociobiomedical issue，”PNAS，April 11，2000，Vol.97，No.8，4279-4282；Spark，Richard F.，“Dehydroepiandrosteronea springboardhormone for female sexuality，”Fertility and Sterility，Vol.77，No.4，Suppl 4，April 2002，S19-25。
本發(fā)明的另一實施方案為治療或預防視網(wǎng)膜變性的方法。已經(jīng)表明雌激素具有降低與年老相關(guān)的黃斑病發(fā)病風險的有利作用，參見SnoW，K.K.等人，“Association between reproductive and hormonalfactors and age-related maculopathy in postmenopausal women，”Americal Journal of Ophthalmology，Vol.134，Issue 6，December 2002，pp.842-48。
本發(fā)明實例為δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇在制備用于在有需要的哺乳動物中治療或預防骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明進一步實例為δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇在制備用于在有需要的哺乳動物中治療或預防骨損失、骨再吸收、骨折、轉(zhuǎn)移性骨疾病或與雌激素功能相關(guān)的障礙的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)標準藥物實踐，δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇可給藥到哺乳動物，優(yōu)選人，可單獨給藥，或優(yōu)選與藥學上可接受的載體或稀釋劑組合，任選與已知的助劑例如明礬在藥物組合物中組合給藥。該化合物可口服給藥或腸胃外給藥，包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、直腸和局部給藥途徑。
在口服使用的片劑的情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉，并且通常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對于膠囊形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。本發(fā)明治療化合物口服使用時，所選化合物可例如以片劑或膠囊的形式給藥，或以水溶液或懸浮液的形式給藥。當以片劑或膠囊形式口服給藥時，活性藥物組分可以與口服無毒、藥學上可接受的任何惰性載體組合使用，例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、硫酸鈣、甘露糖醇、山梨糖醇等；當以液態(tài)形式口服給藥時，口服藥物組分可以與任何口服無毒、藥學上可接受的惰性載體組合使用，例如乙醇、甘油、水等等。并且當需要或必要時，合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑、和著色劑還可加入到混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味劑，天然和合成樹膠例如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等等。這些劑型中使用的潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土、黃原膠等等。當需要口服使用的水懸劑時，活性組分與乳化劑和懸浮劑組合使用。如果需要的話，可以加入某些甜味劑或調(diào)味劑。對于肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)應(yīng)用，通常制備活性組分的無菌溶液，并且溶液的pH應(yīng)當進行相應(yīng)的調(diào)節(jié)和緩沖。對于靜脈內(nèi)應(yīng)用，為了使制劑等滲，應(yīng)當控制溶解物的總濃度。
δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇還可以脂質(zhì)體遞送體系給藥，例如小單層泡囊、大單層泡囊和多層泡囊。脂質(zhì)體可由多種磷脂形成，例如膽固醇、十八胺或磷脂酰膽堿。
δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇還可使用作為單個載體的單克隆抗體遞送，化合物分子偶聯(lián)到所述載體上。本發(fā)明化合物還可與作為可標靶藥物載體的可溶性聚合物結(jié)合。這種聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥基-乙基天冬酰胺-苯酚，或用棕櫚?；鶜埢〈木垩趸蚁?聚賴氨酸。并且，本發(fā)明化合物可連接到用于實現(xiàn)藥物控釋的一類可生物降解聚合物上，例如聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸和聚羥基乙酸共聚物、聚(ε-己內(nèi)酯)、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二羥基吡喃、聚氰基丙烯酸酯，以及水凝膠的交聯(lián)或兩親嵌段共聚物。
δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇還可與用于治療或預防以下疾病的已知藥物組合使用骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、認知功能損害、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、焦慮、由雌激素不足引起的抑郁、炎癥、炎癥性腸病，和癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌和前列腺癌。當前公開的化合物與在治療或預防此處公開的疾病中有用的其它藥物的組合也在本發(fā)明范圍內(nèi)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將能夠認識到，基于藥物和疾病的特性，哪些藥物組合是有用的。這些藥物包括以下有機二膦酸酯；組織蛋白酶K抑制劑、雌激素或雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細胞合成代謝劑，例如PTH、降血鈣素、維生素D或合成維生素D類似物、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)、芳香化酶抑制劑；以及藥學上可接受的鹽或其混合物。優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和有機二膦酸酯。另一優(yōu)選組合為本發(fā)明化合物和組織蛋白酶K抑制劑。另一優(yōu)選組合為本發(fā)明化合物和雌激素。另一優(yōu)選組合為本發(fā)明化合物和雌激素受體調(diào)節(jié)劑。另一優(yōu)選組合為本發(fā)明化合物和成骨細胞合成代謝劑。
“有機二膦酸酯”包括但不限于下式化合物
其中n為0-7的整數(shù)并且其中A和X獨立地選自H、OH、鹵素、NH2、SH、苯基、C1-30烷基、C3-30支化或環(huán)烷基、含有兩個或三個N的雙環(huán)結(jié)構(gòu)、C1-30取代烷基、C1-10烷基取代的NH2、C3-10支化或環(huán)烷基取代的NH2、C1-10二烷基取代的NH2、C1-10烷氧基、C1-10烷基取代的硫基、苯硫基、鹵代苯硫基、C1-10烷基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑并吡啶基和芐基，由此當n是0時全部A和X不選自H或OH；或者A和X與其所連接的碳原子一起形成C3-10環(huán)。
在上述化學式中，烷基可為直連、支鏈或環(huán)狀，條件是為化學式選擇足夠的原子。C1-30取代烷基可包括多種取代基，其非限制性實例包括選自下組的那些苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、NH2、C1-10烷基或二烷基取代的NH2、OH、SH、和C1-10烷氧基。
對于A或X取代基，上述化學式還意圖包括絡(luò)合碳環(huán)、芳香環(huán)和雜環(huán)結(jié)構(gòu)，其非限制性實例包括萘基、喹啉基、異喹啉基、金剛烷基和氯代苯硫基。
本文還可使用二膦酸酯藥學上可接受的鹽和衍生物。鹽的非限制性實例包括堿金屬、堿土金屬、銨、和單、二、三或四C1-30烷基取代銨。優(yōu)選的鹽為鈉、鉀、鈣、鎂和銨鹽。更優(yōu)選鈉鹽。衍生物非限制性實例包括酯、水合物和酰胺。
應(yīng)當注意到此處用于治療劑的術(shù)語“二膦酸酯”還意圖包括雙膦酸酯、二膦酸(biphosphonic acids)、雙膦酸(diphosphonic acids)，以及這些材料的鹽和衍生物。除非另有說明，二膦酸酯的特定命名的使用并不意圖限制本發(fā)明。
二膦酸鹽的非限制性實例包括阿侖膦酸鹽、英卡膦酸鹽、氯屈膦酸鹽、依替膦酸鹽、伊班膦酸鹽、伊卡膦酸鹽、米諾膦酸鹽(minodronate)、奈立膦酸鹽、奧帕膦酸鹽、帕米膦酸鹽、吡磷酸鹽(piridronate)、利塞膦酸鹽、替魯膦酸鹽和zolendronate，及其藥學上可接受的鹽和酯。特別優(yōu)選的二膦酸鹽為阿侖膦酸鹽，尤其是阿侖膦酸的鈉、鉀、鈣、鎂或銨鹽。優(yōu)選的二膦酸鹽的實例為阿侖膦酸的鈉鹽，尤其是阿侖膦酸的水合鈉鹽。鹽可用整數(shù)摩爾或非整數(shù)摩爾水水合。其它優(yōu)選二膦酸鹽的實例為阿倫膦酸的水合鈉鹽，當水合鹽為阿侖膦酸單鈉三水合物時尤為如此。
有機二膦酸酯的精確劑量將隨著下列因素而改變給藥方案、所選擇的具體二膦酸鹽、哺乳動物或人類的年齡、大小、性別和健康狀況、所治療病癥的性質(zhì)和嚴重性以及其它相關(guān)的醫(yī)學和身體因素。對于人，二膦酸鹽的有效口服劑量一般為約1.5至約6000μg/kg體重，優(yōu)選約10-約2000μg/kg體重。在另一給藥方案中，除了以每天的間隔給藥外，二膦酸鹽可以以例如每周一次劑量、每周兩次劑量、兩周一次劑量和每月兩次的劑量給藥。在每周一次劑量體系中，阿侖膦酸單鈉三水合物將以35毫克/周或70毫克/周的劑量給藥。所述二膦酸鹽還可每月一次、每六個月一次、每年一次或更低頻率給藥，參見WO01/97788(2001年12月27日公開)和WO01/89494(2001年11月29日公開)。
“雌激素”包括但不限于天然存在的雌激素[7-雌二醇(E2)、雌甾醇(E1)和雌三醇(E3)]、合成結(jié)合雌激素、口服避孕藥和硫酸鹽化雌激素。參見Gruber CJ，Tschugguel W，Schneeberger C，Huber JC.，″Production and actions of estrogens″N Engl J Med 2002 Jan 31；346(5)340-52。
“雌激素受體調(diào)節(jié)劑”指的是不管其機理，干涉或抑制雌激素結(jié)合到受體上的化合物。雌激素受體調(diào)節(jié)劑的例子包括但不限于雌激素、孕激素、雌二醇、屈洛昔芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、TSE-424、他莫昔芬、艾多昔酚、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟維司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4′-二羥基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙，以及SH646。
“組織蛋白酶K抑制劑”指的是抑制半胱氨酸蛋白酶組織蛋白酶K活性的化合物。組織蛋白酶K抑制劑的非限制性實例可發(fā)現(xiàn)于AxysPharmaceuticals的PCT公開WO00/55126和Merck Frosst Canada &Co.和Axys Pharmaceuticals的WO01/49288中。
不管其機理，“雄激素受體調(diào)節(jié)劑”指的是干涉或抑制雄激素結(jié)合到受體上的化合物。雄激素受體調(diào)節(jié)劑的實例包括非那雄胺以及其它5α-還原酶抑制劑、尼魯米特、氟他胺、比卡魯胺、利阿唑和阿比特龍乙酸鹽。
“破骨細胞質(zhì)子ATP酶抑制劑”指的是質(zhì)子ATP酶抑制劑，其發(fā)現(xiàn)于破骨細胞的頂膜，并且據(jù)報道在骨吸收過程中扮演重要角色。這些質(zhì)子泵代表了設(shè)計骨吸收抑制劑的有吸引力的目標，其可潛在用于骨質(zhì)疏松和相關(guān)代謝疾病的治療和預防。參見C.Farina等人，“Selectiveinhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel boneantiresorptive agents，”DDT，4163-172(1999)，以其全文并入此處作為參考。
“HMG-CoA還原酶抑制劑”指的是3-羥基-3-甲基戊二?；?CoA還原酶抑制劑。通過使用本領(lǐng)域公知的測試方法可以很容易的確認對于HMG-CoA還原酶具有抑制活性的化合物。例如，參見US 4,231,938第6欄和WO 84/02131第30-33頁中所述或引用的方法。此處使用的術(shù)語“HMG-CoA還原酶抑制劑”和“HMG-CoA還原酶的抑制劑”具有相同意義。
可以使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實例包括但不限于洛伐他汀(MEVACOR；參見美國專利US 4,231,938、US 4,294,926和US4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR；參見美國專利US 4,444,784、US4,820,850和US 4,916,239)、帕伐他汀(PRAVACHOL；參見美國專利US 4,346,227、US 4,537,859、US 4,410,629、US 5,030,447和US5,180,589)、氟伐他汀(LESCOL；參見美國專利US 5,354,772、US4,911,165、US 4,929,437、US 5,189,164、US 5,118,853、US 5,290,946和US 5,356,896)、阿托伐他汀(LIPITOR；參見美國專利US5273,995、US 4,681,893、US 5,489,691和US 5,342,952)和西立伐他汀(還稱為rivastatin和BAYCHOL；參見美國專利US 5,177,080)。這些和其它可用于本發(fā)明方法的HMG-CoA還原酶抑制劑結(jié)構(gòu)式公開在M.Yalpani，″Cholesterol Lowering Drugs″，Chemistry & Industry，pp.85-89(5 February 1996)的第87頁和美國專利US 4,782,084和US4,885,314中。此處使用的術(shù)語HMG-CoA還原酶抑制劑包括所有藥學上可接受的內(nèi)酯和展開酸形式(亦即其中內(nèi)酯環(huán)打開以形成游離酸)以及具有HMG-CoA還原酶抑制活性的化合物的鹽和酯形式，并且這些鹽、酯、展開酸和內(nèi)酯形式的使用也在本發(fā)明范圍之內(nèi)。內(nèi)酯部分及其相應(yīng)的展開酸形式的實例如下結(jié)構(gòu)I和II所示。
內(nèi)酯展開酸I II在可存在展開酸形式的HMG-CoA還原酶抑制劑中，鹽和酯形式優(yōu)選由展開酸形成，并且所有這些形式包括在此處使用的術(shù)語“HMG-CoA還原酶抑制劑”的范圍內(nèi)。HMG-CoA還原酶抑制劑優(yōu)選選自洛伐他汀和辛伐他汀，并且最優(yōu)選辛伐他汀。此處對于HMG-CoA還原酶抑制劑的術(shù)語“藥學上可接受的鹽”將表示本發(fā)明使用的化合物的無毒鹽，其通常通過游離酸與有機或無機堿的反應(yīng)制備，特別是由例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅和四甲銨的陽離子形成的那些，以及由例如氨、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N-芐基苯基乙二胺、1-對氯芐基-2-吡咯烷-1′-基-甲基苯并-咪唑、二乙胺、哌嗪和三(羥甲基)氨基甲烷形成的鹽。HMG-CoA還原酶抑制劑鹽形式的其它實例可包括但不限于乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣鹽、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰對氨基苯胂酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽、哈胺、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、多聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、氯茶堿鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物和戊酸鹽。
當吸收在溫血動物的血流中時，所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物的酯衍生物還可作為前藥，可以這種方式裂解以釋放藥物形式并使得藥物得到改善的治療性能。
如上所述的“整聯(lián)蛋白受體拮抗劑”指的是選擇性拮抗、抑制或阻礙生理學配體結(jié)合到αvβ3整聯(lián)蛋白的化合物，選擇性拮抗、抑制或阻礙生理學配體結(jié)合到αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，選擇性拮抗、抑制或阻礙生理學配體結(jié)合到αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，以及選擇性拮抗、抑制或阻礙在毛細血管內(nèi)皮細胞表達的特定整聯(lián)蛋白活性的化合物。該術(shù)語還表示αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白的拮抗劑。該術(shù)語還表示αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白任意組合的拮抗劑。H.N.Lode和同事在PNAS USA 961591-1596(1999)中已經(jīng)注意到抗血管αv整聯(lián)蛋白拮抗劑和腫瘤特異性抗體細胞因子(干擾白細胞素-2)融合蛋白標記物在消除自發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移中的協(xié)同作用。他們的結(jié)果建議這種組合可能用于治療癌癥和轉(zhuǎn)移性腫瘤生長。通過與所有現(xiàn)有藥物不同的新機制，αvβ3整聯(lián)蛋白受體拮抗劑抑制骨吸收。整聯(lián)蛋白為介導細胞-細胞和細胞-基質(zhì)相互作用的雜二聚跨膜粘著受體。α和β整聯(lián)蛋白亞組非共價相互作用，并以依賴于二價陽離子的方式結(jié)合細胞外基質(zhì)配體。破骨細胞上最多的整聯(lián)蛋白為αvβ3(＞107/破骨細胞)，其看來在對于細胞轉(zhuǎn)移和極化非常重要的細胞骨架組織中具有限速的作用。αvβ3拮抗作用選自抑制骨吸收、抑制再狹窄、抑制黃斑變性、抑制關(guān)節(jié)炎，以及抑制癌癥和轉(zhuǎn)移性生長。
“成骨細胞合成代謝劑”指的是構(gòu)造骨骼的藥劑，例如PTH。甲狀旁腺激素(PTH)或其氨基末端片斷和類似物的間斷給藥已經(jīng)表明能夠在動物和人中預防、阻止、部分逆轉(zhuǎn)骨損失并刺激骨骼形成。D.W.Dempster等人在“Anabolic actions of parathyroid hormone on bone，”Endocr Rev 14690-709(1993)中進行了論述。研究已經(jīng)表明甲狀旁腺激素在刺激骨骼形成并因而增加骨骼質(zhì)量和強度中的臨床益處。RMNeer等人在New Eng J Med 344 1434-1441(2001)中報導了結(jié)果。
此外，甲狀旁腺激素相關(guān)的蛋白質(zhì)碎片或類似物，例如PTHrP(1-36)已經(jīng)表明具有anticalciuric作用(參見M.A.Syed等人，“Parathyroidhormone-related protein-(1-36)renal tubular calcium reabsorption innormal human volunteersimplications for the pathogenesis of humoralhypercalcemia of malignancy，”JCEM 861525-1531(2001))并還可作為用于治療骨質(zhì)疏松的合成代謝劑。
降血鈣素為已知參與鈣和磷代謝的主要通過甲狀腺產(chǎn)生的32氨基酸肽。通過抑制破骨細胞的活性，降血鈣素抑制了骨的再吸收。因而降血鈣素可以容許成骨細胞更加有效的作用并且構(gòu)成骨骼。
“維生素D”包括但不限于維生素D3(膽骨化醇)和維生素D2(麥角鈣化醇)，其為天然存在的生物學上惰性的維生素D1α-羥基維生素D25-羥基維生素D和1α，25-二羥基維生素D的羥基化生物學活性代謝物的前體。維生素D2和維生素D3在人體中具有相同的生物學作用。當維生素D2或維生素D3進入循環(huán)時，其通過細胞色素P450-維生素D-25-羥化酶羥基化以產(chǎn)生25-羥基維生素D。25-羥基維生素D呈生物學惰性并且在腎臟中進一步被細胞色素P450-單加氧酶、25(OH)D-1α-羥化酶羥基化以得到1，25-二羥基維生素D。當血鈣降低時，甲狀旁腺激素(PTH)的產(chǎn)生增加，其通過增加25-羥基維生素D到1，25-二羥基維生素D的轉(zhuǎn)化調(diào)節(jié)鈣體內(nèi)平衡并增加血漿鈣濃度。
1，25-二羥基維生素D被認為在鈣和骨新陳代謝時產(chǎn)生維生素D的作用。1，25-二羥基代謝物為保持鈣吸收和骨骼完整性所需的活性激素。通過誘導單核干細胞分裂成破骨細胞并通過將鈣維持在正常范圍，鈣體內(nèi)平衡通過1，25-二羥基維生素D維持，通過鈣羥基磷灰石在骨表面的沉積，其導致了骨鹽沉積，參見Holick，MF，Vitamin Dphotobiology，metabolism，and clinical applications，InDeGroot L，Besser H，Burger HG等人編輯，Endocrinology，第3版，990-1013(1995)。然而通過骨新陳代謝，高濃度的1α，25-二羥基維生素D3可能導致血液中鈣濃度的增加和鈣濃度的異?？刂?，從而導致高鈣血癥。1α，25-二羥基維生素D3還可在骨新陳代謝中間接調(diào)節(jié)破骨活性，并可能期待高濃度以在骨質(zhì)疏松中增加過量的骨吸收。
“合成維生素D類似物”包括作用類似維生素D的非天然存在的化合物。
選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑通過增加腦中的血清素的量作用。在治療抑郁中，SSRIs已經(jīng)在美國成功使用了十年。SSRIs的非限制性實例包括氟西汀、帕羅西汀、舍曲林、西酞普蘭和氟伏沙明。SSRIs還可用于治療與雌激素功能相關(guān)的疾病，例如經(jīng)前綜合癥和經(jīng)前緊張綜合癥。參見Sundstrom-Poromaa I，Bixo M，Bjorn I，Nordh O.，“Compliance to antidepressant drug therapy for treatment ofpremenstrual syndrome，”J Psychosom Obstet Gynaecol 2000Dec；21(4)205-11。
此處使用的術(shù)語“芳香化酶抑制劑”包括能夠抑制芳香化酶的化合物，例如市場上可買到的抑制劑，例如aminoglutemide(CYTANDREN)、阿那曲唑(ARIMIDEX)、來曲唑(FEMARA)、福美斯坦(LENATRON)、依西美坦(AROMASIN)、阿他美坦(1-甲基雄-1，4-二烯-3，17-二酮)、法倔唑(4-(5，6，7，8-四氫咪唑[1，5-a]吡啶-5-基)-芐腈，單鹽酸鹽)、芬羅唑(4-(3-(4-氟苯基)-2-羥基-1-(1H-1，2，4-三唑-1-基)-丙基)芐腈)、伏氯唑(6-[(4-氯苯基)-1H-1，2，4-三唑-1-基甲基]-1-甲基-1H-苯并三唑)、YM-511(4-[N-(4-溴代芐基)-N-(4-氰基苯基)氨基]-4H-1，2，4-三唑)等等。
如果作為固定劑量配制，這種組合產(chǎn)品以如下所述劑量使用δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇并以許可劑量范圍使用其它藥學上可接受的活性試劑。當組合劑型不合適時，本發(fā)明化合物還可以備選地與已知藥學上可接受的藥物連續(xù)使用。
關(guān)于本發(fā)明化合物的術(shù)語“給藥”以及其變體(例如“給藥”化合物)指的是將化合物或其前藥引入到需要治療的動物體系中。當本發(fā)明化合物或其前藥與一種或多種其它活性藥物(例如二膦酸鹽等)組合提供時，“給藥”以及其變化分別理解為包括同時或連續(xù)給藥化合物或其前藥以及其它藥物。本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的前藥。通常，這種前藥為本發(fā)明化合物的功能衍生物，其在體內(nèi)可容易轉(zhuǎn)化為所需化合物。因此在本發(fā)明治療方法中，術(shù)語“給藥”將包括使用明確公開的化合物，或雖然沒有明確公開但在給藥到患者后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為指定化合物的化合物的多種治療情況。合適的前藥衍生物的選擇和配制的常規(guī)方法已經(jīng)公開在例如″Design of Prodrugs，″ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中，以其全文引用于此作為參考。這些化合物的代謝物包括在將本發(fā)明化合物引入到生物學環(huán)境時產(chǎn)生的活性中心。
本發(fā)明還包括可用于治療骨質(zhì)疏松或其它骨疾病的藥物組合物，包括在有或沒有藥學上可接受的載體或稀釋劑的情況下給藥治療有效量的δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇。本發(fā)明合適的組合物包括含有δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇和藥學上可接受的載體的水溶液，合適的載體例如pH例如7.4的鹽水。所述溶液可通過局部彈丸注射引入到患者血液。
當本發(fā)明化合物給藥到受試的人時，處方醫(yī)師通常根據(jù)年齡、體重、各個患者的反應(yīng)以及患者癥狀的嚴重程度確定日劑量。
在一個示范性應(yīng)用中，合適量的化合物給藥到進行治療的哺乳動物中。在用于所示作用時，本發(fā)明的口服劑量將在約0.01毫克/千克體重/天(毫克/千克/天)到約100毫克/千克/天之間變化，優(yōu)選0.01-10毫克/千克/天，并且最優(yōu)選0.1-5.0毫克/千克/分鐘。對于口服給藥，組合物優(yōu)選以含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0、50.0、100和500毫克活性組分的片劑形式提供，根據(jù)癥狀調(diào)整給予治療患者的劑量。藥物一般含有約0.01毫克至約500毫克的活性組分，優(yōu)選約1毫克至約100毫克的活性組分。對于靜脈內(nèi)途徑，在連續(xù)輸液期間，最優(yōu)選的劑量范圍為約0.1至約10毫克/千克/分鐘。有利地，δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇可每天給藥一次，或者每日總劑量可分成每日兩次、三次或四次。此外，δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇可以通過局部使用適合的鼻內(nèi)賦形劑以鼻內(nèi)形式給藥，或者使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的透皮貼劑形式通過透皮途徑給藥。為以透皮釋放體系形式給藥，整個給藥方案中應(yīng)持續(xù)給藥，而非間歇給藥。
δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇可以與其它可用于治療雌激素-介導的病況的藥物組合使用。這種組合的各個組分可在治療期間的不同時期分別給藥，或者以分離或單一組合形式同時給藥。本發(fā)明因此將理解為包括所有這些同時或交替治療的方案，并應(yīng)相應(yīng)地解釋術(shù)語“給藥”。應(yīng)當清楚，δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇與其它可用于治療組織蛋白酶-介導的病況的藥物的組合通常包括與可用于治療與雌激素功能相關(guān)病癥的任意藥物組合物的任意組合。
本發(fā)明范圍因此包括與選自下組的第二藥物的組合使用δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇有機二膦酸鹽、組織蛋白酶K抑制劑、雌激素、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細胞合成代謝劑、降血鈣素、維生素D、合成維生素D類似物、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、芳香化酶抑制劑；以及藥學上可接受的鹽或其混合物。本發(fā)明這些其它方面將根據(jù)此處的教導更加明顯。
定義如本文所用，術(shù)語“組合物”意在包括包含特定量特定成分的產(chǎn)品，以及直接或間接地由特定量的特定成分組合所得的任何產(chǎn)品。
此處使用的術(shù)語“治療有效量”指的是研究人員、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所追求的在組織、體系、動物或人中產(chǎn)生生物學或醫(yī)學響應(yīng)的活性化合物或藥物的量。
此處使用的術(shù)語疾病的“治療”包括疾病的預防，即在可能暴露于或易感染某種疾病卻沒有經(jīng)歷或顯示疾病的癥狀的哺乳動物中使疾病的臨床癥狀不再發(fā)展；疾病的抑制，即阻止或減少疾病或其臨床癥狀的發(fā)展；疾病的減輕，即，使疾病或其臨床癥狀退化。
此處使用的術(shù)語“骨再吸收”是指破骨細胞降解骨的過程。
使用δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇的劑量方案根據(jù)多種因素進行選擇，這些因素包括患者的種類、種族、年齡、體重、性別和醫(yī)學情況；所治療的適應(yīng)癥的嚴重程度；給藥途徑；患者的腎和肝功；以及使用的具體化合物或其鹽。普通專業(yè)醫(yī)師、獸醫(yī)或臨床醫(yī)師可方便地確定和開處方給出預防、治療或抑制適應(yīng)癥發(fā)展的有效量的藥物。
在本發(fā)明方法中，此處詳述的δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇可形成活性組分，并通常與合適的藥物稀釋劑、賦形劑或載體(此處共同相當于“載體”材料)混合給藥，這些藥物稀釋劑、賦形劑或載體根據(jù)預期給藥形式和常規(guī)藥物實踐合適的選擇，給藥形式例如口服片劑、膠囊、酏劑、糖漿等等。本發(fā)明化合物可商購或者根據(jù)本領(lǐng)域公知的程序制備。
試驗雌激素受體結(jié)合測定將雌激素受體配體結(jié)合測定設(shè)計為使用氚代雌二醇和重組表達的雌激素受體的閃爍親近測定法。在bacculoviral表達系統(tǒng)中制備全長的重組人ER-α和ER-β蛋白。ER-α或ER-β提取物用含6mMα-一硫代甘油(monothiolglycerol)的磷酸鹽緩沖鹽水以1∶400稀釋。將每份200μL的稀釋的受體制品加到96孔Flashplate的每個孔中。將培養(yǎng)板用SaranWrap覆蓋并在4℃下保溫過夜。
第二天早晨，將每份20μl含10％牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖鹽水加到96孔培養(yǎng)板的每個孔中，使之在4℃保溫2小時。然后，培養(yǎng)板用200μl緩沖液洗滌，該緩沖液中含20mM Tris(pH7.2)、1mMEDTA、10％甘油、50mM KCl和6mMα-一硫代甘油。為在這些受體包被的培養(yǎng)板中進行測定，往96孔培養(yǎng)板的每個孔中加入178μl的同樣的緩沖液。然后往培養(yǎng)板的每個孔中加入20μl 10nM3H-雌二醇溶液。
在0.01nM至1000nM濃度范圍內(nèi)評價測試化合物。以測試所需終濃度的100倍用100％DMSO制備試驗化合物的儲備溶液。96孔培養(yǎng)板的測試孔中的DMSO的量應(yīng)不超過1％。最終加到測定培養(yǎng)板中的是2μl等份的用100％DMSO補足的測試化合物。密封培養(yǎng)板并使其在室溫下平衡3小時。在為計數(shù)96孔培養(yǎng)板安裝的閃爍掃描計數(shù)器中對培養(yǎng)板計數(shù)。
實施例1-3化合物在IC50＝75至大于10000納米的范圍內(nèi)對雌激素受體α-亞型顯示結(jié)合親合力，并且在IC50＝5-250納米的范圍內(nèi)對雌激素受體β-亞型顯示結(jié)合親合力。
小鼠強迫游泳實驗重量為20-25g的雄性Swiss Webster小鼠(Bantin and Kingman，Hull，UK)以9只分組居住在濕度和溫度受控的房間中，自由進食食物和水。它們維持在12小時光照/黑暗循環(huán)，在0700時刻光照，并且允許動物在使用前馴化至少三天。所有程序根據(jù)UK Animals(ScientificProcedures)Act(1986)和其相關(guān)指導進行。
通過將小鼠置于含深度14cm的水(24-25℃)的玻璃圓筒(高度＝25cm；直徑10cm)中進行測試。在1分鐘時間箱(bins)中記錄動物試圖逃跑、不動和繞管運動(游泳)的時間5分鐘。
ERβ選擇性激動劑溶解于麻油中。試驗前30分鐘SC注射體積為10mL/kg的試驗化合物。在強迫游泳試驗中減少不動性的試驗化合物有可能治療抑郁。
鼠類大腦孕酮受體(PR)ICC試驗動物給藥和組織收集雌性小鼠(12-16周齡)由售主(C57BL/6s，來自Charles River)切除卵巢且一周后裝運。動物在達到Merch動物設(shè)施時進食無大豆嚙齒類食物，在此用額外的一周來適應(yīng)新環(huán)境。小鼠在早晨口服(每日一次，持續(xù)3日)0.2cc賦形劑(20％乙醇∶30％聚乙二醇∶50％水)或者化合物(0.1-30mpk，用于劑量曲線；10mpk，用于單一劑量試驗)；皮下給藥麻油(0.1cc)中的0.2mpk雌二醇17-β。在最后一次給藥約24小時之后，用氯胺酮/賽拉嗪深度麻醉動物，并且經(jīng)心(transcardially)灌注50ml的3.5％丙烯醛和2％多聚甲醛的0.1M磷酸鈉緩沖液(PB)，pH7.4。立即除去大腦并且置于冰冷的0.1M PB且在4C儲存過夜。在0.1M PB中在振動切片機上以40μm切割大腦，轉(zhuǎn)移到冷凍保護劑(0.1M PB中30％蔗糖；30％乙二醇，pH7.4)且儲存在-20℃，直到加工用于免疫細胞化學。
免疫化學在冷的0.1M磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH7.4)中洗滌自由漂浮的40μm切片，以徹底除去冷凍保護劑。為確保通過動物的免疫標記一致，采用篩底24孔組織夾持器和含緩沖液的合適的固體有機玻璃盤進行試驗。因此，所有切片在整個試驗期間在相同溶液/條件下共同培養(yǎng)。為阻止在丙烯醛-固定組織中的非特異性染色，切片在PBS中1％硼氫化鈉(NaBH4)中洗滌30分鐘，且用PBS漂洗8-10次。通過在PBS中的0.3％過氧化氫和10％甲醇中洗滌組織15分鐘，抑制內(nèi)源性過氧化酶活性。切片在PBS中洗滌，且在1)PBS中2％正常山羊血清，用0.05％Triton X-100(PBST)阻滯1小時，或者2)mouse-on-mouse Ig阻滯劑(載體)阻滯1小時，隨后小鼠蛋白濃縮物(載體)阻滯30分鐘。切片在稀釋到1％正常血清的阻滯緩沖液中由PR抗體在RT培養(yǎng)一夜，且在4C培養(yǎng)一夜，或者在4C培養(yǎng)3夜。采用三種抗體，其中兩種識別兩種PR異構(gòu)型1)兔多克隆[DAKO，1∶2500]；2)小鼠單克隆[親合力生物試劑，1∶700]；3)兔單克隆[Lab Vision，SP2克隆“備用”稀釋到1∶400]；我們目前采用SP2。負控制切片在緩沖液中培養(yǎng)，沒有初次抗體。
在初次抗體培養(yǎng)之后，在PBS中洗滌切片且在PBS中生物素化的抗合適物種的二次抗體(IgG)(用于多克隆[1∶600]的抗兔或用于單克隆[1∶250]的抗鼠，均來自Vector Laboratories，Burlingame，CA)和阻滯劑中暴露1小時。在數(shù)次PBS洗滌之后，切片暴露于PBS中的卵白素-生物素絡(luò)合物(ABC Elite kit，Vector Laboratories)30分鐘。切片在PBS中洗滌，隨后用0.175M醋酸鈉緩沖液(pH 7.0；Sigma，St.Louis，MO)洗滌。通過暴露切片到底物3，3’-二氨基聯(lián)苯胺四氯化物(DAB)、硫酸鎳和過氧化氫的0.175M醋酸鈉緩沖液3分鐘以進行生色反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物看上去是深藍-黑色點狀色斑，主要在細胞核中。在一次醋酸鈉緩沖液漂洗和數(shù)次PBS洗滌之后，將切片固定到0.05M PB中凝膠涂覆的玻片上，空氣干燥過夜，在上升的乙醇濃度中脫水，在二甲苯中清潔，用DPX固定介質(zhì)蓋住(cover-slipped)。
分析最初檢查所有玻片的組織學質(zhì)量；任何表現(xiàn)出不好的組織學的大腦在抓圖和分析之前被除去。從各大腦中選出4塊代表背縫神經(jīng)核嘴部至尾部范圍的切片。在Nikon E-800 Microscope下從各切片識別到背縫神經(jīng)核的腹內(nèi)側(cè)部分(含有最高密度的類固醇受體-表達5-羥色胺神經(jīng)元的區(qū)域)。該視區(qū)由Nikon數(shù)碼相機(成像軟件(ACT-1))以200倍放大倍數(shù)捕獲，并且儲存到PC。表現(xiàn)出明顯PR-免疫活性的細胞數(shù)被人工通過手持式細胞計數(shù)器量化，或通過指導ImageProPlus軟件的Visual Basic程序(由Anil Tarachandani和發(fā)明人設(shè)計)量化。從所有組的平均細胞數(shù)減去賦形劑(負控制)組的平均細胞數(shù)，該數(shù)據(jù)表達為“雌激素激動百分比(正控制)”。
針對PR-免疫活性細胞觀察通過各大腦的海馬切片。在該大腦區(qū)域，PR基因完全由ER-α調(diào)節(jié)；在經(jīng)賦形劑處理的動物中，完全沒有PR免疫標簽，而雌激素處理的小鼠表現(xiàn)出明顯的核PR染色。以從“-”(缺乏染色)直到“+++”(表示具有黑色、明顯核PR-免疫活性的細胞)的定性方法報導這一結(jié)果。
鼠脊TPHI TaqMan試驗動物和治療組雌性小鼠(13-16周齡)被切除卵巢(C57/B16，來自CharlesRiver)。給動物進食無大豆嚙齒類食物，允許最少1周的時間從手術(shù)中恢復并且裝運。小鼠在早晨皮下給藥(每日一次，持續(xù)4日)0.1cc賦形劑(麻油)或者化合物(如所示3，10，或20mpk)。在第四次給藥約6小時之后，用氯胺酮/賽拉嗪深度麻醉小鼠，并且從頭顱取出大腦，將小鼠大腦區(qū)域中腹部側(cè)上部置于冰上，將冰冷的剃刀以1mm間隔插入該區(qū)。下丘腦尾部用作放置第一剃刀刀片的解剖標記物，將4塊刀片放置在尾部連續(xù)槽中。檢查4塊切片并且包含了中縫背核最大部分的兩塊置于含有RNA-later的試管中并且在4℃放置過夜。24小時后從RNALater除去大腦切片并在新鮮管中于-80℃儲存。
鼠TPH TaqMan引物和探針序列鼠TPH1正向引物命名為mTPH-874F，其相應(yīng)序列是5′-CAC AGTTCA GAT CCC CTC TAC ACT-3’且其跨過核苷酸874至897。鼠TPH1反向引物名為mTPH-962R，其相應(yīng)序列是5′-GCA AAA CTG GGTTCA GCC AA-3′，且其跨過核苷酸943至962。鼠TPH1探針名為mTPH-926T，其相應(yīng)序列是5′-AGG AGT TCA TGG CAG GTG TCTGGC TCT-3′，且其跨過核苷酸900至926。鼠TPH1基因庫登記號J04758用于設(shè)計這些引物和探針從而核苷酸編號基于該序列。
從用于TaqMan分析的鼠脊切片分離總RNA切片從-80℃除去并且置于FastPrep加工試管中的1.0ml TRIzol試劑中。在FastPrep120均化器中采用具有珠?；|(zhì)的Lysing MatrixD試管在6檔(setting 6)一次性均化切片30s，隨后在加工所有樣品之后在6檔20s。樣品在室溫放置5分鐘以允許核蛋白絡(luò)合物的完全離解，隨后于4℃在12000×g離心5分鐘。將勻漿轉(zhuǎn)移到1.5ml微量離心管并且加入100μl BCP(溴-3-氯丙烷)，旋流樣品15秒，在室溫放置2-3分鐘。樣品于4℃在12000×g離心15分鐘。除去含水層并且置于1.5ml的新的無RNA酶無菌微量離心管。向各樣品加入5μl的5mg/ml糖原，旋流樣品。向各樣品加入500μl異丙醇，將樣品旋流15秒，在室溫放置10分鐘，隨后在4℃在12000×g離心15分鐘。潷出上清液，用500μl冰冷的75％乙醇洗滌球粒。樣品在4℃在12000×g離心15分鐘，潷出乙醇并且空氣干燥球粒10分鐘。將球粒再次懸浮于30μl預溫熱的RNASecure(60℃)，且樣品在60℃加熱10分鐘。樣品儲存在-80℃，直到DNA酶處理和cDNA合成。
通過用于Taqman分析的wt鼠脊薄片總RNA的DNA酶處理和cDNA制備采用無DNA試劑盒(Ambion)進行DNA酶處理。
將5μg的總RNA樣品等分到96孔板的各孔。將1倍DNA酶I溶液加入各樣品(DNA酶I緩沖液，DNA酶I，H2O)?；旌头磻?yīng)并且在37℃培養(yǎng)30分鐘。通過加入DNA酶滅活試劑珠滅活反應(yīng)，在室溫充分混和3分鐘并且在4℃以2500 RPM離心1分鐘(進行25μl反應(yīng)并且通過滅活試劑的1/10體積滅活)。
反轉(zhuǎn)錄將10μl的DNA酶I處理的總RNA加入40μl的1X反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合物(DEPC H2O，RT緩沖液，MgCl2，dNTP混合物，無規(guī)六聚體、RNA酶抑制劑、和MultiScribe RT)，并且在25℃培養(yǎng)10分鐘，在48℃培養(yǎng)30分鐘，在95℃培養(yǎng)5分鐘。通過加入EDTA停止反轉(zhuǎn)錄。將樣品轉(zhuǎn)移到儲存板且在-20℃儲存。
Taqman分析脊薄片cDNA以確定鼠TPH mRNA的相對水平將2.5μl的cDNA與22.5μl的TaqMan反應(yīng)混合物(IXUniversal Master Mix(ABI)，20nM正向和反向18S rRNA控制引物，和100nM 18S rRNA控制探針和300nM mTPHl-874F與mTPHl-962R引物，200nM mTPHl-926T探針加入各96孔板。樣品在ABIPRISMO7700 Sequence Detection Instrument(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)上測試，收集的數(shù)據(jù)通過Merck BiometricsTaqManPlus program分析。
藥物組合物作為本發(fā)明的具體實施方案，100mgδ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇與粉碎得足夠細的乳糖一起配制，得到總量為580-590mg，將其填充到0號硬明膠膠囊中。
權(quán)利要求
1.一種通過向該哺乳動物給藥治療有效量的δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇治療有需要的哺乳動物中的疾病的方法，其中所述疾病是骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、高血壓、視網(wǎng)膜變性、認知功能損害、阿爾茨海默病、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、焦慮、由雌激素不足引起的抑郁、炎癥、炎癥性腸病、性功能失調(diào)、或雌激素依賴性癌癥。
2.一種藥物組合物，包含δ-5-雄烯-3-β-17-β-二醇和另一種選自以下的藥物有機二膦酸酯；組織蛋白酶K抑制劑、雌激素、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細胞合成代謝劑、降血鈣素、維生素D、合成維生素D類似物、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、芳香化酶抑制劑，或其藥學上可接受的鹽或其混合物。
3.權(quán)利要求1的方法，還包括另一種選自以下的藥物有機二膦酸酯；組織蛋白酶K抑制劑、雌激素、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細胞合成代謝劑、降血鈣素、維生素D、合成維生素D類似物、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑、芳香化酶抑制劑，或其藥學上可接受的鹽或其混合物。
4.權(quán)利要求3的方法，其中該疾病是熱潮紅。
5.權(quán)利要求3的方法，其中該疾病是抑郁。
6.權(quán)利要求5的方法，其中該藥物是選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑。
7.權(quán)利要求3的方法，其中該藥物是有機二膦酸酯。
8.權(quán)利要求7的方法，其中該有機二膦酸酯是阿侖膦酸鹽。
9.權(quán)利要求3的方法，其中該藥物是HMG-CoA還原酶的抑制劑。
10.權(quán)利要求9的方法，其中該HMG-CoA還原酶的抑制劑是辛伐他汀。
全文摘要
本發(fā)明涉及化合物及其衍生物、其合成，以及其作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用。本發(fā)明化合物為雌激素受體的配體并因此可用于治療或預防多種與雌激素功能相關(guān)的適應(yīng)癥，包括骨損失、骨折、骨質(zhì)疏松、轉(zhuǎn)移性骨疾病、佩吉特氏疾病、牙周病、軟骨變性、子宮內(nèi)膜異位、子宮纖維性疾病、熱潮紅、LDL膽固醇水平升高、心血管疾病、認知功能損害、腦變性疾病、再狹窄、男子乳腺發(fā)育、血管平滑肌細胞增殖、肥胖、失禁、炎癥、炎癥性腸病、性別功能失調(diào)、高血壓、視網(wǎng)膜變性，和癌癥，尤其是乳腺癌、子宮癌和前列腺癌。
文檔編號A61K31/56GK1997374SQ200580020871
公開日2007年7月11日 申請日期2005年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月23日
發(fā)明者S·E·阿爾韋斯, J·克拉克, S·P·羅雷爾 申請人:默克公司