專利名稱：漢防己甲素固體脂質納米粒及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于納米中藥制劑領域，特別涉及一種中藥漢防己的有效成分漢防己甲素的固體脂質納米粒制劑及其制備方法。
背景技術：
固體脂質納米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)是在20世紀90年代初發(fā)展起來的一種可替代乳劑、脂質體和聚合納米粒的新型膠體給藥系統。它所含有的固體脂質成分是機體可利用、可生物降解的，與聚合納米粒相比，它的毒性更低。與脂質體相比，由于藥物被包封在固體脂粒的骨架中，不存在藥物在貯存過程中的泄漏問題。SLN還具有緩釋、控釋和靶向作用。靜脈給藥后，很快被網狀內皮系統吞噬而被動進入肝脾，達到肝靶向作用。
漢防己甲素(tetrandrine，TET)是從防己科千金藤屬植物漢防己干燥塊根中提取的一種雙芐基異喹啉生物堿，它具有廣泛的藥理作用。近年來研究發(fā)現其具有抗肝纖維化、降低門脈壓力的作用，所以在臨床上可用于大量的慢性肝炎、肝硬化患者。但漢防己甲素不溶于水，其普通制劑生物利用度不高，也無組織靶向作用，影響了該藥的治療效果；而且漢防己甲素安全范圍較小，毒副作用較大，使該藥在臨床的使用范圍受到一定的限制。
超聲法是最早用于制備固體脂質納米粒的技術，因操作簡單而被廣泛采用，特別適用于實驗室制備少量樣品。但當應用超聲法時，應考慮金屬粒子污染等缺點。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種漢防己甲素固體脂質納米粒及其制備方法，以提高漢防己甲素的生物利用度，增加肝靶向作用，減少用藥劑量和毒副作用，提高療效；其含有的磷脂成分還能起到抗脂質過氧化、保護肝細胞膜的作用，從而開發(fā)出高效的保肝、抗肝纖維化中藥制劑，該納米粒的粒徑達到納米級，且穩(wěn)定性和包封率均較高。
本發(fā)明的技術方案是這樣實現的本發(fā)明的漢防己甲素固體脂質納米粒制劑，用從中藥漢防己中提取的漢防己甲素作為藥物有效成分，以硬脂酸等脂質材料為載體，以豆磷脂等為乳化劑，采用超聲法和高壓乳勻法，將漢防己甲素包載于固體脂質納米粒中制得。
上述的漢防己甲素固體脂質納米粒制劑，從中藥漢防己中提取漢防己甲素作為藥物有效成分，以脂質材料為載體，以磷脂為乳化劑；漢防己甲素、脂質材料、乳化劑的重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％；脂質材料選自硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯其中之一；乳化劑選自豆磷脂、卵磷脂其中之一；以無水乙醇、乙酸乙酯有機溶劑其中之一為有機相，以蒸餾水為水相，以甘油、甘露醇其中之一為助乳化劑；有機相和水相的體積比為1∶2～6；助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5。
本發(fā)明的漢防己甲素固體脂質納米粒的制備方法，包括超聲法，適用于實驗室制備少量漢防己甲素固體脂質納米粒，包括以下步驟1)稱取漢防己甲素、脂質材料、乳化劑，其重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有機溶劑中，漢防己甲素溶解在有機溶劑中的濃度為0.3％～1％，w/v，形成有機相溶液；所述的脂質材料是硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化劑是豆磷脂或卵磷脂；所述的有機溶劑是指無水乙醇或乙酸乙酯；2)將助乳化劑分散于蒸餾水中形成水相，助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為75℃～85℃，攪拌速度為800～1500rpm；所述的助乳化劑是指甘油或甘露醇；3)將步驟1)制得的有機相溶液注入步驟2)制得的水相，有機相和水相的體積比為1∶2～6中，攪拌1～2h，使其成乳白色混懸液，形成初乳；4)將步驟3)制得的初乳超聲處理200～600秒，冷卻至室溫，用0.45μm以下微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，3℃-5℃密封保存。
本發(fā)明的漢防己甲素固體脂質納米粒的制備方法，還包括高壓乳勻法，可用于工業(yè)化生產大量漢防己甲素固體脂質納米粒，包括以下步驟1)稱取漢防己甲素、脂質材料、乳化劑的重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有機溶劑中，漢防己甲素溶解在有機溶劑中濃度為0.3％～1％，w/v，形成有機相溶液；所述的脂質材料是硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化劑是豆磷脂或卵磷脂；所述的有機溶劑是指無水乙醇或乙酸乙酯；2)將助乳化劑分散于蒸餾水中形成水相，助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為75℃～85℃，攪拌速度為800～1500rpm；所述的助乳化劑是甘油或甘露醇；
3)將1)制得的有機相溶液注入2)制得的水相，有機相和水相的體積比為1∶2～6中，攪拌1～2h，使成乳白色混懸液，形成初乳；4)將3)制得的初乳在高壓乳勻機上50～80MPa乳勻4～5次，制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，3℃-5℃密封保存。
本發(fā)明用0.45μm以下微孔濾膜過濾，可有效除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質。高壓乳勻法是制備固體脂質納米?？煽慷行У募夹g。其原理是用高壓推動液體通過狹縫(只有幾個微米寬)，流體在短距離內加速到很高的速率(大于1000km·h-1)，非常高的剪切力和空穴力撕開顆粒至納米尺度。高壓乳勻法發(fā)明可用于工業(yè)化生產，且制備的納米粒粒徑更小、更穩(wěn)定。同時，經過大量試驗，對制備工藝(攪拌時間、超聲時間等)、處方都進行了優(yōu)化，所以制備的漢防己甲素固體脂質納米粒具有較高的包封率。
本發(fā)明采用超聲法和高壓乳勻法，將漢防己甲素包載于固體脂質納米粒中，通過處方和工藝條件控制納米粒的粒徑，得到符合要求的制劑。
圖1是超聲法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的透射電鏡圖，×60000圖2是超聲法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體的Zeta電位圖；圖3是高壓乳勻法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的透射電鏡圖，×60000；圖4是高壓乳勻法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體的Zeta電位圖。
具體實施例方式
本發(fā)明是將從中藥漢防己中提取的有效成分漢防己甲素包載于固體脂質納米粒中，制成中藥的納米劑型。漢防己甲素是一種雙芐基異喹啉生物堿，不溶于水，溶解于多種有機溶劑，特別適合于制備成固體脂質納米粒的劑型。
本發(fā)明所用藥用制劑輔料均為市售且符合藥典標準，如漢防己甲素(98％，西安山川生物技術有限公司)，豆磷脂(北京奧博星生物技術責任有限公司)，硬脂酸(天津市天大化學試劑廠)，單硬脂酸甘油酯(上海三浦化工儀器有限公司)、膽固醇(上海政翔化學試劑研究所)、無水乙醇(西安化學試劑廠)，乙酸乙酯(西安化學試劑廠)，甘油(廈門魚肝油廠)。
漢防己甲素固體脂質納米粒的制備方法，較好的選擇為漢防己甲素純度98％以上，脂質材料選擇硬脂酸，乳化劑選擇豆磷脂，有機相選擇無水乙醇，助乳化劑選擇甘油，有機相和水相的體積比為1∶4～5，助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶2～3。
實施例1(1)稱取漢防己甲素70mg、硬脂酸60mg和豆磷脂150mg，在70℃水浴中溶解于10ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取15ml甘油分散于30ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1000rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌1.5h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理300秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為92nm(圖1超聲法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的透射電鏡照片，×60000)，Zeta電位為-21.11mv(圖2超聲法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體的Zeta電位)，包封率為95.27％。
實施例2(1)稱取漢防己甲素65mg、膽固醇45mg和卵磷脂120mg，在70℃水浴中溶解于9.5ml乙酸乙酯中，形成有機相溶液。
(2)量取15ml甘露醇分散于30ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為75℃，攪拌速度為800rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌1h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理400秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為97nm，Zeta電位為-20.74mv，包封率為94.88％。
實施例3(1)稱取漢防己甲素250mg、硬脂酸150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理600秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為95nm，Zeta電位為-22.50mv，包封率為92.34％。
實施例4(1)稱取漢防己甲素250mg、單硬脂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml乙酸乙酯中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘露醇分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理600秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為96nm，Zeta電位為-20.26mv，包封率為91.23％。
實施例5(1)稱取漢防己甲素250mg、三硬脂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理600秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為94nm，Zeta電位為-20.87mv，包封率為92.65％。
實施例6(1)稱取漢防己甲素250mg、三月桂酸甘油酯150mg和豆磷脂450mg，在75℃水浴中溶解于30ml乙酸乙酯中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘露醇分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳超聲處理600秒，攪拌至室溫，用0.45μm微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為91nm，Zeta電位為-21.85mv，包封率為94.14％。
實施例7(1)稱取漢防己甲素250mg、硬脂酸150mg和卵磷脂450mg，在65℃水浴中溶解于30ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上55MPa乳勻5次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為47nm(圖3高壓乳勻法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的透射電鏡照片×60000)，Zeta電位為-32.99mv(圖4高壓乳勻法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體的Zeta電位)，包封率為97.82％。
實施例8(1)稱取漢防己甲素700mg、三硬脂酸甘油酯600mg和豆磷脂1.5g，在70℃水浴中溶解于100ml乙酸乙酯中，形成有機相溶液。
(2)量取150ml甘露醇分散于350ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為85℃，攪拌速度為1500rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上50MPa乳勻4次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為52nm，Zeta電位為-30.64mv，包封率為96.78％。
實施例9(1)稱取漢防己甲素2.5g、三月桂酸甘油酯1.5g和豆磷脂4.5g，在75℃水浴中溶解于300ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取450ml甘油分散于950ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為76℃，攪拌速度為1500rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上80MPa乳勻5次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為59nm，Zeta電位為-28.71mv，包封率為96.54％。
實施例10(1)稱取漢防己甲素2.5g、硬脂酸1.5g和豆磷脂4.5g，在70℃水浴中溶解于300ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取450ml甘露醇分散于950ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1500rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上80MPa乳勻5次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為52nm，Zeta電位為-26.33mv，包封率為95.22％。
實施例11(1)稱取漢防己甲素2.5g、膽固醇1.5g和卵磷脂4.5g，在75℃水浴中溶解于300ml乙酸乙酯中，形成有機相溶液。
(2)量取450ml甘露醇分散于950ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1500rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上70MPa乳勻5次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為56nm，Zeta電位為-29.17mv，包封率為94.52％。
實施例12(1)稱取漢防己甲素250mg、單硬脂酸甘油酯150mg和卵磷脂450mg，在65℃水浴中溶解于30ml無水乙醇中，形成有機相溶液。
(2)量取45ml甘油分散于95ml蒸餾水中形成水相，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為80℃，攪拌速度為1300rpm。
(3)將步驟(1)制得的有機相注入步驟(2)制得的水相中，攪拌2h，使成乳白色混懸液，形成初乳。
(4)將步驟(3)制得的初乳在高壓乳勻機上55MPa乳勻5次。制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，4℃密封保存。
檢測該法制備的漢防己甲素固體脂質納米粒的平均粒徑為49nm，Zeta電位為-31.68mv，包封率為96.33％。
權利要求
1.一種漢防己甲素固體脂質納米粒制劑，其特征在于從中藥漢防己中提取漢防己甲素作為藥物有效成分，以脂質材料為載體，以磷脂為乳化劑；漢防己甲素、脂質材料、乳化劑的重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％；脂質材料選自硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯其中之一；乳化劑選自豆磷脂、卵磷脂其中之一；以無水乙醇、乙酸乙酯有機溶劑其中之一為有機相，以蒸餾水為水相，以甘油、甘露醇其中之一為助乳化劑；有機相和水相的體積比為1∶2～6；助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5。
2.一種漢防己甲素固體脂質納米粒的制備方法，用于制備漢防己甲素固體脂質納米粒，其特征在于，包括以下步驟1)稱取漢防己甲素、脂質材料、乳化劑，其重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有機溶劑中，漢防己甲素溶解在有機溶劑中的濃度為0.3％～1％，w/v，形成有機相溶液；所述的脂質材料是硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化劑是豆磷脂或卵磷脂；所述的有機溶劑是指無水乙醇或乙酸乙酯；2)將助乳化劑分散于蒸餾水中形成水相，助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為75℃～85℃，攪拌速度為800～1500rpm；所述的助乳化劑是指甘油或甘露醇；3)將步驟1)制得的有機相溶液注入步驟2)制得的水相，有機相和水相的體積比為1∶2～6中，攪拌1～2h，使其成乳白色混懸液，形成初乳；4)將步驟3)制得的初乳超聲處理200～600秒，冷卻至室溫，用0.45μm以下微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒雜質，得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，3℃-5℃密封保存。
3.一種漢防己甲素固體脂質納米粒的制備方法，制備漢防己甲素固體脂質納米粒，其特征在于，包括以下步驟1)稱取漢防己甲素、脂質材料、乳化劑的重量百分比為10％-30％∶10％-50％∶15％-60％，在65℃～75℃水浴中溶解于有機溶劑中，漢防己甲素溶解在有機溶劑中濃度為0.3％～1％，w/v，形成有機相溶液；所述的脂質材料是硬脂酸、膽固醇、單硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯或三月桂酸甘油酯；所述的乳化劑是豆磷脂或卵磷脂；所述的有機溶劑是指無水乙醇或乙酸乙酯；2)將助乳化劑分散于蒸餾水中形成水相，助乳化劑和蒸餾水的體積比為1∶1.5～5，置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為75℃～85℃，攪拌速度為800～1500rpm；所述的助乳化劑是甘油或甘露醇；3)將1)制得的有機相溶液注入2)制得的水相，有機相和水相的體積比為1∶2～6中，攪拌1～2h，使成乳白色混懸液，形成初乳；4)將3)制得的初乳在高壓乳勻機上50～80MPa乳勻4～5次，制得漢防己甲素固體脂質納米粒水分散體，3℃-5℃密封保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種漢防己甲素固體脂質納米粒及其制備方法，用從中藥漢防己中提取的漢防己甲素作為藥物有效成分，以硬脂酸等脂質材料為載體，以豆磷脂等為乳化劑，采用超聲法和高壓乳勻法，將漢防己甲素包載于固體脂質納米粒中制得。本發(fā)明制備的漢防己甲素固體脂質納米粒具有粒徑小、穩(wěn)定性和包封率高的特點，不僅可以提高藥物的生物利用度，而且可以改變藥物的體內過程，增加對肝、脾的靶向性，減少用藥劑量和毒副作用，提高療效。
文檔編號A61P1/00GK1813737SQ20051009645
公開日2006年8月9日 申請日期2005年12月1日 優(yōu)先權日2005年12月1日
發(fā)明者厲英超 申請人:西安交通大學