專利名稱：環(huán)維黃楊星d的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及環(huán)維黃楊星D的提純和質(zhì)量控制方法，以及含有經(jīng)純化的環(huán)維黃楊星D的藥物組合物。
背景技術(shù)：
環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxine D)系從黃楊科植物小葉黃楊及其同屬植物中提取的生物堿有效單體，商品名為“黃楊寧”，其片劑收載于2000年版中國(guó)藥典，臨床上主要用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、心肌缺血、改善微循環(huán)障礙等(梁濤等，解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，17(1)35-38；沈祥春等，中藥藥理與臨床，2000，16(4)15-16)。
藥理實(shí)驗(yàn)及臨床研究表明，環(huán)維黃楊星D的安全范圍較窄(Liu XJ等，ActaPharmcol Sin，1981，2(2)101-107)，且是脂溶性生物堿，水溶性差，目前僅有黃楊寧片劑上市，不能滿足臨床對(duì)多種劑型的用藥要求，同時(shí)環(huán)維黃楊星D的穩(wěn)定性及生物利用度也尚需提高。因此，人們對(duì)環(huán)維黃楊星D進(jìn)行廣泛而深入的研究，例如通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾或制劑手段等，以期獲得活性更高、能滿足臨床對(duì)多種劑型的要求。這些技術(shù)例如，結(jié)構(gòu)修飾技術(shù)(藥學(xué)學(xué)報(bào)，2004，39(6)434-438)，進(jìn)一步純化技術(shù)(CN1064869A、CN1438236A)；成鹽技術(shù)(CN1456568A、CN1435429A、CN1456165A、CN1379040A)；改善其溶解和釋放性能的技術(shù)，例如分散片、速釋分散體、口腔崩解片、滴丸(尹麗等，中國(guó)新藥雜志，2002，11(12)939-942、CN1461751A、CN1394607A、CN1438011A)；緩、控釋制劑(CN1460478A、CN1435178A)等。
然而，采用傳統(tǒng)分離純化方法，即萃取、重結(jié)晶方法而得到的環(huán)維黃楊星D中，還含有與其結(jié)構(gòu)極為相似的環(huán)常綠黃楊堿C、環(huán)原黃楊堿C和環(huán)原黃楊堿A等不想要的生物堿成分。非常不利的是，這些不想要的生物堿的極性與環(huán)維黃楊星D極為接近，很難采用常規(guī)手段將它們徹底分離掉。人們對(duì)現(xiàn)有分離純化技術(shù)作了進(jìn)一步的改進(jìn)，但是仍不能有效地除去上述“其它生物堿”。例如，CN1379040A涉及環(huán)維黃楊星D的精制工藝，然而經(jīng)薄層色譜方法檢識(shí)，發(fā)現(xiàn)除環(huán)維黃楊星D斑點(diǎn)外，仍含有至少2個(gè)雜質(zhì)斑點(diǎn)；這表明該方法也只是簡(jiǎn)單地除去了按CN1033456C方法得到的產(chǎn)品中的少量雜質(zhì)，并不能夠達(dá)到除去除其他生物堿的目的。
徐新軍等(中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33(5)408-411)提及采用柱層析可以獲得環(huán)維黃楊星D對(duì)照品，但并沒(méi)有教導(dǎo)具體方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員獲得該文獻(xiàn)的啟發(fā)后，最直接做法就是采用高效液相制備柱獲得純度更高的環(huán)維黃楊星D。例如，CN1438236A即涉及以高效液相制備柱來(lái)純化環(huán)維黃楊星D的方法(聲稱含量在90％以上，但是并沒(méi)有提供含量測(cè)定方法)。遺憾的是，這種HPLC制備柱價(jià)格昂貴，上樣量小(例如小于1g)、重復(fù)使用率低、產(chǎn)率低(例如CN1438236A方法的產(chǎn)率約為15％)，不利于環(huán)維黃楊星D的工業(yè)化生產(chǎn)。
環(huán)維黃楊星D結(jié)構(gòu)不含雙鍵，在紫外及可見(jiàn)區(qū)均無(wú)吸收，直接采用高效液相色譜方法中的紫外檢測(cè)有一定困難，因此現(xiàn)有技術(shù)一直停留在各種衍生化HPLC水平上(例如紫外、熒光方法)。另外，采用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)檢測(cè)時(shí)，峰形差且難將雜質(zhì)與環(huán)維黃楊星D分離。最近，張正行等(中藥新藥與臨床藥理，2004，15(2)110-112)采用以末端波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)的HPLC測(cè)定環(huán)維黃楊星D含量，實(shí)現(xiàn)了一定的突破。該文獻(xiàn)中采用氨基色譜柱為固定相，以磷酸緩沖鹽為流動(dòng)相，210nm為紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。但是，耐用性較差，經(jīng)數(shù)次使用后色譜柱中的鍵合相流失嚴(yán)重，柱效下降快，而在以緩沖鹽為流動(dòng)相時(shí)情況尤為嚴(yán)重。
因此，迫切需要能工業(yè)化實(shí)施的環(huán)維黃楊星D提純方法和質(zhì)量控制方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明建立了不同于高效液相制備柱的方法，即采用適宜填料的柱層析法來(lái)實(shí)現(xiàn)純化環(huán)維黃楊星D的目的，以獲得高純度、高產(chǎn)率、低成本、可工業(yè)化大量生產(chǎn)的環(huán)維黃楊星D制備方法。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供提取純化環(huán)維黃楊星D的方法。該方法適宜于工業(yè)化大生產(chǎn)，其優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便、成本低、純度高、產(chǎn)率高，尤其是產(chǎn)率很高，例如環(huán)維黃楊星D含量大于90％的產(chǎn)品得率大于50％，優(yōu)選大于60％，更優(yōu)選大于70％(重量百分比)。
下面對(duì)發(fā)明提取純化方法作進(jìn)一步說(shuō)明a)選擇柱層析的各項(xiàng)條件層析柱徑高比的要求合適的層析柱內(nèi)徑層析柱高度多為1∶5-100，常選1∶10-50，更常選1∶10-20。
層析柱內(nèi)的填料包括硅膠、氧化鋁、ODS、聚酰胺、凝膠、大孔吸附樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂、硅藻土、纖維素等，優(yōu)選硅膠、ODS、氧化鋁、大孔吸附樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂，更優(yōu)選采用硅膠、氧化鋁。
填料的用量填料與待純化原料的重量比例，視原料雜質(zhì)的多少、填料分離度的優(yōu)劣和目標(biāo)純度的高低的不同而不同，一般可為10-2000∶1，常選20-500∶1，更常選50-200∶1。
填料的粒度可為10-500目，優(yōu)選100-300目，更優(yōu)選200-300目。
填料裝柱方法分為濕法和干法兩種裝柱方法，優(yōu)選濕法裝柱。
上樣方法分為濕法和干法兩種上樣方法，視原料和填料的性質(zhì)而定，我們選擇干法上樣。
洗脫方法分為自上而下洗脫或自下而上洗脫，優(yōu)選自上而下洗脫。
洗脫溶劑主要為有機(jī)溶劑，包括C1-C15醇、氯仿、石油醚、丙酮、正己烷、苯、甲苯、乙醚、乙酸乙酯、呋喃、四氫呋喃、吡啶或它們不同比例的混合體系；優(yōu)選為甲醇、乙醇、正丁醇、異丙醇、異戊醇、氯仿、乙醚、石油醚、丙酮、乙酸乙酯或它們不同比例的混合體系；更優(yōu)選采用石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇或它們的混合體系。另外，可在洗脫劑中加入少量堿性溶劑(例如氨水、二乙胺、三乙胺等)來(lái)改善分離度。
洗脫速度流速通?？刂圃?.01-10L/Kg.h，優(yōu)選0.05-5L/Kg.h，更優(yōu)選0.1-2L/Kg.h。(L/Kg.h指每公斤填料每小時(shí)流過(guò)的溶劑體積為1升)b)純化步驟待分離的樣品為含環(huán)維黃楊星D的黃楊寧粗品，按中國(guó)藥典2000年版一部第153頁(yè)的含量測(cè)定方法(測(cè)定總生物堿方法)，含量在大于30％的粗品均可以為本發(fā)明的起始原料。所述方法包括以下步驟1)選擇層析柱和填料；2)根據(jù)不同的填料，篩選與之相適宜的溶劑系統(tǒng)；3)按照不同的柱層析方法，將填料采用濕法或干法裝柱；4)將起始原料用適量的適宜溶劑溶解后，拌入適量填料混勻，蒸干，研細(xì)攪勻上樣；5)選用溶劑系統(tǒng)的不同比例，以一定的流速進(jìn)行梯度或等度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)濃縮，干燥，即可得高純度的環(huán)維黃楊星D。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法具有以下優(yōu)點(diǎn)1)成本低。不需要特殊的儀器設(shè)備，對(duì)洗脫劑的級(jí)別無(wú)過(guò)高要求，而制備柱為了防止污染或堵塞，常常需要預(yù)柱除雜質(zhì)或選擇一些高純度的價(jià)格很貴的色譜級(jí)別的洗脫液，一旦制備柱失效，其內(nèi)部的填料和外部的不銹鋼材料則不能再使用，并且還需配備價(jià)格昂貴的制備液相，成本遠(yuǎn)高于本方法。
2)收率高。例如環(huán)維黃楊星D含量大于90％的產(chǎn)品得率大于50％，優(yōu)選大于60％，更優(yōu)選大于70％，顯著高于現(xiàn)有技術(shù)。
3)純度高。本發(fā)明方法純化后的環(huán)維黃楊星D的純度大于90％，優(yōu)選為大于95％，更優(yōu)選為大于98％，最高可以獲得純度大于99％(例如99.5％)的樣品。在此所指的純度是按本發(fā)明檢測(cè)方法測(cè)定的。
4)操作簡(jiǎn)便。柱層析的洗脫、收集、濃縮、干燥等各項(xiàng)操作均比較簡(jiǎn)單，沒(méi)有繁瑣的操作和特殊的操作。
5)工藝很穩(wěn)定。本工藝平行操作得到的結(jié)果在誤差范圍內(nèi)相平行，具有良好的重現(xiàn)性，能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。
本發(fā)明方法，適于有效分離按2000年版中國(guó)藥典方法測(cè)得環(huán)維黃楊星D含量30％-90％的黃楊寧粗品。
另一方面，本發(fā)明提供了環(huán)維黃楊星D含量的檢測(cè)方法a)UV-高效液相色譜法以C18、C8、氰基、苯基以及陽(yáng)離子樹(shù)脂柱為固定相，紫外檢測(cè)器，測(cè)定環(huán)維黃楊星D的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)190-215nm；流動(dòng)相甲醇、乙腈、四氫呋喃、正丁醇、鉀鹽和鈉鹽的緩沖鹽、離子對(duì)試劑、酸堿調(diào)節(jié)劑(控制流動(dòng)相酸堿度在2.0-9.0)。
b)ELSD-高效液相色譜以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)測(cè)定環(huán)維黃楊星D的含量。固定相C18、C8、氰基、氨基以及陽(yáng)離子樹(shù)脂柱；流動(dòng)相甲醇、乙腈、四氫呋喃、正丁醇、酸堿調(diào)節(jié)劑(控制流動(dòng)相酸堿度在2.0-9.0)上述兩種方法的專屬性均良好，ELSD方法的靈敏度要高于紫外檢測(cè)。以本發(fā)明UV-高效液相色譜法為例，與2000年版中國(guó)藥典中的測(cè)定方法做了對(duì)比，結(jié)果表明該法的專屬性顯著高于藥典方法。
在另一方面，本發(fā)明提供含有高純度環(huán)維黃楊星D的藥物組合物，其中包括環(huán)維黃楊星D和適量藥用賦形劑，其中每個(gè)制劑規(guī)格含環(huán)維黃楊星D為0.01-50mg、優(yōu)選0.1-20mg、和更優(yōu)選0.2-10mg(按測(cè)定方法實(shí)施例1測(cè)得)；所述環(huán)維黃楊星D的純度大于80％、優(yōu)選大于88％、和更優(yōu)選大于92％。
本發(fā)明藥物組合物為口服或非腸道給藥劑型，可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的制劑技術(shù)制得。
所述口服劑型包括但不限于常規(guī)、速釋、緩/控口服制劑，如片劑、分散片、軟/硬膠囊劑、速釋分散體、口腔崩解片、滴丸、緩釋片、控釋膠囊或納米制劑(例如粒徑為0.1-300nm，95％粒子小于100nm)，適宜的示例藥用賦形劑包括但不限于填充劑(稀釋劑)如(預(yù)壓性)淀粉，糊精，糖粉，乳糖，甘露醇，纖維素類，各種鈉、鈣鹽，各種植物油、動(dòng)物油和礦物油，聚乙二醇等；崩解劑，如(交聯(lián))PVP，羧甲基淀粉鈉，羥丙纖維素等；潤(rùn)滑劑和助流劑，如硬脂酸鎂，二氧化硅(微粉硅膠)，滑石粉等。
所述非腸道給藥劑型例如包括注射液、凍干粉針和輸液劑，適宜的示例藥用賦形劑包括等滲調(diào)節(jié)劑，如氯化鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇；酸堿調(diào)節(jié)劑，包括有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸、氨基酸；支持劑，如甘露醇，山梨醇，木糖醇，氯化鈉，葡萄糖，乳糖，海藻糖，右旋糖酐等。
藥效學(xué)試驗(yàn)文獻(xiàn)指出黃楊寧的小鼠的半數(shù)致死量LD50為8.9mg/kg；CN02148452.X黃楊寧的小鼠的半數(shù)致死量LD50為13.93mg/kg；本發(fā)明黃楊寧的小鼠的半數(shù)致死量LD50為15.22mg/kg。
CN02148452.X連續(xù)3個(gè)月給Beagle犬靜脈注射黃楊寧的基本安全劑量為1.5mg/kg；本發(fā)明連續(xù)3個(gè)月給Beagle犬靜脈注射黃楊寧的基本安全劑量為2.0mg/kg。
研究表明，本發(fā)明方法制備的高純度的環(huán)維黃楊星D顯示出更好的藥效，尤其是毒性方面的表現(xiàn)更理想。
提取純化實(shí)施例1稱取1g環(huán)維黃楊星D含量50％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量100～200目硅膠，蒸干，研勻；按原料藥∶硅膠＝1∶120稱取100～200目硅膠，用乙酸乙酯濕法裝于一3×60cm的層析柱內(nèi)(硅膠×h＝3×46.5cm，1BV≈300ml)，再將研勻的樣品裝于硅膠層析柱上端，用乙酸乙酯∶無(wú)水乙醇∶氨水＝120∶2∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫20倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的環(huán)維黃楊星樣品，產(chǎn)率為55左右％。
提取純化實(shí)施例2稱取2g環(huán)維黃楊星D含量60％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量100～200目氧化鋁，蒸干，研勻；按原料藥∶氧化鋁＝1∶100稱取100～200目氧化鋁，用石油醚濕法裝于一3×60cm層析柱內(nèi)(氧化鋁×h＝3×32cm，1BV≈200ml)，再將研勻的樣品裝于氧化鋁層析柱上端，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝70∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫20倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為60％左右。
提取純化實(shí)施例3稱取2g環(huán)維黃楊星D含量70％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量100～200目氧化鋁，蒸干，研勻；按原料藥∶氧化鋁＝1∶100稱取100～200目氧化鋁，用石油醚濕法裝于一3×60cm層析柱內(nèi)(氧化鋁×h＝3×30.5cm，1BV≈200ml)，再將研勻的樣品裝于氧化鋁層析柱上端，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝100∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫5倍柱體積后，再用石油醚∶無(wú)水乙醇＝50∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫15倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為65％左右。
提取純化實(shí)施例4稱取7g環(huán)維黃楊星D含量70％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量100～200目氧化鋁，蒸干，研勻；按原料藥∶氧化鋁＝1∶100稱取100～200目氧化鋁，用石油醚濕法裝于一5×75cm層析柱內(nèi)(氧化鋁×h＝5×45cm，1BV≈700ml)，再將研勻的樣品裝于氧化鋁層析柱上端，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝100∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫5倍柱體積后，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝50∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫15倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為60％左右。
提取純化實(shí)施例5
稱取2g環(huán)維黃楊星D含量75％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量100～200目氧化鋁，蒸干，研勻；按原料藥∶氧化鋁＝1∶150稱取100～200目氧化鋁，用石油醚濕法裝于一3×60cm層析柱內(nèi)(氧化鋁×h＝3×40.5cm)，再將研勻的樣品裝于氧化鋁層析柱上端，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝50∶1的溶劑以0.6L/Kg.h流速洗脫20倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為70％左右。
提取純化實(shí)施例6稱取2g環(huán)維黃楊星D含量80％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量200～300目氧化鋁，蒸干，研勻；按原料藥∶氧化鋁＝1∶150稱取200～300目氧化鋁，用石油醚濕法裝于一3×60cm層析柱內(nèi)(氧化鋁×h＝3×42.5cm)，再將研勻的樣品裝于氧化鋁層析柱上端，用石油醚∶無(wú)水乙醇＝50∶1的溶劑以0.3L/Kg.h流速洗脫15倍柱體積，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為70％左右。
提取純化實(shí)施例7稱取1g環(huán)維黃楊星D含量85％左右的黃楊寧原料藥，用適量溶劑溶解，拌入適量200-400目的ODS，蒸干，研勻；按原料藥∶ODS＝1∶50稱取200～400目ODS，用5％甲醇水溶液(含0.2％三乙胺)濕法裝于一1.5×45cm層析柱內(nèi)(ODS的×h＝1.5×32.5cm)；將研勻的樣品裝于層析柱上端，以5％、10％、20％、30％、40％的甲醇水溶液(含0.2％三乙胺)進(jìn)行梯度洗脫，洗脫速度控制在1.0L/Kg.h左右，分段收集(1倍柱體積每段)，濃縮，干燥，得含量大于90％的樣品，產(chǎn)率為50％左右％測(cè)定方法實(shí)施例1按照提取純化實(shí)施例2方法獲得環(huán)維黃楊星D，采用具有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜法測(cè)定。色譜柱以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜分析柱；210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)；流動(dòng)相磺酸鈉鹽(用磷酸和三乙胺調(diào)節(jié)Ph)∶乙腈＝70∶30；流速0.8ml/min。去除空白溶劑，按面積歸一化法計(jì)算環(huán)維黃楊星D的含量為93％。


測(cè)定方法實(shí)施例2按照提取純化實(shí)施例5方法獲得環(huán)維黃楊星D，采用具有ELSD檢測(cè)器的高效液相色譜法測(cè)定。色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜分析柱；流動(dòng)相三乙胺與乙酸的混合液∶乙腈＝60∶40。去除空白溶劑，按面積歸一化法計(jì)算環(huán)維黃楊星D的含量為91％。

測(cè)定方法實(shí)施例3按照提取純化實(shí)施例4方法獲得環(huán)維黃楊星D，采用具有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜法測(cè)定。色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜分析柱；205nm為檢測(cè)波長(zhǎng)；流動(dòng)相KH2PO4緩沖鹽(用H3PO4調(diào)pH)∶乙腈＝80∶20。去除空白溶劑，按面積歸一化法計(jì)算環(huán)維黃楊星D的含量為99％。

制劑實(shí)施例1凍干注射劑按照提取純化實(shí)施例2方法獲得環(huán)維黃楊星D，稱取1.2g環(huán)維黃楊星D，用適量磷酸使環(huán)維黃楊星D溶解。加注射用水至800ml，攪勻，加甘露醇50g，攪拌使其完全溶解，加0.05％(w/v)的藥用炭，加熱攪拌，并保持30分鐘后。粗濾脫炭。濾液加注射用水至1000ml，攪拌均勻，測(cè)定pH3-5。藥液用微孔濾膜(φ0.22um)精濾，按測(cè)定方法實(shí)施例1檢測(cè)藥液中環(huán)維黃楊星D的含量，合格后，灌封(每支1ml)，冷凍，包裝。
制劑實(shí)施例2注射液按照提取純化實(shí)施例5方法獲得環(huán)維黃楊星D，稱取1.1g環(huán)維黃楊星D，用適量枸櫞酸使環(huán)維黃楊星D溶解。加注射用水至500ml，攪勻，加0.01％(w/v)的藥用炭，加熱攪拌并保持30分鐘后。粗濾脫炭。濾液加注射用水至1000ml，攪拌均勻，測(cè)定pH4-6。精濾，采用測(cè)定方法實(shí)施例1，按測(cè)定方法實(shí)施例1檢測(cè)藥液中環(huán)維黃楊星D的含量，合格后，灌封(每支2ml)，滅菌，包裝。
制劑實(shí)施例3葡萄糖輸液稱取注射用葡萄糖525g，加注射用水2L，溶解，用適量鹽酸調(diào)節(jié)pH為4-5之間，加0.05％(w/v)的藥用活性炭，加熱60℃，攪拌并保持30分鐘，粗濾脫炭，濾液中加入0.35g環(huán)維黃楊星D(按照提取純化實(shí)施例6方法獲得)，攪勻、待完全溶解后，加0.01％(w/v)的藥用炭，加熱攪拌并保持30分鐘后。粗濾脫炭。濾液補(bǔ)加注射用水至10L，攪拌均勻，測(cè)定pH4-5。藥液用微孔濾膜(φ0.22um)精濾，按測(cè)定方法實(shí)施例2檢測(cè)藥液中環(huán)維黃楊星D的含量，合格后，灌封(每瓶100ml)，滅菌，包裝。
制劑實(shí)施例4氯化鈉輸液稱取注射用氯化鈉90g，加注射用水2L，溶解，用適量鹽酸調(diào)節(jié)pH為5-6之間，加0.05％(w/v)的藥用活性炭，加熱60℃，攪拌并保持30分鐘，粗濾脫炭，濾液中加入0.35g環(huán)維黃楊星D(按照提取純化實(shí)施例6方法獲得)，攪勻、待完全溶解后，加0.01％(w/v)的藥用炭，加熱攪拌并保持30分鐘后。粗濾脫炭。濾液補(bǔ)加注射用水至10L，攪拌均勻，測(cè)定pH5-6。藥液用微孔濾膜(φ0.22um)精濾，按測(cè)定方法實(shí)施例1檢測(cè)藥液中環(huán)維黃楊星D的含量，合格后，灌封(每瓶100ml)，滅菌，包裝。
制劑實(shí)施例5軟膠囊按照提取純化實(shí)施例3方法獲得環(huán)維黃楊星D，稱取1.2g環(huán)維黃楊星D，用200g的花生油加熱使環(huán)維黃楊星D完全溶解，冷至室溫后加工成1000粒軟膠囊。
制劑實(shí)施例6滴丸取2g聚乙二醇6000、16g聚乙二醇4000加熱至熔融，混合均勻；稱取按照提取純化實(shí)施例3方法獲得的環(huán)維黃楊星D環(huán)維黃楊星D0.12g、甘露醇1g和0.05g鹽酸半胱氨酸得混合粉，經(jīng)微粉化過(guò)200目篩后，加入上述基質(zhì)中，以液體石蠟為冷卻劑，滴制法制成1000丸，干燥，即得。
制劑實(shí)施例7口崩片按照提取純化實(shí)施例4方法獲得環(huán)維黃楊星D，稱取0.6g環(huán)維黃楊星D，經(jīng)超微粉化使粒徑在5μm左右，加入25g甘露醇、25g噴霧干燥乳糖、50g微晶纖維素、30g羧甲基淀粉鈉、20g交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮PVPXL、5g微粉硅膠，混勻，采用干法直接壓片，制成1000片，即得。
制劑實(shí)施例8緩、控釋制劑稱取糊精50g，羥丙基甲基纖維素K1530g和按照提取純化實(shí)施例4方法獲得的環(huán)維黃楊星D 2.2g，混合均勻，用5％的PVP水溶液濕法制粒，干燥，各加入1％二氧化硅和硬脂酸鎂，整粒，混合均勻，按測(cè)定方法實(shí)施例2檢驗(yàn)中間體、確定片重制成1000片，壓片包裝，即得。
權(quán)利要求
1.環(huán)維黃楊星D的提純方法，包括以下步驟取黃楊寧粗品，用溶劑溶解后拌入適量填料中，混勻、蒸干、研細(xì)攪勻上樣；按填料∶黃楊寧粗品＝10-2000∶1(重量比)的比例，稱取適量填料，用溶劑濕法或干法裝于層析柱內(nèi)；將研勻的樣品裝于硅膠層析柱上端，用洗脫溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度或等度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)濃縮、干燥，即得高純度的環(huán)維黃楊星D，其中層析柱的內(nèi)徑與高度比為1∶5-100，所述填料選自硅膠、氧化鋁、ODS、聚酰胺、凝膠、大孔吸附樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂、硅藻土、纖維素。
2.如權(quán)利要求1的方法，所述層析柱的內(nèi)徑與高度比為1∶10-50，層析柱內(nèi)的填料選自10-500目的硅膠、ODS、氧化鋁、大孔吸附樹(shù)脂、離子交換樹(shù)脂。
3.如權(quán)利要求1或2的方法，所述層析柱的內(nèi)徑與高度比為1∶10-20，層析柱內(nèi)的填料選自100-300目的硅膠、氧化鋁，和洗脫溶劑選自C1-C15醇、氯仿、石油醚、丙酮、正己烷、苯、甲苯、乙醚、乙酸乙酯、呋喃、四氫呋哺、吡啶或它們不同比例的混合體系。
4.如權(quán)利要求3的方法，所述填料與黃楊寧粗品的比例為20-500∶1，和所述洗脫溶劑選自甲醇、乙醇、正丁醇、異丙醇、異戊醇、氯仿、乙醚、石油醚、丙酮、乙酸乙酯、或它們的混合體系。
5.如權(quán)利要求4的方法，所述洗脫溶劑中進(jìn)一步含有堿性溶劑。
6.如權(quán)利要求1-5之一的方法，采用UV-高效液相色譜法或者ELSD-高效液相色譜法測(cè)定，提取純化后環(huán)維黃楊星D的純度為90％～100％。
7.如權(quán)利要求--的方法，所述待分離樣品是按2000年版中國(guó)藥典方法測(cè)得的環(huán)維黃楊星D含量大于30％的黃楊寧粗品。
8.一種藥物組合物，含有按照權(quán)利要求1-7之一方法純化的環(huán)維黃楊星D和適量藥用賦形劑，其中含有0.01-50mg環(huán)維黃楊星D，和所述環(huán)維黃楊星D的純度大于80％。
9.如權(quán)利要求8的藥物組合物，含有0.01-50mg純度大于88％的環(huán)維黃楊星D。
10.如權(quán)利要求8的藥物組合物，含有0.2-10mg純度為92-99％的環(huán)維黃楊星D。
11.如權(quán)利要求8-10之一的藥物組合物，為口服或非腸道給藥劑型。
全文摘要
本發(fā)明涉及環(huán)維黃楊星D的提純和質(zhì)量控制方法，以及含有經(jīng)純化的環(huán)維黃楊星D的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1733792SQ200510097980
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月2日
發(fā)明者徐新盛, 文艷秋 申請(qǐng)人:徐新盛, 文艷秋