專利名稱：注射用薄芝糖肽凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及薄芝糖肽制劑，尤其涉及薄芝糖肽注射用制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
靈芝作為藥物首載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》內(nèi)。古代醫(yī)學(xué)家均認(rèn)為靈芝能治療多種疾病，是滋補強壯，扶正固本的珍貴藥物。靈芝俗稱靈芝草，民間有“靈芝治百病”等傳說。靈芝是一種珍貴的藥用真菌，屬于擔(dān)子菌綱，多孔菌科，靈芝屬。本屬約有100種，常見的有赤芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(G.japonicum)、薄樹芝(G.capense)等。古代稱之為″仙草″。靈芝是祖國中醫(yī)藥寶庫中珍貴的藥用植物。靈芝性溫，味淡，具有安神養(yǎng)精，滋補強壯，止咳平喘之功效，常作為補品出現(xiàn)于古書中。研究表明，靈芝主要成分為麥角甾醇、真菌溶菌酶、甘露醇、多肽、氨基酸等，具有扶正固本、整體調(diào)節(jié)、增強免疫、抑制腫瘤、健腦益腎、滋補強壯、解毒、保肝、強心、鎮(zhèn)靜、抗缺氧、抗驚厥、止咳平喘等多方面生物活性；用于心絞痛、動脈粥樣硬化、高血脂、急性病毒性肝炎、神經(jīng)衰弱、慢性支氣管炎等癥。
靈芝除了對人類三大死因的癌癥、腦溢血、心臟病有療效以外，還對胃腸、肝臟、腎臟、白血病、神經(jīng)衰弱、慢性支氣管炎、哮喘、過敏等疾病有顯著的療效。此外，靈芝還有強精、消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、解毒、利尿、凈血等多種作用和功效。靈芝不但具有很好的保健作用，而且對多種中老年慢性代謝性疾病有輔助治療作用。靈芝的抗癌研究也受到國內(nèi)外學(xué)者的矚目，靈芝抗癌藥品已成功上市，并取得了良好的治療效果。國內(nèi)外的藥理研究均證明，靈芝有明顯的抑制腫瘤作用，抑瘤率在50％～70％。靈芝還能顯著降低致死劑量的放射線照射動物或注射化療藥動物的死亡率。
目前我國靈芝多糖主要從靈芝子實體中提取。人工栽培靈芝子實體生產(chǎn)周期長，而采用深層培養(yǎng)的方法來獲得靈芝菌絲體和靈芝多糖，可縮短生產(chǎn)周期。北京賽生藥業(yè)生產(chǎn)的薄芝糖肽是以薄樹芝(G.capense)菌株經(jīng)液體深層發(fā)酵制得的靈芝屬薄樹芝[Ganoderma capense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體粉末中提取制成的，其主要成分為多肽和多糖。薄芝糖肽具有調(diào)節(jié)機體免疫功能的作用，對機體非特異性免疫、體液免疫及細(xì)胞免疫等均有促進作用；具有抗氧化作用，能夠清除氧自由基；此外，尚有促進核酸、蛋白質(zhì)生物合成等作用。薄芝糖肽適用于進行性肌營養(yǎng)不良、萎縮性肌強直，及前庭功能障礙、及高血壓等引起的眩暈和植物神經(jīng)功能紊亂、癲癇、失眠等癥。亦可用于腫瘤、肝炎的輔助治療。
林永奇、馬骉等研究了硼配基親和層析技術(shù)純化薄芝糖肽的方法(生物技術(shù)，2004，14，No.z1，31-32)。方法為用乙酸銨緩沖液考察不同pH條件下加入不同濃度NaCl對薄芝糖肽吸附解吸的影響，找出靜態(tài)最佳吸附解吸條件；依據(jù)Chase模型求出最大靜態(tài)吸附容量、吸附常數(shù)以及動態(tài)吸附糖及蛋白的容量.結(jié)果表明在pH8.2、NaCl濃度加至0.15mol/L條件下薄芝糖肽的吸附量達到最大，因此為最佳吸附解吸條件；在此條件下的最大靜態(tài)吸附容量qm＝55.57mg/g濕基，吸附常數(shù)Kd＝5.312g/L；動態(tài)吸附多糖容量為43.1mg/g濕基，動態(tài)吸附蛋白容量為10.3mg/g濕基。說明該系統(tǒng)使用的親和層析能有效地分離純化薄芝糖肽。
經(jīng)多年臨床應(yīng)用，已證明薄芝糖肽具有很好的療效。目前市場上經(jīng)靜脈給藥劑型只有水針劑，經(jīng)過國家批準(zhǔn)生產(chǎn)的只有薄芝糖肽注射液。該藥品在臨床應(yīng)用多年，療效可靠，市場用量大，但存在穩(wěn)定性差，澄明度不好，產(chǎn)品收率低，保存、運輸過程中易受溫度變化影響等問題。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明人成功地研制出薄芝糖肽凍干粉針劑，其極大地提高了藥物的穩(wěn)定性，在低溫和較高溫度下貯存均較穩(wěn)定，而且解決了澄明度不好的問題；并且提高了產(chǎn)品收率，運輸、攜帶方便。
因此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種注射用薄芝糖肽凍干粉針。
本發(fā)明的另一個目的在于提供該凍干粉針的制備方法。
根據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種注射用薄芝糖肽凍干粉針，其特點為所述凍干粉針劑是由薄芝糖肽濃縮液和凍干賦形劑制備得到；
所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～7；所述薄芝糖肽濃縮液是從薄樹芝菌絲體中提取制成，每毫升薄芝糖肽濃縮液含多糖以葡萄糖計不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg。
所述凍干賦形劑可以為氨基酸類，如甘氨酸、丙氨酸、組氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺等；也可以為甘露醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、多元醇肌醇、白蛋白、明膠、聚乙二醇等。
優(yōu)選的，所述凍干賦形劑為選自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸等的一種或多種。
更優(yōu)選的，所述凍干賦形劑為甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。
優(yōu)選的，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～1。
最優(yōu)選的，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.5。
本發(fā)明所述水針劑是薄芝糖肽加適當(dāng)穩(wěn)定劑制成的滅菌水溶液，所述凍干粉針劑是薄芝糖肽加適當(dāng)輔料制成的凍干粉針劑。
在本發(fā)明的較佳實施方式中，所述凍干粉針劑含多糖以葡萄糖(C6H12O6)計和多肽通常不低于標(biāo)示量的90％。
所述薄芝糖肽濃縮液是以薄樹芝(G.capense)菌株經(jīng)液體深層發(fā)酵制得的靈芝屬薄樹芝[Ganoderma capense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體粉末中提取制成的，其主要成分為多肽和多糖。
應(yīng)用靈芝屬的其它品種，如赤芝、紫芝等，也可制備得到包含多糖和多肽量與本發(fā)明所用薄芝糖肽濃縮液相似的糖肽提取液，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，由這些糖肽提取液制備得到的粉針劑也應(yīng)包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明提供的粉針劑可按照粉針劑的常規(guī)使用方法以有效劑量給予患者。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備方法，包括下述步驟A、從薄樹芝菌絲體中提取制成薄芝糖肽濃縮液，每毫升薄芝糖肽濃縮液含多糖以葡萄糖計不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg；B、將重量比為10∶0.3～7的薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑混合，分裝入瓶，冷凍干燥后，封口，即得注射用薄芝糖肽凍干粉針劑。
根據(jù)本領(lǐng)域的公知常識，用于制備凍干粉針劑的薄芝糖肽濃縮液應(yīng)為無菌無熱原，分裝入瓶應(yīng)在無菌條件下進行。
在制備薄芝糖肽凍干粉針劑時，提取薄芝糖肽濃縮液所用的薄樹芝菌絲體通常應(yīng)為便于工業(yè)生產(chǎn)的薄樹芝干燥菌絲體。
優(yōu)選的，所述凍干賦形劑為選自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸等的一種或多種。
更優(yōu)選的，所述凍干賦形劑為甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。
優(yōu)選的，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～1。
最優(yōu)選的，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.5。
在本發(fā)明中，所述薄芝糖肽濃縮液可以采用傳統(tǒng)的分離純化方法如熱水或乙醇沉淀法從靈芝屬薄樹芝干燥菌絲體粉末中提取制得；也可先制備薄芝糖肽粗提物，然后采用親和層析純化技術(shù)制備得到。
因此，在步驟A中，所述薄芝糖肽濃縮液可通過下述步驟制備得到a1、將薄樹芝干燥菌絲體粉碎，過篩，得菌絲體粉；a2、將菌絲體粉用92～94％乙醇回流提取3～6次，趁熱過濾，合并濾液，于70℃以下減壓濃縮至小體積，加水再進行減壓濃縮至蒸餾液中無乙醇為止，得乙醇浸液；a3、將上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取8～12次，收集水層液，并將醚層液加水洗滌，將水洗液合并在水層液中，得水層液；a4、將水層液置水浴中濃縮，驅(qū)醚，得薄芝糖肽濃縮液。
在步驟A中，所述薄芝糖肽濃縮液也可通過下述步驟制備得到b1、將薄樹芝干燥菌絲體粉碎，過篩，得菌絲體粉；b2、采用乙醇和水作為提取溶劑，從上述菌絲體粉提取分離得到薄芝糖肽粗提物；b3、采用硼配基親和層析法，從上述薄芝糖肽粗提物分離純化得到薄芝糖肽濃縮液。
步驟b3中所用硼配基親和層析法的具體工藝條件可參見林永奇、馬骉等公開的相關(guān)文獻(薄芝糖肽親和層析純化技術(shù)，生物技術(shù)，2004，14，No.z1，31-32)。
在步驟B中，所述冷凍干燥為真空冷凍干燥，并按照如下步驟進行先以每分鐘0.1～10℃速凍至-45℃，按凍干曲線保持真空，在真空狀態(tài)下以每小時0.5～10℃的速度緩慢升溫至35℃，停止加熱。
在本發(fā)明的一個具體實施方式
中，所述注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備方法如下1、制備薄芝糖肽濃縮液；2、按照制劑規(guī)格、批量及配方要求，準(zhǔn)備無菌無熱原的薄芝糖肽濃縮液；3、用注射用水溶解可藥用輔料，超濾除熱原；4、在百級潔凈區(qū)將上述原輔料按配方要求量取，置于無菌無熱原配液容器內(nèi)充分混勻；5、經(jīng)0.22μm濾膜除菌過濾；6、濾液準(zhǔn)確分裝于藥用內(nèi)包裝瓶，置真空干燥箱；7、冷凍干燥先以每分鐘0.1～10℃速凍至-45℃，按凍干曲線保持真空，在真空狀態(tài)下以每小時0.5～10℃的速度緩慢升溫至35℃，停止加熱；8、自然冷卻降至室溫后取出，立即壓蓋即得凍干粉針劑。
影響因素試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的薄芝糖肽凍干粉針前后無明顯變化，而水針的性狀和pH值發(fā)生了較明顯變化，說明粉針穩(wěn)定性明顯高于水針。
目前，薄芝糖肽注射液采用管制抗生素瓶包裝，瓶塞和注射液長期接觸，造成在澄明度檢查時檢查出許多纖維和玻點，導(dǎo)致產(chǎn)品收率較低，而本發(fā)明提供的凍干粉針避免了藥品與瓶塞的長期接觸，從而提高了澄明度，大大提高了產(chǎn)品收率。
本發(fā)明提供的注射用薄芝糖肽凍干粉針的優(yōu)點在于1、注射用薄芝糖肽凍干粉針劑與薄芝糖肽注射液(水針)等其它劑型相比具有穩(wěn)定性好，易運輸，易保存等優(yōu)點。
2、經(jīng)穩(wěn)定性試驗、影響因素試驗、加速試驗及室溫留樣觀察，與水針相比，凍干粉針質(zhì)量穩(wěn)定，長期放置樣品外觀、pH值、含量均無明顯變化。
3、凍干粉針60℃保存10天，才有分解產(chǎn)物，水針60℃保存2天，有分解產(chǎn)物產(chǎn)生。由此可見凍干粉針穩(wěn)定性提高，且抗降解能力優(yōu)于水針。
4、凍干粉針采用西林瓶，質(zhì)量穩(wěn)定，易于保管和運輸。
5、產(chǎn)品收率提高。
6、解決了薄芝糖肽水針劑澄明度不好的問題。
為了更好地理解本發(fā)明的本質(zhì)，下面通過對本發(fā)明較佳實施方式的描述，詳細(xì)說明但不限制本發(fā)明。
具體實施例方式
本發(fā)明所用試驗材料，如無特別說明，均為市售購買產(chǎn)品。
薄樹芝干燥菌絲體粉的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)實施例1經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)法，由薄樹芝菌株制備得到靈芝屬薄樹芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體(由北京賽而生物藥業(yè)有限公司提供)，經(jīng)粉碎機粉碎，過20目篩，得粉狀菌絲體。
按照薄樹芝干燥菌絲體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗，本發(fā)明的菌絲體粉符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下1、性狀本品為淡褐色和黃褐色顆粒狀粉末。
2、干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過8％。
3、毒性和抗菸堿作用檢查取干燥菌絲體30克，以90％乙醇回流提取2小時，趁熱過濾，繼以乙醇回流提取3次，合并乙醇提取液，于水浴上減壓濃縮至小體積，后再加入約1/3體積的水，繼續(xù)減壓濃縮至餾出液無乙醇為止。再加入乙醚適量萃取10次左右，將水層于水浴上濃縮，驅(qū)醚，將濃縮的提取液配成每ml相當(dāng)2克干燥菌絲體的溶液和每ml相當(dāng)1克干燥菌絲體的溶液，分別做毒性及抗菸堿作用檢查。
3.1抗菸堿作用取18～22克體重的小鼠20只，等分兩組，一組腹腔注射上述制備的每ml相當(dāng)1克的干燥菌絲體的溶液(劑量按每公斤體重40克)，對照組注射同體積的生理鹽水，之后每鼠均靜脈注射濃度為0.2mg/ml的菸堿(劑量按每公斤體重1mg)，記錄小鼠因強直性驚厥而死亡數(shù)。
※P＜0.05進行毒性測定，如在邊緣可重復(fù)一次，如在未注射菸堿前小鼠中有死亡，則可作適當(dāng)稀釋后再重復(fù)實驗。

3.2毒性測定用體重18～22克小鼠10只，腹腔注射上述每ml相當(dāng)于2克干燥菌絲體溶液(劑量按每公斤40克)于24小時內(nèi)，小鼠死亡數(shù)不得過5只。
薄芝糖肽濃縮液的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
實施例2薄芝糖肽濃縮液的制備方法一將薄樹芝菌株經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)法制得的靈芝屬薄樹芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體經(jīng)粉碎機粉碎，過20目篩，得粉狀菌絲體。取30g菌絲體粉，加入92～94％乙醇回流2小時，趁熱過濾。再繼以乙醇回流提取3次，合并乙醇提取液，于水浴上減壓濃縮至小體積后，再加入約1/3體積的水，再減壓濃縮至蒸餾液用乙醇比重計測定比重為0止。放冷，加入乙醚適量萃取約10次左右，棄去中間層，收集醚層及水層。將水層于水浴上濃縮，驅(qū)醚，即為濃縮的薄芝注射液部分，取濃縮液配成100％和200％兩種濃度各5ml，進行生物檢查。
方法二取檢驗合格的干燥菌絲體經(jīng)粉碎機粉碎，過20目篩，得粉狀菌絲體。用5倍量、4倍量、3倍量的92～94％乙醇回流提取四次，每次回流2小時，趁熱過濾。合并濾液，于70℃以下減壓濃縮至小體積，加水再行減壓濃縮至蒸餾液中無乙醇為止，得乙醇浸液。將上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取至醚層顏色較淺，收集水層液，并將醚層液加少量水洗滌，水洗液亦合并于水層液中，得水層液。將水層液置水浴中濃縮，驅(qū)醚，得薄芝糖肽濃縮液，按薄芝糖肽濃縮液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗。
實施例3薄芝糖肽濃縮液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照薄芝糖肽濃縮液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗，本發(fā)明的薄芝糖肽濃縮液符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下本品系用薄樹芝菌株，經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)法制得的靈芝屬薄樹芝[GanodermaCapense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體提取制得的溶液，每毫升溶液含多糖以葡萄糖(C6H12O6)計不得低于2.5mg，多肽不得低于0.5mg。
1、性狀本品為淡黃色至淡棕黃色的澄明液體。
2、鑒別(1)取本品1ml，加蒽酮溶液(取蒽酮0.2g，加硫酸100ml使溶解；臨用新配)5ml，置水浴放置，溶液呈藍綠色。
(2)取本品2ml，加茚三酮約10mg，搖勻，滴于濾紙上，熱風(fēng)吹干，應(yīng)出現(xiàn)藍紫色。
(3)取本品10ml，小火加熱濃縮至約2ml，冷卻至室溫后，加碘化鉍鉀試液2滴，即產(chǎn)生橙紅色或紅棕色的沉淀。
3、檢查pH值取本品，用注射用水稀釋至含多糖約2.5mg/ml或含多肽0.5mg/ml，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VI H)，應(yīng)為5.0～7.0。
蛋白質(zhì)取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液1ml，搖勻，溶液不得產(chǎn)生渾濁。
鞣質(zhì)取本品1ml，加4％明膠溶液2～3滴，搖勻，溶液不得產(chǎn)生渾濁。
異常毒性取本品，用注射用水稀釋至含多肽約0.5mg/ml或含多糖2.5mg/ml，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI C)，按靜脈法給藥，應(yīng)符合規(guī)定。
細(xì)菌內(nèi)毒素取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI E)，每1mg多肽所含的細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)小于10EU，每1mg多糖所含的細(xì)菌內(nèi)毒素應(yīng)小于2EU。
4、含量測定多肽量取本品適量，加水制成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作為供試品溶液。按照福林酚測定法(見實施例4)測定，從回歸方程中求出多肽含量。
多糖參比溶液的制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖約0.1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖勻。
供試品溶液的制備精密量取本品，加水稀釋每1ml約含0.0375mg的溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取參比溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，分別置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述5個濃度的參比溶液各1.0ml，另取水1.0ml，作空白，分別置具塞試管中，置于冰水浴中，分別精密加入蒽酮溶液5.0ml，搖勻，置水浴中反應(yīng)10分鐘，取出，用冷水冷卻至室溫，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IV B)，在620nm的波長處測定吸收度，以測得吸收度與其對應(yīng)的濃度進行回歸方程計算。測定法精密量取供試品溶液1.0ml，置具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下自“置于冰水浴中，分別精密加入蒽酮溶液5.0ml”起，依法測定吸收度，從回歸方程中計算多糖的含量。
5、類別免疫調(diào)節(jié)藥。
6、貯藏避光，低溫保存。
實施例4福林酚測定法試劑堿性銅試液取氫氧化鈉10g，碳酸鈉50g，加水400ml使溶解，作為甲液；取酒石酸鉀0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸銅0.25g，加水30ml使其溶解將兩液混合作為乙液。
臨用前，合并甲、乙兩液，并加水至500ml。
操作法對照溶液的制備取牛血清白蛋白對照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
供試品溶液的制備照各品種項下規(guī)定的方法制備。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加入堿性銅試液1.0ml，搖勻，各加入福林酚試液(取福林試液中的貯備液1→16)4.0ml，立即混勻，置55℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘，置冷水浴10分鐘，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IV B)，在650nm的波長處測定吸收度；以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與相對應(yīng)的吸光度計算回歸方程。
測定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入堿性銅試液”起，依法測定，從回歸方程計算多肽的含量，并乘以稀釋倍數(shù)，即得。
注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)實施例5注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備制備本發(fā)明注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的具體過程和步驟如下1、薄芝糖肽濃縮液的制備參照實施例2的方法，并按照制劑規(guī)格、批量及配方要求，準(zhǔn)備無菌無熱原的薄芝糖肽濃縮液；2、配液準(zhǔn)備各種配液用品準(zhǔn)備齊全；量取液體量取處方量的薄芝糖肽濃縮液(按成品計算)，二人復(fù)核；輔料配制稱取藥用輔料甘露醇適量，用注射用水溶解至終濃度為10％，超濾除熱原；除菌過濾在百級潔凈區(qū)將上述原輔料和稀釋液按配方要求量取，置于無菌無熱原配液容器內(nèi)充分混勻；過0.22um濾膜；無菌藥品的藥液從配制到除菌過濾的時間間隔應(yīng)不超過3小時，檢查半成品含量、pH及細(xì)菌內(nèi)毒素等，清場。
3、灌裝試車裝好機器、接通電源，檢查各部運轉(zhuǎn)情況，由低速到高速運行完好后，方可使用準(zhǔn)備裝瓶上塞，將西林瓶送入理瓶盤，將膠塞裝入理塞器內(nèi)；調(diào)裝量按半成品含量測定結(jié)果確定裝量，旋轉(zhuǎn)調(diào)量螺母，調(diào)到確定的裝量。
理想裝量1±0.2ml；灌裝理盤作順時針旋轉(zhuǎn)，將瓶子送入理瓶軌道，進入分度齒盤，分度齒盤以每分鐘10-50次間歇速度旋轉(zhuǎn)，將瓶子撥到灌裝位置，灌裝機構(gòu)以同步間歇的上下往返運行進行灌裝，灌裝后的西林瓶轉(zhuǎn)至按塞位，進行按塞。
膠塞由理塞器輸塞軌道將其送到按塞輪處，膠塞在真空吸力下牢靠的跟隨按塞輪做間歇轉(zhuǎn)位，使塞對準(zhǔn)瓶口，按塞推桿將瓶上推，使塞對準(zhǔn)瓶口，此時真空自動關(guān)閉，塞脫開按塞輪，隨瓶進入輸瓶軌道。
將灌裝半加塞的藥瓶裝盤，送入凍干機，清場。
從過濾結(jié)束到灌裝結(jié)束時間間隔應(yīng)不超過7小時。
4、冷凍干燥4.1預(yù)凍隔板溫度控制在-35℃至-40℃，制品溫度達-35℃以下，從視窗可見凍結(jié)成冰；4.2升華前期緩慢升溫至制品全白(-25℃左右)，同時將系統(tǒng)真空度保持在6～8Pa，然后，升溫速度可稍快至板溫與制品接近。
4.3再干燥制品38℃～40℃，保持4～6小時3.4清場。
5、軋蓋、檢漏、燈檢后，抽取樣品送質(zhì)檢部門檢驗，檢驗合格后即得注射用薄芝糖肽凍干粉針劑。
實施例6注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備取檢驗合格無菌無熱原的薄芝糖肽濃縮液適量，加適量甘露醇，使甘露醇在溶液中最終濃度為5％，無菌灌裝凍干，即得注射用薄芝糖肽。具體制備方法同實施例4。
實施例7注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備取檢驗合格無菌無熱原的薄芝糖肽濃縮液適量，加適量右旋糖酐，使右旋糖酐在溶液中最終濃度為5％，無菌灌裝凍干，即得注射用薄芝糖肽。具體制備方法同實施例4。
實施例8注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備取檢驗合格無菌無熱原的薄芝糖肽濃縮液適量，加適量甘氨酸，使甘氨酸在溶液中最終濃度為5％，無菌灌裝凍干，即得注射用薄芝糖肽。具體制備方法同實施例4。
實施例9注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)按照注射用薄芝糖肽凍干粉針劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗，本發(fā)明的注射用薄芝糖肽凍干粉針劑符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下本品為薄芝糖肽凍干粉針劑，系用薄樹芝菌株，經(jīng)液體發(fā)酵培養(yǎng)法制得的靈芝屬薄樹芝[Ganoderma Capense(Lloyd)Teng]干燥菌絲體提取制得的，含多糖以葡萄糖(C6H12O6)計和多肽均不得低于標(biāo)示量的90.0％。
1、性狀本品為白色至淡黃色凍干粉末。
2、鑒別(1)取本品1支加水2ml，從中量取1ml，加蒽酮溶液(取蒽酮0.2g，加硫酸100ml使溶解；臨用新配)5ml，置水浴放置，溶液呈藍綠色。
(2)取本品1支，加水2ml，加茚三酮約10mg，滴于濾紙上，熱風(fēng)吹干，應(yīng)出現(xiàn)藍紫色。
(3)取本品3支，共加水1ml溶解，加碘化鉍鉀試液2滴，即產(chǎn)生橙紅色或紅棕色的沉淀。
3、檢查pH值取供試品，每支用2ml注射用水溶解，依法(中國藥典2000年版二部附錄VIH)檢查pH值，應(yīng)為5.5～7.0。
蛋白質(zhì)取本品1支，加水2ml，加20％磺基水楊酸溶液1ml，搖勻，溶液不得產(chǎn)生渾濁。
鞣質(zhì)取本品3支，分別加水2ml，混勻后量取1ml，加4％明膠水溶液2～3滴，搖勻，溶液不得產(chǎn)生渾濁。
異常毒性取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XI D)，按靜脈注射給藥，應(yīng)符合規(guī)定。
熱原取供試品每支以2ml注射用水溶解，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XID)，劑量按家兔體重每1kg注射1ml。
溶液的澄清度取本品，每支以2ml注射用水溶解，溶液應(yīng)澄清。
干燥失重取本品，依法檢查(中國藥典2000年版附錄VIIIL)，在60℃減壓干燥4小時，減失重量不得過5.0％。
其他應(yīng)符合注射劑項下有關(guān)的各項規(guī)定(中國藥典2000年版二部附錄IB)。
4、含量測定多肽取本品3支加水制成每1ml中含多肽0.15mg的溶液，作為供試品溶液。照福林酚測定法測定，從回歸方程中求出多肽含量。
多糖參比溶液的制備取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖約0.1g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。
供試品溶液的制備精密量取本品3ml，置200ml量瓶中，加水稀釋至刻度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取參比溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，分別置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述5個濃度的參比溶液各1.0ml，以水作空白，分別置具塞試管中，置于冰水浴中，分別精密加入蒽酮溶液5.0ml，搖勻，置水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘，取出，用冷水冷卻至室溫，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IV B)，在620nm的波長處測定吸光度，以測得吸收度與其對應(yīng)的濃度進行回歸方程計算。
測定法精密量取供試品溶液1.0ml，置具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下自“置于冰水浴中，分別精密加入蒽酮溶液5.0ml”起，依法測定吸收度，從回歸方程中計算多糖的含量。
5、規(guī)格5mg(多糖)，1mg(多肽)。遮光，陰涼處保存。有效期暫定2年。
薄芝糖酐凍干粉針劑與注射液的穩(wěn)定性比較試驗實施例10

影響因素試驗條件及結(jié)果見表1和2。從試驗結(jié)果可以看出，粉針的影響因素試驗前后無明顯變化，而水針的性狀和pH值發(fā)生了較明顯變化，說明粉針穩(wěn)定性明顯高于水針。
表1注射用薄芝糖肽凍干粉針劑影響因素試驗結(jié)果(n＝6)

表2薄芝糖肽注射液影響因素試驗結(jié)果(n＝6)

以上對本發(fā)明較佳實施方式的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。
權(quán)利要求
1.一種注射用薄芝糖肽凍干粉針劑，其特征在于，所述凍干粉針劑是由薄芝糖肽濃縮液和凍干賦形劑制備得到；所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～7；所述薄芝糖肽濃縮液是從薄樹芝菌絲體中提取制成，每毫升薄芝糖肽濃縮液含多糖以葡萄糖計不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干粉針劑，其特征在于，所述凍干賦形劑為選自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍干粉針劑，其特征在于，所述凍干賦形劑為甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干粉針劑，其特征在于，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～7。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的凍干粉針劑，其特征在于，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～1。
6.一種注射用薄芝糖肽凍干粉針劑的制備方法，包括下述步驟A、從薄樹芝菌絲體中提取制成薄芝糖肽濃縮液，每毫升薄芝糖肽濃縮液含多糖以葡萄糖計不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg；B、將重量比為10∶0.3～7的薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑混合，分裝入瓶，冷凍干燥后，封口，即得注射用薄芝糖肽凍干粉針劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述凍干賦形劑為選自甘露醇、右旋糖酐、甘氨酸的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述凍干賦形劑為甘露醇、右旋糖酐或甘氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～1。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟A中，所述薄芝糖肽濃縮液是通過下述步驟制備得到a1、將薄樹芝干燥菌絲體粉碎，過篩，得菌絲體粉；a2、將上述菌絲體粉，用92～94％乙醇回流提取3～6次，趁熱過濾，合并濾液，于70℃以下減壓濃縮至小體積，加水再進行減壓濃縮至蒸餾液中無乙醇為止，得乙醇浸液；a3、將上述乙醇浸液移至分液漏斗中，加乙醚萃取8～12次，收集水層液，并將醚層液加水洗滌，將水洗液合并在水層液中，得水層液；a4、將上述水層液置水浴中濃縮，驅(qū)醚，得薄芝糖肽濃縮液。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟A中，所述薄芝糖肽濃縮液是通過下述步驟制備得到b1、將薄樹芝干燥菌絲體粉碎，過篩，得菌絲體粉；b2、采用乙醇和水作為提取溶劑，提取分離得到薄芝糖肽粗提物；b3、采用硼配基親和層析法，分離純化得到薄芝糖肽濃縮液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用薄芝糖肽凍干粉針劑及其可工業(yè)化的制備方法，所述凍干粉針劑是由薄芝糖肽濃縮液和凍干賦形劑制備得到；所述薄芝糖肽濃縮液與凍干賦形劑的重量比為10∶0.3～7；所述薄芝糖肽濃縮液是從薄樹芝菌絲體中提取制成，每毫升薄芝糖肽濃縮液含多糖以葡萄糖計不低于2.5mg，多肽不低于0.5mg。注射用薄芝糖肽凍干粉針劑與薄芝糖肽注射液相比具有穩(wěn)定性好，易運輸，易保存等優(yōu)點。經(jīng)穩(wěn)定性試驗、影響因素試驗、加速試驗及室溫留樣觀察，與水針劑相比，凍干粉針劑質(zhì)量穩(wěn)定，長期放置樣品外觀、pH值、含量均無明顯變化。
文檔編號A61P9/00GK1939530SQ20051008653
公開日2007年4月4日 申請日期2005年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日
發(fā)明者馬骉, 薛印革, 戴杰森, 宋夢薇 申請人:北京賽生藥業(yè)有限公司