專利名稱：芍藥苷的醫(yī)藥新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及芍藥苷在制備用于促進(jìn)手術(shù)后腸功能恢復(fù)藥物及預(yù)防腸粘連藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腹部手術(shù)是外科最常見(jiàn)的手術(shù)，一般手術(shù)后病人的腸功能比較虛弱，手術(shù)后腸功能的恢復(fù)對(duì)病人的康復(fù)，包括疾病的痊愈，減少腸粘連等并發(fā)癥，均具有重要意義。
恢復(fù)手術(shù)后的腸功能，主要是恢復(fù)一定強(qiáng)度的腸蠕動(dòng)，但由于手術(shù)后不能進(jìn)食，因此胃的過(guò)早蠕動(dòng)，可能會(huì)因胃內(nèi)無(wú)食物而引起上腹不適。文獻(xiàn)報(bào)道，腹部手術(shù)后發(fā)生不同程度腸粘連的比例高達(dá)80-90％[Menies D，Ellis H.Intestinal obstruction from adhesion how bigis the problem.Ann R Coll Surg Engl，1990，7260]，手術(shù)后滲出的纖維蛋白，10小時(shí)起開(kāi)始形成纖維粘連，而腸粘連的發(fā)生，與手術(shù)后的腹腔滲出及腸蠕動(dòng)過(guò)弱有關(guān)，減少滲出或改善蠕動(dòng)，將可減少粘連的發(fā)生。
目前，胃腸動(dòng)力藥物，對(duì)胃腸特別是胃的作用過(guò)強(qiáng)，不適于手術(shù)后胃腸功能的恢復(fù)。
可防治粘連藥物有非甾體類抗炎藥和甾體類抗炎藥，甾體類抗炎藥如地塞米松能減輕炎性反應(yīng)，減少炎性物質(zhì)及纖維蛋白滲出，但同時(shí)地塞米松也容易引起消化系統(tǒng)并發(fā)癥和傷口愈合遲緩等副作用；甾體類抗炎藥物在減少滲出，抑制腸粘連發(fā)生的同時(shí)，嚴(yán)重影響腹腔內(nèi)手術(shù)部位及腹壁切口的愈合；非甾體抗炎藥可減少滲出，但現(xiàn)在臨床使用劑量常常引起胃腸道不良反應(yīng)；促進(jìn)纖維蛋白溶解吸收的藥物有東菱克栓酶等，應(yīng)用時(shí)有出血傾向副作用。促進(jìn)腸蠕動(dòng)藥物能促進(jìn)腸蠕動(dòng)，減少粘連發(fā)生，但不能減輕炎性反應(yīng)，減少炎性物質(zhì)及纖維蛋白滲出。
因此尋找一種既有利于術(shù)后腸功能的恢復(fù)、防止腸粘連又能克服現(xiàn)有藥物的治療缺陷成為當(dāng)下醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一。
芍藥苷是從赤芍、白芍、牡丹皮中提取得到的，成無(wú)定形粉末，具吸濕性，有鎮(zhèn)靜、解痙、抗炎、抗應(yīng)激性潰瘍病、擴(kuò)張冠脈血管、對(duì)抗急性心肌缺血以及抑制血小板聚集等多方面的作用，但關(guān)于芍藥苷具有預(yù)防和治療術(shù)后恢復(fù)腸功能及預(yù)防腸粘連的作用未見(jiàn)報(bào)道；鑒于此，本發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，提供了芍藥苷在制備預(yù)防或治療術(shù)后腸功能恢復(fù)及預(yù)防腸粘連的藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了芍藥苷在制備治療或預(yù)防術(shù)后腸功能恢復(fù)的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了芍藥苷在預(yù)防術(shù)后腸粘連的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了由芍藥苷和藥學(xué)上可接受的的載體或輔料組成的用于預(yù)防或治療術(shù)后腸功能恢復(fù)及預(yù)防腸粘連的藥物組合物。
本發(fā)明提供的芍藥苷在用于術(shù)后腸功能恢復(fù)及預(yù)防腸粘連時(shí)，其給藥方式為為靜脈給藥(包括靜脈注射和靜脈滴注)。
本發(fā)明提供的芍藥苷在用于術(shù)后腸功能恢復(fù)及預(yù)防腸粘連時(shí)，其給藥劑量范圍為50-5000mg，優(yōu)選為100-2500mg。
我們藥理研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷靜脈給藥對(duì)急性炎癥滲出具有明顯的抑制作用，對(duì)胃排空無(wú)明顯影響，可明顯加快腸蠕動(dòng)減慢模型動(dòng)物的腸蠕動(dòng)。手術(shù)后前期(手術(shù)后1-3天)靜脈給予芍藥苷，可明顯縮短手術(shù)后腸鳴音恢復(fù)時(shí)間，排氣和排便時(shí)間提前，表明芍藥苷能減輕炎性反應(yīng)，減少炎性滲出，促進(jìn)腸蠕動(dòng)恢復(fù)。本發(fā)明芍藥苷具有療效好，副作用低等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明通過(guò)下列試驗(yàn)來(lái)證實(shí)芍藥苷具有預(yù)防或治療術(shù)后腸功能恢復(fù)及預(yù)防腸粘連的作用。
具體實(shí)施例方式
制備例1制備芍藥苷取赤芍10kg，70％乙醇分別回流提取3次，每次1.5h，每次30L，合并提取液，過(guò)濾，減壓回收至干，殘?jiān)赃m量水加熱溶解，抽濾，濾液加入一預(yù)先裝填好的大孔吸附樹(shù)脂柱上(干膏和樹(shù)脂的比例為15∶20)，慢慢滴加完后，先用水洗脫至還原糖的反應(yīng)呈陰性(Molish反應(yīng)檢測(cè))，改用20％濃度的乙醇洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，得赤芍總苷530g，加入一預(yù)先裝填好的硅膠柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，其中芍藥苷含量為91.4％。
制備例2制備芍藥苷取丹皮藥材(產(chǎn)地銅陵)20kg，粉碎成粗粉，放入提取罐中；加200L的水沸提2次，每次2h，過(guò)濾后，減壓濃縮至約30L；上大孔吸附樹(shù)脂柱，用水充分洗脫至流出液為澄清且無(wú)還原糖反應(yīng)后，再用40％乙醇洗脫；收集洗脫液，減壓濃縮，氯仿萃取2次，回收氯仿，水溶液加入95％乙醇，使醇濃度為80％。放冷靜置0.5h，濾去沉淀物，將濾液減壓回收至干，即得丹皮總苷原料1kg。有效部位丹皮總苷中總苷含量為66％，主要成分芍藥苷含量為42％。將丹皮總苷原料溶于無(wú)水乙醇，上氧化鋁柱層析，用無(wú)水乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇、干燥，得精制丹皮總苷，再加入一預(yù)先裝填好的硅膠柱，用氯仿-甲醇(1∶10)洗脫，合并洗脫液，減壓回收至干，芍藥苷含量為95.5％。
制備例 制備芍藥苷凍干粉針在潔凈條件下，取制備例所得芍藥苷，溶于注射用水，加入低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無(wú)熱源的澄清液，每只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含的凍干粉針。
制備例 制備芍藥苷注射液在潔凈條件下，取制備例所得芍藥苷，溶于注射用水，攪拌溶解，超濾，得到無(wú)熱源的澄清液，按注射液制備工藝，制成一支，含芍藥苷的注射液。
試驗(yàn)例1 芍藥苷對(duì)正常小鼠小腸推動(dòng)的影響1.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備；嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號(hào)030214002)；清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取小鼠80只，雌雄各半，禁食12小時(shí)，隨機(jī)8組，分別為芍藥苷5mg/kg組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷20mg/kg組，芍藥苷250mg/kg組，芍藥苷500mg/kg組，芍藥苷1000mg/kg組，嗎丁啉組，空白對(duì)照組。芍藥苷各靜脈組給藥后30分鐘，分別灌服含5％活性炭混懸液，嗎丁啉組灌服含1mg/ml嗎丁啉的5％活性炭的混懸液，空白對(duì)照組同時(shí)灌服含5％活性炭混懸液。20分鐘處死小鼠，剖腹取出腸管，測(cè)量幽門(mén)至活性炭前沿的距離作為“活性炭腸內(nèi)推進(jìn)距離”，測(cè)量幽門(mén)至盲腸的距離作為全腸長(zhǎng)度，按下式計(jì)算活性炭推進(jìn)率＝活性炭腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)/全腸長(zhǎng)度(cm)·100％，各組活性炭推進(jìn)率采用組間t檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表1結(jié)果表明，芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥組明顯加強(qiáng)正常小鼠小腸的活性炭推進(jìn)率(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05)，芍藥苷20mg/kg、芍藥苷250mg/kg、芍藥苷500mg/kg、芍藥苷1000mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強(qiáng)正常小鼠小腸的活性炭推進(jìn)率(與空白對(duì)照組比較，P＜0.01)。
表1 芍藥苷對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)的影響

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，與空白對(duì)照組比較試驗(yàn)例2 芍藥苷對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠的小腸推動(dòng)的影響2.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號(hào)030214002)消旋山莨菪堿片(青島黃海制藥廠，規(guī)格10mg/粒，批號(hào)030210)清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
2.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取小鼠80只，雌雄各半，連續(xù)灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿2天，體積0.4ml/天，禁食16小時(shí)，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿，體積0.4ml/只，隨機(jī)分為8組，分別為芍藥苷5mg/kg組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷20mg/kg組，芍藥苷250mg/kg，芍藥苷500mg/kg組，芍藥苷1000mg/kg組，嗎丁啉組，空白對(duì)照組。芍藥苷各靜脈組給藥后30分鐘，分別灌服含5％活性炭混懸液，嗎丁啉組灌服含1mg/ml嗎丁啉的5％活性炭混懸液，空白對(duì)照組同時(shí)灌服含5％活性炭混懸液。30分鐘處死小鼠，剖腹取出腸管，測(cè)量幽門(mén)至活性炭前沿的距離作為“活性炭腸內(nèi)推進(jìn)距離”，測(cè)量幽門(mén)至盲腸的距離作為全腸長(zhǎng)度，按下式計(jì)算活性炭推進(jìn)率＝活性炭腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)/全腸長(zhǎng)度(cm)·100％，各組活性炭推進(jìn)率采用組間t檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
表2結(jié)果表明，芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強(qiáng)蠕動(dòng)減慢小鼠的小腸活性炭推進(jìn)率(與空白對(duì)照組比較，P＜0.05)，芍藥苷20mg/kg、芍藥苷250mg/kg、芍藥苷500mg/kg、芍藥苷1000mg/kg靜脈注射給藥，明顯加強(qiáng)蠕動(dòng)減慢小鼠的小腸活性炭推進(jìn)率(與空白對(duì)照組比較，P＜0.01)。
表2 芍藥苷對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠小腸推進(jìn)的影響

ΔΔP＜0.01；ΔP＜0.05，與空白對(duì)照組比較試驗(yàn)例3 芍藥苷對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響3.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備伊文思藍(lán)(進(jìn)口分裝)雙氯芬酸鈉凍干粉針(山東綠葉天然藥物有限公司提供，批號(hào)030501)清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
3.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取小鼠60只，雄性，體重19～21g，隨機(jī)分為6組，每組10只，芍藥苷5mg/kg組，10mg/kg組，50mg/kg組，500mg/kg組，雙氯芬酸鈉5mg/kg組，NS組，給藥體積0.20ml/20g，給藥后立即給小鼠靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)溶液，給藥體積0.20ml/20g。隨即腹腔注射1.0％的醋酸0.20ml，20分鐘后處死小鼠，吸取6.0ml生理鹽水，注入腹腔，輕揉腹部，吸取腹腔液，離心(3000rpm，10min)，于590nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。
表3試驗(yàn)結(jié)果表明芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥明顯降低小鼠毛細(xì)血管通透性(與NS組比較，P＜0.05)，芍藥苷50mg/kg，芍藥苷500mg/kg靜脈注射給藥明顯降低小鼠毛細(xì)血管通透性(與NS組比較，P＜0.01)。
表3 芍藥苷對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，與NS組比較試驗(yàn)例4 芍藥苷對(duì)棉球致大鼠肉芽腫形成的影響4.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備地塞米松磷酸鈉注射液(規(guī)格5mg/支，天津藥業(yè)漣水有限公司，批號(hào)0105305)SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)4.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠隨機(jī)分為5組，即NS組，地塞米松組，芍藥苷10mg/kg組、芍藥苷50mg/kg組、芍藥苷500mg/kg組，每組10只，乙醚麻醉，肩胛部皮膚碘酊消毒，酒精脫碘，肩胛間切一1cm的切口，止血鉗鈍性分離兩側(cè)皮膚與皮下組織，切口兩側(cè)皮下各植入消毒棉球一個(gè)(重19.8～20.2mg)，縫合切口。手術(shù)當(dāng)日開(kāi)始給藥。地塞米松組隔日im注射給藥一次，給藥劑量10mg/kg，給藥體積0.4ml/100g；NS組及芍藥苷給藥組，每次給藥體積0.4ml/100g，每日給藥1次，iv。一周后脫臼處死，取出棉球，剔除脂肪組織，70℃烘24小時(shí)，稱重，減去棉球原重，即為肉芽腫重量，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。
表4結(jié)果表明芍藥苷10mg/kg、芍藥苷50mg/kg、芍藥苷500mg/kg靜脈注射給藥明顯抑制大鼠棉球肉芽腫形成(與NS組比較，P＜0.01)。
表4 芍藥苷對(duì)大鼠棉球肉芽腫形成的影響

ΔΔP＜0.01，與NS組比較。
試驗(yàn)例5 芍藥苷對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠的胃排空的影響5.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備嗎丁啉(10mg/粒，西安楊森制藥有限公司，批號(hào)030214002)消旋山莨菪堿片(青島黃海制藥廠，規(guī)格10mg/粒，批號(hào)030210)清潔級(jí)昆明種小鼠，體重18g～22g，雌雄各半，山東綠葉制藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
5.2方法與結(jié)果取小鼠50，雌雄各半，連續(xù)灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿2天，體積0.4ml/天，禁食16小時(shí)，灌胃1.5mg/ml消旋山莨菪堿，隨機(jī)分為5組，每組10只，陰性對(duì)照組灌服蒸餾水，陽(yáng)性對(duì)照組灌服1mg/ml嗎丁啉混懸液，芍藥苷高、中、低劑量組靜脈給予芍藥苷。給藥后20分鐘，灌服0.2ml0.1％甲基橙溶液，給甲基橙后20分鐘處死小鼠，剖腹，取胃，將胃置于10ml西林瓶中，加入8ml 0.1％的碳酸氫鈉溶液用小剪刀剪開(kāi)胃，將胃內(nèi)容物充分洗于碳酸氫鈉溶液中，搖勻，取上清液，置入試管中，2000rpm離心10分鐘，取上清液于420nm處測(cè)定吸收值，0.1％的碳酸氫鈉溶液調(diào)零點(diǎn)，并以0.1％甲基橙溶液0.2ml加入8ml 0.1％的碳酸氫鈉溶液搖勻后測(cè)吸收度作為基數(shù)甲基橙光密度，按下式計(jì)算甲基橙胃殘留率甲基橙胃殘留率(％)＝胃內(nèi)甲基橙光密度/基數(shù)甲基橙光密度*100％。各組甲基橙胃殘留率采用組間t檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果顯示，嗎丁啉組可顯著促進(jìn)小鼠胃排空(P＜0.01)，芍藥苷各劑量組對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠胃排空均無(wú)明顯影響(P＞0.05)，即芍藥苷對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠胃排空無(wú)促進(jìn)或抑制作用。
表5 芍藥苷對(duì)蠕動(dòng)減慢小鼠胃排空的影響

注與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01
試驗(yàn)例6 芍藥苷對(duì)大鼠腸粘連的影響6.1實(shí)驗(yàn)材料芍藥苷按照制備例2制備地塞米松磷酸鈉注射液(規(guī)格5mg/支，天津藥業(yè)漣水有限公司，批號(hào)0105305)SD大鼠，雌雄各半，體重180-220g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證魯動(dòng)質(zhì)字200106005號(hào)6.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠40只，禁食16h，以10％水合氯醛腹腔內(nèi)麻醉。麻醉體積0.35ml/100g，麻醉后將大鼠仰臥固定于手術(shù)板上，腹部脫毛，消毒皮膚，鋪無(wú)菌巾，取下腹部正中長(zhǎng)約2cm切口，提出盲腸，置于干紗布上約5分鐘，使?jié){膜干燥，以解剖刀片輕刮整個(gè)盲腸漿膜10遍，造成輕度滲血，以止血鉗用同樣力度夾小腸兩下，再滴入無(wú)水酒精于創(chuàng)面上。分兩層以1號(hào)絲線關(guān)腹，隨機(jī)分組即NS組，地塞米松組，芍藥苷10mg/kg組，芍藥苷50mg/kg組，隨后立即給藥，分籠飼養(yǎng)。每天給藥一次，給藥體積0.4ml/100g，模型組給予同體積的NS，陽(yáng)性對(duì)照組給予地塞米松，隔天給藥，劑量10mg/kg，給藥體積同給藥組。術(shù)后第7d處死，腹部取“n”形切口開(kāi)腹，分別進(jìn)行粘連程度分級(jí)評(píng)分。觀察指標(biāo)粘連程度分級(jí)判斷標(biāo)準(zhǔn)參考Nair制定的5級(jí)分類法，確定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表6，試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行組間秩和檢驗(yàn)。
表7結(jié)果表明芍藥苷10mg/kg靜脈注射給藥，明顯抑制大鼠腸粘連(與NS組比較，P＜0.05)，芍藥苷50mg/kg靜脈注射給藥明顯抑制大鼠腸粘連(與NS組比較，P＜0.01)。
表6 腸粘連程度分級(jí)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

表7 芍藥苷對(duì)大鼠腸粘連的影響

Δp＜0.05；ΔΔp＜0.01，與NS組比較
權(quán)利要求
1.芍藥苷在制備用于促進(jìn)手術(shù)后腸功能恢復(fù)的藥物中的應(yīng)用。
2.芍藥苷在制備預(yù)防術(shù)后腸功能恢復(fù)的藥物中的應(yīng)用。
3.由芍藥苷和藥學(xué)上可接受載體組成的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了芍藥苷在制備用于促進(jìn)手術(shù)后腸功能恢復(fù)藥物及預(yù)防腸粘連藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1810254SQ200510042410
公開(kāi)日2006年8月2日 申請(qǐng)日期2005年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月26日
發(fā)明者蔣王林, 高玉白, 田京偉, 傅風(fēng)華 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司