專利名稱：擬人參皂苷元(Ocotillol)在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人口老齡化進(jìn)程的加速以及生活方式的改變，心腦血管疾病已成為一個(gè)全球性的健康問題，冠心病、卒中的死亡率在世界范圍分別居第1、3位，極大的危害人民的健康。新型有效的防治心腦血管病藥物的開發(fā)已是臨床亟需。
擬人參皂苷F11是從西洋參中分離提取的四環(huán)三萜類人參二醇型皂苷單體，擬人參皂苷元是由擬人參皂苷F11轉(zhuǎn)化得到的苷元。
擬人參皂苷元結(jié)構(gòu)式本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)擬人參皂苷元具有預(yù)防或治療心腦血管疾病的醫(yī)藥用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了含有擬人參皂苷元的治療心腦血管疾病的藥物組合物。
本發(fā)明所述的擬人參皂苷元在用于上述任一用途時(shí)，其使用劑量范圍為10mg～1000mg/天，優(yōu)選50mg～250mg/天。
本發(fā)明中使用的擬人參皂苷元可以單獨(dú)使用或以藥物組合物形式使用。藥物組合物包括作為活性成分的擬人參皂苷元及藥用載體。該藥物組合物可以通過口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或皮下、皮膚粘膜、靜脈途徑給藥。藥物組合物可以以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸或口服液的形式存在。本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明人通過下列試驗(yàn)證實(shí)了擬人參皂苷元具有治療或預(yù)防心腦血管疾病的作用，下面的實(shí)施例用來更詳細(xì)的說明本發(fā)明，但并不意味著本發(fā)明僅限于此。試驗(yàn)所用的擬人參皂苷元可以按照中國專利申請200410023510.7提供的制備方法獲得，經(jīng)HPLC檢測含量＞95％。
具體實(shí)施例方式制備例1擬人參皂苷元的制備將10升甘油加入小型具油浴加熱和攪拌的反應(yīng)罐中，再分別加入1kg的氫氧化鈉和1kg西洋參莖葉皂苷，攪拌，常壓下持續(xù)加熱升溫，升溫至210℃下保溫反應(yīng)40分鐘，反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液傾入60倍冷水中并攪拌，析出沉淀。靜置，過濾，水洗至中性，即得擬人參皂苷元粗品。再將此粗品經(jīng)硅膠柱層析，以正己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫，回收溶劑，以甲醇-乙酸乙酯混合溶劑重結(jié)晶得到40g擬人參皂苷元，收率4％。
制備例2擬人參皂苷元注射液的制備稱取0.50g擬人參皂苷元，加入50g PEG-400，使皂苷溶解；配制50g pH5.5的磷酸鹽緩沖液，稱取0.20g鹽酸普魯卡因、0.02g亞硫酸氫鈉加入到上述磷酸鹽緩沖液中；將緩沖液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均勻，加入0.01％針用活性炭100℃保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過濾、0.22um的微孔濾膜過濾，過濾后的藥液分裝成2ml/支的針劑50支，分裝好的注射劑可以直接壓塞、壓鋁蓋成針劑。
制備例3注射用擬人參皂苷元的制備稱取0.50g擬人參皂苷元，加入50g PEG-400，使皂苷溶解。配制50g pH5.5的磷酸鹽緩沖液，稱取0.20g鹽酸普魯卡因、0.02g亞硫酸氫鈉加入到上述磷酸鹽緩沖液中；將緩沖液加入到皂苷的PEG溶液中，混合均勻，加入0.01％針用活性炭100℃保溫30分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過濾、0.22um的微孔濾膜過濾；過濾后的藥液分裝成2ml/支的西林瓶中，經(jīng)凍干機(jī)凍干制成凍干粉針。
試驗(yàn)例1擬人參皂苷元對大鼠局部腦缺血損傷的影響(1)材料擬人參皂苷元注射液按制備例2制備。紅四氮唑美國Sigma公司產(chǎn)品，臨用前用生理鹽水配成4％溶液。實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果動物隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型對照組(等容量溶劑)，尼莫地平組(Nim，1.5mg/kg)，擬人參皂苷元1mg/kg組，擬人參皂苷元5mg/kg組，擬人參皂苷元10mg/kg組，擬人參皂苷元25mg/kg組，擬人參皂苷元100mg/kg組，每組10只。禁食12小時(shí)后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分離左側(cè)頸總動脈，夾閉頸內(nèi)、頸總動脈，頸外動脈近心端及遠(yuǎn)心端結(jié)扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內(nèi)動脈成一條直線，將栓線(選用直徑0.24mm尼龍線，長度5.0cm)由頸外動脈插入至顱內(nèi)，遇輕微阻力時(shí)停止，插入深度約為2cm。結(jié)扎頸外動脈開口，并打開頸總動脈動脈夾，消毒縫合傷口，造成左側(cè)大腦中動脈缺血模型；假手術(shù)組僅進(jìn)行左側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈、頸外動脈的分離(以上實(shí)驗(yàn)均在23℃～25℃進(jìn)行)。術(shù)后各組動物靜脈滴注(用輸液泵注射)相應(yīng)藥物(給藥體積3ml，30min滴完)。24小時(shí)后按文獻(xiàn)劉小光，徐理納，一種能評價(jià)溶栓和抗溶栓的大鼠腦中動脈模型，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30662所述方法及標(biāo)準(zhǔn)觀察并記錄大鼠的行為障礙(A)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計(jì)為0分，如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)腕屈曲計(jì)為1分，肘屈曲計(jì)為2分，肩內(nèi)旋計(jì)為3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩內(nèi)旋者，計(jì)為4分。(B)將動物置于平地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢查阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力，計(jì)為0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時(shí)阻力下降者，根據(jù)下降程度不同分為輕、中、重三度，分別計(jì)為1，2和3分。(C)將動物雙前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計(jì)為0分。同樣根據(jù)手術(shù)對側(cè)肌張力下降程度不同計(jì)為1，2和3分。(D)動物有不停地向一側(cè)轉(zhuǎn)圈者，計(jì)為1分。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為11分，分?jǐn)?shù)越高，表示動物行為障礙越嚴(yán)重。
行為評分后處死大鼠，取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，冠狀切成5片，腦片用紅四氮唑(TTC)染色，正常組織經(jīng)染色后呈紅色，梗塞組織呈白色，染色后照相，用中國航空航天大學(xué)病理圖像分析軟件求梗塞面積比。數(shù)據(jù)用X±s表示，以組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果如表1所示，缺血24小時(shí)后，大鼠表現(xiàn)出明顯的行為障礙，大鼠腦組織也出現(xiàn)明顯的灶狀缺血區(qū)，達(dá)到全腦的25％左右；給予不同劑量的擬人參皂苷元，動物行為障礙有不同程度的減輕，大鼠腦缺血區(qū)也有明顯好轉(zhuǎn)，且呈劑量依賴性。
擬人參皂苷元25mg/kg抗腦缺血作用強(qiáng)于10mg/kg(P＜0.05)，但是與100mg/kg比較無明顯差別(P＞0.05)。提示當(dāng)劑量≥25mg/kg時(shí)，藥效并沒有繼續(xù)增加。
表1擬人參皂苷元對大鼠局部腦缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與25mg/kg組比較△P＜0.05，#P＞0.05。
試驗(yàn)例2擬人參皂苷元對大鼠心肌缺血的影響(1)材料注射用擬人參皂苷元按制備例3制備。氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站提供。實(shí)驗(yàn)動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重280g-350g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106005號。
(2)方法與結(jié)果將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型對照組(等容量溶劑)，擬人參皂苷元1mg/kg組，擬人參皂苷元5mg/kg組，擬人參皂苷元10mg/kg組，擬人參皂苷元25mg/kg組，擬人參皂苷元100mg/kg組，每組10只。禁食12小時(shí)后，ip烏拉坦(1.2g/kg)麻醉，測肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左緣1cm處，剪開胸壁肌肉及二條肋骨，迅速打開胸腔，暴露心臟，在動脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎左冠狀動脈，立即將心臟放回，排擠出胸腔空氣，用止血鉗閉合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。術(shù)后各組動物靜脈滴注(用輸液泵注射)相應(yīng)藥物(給藥體積3ml，30min滴完)。記錄術(shù)后1，2，6h心電圖，隨后取出心臟，以冷生理鹽水洗凈后，-20℃冰箱冷凍過夜。次日，將冷凍的心臟由結(jié)扎處至心尖部等厚切成5片，浸入新鮮配制的0.5％N-BT磷酸緩沖液(pH7.4)中。37℃水浴振搖10～15min。用濾紙吸干切片表面的染色液，分離染色部分和未染色部分，稱重，記算梗死面積。梗死面積(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。
結(jié)果如表2所示，不同劑量的擬人參皂苷元明顯減少結(jié)扎冠狀動脈所致大鼠急性心肌缺血引起的心肌梗死面積，并可降低由心肌缺血造成的肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖J點(diǎn)的升高。
擬人參皂苷元25mg/kg抗心肌缺血作用強(qiáng)于10mg/kg(P＜0.05)，但是與100mg/kg比較無明顯差別(P＞0.05)。提示當(dāng)劑量≥25mg/kg時(shí)，藥效并沒有繼續(xù)增加。
表2擬人參皂苷元對大鼠心肌缺血損傷的影響(n＝10，X±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與25mg/kg組比較△P＜0.05，#P＞0.05。
試驗(yàn)例3擬人參皂苷元對貓實(shí)驗(yàn)性心力衰竭的治療作用(1)材料擬人參皂苷元注射液按制備例2制備。Powerlab/8sp生理記錄儀澳大利亞InStruments公司生產(chǎn)。電磁流量計(jì)(MFV-3200型)日本光電公司生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)動物健康成年貓?bào)w重2.5～3.5kg，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。
(2)方法將貓隨機(jī)分為模型對照組(等容量溶劑)，擬人參皂苷元0.5mg/kg組，擬人參皂苷元2.5mg/kg組，擬人參皂苷元5mg/kg組，擬人參皂苷元12.5mg/kg組，擬人參皂苷元50mg/kg組，每組6只。禁食12小時(shí)后，靜脈注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉，氣管插管，人工呼吸，監(jiān)測主動脈壓(AP)與心電圖。左側(cè)開胸，從心尖插導(dǎo)管至左心室，測左室壓及其壓力變化速度(±dP/dtmax)。將Waltan-Brodie應(yīng)變弓植入左心室前壁，測定心肌收縮力。用電磁流量計(jì)測定升主動脈血流量。以升主動脈流量作為心輸出量(CO)，計(jì)算心臟指數(shù)(CI)，每搏指數(shù)(SI)，每搏作功(SW)，左心作功(LVW)及總外周血管阻力(SVR)。各項(xiàng)參數(shù)記錄于Powerlab/8sp生理記錄儀。術(shù)后半小時(shí)，各項(xiàng)參數(shù)達(dá)到穩(wěn)定。從股靜脈恒速輸注戊巴比妥鈉(0.5ml/kg·min)，以±dP/dtmax下降到約1000mmHg/s為主要指標(biāo)形成急性心力衰竭。待心衰模型穩(wěn)定后，各組動物靜脈滴注(用輸液泵注射)相應(yīng)藥物(給藥體積10ml，30min滴完)。
(3)結(jié)果A、擬人參皂苷元對心力衰竭貓心率與血壓的影響結(jié)果如表3所示，滴注不同劑量擬人參皂苷元可不同程度降低心力衰竭貓血壓，而且對舒張壓的作用尤為明顯。
表3擬人參皂苷元對心力衰竭貓血壓的影響(n＝6，X±s)

與給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較@P＜0.05，@@P＜0.01；與12.5mg/kg組比較△P＜0.05，#P＞0.05。
B、擬人參皂苷元對心力衰竭貓心臟作功的影響結(jié)果如表4所示，滴注不同劑量擬人參皂苷元可增加心衰貓的SW與LVW，與給藥前、模型對照組比較有顯著性差異。
表4擬人參皂苷元對心力衰竭貓心臟作功的影響(n＝6，X±s)

與給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較@P＜0.05，@@P＜0.01；與12.5mg/kg組比較△P＜0.05，#P＞0.05。
C、擬人參皂苷元對心力衰竭貓總外周血管阻力的影響結(jié)果如表5所示，滴注不同劑量擬人參皂苷元可降低心力衰竭貓總外血管阻力，與給藥前、模型對照組比較有顯著性差異。
表5擬人參皂苷元對心力衰竭貓總外周血管阻力的影響(n＝6，X±s)

與給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較@P＜0.05，@@P＜0.01；與12.5mg/kg組比較△P＜0.05，#P＞0.05。
D、擬人參皂苷元對心力衰竭貓心輸出量的影響結(jié)果如表6所示，滴注不同劑量擬人參皂苷元可增加心衰貓的心輸出量，與給藥前、模型對照組比較有顯著性差異。
表6擬人參皂苷元對心力衰竭貓心輸出量的影響(n＝6，X±s)

與給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對照組比較@P＜0.05，@@P＜0.01；與12.5mg/kg組比較△P＜0.05，#P＜0.05。
綜合貓心力衰竭實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，擬人參皂苷元12.5mg/Kg對貓心力衰竭的治療作用強(qiáng)于10mg/Kg(P＜0.05)，但是與100mg/kg比較無明顯差別(P＞0.05)。提示當(dāng)劑量≥12.5mg/kg時(shí)，藥效并沒有繼續(xù)增加。
試驗(yàn)例4擬人參皂苷元急性毒性試驗(yàn)(1)材料注射用擬人參皂苷元按制備例3制備。清潔級昆明系小鼠，18～22g，由山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動物實(shí)驗(yàn)中心提供。合格證號魯動質(zhì)字200106003號。飼料由中國藥品生物制品鑒定檢驗(yàn)所提供。
(2)方法根據(jù)預(yù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)給藥劑量并分組溶劑對照組、100mg/kg、150mg/kg、215mg/kg、322.5mg/kg、483.75mg/kg、725.625mg/kg組，共7組，每組10只。稱重后，按0.2ml/10g的體積靜脈注射，對照組給予等體積溶劑。給藥后密切觀察小鼠的毒性反應(yīng)和7天內(nèi)死亡情況，并按改進(jìn)寇氏法測定LD50。
(3)結(jié)果注射用擬人參皂苷元的LD50為338.7±28.6mg/kg；LD50的95％可信限302.2～369.1mg/kg。
權(quán)利要求
1.擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防充血性心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元的使用劑量范圍為10mg～1000mg/天。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，擬人參皂苷元的使用劑量優(yōu)選為50mg～250mg/天。
7.含有擬人參皂苷元的用于治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，該組合物可以通過靜脈、口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或皮下、皮膚粘膜等途徑給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可以以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑等形式存在。
全文摘要
本發(fā)明提供了擬人參皂苷元在制備治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用，具體提供了其在制備治療或預(yù)防腦損傷的藥物中的應(yīng)用，其在制備治療或預(yù)防心肌缺血的藥物中的應(yīng)用，其在制備治療或預(yù)防充血性心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/58GK1689575SQ20051005202
公開日2005年11月2日 申請日期2005年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月2日
發(fā)明者田京偉, 蔣王林, 馬雙剛, 王超云, 孫芳, 張?zhí)? 傅風(fēng)華, 劉珂 申請人:山東綠葉制藥有限公司