專(zhuān)利名稱(chēng)：注射用骨瓜多肽藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及注射用骨瓜多肽藥物組合物及其制備方法。更具體地，本發(fā)明涉及含有豬或牛骨多肽和甜瓜子多肽的注射用骨瓜多肽藥物組合物。本發(fā)明還涉及注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
骨瓜多肽提取物是用豬四肢骨和甜瓜子的提取物配制而成，祖國(guó)醫(yī)學(xué)中早有以豬或牛骨入藥，具有補(bǔ)虛贏、強(qiáng)筋骨，治風(fēng)濕四肢疼痛及筋骨冷痹等的作用，而甜瓜子有散結(jié)，消痛等作用，兩者配制用于散寒、祛風(fēng)濕、鎮(zhèn)痛，因而對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有治療作用。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)公開(kāi)了有關(guān)骨瓜多肽及其制備工藝。例如，CN1579540A公開(kāi)了一種注射用骨瓜多肽及其制備工藝。該骨瓜多肽包括多肽類(lèi)物質(zhì)和賦形劑，其中多肽類(lèi)物質(zhì)是從哺乳動(dòng)物四肢骨骼和葫蘆科植物甜瓜種子中提取而成，其重量份數(shù)為多肽類(lèi)物質(zhì)2.5-100，賦形劑0.625-90，多肽類(lèi)物質(zhì)分子量為3000-10000道爾頓，PH值為3.5-9.0。
該專(zhuān)利申請(qǐng)還公開(kāi)了骨瓜多肽的制備工藝，包括(1)取新鮮冷凍的哺乳動(dòng)物四肢骨，熱壓(35-150℃)，提取1-5次。調(diào)PH值至3.5-4.5，去沉渣，調(diào)堿性PH值至8.0-11.0，去沉渣，調(diào)中性PH后，用超濾膜超濾，相對(duì)截留分子量為3000-10000道爾頓，從制成骨提取液備用；(2)取甜瓜子，熱壓(35-150℃)，提取1-5次，合并提取液，去沉渣，超濾，相對(duì)截留分子量為3000-10000道爾頓，制成甜瓜子提取液備用；(3)將上述的骨提取液和甜瓜子提取液按31比例混合，制備骨瓜提取物溶液；(4)取骨瓜提取物溶液，加入賦型劑(甘露醇、聚乙二醇、葡聚糖、乳糖、甘氨酸及膠體物質(zhì))水溶液，冷凍干燥(板溫-30℃至50℃)，制劑重量分?jǐn)?shù)為多肽類(lèi)物質(zhì)2.5-100、賦型劑0.625-90、PH值為3.5-9.0的微黃色至淡黃色無(wú)定形粉末。
此外，現(xiàn)有技術(shù)中已公開(kāi)了有關(guān)鹿瓜多肽提取物或其制備工藝。例如，CN1470256A公開(kāi)了促進(jìn)骨折愈合和骨關(guān)節(jié)損傷修復(fù)的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。該專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)的組合物由鹿骨提取物和甜瓜子提取物與一種或多種醫(yī)藥上接受的載體或賦形劑組成的藥物組合物；鹿骨提取物和甜瓜子提取物分別是鹿骨和甜瓜子生藥原料經(jīng)過(guò)提取得到，鹿骨和甜瓜子生藥原料的重量比為1∶4至4∶1。
該專(zhuān)利申請(qǐng)還公開(kāi)了藥物組合物的制備方法，其包括(1)將新鮮鹿骨經(jīng)預(yù)處理后，在鹿骨(400-100Kg)中加等重量的水，于121℃的溫度下加熱提取3次；合并所得的水提溶液，用2M鹽酸調(diào)節(jié)PH值調(diào)到3.2得到酸沉淀后的提取液；加熱煮沸酸沉淀后的提取液，過(guò)濾除去雜質(zhì)并離心除去酸沉淀；收集濾液和離心上清后，加入氫氧化鈉溶液將PH調(diào)到8.5，從而得到所需的鹿骨提取液；(2)在不銹鋼容器內(nèi)，向清洗后甜瓜子(100-400Kg)中加等重量的水，于121℃的溫度下加熱提取3次；合并水提溶液，用2M鹽酸調(diào)節(jié)PH值調(diào)到3.2；加熱煮沸酸沉淀后的提取液，離心除去酸沉淀物；收集離心上清后，加入氫氧化鈉液PH調(diào)到8.3，從而得到所需的甜瓜子提取液；(3)混合步驟(1)和(2)得到的鹿骨提取液和甜瓜子提取液，加熱濃縮至原體積的1/3。將該濃縮液的PH調(diào)到7.2后，依次使用截流分子量為10,000和8,000的中空纖維柱進(jìn)行超濾處理，得到的混合液與一種或多種醫(yī)藥上接受的載體或賦形劑制成藥物組合物。
上述技術(shù)是以生藥原料重量比為配方組成的提取物及其制備方法，例如CN1579540A專(zhuān)利申請(qǐng)中采用哺乳動(dòng)物四肢骨提取物和甜瓜子提取物按3∶1制成骨瓜多肽提取物溶液，而CN1470256A采用重量比為1∶4至4∶1的鹿骨和甜瓜子作為生藥原料。由于生藥原料骨和甜瓜子存在產(chǎn)地和采集期上的差異，所含有的有效成份差異較大，以生藥原料重量比作配方，很難保證生產(chǎn)的每批骨瓜多肽提取液的有效成份含量一致，從而無(wú)法保證所生產(chǎn)的藥物質(zhì)量。
同時(shí)，由于很難做到每批提取條件的完全一致，因此即使同一產(chǎn)地、采集期的生藥所提有效成份也存在差異，以生藥原料重量比為配方組成，很難保證骨瓜多肽每批制劑的多肽含量一致。
上述技術(shù)分別采用8,000的中空纖維柱進(jìn)行超濾或采用10,000超濾膜超濾，不能有效去除提取液中的高分子量物質(zhì)(在藥品生產(chǎn)中，分子量大于5800的物質(zhì)稱(chēng)為高分子量物質(zhì))，極易引起變態(tài)反應(yīng)。
豬或牛骨提取物和甜瓜子提取物含有多種游離氨基酸，其為骨細(xì)胞合成BMPs、TGF-β、FGF等骨源性生物因子提供原料，促進(jìn)骨源性生物因子的合成。但大多數(shù)氨基酸在堿性溶液中易析出，而上述技術(shù)在提取過(guò)程中均采用堿性的pH值，均與國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)不符。
因此，現(xiàn)有技術(shù)中迫切需要提供一種有效成份保持穩(wěn)定的注射用骨瓜多肽以及相應(yīng)簡(jiǎn)化的生產(chǎn)工藝，注射用骨瓜多肽可以由不同產(chǎn)地和不同采集期的豬或牛骨和甜瓜子為原料，產(chǎn)品質(zhì)量不受提取工藝條件影響，安全有效，符合國(guó)家有關(guān)藥品標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明經(jīng)過(guò)多年努力研究和探索，解決了上述需求，完成了本發(fā)明。
本發(fā)明提供一種注射用骨瓜多肽藥物組合物，它含有豬或牛骨提取物、甜瓜子提取物和一種或多種賦形劑組成，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
本發(fā)明還提供一種注射用骨瓜多肽藥物組合物，它由如下制備方法制備，該方法包括如下步驟A)豬或牛骨提取物溶液的制備(1)豬或牛骨預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬或牛骨粉碎；(3)在碎豬或牛骨中加2倍重量以上的注射用水，121℃熱壓提取濾出獲得一次豬或牛骨提取液；(4)在一次提取后的豬或牛骨渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出獲得二次豬或牛骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬或牛骨提取液合并制成豬或牛骨提取液；
(5)將豬或牛骨提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，制得豬或牛骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子漂洗干凈；(2)在凈甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子提取液離心，收集上清離心液(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬或牛骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
本發(fā)明還提供一種注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備方法，其包括如下步驟A)豬或牛骨提取物溶液的制備(1)豬或牛骨預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬或牛骨粉碎；(3)在碎豬或牛骨中加2倍以上重量的注射用水，121℃熱壓提取濾出獲得一次豬或牛骨提取液；(4)在一次提取后的豬或牛骨渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出獲得二次豬或牛骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬或牛骨提取液合并制成豬或牛骨提取液；
(5)將豬或牛骨提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，制得豬或牛骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子漂洗干凈；(2)在凈甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬或牛骨提取液和步驟B)制備的甜瓜子提取液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
作為用于本發(fā)明的藥物組合物中豬或牛骨提取物和甜瓜子提取物的提取原料，使用豬或牛骨骼和葫蘆科植物甜瓜(Cucumis melo L.)的干燥成熟種子，經(jīng)分別提取后混合，并與一種或多種賦形劑混合制成本發(fā)明的藥物組合物。用于本發(fā)明的豬或牛骨骼優(yōu)選是豬或牛的四肢骨，更優(yōu)選豬四肢骨。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，在注射用骨瓜多肽藥物組合物中，豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1。
用作本發(fā)明的藥物組合物的賦形劑可以是右旋糖酐40、葡萄糖、乳糖、聚乙二醇、葡聚糖、甘氨酸等，考慮到對(duì)最終產(chǎn)品中多肽含量檢測(cè)的影響，其中優(yōu)選的賦形劑為右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。多肽總量與賦形劑的重量比通常為1∶2-10。
本發(fā)明的注射用骨瓜多肽藥物組合物可用于治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、骨折創(chuàng)傷修復(fù)及腰腿疼痛等疾病或癥狀。
雖然不打算受此限制，但我們認(rèn)為，本發(fā)明的藥物組合物中的豬或牛骨多肽是由豬或牛骨提取的，含有多種骨代謝的活性肽類(lèi)。具有調(diào)節(jié)骨代謝，刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷低矮謝，增加骨鈣沉積，防治骨質(zhì)疏松，具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用。
多肽類(lèi)骨代謝因子可有效促進(jìn)機(jī)體內(nèi)影響骨形成和吸收的骨源性生長(zhǎng)因子的合成，包括骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPS)，β-轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)等，從而具有多種生物活性。其主要藥理作用有促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、分化作用、趨化作用和溶骨活性。其中BMPS是一組酸性低分子量糖蛋白，作為一種高效骨誘導(dǎo)物質(zhì)，BMPS是間充質(zhì)細(xì)胞向骨系細(xì)胞分化的最初信號(hào)因子，能誘導(dǎo)血管周?chē)坞x的間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為不可逆性的骨系細(xì)胞，即軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞，從而促進(jìn)骨痂形成，誘導(dǎo)新骨形成，促進(jìn)骨折修復(fù)。此外，BMPS還可調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)成份的改變，并通過(guò)與TGF-β和FGF相互之間的協(xié)調(diào)作用更好地誘導(dǎo)新骨形成，使骨組織更成熟。TGF-β則是一族具有多種功能的蛋白多肽，對(duì)成骨細(xì)胞及成軟骨細(xì)胞有促進(jìn)分化或降低分化的雙重調(diào)節(jié)作用，與多種因子如細(xì)胞外基質(zhì)和其它分化調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子一起協(xié)同參與對(duì)細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)；TGF-β可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成，可以直接刺激成纖維細(xì)胞外基質(zhì)的合成，并對(duì)其合成的基質(zhì)降解有顯著抑制作用；對(duì)于成骨細(xì)胞，TGF-β可促進(jìn)其合成I型膠原、骨粘連素和骨橋蛋白；同時(shí)，TGF-β對(duì)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的作用表明，它即能緩解炎性反應(yīng)的破壞性，又能協(xié)助巨噬細(xì)胞來(lái)源的某些細(xì)胞因子在細(xì)胞組織修復(fù)中發(fā)揮作用。FGF是一組肝素粘合多肽，可刺激細(xì)胞的趨向移動(dòng)，增值和分化，增加合成膠原的細(xì)胞數(shù)量，促進(jìn)骨膠原蛋白及非膠原蛋白的合成，增加骨鈣素的合成。
甜瓜子提取物是從葫蘆科植物甜瓜(Cucumis melo L).的成熟干燥的種子經(jīng)特殊工藝提取而成，能降低骨折局部毛細(xì)血管通透性，減少炎性滲出，促進(jìn)局部血運(yùn)障礙的恢復(fù)；同時(shí)還能降低全血粘度及紅細(xì)胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循環(huán)，為骨細(xì)胞提供一個(gè)良好的血供環(huán)境；另外還能抑制前列腺素的釋放，達(dá)到止痛效果；在促進(jìn)骨折早期愈合中，甜瓜子提取物與補(bǔ)充的骨誘導(dǎo)多肽生物因子具有協(xié)同作用，促進(jìn)骨源性生長(zhǎng)因子的合成。
此外，本發(fā)明的骨瓜多肽藥物組合物富含多種游離氨基酸，為骨細(xì)胞合成BMPS，TGF-β，F(xiàn)GF等骨源性生物因子提供原料，促進(jìn)骨源性生物因子的合成，有機(jī)鈣、磷離子可參與鈣磷代謝、維持骨容量。因而可有效治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、各種類(lèi)型骨折創(chuàng)傷修復(fù)及腰腿疼痛等疾病或癥狀。
本發(fā)明的注射用骨瓜多肽藥物組合物的劑量為在用于肌肉注射時(shí)，一次10-25mg，日劑量為20-50mg，用適量注射用水溶解稀釋后肌肉注射；在用于靜脈注射時(shí)，每日50-100mg，用5％葡萄糖注射液或0.9％氯化鈉注射液250ml溶解稀釋后靜脈滴注。準(zhǔn)確劑量將由臨床醫(yī)生根據(jù)患者的年齡、體重、所治療的癥狀、患者身體狀況等因素確定，一般20-30日為一療程。本發(fā)明的骨瓜多肽提取物藥物組合物的包裝規(guī)格有10mg、25mg、50mg或100mg。
在本發(fā)明更具體的實(shí)施方案中，其提供一種注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備方法，其包括如下步驟A)豬四肢骨提取物溶液的制備(1)豬四肢骨在沸水中煮沸30分鐘后，除去筋膜及殘肉，完成預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬四肢骨粉碎至3cm以下，優(yōu)選1cm以下的碎骨；(3)在碎豬四肢骨中加2倍重量的注射用水，121℃熱壓提取2小時(shí)，濾出獲得一次豬四肢骨提取液；(4)在一次提取后的豬四肢骨渣中加入2倍重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取2小時(shí)，濾出獲得二次豬四肢骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬四肢骨提取液合并制成豬四肢骨提取液，放置過(guò)夜；(5)將豬四肢骨提取液以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)pH值6.0-6.5，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，制得豬四肢骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子用注射用水漂洗3-4次；
(2)在凈甜瓜子中加入2倍重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取2小時(shí)，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取2小時(shí)，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子多肽提取液以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)pH值至6.0-6.5，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬四肢骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬四肢骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1，賦形劑選自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖，多肽總量與賦形劑的重量比為1∶2-10。
步驟C)的制備藥物組合物的方法是制藥技術(shù)領(lǐng)域中已知的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員將根據(jù)所制備的劑型和選擇的賦形劑選取準(zhǔn)確的具體工藝方法和條件。
如上所述，本發(fā)明提供的注射用骨瓜多肽藥物組合物及其制備方法具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)以豬或牛骨多肽和甜瓜子多肽為計(jì)算單位，可以保證每批制劑多肽含量一致，批次差異可降至最低，保證產(chǎn)品質(zhì)量；(2)以豬或牛骨多肽和甜瓜子多肽為計(jì)算單位，降低或避免了因產(chǎn)地、采集期、提取條件差異所造成的最終產(chǎn)品含量差異；(3)預(yù)先粉碎豬或牛骨和制備甜瓜子勻漿，提高熱壓提取豬或牛骨多肽和甜瓜子多肽的提取率；(4)采用純粹的熱壓提取方法，避免酸或堿處理，提高有效成份的提取率；(5)采用分級(jí)超濾的方法，可有效去除提取物中存在的分子量超過(guò)5800的高分子量物質(zhì)，將變態(tài)反應(yīng)的可能性降至最低，提高了產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性；(6)采用右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖為賦型劑，能夠避免對(duì)多肽含量檢測(cè)所帶來(lái)的影響。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明附

圖1是本發(fā)明制備注射用骨瓜多肽藥物組合物的工藝流程示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明將借助如下實(shí)施例具體說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，應(yīng)理解的是，在說(shuō)明書(shū)上下文中的具體說(shuō)明并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的保護(hù)范圍由權(quán)利要求說(shuō)明。
實(shí)施例實(shí)施例1.豬四肢骨提取物溶液的制備將豬四肢骨置于沸水中煮沸30min，取出，剔除筋膜及殘肉，得凈豬四肢骨。取凈豬四肢骨，粉碎至小于1cm的碎骨備用。取碎骨60kg，加入120kg注射用水，在121℃熱壓提取2h，濾出一次提取液；再加入60kg注射用水，121-123℃熱壓提取2h，濾出二次提取液，合并濾液，放置過(guò)夜。取豬四肢骨提取液，離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘、15分鐘)，取上清，棄沉淀。取上清液，進(jìn)行分級(jí)超濾，100KD、10KD、6KD，每次取濾過(guò)液，棄濃縮液。取濾過(guò)液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)PH值6.0-6.5，用0.22μm濾膜除菌過(guò)濾，得豬四肢骨提取物溶液25L。
經(jīng)高效液相色譜法、福林酚法測(cè)定，存在豬四肢骨多肽，其含量為14.1mg/ml。
實(shí)施例2甜瓜子提取物溶液的制備取甜瓜子，置注射用水中，反復(fù)漂洗3-4次，空干水份，挑出雜物，得凈甜瓜子備用。取凈甜瓜子15kg，加30kg注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿。取甜瓜子勻漿，121℃熱壓提取2h，濾出一次提取液；再加入30kg注射用水，121℃-123℃熱壓繼續(xù)提取2h，濾出二次提取液，合并濾液，放置過(guò)夜。取甜瓜子提取液，離心(4000轉(zhuǎn)/分鐘、15分鐘)，取上清，棄沉淀。取上清液，進(jìn)行分級(jí)超濾100KD、10KD、6KD，每次取濾過(guò)液，棄濃縮液。取最終濾過(guò)液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)PH值6.0-6.5，0.22μm濾膜除菌過(guò)濾，得甜瓜子提取物溶液5.7L。
經(jīng)分光光度法、福林酚法測(cè)定，存在甜瓜子多肽，其含量為7.4mg/m1。
實(shí)施例3藥物組合物1制劑處方實(shí)施例1的豬四肢骨提取物溶液 200g(按豬四肢骨多肽計(jì))實(shí)施例2的甜瓜子提取物溶液 50g(按甜瓜子多肽計(jì))20％賦型劑溶液8000ml5％NaOH(或5％HCl) 適量注射用水 加至32000ml將實(shí)施例1制備的豬四肢骨提取物溶液和實(shí)施例2制備的甜瓜子提取物溶液按豬四肢骨多肽與甜瓜子多肽重量比4∶1比例混合，加入8000ml賦形劑(右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖)溶液，用適量5％NaOH或5％HCl調(diào)測(cè)溶液PH值至5.5-7.0后，補(bǔ)加注射用水至全量，通過(guò)罐裝、凍干、軋蓋等步驟，制成每支25mg的制劑。
實(shí)施例4藥物組合物2制劑處方實(shí)施例1的豬四肢骨提取物溶液75g(按豬四肢骨多肽計(jì))實(shí)施例2的甜瓜子提取物溶液 25g(按甜瓜子多肽計(jì))20％賦型劑溶液 8000ml5％NaOH(或5％HCl) 適量注射用水 加至32000ml除多肽提取物的用量不同外，藥物組合物如實(shí)施例3中所述制備，通過(guò)罐裝、凍干、軋蓋等步驟，制成每支10mg的制劑。
實(shí)施例5藥物組合物3制劑處方實(shí)施例1的豬四肢骨提取物溶液 200g(按豬四肢骨多肽計(jì))實(shí)施例2的甜瓜子提取物溶液 100g(按甜瓜子多肽計(jì))20％右旋糖酐40溶液 10500ml5％NaOH(或5％HCl) 適量注射用水加至42000ml除多肽提取物的用量不同外，藥物組合物如實(shí)施例3中所述制備，通過(guò)罐裝、凍干、軋蓋等步驟，制成每支50mg的制劑。
實(shí)施例6制劑有效成份測(cè)定1、多肽有效成份確定(1)取樣實(shí)施例3的制劑，加水制成每1ml中含多肽類(lèi)物質(zhì)5mg的溶液，取2ml，加雙縮脲試液(通過(guò)稱(chēng)取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉3.0g，加水250ml使溶解，在攪拌下加入10％氫氧化鈉溶液150ml，加水至500ml制備)4m1，室溫放置15分鐘，溶液顯紫紅色。
(2)根據(jù)《中國(guó)藥典2000年版二部附錄IV A》中所述的方法，用實(shí)施例3的制劑加水制成每1ml中含多肽類(lèi)物質(zhì)5μg的溶液，取2ml，照分光光度法測(cè)定，在258nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。
如上結(jié)果說(shuō)明，實(shí)施例3制劑的最大吸收鑒別項(xiàng)成立。
2、高分子量物質(zhì)含量測(cè)定按照《中國(guó)藥典2000年版二部附錄VD》中規(guī)定的高效液相色譜法測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用凝膠色譜柱(TSK gel2000SW 7.8mm×300mm，5μm)；流動(dòng)相為三氟醋酸-乙腈-水(0.05∶10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。理論板數(shù)按胰島素峰計(jì)算不得低于3000。
對(duì)照品溶液的制備取胰島素對(duì)照品(分子量5800)適量，加流動(dòng)相制成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
測(cè)試溶液的制備在實(shí)施例3的制劑中加流動(dòng)相制成每1ml中含多肽1mg的溶液，作為測(cè)試溶液。
測(cè)定法取對(duì)照品溶液和測(cè)試溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，將先于胰島素峰保留時(shí)間的峰視為高分子量物質(zhì)，按面積歸一化法計(jì)算，結(jié)果顯示，測(cè)試溶液的高分子物質(zhì)含量低于2.0％。
3、氨基酸含量測(cè)定用高效液相色譜分別鑒別并定量實(shí)施例3制劑中所含游離氨基酸，結(jié)果見(jiàn)表A。
表A注射用骨瓜多肽游離氨基酸檢查結(jié)果

如上結(jié)果顯示，注射用骨瓜多肽制劑含有18種游離氨基酸。
實(shí)施例7生產(chǎn)骨瓜多肽制劑中各批之間多肽總量的差異本實(shí)施例說(shuō)明在每批投入相同的生藥原料，以相同的工藝方法制備多肽提取物時(shí)，每批提取物中多肽總量的差異。
用實(shí)施例1的方法，投入相同重量的豬四肢骨，制備豬四肢骨提取物，其豬四肢骨多肽總量顯示于如下表格B中。
表B豬四肢骨提取物溶液成份分析

用實(shí)施例2的方法，投入相同重量的甜瓜子，制備甜瓜子提取物，其甜瓜子多肽總量顯示于如下表格C中。
表C甜瓜子提取物溶液成份分析

由表B結(jié)果可知，每批投入150Kg豬四肢骨，豬四肢骨多肽最大提取量與最小量差異達(dá)142g；由表C結(jié)果可知，每批投入100Kg甜瓜子，甜瓜子多肽最大提取量與最小量差異達(dá)69g。
此實(shí)施例說(shuō)明，若按照背景技術(shù)用生藥重量比進(jìn)行生產(chǎn)，不僅批間含量很大，而且最終注射用骨瓜多肽產(chǎn)品中豬四肢骨多肽與甜瓜子多肽也無(wú)確切比例。這就說(shuō)明，唯有用各自提取物中的豬四肢骨多肽和甜瓜子多肽有效成份的重量比控制生產(chǎn)注射用骨瓜多肽藥物組合物，才能夠保證最終制劑的含量差異最小。如下表D說(shuō)明用實(shí)施例5的方法制備的規(guī)格為25mg/支的不同批制劑間有效成份含量說(shuō)明。
表D注射液骨瓜多肽

如上表數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的方法可制備有效成份穩(wěn)定的制劑，保證了產(chǎn)品質(zhì)量，符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例8本發(fā)明的制劑治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果隨機(jī)選擇患有風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者50例，其中男29例、女21例；年齡15-68歲；病程3個(gè)月-15年；隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，其中治療組30例，對(duì)照組20例。臨床檢查血沉、C-反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、病變關(guān)節(jié)X射線檢查。
對(duì)照組給予常規(guī)用藥，治療組給予實(shí)施例3的注射用骨瓜提取物50-100mg，用0.9％氯化鈉注射液250ml溶解稀釋后靜脈滴注，每日1次，20天為一個(gè)療程，共治療2個(gè)療程，治療期間停用其它療法和藥物。
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)1.顯效受累部位疼痛消失，活動(dòng)功能改善或恢復(fù)正常，血沉恢復(fù)正常，X射線顯示骨質(zhì)病變有改善或無(wú)發(fā)展；2.有效受累部位疼痛減輕，活動(dòng)范圍增大，血沉降低；3.無(wú)效受累部位癥狀無(wú)改善；治療效果顯示于如下表E中。
表E本品治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床療效顯效 有效 無(wú)效總有效組別 例數(shù)例數(shù) ％ 例數(shù) ％ 例數(shù) ％ 例數(shù) ％治療組30 1963.3 9 30.026.7 2893.3對(duì)照組20 8 40.0 7 35.0525.0 1575.0表E結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑對(duì)風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有顯著的治療作用。
實(shí)施例9本發(fā)明制劑對(duì)治療增生性關(guān)節(jié)炎的結(jié)果隨機(jī)選擇患有增生性關(guān)節(jié)炎患者45例，其中男19例、女26例；年齡37-70歲；病程3個(gè)月-10年；分為治療組31例，對(duì)照組14例。
對(duì)照組給予常規(guī)用藥，治療組給予實(shí)施例5的注射用骨瓜提取物50-100mg，用0.9％氯化鈉注射液250ml溶解稀釋后靜脈滴注，每日1次，20天為一個(gè)療程，共治療2個(gè)療程，治療期間停用其它療法和藥物。
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)1.治愈疼痛消失，關(guān)節(jié)活動(dòng)正常，功能恢復(fù)；2.顯效疼痛明顯改善，關(guān)節(jié)活動(dòng)度增大，功能恢復(fù)大部分恢復(fù)；3.好轉(zhuǎn)癥狀減輕；4.無(wú)效主要癥狀無(wú)改善；療效結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示于如下表F中。
表F本品治療增生性關(guān)節(jié)炎臨床療效痊愈 顯效 好轉(zhuǎn)無(wú)效 總有效組別例數(shù)例數(shù) ％ 例數(shù) ％ 例數(shù) ％例數(shù) ％ 例數(shù) ％治療組 31 9 29.0 1238.7 825.82 6.5 29 93.5對(duì)照組 14 1 7.1 4 28.6 214.37 50.0 750.0表F結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑對(duì)增生性關(guān)節(jié)炎具有顯著的治療作用。
實(shí)施例10本發(fā)明制劑對(duì)治療急性腰扭傷、腿拉傷的效果隨機(jī)選擇急性腰扭傷患者27例、腿拉傷患者16例，分成兩組，其中治療組36例，對(duì)照組7例。
對(duì)照組給予常規(guī)用藥，治療組給予實(shí)施例3的注射用骨瓜提取物，一次25mg，一日2次，肌肉注射。5-7天為一個(gè)療程，治療期間停用其它療法和藥物。
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)1.痊愈疼痛完全消失、功能恢復(fù)、活動(dòng)自如；2.顯效疼痛明顯消失、功能基本恢復(fù)；3.有效疼痛有所減輕、功能略有恢復(fù)；4.無(wú)效治療前后無(wú)差別。
療效結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示于如下表G中。
表G本品治療急性腰扭傷、腿拉傷臨床療效痊愈顯效 有效無(wú)效 總有效組別例數(shù) 例數(shù) ％例數(shù) ％ 例數(shù) ％例數(shù) ％ 例數(shù) ％治療 3626 72.2 822.2 25.600 36100對(duì)照組 7 342.8 228.6 228.6 00 7 100表G結(jié)果表明，本發(fā)明的制劑對(duì)急性腰扭傷、腿拉傷有顯著的治療作用。
權(quán)利要求
1.一種注射用骨瓜多肽藥物組合物，它含有豬或牛骨提取物、甜瓜子提取物和一種或多種賦形劑組成，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
2.權(quán)利要求1的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1。
3.權(quán)利要求1或2所述的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中所述賦形劑選自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。
4.權(quán)利要求3所述的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中所述豬或牛骨是四肢骨。
5.一種注射用骨瓜多肽藥物組合物，它由如下制備方法制備，該方法包括如下步驟A)豬或牛骨提取物溶液的制備(1)豬或牛骨預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬或牛骨粉碎；(3)在碎豬或牛骨中加2倍重量以上的注射用水，121℃熱壓提取濾出獲得一次豬或牛骨提取液；(4)在一次提取后的豬或牛骨渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出獲得二次豬或牛骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬或牛骨提取液合并制成豬或牛骨提取液；(5)將豬或牛骨提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，制得豬或牛骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子漂洗干凈；(2)在凈甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取物合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子提取液離心，收集上清離心液(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬或牛骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
6.權(quán)利要求5所述的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1。
7.權(quán)利要求5或6所述的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中所述賦形劑選自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。
8.權(quán)利要求7所述的注射用骨瓜多肽藥物組合物，其中所述豬或牛骨是四肢骨。
9.一種注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備方法，其包括如下步驟A)豬或牛骨提取物溶液的制備(1)豬或牛骨預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬或牛骨粉碎；(3)在碎豬或牛骨中加2倍以上重量的注射用水，121℃熱壓提取濾出獲得一次豬或牛骨提取液；(4)在一次提取后的豬或牛骨渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出獲得二次豬或牛骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬或牛骨提取液合并制成豬或牛骨提取液；(5)將豬或牛骨提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，制得豬或牛骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子漂洗干凈；(2)在凈甜瓜子中加入2倍以上重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍以上重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子提取液離心，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬或牛骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。
10.權(quán)利要求9的方法，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1。
11.權(quán)利要求9或10所述的方法，其中所述賦形劑選自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖。
12.一種注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備方法，其包括如下步驟A)豬四肢骨提取物溶液的制備(1)豬四肢骨在沸水中煮沸30分鐘后，除去筋膜及殘肉，完成預(yù)處理；(2)將預(yù)處理后的凈豬四肢骨粉碎至1cm以下的碎骨；(3)在碎豬四肢骨中加2倍重量的注射用水，121℃熱壓提取2小時(shí)，濾出獲得一次豬四肢骨提取液；(4)在一次提取后的豬四肢骨渣中加入2倍重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取2小時(shí)，濾出獲得二次豬四肢骨提取液，與步驟(3)獲得的一次豬四肢骨提取液合并制成豬四肢骨提取液，放置過(guò)夜；(5)將豬四肢骨提取液以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至總體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)pH值6.0-6.5，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，制得豬四肢骨提取物溶液；B)甜瓜子提取物溶液的制備(1)將干燥成熟甜瓜子用注射用水漂洗3-4次；(2)在凈甜瓜子中加入2倍重量的注射用水，用膠體磨研磨成甜瓜子勻漿；(3)將甜瓜子勻漿在121℃熱壓提取2小時(shí)，濾出一次甜瓜子提取液；(4)在一次提取后的甜瓜子渣中加入2倍重量注射用水，繼續(xù)在121℃-123℃熱壓提取2小時(shí)，濾出二次甜瓜子提取液，與步驟(3)獲得的一次甜瓜子提取液合并制成甜瓜子提取液；(5)將甜瓜子提取液以4000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清離心液；(6)將離心液分別進(jìn)行100KD、10KD、6KD超濾，收集濾出液，減壓濃縮至原體積的10％，收取濃縮液，調(diào)節(jié)pH值至6.0-6.5，用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，制得甜瓜子提取物溶液；C)注射用骨瓜多肽藥物組合物的制備混合步驟A)制備的豬四肢骨提取物溶液和步驟B)制備的甜瓜子提取物溶液和一種或多種賦形劑制備藥物組合物，通過(guò)冷凍干燥技術(shù)制成凍干粉針，其中豬四肢骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至4∶1，賦形劑選自右旋糖酐40、葡萄糖或乳糖，多肽總量與賦形劑的重量比為1∶2-10。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種注射用骨瓜多肽藥物組合物，它含有豬或牛骨提取物、甜瓜子提取物和一種或多種賦形劑組成，其中豬或牛骨多肽與甜瓜子多肽的重量比為1∶1至6∶1。本發(fā)明還公開(kāi)了用本發(fā)明的方法制備的注射用骨瓜多肽藥物組合物，以及制備注射用骨瓜多肽藥物組合物的方法。本發(fā)明的制劑可以用不同產(chǎn)地和不同采集期的豬或牛骨和甜瓜子為原料，產(chǎn)品質(zhì)量不受提取工藝條件影響，安全有效，符合國(guó)家有關(guān)藥品標(biāo)準(zhǔn)。
文檔編號(hào)A61P19/00GK1742749SQ200510108158
公開(kāi)日2006年3月8日 申請(qǐng)日期2005年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月9日
發(fā)明者王金富 申請(qǐng)人:黑龍江迪龍制藥有限公司