專利名稱：經(jīng)取代的5,12－二吖－苯幷蔥類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般而言是，關(guān)于具有有用的藥理性質(zhì)的經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物。本發(fā)明進一步使用此等化合物于治療辣椒素受體活化相關(guān)的情況、于鑒定其它辣椒素受體結(jié)合化學物、及作為辣椒素受體檢測及定位的探針。
背景技術(shù)：
疼痛感覺，或者痛覺(nociception)，是經(jīng)一群特別化感覺神經(jīng)元的周邊終端所調(diào)節(jié)，稱之″疼痛受體″。種種不同物理及化學刺激引起如此神經(jīng)元于哺乳動物的活性化，得到潛伏性傷害刺激因子的認知。然而，不適當或者過度活化疼痛受體，可導致使人衰弱的急性或者慢性疼痛。
神經(jīng)病變疼痛牽涉于刺激因子不存在時的疼痛信號傳遞，及典型地導因于神經(jīng)系統(tǒng)的傷害。大部分例子，如此疼痛被認為由于隨著先前周邊系統(tǒng)的傷害周邊及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的敏感化而發(fā)生(如，經(jīng)由直接傷害或全身性疾病)。神經(jīng)病變疼痛典型地是燒傷，槍傷及其無可挽回的強度及有時可因先前傷害或疾病過程引發(fā)使人更加衰弱。
現(xiàn)行神經(jīng)病變疼痛治療非常無效。鴉片，例如嗎啡，是強力止痛劑，但由于其不良副作用而使其適用性受限，例如生理成癮及戒斷特性，以及呼吸抑制、情緒改變、及減低腸管蠕動伴隨便秘、惡心、嘔吐，及內(nèi)分泌及自主神經(jīng)系統(tǒng)的改變。此外，神經(jīng)病變疼痛于傳統(tǒng)鴉片止痛劑療法是經(jīng)常性無反應或者僅部分反應。使用N-甲基-D-天冬胺酸拮抗劑氯胺酮或者α(2)-腎上腺素促效劑可樂寧(clonidine)治療可減緩急性或者慢性疼痛，及容許減少鴉片的消耗，但是由于其副作用此類制劑是經(jīng)常難以忍受。
使用典型辣椒素治療法治療慢性及急性疼痛，包括神經(jīng)病變疼痛。辣椒素是辣味物質(zhì)由Solanaceae族植物衍生而出(包括辣椒chili peppers)及顯示選擇性作用于小管徑傳入神經(jīng)纖維(A-delta及C纖維)其據(jù)信以調(diào)節(jié)疼痛。反應于辣椒素特征是藉由持續(xù)活化周邊組織的疼痛受體，隨后對于一個或者更多刺激周邊疼痛受體是最終去敏感化。由動物研究中，辣椒素顯示藉由打開鈣及鈉的陽離子選擇信道去觸發(fā)C纖維膜的去極化。
藉由具有共同香草酸類架構(gòu)的辣椒素結(jié)構(gòu)上類似物亦誘發(fā)類似反應。如此類似物之一是樹脂毒素(resiniferatoxin，RTX)，Euphorbia植物的天然產(chǎn)物。術(shù)語香草酸類受體(VR)是描述神經(jīng)元細胞膜辣椒素及相關(guān)刺激性化合物的認知部位。辣椒素反應是藉由另一辣椒素類似物，辣椒素受體拮抗劑(capsazepine)完全地抑制(及導致拮抗性)，及亦藉由非選擇陽離子信道阻斷劑釕紅抑制，釕紅結(jié)合至VR具有不高于中等的親和性(具有Ki值典型地不低于140μM)。
大鼠及人類香草酸類受體由背根神經(jīng)節(jié)細胞克隆。香草酸類受體第一型是鑒定為為人所知的香草酸類受體第1型(VR1)，及術(shù)語″VR1″及″辣椒素受體″是能交互使用在此意指此型的大鼠及/或人類受體，以及哺乳類同類。VR1于疼痛感覺的角色經(jīng)使用欠缺此受體的小鼠確認，其顯示無香草酸類引發(fā)疼痛的行為，及對于熱及發(fā)炎的不良反應。VR1是非選擇性陽離子信道具有打開信道的閥值降低對升高溫度、低pH、及辣椒素受體促效劑的反應。例如，信道一般于溫度高于約45℃打開。辣椒素受體信道的開啟一般而言是隨著藉由受體表達神經(jīng)元及其它鄰近神經(jīng)元釋放發(fā)炎性，增加疼痛反應。藉由辣椒素先前活化之后，辣椒素受體經(jīng)由借著cAMP-依存性蛋白質(zhì)激活酶的磷酸化，迅速進行去敏感化。
因為其于周邊組織去敏感化疼痛受體的能力，VR1促效劑香草酸類化合物作為局部麻醉劑使用。然而，使用促效劑本身可引起燒傷疼痛，其限制此治療用途。近年來，VR1拮抗劑，包括非香草酸類化合物，亦有用于疼痛的治療的報告(參考PCT國際申請公開號碼WO 02/08221，其公開于2002年1月31日，及WO 03/062209，其公開于2003年7月31日)。
因此，化合物與VR1作用，但是并不引發(fā)VR1促效劑香草酸類化合物先前疼痛感覺，意欲可治療慢性及急性疼痛，包括神經(jīng)病理性疼痛。此受體的拮抗劑是特別地可使其治療疼痛，以及例如曝露于催淚瓦斯及其它刺激物，癢及尿道病癥例如尿失禁及膀胱過動癥癥的病癥。本發(fā)明符合此需要，及提供進一步相關(guān)的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物以及其醫(yī)藥上可接受的如此化合物的鹽類如通式I所示 其中，在通式I中V是C(R4)(R5)、NR6、O或S；R4是氫、鹵素、羥基、氰基、氨基，C1-C2烷基或與R5一起形成酮基；R5是氫、C1-C2烷基或與R4一起形成酮基；R6是氫或C1-C2烷基；W、Y及Z是各自獨立地為N或CR1；
R1在每種情況下獨立地選自由氫、鹵素、羥基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵素烷氧基及單-及二-(C1-C6烷基)氨基；R2是(i)氫、鹵素、氰基或-COOH；(ii)C1-C3氨基烷基，其中每個碳原子是經(jīng)由0至2個獨立地選自羥基及C1-C6烷基的取代基所取代；或(iii)如通式所示-Rc-M-A-Ry所示的基團，其中Rc是C0-C3亞烷基，或是聯(lián)合Ry或Rz形成經(jīng)任選取代的4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，及較佳是經(jīng)由0至2個獨立地選自Rb的取代基所取代；M是單共價鍵，O、S、SO2、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、C(＝O)N(Rz)、OC(＝O)N(Rz)、N(Rz)C(＝O)、N(Rz)SO2、SO2N(Rz)或N(Rz)；A是單共價鍵或C1-C8亞烷基經(jīng)由0至3個獨立地選自Rb的取代基所取代；及Ry及Rz，如果存在，是(a)獨立地為氫、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8烷酮、C2-C8烷基醚、4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)、或與Rc一起形成4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，其中每一個Ry及Rz經(jīng)任選取代；每一Ry及Rz較佳是獨立地經(jīng)由0至6個獨立地選自Rb的取代基所取代；或(b)一起形成4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)是經(jīng)任選取代，及較佳是經(jīng)由0至6個獨立地選自Rb的取代基所取代；Ar1是5-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，每一者是經(jīng)任選取代，及較佳是由0至3個獨立地選自如通式LRa所示基團的取代基所取代；
A1、A2、A3及A4獨立地為N或CR3；每一R3是(i)獨立地選自如通式LRa所示的基團；或(ii)與相鄰R3一起形成稠合5-至7-員碳環(huán)或雜環(huán)是經(jīng)任選取代，及較佳是經(jīng)由0至3個獨立地選自如通式LRa所示的基團的取代基所取代；L在每種情況下獨立地選自由單共價鍵，O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m；其中m在每種情況下獨立地選自0、1或2；及Rx在每種情況下獨立地選自氫或C1-C8烷基；Ra在每種情況下獨立地選自(i)氫、鹵素、氰基及硝基；或(ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8鹵代烷基、C2-C8烷基醚、3-至10-員雜環(huán)、單-及二-(C1-C8烷基)氨基或(3-至10-員雜環(huán))C1-C6烷基，每一者是經(jīng)由0至6個獨立地經(jīng)選自Rb的取代基取代；及Rb在每種情況下獨立地選自由(i)羥基、鹵素、氨基、氨基羰基、氰基、硝基、酮基及COOH；及(ii)C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基硫基、C1-C8烷基醚、C1-C8醯基、C3-C8烷酮、C1-C8醯基氧基、C1-C8烷氧基羰基、C1-C8羥基烷基、C1-C8鹵代烷基、C1-C8氰基烷基、苯基C0-C8烷基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷基磺醯基、單-或二-(C1-C8烷基)氨基磺醯基及(5-至7-員雜環(huán))C0-C8烷基，每一者是經(jīng)任選取代。
在特定的方面，如通式I所示的化合物是VR1調(diào)節(jié)物及于辣椒素受體結(jié)合分析顯示不大于1微摩爾(micromolar)，100納摩爾(nanomolar)，50納摩爾，10納摩爾或1納摩爾的Ki及/或于決定辣椒素受體促效劑或拮抗劑活性的分析中具有不大于1微摩爾，100納摩爾，50納摩爾，10納摩爾或1納摩爾EC50或IC50值。
在特定實施例，作為在此描述的VR1調(diào)節(jié)物是VR1拮抗劑及于辣椒素受體活化作用的活體外分析顯示無可檢測的促效劑活性。
在特定的方面，作為在此描述的化合物是標示具有可檢測標記物(如，放射性同位素標記或螢光接合)。
本發(fā)明進一步提供，在其它方面，作為描述在此的醫(yī)藥組成包含至少一種化合物(如，作為提供在此化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽類)與生理學上可容許的載體或賦形劑組合。
在進一步方面，該方法是提供減低細胞辣椒素受體的鈣傳導，包含以描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物治療有效果的量接觸表達辣椒素受體細胞(如，神經(jīng))。如此接觸可以發(fā)生于活體內(nèi)或活體外。
該方法是進一步提供抑制香草酸類配位子結(jié)合至辣椒素受體。在特定方面，抑制于活體外發(fā)生。此方法包含接觸辣椒素受體以描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物，及其足夠的量可檢測地抑制香草酸類配位子結(jié)合至辣椒素受體的病癥。在其它方面，辣椒素受體是在患者內(nèi)。如此方法包含在患者內(nèi)接觸表達辣椒素受體細胞以描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物的足夠的量可檢測地抑制香草酸類配位子結(jié)合至活體外表達克隆辣椒素受體的細胞，從而在患者內(nèi)抑制香草酸類配位子結(jié)合至辣椒素受體。
本發(fā)明進一步提供治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)有反應的患者病癥的方法，包含投予描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物治療有效的量至患者。
在其它方面，是提供治療患者疼痛的方法，包含投予描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物治療有效的量至受苦于疼痛的患者。
該方法是進一步提供于患者治療癢、尿失禁、膀胱過動癥、咳嗽及/或打嗝，包含投予描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物治療有效的量至受苦于一種或更多上述病癥的患者。
本發(fā)明進一步提供于肥胖患者促進體重減輕，包含投予描述在此至少一種VR1調(diào)節(jié)物治療有效的量至肥胖患者的方法。
該方法是進一步提供鑒定結(jié)合至辣椒素受體的藥劑，包含(a)接觸辣椒素受體描述在此標識的VR1調(diào)節(jié)物容許VR1調(diào)節(jié)物結(jié)合至辣椒素受體的狀況下，從而產(chǎn)生結(jié)合標識的VR1調(diào)節(jié)物；(b)檢測對等于結(jié)合量的信號，測試藥劑不存在下標識的VR1調(diào)節(jié)物；(c)接觸結(jié)合標識的VR1調(diào)節(jié)物與測試藥劑；(d)檢測信號對等于結(jié)合標識的VR1調(diào)節(jié)物的量于測試藥劑的存在下；及(e)比較在步驟(b)檢測的信號，檢測于步驟(d)檢測信號的減少。
于進一步方面，本發(fā)明是提供決定于樣品中辣椒素受體存在或不存在的方法，包含(a)接觸樣品與描述在此的VR1調(diào)節(jié)物，容許VR1調(diào)節(jié)物結(jié)合至辣椒素受體的狀況下；及(b)檢測VR1調(diào)節(jié)物結(jié)合于辣椒素受體的程度。
本發(fā)明亦提供包裝的醫(yī)藥制劑，包含(a)描述在此的醫(yī)藥組合物于容器；及(b)說明使用組合物去治療一種或更多種對辣椒素受體調(diào)節(jié)有反應的病癥，例如疼痛、癢、尿失禁、膀胱過動癥、咳嗽、打嗝及/或肥胖。
在另一方面，本發(fā)明是提供制備揭露在此的化合物的方法，包括中間體。
當參考以下詳細的描述之后，此類及本發(fā)明的其它方面將變?yōu)槊髁恕?br> 發(fā)明內(nèi)容的詳細描述如上述，本發(fā)明是提供經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物。此調(diào)節(jié)物可使用于活體外或活體內(nèi)，調(diào)和辣椒素受體活性于種種不同情況。
術(shù)語描述在此的化合物是一般而言使用標準命名?；衔锞哂蟹菍ΨQ中心，應了解(除非特別指定)是包含所有的光學異構(gòu)體及混合物。此外，化合物具有碳-碳雙鍵可以發(fā)生于Z-及E-型，本發(fā)明除非特別指明包括所有化合物的異構(gòu)體型。當化合物存在于種種不同互變異構(gòu)體，揭示化合物是不限于任何特定的互變異構(gòu)體，但是可包含所有互變異構(gòu)體型。描述在此特定化合物是使用包括變異的一般通式所示(如，R2、Ar1、V)。除非特別指定，每一如此如通式中所示的變異是與任何其它變異獨立地定義，及如通式所示發(fā)生一次以上的任何變異是獨立地定義在每種情況下。
在此使用的術(shù)語″經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物″，包含如通式I所示所有化合物，以及提供在此其它通式所示的化合物及其醫(yī)藥上可接受的鹽類。換言之，化合物其核心環(huán)系統(tǒng) 是 或包括一種或更多附加的雜原子(例如
或 )，在此描述的每一者經(jīng)任選取代是特定地包括于5，12-二吖-苯幷蔥類似物的定義中，在特定實施例，以下是較佳的核心構(gòu)造 及 揭示在此的″其醫(yī)藥上可接受的鹽類″的化合物是酸或堿鹽類是一般而言考慮在其技術(shù)領(lǐng)域中至適合使用于接觸人類或動物組織而無過度毒性、刺激、過敏反應，或其它問題或并發(fā)癥。如此鹽類包括礦物質(zhì)及堿性殘基的有機酸鹽類例如胺，以及堿性或酸性殘基的有機鹽類例如羧酸。特定的藥劑鹽類包括，但是不為其所限，酸的鹽類例如鹽酸鹽、磷酸鹽、溴酸鹽、蘋果酸鹽、乙醇酸鹽，反丁烯二酸鹽、硫酸鹽、磺胺酸鹽、對胺苯磺酸鹽、甲酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、乙二磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、硝酸鹽、苯甲酸鹽、2-乙醯氧基苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、硬脂酸鹽、水楊酸鹽、麩胺酸、抗壞血酸鹽、二羥萘酸鹽(pamoic)、琥珀酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽，丙酸鹽、羥基順丁烯二酸、氫碘酸鹽、苯乙酸鹽、烷酸鹽例如乙酸鹽，HOOC-(CH2)n-COOH當n是0至4及等等。相同地，醫(yī)藥上可接受的陽離子包括，但是不為其所限，鈉、鉀、鈣、鋁、鋰及銨。具有普通技術(shù)的技術(shù)人員在其領(lǐng)域中進一步認知在此提供其醫(yī)藥上可接受的鹽類的化合物，包括列示在Remington′s PharmaceuticalSciences，第17版。Mack印刷公司，Easton，PA，1418頁(1985年)。一般而言，醫(yī)藥上可接受的酸或堿鹽類可由包含堿性或酸性架構(gòu)的親代化合物藉由任何傳統(tǒng)化學方法合成。簡要地，此鹽類可藉由反應具有適當?shù)膲A或酸化學計量的此類化合物的游離酸或堿型式于水或于有機溶劑，或于兩者的混合物中制備；一般而言，使用非水溶性媒，例如醚，乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈較佳。
明顯地可如通式I所示的每一化合物，但不需要處方化為水合物，溶劑合物或非共價鍵錯合物。此外，種種不同結(jié)晶型及多型體是本發(fā)明范圍之內(nèi)。亦在此提供如通式I所示化合物的前驅(qū)薬。″前驅(qū)薬″是化合物可能不完全滿足在此提供的化合物結(jié)構(gòu)上需要，但是在活體內(nèi)修飾，隨著投予至患者生成如通式I所示的化合物，或在此提供其它通式所示的化合物。例如，前驅(qū)薬可能在此提供化合物的醯化衍生物。前驅(qū)薬包括化合物其中羥基、氨基或巰基基團是結(jié)合至任何基團，當投予至哺乳類標的物，各別地分解斷裂形成游離羥基、氨基，或巰基基團。前驅(qū)薬例子包括，但是不限于，在此提供的化合物中醇類的乙酸鹽、甲酸鹽、磷酸鹽及苯甲酸鹽衍生物及胺類官能基團。在此提供的化合物的前驅(qū)薬可能藉由修飾存在于化合物的官能基團以此修飾至分解斷裂成為親代化合物的方式制備。
使用在此，術(shù)語″烷基″意指直鏈或支鏈飽和脂肪族烴。烷基基團包括基團具有1至8碳原子(C1-C8烷基)，由1至6個碳原子(C1-C6烷基)及1至4個碳原子(C1-C4烷基)，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、n-丁基、第二-丁基、第三-丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基、環(huán)庚基及降莰基。″C0-C3烷基″意指單共價鍵或C1-C3烷基基團；″C0-C6烷基″意指單共價鍵或C1-C6烷基基團；″C0-C8烷基″意指單共價鍵或C1-C8烷基基團。一些在此的例子，是特定地指出烷基基團取代基。例如，C1-C8羥基烷基意指C1-C8烷基基團具有至少一種-OH取代基。類似地，″C1-C8氰基烷基″意指C1-C8烷基基團具有至少一個CN取代基。代表性支鏈氰基烷基基團是-C(CH3)2CN?！錍1-C3氨基烷基″是C1-C3烷基基團是經(jīng)-NH2架構(gòu)取代。
″亞烷基″意指如上述定義雙鍵烷基基團。C0-C4亞烷基是單共價鍵或具有1至4個碳原子的亞烷基基團；及C0-C3亞烷基是單共價鍵或具有1至3個碳原子(C1-C3亞烷基)的亞烷基基團。
″烯基″意指直鏈或支鏈烯基團，其中存在至少一種非飽和碳-碳雙鍵。烯基基團包括C2-C8烯基、C2-C6烯基及C2-C4烯基基團，其各別地具有2至8、2至6或2至4個碳原子，例如乙烯基、烯丙基或異丙烯基?！迦不逡庵钢辨溁蛑ф溁颦h(huán)狀炔基基團，其具有一種或更多非飽和碳-碳鍵，至少其一是三鍵鍵結(jié)。炔基基團包括C2-C8炔基、C2-C6炔基及C2-C4炔基基團，其各別地具有由2至8、2至6或2至4個碳原子。
″環(huán)烷基″是基團包含其所有環(huán)成員是碳的一種或更多飽和及/或部分飽和環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、金剛烷基、十氫-萘基、八氫-基，及任何上述部分飽和的變異，例如環(huán)己烯基。特定環(huán)烷基基團是C3-C7環(huán)烷基，其環(huán)包括3至7環(huán)成員。
使用在此″烷氧基″，意味上述描述的烷基基團，經(jīng)由氧橋連接。烷氧基基團包括C1-C6烷氧基及C1-C4烷氧基基團，其各別地具有由1至6或1至4碳原子。甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、n-丁氧基、第二-丁氧基、第三-丁氧基、n-戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、及3-甲基戊氧基是特定的烷氧基基團。類似地，上述描述″烷基硫基″意指烷基，烯基或炔基基團經(jīng)由硫橋連接。
在此使用術(shù)語″酮基″，意指酮(C＝O)基團。酮基是非芳香族碳原子取代物導致CH2-至-C(＝O)-的轉(zhuǎn)換。
術(shù)語″烷氧基羰基″意指烷氧基基團經(jīng)由羰基連結(jié)(如，基團具有一般構(gòu)造-C(＝O)-O-烷基)。烷氧基羰基基團包括C1-C8、C1-C6及C1-C4烷氧基羰基基團，其各別地于基團的具有由1至8、至6或至4個碳原子烷基部分。
術(shù)語″醯基″意指醯基基團于直鏈或支鏈排列(如，-(C＝O)-烷基)。
醯基基團包括C2-C8醯基、C2-C6醯基及C2-C4醯基基團，其各別地具有由2至8，由2至6或由2至4碳原子。術(shù)語″C1-C8醯基″包含″C1醯基″意指-(C＝0)-H，(與C2-C8醯基)。乙醯基是C2醯基。
在此使用的″醯基氧基″，意指醯基基團經(jīng)由氧橋連結(jié)(如，基團具有一般構(gòu)造-O-C(＝O)-烷基)。醯基氧基基團包括C1-C8、C1-C6及C1-C4醯基氧基基團，其于基團各別地具有由1至8、至6或至4個碳原子的烷基部分。
″烷酮″是酮基團其中碳原子是于直鏈或支鏈烷基排列?！錍3-C8烷酮″、″C3-C6烷酮″及″C3-C4烷酮″意指烷酮各別地具有由3至8、至6或至4個碳原子。例如，C3烷酮基團具有-CH2-(C＝O)-CH3的構(gòu)造。
類似地，″烷基醚″意指直鏈或支鏈醚取代基。烷基醚基團包括C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚及C2-C4烷基醚基團，其各別地具有2至8、至6或至4個碳原子。例如，C2烷基醚基團具有-CH2-O-CH3構(gòu)造。
″烷基磺醯基″意指如通式-(SO2)-烷基所示的基團，其中硫原子是連接點。烷基磺醯基基團包括C1-C6烷基磺醯基及C1-C4烷基磺醯基基團，其各別地具有由1至6或1至4個碳原子。甲磺醯基是代表性烷基磺醯基基團。
″氨基磺醯基″意指如通式-(SO2)-NH2所示的基團，其中硫原子是連接點。術(shù)語″單-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基″意指如通式-(SO2)-N(R)2所示的基團，其中硫原子是連接點，及其中R是C1-C6烷基及另一R是氫或獨立地選自C1-C6烷基。
″烷基氨基″意指具有-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的一般構(gòu)造二級或三級胺，其中每一烷基可能相同或相異。如此基團包括，例如，單-及二-(C1-C8烷基)氨基基團，其中每一烷基可能相同或相異及可能包括1至8個碳原子，以及單-及二-(C1-C6烷基)氨基基團及單-及二-(C1-C4烷基)氨基基團。
″烷基氨基烷基″意指烷基氨基基團經(jīng)由烷基基團連結(jié)(即，具有-烷基-NH-烷基或-烷基-N(烷基)(烷基)的一般構(gòu)造的基團)其中每一烷基是獨立地選出。如此基團包括，例如，單-及二-(C1-C8烷基)氨基C1-C8烷基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基C1-C6烷基及單-及二-(C1-C4烷基)氨基C1-C4烷基，其中每一烷基可能相同或相異。″單-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C6烷基″意指單-或二-(C1-C6烷基)氨基基團經(jīng)由單共價鍵或C1-C6亞烷基基團連結(jié)。以下是代表性烷基氨基烷基基團 術(shù)語″氨基羰基″意指醯氨基團(亦即，-(C＝O)NH2)。″單-或二-(C1-C8烷基)氨基羰基″是氨基羰基基團其中一個或兩個氫原子是經(jīng)C1-C8烷基取代。若兩個氫原子是經(jīng)如此取代，C1-C8烷基基團可能相同或相異。
術(shù)語″鹵素″意指氟、氯、溴及碘。
″鹵代烷基″是烷基基團是經(jīng)1或更多個鹵素原子所取代之(即，″C1-C8鹵代烷基″具有由1至8個碳原子的基團；″C1-C6鹵代烷基″具有由1至6個碳原子的基團)。鹵代烷基基團的例子包括，但是并不限于，單-、二-或三-氟甲基；單-、二-或三-氯甲基；單-、二-、三-、四-或五-氟乙基；單-、二-、三-、四-或五-氯乙基；及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型鹵代烷基基團是三氟甲基及二氟甲基。術(shù)語″鹵素烷氧基″意指上述定義鹵代烷基基團經(jīng)由氧橋連接?！錍1-C8鹵素烷氧基″具有1至8個碳原子的基團。
(″-″dash)不在于兩個文字或符號之間是使用于顯示取代基連接點。例如，-CONH2是經(jīng)由碳原子連接。
使用在此的″雜原子″是氧、硫或氮。
″碳環(huán)″或″碳環(huán)基團″包含至少一種環(huán)完全地藉由碳-碳鍵結(jié)合形成(在此意指碳環(huán))，及不包括雜環(huán)。除非特別指定，于碳環(huán)中每一碳環(huán)可能飽和，部分飽和或芳香性。碳環(huán)一般而言具有由1至3個稠合、懸垂或螺環(huán)；碳環(huán)于特定例子中具有一個環(huán)或兩個稠合環(huán)。每一環(huán)典型地包括由3至8個環(huán)成員(即，C3-C8)；4-至10-員碳環(huán)具有1或2個環(huán)，其總數(shù)是由4至10個環(huán)成員。5-至7-員碳環(huán)一般而言具有單環(huán)，有5、6或7環(huán)成員。碳環(huán)包含稠合、懸垂或螺環(huán)典型地包括由9至14環(huán)成員。特定代表性碳環(huán)是上述描述的環(huán)烷基。其它碳環(huán)是芳基(即，包括至少一種芳香族碳環(huán))。如此碳環(huán)包括，例如，苯基、萘基、茀基、氫茚基及1，2，3，4-四氫-萘基。苯基基團經(jīng)由直接結(jié)合連結(jié)或烷基基團可能指名為苯基C0-C8烷基(即，芐基、1-苯基-乙基、1-苯基-丙基及2-苯基-乙基)。
″雜環(huán)″或″雜環(huán)基團″具有由1至3個稠合、懸垂或螺環(huán)，至少其一是雜環(huán)(如，一種或更多的環(huán)原子是雜原子，其余的環(huán)原子是碳)。雜環(huán)典型地包含1，2，3或4個雜原子；于特定實施例中每一環(huán)中具有1或2個雜原子的每一雜環(huán)。每一雜環(huán)一般而言包括由3至8個環(huán)成員(具有4或5至7環(huán)成員的環(huán)揭示于特定實施例)及雜環(huán)包含稠合、懸垂或螺環(huán)典型地包括9至14環(huán)成員。特定雜環(huán)包含硫原子作為環(huán)成員；于特定實施例中，硫原子被氧化至SO或SO2。如同指出的雜環(huán)可能是選擇性經(jīng)種種不同取代基所取代。除非特別指定，雜環(huán)可能是雜環(huán)烷基基團(如，每一環(huán)是飽和或部分飽和)或雜芳基基團(如，至少一種環(huán)其中基團是芳香族)。雜環(huán)基團一般而言可能是經(jīng)由任何環(huán)或取代基原子連結(jié)，提供安定的化合物結(jié)果。
雜環(huán)基團包括，例如，吖環(huán)庚烷基、吖環(huán)辛烷基、苯幷咪唑基、苯幷咪唑啉基、苯幷異噻唑基、苯幷異噁噁唑基、苯幷呋喃基、苯幷硫呋喃基、苯幷惡唑基、苯幷噻唑基、苯幷四唑基、苯并二氫吡喃基、苯并二氫吡喃烯基、辛啉基、十氫喹啉基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃基、二氫異喹啉基、二氫四氫呋喃基、1，4-二噁-8-吖-螺[4.5]癸基、二噻嗪基、呋喃基、呋呫基、咪唑啉基、咪唑啶基、咪唑基、吲唑基、吲哚烯基(indolenyl)、吲哚啉基、中氮吲哚基、吲哚基、異苯幷呋喃基、異苯并二氫吡喃基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異噻唑基、異吖唑基、異喹啉基、嗎啉基、萘啶、八氫異喹啉基、噁二唑基、噁唑啶基、噁唑基、2，3-二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、哌啶基、哌酮基(piperidonyl)、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并咪唑基、吡啶并噁唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啶基、吡咯烷酮基(pyrrolidonyl)、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹噁啉基、喹嚀環(huán)基基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、硫苯基、硫嗎啉基及其中硫原子被氧化的變異、三吖基，及任何上述是經(jīng)上述描述1至4個取代基所取代。
″雜環(huán)C0-C8烷基″是雜環(huán)基團經(jīng)由直接結(jié)合或C1-C8烷基基團連結(jié)。(3-至10-員雜環(huán))C0-C8烷基是雜環(huán)基團具有由3至10環(huán)成員經(jīng)由直接結(jié)合或烷基基團具有由1至8碳原子連結(jié)。(5-至7-員雜環(huán))C0-C8烷基是5-至7-員雜環(huán)經(jīng)由單共價鍵或C1-C8烷基基團連結(jié)。
特定雜環(huán)基團是包括經(jīng)任選取代的1雜環(huán)或2稠合或螺環(huán)的4-至10-員或5-至7-員基團。5-至8-員雜環(huán)烷基基團包括，例如，哌啶基、哌嗪基、吡咯啶基、吖環(huán)庚烷基、N-嗎啉基、硫嗎啉基及1，1-二酮基-硫嗎啉基-4-基。如此基團可能如經(jīng)指出地取代。代表性芳香族雜環(huán)是吖環(huán)辛烷基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、四唑基及3，4-二氫-1H-異喹啉-2-基。
在此使用的″取代基″，意指共價鍵地結(jié)合至有興趣的分子內(nèi)原子的分子架構(gòu)。例如，″環(huán)取代基″可能是，例如鹵素、烷基基團、鹵代烷基基團或在此討論的其它基團的架構(gòu)是共價鍵地結(jié)合至環(huán)成員的原子(較佳是碳或氮原子)。術(shù)語″取代″意指于分子構(gòu)造中經(jīng)上述描述的取代基取代氫原子，不超過鍵結(jié)于指定原子上，及如此導因于取代的化學上安定的化合物(即，可單離、定特征，及測試其生物活性的化合物)。
基團是″經(jīng)任選取代″是非經(jīng)取代的或是經(jīng)其它氫于一種或更多可能位置，典型地于1、2、3、4或5位置，藉由一種或更多適合基團取代(其可能相同或相異)。任選取代亦指出藉由字義″經(jīng)由0至X個取代基取代″其中X是可能取代基最大數(shù)字。特定之經(jīng)任選取代基團是經(jīng)0至2、3或4獨立地選自取代基取代(如，是非經(jīng)取代的或經(jīng)至取代基揭示的最大數(shù)字取代)。
術(shù)語″VR1″及″辣椒素受體″能在此交互使用意指第1型香草酸類受體。除非特別指定，此類術(shù)語包含大鼠及人類VR1受體(如，GenBank存取號碼AF327067，AJ277028及NM_018727；特定人類VR1 cDNAs序列提供于SEQ IDNOs1-3，及氨基酸序列編碼顯示于美國專利號6,482,611的SEQ ID號4及5)，以及發(fā)現(xiàn)于其它物種的相同序列。
″VR1調(diào)節(jié)物″在此亦意指″調(diào)節(jié)物″是化合物調(diào)和VR1活化及/或VR1-中介信號傳導。VR1調(diào)節(jié)物特定地在此提供是如通式I所示的化合物及如通式I所示化合物的醫(yī)藥上可接受的鹽類。VR1調(diào)節(jié)物可能是VR1促效劑或拮抗劑。調(diào)節(jié)物結(jié)合具有″高親和性″若Ki于VR1是少于1微摩爾，較佳是少于100納摩爾，10納摩爾或1納摩爾。決定Ki-于VR1的代表性試驗是在此提供于實施例5。
調(diào)節(jié)物考慮為″拮抗劑″若其可檢測抑制香草酸類配位體結(jié)合至VR1及/或VR1-中介的信號傳導(使用，例如，代表性試驗提供于實施例6)；一般而言，如此拮抗劑抑制VR1活化其具有IC50值少于1微摩爾，較佳是少于100納摩爾，及更較佳是少于10納摩爾或1納摩爾于實施例6提供的試驗中。VR1拮抗劑包括中性拮抗劑及反向促效劑。于特定實施例中，提供在此的辣椒素受體拮抗劑并非香草酸類。
″反向促效劑″VR1是化合物于香草酸類配體不存在下減少VR1活性低于其基礎(chǔ)活性程度。VR1反向促效劑亦可能抑制香草酸類配體活性于VR1，及/或可能亦抑制香草酸類配體結(jié)合至VR1?；衔镆种葡悴菟犷惻潴w結(jié)合至VR1的能力可能藉由結(jié)合分析測量，例如于實施例5中的結(jié)合試驗。VR1的基礎(chǔ)活性，以及由于VR1拮抗劑的存在使VR1活性的減低，可能由鈣移動分析決定，例如實施例6的試驗。
VR1″中性拮抗劑″是化合物抑制香草酸類配體于VR1的活性，但是并不顯著地改變受體的基礎(chǔ)活性(如，于實施例6描述的鈣移動分析，表現(xiàn)于香草酸類配體不存在下，VR1活性是減少不多于10％，較佳是不多于5％，及甚至更佳是不多于2％，最佳是，無可檢測的活性減低)。VR1的中性拮抗劑可能抑制香草酸類配體結(jié)合至VR1。
當在此使用的″辣椒素受體促效劑″或″VR1促效劑″是化合物增加受體活性于受體的基礎(chǔ)活性程度以上(亦即，增加VR1活化及/或VR1-中介信號傳導)。辣椒素受體促效劑活性可能使用實施例6提供的代表性試驗鑒定。一般而言，如此促效劑具有EC50值少于1微摩爾，較佳是少于100納摩爾，及更佳是少于10納摩爾于實施例6中提供的試驗。于特定實施例，在此提供的辣椒素受體促效劑是非香草酸類。
″香草酸類″是辣椒素或任何辣椒素類似物包含具有兩個氧原子的苯基環(huán)其鍵結(jié)于毗鄰環(huán)的碳原子(其一的碳原子是位于結(jié)合于苯環(huán)第三架構(gòu)連接點的對位)。香草酸類是″香草酸類配體″若其結(jié)合至VR1具有不大于10μM的Ki值(在此描述所決定)。香草酸類配體促效劑包括辣椒素、奧伐尼(olvanil)、N-花生醯基多巴胺及樹脂毒素(RTX)。香草酸類促效劑拮抗劑是包括辣椒素受體拮抗劑及碘基樹脂毒素。
″治療有效的量″(或劑量)是，于投予至患者，導致可見的患者益處(如，提供可檢測的治療病癥的舒解)的量。如此舒解可能使用任何適當?shù)幕鶞蕶z測，包括緩解一種或多種癥狀例如疼痛。治療有效的量或劑量一般而言導致體液中化合物的濃度(例如血液、血漿、血清、CSF、滑液、淋巴、細胞間質(zhì)液、眼淚或尿液)是足夠改變活體外香草酸類配體結(jié)合至VR1(使用于實施例5提供的試驗)及/或VR1-中介信號傳導(使用于實施例6提供的試驗)。
″患者″是任何以提供在此的化合物各別治療?；颊甙ㄈ梭w，以及其它動物例如同伴動物(如，狗及貓)及家畜?；颊呖赡芙?jīng)歷響應辣椒素受體調(diào)和的病癥的一種或多種癥狀(如，疼痛、曝露至香草酸類配體、癢、尿失禁、膀胱過動癥、呼吸道疾病、咳嗽及/或打嗝)，或可能無如此癥狀(亦即，治療可能是預防性的)。
經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物如上述，本發(fā)明是提供經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物可能使用于種種不同用途，包括疼痛的治療(如，神經(jīng)病變或周邊神經(jīng)-中介疼痛)；曝露至辣椒素；曝露至酸、熱、光、催淚瓦斯、空氣污染(例如，香煙)，感染性劑(包括病毒、細菌及酵母菌)、胡椒噴劑或相關(guān)制劑；呼吸道病癥例如哮喘或慢性阻塞性肺疾??；搔癢；尿失禁或膀胱過動癥癥；咳嗽或打嗝；及/或肥胖。如此化合物亦可能使用于活體外分析(如，受體活性的試驗)，作為偵測的探針及VR1定位及作為配體結(jié)合及VR1-中介神經(jīng)信號傳導試驗的標準。
提供在此的特定化合物是可檢測調(diào)和辣椒素結(jié)合至VR1于納摩爾(亦即，次微摩爾)濃度，較佳是低于次納摩爾濃度，更佳是于濃度低于100皮摩爾(picomolar)，20皮摩爾，10皮摩爾，或5皮摩爾。如此調(diào)節(jié)物最佳是非香草酸類。特定較佳調(diào)節(jié)物于分析中是具有無可檢測促效劑活性的VR1拮抗劑其描述于實施例6中。較佳VR1調(diào)節(jié)物進一步以高親和性結(jié)合至VR1，及本質(zhì)上并不抑制人類上皮生長因子(EGF)受體酪胺酸激活酶的活性。
Ar1，于如通式I所示特定化合物中，是苯基或5-或6-員芳香族雜環(huán)(如，吡啶基或嘧啶基)，每一者是經(jīng)由0至3取代基獨立地選自經(jīng)如通式LRa所示的基團取代。如上述，L是在每種情況下獨立地選自單一共價鍵、O、C(＝O)(亦即 )、OC(＝O)(亦即 )、C(＝O)O(亦即 )、OC(＝O)O(亦即 )、S(O)m(亦即-S-， 或 )、N(Rx)(亦即 )、(C＝O)N(Rx)(亦即 )、N(Rx)(C＝O)(亦即 ) 、N(Rx)S(O)m(亦即 )、S(O)mN(Rx)(亦即 )及N[S(O)m(Rx)]S(O)m(亦即 )。在特定實施例，Ar1是經(jīng)于鄰位位置至連接點單取代(即，于2-位置若Ar1是經(jīng)苯基取代；于3-位置若Ar1是經(jīng)2-吡啶基取代)。Ar1代表性取代基包括，例如，鹵素(如，氟或氯)、氰基、COOH、C1-C6烷基(如，甲基)、C1-C6鹵代烷基(如，三氟甲基)、C1-C6烷氧基及C1-C6鹵素烷氧基。
如通式I所示，基團示為 一般而言是6-員芳香族碳環(huán)或雜環(huán)，其是選擇性稠合的5-至7-員碳環(huán)或雜環(huán)(即，稠合環(huán)可能包括A1及A2，A2及A3或A3及A4)。如此基團是如上述指出經(jīng)任選取代。如此特定基團中，A1是CH或N；較佳A1是CH。如此代表性基團包括，例如 ，其中R3是如上述描述。于特定實施例，R3是獨立地選自氫、鹵素、氰基、氨基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6醯基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺醯基及單-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基；于如此實施例中進一步，R3是鹵素、氰基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基磺醯基或單-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基。
如通式I所示的變因″V″是，于特定化合物中，C(＝O)，C(H)OH或O。
在此描述的特定R2基團是使用如通式-Rc-M-A-Ry所示。明顯地如通式中所示每一術(shù)語是與其它基團獨立地選擇。M是單共價鍵或聯(lián)結(jié)架構(gòu)包含至少一個雜原子。適合的M基團包括O、S、SO2、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、C(＝O)N(Rz)(如， )、OC(＝O)N(Rz)(如， )、N(Rz)C(＝O)(如， )、N(Rz)SO2(如， )、SO2N(Rz)(如， )及N(Rz)(如， )。于特定實施例中，M是單共價鍵，O、OC(＝O)、C(＝O)O、C(＝O)N(Rz)，N(Rz)C(＝O)或N(C1-C6烷基)，其中C1-C6烷基是選擇性聯(lián)合至Ry形成5-至7-員碳環(huán)或雜環(huán)其是經(jīng)由0至3個取代基獨立地選自Rb所取代。明顯地，于如通式Rc-M-A-Ry所示的基團，若兩個相鄰變異是鍵結(jié)，則兩個變異是一同形成單鍵。例如，若Rc是C0及M及A是兩個單共價鍵，則R2是-Ry。如通式I所示的R2，于特定化合物，是(i)氫或鹵素；或(ii)C1-C6烷基，-(CH2)nNH2，-(CH2)nNH(C1-C8烷基)，-(CH2)nN(C1-C8烷基)2，-(CH2)n(5-至8-員雜環(huán)烷基)，-(CH2)nOH或-(CH2)nO(C1-C6烷基)，其中每一n是0、1、2或3；每一者是經(jīng)由0至4個取代基獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基及C1-C6鹵代烷基所取代。
如此代表性基團包括鹵素、C1-C6烷基、C2-C6烷基醚、單-或二-(C1-C6烷基)氨基甲基、嗎啉基甲基、哌嗪基甲基及哌啶基甲基，每一者是經(jīng)由0至4個取代基獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-及二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基及C1-C6鹵代烷基。如通式I所示的特定化合物進一步滿足通式II [式II]
或是其醫(yī)藥上可接受的鹽類，其中Y、Z及B是獨立地CH或N(于特定實施例中B及/或Z是N及Y是CH)；R5是鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6鹵素烷氧基；A2及A3其中一者是CH而另一是CR3；R3是鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6氰基烷基、C1-C6烷基磺醯基或單-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基；V是C(＝O)、C(H)OH或O；及R2是(i)氫或鹵素；或(ii)C1-C6烷基、-(CH2)nNH2、-(CH2)nNH(C1-C8烷基)、-(CH2)nN(C1-C8烷基)2、-(CH2)n(5-至8-員雜環(huán)烷基)、-(CH2)nOH或-(CH2)nO(C1-C6烷基)，其中每一n是0、1、2或3；每一者是經(jīng)由0至4個取代基獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基及C1-C6鹵代烷基所取代。
于如此特定化合物中，R2是鹵素、C1-C6烷基、C2-C6烷基醚、單-或二-(C1-C6烷基)氨基甲基、嗎啉基甲基、哌嗪基甲基或哌啶基甲基，每一者是經(jīng)由0至4個取代基獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基及C1-C6鹵代烷基所取代。進一步于如此化合物，B是N及R5是甲基、三氟甲基、氟、氯或氰基。
如通式II所示的特定化合物進一步滿足通式III
或是其醫(yī)藥上可接受的鹽類，其中B及Z是獨立地N或CH；R5是鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基；R3a是鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6氰基烷基、C1-C6烷基磺醯基或單-或二-(C1-C6烷基)氨基磺醯基；V是C(＝O)、C(H)OH或O；及R2是如上述描述；較佳R2是鹵素、C1-C6烷基、C2-C6烷基醚、單-或二-(C1-C6烷基)氨基甲基、嗎啉基甲基、哌嗪基甲基或哌啶基甲基，每一者是經(jīng)由0至4個取代基獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-及二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基及C1-C6鹵代烷基。
在此提供的代表性化合物包括，但是不限于，特定地描述于實施例1-3。明顯地在此揭示特定的化合物是僅有代表性，及非意欲限制本發(fā)明的范圍。進一步，如上述，本發(fā)明所有化合物可能存在為游離基或其醫(yī)藥上可接受的鹽類。
在特定的方面，在此提供的經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物可檢測地改變(調(diào)節(jié))VR1活性，使用活體外VR1促效劑結(jié)合試驗及/或功能分析例如鈣移動試驗、背根神經(jīng)節(jié)試驗或活體內(nèi)疼痛舒解試驗來決定。作為如此活性的先期篩選，可能使用VR1配體結(jié)合分析。在此參考″VR1配體結(jié)合試驗″是意指標準活體外受體結(jié)合分析例如于實施例5所提供，及″鈣移動分析″(亦在此意指″信號傳導分析″)可能表現(xiàn)如實施例6的描述。簡要地，檢測至VR1的結(jié)合，競爭性分析可表現(xiàn)于VR1制備是與標記(如，125I或3H)化合物結(jié)合至VR1(如，辣椒素受體促效劑例如RTX)及非標志測試化合物培養(yǎng)。在此提供的試驗，″VR1使用哺乳類VR1較佳，更佳是人類或大鼠VR1。受體可能是重組性地表達或天然性地表達。VR1制備可能是，例如，由重組性地表達人類VR1的HEK293或CHO細胞的膜制劑。與化合物培養(yǎng)可檢測地調(diào)節(jié)香草酸類配體結(jié)合至VR1導致減少或增加結(jié)合于VR1制備的標示量，相對于化合物不存在下的結(jié)合標示量。此減少或增加可能使用決定在此描述的VR1的Ki。一般而言，于如此試驗中較佳減少結(jié)合于VR1制備的標示量的化合物。
如以上所記述，VR1拮抗劑的化合物較佳是于特定實施例中。如此化合物IC50值可使用如實施例6所提供的標準活體外VR1-中介的鈣移動分析決定。簡要而言，細胞表達辣椒素受體與接觸興趣化合物和與細胞內(nèi)鈣濃度的指針(即，膜可穿透性的鈣敏感性染料是可使用例如Fluo-3或Fura-2(二者皆可，例如，得自Molecular Probe，Eugene，OR)，每一者當結(jié)合于鈣離子產(chǎn)生螢光信號)。如此的接觸較佳是藉由包括任一或兩者化合物及標示物于溶液中的一或更多細胞培養(yǎng)于緩沖液或培養(yǎng)基中施行。維持接觸為足夠允許染料進入細胞的時間(即，1至2個小時)。清洗細胞或過濾去除過量染料和然后與香草酸類受體促效劑(即，辣椒素，RTX或，奧伐尼)接觸，典型地以于等同于EC50濃度，并檢測螢光反應。當促效劑接觸細胞與VR1拮抗劑化合物接觸，與于無測試化合物時接觸促效劑的細胞相比較，其螢光反應減少至少20％，較佳地至少50％和更佳地至少80％。在此提供VR1拮抗劑的IC50較佳地是少于1微摩爾，少于100納摩爾，少于10納摩爾或少于1納摩爾。
在其它實施例，較佳是辣椒素受體促效劑化合物。辣椒素受體促效劑活性可能一般如納摩爾實施例6中描述所決定。當細胞與VR1促效劑化合物1微摩爾接觸，螢光反應是當細胞與100nM辣椒素接觸所觀察至少增量30％。在此提供的VR1促效劑EC50較佳地是少于1微摩爾，少于100納摩爾或少于10納摩爾。
VR1調(diào)節(jié)的活性亦可，或可轉(zhuǎn)換地，如在實施例9所提供的使用培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)分析及/或如在實施例10所提供的活體內(nèi)疼痛緩解分析。在此提供的化合物較佳地在此提供的一個或更多功能性試驗中，于VR1活性有統(tǒng)計上顯著特異作用。
在特定實施例中，在此提供的VR1調(diào)節(jié)物并不本質(zhì)地調(diào)節(jié)配體結(jié)合于其它細胞表面受體，例如EGF受體酪胺酸激酶或煙堿乙醯膽堿受體。換言之，如此調(diào)節(jié)物不本質(zhì)地抑制細胞表面受體例如人的表皮成長因子(EGF)受體酪胺酸激活酶或煙堿乙醯膽堿受體的活性(即，IC50或IC40于如此受體較佳是大于1微摩爾，和最佳是大于10微摩爾)。較佳地，調(diào)節(jié)物以濃度0.5微摩爾，1微摩爾或更佳地10微摩爾可檢測地不抑制EGF受體活性或煙堿乙醯膽堿受體活性。決定細胞表面受體活性的試驗是商業(yè)可得的，而包括酪胺酸激酶分析套組可從Panvera購入(Madison，WI)。
在此提供較佳的VR1調(diào)節(jié)物無鎮(zhèn)靜效果。換言之，VR1調(diào)節(jié)物藥量是兩倍于最小的藥量足夠于決定痛覺舒解的動物模型提供止痛(例如模型在此提供于實施例10)只產(chǎn)生暫時(即，沒有持續(xù)多于疼痛緩解持續(xù)時間的一半)或較佳地于鎮(zhèn)靜動物模型分析無統(tǒng)計上顯著地鎮(zhèn)靜(使用方法藉由Fitzgerald等人(1988)Toxicology49(2-3)第433-9頁所描述)。較佳地，是五倍于最小的足夠提供止痛的藥量不產(chǎn)生統(tǒng)計上顯著地鎮(zhèn)靜。更佳地，在此提供的VR1調(diào)節(jié)物不產(chǎn)生鎮(zhèn)靜于少于25mg/kg靜脈內(nèi)藥量(較佳地少于10mg/kg)或于少于140mg/kg口服藥量(較佳地少于50mg/kg，更佳地少于30mg/kg)。
如果需要，在此提供的VR1調(diào)節(jié)物可為特定藥理學性質(zhì)的評估包括，但非限于，口服生體可利用性(較佳的化合物是經(jīng)口服生體可用于容許化合物的治療有效的濃度達到于少于140mg/kg的程度、較佳地少于50mg/kg、更佳地少于30mg/kg、更加較佳地少于10mg/kg、仍然更佳地少于1mg/kg和最佳少于0.1mg/kg的口服藥量)、毒性(較佳的VR1調(diào)節(jié)物是當治療有效的量投予至標的物為無毒性的)、副作用(較佳的VR1調(diào)節(jié)物是當治療有效化合物的量投予至標的物產(chǎn)生的副作用與安慰劑不相上下)、血清蛋白質(zhì)結(jié)合性及于活體外和活體內(nèi)的半衰期(較佳的VR1調(diào)節(jié)物顯示活體內(nèi)半衰期容許一日四次(Q.I.D.)劑型，較佳地一日三次(T.I.D.)劑型，更佳地一日兩次(B.I.D.)劑型，和最佳一日單次劑型)。此外，血腦屏障的有差別的穿透可能是所意的，當總每日口服劑量如上述，從而提供調(diào)節(jié)功能達治療有效范圍，然而用以治療外圍神經(jīng)中介的疼痛的VR1調(diào)節(jié)劑可最佳為低腦中濃度(即，如此藥量不提供化合物的腦濃度(例，腦脊液(CSF))足以顯著地調(diào)節(jié)VR1活性)。習知于相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的一般試驗可用以分析此性質(zhì)，和確認于各別使用中較佳的化合物。例如，使用分析預測生體可利用率包括運輸跨越人的小腸細胞單層，包括Caco-2細胞單層?；衔镌谌搜X障蔽的穿透性可能從給予化合物(即，靜脈內(nèi))在實驗動物的化合物的腦濃度程度預測。血清蛋白質(zhì)結(jié)合性可能從白蛋白結(jié)合試驗預測?；衔锇胨テ谑欠聪虻卣扔诨衔锏慕o藥頻率?；衔锘铙w外半衰期如在此描述于實施例7中可能從微粒體半衰期分析預測。
如以上記述，在此提供的較佳的化合物是無毒性的。一般而言，當在此使用術(shù)語″無毒性″將了解于相對感覺和意欲意指美國食品與藥物管理局(″FDA″)批準的任一種物質(zhì)為投藥在哺乳動物(較佳地是人類)或，跟上所建立的標準，是受于食物與藥物管理局批準的投藥于哺乳動物(較佳是人)的任一種物質(zhì)。此外，高度較佳的無毒性化合物一般滿足一個或更多以下標準(1)不本質(zhì)地抑制細胞的ATP產(chǎn)生；(2)不顯著地延長心臟QT間隔時間；(3)不引起本質(zhì)的肝臟腫大，或(4)不引起肝臟酵素本質(zhì)的釋放。
如本文所使用，不本質(zhì)地抑制細胞ATP產(chǎn)生的化合物是在此滿足在實施例8的化合物標準。換言之，如在實施例8描述細胞以100μM的如此化合物處理顯示的ATP含量是至少50％的檢測于未經(jīng)處理細胞的ATP含量。在高度較佳的實施例，如此細胞顯示的ATP含量是至少80％檢測于未經(jīng)處理細胞的ATP含量。
顯著不延長心臟QT間隔時間的化合物是不導致心臟QT間隔時間(如藉由心電圖決定)統(tǒng)計上顯著地延長，在天竺鼠、迷你豬或狗在劑量投予產(chǎn)生與化合物的EC50或IC50相等的血清濃度。特定較佳的實施例，腸外投予或口服0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg劑量不導致心臟QT間隔時間的統(tǒng)計上顯著地延長。藉由″統(tǒng)計上顯著地″意味結(jié)果變化從對照于p＜0.1程度或更佳地于p＜0.05程度意味著如檢測使用統(tǒng)計意義的標準參數(shù)分析例如student’s Ttest。
化合物不引起本質(zhì)的肝臟腫大，如果實驗室嚙齒目動物(即，小鼠或大鼠)每日以一劑量治療5至10天，此劑量為產(chǎn)生相當在此化合物EC50或IC50的血清濃度，其導致肝臟與體重比率的增量與配對控制組比較是不超過100％。在高度較佳的實施例，如此藥量與配對控制組比較不引起超過75％或50％的肝臟腫大。如果使用非-嚙齒目哺乳動物(即，狗)，如此藥量與未經(jīng)處理的配對控制組比較不應該引起肝臟對體重比率的增量超過50％，較佳地不超過25％，并更佳地不超過10％。于如此分析中較佳的藥量腸外地或口服投予包括0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg。
相同地，化合物不促進肝臟酵素本質(zhì)的釋放如果投予兩倍于產(chǎn)生相當此化合物EC50或IC50血清濃度的最小藥量，與配對的仿真處理(mock-treated)對照組比較不提升于實驗室嚙齒目動物的ALT、LDH或AST的血清程度超過100％。在高度較佳的實施例，與配對的對照組比較，如此藥量不提升血清程度超過75％或50％。可轉(zhuǎn)換地，化合物不促進肝臟酵素本質(zhì)的釋放，如果在活體外肝細胞試驗，濃度(在培養(yǎng)基或在其它溶液其與肝細胞接觸及在活體外培養(yǎng))與相當于化合物EC50或IC50與配對的仿真處理的對照細胞比較不引起任何如此肝臟酵素可檢測的釋放于培養(yǎng)基于基礎(chǔ)線之上的程度。在高度較佳的實施例，當如此化合物濃度五倍，并較佳地十倍化合物的EC50或IC50以上，無任何如此肝臟酵素可檢測的釋放入培養(yǎng)基于基礎(chǔ)線程度以上。
在其它實施例，特定較佳的化合物在相當于化合物的EC50或IC50的濃度不抑制或不引起微粒體細胞色素P450酵素活性，例如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
特定較佳的化合物是非染色體斷裂誘因性(即，如用小鼠紅血球前驅(qū)細胞微小核試驗、艾姆斯微核試驗(Ames micronucleus assay)、螺旋(spiral)微核分析或等等決定)在相等于化合物EC50或IC50的濃度。在其它實施例，特定較佳的VR1調(diào)節(jié)物在此濃度不引起姐妹染色分體交換(例，在中國田鼠卵巢細胞中)。
為檢測目的，較詳細地討論如下，在此提供的VR1調(diào)節(jié)物，可以同位素標記或放射性標記。例如，化合物可能有一個或更多原子藉由相同元素的原子取代具有原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與通常自然界發(fā)現(xiàn)原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同。在此提供化合物同位素的例子可能是存在于包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。此外，與重的同位素取代例如氘(即，2H)可能提供特定治療益處起因于更大的代謝的安定性，例如增加在活體內(nèi)半衰期或減少劑量需求且，因此，可能較佳于若干情況。
經(jīng)取代的5，12-二氮雜-苯幷蔥類似物的制備經(jīng)取代的5，12-二氮雜-苯幷蔥類似物可能一般使用標準合成方法制備。起始材料是商業(yè)可得自供貨商例如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO)，或可能從商業(yè)可得的前驅(qū)體用已建立的方法合成(諸如描述于PCT國際申請公開案第WO 03/062209號的37-51，65-82，106-122和171-187頁，此處包含上述所引的專利參考文獻4-氨基-喹唑啉類似物制備的合成方法的教示)。藉由此例，可能使用類似于顯示在任何以下圖式的合成途徑，與合成方法習知于合成有機化學相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域或藉由同業(yè)者于其技術(shù)領(lǐng)域中認可的變異。在以下圖式每一者變異意指任一個基團符合在此提供的化合物的描述。
在此使用特定定義于圖式中和在別處，是CDCl3氘化氯仿δ 化學位移DMAN，N-二甲基乙醯醯胺EDCI 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺氫氯化物EtOAc 乙酸乙酯EtOH 乙醇1H NMR 氫質(zhì)子核磁共振HPLC 高壓液相層析法Hz 赫茲i-Pr 異丙基i-PrOH 異丙醇KHMDS 鉀貳(三甲基硅烷基)醯胺LCMS 液體層析/質(zhì)量光譜MS 質(zhì)量光譜
Me甲基MeOH 甲醇(M+1) 質(zhì)量+1Ph苯基PhMe 甲苯PPA 多磷酸Pd(PPh3)4肆(三苯基膦)鈀(0)KOt-Bu鉀第三丁基氧化物THF 四氫呋喃TLC 薄層層析法圖式1
圖式2 圖式3
在特定實施例，化合物可能包含一個或更多非對稱的碳原子，以便它可能存在不同的立體異構(gòu)體形式。如此形式可能是，例如，消旋物或光學上活性形式。如以上記述，本發(fā)明包含所有立體異構(gòu)體。仍然，其可是有意獲得單一鏡像異構(gòu)體(即，光學上活性形式)。制備單一鏡像異構(gòu)體的標準方法為包括非對稱的合成和消旋物的離析。消旋物的離析是可藉以下方法完成，例如，由常規(guī)方法例如于離析劑存在結(jié)晶，或?qū)游龇ㄊ褂?，例如對掌性HPLC管柱。
化合物是經(jīng)使用包括至少一原子為放射性同位素的前驅(qū)體進行合成以標記上放射線同位素。各放射性同位素較佳地是碳(即，14C)，氫(例如，3H)、硫(例如，35S)，或碘(例如，125I)。氚標記化合物并可于氚化乙酸中經(jīng)鉑催化交換反應、于氚化三氟乙酸中經(jīng)酸催化交換反應，或以化合物作為受質(zhì)于氚氣體中經(jīng)異質(zhì)催化交換反應而經(jīng)催化以制備。此外，某些前體可于氚氣中參與氚-鹵素交換反應，氚氣還原不飽和鍵，或若合適則以氚硼化鈉還原。標記放射性的化合物制備可便利地由放射性同位素供貨商合成特制客訂的標記放射性的探針化合物。
本發(fā)明亦提供一種醫(yī)藥組合物，其包含一種或多種本文所提供化合物，及至少一種生理上可接受的基劑或賦形劑。醫(yī)藥組合物可包含例如下列一項或多項水、緩沖液(例如中性緩沖生理食鹽水或磷酸鹽緩沖溶液)、乙醇、礦物油、植物油、二甲亞砜、碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露糖醇、蛋白質(zhì)、輔劑、多肽或氨基酸(如甘胺酸)、抗氧化劑、螯合劑(如EDTA)或谷胱甘肽與/或防腐劑。此外，本文所提供的醫(yī)藥組合物中亦可(但不必要)包括其它活性成分。
醫(yī)藥組合物可調(diào)配供任何適當投藥方式使用，包括例如局部、口服、經(jīng)鼻、直腸內(nèi)或非經(jīng)腸式投藥。本文所采用術(shù)語非經(jīng)腸式包括經(jīng)皮下、皮內(nèi)、血管內(nèi)(例如靜脈內(nèi))、肌內(nèi)、脊髓、顱內(nèi)、鞘內(nèi)、與腹腔內(nèi)注射，及任何類似的注射或輸液技術(shù)。某些具體實施例中，以適合口服的組合物較佳。此等組合物包括例如錠劑、糖衣錠、口含錠、水性或油性懸浮液、可勻散的粉劑或粒劑、乳液、硬性或軟性膠囊或糖漿或酏劑。其它具體實施例中，本發(fā)明醫(yī)藥組合物可呈冷凍干燥物調(diào)配。局部投藥用配方可能較適于某些癥狀(例如用于治療皮膚癥狀如燒傷或搔癢)。直接投藥至膀胱的配方(膀胱內(nèi)投藥)可能較適于治療尿失禁與膀胱過動癥。
口服用組合物尚可包含一種或多種成分，如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑與/或防腐劑，以提供吸引人且適口的制劑。錠劑包含活性成分與適合制造錠劑的生理上可接受的賦形劑混合。此等賦形劑包括例如惰性稀釋劑(例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)、制粒劑與崩解劑(例如玉米淀粉或藻酸)、結(jié)合劑(例如淀粉、明膠或阿拉伯膠)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石)。錠劑可以沒有包衣或可依已知技術(shù)包覆包衣，以延緩于胃腸道中崩解與吸收，藉以提供長期的持續(xù)作用。例如可使用時間延遲性物質(zhì)如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
口服用配方亦可呈硬明膠囊，其中由活性成分與惰性固體稀釋劑混合(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)，或呈軟明膠囊，其中活性成分與水或油介質(zhì)(例如花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液包含活性成分(群)混合合適賦形劑制成水性懸浮液，彼等賦形劑包括懸浮劑(例如羧基甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯 咯烷酮、黃耆膠與阿拉伯膠)；與勻散劑或濕化劑(例如天然磷脂如卵磷脂、亞烷基氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物如聚氧伸乙基硬脂酸酯、環(huán)氧乙烷與長鏈脂系醇的縮合產(chǎn)物如十七碳伸乙氧基鯨蠟醇、環(huán)氧乙烷以及衍生自脂肪酸和己糖醇的部份酯的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酐的部份酯的縮合產(chǎn)物如聚伸乙基山梨糖醇酐單油酸酯)。水性懸浮液亦可包含一種或多種防腐劑例如對羥基苯甲酸的乙酯或正丙酯、一種或多種著色劑、一種或多種調(diào)味劑與/或一種或多種甜味劑，如蔗糖或糖精。
油性懸浮液的調(diào)配法可將活性成分(群)懸浮于植物油中(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或于礦物油如液態(tài)石蠟。油性懸浮液可包含稠化劑如蜂蠟、硬性石蠟或鯨蠟醇?？商砑尤缟鲜龅奶鹞秳┡c/或調(diào)味劑，以提供適口的口服制劑。此等懸浮液可添加抗氧化劑如抗壞血酸以防腐。
適合制備水性懸浮液的可勻散性粉劑與粒劑可藉由水的添加，使活性成分與勻散劑或濕化劑、懸浮劑及一種或多種防腐劑混合。合適的勻散劑或濕化劑及懸浮劑實例已如上述。亦可包含其它賦形劑如甜味劑、調(diào)味劑與著色劑。
醫(yī)藥組合物亦可調(diào)配成水包油性(oil-in-water)乳液。油相可為植物油(例如橄欖油或花生油)、礦物油(例如液態(tài)石蠟)或其混合物。合適的乳化劑包括天然膠質(zhì)(例如阿拉伯膠或黃耆膠)、天然磷脂(例如大豆卵磷脂、與衍生自脂肪酸及己糖醇的酯或部份酯)、酸酐(例如山梨糖醇單油酸酯)及衍生自脂肪酸及己糖醇的部份酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如聚氧伸乙基山梨糖醇酐單油酸酯)。乳液亦可包含一種或多種甜味劑與/或一種或多種調(diào)味劑。
糖漿與酏劑可使用甜味劑調(diào)配，如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此等配方亦可包含一種或多種緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑與/或著色劑。
局部投藥用配方典型地包含局部用基劑與活性成分(群)組合，可添加或不添加額外的可任選選用的成分。合適的局部用基劑與其它成分是在此技藝中廣知，且咸了解，其可依特定的物理形式與傳送模式選擇基劑。局部用基劑包括水；有機溶劑如醇類(例如乙醇或異丙醇)或甘油；二醇類(例如丁二醇、異戊間二烯二醇或丙二醇)；脂系醇(例如羊毛脂)；水與有機溶劑的混合物，及有機溶劑的混合物如醇類與甘油混合物；以脂質(zhì)為主的物質(zhì)如脂肪酸、醯基甘油(包括油類如礦物油，與天然或合成的脂肪)、磷酸甘油酯、神經(jīng)鞘脂質(zhì)與蠟類；以蛋白質(zhì)為主的物質(zhì)如膠原與明膠；以聚硅氧為主的物質(zhì)(包括非揮發(fā)性及揮發(fā)性)；與以烴為主的物質(zhì)如微型海綿與聚合物基體。組合物可另包括一種或多種適于改善所施用配方的安定性或有效性的成分，如安定劑、懸浮劑、乳化劑、黏度調(diào)整劑、膠凝劑、防腐劑、抗氧化劑、皮膚滲透強化劑、濕化劑與緩釋材料。此等成分實例說明于Martindale的TheExtra Pharmacopoeia(Pharmaceutical Press，London 1993)與Martin(ed.)，Remington’s Pharmaceutical Sciences。配方可包括微膠囊，如羥甲基纖維素或明膠微膠囊、微脂粒、白蛋白微小球、微乳液、奈米粒子或奈米膠囊。
局部用配方可制成多種物理型式包括，例如固體、糊劑、乳霜、泡沫物、洗液、凝膠、粉劑、水性液體與乳液。此等醫(yī)藥可接受的型式其物理外觀與黏度可經(jīng)配方中所含乳化劑與黏度調(diào)整劑的含量來控制。固體通常堅實，無法傾倒，經(jīng)常調(diào)配成棒狀或桿狀或特別形狀；固體可不透明或透明，其可任選包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強最終產(chǎn)物效力的活性成分。乳霜與洗液通常類似，其差異主要在其黏度；洗液與乳霜二者均可能不透明、半透明或澄清，經(jīng)常包含乳化劑、溶劑與黏度調(diào)整劑，及濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強最終產(chǎn)物效力的活性成分。凝膠可制成多種不同黏度，由濃稠或高黏度至稀薄或低黏度。此等配方如同洗液與乳霜，亦可包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強最終產(chǎn)物效力的活性成分。液體比乳霜、洗液或凝膠稀薄，通常不包含乳化劑。液態(tài)局部產(chǎn)品經(jīng)常包含溶劑、乳化劑、濕化劑、軟化劑、香料、染料/著色劑、防腐劑與其它可提高或加強最終產(chǎn)物效力的活性成分。
適用于局部用配方的乳化劑包括(但不限于)離子性乳化劑、鯨蠟醇、非離子性乳化劑如聚氧伸乙基油基醚、PEG-40硬脂酸酯、鯨蠟硬脂醇醚(ceteareth)-12、鯨蠟硬脂醇醚-20、鯨蠟硬脂醇醚-30、鯨蠟硬脂醇(ceteareth alcohol)、PEG-100硬脂酸酯與硬脂酸甘油酯。合適的黏度調(diào)整劑包括(但不限于)保護性膠體或非離子性膠質(zhì)如羥乙基纖維素、黃耆膠、硅酸鎂鋁、硅石、微晶蠟、蜂蠟、石蠟與棕櫚酸鯨蠟酯。凝膠組合物的形成法可添加膠凝劑如甲殼素(chitosan)、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚季胺鹽(polyquaterniums)、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧聚甲烯(carbomer)或甘草酸銨。合適的界面活性劑包括(但不限于)非離子性、兩性、離子性與陰離子性界面活性劑。局部用配方例如下列一種或多種二甲硅酮共多元醇(dimethiconecopolyol)、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯40、聚山梨酸酯60、聚山梨酸酯80、月桂醯胺DEA、椰子醯胺DEA與椰子醯胺MEA、油基甜菜堿、椰子醯胺丙基磷脂醯基PG-氯化銨(cocamidopropyl phosphatidyl PG-dimonium chioride)、與十二酯硫酸銨。合適的防腐劑包括(但不限于)抗微生物劑如對氧苯甲酸甲酯(methylparaben)、對氧苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸與甲醛，以及物理性安定劑與抗氧化劑如維生素E、抗壞血酸鈉/抗壞血酸與五倍子酸丙酯。合適的濕化劑包括(但不限于)乳酸與其它羥基酸與其鹽類、甘油、丙二醇與丁二醇。合適的軟化劑包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、膽固醇、凡士林、新戊酸異硬脂基酯與礦物油。合適的香料與色素包括(但不限于)FD&C紅色40號與FD&C黃色5號。其它適于局部用配方的額外成分可包含(但不限于)研磨劑、吸收劑、抗結(jié)塊劑、消泡劑、抗靜電劑、收斂劑(例如金縷梅、酒精與藥草萃液如洋甘菊萃液)、結(jié)合劑/賦形劑、緩沖劑、螯合劑、膜形成劑、調(diào)節(jié)劑、推進劑、不透明劑、pH調(diào)整劑與保護劑。
調(diào)配凝膠的合適局部用基劑實例為羥丙基纖維素(2.1％)；70/30異丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；與聚山梨酸酯80(1.9％)。調(diào)配泡沫物的合適局部用基劑實例為鯨蠟醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季銨鹽52(1.0％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95 PGF3(61.05％)；去離子水(30.05％)；P75烴推進劑(4.30％)。所有百分比均以重量計。
傳送局部用組合物的典型方式包括使用手指涂抹；使用物理性涂抹器施用如布、衛(wèi)生紙、拭子、小棒或刷子；噴灑(包括霧、氣霧或泡沫噴灑)；滴藥法；傾注；浸泡；及潤洗。亦可使用控釋基劑。
醫(yī)藥組合物亦可制成無菌的注射用水性或油性懸浮液。依所使用的基劑與濃度而定，本文所提供的化合物(群)可以懸浮或溶解于基劑中。此等組合物可依據(jù)相關(guān)技藝已知的方式，使用如上述的合適勻散劑、濕化劑與/或懸浮劑調(diào)配?？山邮艿幕鶆┡c溶劑中，可使用水、1，3-丁二醇、林格氏溶液與等張性氯化鈉溶液。此外，可使用無菌的固定油類作為溶劑或懸浮介質(zhì)。因此無刺激性的固定油均可使用，包括合成的單-或二酸甘油酯。此外，脂肪酸如油酸見于注射用組合物的制備，而佐劑如局部麻醉劑、防腐劑與/或緩沖劑可溶于基劑中。
調(diào)節(jié)劑亦可調(diào)配成栓劑(例如經(jīng)直腸投藥用)。此等組合物可經(jīng)藥物混合合適的無刺激性賦形劑而制備，此賦形劑于常溫下呈固體但于直腸溫度下卻呈液體，因此可于直腸中融化以釋出藥物。合適的賦形劑包括，例如可可奶油與聚乙二醇。
醫(yī)藥組合物可調(diào)配成緩釋或控釋配方(亦即于投藥后使調(diào)節(jié)劑緩慢釋放的配方)。此等配方通?？梢老嚓P(guān)技藝廣知的方式制備及經(jīng)例如口、直腸或皮下植入物，或植入所需目標位置投予。此等配方中使用的基劑為生物可相容性，且亦可為生物可降解性；較佳的配方可提供相當恒定濃度的調(diào)節(jié)劑釋放。緩釋配方中的調(diào)節(jié)劑含量依，例如植入位置、釋放的速度與所期望的釋放持續(xù)時間及所治療或預防癥狀的性質(zhì)而定。
外加或并用上述投藥法外，調(diào)節(jié)劑亦可加至食物或飲水中(例如供投藥給非人類動物，包括伙伴動物(如狗與貓)與家畜)。動物飼料與飲水組合物的調(diào)配可使動物在進食時同時攝取適量組合物。使組合物呈加至飼料或飲水中的預混合物，亦相當方便。
化合物通常投予醫(yī)療有效量。較佳的全身劑量每日不超過每公斤體重50毫克(例如每日每公斤體重約0.001毫克至約50毫克)，口服劑量通常為高于靜脈內(nèi)投藥劑量的約5至20倍(例如每日每公斤體重0.01至40毫克)。
可與基劑材料組合以產(chǎn)生單一劑量單位的活性成分的量取決于例如所治療患者、特定的投藥模式而變化。劑量單位通常包含約10微克至約500毫克活性成分。最佳劑量可經(jīng)在此技藝中廣知的例行試驗與程序而建立。
醫(yī)藥組合物可包裝用于治療對VR1調(diào)節(jié)作用有反應的癥狀(例如治療曝露至類香草酸配位體或其它刺激物、疼痛、搔癢、肥胖或尿失禁)。包裝的醫(yī)藥組合物可包括容器，內(nèi)裝包含治療有效量的至少一種本文所說明的VR1調(diào)節(jié)劑，及說明書(例如卷標)，說明其中內(nèi)含的組合物是用于治療患者的對VR1調(diào)節(jié)作用有反應的癥狀。
使用方法本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可于活體外與活體內(nèi)，用以改變多方面辣椒素受體的活性與/或活化作用。某些態(tài)樣中，VR1拮抗劑可用在活體外或活體內(nèi)抑制類香草酸配位體促效劑(如辣椒素與/或RTX)與辣椒素受體結(jié)合。一般而言，此等方法包括的步驟為于水溶液中類香草酸配位體的存在下，以及其它適合配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件下辣椒素受體接觸本文所提供一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑。VR1調(diào)節(jié)劑通常其濃度為足以改變類香草酸配位體與VR1于活體外的結(jié)合性(采用實例5的試驗檢測)與/或VR1所介導訊息傳導作用(采用實例6的試驗檢測)。辣椒素受體可呈溶液或懸浮液(例如含于單離的膜或細胞制劑中)，或含于培養(yǎng)或單離的細胞中。某些具體實施例中，辣椒素受體是由患者的神經(jīng)細胞表現(xiàn)，且該水溶液為體液。較佳者，可對動物投予一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑，其投藥量應使動物體內(nèi)至少一種體液所含VR1調(diào)節(jié)劑的治療有效濃度為1微摩爾濃度或以下；較佳為500納摩爾濃度或以下；更佳為100納摩爾濃度或以下，50納摩爾濃度或以下，20納摩爾濃度或以下，或10納摩爾濃度或以下。例如此等化合物的投藥劑量可小于20毫克/公斤體重，較佳為小于5毫克/公斤，于有些實例中，小于1毫克/公斤。
本文亦提供一種調(diào)節(jié)(較佳為降低)細胞辣椒素受體的訊息傳導活性(亦即鈣傳導)的方法。此等調(diào)節(jié)法可經(jīng)于適合調(diào)節(jié)劑(群)與受體結(jié)合的條件下辣椒素受體(活體外或活體內(nèi))接觸一種或多種本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑而達成。VR1調(diào)節(jié)劑(群)的濃度通常足以改變本文所說明的類香草酸配位體與VR1于活體外的結(jié)合性與/或VR1所介導訊息傳導作用。受體可呈溶液或懸浮液，含于培養(yǎng)或單離的細胞制劑或在患者的細胞內(nèi)。例如細胞可為于動物活體內(nèi)接觸的神經(jīng)細胞?；蛘撸毎蔀橛趧游锘铙w內(nèi)接觸的上皮細胞，如尿道膀胱上皮細胞(urothelial cell)或呼吸道上皮細胞。訊息傳導活性的調(diào)節(jié)作用可藉由檢測其對鈣離子傳導性的影響來評估(亦稱為鈣離子移動化或流量)。訊息傳導活性的調(diào)節(jié)作用亦可藉由檢測接受本文所提供一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑治療的患者癥狀的改變來評估(例如疼痛、燒傷感覺、支氣管收縮、發(fā)炎、咳嗽、呃逆、搔癢、尿失禁或膀胱過動癥)。
本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑(群)較佳為經(jīng)口服或局部投予患者(例如人類)，且當調(diào)節(jié)VR1訊息傳導活性時，存在于動物的至少一種體液中。在活體外調(diào)節(jié)VR1訊息傳導活性用在此種方法的較佳VR1調(diào)節(jié)劑濃度為1納摩爾濃度或以下，較佳為100皮摩爾濃度或以下，更佳為20皮摩爾濃度或以下，及在活體內(nèi)體液如血液中的濃度為1微摩爾濃度或以下，500納摩爾濃度或以下，或100納摩爾濃度或以下。
本發(fā)明復提供一種方法以治療對VR1調(diào)節(jié)作用有反應的癥狀。本發(fā)明中，術(shù)語″治療″包括疾病緩和的治療及癥狀處置，其可為預防性(亦即在癥狀發(fā)生之前處理，以預防、延緩或降低癥狀的嚴重性)或治療性(亦即在癥狀發(fā)生后，以降低癥狀的嚴重性與/或持續(xù)時間)。不論類香草酸配位體的局部含量，若癥狀的特征為辣椒素受體活性不當，及/或若辣椒素受體活性的調(diào)節(jié)作用造成癥狀或其癥狀緩解時，則稱該癥狀″對VR1調(diào)節(jié)作用有反應″。此等癥狀包括，例如因暴露至VR1活化性刺激所造成的癥狀、疼痛、呼吸系統(tǒng)疾病如哮喘，慢性阻塞性肺病、搔癢、尿失禁、膀胱過動癥、咳嗽、呃逆與肥胖，于下文中更詳細地說明之。此等癥狀可采用在此技藝已建立的標準診斷及監(jiān)控?；颊呖砂ㄈ祟?、馴化伙伴動物與家畜，其劑量如上述。
治療處方可依所使用的化合物與所治療的特定癥狀而定。然而，治療大多數(shù)疾病時，以每日投藥4次或以下的頻率較佳。通常，以每天投藥2次的給藥方式更佳，以每天單次投藥特別佳。為治療急性疼痛，迅速達到有效濃度的單一劑量為必須。然而咸了解，對任何特定患者的明確劑量與治療處方將取決于多項因素，包括所用的個別化合物的活性、年齡、體重、一般健康情形、性別、飲食、投藥時間、投藥途徑與排泄速度、藥物聯(lián)用與治療期間個別疾病的嚴重性。通常，使用足以提供有效治療的最低劑量較佳。可采用適合所治療或預防癥狀的醫(yī)學或獸醫(yī)學標準監(jiān)控患者的治療效力。
因曝露至辣椒素受體活化性刺激而導致癥狀的患者包括因熱、光、催淚氣體或酸而引起灼傷的個體及黏膜曝露至(例如因食入、吸入或眼睛接觸)辣椒素(例如辣椒或胡椒噴霧)或相關(guān)刺激物如酸、催淚氣體、傳染性制劑或空氣污染的個體。所產(chǎn)生的癥狀(可使用本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑，尤指拮抗劑治療的癥狀)可包括例如疼痛、支氣管收縮與發(fā)炎。
可使用本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑治療的疼痛可為慢性或急性疼痛，包括(但不限于)周邊神經(jīng)所介導的疼痛(尤指神經(jīng)病變性疼痛)。本文所提供化合物可用于治療例如乳房切除手術(shù)后疼痛癥候群、殘肢疼痛、幻肢疼痛、口腔神經(jīng)病變性疼痛、牙齒疼痛(牙痛)、假牙疼痛(denture pain)、疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)病變、反射交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、類風濕關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞(Guillain-Barre)癥候群、感覺異常性股痛(meralgia paresthetica)、口腔燒灼癥候群。其它神經(jīng)病變性疼痛癥狀包括灼熱痛(反射交感神經(jīng)失養(yǎng)癥-RSD、周邊神經(jīng)損傷后的次發(fā)癥狀)、神經(jīng)炎(包括，例如坐骨神經(jīng)炎、周邊神經(jīng)炎、多發(fā)神經(jīng)炎、眼神經(jīng)炎、發(fā)熱后神經(jīng)炎、游走性神經(jīng)炎、節(jié)段神經(jīng)炎與貢博氏(Gombault′s)神經(jīng)炎)、神經(jīng)元炎、神經(jīng)痛(例如如上述的彼等病癥、頸臂神經(jīng)痛、腦神經(jīng)痛、膝神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、偏頭痛神經(jīng)痛、自發(fā)性神經(jīng)痛、肋間神經(jīng)痛、乳房神經(jīng)痛、頜關(guān)節(jié)神經(jīng)痛、莫頓氏(Morton′s)神經(jīng)痛、鼻睫神經(jīng)痛、枕骨神經(jīng)痛、紅神經(jīng)痛、斯盧德氏(Sluder′s)神經(jīng)痛、蝶顎神經(jīng)痛、眶上神經(jīng)痛與翼管神經(jīng)痛)、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉骨骼疼痛、顏面肌肉疼痛、后天性免疫不全癥候群(AIDS)相關(guān)神經(jīng)病變、多發(fā)性硬化癥(MS)的相關(guān)神經(jīng)病變、脊椎損傷的相關(guān)疼痛。頭痛，包括周邊神經(jīng)興奮相關(guān)的疼痛，亦可依本文的說明治療。此等疼痛包括例如，如竇性、叢發(fā)性(亦即偏頭痛性神經(jīng)痛)與緊縮型頭痛。例如當患者出現(xiàn)偏頭痛前的先兆時，立即投予本文所提供的化合物可預防偏頭痛。其它可依本文所說明治療的疼痛癥狀包括口腔燒灼癥候群、沙爾科氏(Charcot′s)疼痛、腸脹氣疼痛、經(jīng)痛、急性與慢性背痛(例如下背疼痛)、痔瘡疼痛、消化不良疼痛、絞痛(angina)、神經(jīng)根疼痛、同位疼痛與異位疼痛-包括癌相關(guān)的疼痛(例如在骨癌患者)、與曝露至毒液有關(guān)的疼痛(與發(fā)炎)(例如因蛇咬傷、蜘蛛咬傷、或昆蟲叮咬)及創(chuàng)傷的相關(guān)疼痛(例如手術(shù)后疼痛、割傷疼痛、挫傷與斷骨，以及燒燙傷疼痛)。其它可依本文所述治療的疼痛癥狀包括發(fā)炎性腸部疾病、腸激躁癥及/或發(fā)炎性腸部疾病。
于某些態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可用于治療機械性疼痛。本文所采用術(shù)語″機械性疼痛″指頭痛以外的疼痛，其不為神經(jīng)病變性或因暴露至熱、冷或外來化學刺激所致。機械性疼痛包括物理性創(chuàng)傷(不為熱或化學燒灼傷及/或其它曝露至有害化學物質(zhì)的疼痛性暴露)如手術(shù)后疼痛及因割傷、挫傷與斷骨引起的疼痛；牙痛、假牙疼痛；神經(jīng)根疼痛；骨關(guān)節(jié)炎；類風濕關(guān)節(jié)炎；纖維肌痛；感覺異常性股痛；背痛；癌相關(guān)的疼痛；絞痛；腕隧道癥候群；及因骨折、分娩、痔瘡、腸部脹氣、消化不良及月經(jīng)引起的疼痛。
可治療的搔癢癥狀包括干癬性搔癢、因血液透析引起的搔癢、水因性(aquagenic)搔癢癥，及與外陰前庭炎有關(guān)的搔癢、接觸性皮膚、昆蟲叮咬與皮膚過敏?？梢辣疚牡恼f明治療的泌尿道疾病包括尿失禁(包括滿溢性尿失禁、急迫性尿失禁及壓力性尿失禁)，與過動性或不穩(wěn)定性膀胱癥狀(包括因脊椎造成逼尿肌過度反射與膀胱過度敏感)。某些此等治療方法中，VR1調(diào)節(jié)劑是經(jīng)由導管或類似裝置投藥，致使VR1調(diào)節(jié)劑直接注射入膀胱中。本文所提供化合物亦可用為止咳劑(預防、緩解或壓制咳嗽)及用為呃逆的治療，及促進肥胖患者體重的減輕。
于其它態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可用在聯(lián)用治療中，供治療涉及發(fā)炎因子的癥狀。此等癥狀包括例如自體免疫病變與已知具有發(fā)炎成分的病理性自體免疫反應，包括(但不限于)關(guān)節(jié)炎(尤指類風濕關(guān)節(jié)炎)、干癬、克隆氏癥(Crohn′sdisease)、紅斑性狼瘡、腸激躁癥、組織移植物排斥與移植器官的超急性排斥。其它此等癥狀包括創(chuàng)傷(例如頭部或脊椎傷傷)、心血管及腦血管疾病與某些傳染性疾病。
此等聯(lián)用療法中，VR1調(diào)節(jié)劑是與抗發(fā)炎劑一起投予患者。VR1調(diào)節(jié)劑與抗發(fā)炎劑可在同一醫(yī)藥組合物中，或可依任一順序分別投藥。抗發(fā)炎劑包括例如非類固醇抗發(fā)炎藥(NSAIDs)、非專一性與環(huán)氧化 -2(COX-2)專一性環(huán)氧化 酵素抑制劑、金化合物、皮質(zhì)類固醇、胺甲蝶呤、腫瘤壞死因子(TNF)受體拮抗劑、抗-TNFα抗體、抗-C5抗體與介白素-1(IL-1)受體拮抗劑。NSAID實例包括(但不限于)布洛芬(ibuprofen)(例如ADVILTM、MOTRINTM)、氟布洛芬(flurbiprofen)(ANSAIDTM)、普生(naproxen)或普生鈉(例如NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、雙氯芬酸(diclofenac)(例如CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、雙氯芬酸鈉與米索前列醇(misoprostol)的組合(例如ARTHROTECTM)、速靈達(sulindac)(CLINORILTM)、噁丙嗪(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟尼柳(diflunisal)(DOLOBIDTM)、炎痛喜康(piroxicam)(FELDENETM)、吲哚美辛(indomethacin)(INDOCINTM)、伊托多雷(etodolac)(LODINETM)、非諾洛芬鈣(fenoprofen calcium)(NALFONTM)、酮洛芬(ketoprofen)(例如ORUDISTM、ORUVAILTM)、丁美酮鈉(sodium nabumetone)(RELAFENTM)、柳氮磺胺嘧啶(sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、托美汀鈉(tolmetin sodium)(TOLECTINTM)、及羥氯喹嚀(hydroxychloroquine)(PLAQUENILTM)。一種特別的NSAID包括抑制環(huán)氧化(COX)酵素的化合物。NSAID尚包括水楊酸鹽如乙醯基水楊酸或阿司匹林、水楊酸鈉、膽堿與水楊酸鎂(TRILISATETM)與水楊醯水楊酸(DISALCIDTM)及皮質(zhì)類固醇如可體松(CORTONETM乙酸鹽)、地塞美松(dexamethasone)(例如DECADRONTM)、甲基氫化潑尼松(methylprednisolone)(MEDROLTM)、氫化潑尼松(PRELONETM)、氫化潑尼松磷酸鈉(PEDIAPREDTM)與潑尼松(例如PREDNICEN-MTM、DELTASONETM、STERAPREDTM)。
此等聯(lián)用療法中，VR1調(diào)節(jié)劑的合適劑量通常如上述。抗發(fā)炎劑的劑量與投藥方法可參見例如制造商于Physician′sDesk Reference中的說明。某些具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗發(fā)炎劑的組合投藥結(jié)果可降低抗發(fā)炎劑要產(chǎn)生醫(yī)療效果時所需劑量，亦即降低最低醫(yī)療有效量。因此，本發(fā)明組合或聯(lián)用投藥法中，抗發(fā)炎劑的劑量最好低于不與VR1拮抗劑聯(lián)用投藥時，制造商所建議的最高抗發(fā)炎劑劑量。此劑量低于不與VR1拮抗劑組合投藥時，制造商所建議的最高抗發(fā)炎劑劑量的3/4時更佳，甚至更佳為低于1/2，極佳為低于1/4，最佳劑量為低于最高劑量的10％。咸了解，組合中VR1拮抗劑成分要達到所需效果時所需劑量同樣會受組合中抗發(fā)炎劑成分劑量與效力影響。
某些較佳具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗發(fā)炎劑的組合投藥法是將一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種抗發(fā)炎劑包裝在同一包裝中，在同一包裝中分裝在不同容器中、或為含有一種或多種VR1拮抗劑與一種或多種抗發(fā)炎劑的混合物裝在同一容器中。較佳混合物是調(diào)配成口服投藥用(例如呈丸劑、膠囊、錠劑，等等)。某些具體實施例中，包裝中包含卷標，說明該一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種抗發(fā)炎劑是用于共同治療發(fā)炎疼痛癥狀。
其它態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可與一種或多種其它解除疼痛的醫(yī)藥組合。某些此等醫(yī)藥亦為上列的抗發(fā)炎劑。其它此等醫(yī)藥為止痛劑，包括典型作用在一種或多種類鴉片受體亞型(例如μ，κ與/或δ)的麻醉劑，較佳為作為促效劑或部份促效劑。此等藥劑包括鴉片制劑、鴉片制劑衍生物與類鴉片劑，及其醫(yī)藥上可接受的鹽與水合物。較佳具體實施例中，麻醉-止痛劑的明確實例包括阿芬他泥(alfentanyl)、阿法普魯汀(alphaprodine)、阿尼利定(anileridine)、貝齊醯胺(bezitramide)、丁丙諾菲(buprenorphine)、丁啡喃(butorphanol)、可待因(codeine)、二乙醯基二氫嗎啡、二乙醯基嗎啡、二氫可待因、地芬諾酯(diphenoxylate)、乙基嗎啡、芬坦尼(fentanyl)、海若英、氫可酮(hydrocodone)、氫化嗎啡酮(hydromorphone)、異美沙酮(isomethadone)、左旋甲嗎凡(levomethorphan)、左旋凡(levorphane)、左嗎喃(levorphanol)、麥啶(meperidine)、美索辛(metazocine)、美沙酮(methadone)、甲嗎凡(methorphan)、甲基二氫嗎啡酮(metopon)、嗎啡、鴉片萃出物、鴉片液體萃出物、鴉片粉末、鴉片粒劑、生鴉片、鴉片酊劑、羥考酮(oxycodone)、羥氫嗎啡酮(oxymorphone)、帕格利(paregoric)、噴他左辛(pentazocine)、替啶(pethidine)、安唑辛(phenazocine)、去痛定(piminodine)、丙氧吩(propoxyphene)、消旋甲嗎喃(racemethorphan)、消旋嗎喃(racemorphan)、蒂巴因(thebaine)與上述制劑的醫(yī)藥上可接受的鹽類及水合物。
麻醉止痛劑的其它明確實例包括例如乙醯吩(acetorphine)、乙醯基二氫可待因、乙醯美沙醇(acetylmethadol)、烯丙基普洛定(allylprodine)、α-乙醯美沙醇(alphracetylmethadol)、α-美普定(alphameprodine)、α-美沙醇(alphamethadol)、苯塞定(benzethidine)、苯甲基嗎啡、β-乙醯美沙醇(betacetylmethadol)、β-美普定(betameprodine)、β-美沙醇(betamethadol)、β-普洛定(betaprodine)、美妥芬諾(butorphanol)、克尼辛(clonitazene)、可待因甲基溴化物、可待因-N-氧化物、希普嗎啡(cyprenorphine)、二氫脫氧嗎啡(desomorphine)、右旋莫醯胺(dextromoramide)、二普醯胺(diampromide)、二乙基噻丁烯(diethylthiambutene)、二氫嗎啡(dihydromorphine)、狄門諾沙多(dimenoxadol)、二甲庚醇(dimepheptanol)、二甲基噻丁烯(dimethylthiamubutene)、二噁菲定丁酸鹽(dioxaphetyl butyrate)、地匹酮(dipipanone)、羥蒂巴酚(drotebanol)、乙醇、乙基甲基噻丁烯(ethylmethylthiambutene)、依托嗒辛(etonitazene)、依托芬(etorphine)、依托利定(etoxeridine)、夫特定(furethidine)、氫化嗎啡醇(hydromorphinol)、羥基普地定(hydroxypethidine)、酮基貝米酮(ketobemidone)、左旋莫醯胺(levomoramide)、左旋酚醯基嗎喃(levophenacylmorphan)、甲基脫氧嗎啡(methyldesorphine)、甲基二氫嗎啡、嗎啡啶(morpheridine)、嗎啡甲基普醯胺(methylpromide)、嗎啡甲基磺酸酯、嗎啡-N-氧化物、嗎咯吩(myrophin)、納洛酮(naloxone)、納拜芬(nalbuyphine)、納曲酮(naltyhexone)、煙可待因(nicocodeine)、煙嗎啡(nicomorphine)、去甲基醯基美沙醇(noracymethadol)、去甲基左嗎喃(norlevorphanol)、去甲基美沙酮(normethadone)、去甲基嗎啡、去甲基比喃酮(norpipanone)、苯他索咔因(pentazocaine)、芬那多松(phenadoxone)、酚安普醯胺(phenampromide)、酚嗎喃(phenomorphan)、酚普啶(phenoperidine)、吡咯他醯胺(piritramide)、福爾可定(pholcodine)、普庚索辛(proheptazoine)、備解素(properidine)、普魯匹蘭吡(propiran)、消旋莫醯胺(racemoramide)、蒂巴康(thebacon)、三甲普定(trimeperidine)與其醫(yī)藥上可接受的鹽類與水合物。
其它明確的代表性止痛劑包括例如TALWIN Nx與DEMEROL(均來自溫莎藥廠(Sanofi WinthropPharmaceuticals；New York，NY))；LEVO-DROMORAN；BUPRENEX(Reckitt&Coleman藥廠；Richmond，VA)；MSIR(Purdue Pharma L.P.藥廠；Norwalk，CT)；DILAUDID(Knoll藥廠；Mount Olive，NJ)；SUBLIMAZE；SUFENTA(Janssen藥廠；Titusville，NJ)；PERCOCET、NUBAIN與NUMORPHAN(均來自Endo藥廠；Chadds Ford，PA)；HYDROSTAT IR、MS/S與MS/L(均來自Richwood藥廠；Florence，KY)、ORAMORPH SR與ROXICODONE(均來自Roxanne Laboratories實驗室；Columbus OH)及STADOL(Bristol-Myers Squibb藥廠；New York，NY)。其它止痛劑包括CB2-受體促效劑，如AM1241，及與α2δ亞單位結(jié)合的化合物，如尼克定(Neurontin(Gabapentin))與普加靈(pregabalin)。
其它態(tài)樣中，本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可與一種或多種白三烯受體拮抗劑(例如抑制半胱胺醯基白三烯CysLT1受體的藥劑)組合使用。CysLT1拮抗劑包括蒙特利克(Montelukast)(SINGULAIR；Merck&Co.，Inc.)。此等組合可用于治療肺部疾病，如哮喘。
本發(fā)明亦提供治療尿失禁的聯(lián)用療法。此方面中，本文所提供的VR1調(diào)節(jié)劑可與蕈毒堿受體拮抗劑組合使用，如特洛定(Tolterodine)(DETROL；Pharmacia Corporation藥廠)與抗膽堿激導性劑，如歐比汀(oxybutynin)(DITROPAN；Ortho-McNeil Pharmaceutical，Inc.，Raritan，NJ)。
此等聯(lián)用療法中合適的VR1調(diào)節(jié)劑劑量通常如上述。其它解除疼痛的醫(yī)藥劑量與投藥方法可參見例如制造商于Physician′s Desk Reference中的說明。某些具體實施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種其它解除疼痛的醫(yī)藥的組合投藥結(jié)果使產(chǎn)生醫(yī)療效果時所需各醫(yī)療劑的劑量降低(例如其中一種或兩種藥劑的劑量可小于上述或制造商所建議的最高劑量的3/4、小于1/2、小于1/4、或小于10％)。于某些較佳的具體實例中，如上述醫(yī)藥組合物用于組合療法時，可再額外包含一種或多種止痛藥，如上述于同一包裝中包含一種或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一種或多種其它止痛劑。
作為VR1促效劑的化合物亦可用在例如群體控制(替代催淚氣體)或個人保護(例如呈噴霧配方)或經(jīng)由辣椒素受體去敏化作用，作為治療疼痛、搔癢、尿失禁或膀胱過動癥的醫(yī)療劑。通常，用于群體控制或個人保護的化合物是依據(jù)習知催淚氣體或胡椒噴霧技術(shù)調(diào)配及使用。
另一態(tài)樣，本發(fā)明提供多種本文所提供化合物的非醫(yī)藥活體外與活體內(nèi)用途。例如此等化合物可加以標記，(于如細胞制劑或組織切片、制劑或其部份中)用為偵測與定位辣椒素受體的探針。此外，本文所提供包含合適反應基(如芳基、羰基、硝基或疊氮基)的化合物可用于受體結(jié)合位置的光親和性標記試驗。此外，本文所提供化合物亦可用為受體活性試驗中的陽性對照組，作為決定候選試劑與辣椒素受體結(jié)合的能力的標準物，或作為正子放射斷層掃瞄攝影(PET)或單光子放射計算機斷層掃瞄攝影(SPECT)的放射追蹤劑。此等方法可用于描述活體中辣椒素受體的特性。例如VR1調(diào)節(jié)劑可采用多種習知技術(shù)標記(例如放射性標記如本文中說明的放射性核素如氚)，與樣本定溫反應一段合適的時間(例如先分析一段結(jié)合時間決定)。定溫反應后，排除未結(jié)合的化合物(例如經(jīng)由洗滌)，采用任何適合所采用標記物的方法檢測已結(jié)合的化合物(例如自動放射照相術(shù)或閃爍計數(shù)法，檢測標記放射性的化合物；分光鏡試驗可用于檢測冷光基團與螢光基團)。依相同方式處理含有有標記的化合物以及較高量(例如超過10倍以上)無標記的化合物的配對樣本作為對照組。試驗樣本中殘留可檢測的標記物含量高于對照組時，表示樣本中含有辣椒素受體。檢測試驗(包括培養(yǎng)細胞或組織樣本中辣椒素受體的受體自動放射顯影(autoradiography)(受體圖譜分析))可依Kuhar述于Current Protocols in Pharmacology(1998)JohnWiley&Sons，New York”中第8.1.1至8.1.9.節(jié)中的方法進行。
本文所提供的化合物亦可用于多種習知的細胞分離法。例如調(diào)節(jié)劑可連結(jié)組織培養(yǎng)盤或其它擔體的內(nèi)表面，用為親和性配位體，以于活體外使辣椒素受體固定而單離之(例如單離表現(xiàn)受體的細胞)。一項較佳具體實施例中，調(diào)節(jié)劑是連結(jié)螢光標記物，如螢光素，與細胞接觸后，使用螢光激活細胞分選器(FACS)分析(或單離)。
本文所提供VR1調(diào)節(jié)劑可進一步用于鑒定其它結(jié)合辣椒素受體的制劑的試驗。一般而言，此等試驗為標準競爭結(jié)合試驗，其中已結(jié)合的有標記VR1調(diào)節(jié)劑經(jīng)以試驗化合物置換。簡言之，進行此等試驗的方式為(a)由辣椒素受體與本文所說明有標記放射性的化合物，于可使化合物與辣椒素受體結(jié)合的條件下接觸，藉以產(chǎn)生已結(jié)合的有標記的化合物；(b)于無試驗制劑存在下檢測與已結(jié)合的有標記化合物含量相應的訊號；(c)由已結(jié)合的有標記化合物與試驗制劑接觸；(d)在試驗制劑的存在下檢測與已結(jié)合的有標記化合物含量相應的訊號；及(e)與步驟(b)所檢測到的訊號比較，檢測步驟(d)的訊號降低程度。
下列實例是供說明用，并未加以限制。除非另有說明，否則所有試劑與溶劑均為標準商品級，未再進一步純化即使用。采用例行修飾法可以變化起始物與其它所采用的步驟，以制成本文所提供的其它化合物。
實施例實施例1代表性經(jīng)取代的5，12-二氮雜-苯幷蔥類似物的制備此實施例說明代表的經(jīng)取代的5，12-二氮雜-苯幷蔥類似物的制備根據(jù)圖式1和2。
A.6-甲氧基甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三氮雜-苯幷[A]蔥1.6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-羧酸
6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]-聯(lián)吡啶基-5-腈，基本上如在PCT國際公開號WO 03/062209所描述制備[即，在76頁2-氨基-4-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-苯幷腈的合成和在184頁 的合成，本文包含上述參考文獻的合成教示]。溶解6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-腈(2.33g，8.82mmol)在12M HCl(50毫升)并在110℃加熱隔夜。減壓蒸發(fā)得到標題化合物的鹽酸鹽。
2.6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-羧酸2，5-二氧代-吡咯啶-1-基酯 攪拌-6-氨基3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-羧酸鹽酸鹽(11.33g，35.44mmol)、N-羥基-琥珀醯亞胺(8.15g，70.9mmol)、Hunig氏堿(16.12g，125mmol)，和EDCI(10.19g，53.16mmol)在THF(100毫升)的溶液。16個小時之后，添加EtOAc(200毫升)并以水(3×100毫升)及鹽水(100毫升)洗滌。以硫酸鈉干燥此有機萃取物并于減壓下去除溶劑得到標題化合物的棕色泡沫。
3.4-羥基-2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)[1，8]萘啶-3-羧酸甲酯 加入6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-羧酸2，5-二氧代基-吡咯啶-1-基酯(10.4g，27.3mmol)的50毫升無水THF溶液在鉀第三丁氧化物(7.36g，65.6mmol)及甲基4-甲氧基乙醯乙酸(8.77g，60.7mmol)的無水THF溶液(100毫升)的混合物。在室溫中隔夜攪拌此反應。加水(30毫升)并濃縮之。以醚萃取此混合物(2×50毫升)。以濃鹽酸酸化水層并以CH2Cl2萃取(4×100毫升)。以硫酸鈉干燥其有機萃取物并在減壓下去除溶劑得到標題化合物的淺褐色油狀物，其在一段時間后會硬化。
4.2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-醇 溶解4-羥基-2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-3羧酸甲酯(200毫克，0.508mmol)在12M HCl(20毫升)并在110℃加熱6個小時。反應混合物倒置冰上(100g)接著以CH2Cl2萃取(4×150毫升)。以硫酸鈉干燥其有機萃取物并于減壓下去除溶劑。純化是經(jīng)硅膠制備TLC以己烷/丙酮(3∶1)溶離得到標題化合物的白色固體。
5.2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-醇 2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-醇(1.95g，5.82mmol)溶于濃硫酸中(60毫升)。冷卻混合物至0℃并加入發(fā)煙硝酸(14毫升)。允許混合物在環(huán)境溫度下攪拌隔夜。在60℃加熱混合物持續(xù)3個小時。冷卻混合物至室溫并倒置冰上(200g)。以10N NaOH處理酸性混合物，直到產(chǎn)物的沉淀產(chǎn)生(pH～4至5)。過濾掉沉淀物然后在真空烘箱烘干隔夜以產(chǎn)生標題化合物。MS 381.08(M+1)。
6.4-氯-2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶
溶解2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-醇(1.80g，4.74mmol)在CHCl3(50毫升)中。加入磷酸氧氯化物(1.76毫升，18.9mmol)及2，6-二甲基吡啶(2.13毫升，18.9mmol)在此溶液。回流加熱混合物隔夜。冷卻混合物至室溫并倒置冰(50g)和飽和小蘇打的溶液(50毫升)上。攪拌混合物1個小時。以CH2Cl2(2×100毫升)萃取混合物。以硫酸鈉干燥其有機萃取物并在減壓下去除溶劑。以硅膠分離層析粗產(chǎn)物以EtOAc/己烷(1∶1)溶離得到標題化合物。MS399.06(M+1)。
7.2-[2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)[1，8]萘啶-4-基氨基]-5-三氟甲基-苯基鹽酸鹽 溶解4-氯-2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶(1.60g，4.01mmol)在乙腈中(35毫升)并加入3-羥基-4-三氟甲基-苯胺(0.782g，4.41mmol)于溶液。在環(huán)境溫度攪拌混合物4個小時(黃色沉淀物形成)。在冰浴冷卻溶液并過濾沉淀物。以冷的乙腈清洗沉淀物以產(chǎn)成。在真空烘箱烘干黃色固體，得到標題化合物。MS 540.12(M+1)。
8.6-甲氧基甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥
溶解2-[2-甲氧基甲基-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-基氨基]-5-三氟甲基-苯基(2.15g，3.99mmol)在DMA(25毫升)及碳酸鉀(1.65g，12.0mmol)的混合物。在13O℃加熱混合物10分鐘。在冰浴冷卻混合物并用EtOAc(150毫升)稀釋。以水(3×150毫升)及鹽水(100毫升)萃取混合物。以硫酸鈉干燥有機萃取物并在減壓下去除溶劑。以硅膠層析分離粗產(chǎn)品以CH2Cl2/Me0H(95∶5)溶離生成標題化合物的橙色固體。MS 493.16(M+1)；1H NMR(CD3OD)δ8.88(d，1H)，8.52(d，1H)，8.33(d，1H)，7.73(m，2H)，7.13(d，IH)，6.97(d，IH)，6.82(d，IH)，4.64(s，2H)，3.50(s，3H)。
B.6-(2，6-順-二甲基-嗎啉-4-基甲基)-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三氮雜-苯并[a]蔥1.[9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三氮雜-苯幷[a]蔥-6-基]-甲醇 溶解6-甲氧基甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三氮雜-苯幷[a]蔥(265毫克，0.538mmol)在CH2Cl2(15毫升)中并冷卻至0℃。滴加BBr3(1.61毫升，1.61mmol，1.0M在CH2Cl2)到溶液中，在室溫下攪拌五個小時。以NaHCO3的飽和溶液(10毫升)驟止反應。以CH2Cl2/i-PrOH(90∶10；3×50毫升)萃取此混合物。以硫酸鈉干燥此有機萃取物并在減壓下去除溶劑得到標題化合物。MS479.05(M+1)。
2.6-氯甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥鹽酸鹽 溶解[9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥-6-基]-甲醇(132毫克，0.276mmol)在CH2Cl2(10毫升)并冷卻至0℃。添加SOCl2(2毫升)并在下攪拌1個小時。在減壓下去除溶劑并以Et2O振蕩洗滌殘滓而產(chǎn)生產(chǎn)物。MS 497.07(M+1)。
3.6-異丁氧基甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥 溶解6-氯甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥(25毫克，0.05mmol)在2-甲基-丙醇中(2毫升)并冷卻至0℃。分次添加NaH(35毫克)。使混合物在室溫攪拌隔夜。以EtOAc(25毫升)、水(25毫升)及鹽水(25毫升)萃取。以Na2SO4干燥有機層并在減壓下去除溶劑。經(jīng)制備的薄層層析法純化殘滓以己烷/丙酮/三乙基胺(50∶50∶1)溶離得到標題化合物的淡紅色固體。MS535.11(M+1)。
4.6-(2，6-順-二甲基-嗎啉-4-基甲基)-9-三氟甲基-3-)3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥 溶解6-氯甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥(25毫克，0.05mmol)在DMA(0.5毫升)并添加順-3，5-二甲基-嗎啉(0.15毫升)。在室溫下攪拌混合物隔夜。用EtOAc(25毫升)稀釋并用水萃取(3×25毫升)。以硫酸鈉干燥有機層并在減壓下去除溶劑，產(chǎn)生標題化合物的紅色固體。MS 576.14(M+1)。
實施例2額外的代表性經(jīng)取代的5.12二吖-苯幷蔥類似物的合成A.9-溴-6-甲氧基甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-7，12-二氫4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥-7-醇1.5-溴-2-[2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-基氨基]-苯甲酸 溶解4-氯-2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶(250毫克，0.708mmol)在i-PrOH(5毫升)。添加10滴HCl(2.0M醚溶液)至溶液并在室溫下攪拌4個小時。過濾黃色沉淀物并在真空烘箱烘干得到標題化合物。MS 533.05(M+1)。
2.9-溴-6-甲氧基甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥-7-酮
溶解5-溴-2-[2-甲氧基甲基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4基氨基]-苯甲酸(150毫克，0.281mmol)在PPA(大約3g)并在120℃加熱。在2個小時之后，傾倒熱的混合物到水和冰之上并攪拌1個小時。以NaOH中和混合物接著以EtOAc(3×100毫升)萃取。以硫酸鈉干燥其有機萃取物并在減壓下去除溶劑。藉由制備的TLC純化粗產(chǎn)品以己烷/丙酮(1∶1)溶離得到標題化合物。MS 515.03(M+1)。
3.9-溴-6-甲氧基甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-7，12-二氫4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥-7-醇 溶解9-溴-6-甲氧基甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥-7-酮(34毫克，0.066mmol)在i-PrOH(2毫升)并添加NaBH4(7.5毫克，0.198mmo1)。在室溫下攪拌混合物隔夜。以1NNaOH(10毫升)驟止反應并以EtOAc(2×20毫升)萃取。以硫酸鈉干燥其有機萃取物并在減壓下去除溶劑。藉由制備的TLC純化粗產(chǎn)物，以己烷/丙酮(1∶1)溶離得到標題化合物。MS 517.06(M+1)。
B.6-甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥及9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥1.6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基-5-羧酸甲酯
通氯化氫氣體至6-氨基3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基)-5-羧酸(5g)的MeOH(100毫升)溶液達飽和?；亓骷訜峄旌衔?天，接著蒸發(fā)至干。分離混合物于EtOAc和飽和小蘇打溶液之間。分離各層并進一步以EtOAc萃取水層。以鹽水清洗其有機萃取物，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)得到標題化合物。
2.4-羥基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1，8]萘啶-2-酮 在60℃加熱6-氨基-3′-三氟甲基-[2，2′]聯(lián)吡啶基)-5-羧酸甲酯(297毫克，1.0mmo1)及乙酸(1毫升)的二噁烷(2毫升)溶液持續(xù)3個小時。冷卻混合物，加水(1毫升)接著蒸發(fā)至干。溶解此固體在THF(4毫升)并在-78℃滴加至貳(三甲基硅烷基)醯胺鉀(600毫克，3.0mmol)的甲苯溶液(6毫升)。允許反應回至室溫隔夜。添加水(10毫升)并以EtOAc萃取。以鹽酸酸化水層和藉由過濾收集沉淀物。風干得到標題化合物。
3.3-硝基-4-羥基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1，8]萘啶-2-酮 對發(fā)煙硝酸(1毫升)及濃硫酸(10毫升)的溶液于0℃加入4-羥基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1，8]萘啶-2-酮(307毫克)。允許混合物以1個小時回到室溫。傾倒反應混合物至冰/水(20毫升)上，并加入10M氫氧化鈉溶液直到沉淀物產(chǎn)生。藉由過濾和風干收集沉淀物得到標題化合物。
4.2，4-二氯-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶 回流3-硝基-4-羥基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-1H-[1，8]萘啶-2-酮(70毫克)在POCl3(2毫升)18個小時。在真空內(nèi)蒸發(fā)溶劑，以飽和的NaHCO3小心地中和，并以EtOAc萃取。以硫酸鈉干燥，在真空下濃縮獲得標題化合物。
5.2-[2-氯-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]-萘啶-4-基氨基]-5-三氟甲基-1-苯基 回流加熱2，4-二氯-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶(65毫克)、2-氨基-5-(三氟甲基)-苯基(30毫克)、醋酸鈉(17毫克)的EtOH溶液(2毫升)1小時。冷卻，加水(2毫升)，藉由過濾收集沉淀物并風干得到標題化合物。
6.6-氯-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥 溶液2-[2-氯-3-硝基-7-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-[1，8]萘啶-4-基氨基]-5-三氟甲基-1-酚(50毫克)及碳酸鉀(27毫克)的DMA(2毫升)溶液在130℃加熱1個小時。冷卻混合物接著分離于EtOAc和水之間。分離各層并進一步以EtOAc萃取水層。以鹽水清洗其有機萃取物，干燥(MgSO4)并蒸干。藉由預備的TLC(溶離液EtOAc)純化得到標題化合物，MS 483(M+1)。400MHz 1H NMR(CDCl3)6.62(d，IH)，7.05(brs，2H)，7.45(m，2H)，7.65(d，1H)，8.12(d，1H)，8.25(d，1H)，8.80(s，1H)。
7.6-甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥及9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥 和 去除氣體的6-氯-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥(96毫克)、甲基硼酸(60毫克)，肆(三苯基膦)鈀(0)(15毫克)及2M碳酸鉀(1毫升)在甲苯中(4毫升)的混合物，在氮氣環(huán)境氣下在90℃加熱8個小時。冷卻反應混合物并分離各層。以EtOAc萃取并以4M氫氧化鈉、水、鹽水清洗其有機層，干燥(MgSO4)并于減壓下濃縮。藉由MS觸發(fā)預備的HPLC/MS純化油狀物得6-甲基-9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥。MS 463(M+1)。400MHz 1H NMR(CD3OD)2.45(s，3H)，6.75(d，1H)，6.90(s，1H)，7.18(d，1H)，7.65(d，1H)，7.70(m，1H)，8.34(d，1H)，8.42(d，1H)，8.90(d，1H)；及9-三氟甲基-3-(3-三氟甲基-吡啶-2-基)-12H-7-噁-4，5，12-三吖-苯幷[a]蔥。MS 449(M+1)。400MHz 1HNMR(d-丙酮)6.92(m，2H)，7.15(d，1H)，7.75(m，1H)，7.85(brs，1H)，8.38(m，2H)，8.42(d，1H)，8.95(d，1H)。
實施例3額外的代表性經(jīng)取代的5.12-二吖-苯幷蔥類似物使用常規(guī)的修飾方法，起始材料可能取決于使用產(chǎn)生在此提供的化合物的其它步驟。列出于表I的化合物使用如此方法制備。于標記″IC50″欄指明，IC50如描述于實施例6所決定是1微摩爾或更低(即，如此化合物的濃度必需提供于暴露于辣椒素的IC50是1微摩爾的細胞于或更低的螢光反應減少50％)。在標示″MS″欄內(nèi)的質(zhì)量光譜數(shù)據(jù)是電噴灑質(zhì)量光譜，以15V或30V錐體電壓獲得于正離子模式下，使用微質(zhì)量飛行時間(micromass time-of-flight)LCT，以Waters 600泵浦、Waters 996光電二極管數(shù)組探測器、Gilson 215自動給樣器、和Gilson841微注射器裝備。Mass Lynx(Advanced Chemistry Development，Inc；Toronto，Canada)使用版本4.0軟件為搜集數(shù)據(jù)和分析。注射1微升的樣品量至50×4.6mm Chromolith SpeedROD C18管柱，并使用6ml/min流速2相線性梯度溶離出。使用總吸收計數(shù)于220-340nm UV范圍檢測內(nèi)樣品。溶離條件是流動相A-95/5/0.05水/MeOH/TFA；流動相B-5/95/0.025水/MeOH/TFA。
梯度Time(min)％B0 100.51001.21001.21 10每次注射之間循環(huán)2分鐘。
表I代表性經(jīng)取代的5，12-二吖-苯幷蔥類似物







實例4VR1-轉(zhuǎn)染細胞與膜制劑此實例說明用于辣椒素結(jié)合試驗(實例5)的VR1-轉(zhuǎn)染細胞與含VR1的膜制劑的制法。
取人類辣椒素受體全長編碼的互補去氧核糖核酸(cDNA)(美國專利案No.6,482,611的SEQ ID N01、2或3)次選殖(subclone)至質(zhì)體pBK-CMV(Stratagene，La Jolla，CA)，供于哺乳動物細胞中重組表現(xiàn)。
以標準方法，轉(zhuǎn)染pBK-CMV的人類辣椒素受體全長編碼表現(xiàn)結(jié)構(gòu)至人類胚胎腎臟(HEK293)細胞。轉(zhuǎn)染的細胞經(jīng)含G418(400μg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周以選取，獲得一群穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞。經(jīng)由限數(shù)稀釋法，自此群細胞中單離出獨立純系，得到純系的安定細胞株，供下一個試驗使用。
進行放射性配位體結(jié)合性試驗時，接種細胞至T175細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)不含抗生素的培養(yǎng)基中，生長至約90％滿盤。培養(yǎng)瓶隨后經(jīng)PBS洗滌，于含5mM EDTA的PBS中收集細胞。細胞經(jīng)溫和離心集結(jié)成塊，保存在-80℃下，至分析為止。
將先前冷凍的細胞置于冰冷羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)均質(zhì)緩沖液(5mM KCl、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mMMgCl、320mM蔗糖與10mM HEPES pH 7.4)中以組織均質(zhì)器打破。組織均質(zhì)液先于1000×g(4℃)下離心10分鐘，以移除細胞核部份及細胞碎片，然后取第一次離心之上澄液再于35,000×g(4℃)下離心30分鐘，得到部份純化的膜部份。膜先再懸浮于HEPES均質(zhì)緩沖中后才進行分析。取一份膜均質(zhì)液，使用Bradford方法(BIO-RAD蛋白質(zhì)分析套組，#500-0001，BIO-RAD，Hercules，CA)檢測蛋白質(zhì)濃度。
實例5辣椒素受體結(jié)合試驗本實例說明辣椒素受體結(jié)合性的代表性試驗，其可用于檢測化合物對辣椒素(VR1)受體的結(jié)合親和性。
與[3H]樹脂毒素(resiniferatoxin)(RTX)的結(jié)合性試驗基本上是依Szallasi與Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888中說明的方法進行。此方法中，非專一性RTX結(jié)合性會因當結(jié)合反應結(jié)束后添加牛α1酸醣蛋白(每支管100微克)而下降。
RTX(37 Ci/毫摩爾)是由國家癌癥研究所-費得利克癌癥研究與發(fā)展中心的化學合成與分析實驗室(the ChemicalSynthesis and Analysis Laboratory，National CancerInstitute-Frederick Cancer Research and Development Center，F(xiàn)rederick，MD)所合成而得。[3H]RTX亦可自銷售商而得(例如藥廠Amersham Pharmacia Biotech，Inc.；Piscataway，NJ)。
取實例4的膜均質(zhì)液依上述離心及再懸浮于均質(zhì)緩沖液中，達蛋白質(zhì)濃度333μg/ml。于冰上制備結(jié)合性試驗混合物，其中包含[3H]RTX(比活性2200mCi/ml)、2μl非放射活性試驗化合物、0.25mg/ml牛血清白蛋白(Cohn部份V)、與5×104至1×105VR1-轉(zhuǎn)染細胞。使用上述冰-冷HEPES均質(zhì)緩沖液(pH7.4)調(diào)整最終體積至500μl(用于競爭型結(jié)合試驗)或1,000μl(用于飽和型結(jié)合試驗)。非專一結(jié)合性的定義為在1μM非放射活性RTX(Alexis Corp.；San Diego，CA)的存在下的結(jié)合性。分析飽和結(jié)合性時，[3H]RTX的添加濃度范圍為7至1,000pM，稀釋1至2次。典型作法為每條飽和結(jié)合性曲線收集11個濃度點。
競爭型結(jié)合試驗是于60pM[3H]RTX及不同濃度的試驗化合物的存在下進行。藉將分析混合物移至37℃水浴中，起始結(jié)合性反應，定溫反應60分鐘后，將試管置于冰上冷卻，以中止反應。以WALLA玻璃纖維濾紙過濾(PERKIN-ELMER，Gaithersburg，MD)(使用前先浸泡1.0％PEI(聚乙烯亞胺)2小時)，膜結(jié)合的RTX藉此與游離的RTX及任何與α1酸醣蛋白結(jié)合的RTX分離。使濾紙干燥一夜后，添加WALLAC BETASCINT閃爍計數(shù)液，于WALLAC 1205 BETA PLATE計數(shù)器上計數(shù)。
平衡結(jié)合參數(shù)是將所得的數(shù)值代入變構(gòu)性希爾公式(theallosteric Hill equation)，藉計算機程序FIT P(Biosoft，F(xiàn)erguson，MO)而判定(說明于Szallasi等人的(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266678-683)計算數(shù)據(jù)。本文所提供化合物在此試驗中對辣椒素受體的Ki值小于1μM、100nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
實例6鈣離子移動試驗本實例說明用于試驗化合物的促效劑與拮抗劑活性的代表性鈣離子移動化試驗。
經(jīng)表現(xiàn)質(zhì)體轉(zhuǎn)染(依實例4所述)藉以表現(xiàn)人類辣椒素受體的細胞接種至FALCON黑邊，透明底板的96孔盤中(#3904，BECTON-DICKINSON，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)，生長至70至90％滿盤。倒空96孔盤中的培養(yǎng)基，在各孔中添加FLUO-3AM鈣敏感性染料(Molecular Probes，Eugene，OR)(染料溶液1毫克FLUO-3 AM、440μL DMSO與440μl 20％普羅尼克酸(pluronicacid)的DMSO溶液，于克氏-林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)緩沖液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1mMMgSO4、2mM CaCl2、5mM葡萄糖、1mM丙磺舒(probenecid)，pH7.4)中稀釋1∶250，每孔50μl稀釋溶液)。分析盤以鋁箔覆蓋，于37℃的含5％CO2環(huán)境下培養(yǎng)1至2小時。培養(yǎng)后，倒空培養(yǎng)盤中的染料，以KRH緩沖液洗滌細胞一次，再懸浮于KRH緩沖液中。
辣椒素EC50的檢測法為了檢測試驗化合物在于辣椒素或其它類香草酸促效劑的辣椒素受體表現(xiàn)細胞中對促進或擷抗鈣離子移動反應的能力，因此先檢測促效劑辣椒素的EC50。在各孔細胞中添加依上述制備的20μl KRH緩沖液與1μl DMSO。采用FLIPR儀器，自動加入100μl含辣椒素的KRH緩沖液至各孔中。采用螢光掃瞄器(FLUOROSKAN ASCENT)(Labsystems；Franklin，MA)或FLIPR(螢光檢測儀顯影板讀數(shù)系統(tǒng)；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)儀器監(jiān)測辣椒素誘發(fā)的鈣離子移動作用。以施用促效劑后30至60秒之間的數(shù)據(jù)制成8個點的濃度效應曲線，最終辣椒素濃度為1nM至3μM。采用KALEIDAGRAPH軟件(Synergy Software，Reading，PA)將數(shù)據(jù)代入公式y(tǒng)＝a*(1/(1+(b/x)c))以檢測反應的50％激發(fā)濃度(excitatory concentration；EC50)。此公式中，y為最高螢光訊號，x為促效劑或拮抗劑(此時指辣椒素)濃度，a為Emax；b相當于EC50值，且c為希爾系數(shù)(Hill coefficient)。
促效劑活性的判定。
取試驗化合物溶于DMSO中，于KRH緩沖液中稀釋，立即加至依上述制備的細胞中。亦添加100nM辣椒素(約EC90濃度)至相同96孔培養(yǎng)盤中的細胞作為陽性對照組。分析孔中試驗化合物的最終濃度為0.1nM至5μM之間。
試驗化合物作用為辣椒素受體促效劑的能力取決于測量表現(xiàn)辣椒素受體的細胞的螢光反應，此螢光反應是經(jīng)化合物誘發(fā)并為隨化合物濃度變化的函數(shù)。將數(shù)據(jù)依上述方式代入，得到EC50，結(jié)果通常小于1微摩爾濃度，較佳為小于100nM，更佳為小于10nM。亦由指定試驗化合物濃度(典型為1μM)誘發(fā)的反應相對于由100nM辣椒素誘發(fā)的反應計算各試驗化合物的效力程度。此數(shù)值稱為訊號百分比(POS)，由下列公式計算POS＝100*試驗化合物反應/100nM辣椒素反應此試驗提供一種同時試驗化合物作為人類辣椒素受體促效劑的強度與效力的定量法。人類辣椒素受體的促效劑通常在小于100μM濃度下誘發(fā)可檢測的反應，或較佳為小于1μM的濃度，或最佳為小于10nM的濃度。其在1μM濃度時，對人類辣椒素受體的效力程度較佳為大于30POS，更佳為大于80POS。某些促效劑在下文說明的試驗中，于低于4nM的化合物濃度下沒有可檢測的拮抗劑活性，即證實其基本上沒有拮抗劑活性，更佳為低于10μM的濃度，及最佳為低于或等于100μM的濃度。
拮抗劑活性檢測法取試驗化合物溶于DMSO中，以20μl KRH緩沖液稀釋，使分析孔中最終試驗化合物濃度為1μM至5μM之間，加至如上述制備的細胞中。取含已制備的細胞與試驗化合物的96孔盤于黑暗中與室溫下培養(yǎng)0.5至6小時。應注意，培養(yǎng)時間不可持續(xù)超過6小時。即將檢測螢光反應之前，方使用FLIPR儀器自動添加100μl含辣椒素的KRH緩沖液至96孔盤各孔中，其濃度為如上述測得的EC50的兩倍濃度，最終樣本體積為200μl，最終辣椒素濃度等于EC50。分析孔中試驗化合物的最終濃度為1μM至5μM之間。辣椒素受體的拮抗劑在10微摩爾濃度或以下濃度，較佳為1微摩爾濃度或以下濃度，使此反應相對于配對對照組(亦即于無試驗化合物的存在下，使用兩倍EC50濃度的辣椒素處理的細胞)降低至少約20％，較佳為至少約50％，最佳為至少80％。取相對于在辣椒素的存在下及沒有拮抗劑下所觀察到的反應降低50％時所需拮抗劑濃度，為拮抗劑的IC50，較佳為低于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。
某些較佳VR1調(diào)節(jié)劑為于上述試驗中，于低于4nM的化合物濃度下沒有可檢測的促效劑活性時，即證實其基本上沒有促效劑活性，更佳為低于10μM的濃度，及最佳為低于或等于100μM的濃度。
實例7微粒體活體外半衰期此實施例說明使用代表性肝臟微粒體半衰期試驗對化合物半衰期值(t1/2值)的評估。
合并的(pooled)人的肝臟微粒體從XenoTech LLC(Kansas City，KS)而得。此等肝臟微粒體亦可自In Vitro Technologies(Baltimore，MD)或Tissue Transformation Technologies(Edison，NJ)。制備六組測試反應，各包含25μl微粒體，100μM測試化合物的溶液5μl，和0.1M磷酸鹽緩沖液(19毫升0.1 M NaH2PO4，81毫升0.1 M Na2HPO4，以H3PO4調(diào)節(jié)至酸堿度7.4)399μl。第七反應制備作為包含25μl微粒體的陽性控制組，0.1M磷酸鹽緩沖液399μl，和5μl具已知代謝性的化合物的100μM溶液(例如，二氮平(DIAZEPAM)或氯氮平(CLOZAPINE))。反應于39℃預定溫10分鐘。
輔助因子混合物藉稀釋16.2毫克NADP及45.4毫克葡萄糖-6-磷酸鹽于4毫升100mM氯化鎂制備。葡萄糖-6-磷酸鹽去氫酶溶液藉由稀釋214.3μl葡萄糖-6-磷酸鹽去氫酶懸浮劑(Roche MolecularBiochemicals；Indianapolis，IN)入1285.7μl蒸餾水制備。71μl起始反應混合物(3毫升輔助因子混合物；1.2毫升葡萄糖-6-磷酸鹽去氫酶溶液)加入6組測試反應中的5個以及陽性控制組。71μl 100mM氯化鎂加入第6個測試反應，作為負控制組使用。于每時間點(0，1，3，5，和10分鐘)，各反應混合75μl吸取加入內(nèi)含75μl冰冷乙腈96-孔盤的孔。樣品是于3500轉(zhuǎn)每分鐘漩渦攪拌與離心10分鐘(Sorval T 6000D離心機，HlOOOB旋轉(zhuǎn)輪)。從各反應的75μl上層清液移至每一孔，其內(nèi)含已知LCMS圖形的(內(nèi)部標準)化合物的0.5μM溶液150μl。進行各個樣品的LCMS分析及檢測未代謝測試化合物的量作為曲線下面積(AUC)，化合物濃度對時間作圖，及外推及測試化合物的t1/2值。在此提供的較佳的化合物于人的肝臟微粒體，顯示活體外大于10分鐘和少于4個小時的t1/2值，較佳介于30分鐘和1個小時之間。
實例8MDCK毒性試驗此實施例說明使用Madin Darby犬腎臟(MDCK)細胞的細胞毒性試驗對化合物毒性的評估。
加入試驗化合物1μL于透明底部96-孔盤的每一孔(PACKARD，Meriden，CT)使試驗中的化合物的最終濃度為10微摩爾，100微摩爾或200微摩爾。加入未含試驗化合物的溶劑于控制組孔。
MDCK細胞，ATCC號碼.CCL-34(American Type CultureCollection，Manassas，VA)，維持于無菌條件遵循于ATCC產(chǎn)品信息說明。滿盤的MDCK細胞經(jīng)胰蛋白酶水解，收取，和以溫暖的(37℃)培養(yǎng)液(VITACELL最低必需培養(yǎng)基(minimum essential medium)Eagle，ATCC編目#30-2003)稀釋至密度0.1×106cells/ml。稀釋的細胞100μL加入每一孔，除了含100μL溫暖培養(yǎng)液而不含細胞的五個標準曲線控制組孔。然后培養(yǎng)盤于37℃于95％O2，5％二氧化碳之下穩(wěn)定震蕩2個小時。于培養(yǎng)之后，加入50μL哺乳類細胞水解溶液(由PACKARDMeriden，CT)ATP-LITE-M發(fā)光ATP檢測套組)至每一孔，孔用PACKARD TOPSEAL黏貼紙片蓋覆，以適當?shù)恼駝悠饔诖蠹s每分鐘700轉(zhuǎn)震蕩2分鐘。
相對于未經(jīng)處理的細胞，致毒性的化合物將減少ATP產(chǎn)生。ATP-LITE-M冷光ATP檢測套組一般根據(jù)制造商的說明于處理的和未經(jīng)處理的MDCK細胞中檢測ATP的產(chǎn)生。PACKARD ATP LITE-M試劑被允許平衡至室溫。一旦平衡，被凍干的基體溶液重新組成于5.5毫升基質(zhì)緩沖溶液(由套組)。凍干的ATP標準溶液以去離子化的水重組成10mM存品。五個控制組孔，10μL序列稀釋的PACKARD標準液加入于每一孔，得到序列稀釋孔的最終濃度為200nM，100nM，50nM，25nM和12.5nM。加入PACKARD基體溶液(50μL)于所有孔，然后蓋覆，然后于適當?shù)恼駝悠饕源蠹s每分鐘700轉(zhuǎn)震蕩2分鐘。白色PACKARD黏貼紙片貼附于各盤底部，樣品藉鋁箔包覆以遮光并置于黑暗10分鐘。然后使用冷光記數(shù)器于22℃檢測冷光(即，PACKARDTOPCOUNT微盤閃爍及冷光記數(shù)器或TECAN SPECTRAFLUORPLUS)，而ATP含量由標準曲線計算。經(jīng)測試化合物處理細胞的ATP含量經(jīng)與未經(jīng)處理細胞比較來判定。細胞以較佳的測試化合物10μM處理是至少顯示ATP程度于80％，較佳地至少90％，未經(jīng)處理的細胞。當使用測試化合物的100μM濃度，細胞以較佳的測試化合物處理是至少顯示ATP程度于50％，較佳地偵測ATP程度至少80％，于未經(jīng)處理的細胞中。
實例9背根神經(jīng)節(jié)細胞試驗此實例說明用于評估化合物的VR1拮抗劑或促效劑活性的代表性背根神經(jīng)節(jié)細胞試驗。
依標準方法(Aguayo與White(1992)Brain Research57061-61)，自新生大鼠中切下DRG，分離及培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時后，洗滌細胞一次，與鈣敏感性染料Fluo 4 AM(2.5至10μg/ml；TefLabs，Austin，TX)培養(yǎng)30至60分鐘。然后再洗滌細胞一次。采用螢光計檢測Fluo 4螢光的變化，追蹤細胞內(nèi)鈣濃度因添加辣椒素至細胞中而隨VR1增加的變化。收集60至180秒的數(shù)據(jù)，檢測最高螢光訊號。
拮抗劑試驗中，添加不同濃度的化合物至細胞，然后以化合物濃度為函數(shù)畫出螢光訊號曲線，以判別達到抑制50％辣椒素活化反應時所需的濃度，或IC50。辣椒素受體的拮抗劑的較佳IC50低于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。促效劑試驗中，添加不同濃度的化合物至沒有添加辣椒素的細胞中。作為辣椒素受體促效劑的化合物采用螢光計追蹤Fluo-4螢光變化時，細胞內(nèi)鈣濃度會隨VR1增加。達到辣椒素活化反應最高訊號的50％時所需濃度為EC50，其較佳為低于1微摩爾濃度、低于100納摩爾濃度或低于10納摩爾濃度。
實例10判定疼痛解除的動物模式此實例說明分析化合物解除疼痛程度的代表性方法。
A.疼痛解除試驗下列方法是用于分析疼痛解除程度。
機械性異常疼痛基本上依Chaplan等人的(1994)J.Neurosci.Methods5355-63及Tal與Eliav的(1998)Pain 64(3)511-518中說明的方法分析機械性異常疼痛(對無害刺激產(chǎn)生的異常反應)。取一系列不同剛度的凡弗瑞(von Frey)絲線(典型為一系列8至14種絲線)施加在后腳足底表面上，其力量恰足使絲線彎曲。絲線保持此位置不超過3秒鐘或直到大鼠出現(xiàn)陽性異常疼痛反應為止。陽性異常疼痛反應包括舉起處理的后腳，立即舔或搖動腳部。采用狄克森上下試驗(Dixon up-down method)決定各絲線的施加順序與頻率。使用此系列中之中等絲線開始試驗，隨后依向上或向下順序連續(xù)施用，分別依開始時所使用絲線是否出現(xiàn)陰性或陽性反應而定。
若接受此等化合物處理的大鼠相較于未處理對照組或基劑處理組大鼠需要使用較高剛度的凡弗瑞(von Frey)絲線方可引起陽性異常疼痛反應時，表示該化合物可有效逆轉(zhuǎn)或預防類似機械性異常疼痛的癥狀。或者，或此外，可在投予化合物之前及之后測試動物的慢性疼痛。此等試驗中，相較于處理前誘發(fā)反應時所需絲線或未經(jīng)處理或經(jīng)基劑處理且亦具慢性疼痛的動物所需絲線，有效化合物可使處理后誘發(fā)反應所需絲線剛度提高。試驗化合物是于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，試驗于投藥后10分鐘至3小時進行。
機械性痛覺過敏基本上依Koch等人的(1996)Analgesia 2(3)157-164說明的方法檢測機械性痛覺過敏(對疼痛刺激的反應過度)。取大鼠置于有溫熱多孔金屬地板的個別籠內(nèi)。在任一只后腳足底表面上溫和針刺后，檢測后腳抽回的時間期(亦即動物將其后腳放回地板上之前保持的時間)。
若化合物使后腳抽回的時間期縮短達統(tǒng)計顯著性時，則該化合物可降低機械性痛覺過敏。試驗化合物是于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，在投藥后10分鐘至3小時進行試驗。
熱痛覺過敏基本上依Hargreaves等人說明于(1988)Pain. 32(1)77-88中方法檢測熱痛覺過敏(對有害熱刺激的反應過度)。簡言之，在動物任一只后腳的足底表面施加恒定的輻射熱源。抽回后腳的時間(亦即動物移動后腳之前之加熱時間期)，或稱為熱閾值或潛伏期，即可決定動物后腳對熱的敏感性。
若化合物使后腳抽回的時間期加長達統(tǒng)計顯著性時(亦即出現(xiàn)反應的熱閾值或潛伏期加長)，則該化合物可降低熱痛覺過敏。試驗化合物是于疼痛發(fā)作之前或之后投藥。當試驗化合物在疼痛發(fā)作之后投藥時，在投藥后進行試驗10分鐘至3小時。
B.疼痛模式可采用下列任一種方法誘發(fā)疼痛，以檢測化合物的止痛效力。一般而言，采用雄性SD大鼠及下列至少一種模式時，本文所提供化合物可在上述至少一種試驗法中使疼痛在統(tǒng)計上顯著降低。
急性發(fā)炎疼痛模式急性發(fā)炎疼痛是基本上依Field等人說明于(1997)Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522中的角叉菜膠模式中誘發(fā)急性疼痛。取100至200μl的1至2％角叉菜膠溶液注射大鼠后腳中。注射后3至4小時，依上述方法檢測動物對熱及與機械性刺激的敏感性。在試驗前或注射角叉菜膠之前，對動物投與試驗化合物(0.01至50mg/kg)。化合物可經(jīng)口或任何非經(jīng)腸式、或局部投藥至腳部。在此模式中解除疼痛的化合物可使機械性異常疼痛與/或熱痛覺過敏在統(tǒng)計上顯著降低。
慢性發(fā)炎疼痛模式采用下列一種方法誘發(fā)慢性發(fā)炎疼痛1.基本上依Bertorelli等人說明于(1999)Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258的方法及Stein等人說明于(1998)Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51的方法，取200μl完全弗洛伊德氏輔劑(Complete Freund′s Adjuvant)(0.1毫克的熱殺死與干燥的結(jié)核菌(M.Tuberculosis))注射至大鼠后腳中100μl注入足背，100μl注入足底表面。
2.基本上依Abbadie等人說明于(1994).J Neurosci.14(10)5865-5871的方法，在大鼠的脛骨跗骨關(guān)節(jié)上注射150μlCFA(1.5mg)。
其任一方法中，在注射CFA之前，先取得各試驗動物后腳對機械及熱刺激的個別敏感度底線。
注射CFA后，依上述測試大鼠的熱痛覺過敏、機械性異常疼痛與機械性痛覺過敏。為了確使其發(fā)展出癥狀，在注射CFA后第5、6與7天時才開始進行大鼠試驗。第7天時，以試驗化合物、嗎啡或基劑處理動物。以口服劑量為1至5mg/kg的嗎啡作為合適的陽性對照組。典型采用的試驗化合物劑量為0.01至50mg/kg?；衔锟稍谠囼炃俺蕟我淮笸鑴┩端幓蛟谠囼炃埃刻焱端?、2或3次，進行數(shù)天。藥物可經(jīng)口或任何非經(jīng)腸式途徑、或局部投藥給動物。
其結(jié)果以最高可能效力百分比(MPE)表示。0％MPE的定義為基劑的止痛效力，100％MPE的定義為動物恢復注射CFA前的底線敏感度。在此模式中解除疼痛的化合物所得到的MPE為至少30％。
慢性神經(jīng)病變性疼痛模式慢性神經(jīng)病變性疼痛是基本上依Bennett與Xie說明于(1988)Pain 3387-107中的方法，采用慢性收縮傷害(CCI)處理大鼠坐骨神經(jīng)而誘發(fā)。麻醉大鼠(例如經(jīng)腹膜內(nèi)使用劑量50至65mg/kg的戊巴比妥及依需要再增加劑量)。將后腳側(cè)面刮干凈及消毒。采用無菌技術(shù)，切開后腳側(cè)面中股。將股二頭肌切成鈍端，曝露出坐骨神經(jīng)。在每只動物的其中一只后腳上，依約1至2毫米的間隔，將四條結(jié)扎線松弛結(jié)扎坐骨神經(jīng)。另一只腳的坐骨神經(jīng)則沒有結(jié)扎且不處理。隨后蓋上肌肉，使用傷口夾或縫合線縫合皮膚。依上述分析大鼠的機械性異常疼痛、機械性痛覺過敏與熱痛覺過敏。
當化合物在此模式中，在即將試驗前呈單一大丸劑投藥或在試驗前，每天投藥1、2或3次，進行數(shù)天(0.01至50mg/kg，經(jīng)口、非經(jīng)腸式或局部投藥)時，該化合物可在統(tǒng)計上顯著降低機械性異常疼痛、機械性痛覺過敏與/或熱痛覺過敏。
權(quán)利要求
1.一種如下通式所示的化合物或其醫(yī)藥上可接受的鹽 其中V是C(R4)(R5)、NR6、O或S；R4是氫、鹵素、羥基、氰基、氨基、C1-C2烷基或與R5一起形成酮基；R5是氫、C1-C2烷基或與R4一起形成酮基；R6是氫或C1-C2烷基；W、Y及Z是各自獨立地為N或CR1；R1在每種情況下獨立地選自氫、鹵素、羥基、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基或單-或二-(C1-C6烷基)氨基；R2是(i)氫、鹵素、氰基或-COOH；(ii)C1-C3氨基烷基，其中每個碳原子經(jīng)0至2個獨立地選自羥基或C1-C6烷基的取代基所取代；或(iii)通式為-Rc-M-A-Ry所示的基團，其中Rc是C0-C3亞烷基或與Ry或Rz一起形成4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，該碳環(huán)或雜環(huán)經(jīng)0至2個獨立地選自Rb的取代基所取代；M是單共價鍵，O、S、SO2、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、C(＝O)N(Rz)、OC(＝O)N(Rz)、N(Rz)C(＝O)、N(Rz)SO2、SO2N(Rz)或N(Rz)；A是單共價鍵或經(jīng)0至3個獨立地選自Rb的取代基所取代的C1-C8亞烷基；及Ry及Rz，如果存在，是(a)獨立為氫原子、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C8烷酮、C2-C8烷基醚、C2-C8烯基、4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，或與Rc一起形成4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，其中每個Ry及Rz獨立地經(jīng)0至6個獨立地選自Rb的取代基所取代；或(b)一起形成4-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，該碳環(huán)或雜環(huán)經(jīng)0至6個獨立地選自Rb的取代基所取代；Ar1是5-至10-員碳環(huán)或雜環(huán)，每一個經(jīng)0至3個獨立地選自通式LRa所示基團的取代基所取代；A1、A2、A3和A4獨立地為N或CR3；每個R3是(i)獨立地選自通式LRa所示基團；或(ii)與相鄰的R3一起形成稠合5-至7-員碳環(huán)或雜環(huán)，該碳環(huán)或雜環(huán)經(jīng)0至3個獨立地選自通式LRa所示基團的取代基所取代；L在每種情況下獨立地選自單一共價鍵，O、C(＝O)、OC(＝O)、C(＝O)O、OC(＝O)O、S(O)m、N(Rx)、C(＝O)N(Rx)、N(Rx)C(＝O)、N(Rx)S(O)m、S(O)mN(Rx)或N[S(O)mRx]S(O)m；其中m在每種情況下獨立地選自0、1或2；及Rx在每種情況下獨立地選自氫或C1-C8烷基；Ra在每種情況下獨立地選自(i)氫、鹵素、氰基或硝基；或(ii)C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8鹵代烷基、C2-C8烷基醚、3-至10-員雜環(huán)、單-或二-(C1-C8烷基)氨基或(3-至10-員雜環(huán))C1-C6烷基，每些基團中的每一個經(jīng)0至6個獨立地選自Rb的取代基所取代；及Rb在每種情況下獨立地選自羥基、鹵素、氨基、氨基羰基、氰基、硝基、酮基、COOH、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C8烷氧基、C1-C8烷基硫基、C1-C8烷基醚、C1-C8烷酰基、C1-C8烷酮、C1-C8烷?；趸?、C1-C8烷氧基羰基、C1-C8羥基烷基、C1-C8鹵代烷基、C1-C8氰基烷基、苯基C0-C8烷基、單-或二-(C1-C6烷基)氨基C0-C8烷基、C1-C8烷基磺?；?、單-或二-(C1-C8烷基)氨基磺?；?5-至7-員雜環(huán))C0-C8烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中W是CH，且Y和Z中的至少一個是N。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中Ar1是苯基或5-或6-員芳香族雜環(huán)，每個基團經(jīng)0至3個獨立地選自通式LRa所示基團的取代基所取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中Ar1是苯基或吡啶基，這些基團經(jīng)任選鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6鹵代烷氧基所取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物或鹽，其中Ar1是2-吡啶基，該基團在3-位置經(jīng)甲基、三氟甲基、氰基、氟或氯所取代。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中A1是CH或N。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物或鹽，其中A2、A3和A4是CR3，其中每個R3獨立地選自氫、鹵素、氰基、氨基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6羥基烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷?；?或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；騿?或二-(C1-C6烷基)氨基磺?；?br> 8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的化合物或鹽，其中A4是CH；A2及A3中的一個是CH，另一是CR3；和R3是鹵素、氰基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基磺?；騿?或二-(C1-C6烷基)氨基磺酰基。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物或鹽，其中A2是CH。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中V是C(＝O)、C(H)OH或O。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽類，其中R2是(i)氫或鹵素；或(ii)C1-C6烷基、-(CH2)nNH2、-(CH2)nNH(C1-C8烷基)、-(CH2)nN(C1-C8烷基)2、-(CH2)n(5-至8-員雜環(huán)烷基)、-(CH2)nOH或-(CH2)nO(C1-C6烷基)，其中，每個n是0、1、2或3；這些基團中的每一個經(jīng)0至4個獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基的取代基所取代。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物或鹽，其中R2是鹵素、C1-C6烷基、C2-C6烷基醚、單-或二-(C1-C6烷基)氨基甲基、嗎啉基甲基、哌嗪基甲基或哌啶基甲基，這些基團中的每一個經(jīng)0至4個獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基的取代基所取代。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中，化合物具有如下通式 其中Y、Z及B獨立地為CH或N；R5是鹵素、氰基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6鹵代烷氧基；A2及A3中的一個是CH，另一是CR3；及R3是鹵素、氰基、COOH、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6氰基烷基、C1-C6烷基磺?；騿?或二-(C1-C6烷基)氨基磺?；?；V是C(＝O)、C(H)OH或O；及R2是(i)氫或鹵素；或(ii)C1-C6烷基、-(CH2)nNH2、-(CH2)nNH(C1-C8烷基)、-(CH2)nN(C1-C8烷基)2、-(CH2)n(5-至8-員雜環(huán)烷基)、-(CH2)nOH或-(CH2)nO(C1-C6烷基)，其中，每個n為0、1、2或3；這些基團中的每一個經(jīng)0至4個獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基的取代基所取代。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物或鹽，其中Z是N。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物或鹽，其中R2是鹵素、C1-C6烷基、C2-C6烷基醚、單-或二-(C1-C6烷基)氨基甲基、嗎啉基甲基、哌嗪基甲基或哌啶基甲基，這些基團中的每一個經(jīng)0至4個獨立地選自鹵素、氰基、羥基、氨基、單-或二-(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基或C1-C6鹵代烷基的取代基所取代。
16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的化合物或鹽，其中B是N，R5是甲基、三氟甲基、氟、氯或氰基。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中所述化合物在體外辣椒素受體促效試驗中顯示無可檢測的促效劑活性。
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中所述化合物在辣椒素受體鈣移動試驗中的IC50值是1微摩爾或以下。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中所述化合物在辣椒素受體鈣移動試驗中的IC50值是100納摩爾或以下。
20.一種醫(yī)藥組合物，該組合物包含如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽，及生理學上可接受的載體或賦形劑。
21.一種減低細胞辣椒素受體鈣傳導的方法，該方法包括使表達辣椒素受體的細胞與如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或鹽類接觸，從而減低辣椒素受體的鈣傳導。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述細胞是在動物體內(nèi)接觸。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述細胞是神經(jīng)元細胞。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述細胞是尿道上皮細胞。
25.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述化合物在接觸過程中存在于動物的體液中。
26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述化合物是以1微摩爾或以下的濃度存在于動物血液中。
27.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述動物是人類。
28.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述化合物是經(jīng)口服給藥。
29.一種在活體外抑制香草酸類配體與辣椒素受體結(jié)合的方法，該方法包含在一定條件下在足夠可測定性地抑制香草酸配體與辣椒素受體結(jié)合的用量下，將如權(quán)利要求1所述的至少一個化合物或鹽與辣椒素受體接觸。
30.一種抑制香草酸配體與患者體內(nèi)辣椒堿受體結(jié)合的方法，該方法包含在足夠可測定性地抑制香草酸配體與體外表達克隆的辣椒素受體的細胞結(jié)合的用量下將表達辣椒素受體的細胞與如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或鹽接觸，從而抑制香草酸類配體與患者體內(nèi)辣椒素受體結(jié)合。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述患者是人類。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中化合物是以1微摩爾或更低的濃度存在于患者血液中。
33.一種治療患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)有反應的病癥的方法，該方法包括向病人給藥有效量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或鹽，從而緩解患者病癥。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述患者患有(i)曝露至辣椒素下，(ii)由于曝露至熱導致的燒傷或刺激，(iii)由于曝露至光下所導致的燒傷或刺激，(iv)由于曝露于催淚瓦斯、空氣污染或胡椒噴劑導致的燒傷、支氣管收縮或刺激，或(v)由于曝露在酸下導致的燒傷或刺激。
35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述病癥是哮喘或慢性阻塞性肺疾病。
36.一種治療患者疼痛的方法，該方法包含向患有疼痛的患者給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的至少一種化合物或鹽，從而緩解患者的疼痛。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述化合物是以1微摩爾或更低的濃度存在于患者血液中。
38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述患者是患有神經(jīng)病理性疼痛。
39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述疼痛是與選自如下癥狀有關(guān)的疼痛乳房切除手術(shù)后之疼痛癥候群、殘肢疼痛、幻想肢疼痛、口腔神經(jīng)病變性疼痛、牙痛、疹后神經(jīng)痛、糖尿病性神經(jīng)病變、反射交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、類風濕關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞(Guillain-Barre)癥候群、感覺異常性股痛、口腔燒灼癥候群、兩側(cè)周邊神經(jīng)病變、灼痛(causalgia)、神經(jīng)炎、神經(jīng)元炎、神經(jīng)痛、AIDS相關(guān)之神經(jīng)病變、MS相關(guān)之神經(jīng)病變、脊髓損傷相關(guān)之疼痛、手術(shù)相關(guān)之疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、頭痛、偏頭痛、絞痛(angina)、分娩、痔瘡、消化不良、沙爾科氏(Charcot′s)疼痛、腸脹氣、月經(jīng)痛、癌癥、暴露至毒液、腸激躁癥、發(fā)炎性腸部疾病與創(chuàng)傷。
40.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述患者是人類。
41.一種治療患者搔癢的方法，該方法包含向患者給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，從而緩解患者的搔癢。
42.一種治療患者咳嗽或打嗝的方法，該方法包含向患者給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，從而緩解患者的咳嗽或打嗝。
43.一種治療患者尿失禁或膀胱過動癥的方法，該方法向患者給藥治療有效量的如權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，從而緩解患者的尿失禁或膀胱過動癥。
44.一種促進肥胖患者體重減輕的方法，該方法包含向患者給藥治療有效量的如1所述的化合物或鹽，從而促進患者體重減輕。
45.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或鹽，其中所述化合物或鹽是經(jīng)放射性標記的。
46.一種測定樣品中辣椒堿受體是否存在的方法，該方法包含如下步驟(a)在容許化合物與辣椒素受體結(jié)合的條件下，使樣品與如權(quán)利要求1所述的化合物或鹽接觸；及(b)檢測結(jié)合在辣椒素受體上的化合物的量，從而測定樣品中是否存在辣椒素受體。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述化合物是如權(quán)利要求45所述的經(jīng)放射性標記的化合物，并且測定步驟包含如下步驟(i)將結(jié)合的化合物與未結(jié)合的化合物分離；及(ii)檢測樣品中是否存在結(jié)合的化合物。
48.一種包裝的醫(yī)藥制劑，該制劑包含(a)裝在容器中的如權(quán)利要求20所述的醫(yī)藥組合物；及(b)使用該組合物治療疼痛的說明。
49.一種包裝的醫(yī)藥制劑，該制劑包含(a)裝在容器中的如權(quán)利要求20所述的醫(yī)藥組合物；及(b)使用該組合物治療咳嗽或打嗝的說明。
50.一種包裝的醫(yī)藥制劑，該制劑包含(a)裝在容器中的如權(quán)利要求20所述的醫(yī)藥組合物；及(b)使用該組合物治療肥胖的說明。
51.一種包裝的醫(yī)藥制劑，該制劑包含(a)裝在容器中的如權(quán)利要求20所述的醫(yī)藥組合物；及(b)使用該組合物治療尿失禁或膀胱過動癥的說明。
52.根據(jù)權(quán)利要求1-20任一項所述的化合物或鹽在制備治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)有反應的病癥的藥物
53.根據(jù)權(quán)利要求52所述用途，其中，所述癥狀為疼痛、哮喘、慢性阻塞性肺病、咳嗽、呃逆、肥胖、尿失禁或膀胱過動癥、暴露至辣椒素下、因暴露至熱造成的灼傷或刺激、因暴露至光造成的灼傷或刺激、因暴露于催淚氣體、感染性制劑、空氣污染物或胡椒噴霧造成的支氣管收縮或刺激、或因暴露至酸造成的灼傷或刺激。
全文摘要
經(jīng)取代的5，12－二吖－苯幷蔥類似物在此提供是如式(I)所示，其中的變異在此描述。使用如此化合物為調(diào)節(jié)活體內(nèi)或活體外特定的受體活性的配體，及特別地有用于人體及家畜體內(nèi)結(jié)合病理受體活化病癥的治療。使用此化合物的醫(yī)藥組合物及方法提供以治療此等疾病，同時使用此配體亦為研究受體定位的方法。
文檔編號A61K31/44GK1953979SQ200580015229
公開日2007年4月25日 申請日期2005年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月11日
發(fā)明者T·M·考德威爾, K·J·霍杰茨, A·哈奇森 申請人:神經(jīng)能質(zhì)公司