專利名稱：一種靈芝孢子油及其超臨界制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥靈芝孢子油，屬中藥領域。同時還涉及該靈芝孢子油的CO2超臨界提取制備方法。
背景技術：
靈芝為擔子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，在我國已有悠久的藥用歷史，始載于《神農本草經》，把靈芝歸入上品；靈芝孢子是靈芝在成熟時期不斷從菌蓋噴射出的生殖細胞即靈芝的種子，近年來的研究表明，靈芝孢子在抗腫瘤、免疫調節(jié)、抗放射、調節(jié)神經、保護心血管系統(tǒng)、調節(jié)呼吸系統(tǒng)、促進消化功能等方面有顯著的藥理作用，靈芝孢子中主要含有三萜類、不飽和脂肪酸、多糖類、核苷、有機鍺、甾醇類、生物堿等有效成分，Kutoba等1982年首次從靈芝中分離得到三萜類化合物柫櫓ニ酇、B以來，迄今為止從靈芝中分離得到的三萜類化合物已達120余種，三萜類化合物是靈芝的一級代謝產物，有顯著的藥理活性；但靈芝孢子有堅韌的外殼，含有幾丁質、不溶性纖維和木質素，具有很強的耐腐蝕性，其中的有效成分溶出速度過于緩慢，不易為人體消化和吸收。
現(xiàn)有的靈芝孢子油CO2超臨界提取制備方法工藝專利多是先將靈芝孢子采用膨化、超微粉碎技術進行破壁粉碎，然后將破壁后的孢子粉濕法制粒，進行超臨界提取，但大都存在不足之處。
1、未充分考慮靈芝孢子油極易氧化酸敗。靈芝孢子油極易氧化酸敗，變味變質而無法應用。一般靈芝破壁孢子粉室溫暴露空氣中4～7天就會氧化酸敗而變味，在濕度大及藥粉中水分含量高時，更易氧化酸敗。專利申請CN1445346A中靈芝孢子采用膨化技術破壁，由于膨化溫度較高(80～140℃)，破壁后孢子粉內的油脂類物質暴露在空氣中，在有氧存在的情況下會被氧化、分解；采用氣流粉碎，溫度較高，對成分破壞嚴重；專利申請CN1586295A以乙醇溶液為黏合劑將靈芝孢子粉濕法制粒、專利申請CN1094766C以水、明膠、淀粉的混合物或其中一種為黏合劑將靈芝孢子粉濕法制粒，濕法制粒藥物與水直接接觸，還要經過高溫干燥，會破壞成分；所得孢子油中含水，既影響孢子油的純度，微量的水又易染菌而加速孢子油氧化酸敗，其中專利申請CN1445346A、CN1094766C均為含水產品，專利申請CN1586295A采用離心脫水，但少量水已高度分散油中，且二者密度差異不大，故很難除盡。
2、未考慮萃取釜濾板漏粉。CO2超臨界萃取是高壓設備，管路堵塞就會導致壓力異常升高而停機。因靈芝孢子本身粒徑僅10μm，破壁后更細小，而超臨界萃取釜濾板孔徑約20～25um，即使破壁孢子粉制粒，較快的壓力變化及較高的壓力均可使大量細粉，穿過濾板進入管路，不但影響孢子油的純度，油顏色變深，顯微鏡下檢查有大量孢子碎片，還會堵塞管路。
3、未充分優(yōu)化萃取條件。靈芝孢子油中不僅含大量不飽和脂肪酸等有效成分，而且還含有確切抗癌作用的靈芝酸等三萜類成分。超臨界萃取時對不同性質的成分應采用不同萃取條件，主要通過調節(jié)壓力來實現(xiàn)。由于這兩類成分的分子都較大且有一定極性，所以萃取壓力應較大，對三萜類成分則更應加大壓力。若同時兼顧兩者，就需像上述專利要求的條件，需要較高的萃取壓力(35--40MPa)，提取時間長一般4--30小時，國內現(xiàn)有的超臨界中試及大生產設備難以達到要求，很容易出現(xiàn)泄漏現(xiàn)象，也會縮短設備的使用壽命；由于同時兼顧兩者，油的收率尚可，但三萜類成分含量不高。
由于上述的缺點，我們需要進一步選擇更合理的生產工藝條件，既提高靈芝孢子油中有效成的含量及純度，又能提高得油率，并減少耗能、縮短時間而提高效率。。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種具有生理活性的靈芝孢子油及其適合工業(yè)生產的制備方法。
這種靈芝孢子油具有以下特征顯微鏡10個視野觀察，其中含靈芝孢子碎片數(shù)目不得多于10個；以比色法含量測定含有25～35％的總三萜，采用氣相色譜法測定含不飽和脂肪酸60～80％，孢子油的相對密度為0.85～1.0，折光率在25℃時為1.45～1.50、酸價15～25。
得到如此高品質的靈芝油是通過如下技術步驟實現(xiàn)的A、將靈芝孢子放入超微粉碎機中，超微粉碎破壁，得到靈芝孢子粉；B、超微粉碎后的靈芝孢子粉干法制粒，制成顆粒；C、將顆粒放入CO2超臨界萃取釜內，加入夾帶劑，進行超臨界萃??；D、從分離釜放出萃取物，除去水份及其他雜質，得到含三萜類成分的靈芝孢子油。
具體地講，步驟A中靈芝孢子粉是采用振動磨式超微粉碎機進行超微粉碎，至300目左右，得到破壁的靈芝孢子粉；步驟B中破壁的靈芝孢子粉采用干法制粒機，加5-10％預膠化淀粉干壓制粒，制得10～20目的顆粒；步驟C中進行CO2超臨界萃取時，以濾紙加紙漿板或濾紙加脫脂棉放入萃取釜中的濾板處加強過濾，先以萃取壓力25～30MPa，溫度35～40℃，萃取1～2小時，再加入藥材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一種為夾帶劑，繼續(xù)萃取0.5～1小時；分離釜1中分離壓力8～8.5MPa，溫度45～50℃；分離釜2中分離壓力5.5～6MPa，溫度30～35℃；步驟D的具體過程是從分離釜放出萃取物，減壓回收夾帶劑后，經8000～15000rpm離心除雜后，通過無水硫酸鈉除去水分，得到靈芝孢子油。
經過以上方法制得的靈芝孢子油，可以與其他油性藥物或脂溶性藥物配伍使用，制備成各種劑型，提高治療效果。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點1.采用振動磨式超微粉碎機進行超微粉碎30min，夾層通冷卻水冷卻，可達到低溫粉碎，避免粉碎過程中，破壁的靈芝孢子中的有效成分被氧化、分解。
2.超微粉碎后的靈芝孢子粉加入5-10％的預膠化淀粉混勻，采用LGJ-110干法制粒機干壓制粒機干壓制粒，制得10～20目的顆粒。可避免濕法制粒水分和高溫干燥對有效成分造成的破壞。
3.CO2超臨界萃取，工藝簡單、溫度低、CO2不與化學成分反應并且抑制孢子油的氧化酸敗。CO2超臨界萃取時，以濾紙加紙漿板或濾紙加脫脂棉放入萃取釜中的濾板處加強過濾，可阻擋孢子細粉穿過濾板。先以萃取壓力25～30MPa，溫度35～40℃，萃取1～2小時，主要提取孢子脂肪油，再加入藥材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一種為夾帶劑，繼續(xù)萃取0.5～1小時，主要提取三萜類成分，及提高收率，縮短時間。分離釜1，分離壓力8～8.5MPa，溫度45～50℃，主要收集清油；分離釜2，分離壓力5.5～6MPa，溫度30～35℃，收集油、水及夾帶劑等。。
4.靈芝孢子油中的三萜類大分子物質，需要較高的萃取條件才能提取出來，國內現(xiàn)有的超臨界設備難以達到要求，很容易出現(xiàn)泄漏現(xiàn)象，也會縮短設備的使用壽命；加入夾帶劑能從溶劑的密度、溶質與夾帶劑分子間的相互作用兩個方面影響溶質在超臨界流體中的溶解度和選擇性，可增加溶解度對溫度、壓力的敏感程度。經試驗以60～90％乙醇、甲醇、乙酸乙脂為夾帶劑，用量為孢子粉量的5～20％效果較好，可降低萃取壓力、縮短萃取時間、提高三萜類成分萃取效率。而萃取物中的夾帶劑容易減壓回收，且不損失孢子油。
5.從分離釜底部放出的萃取物，減壓回收夾帶劑后，經8000～15000rpm離心，可除去大量的水分和其他除雜，通過無水硫酸鈉進一步脫水，可避免少量水分的存在而影響孢子油的穩(wěn)定性，得到純度高、穩(wěn)定性好的靈芝孢子油。經萃取后的靈芝孢子粉，可采用水煎煮提取其中的多糖成分，不浪費藥材。
從中試結果也可以看出，按本發(fā)明工藝制備靈芝孢子油，其收率穩(wěn)定在25％～35％之間，其中以熊果酸計總三貼含量也在30％以上，且粉末雜質含量較低。由此可見，本發(fā)明制備工藝及制成的靈芝孢子油，均遠遠優(yōu)于同類產品。
具體實施例方式
實施例1取靈芝孢子5kg，放入超微粉碎機中，通冷卻水，超微粉碎成300目左右，取超微粉碎后的靈芝孢子粉加入5％的預膠化淀粉，混勻，放入干壓制粒機，制成18目的顆粒，放入超臨界CO2萃取釜內，將濾紙加漿板放入萃取釜中的濾板處，萃取壓力25MPa，溫度35℃，萃取60分鐘；再以95％乙醇為夾帶劑，加入250g，萃取60分鐘；分離釜1，分離壓力8MPa，溫度45℃；分離釜2，分離壓力5.5MPa，溫度30℃，從分離釜底部放出萃取物，得到淡黃色具有特殊氣味的油狀液體，減壓回收夾帶劑，經15000rpm離心除雜后，通過鋪有無水硫酸鈉濾層的漏斗除去水分，得油狀物1.356kg，其中含有以齊墩果酸計達33％的總三萜，孢子油的相對密度為0.88，折光率在25℃為1.46、酸價18。
實施例2取靈芝孢子5kg，放入貝利超微粉碎機中，通冷卻水，超微粉碎成300目，取超微粉碎后的靈芝孢子粉加入8％的預膠化淀粉，混勻，放入干壓制粒機，制成12目的顆粒，放入超臨界CO2萃取釜內，以濾紙加漿板放入萃取釜中萃取壓力30MPa，溫度40℃，萃取90分鐘；再以甲醇為夾帶劑，加入300g。萃取30分鐘；分離釜1，分離壓力8.5MPa，溫度50℃；分離釜2，分離壓力6MPa，溫度30℃，從分離釜底部放出萃取物，得到淡黃色具有特殊氣味的油狀液體，減壓回收夾帶劑，經15000rpm離心除雜后，通過無水硫酸鈉除去水分，得油狀物1.433kg，其中含有以齊墩果酸計達32％的總三萜，孢子油的相對密度為0.92，折光率在25℃為1.44、酸價22。
實施例3取靈芝孢子5kg，放入超微粉碎機中，通冷卻水，超微粉碎成300目左右，取超微粉碎后的靈芝孢子粉加入10％的預膠化淀粉，混勻，放入干壓制粒機，制成16目的顆粒，放入超臨界CO2萃取釜內，以脫脂棉加濾紙放入萃取釜中的濾板處，萃取壓力28MPa，溫度40℃，萃取120分鐘；再以乙酸乙酯為夾帶劑，加入1000g萃取45分鐘；分離釜1，分離壓力8MPa，溫度45℃；分離釜2，分離壓力6MPa，溫度35℃，含有靈芝孢子油的超臨界流體進入分離釜，分離釜1，分離壓力8MPa，溫度50℃；分離釜2，分離壓力6MPa，溫度30℃，從分離釜底部放出萃取物，得到淡黃色具有特殊氣味的油狀液體，減壓回收夾帶劑，經10000rpm離心除雜后，通過無水硫酸鈉除去水分，得油狀物1.583kg，其中含33％的總三萜，孢子油的相對密度為0.88，折光率在25℃為1.45、酸價24。
權利要求
1.一種靈芝孢子油，其特征在于顯微鏡10個視野觀察，其中含靈芝孢子碎片數(shù)目不得多于10個；以比色法含量測定含有25～35％的總三萜，采用氣相色譜法測定含不飽和脂肪酸60～80％，孢子油的相對密度為0.85～1.0，折光率在25℃時為1.45～1.50、酸價15～25。
2.一種制備如權利要求1所述的靈芝孢子油的CO2超臨界制備方法，其特征在于該方法分為以下幾個步驟A、將靈芝孢子放入超微粉碎機中，超微粉碎破壁，得到靈芝孢子粉；B、超微粉碎后的靈芝孢子粉干法制粒，制成顆粒；C、將顆粒放入CO2超臨界萃取釜內，加入夾帶劑，進行超臨界萃??；D、從分離釜放出萃取物，除去水份及其他雜質，得到含三萜類成分的靈芝孢子油。
3.根據(jù)權利要求2所說的靈芝孢子油的制備方法，其特征在于步驟A中靈芝孢子粉是采用振動磨式超微粉碎機進行超微粉碎，至300目左右，得到破壁的靈芝孢子粉。
4.根據(jù)權利要求3所說的靈芝孢子油的制備方法，其特征在于步驟B中破壁的靈芝孢子粉采用干法制粒機，加5-10％預膠化淀粉干壓制粒，制得10～20目的顆粒。
5.根據(jù)權利要求4所說的靈芝孢子油的制備方法，其特征在于步驟C中進行CO2超臨界萃取時，以濾紙加紙漿板或濾紙加脫脂棉放入萃取釜中的濾板處加強過濾，先以萃取壓力25～30MPa，溫度35～40℃，萃取1～2小時，再加入藥材量的5～20％的甲醇、乙醇、乙酸乙酯中的一種為夾帶劑，繼續(xù)萃取0.5～1小時；分離釜1中分離壓力8～8.5MPa，溫度45～50℃；分離釜2中分離壓力5.5～6MPa，溫度30～35℃。
6.根據(jù)權利要求5所說的靈芝孢子油的制備方法，其特征在于步驟D的具體過程是從分離釜放出萃取物，減壓回收夾帶劑后，經8000～15000rpm離心除雜后，通過無水硫酸鈉除去水分，得到靈芝孢子油。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種靈芝孢子油，屬中藥領域。該靈芝孢子在油顯微鏡10個視野觀察，其中含靈芝孢子碎片數(shù)目不得多于10個；以比色法含量測定含有25～35％的總三萜，采用氣相色譜法測定含不飽和脂肪酸60～80％，相對密度為0.85～1.0，折光率在25℃時為1.45～1.50、酸價15～25。同時本發(fā)明還公開了該靈芝孢子油的超臨界制備方法，該方法提取率更高、更有利于孢子油的穩(wěn)定，且適合工業(yè)生產。
文檔編號A61K36/074GK1931195SQ200510200529
公開日2007年3月21日 申請日期2005年9月12日 優(yōu)先權日2005年9月12日
發(fā)明者吳逸芳 申請人:吳逸芳