專利名稱：重組人干擾素－γ脂質(zhì)體凝膠劑及其在治療尖銳濕疣中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥制品、食品及化妝品領(lǐng)域。特別涉及干擾素制品領(lǐng)域，尤其涉及重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑及其在治療尖銳濕疣中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
干擾素(IFN)是1957年被發(fā)現(xiàn)的，它是一類分泌性蛋白，具有廣譜抗病毒、抗增殖和免疫調(diào)節(jié)功能。根據(jù)產(chǎn)生干擾素細(xì)胞來(lái)源不同、理化性質(zhì)和生物學(xué)活性的差異，可分為α-1b型干擾素、β-干擾素和γ干擾素。目前所知，干擾素對(duì)約30種病毒性疾病和由病毒引起的腫瘤病均有一定療效，特別是γ干擾素具有雙向免疫調(diào)節(jié)的功能。目前干擾素廣泛采用的劑型有針劑和外用劑型，外用型的干擾素可以直接作用于病灶部位，使用便利；但是在應(yīng)用過(guò)程中需要解決的問(wèn)題是干擾素的穩(wěn)定性和透皮吸收。目前為了保持干擾素生物活性的穩(wěn)定性和改善干擾素的透皮吸收問(wèn)題，達(dá)到治療效果，一般使將干擾素用脂質(zhì)體包封起來(lái)，再制備成相應(yīng)的劑型或者直接應(yīng)用。直接應(yīng)用因?yàn)榕c皮膚或者黏膜不能很好的粘連，而大大降低了干擾素的治療效果?，F(xiàn)在有專利號(hào)為97109123.4的發(fā)明專利公開(kāi)了將用脂質(zhì)體包封后的干擾素在制備成凝膠劑。專利號(hào)為97109123.4的發(fā)明專利采用將凝膠和干擾素脂質(zhì)體組合后使其脫水成粉狀，使用前需要先用水全部溶解成凝膠水溶液再作為外涂藥物使用；同時(shí)，該種干擾素脂質(zhì)體凝膠在制備時(shí)需要將凝膠基質(zhì)與干擾素在0-4℃相混合，干燥后成為微粒粉狀的干擾素脂質(zhì)體凝膠劑。該發(fā)明制備工藝復(fù)雜，需要經(jīng)過(guò)凍干過(guò)程，此過(guò)程會(huì)降低干擾素的活性；使用時(shí)需要將凝膠劑用水溶解后才能使用，使用不方便。
在專利號(hào)為97109123.4的發(fā)明專利中也提到了利用干擾素治療尖銳濕疣。但是在整個(gè)說(shuō)明書中只是籠統(tǒng)的提到了干擾素脂質(zhì)體凝膠劑治療尖銳濕疣，并沒(méi)有說(shuō)明干擾素治療尖銳濕疣的作用機(jī)理。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種穩(wěn)定性好、透皮吸收好的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。
本發(fā)明的另一目的在于將上述重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑應(yīng)用于治療尖銳濕疣。
本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，其包含有包封于脂質(zhì)體中的干擾素和凝膠基質(zhì)；所述脂質(zhì)體包括下述重量百分比組分氫化十八磷酸膽堿 10-28％十八磷酸膽堿 1-3％二硬脂酰磷脂酰膽堿1-3％膽固醇2-10％琥珀酸鹽 10-30％甘露醇15-30％葡萄糖5-20％所述干擾素的含量為重組人干擾素-γ100-500萬(wàn)國(guó)際單位/毫升。
所述凝膠基質(zhì)包括下述重量百分比組分增稠劑2-10％保濕劑2-25％PH調(diào)節(jié)劑 1-15％透皮促進(jìn)劑1-5％防腐劑0.1-3％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5) 50-70％所述增稠劑選自卡伯姆-940型、卡伯姆-941型、卡伯姆-942型中的一種或幾種聯(lián)合使用；所述保濕劑選自丙三醇、丙二醇中的一種或者兩者聯(lián)合使用；所述PH調(diào)節(jié)劑選自三乙醇胺、氫氧化鈉溶液中的一種；所述透皮促進(jìn)劑為氮酮；所述防腐劑選自尼伯金乙酯、甲酯中的一種或者兩者聯(lián)合使用；上述重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑在治療尖銳濕疣中的應(yīng)用。
本發(fā)明利用一定配比的成膜劑和分散劑制成的脂質(zhì)體將所述干擾素包封，對(duì)干擾素起到了緩釋和控釋的作用，同時(shí)提高了干擾素的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體干擾素-γ的包封率達(dá)96％以上，試驗(yàn)表明脂質(zhì)體干擾素-γ的生物活性提高了7倍，儲(chǔ)存期延長(zhǎng)一年；另外由于形成脂質(zhì)體的成膜劑和分散劑與生物膜具有較大的相似性和組織相容性，易于被組織吸收，促進(jìn)了皮膚對(duì)干擾素的吸收。還有在凝膠基質(zhì)中由于加有透皮促進(jìn)劑，進(jìn)一步加快了干擾素透過(guò)皮膚屏障使藥物盡快起效；增稠劑起到調(diào)整產(chǎn)品粘稠度；整個(gè)粘膠基質(zhì)對(duì)脂質(zhì)體起到了穩(wěn)定作用，減少了脂質(zhì)體中干擾素的泄漏，進(jìn)一步的提高了干擾素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一取 氫化十八磷酸膽堿 10％十八磷酸膽堿 1％二硬脂酰磷脂酰膽堿 1％膽固醇 8％琥珀酸鹽 30％甘露醇 30％葡萄糖 20％將脂質(zhì)體成膜劑(氫化十八磷酸膽堿、十八磷酸膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、膽固醇按照組方比例10∶1∶1∶8)加入燒杯中，加入2-6倍量的氯仿溶解，將溶液加入茄型瓶中，在35-45℃水浴中加熱減壓旋轉(zhuǎn)干燥，揮盡有機(jī)溶劑，加入分散劑(琥珀酸鹽、甘露醇、葡萄糖溶液按照組方比例30∶30∶20)，分別用均質(zhì)機(jī)和高壓微射流儀M-110L型分散，控制脂質(zhì)體的粒徑小于10微米，Zeta電位絕對(duì)值大于30，保證脂質(zhì)體體系的穩(wěn)定。加入100-500萬(wàn)國(guó)際單位/毫升的重組人干擾素-γ緩緩震搖均勻。
取 卡伯姆-940型(或941型、942型) 10％丙三醇(或丙二醇) 25％三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液) 15％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5)42％氮酮 5％尼伯金乙酯(或甲酯) 3％將增稠劑(卡伯姆-940型或941型或942型))充分溶脹，分別加入保濕劑(丙三醇(或丙二醇))，PH調(diào)節(jié)劑(三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液))，透皮促進(jìn)劑(氮酮)，防腐劑(尼伯金乙酯(或甲酯))，磷酸鹽緩沖液(PH6.0-PH7.5)攪拌均勻。
將含有重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液，加入凝膠劑基質(zhì)中，緩緩攪拌均勻、滅菌，得重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。之后可以按照規(guī)格無(wú)菌分裝。
實(shí)施例二取 氫化十八磷酸膽堿28％十八磷酸膽堿3％二硬脂酰磷脂酰膽堿 3％膽固醇 10％琥珀酸鹽30％甘露醇 15％葡萄糖 11％按照實(shí)施一例的方法制成重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液。
取 卡伯姆-940型(或941型、942型)2.9％丙三醇(或丙二醇)25％三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液)1％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5) 70％氮酮1％尼伯金乙酯(或甲酯) 0.1％按照實(shí)施一例的方法制成凝膠基質(zhì)。
將含有重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液，加入凝膠劑基質(zhì)中，緩緩攪拌均勻、滅菌，得重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。之后可以按照規(guī)格無(wú)菌分裝。
實(shí)施例三取 氫化十八磷酸膽堿 28％十八磷酸膽堿 3％二硬脂酰磷脂酰膽堿3％膽固醇2％琥珀酸鹽 29％甘露醇30％
葡萄糖5％按照實(shí)施一例的方法制成重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液。
取 卡伯姆-940型(或941型、942型) 2％丙三醇(或丙二醇) 5％三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液) 15％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5) 70％氮酮 5％尼伯金乙酯(或甲酯)3％按照實(shí)施一例的方法制成凝膠基質(zhì)。
將含有重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液，加入凝膠劑基質(zhì)中，緩緩攪拌均勻、滅菌，得重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。之后可以按照規(guī)格無(wú)菌分裝。
實(shí)施例四取 氫化十八磷酸膽堿 28％十八磷酸膽堿 3％二硬脂酰磷脂酰膽堿 3％膽固醇 10％琥珀酸鹽 10％甘露醇 30％葡萄糖 16％按照實(shí)施一例的方法制成重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液。
取 卡伯姆-940型(或941型、942型) 10％丙三醇(或丙二醇) 2％三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液) 15％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5)65％氮酮 5％尼伯金乙酯(或甲酯) 3％按照實(shí)施一例的方法制成凝膠基質(zhì)。
將含有重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液，加入凝膠劑基質(zhì)中，緩緩攪拌均勻、滅菌，得重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。之后可以按照規(guī)格無(wú)菌分裝。
實(shí)施例五取 氫化十八磷酸膽堿 28％十八磷酸膽堿 3％二硬脂酰磷脂酰膽堿 3％膽固醇 10％琥珀酸鹽 16％甘露醇 20％葡萄糖 20％按照實(shí)施一例的方法制成重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液。
取 卡伯姆-940型(或941型、942型) 4％丙三醇(或丙二醇) 25％三乙醇胺(或氫氧化鈉溶液) 15％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5)50％氮酮 3％尼伯金乙酯(或甲酯) 3％按照實(shí)施一例的方法制成凝膠基質(zhì)。
將含有重組人干擾素-γ的脂質(zhì)體溶液，加入凝膠劑基質(zhì)中，緩緩攪拌均勻、滅菌，得重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑。之后可以按照規(guī)格無(wú)菌分裝。
尖銳濕疣是由人類乳頭瘤病毒引起的常見(jiàn)性傳播疾病，在成年人中患病率較高，在我國(guó)成年人中，發(fā)病率成上升趨勢(shì)。目前由于無(wú)法清除疣體周圍潛伏的病毒，復(fù)發(fā)率極高，達(dá)不到根治的目的，臨床以改善患者癥狀為主要治愈指標(biāo)。目前也有利用干擾素-α注射劑治療尖銳濕疣的，但是沒(méi)有報(bào)道利用重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑作為外用藥物治療尖銳濕疣的。重組人干擾素-γ治療尖銳濕疣的作用機(jī)理在于1)廣譜抗病毒作用當(dāng)機(jī)體受到病毒的入侵后，首先調(diào)動(dòng)非特異性防御系統(tǒng)來(lái)控制病毒，干擾素在此系統(tǒng)中起著核心作用，他可以對(duì)抗所有的病毒入侵，對(duì)于不同病毒類型，干擾素所表現(xiàn)的效價(jià)有所不同，而且干擾素可針對(duì)不同的病毒通過(guò)不同的途徑來(lái)干擾病毒的復(fù)制。其抗病毒活性主要通過(guò)激活2-5A合成酶、蛋白激酶及磷酸二脂酶使病毒mRNA降解，并抑制病毒蛋白翻譯。用PCR方法發(fā)現(xiàn)，在使用重組人干擾素-γ治療尖銳濕疣前后，HPV病毒的拷貝數(shù)量明顯下降，且與臨床療效呈正相關(guān)性。2)雙向免疫調(diào)節(jié)作用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，皮下注射重組人干擾素-γ，能夠明顯增強(qiáng)Ia抗原在表皮角朊細(xì)胞的表達(dá)，增加真皮淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)，減少表皮內(nèi)部漢斯細(xì)胞數(shù)，并能夠引起系統(tǒng)的免疫效應(yīng)，在尖銳濕疣患者皮損內(nèi)注射重組人干擾素-γ后，皮損內(nèi)發(fā)現(xiàn)有T細(xì)胞進(jìn)入疣體，以及HLA-DR、ICAM-1在角朊細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，已有研究表明，尖銳濕疣患者體內(nèi)的重組人干擾素-γ水平比較低下，上述作用表明干擾素-γ在宿主防御機(jī)理中起著重要的調(diào)控作用。在調(diào)節(jié)免疫的生物學(xué)活性方面，干擾素的三種亞型中，只有干擾素-γ獨(dú)具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，即可體哦阿姐白介素-1水平，又可拮抗白介素-4；不僅可用于免疫缺陷，也可以用于病毒感染性疾病及自身免疫低下疾病。本發(fā)明正式利用干擾素-γ的上述特性將其制備成可以穩(wěn)定釋放其藥效，且透皮性能優(yōu)異的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，用于治療尖銳濕疣。
下面是重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑的相關(guān)試驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，自制。
一、藥理及毒理性實(shí)驗(yàn)(一)藥理學(xué)研究實(shí)驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑0.6×104、1.0×104、10.0×104IU/支，每日分2次涂抹患處，連續(xù)7日，對(duì)豚鼠實(shí)用性單皰病毒性皰疹有明顯抑制作用，且其強(qiáng)度隨劑量增大而增強(qiáng)。
另實(shí)驗(yàn)證明，該凝膠劑0.9×104、1.5×104、15.0×104IU/支涂抹小鼠破損皮膚對(duì)其自主活動(dòng)無(wú)明顯影響麻醉貓破損皮膚涂抹該凝膠劑0.3×105、0.5×105、5.0×105IU/支，對(duì)其血壓、心率、呼吸頻率、呼吸深度及心電圖無(wú)明顯影響。
(二、)毒理學(xué)研究實(shí)驗(yàn)1、大鼠急性毒性試驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑最大給藥量2.78×107IU/kg，連續(xù)觀察7天，7天內(nèi)大鼠無(wú)一死亡，亦未出現(xiàn)異常反應(yīng)，該劑量相當(dāng)于臨床劑量的1.1×104倍，所以臨床用藥非常安全。
2、大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑按2.5×106IU/支劑量于大鼠破損皮膚處給藥，每日一次，連續(xù)28天(相當(dāng)于臨床擬用周期的4倍)。結(jié)果與對(duì)照組比較，對(duì)所觀察的各指標(biāo)(活動(dòng)、體重、飲食量、飲水量、血常規(guī)、血生化指標(biāo)、臟器系數(shù)、組織病理學(xué)檢查)均無(wú)明顯異常。連續(xù)給藥28天后再停藥觀察14天，上述各指標(biāo)均無(wú)明顯異常。
二、皮膚過(guò)敏和刺激性實(shí)驗(yàn)(一)、皮膚過(guò)敏試驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑按5.0×104IU/g，0.2g/次劑量，反復(fù)接觸皮膚，無(wú)見(jiàn)紅腫、壞死等過(guò)敏反應(yīng)。
(二)皮膚刺激性試驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑按5.0×104IU/g，1.0g/次劑量，連續(xù)7日涂抹皮膚，對(duì)豚鼠完整皮膚和破損皮膚無(wú)刺激性反應(yīng)。
三、對(duì)單皰病毒性皰疹實(shí)驗(yàn)重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑按0.6×104、1.0×104、10.0×104IU/支，每日分2次涂抹已形成皰疹模型的豚鼠皮患處，連續(xù)7日。給藥后1-2天，病情無(wú)明顯差異。1.0×104IU/支組和10.0×104IU/支組給藥后第3天開(kāi)始，0.6×104IU/支組從第4天開(kāi)始，病情恢復(fù)程度明顯好于模型組。與陽(yáng)性對(duì)照組阿昔洛韋軟膏比較，抗單純皰疹病毒作用更強(qiáng)。
權(quán)利要求
1.一種重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，其包含有包封于脂質(zhì)體中的干擾素和凝膠基質(zhì)；其特征在于，所述脂質(zhì)體包括下述組分氫化十八磷酸膽堿、十八磷酸膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、膽固醇、琥珀酸鹽、甘露醇、葡萄糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，其特征在于，所述組分的重量百分比為氫化十八磷酸膽堿10-28％十八磷酸膽堿1-3％二硬脂酰磷脂酰膽堿 1-3％膽固醇 2-10％琥珀酸鹽10-30％甘露醇 15-30％葡萄糖 5-20％
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，其特征在于，所述凝膠基質(zhì)包括下述重量百分比組分增稠劑2-10％保濕劑2-25％PH調(diào)節(jié)劑 1-15％透皮促進(jìn)劑1-5％防腐劑0.1-3％磷酸鹽緩沖液(PH6.8-PH7.5) 50-70％所述增稠劑選自卡伯姆-940型、卡伯姆-941型、卡伯姆-942型中的一種或幾種聯(lián)合使用；所述保濕劑選自丙三醇、丙二醇中的一種或者兩者聯(lián)合使用；所述PH調(diào)節(jié)劑選自三乙醇胺、氫氧化鈉溶液中的一種；所述透皮促進(jìn)劑為氮酮；所述防腐劑選自尼伯金乙酯、甲酯中的一種或者兩者聯(lián)合使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑，其特征在于，所述干擾素的含量為重組人干擾素-γ100-500萬(wàn)國(guó)際單位/毫升。
5.權(quán)利要求1-4中任意一個(gè)所述的重組人干擾素-γ脂質(zhì)體凝膠劑在制備治療尖銳濕疣藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種重組人干擾素－γ脂質(zhì)體凝膠劑，其包含有包封于脂質(zhì)體中的干擾素和凝膠基質(zhì)；所述脂質(zhì)體包括下述重量百分比組分氫化十八磷酸膽堿10－28％、十八磷酸膽堿1－3％；二硬脂酰磷脂酰膽堿1－3％；膽固醇2－10％；琥珀酸鹽10－30％；甘露醇15－30％；葡萄糖5－20％。上述重組人干擾素－γ脂質(zhì)體凝膠劑在治療尖銳濕疣中的應(yīng)用。本發(fā)明利用一定配比的成膜劑和分散劑制成的脂質(zhì)體將所述干擾素包封，對(duì)干擾素起到了緩釋和控釋的作用，同時(shí)提高了干擾素的穩(wěn)定性，脂質(zhì)體干擾素－γ的包封率達(dá)96％以上，試驗(yàn)表明脂質(zhì)體干擾素－γ的生物活性提高了7倍，儲(chǔ)存期延長(zhǎng)一年；另外由于形成脂質(zhì)體的成膜劑和分散劑與生物膜具有較大的相似性和組織相容性，易于被組織吸收，促進(jìn)了皮膚對(duì)干擾素的吸收。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1799626SQ20051010052
公開(kāi)日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月24日
發(fā)明者馬小玲, 胡振湘, 彭旺 申請(qǐng)人:麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司