專利名稱：含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種藥物和疫苗的傳遞系統(tǒng)。尤其是在藥物或疫苗的傳遞系統(tǒng)中，提供一種含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
納米技術(shù)是21世紀(jì)最具革命性的技術(shù)之一，是一門跨學(xué)科的邊緣科學(xué)技術(shù)。是生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)等多門學(xué)科的結(jié)晶。納米技術(shù)作為一種空間平臺(tái)技術(shù)，其范圍已涉及到許多學(xué)科和技術(shù)領(lǐng)域。尤其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域、藥劑學(xué)發(fā)展及生物工程和醫(yī)學(xué)器材方面有革命性的突破，成為醫(yī)學(xué)、生物醫(yī)學(xué)及藥學(xué)研究中的熱點(diǎn)之一。
納米技術(shù)在醫(yī)學(xué)研究中涉及到醫(yī)學(xué)材料、醫(yī)學(xué)設(shè)備、藥劑學(xué)的研制技術(shù)的發(fā)展。納米粒子的制備和應(yīng)用則是藥劑學(xué)中具有希望的突破點(diǎn)并具有極大的市場(chǎng)和應(yīng)用價(jià)值。納米粒子在藥劑學(xué)研究中通常是指大小在100nm-1000nm范圍內(nèi)的粒子(平其能“納米藥物和納米載體系統(tǒng)”。中國(guó)新藥雜志2002年地11卷第1期，編號(hào)1003-3734(2002)01-0042-05)。
在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中利用納米或微米粒子作為診斷工具，結(jié)合計(jì)算機(jī)技術(shù)提高診斷的敏感性和正確性，從而達(dá)到早期、快速和精確診斷。為腫瘤疾病的治愈提供幫助(Borm PJ，Kreyling W.J Nanosci Nanotechnol.2004 May；4(5)521-31.Toxicological hazards of inhaled nanoparticles--potential implications for drugdelivery)。同時(shí)，由于納米制備的診斷試劑盒便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，從而減少了診斷費(fèi)用。尤其適合于大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)的普查和邊遠(yuǎn)地區(qū)的醫(yī)院使用。
在藥物學(xué)和藥劑學(xué)中納米粒子作為藥物傳遞系統(tǒng)具有以下優(yōu)勢(shì)1、納米粒子因其尺寸、理化特性和表面特性特別適合作為各種類型的藥物載體，并通過不同的結(jié)合方式形成藥物的傳遞系統(tǒng)。由于其尺寸屬于亞細(xì)胞、亞微米范圍，在體內(nèi)被細(xì)胞攝取的效率比微米粒子大15-250倍并且可以穿過亞粘膜層，而微米只停留在粘膜表層。納米粒子還可以有效地穿過血腦屏障，從而傳輸藥物進(jìn)入腦部，增加藥物在腦部的濃度，有效的治療腦部疾病。例如腦瘤，就是由于藥物不能很好的通過血腦屏障而得不到有效的治療(Lisa Brannon-Peppas and James O.Blanchette.Adv Drug DelivRev.2004 Sep 22；56(11)1649-59.Nanoparticle and targeted systems for cancer therapy.以及Kreuter J.J Nanosci Nanotechnol.2004 May；4(5)484-8.Influence of thesurface properties on nanoparticle-mediated transport of drugs to the brain.)。
2、有些納米粒子是可以生物降解的。當(dāng)納米攜帶藥物進(jìn)入體內(nèi)，隨著納米粒子的降解，藥物持續(xù)釋放從而保證了藥物的濃度，提高了藥物的作用時(shí)間，減少了用藥量，減輕了藥物的毒副作用，減少了病人因服藥而引起的不適反應(yīng)。
3、納米粒子可以定向輸送藥物，尤其是可以定向輸送抗腫瘤藥物，在靜脈注射納米抗腫瘤藥物后，發(fā)現(xiàn)藥物聚集在腫瘤周圍，提高了藥物抗腫瘤特性，減少了用藥量，能夠明顯降低病人對(duì)藥物的毒副作用的反應(yīng)。納米粒子這種靶向輸送藥物的功能，提高了藥物局部濃度，增加了藥物的療效，尤其適合于腦部和眼部疾病的治療(Lockman PR，Mumper RJ，Khan MA，Allen DD.Drug Dev Ind Pharm.2002 Jan；28(1)1-13.Nanoparticle technology for drugdelivery across the blood-brain barrier.)。
4、改善大分子藥物的穩(wěn)定性。尤其是肽類和蛋白質(zhì)類藥物。把這類藥物合成到納米粒子內(nèi)，可保護(hù)藥物在口服時(shí)不被胃腸道的低PH值環(huán)境所破壞并保護(hù)藥物不被酶降解(Gavini E，Chetoni P，Cossu M，Alvarez MG，SaettoneMF，Giunchedi P.Eur J Pharm Biopharm.2004 Mar；57(2)207-12.PLGA microspheres forthe ocular delivery of a peptide drug，vancomycin using emulsification/spray-drying as thepreparation methodin vitro/in vivo studies.以及Morishita M，Takayama K.NipponRinsho.2002 Sep；60 Suppl 9516-21.The design of oral insulin delivery systemsbased on smart hydrogels)。
5、最近研究發(fā)現(xiàn)用納米作為載體的藥物不僅可以靶向傳輸藥物到特定的組織和細(xì)胞還可以傳遞藥物到特定的細(xì)胞器，更進(jìn)一步提高藥物的生物利用度(Takeuchi H，Yamamoto H，Kawashima Y.Adv Drug Deliv Rev.2001 Mar23；47(1)39-54.Mucoadhesive nanoparticulate systems for peptide drugdelivery.)。
納米粒子在藥物傳遞和藥劑學(xué)的研制和發(fā)展中占據(jù)越來越重要的地位，不久將成為最具有潛力的藥物攜帶系統(tǒng)。尤其是隨著生物藥品的需求和市場(chǎng)比重的增加，納米藥物傳遞系統(tǒng)的需求必將隨之提高。
目前在藥物傳遞系統(tǒng)中最常見研究的納米粒子有由脂肪酸、脂肪醇及磷脂組成的固體脂質(zhì)納米粒子；由聚乳酸、聚丙膠脂、聚殼糖、明膠等生物高分子材料制備的納米球或納米束；由聚乳酸和聚乙二醇的共聚物或者是聚殼糖及其衍生物組成的納米粒子。其合成方法有聚合法；超臨界技術(shù)；凝聚分散法；高壓勻質(zhì)法；熔融分散法；溶劑蒸發(fā)法和乳化/溶劑擴(kuò)散法。目前在我國(guó)最常研究的納米粒子有脂質(zhì)納米、納米囊、納米球及納米膠囊。其中脂質(zhì)體納米粒子是國(guó)內(nèi)外研究最廣泛的一種(平其能，“納米藥物制劑的現(xiàn)狀與未來”2002-09-03，中國(guó)醫(yī)藥報(bào)；以及Maitra，et al.United State Patent 6,555,376.July 24，2002；以及Bell，etal.United State Patent 635，5271.March，2002；以及Fulton et al.United StatePatent 5,266,205.Nov，1993)。
雖然納米技術(shù)合成的藥物和疫苗傳遞系統(tǒng)在近年來有很大的進(jìn)展，但仍然存在一些重要的障礙，使得納米粒子作為藥物傳遞系統(tǒng)在產(chǎn)業(yè)化方面停滯不前。目前存在的問題有(Rao GC，Kumar MS，Mathivanan N，Rao ME.Pharmazie.2004 Jan；59(1)5-9.Nanosuspensions as the most promising approach innanoparticulate drug delivery systems.)首先，大多數(shù)納米粒子的原材料是有機(jī)化合物或其衍生物，合成過程復(fù)雜。與大分子藥物結(jié)合的制備過程中會(huì)改變大分子藥物的結(jié)構(gòu)，從而降低其活性。例如，PLGA在與蛋白質(zhì)藥物結(jié)合的過程中會(huì)失去大約30％的蛋白質(zhì)活性。
其次，一些納米粒子在體內(nèi)不能生物降解，從而影響所攜帶藥物的緩釋和控釋作用，并且由于粒子的在體內(nèi)的聚集，有可能產(chǎn)生一定的副作用。
第三，大部分納米粒子合成過程復(fù)雜，原材料又多為一些有機(jī)大分子物質(zhì)，因而每一批產(chǎn)品之間的重復(fù)性差，粒子的尺寸、表面物化特性及濃度在不同批品之間有很大的差異，很難控制納米粒子的工業(yè)化生產(chǎn)，給納米粒子的產(chǎn)業(yè)化帶來很大的障礙。脂質(zhì)體納米是最常見的。
第四，有些粒子載體系統(tǒng)有一定的副作用，其產(chǎn)生的副作用的機(jī)制尚不清楚。例如，用脂質(zhì)體作為流感疫苗的載體，臨床報(bào)道出現(xiàn)面癱高發(fā)率，目前已在歐洲市場(chǎng)禁用。
第五，多聚物納米粒子在多次服用后，因其生物降解速度慢，可能誘發(fā)全身性毒性反應(yīng)，并在降解過程中可能產(chǎn)生毒性代謝物。
第六，高分子有機(jī)物的納米粒子無法進(jìn)行高壓消毒，只能用伽馬射線消毒。這也影響到納米粒子在人體的應(yīng)用。
第七，目前尚沒有發(fā)現(xiàn)一種方法可以大規(guī)模的生產(chǎn)脂質(zhì)納米粒子并有效的控制成本。
第八，固體脂質(zhì)納米粒子與藥物結(jié)合后穩(wěn)定性差，藥物極易從納米粒子上分解，從而影響藥物的包封率。
目前為止尚無一種納米傳遞系統(tǒng)正式應(yīng)用于臨床。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前在藥物學(xué)和藥劑學(xué)中采用的納米粒子多為固體脂質(zhì)納米粒子以及納米囊、納米球及納米膠囊在制備和作為藥物傳遞系統(tǒng)應(yīng)用中存在的一系列問題，提供一種在體內(nèi)能生物降解并含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法，其特征在于首先制備包含生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子，具體過程是將0.01～1.0摩爾的鹽溶液、生物活性物質(zhì)溶液、0.01～1.0摩爾的磷酸溶液按1∶1∶1混合后，在4℃下攪拌48小時(shí)，超聲處理15分鐘，在4℃下，8500rpm離心15分鐘，去除含有游離生物活性物質(zhì)溶液的上清液，用去離子水懸浮粒子，在5mg/ml的濃度形成含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子，其大小尺寸為100nm～800nm；然后包封中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，具體過程是室溫下，將含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽粒子、中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)按1∶10∶10混合后，按10mg/ml的濃度懸浮在PH值7.0，0.01摩爾的磷酸緩沖液中，4℃下在搖床上搖動(dòng)2小時(shí)，4℃，8500rpm離心三次，每次15分鐘，獲得含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子。
獲得的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子應(yīng)該貯存于4℃或冷凍干燥后備用。
所述的鹽溶液是用去離子水制備的0.01～1.0摩爾的氯化錳，或氯化鎂，或氯化鈣溶液；所述的中藥的活性物質(zhì)是中藥的單體多糖或復(fù)合體的活性物質(zhì)；所述的生物活性物質(zhì)溶液是含有蛋白質(zhì)，或脂溶性的小分子藥物，或水溶性的小分子藥物，或抗體類藥物，或多肽類藥物的溶液，或基因遺傳活性物液體。
所述的中藥的單體多糖活性物質(zhì)是蟲草多糖，或茯苓多糖，或黃芪多糖，或甘草酸，或枸杞多糖；所述的中藥的復(fù)合體活性物質(zhì)是蟲草，或茯苓，或黃芪，或甘草，或枸杞的粗提物。
一種含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的應(yīng)用，其特征在于作為載體傳遞生物活性物質(zhì)治療疾病，或作為疫苗佐劑。
所述的生物活性物質(zhì)是指蛋白質(zhì)，或脂溶性的小分子藥物，或水溶性的小分子藥物，或多肽類藥物，所述的疫苗是指蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)抗體或基因遺傳活性物。
傳遞生物活性物質(zhì)的方式包括黏膜傳遞或通過系統(tǒng)給藥。
所述的黏膜給藥是指鼻黏膜給藥，或陰道給藥，或口腔給藥；所述的系統(tǒng)給藥是指腹腔注射，或靜脈注射，或肌肉注射。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于由于在制備過程中形成的磷酸鈣、或磷酸鎂、或磷酸錳等無機(jī)鹽納米粒子易于相互粘連，分散率差，表面物理化學(xué)特性需要改進(jìn)，采用中藥的活性物質(zhì)包裹后形成的無機(jī)鹽納米粒子不僅可以改變離子的表面電極，提高它們的分散率，而且提高了生物活性物質(zhì)對(duì)無機(jī)鹽納米粒子的包封率；中藥中的有效成分(多糖、皂苷等成分)本身具有一定的生理功能，一旦與無機(jī)鹽納米粒子結(jié)合后，可以使納米粒子從純粹的攜帶體變?yōu)榫哂幸欢ㄉ锕δ艿募{米攜帶體；同時(shí)，形成的納米粒子可以在體內(nèi)生物降解。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)還在于不僅制備含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的工藝簡(jiǎn)單，而且產(chǎn)品的穩(wěn)定性高，不同批次的批間的差異極小，易于產(chǎn)業(yè)化。


圖1含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的模型圖；圖2含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法的工藝流程；圖3含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子掃描電鏡照片；圖4含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的大小分布；圖5含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子攜帶人體生長(zhǎng)激素體外釋放試驗(yàn)；圖6含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子攜帶人體生長(zhǎng)激素經(jīng)鼻腔給藥后在血漿中的含量；圖7人體簡(jiǎn)單病毒II型抗原(HSV-2)在體外從納米粒子釋放試驗(yàn)。
在圖1、圖2中1、無機(jī)鹽納米粒子，2、中藥的活性物質(zhì)，3、生物活性物質(zhì)，4、鹽溶液，5、磷酸溶液，6、含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子，7、攪拌器，8、高速離心機(jī)，9、超聲波破碎儀，10、搖床，11、冷凍干燥機(jī)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1含有中藥黃酮和皂苷成分的用人體生長(zhǎng)激素(hGH)包封的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法及其應(yīng)用制備前的準(zhǔn)備鹽溶液用去離子水制備0.01～1.0摩爾的氯化錳(或氯化鎂，或氯化鈣溶液)。
磷酸溶液用去離子水制備0.01～1.0摩爾的磷酸溶液。
生物活性物質(zhì)溶液按每100ml磷酸緩沖液+10mg人體生長(zhǎng)激素的比例制備10％的人體生長(zhǎng)激素溶液。
中藥的活性物質(zhì)溶液按每100ml生理鹽水+10mg黃酮和皂苷的制備成中藥的復(fù)合體活性物質(zhì)溶液。
PH值為7.0，0.01摩爾的磷酸緩沖液可以外購。
圖1是含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的模型圖，由圖1可見，模型的中的無機(jī)鹽納米粒子1內(nèi)部為生物活性物質(zhì)3，在含有生物活性物質(zhì)3的無機(jī)鹽納米粒子1的外圍包封有中藥的活性物質(zhì)2，最后再包封生物活性物質(zhì)3。本實(shí)施例反映的是含有人體生長(zhǎng)激素和包封中藥成分黃酮和皂苷的無機(jī)鹽納米粒子，在無機(jī)鹽納米粒子1選擇的是人體生長(zhǎng)激素，外圍選擇的都是黃酮和皂苷，最外層包封的還是人體生長(zhǎng)激素。
圖2是含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法涉及的工藝流程，由圖2可見，制備過程如下a)制備包含生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子將0.01～1.0摩爾的鹽溶液4、生物活性物質(zhì)3溶液、0.01～1.0摩爾的磷酸溶液5按1∶1∶1混合置于攪拌器7后，在4℃下攪拌48小時(shí)，再通過超聲波破碎儀9超聲處理15分鐘，然后在4℃下，經(jīng)過高速離心機(jī)8在轉(zhuǎn)速為8500rpm離心15分鐘，去除含有游離生物活性物質(zhì)溶液的上清液，用去離子水懸浮粒子，在5mg/ml的濃度形成含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽粒子6，其大小尺寸為100nm～800nm；b)包封中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)室溫下，將含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子6、中藥的活性物質(zhì)2(本實(shí)施例為中藥復(fù)合體的活性物質(zhì))和生物活性物質(zhì)3按1∶10∶10混合后，按10mg/ml的濃度懸浮在PH值7.0，0.01摩爾的磷酸緩沖液中，4℃下在搖床10上搖動(dòng)2小時(shí)，然后在4℃下，經(jīng)過高速離心機(jī)8在轉(zhuǎn)速為8500rpm離心三次，每次15分鐘，獲得含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子。
獲得的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子應(yīng)該貯存于4℃或通過冷凍干燥機(jī)11冷凍干燥后備用。
在具體制備過程中，所述的鹽溶液4可以選用去離子水制備的0.01～1.0摩爾的氯化錳，或氯化鎂，或氯化鈣溶液；所述的中藥的活性物質(zhì)2可以選用中藥的單體或復(fù)合體的活性物質(zhì)，它們包括蟲草多糖，或茯苓多糖，或黃芪多糖，或甘草酸，或枸杞多糖以及包括蟲草，或茯苓，或黃芪，或甘草，或枸杞的粗提物；所述的生物活性物質(zhì)3溶液可以選用含有蛋白質(zhì)，或脂溶性的小分子藥物，或水溶性的小分子藥物，或抗體類藥物，或多肽類藥物的溶液，或基因遺傳活性物液體。
制備結(jié)束后，可以計(jì)算納米粒子中生物活性物質(zhì)的濃度，具體方法是用去離子水懸浮粒子，檢測(cè)游離的生物活性物質(zhì)的濃度，計(jì)算納米粒子中生物活性物質(zhì)的濃度，用Backman Counter N5 Plus檢測(cè)粒子的尺寸和分布。含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子掃描電鏡照片參見圖3，含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的大小分布參見圖4。
由于在本實(shí)施例中采用的鹽溶液是氯化鈣，采用的中藥的活性物質(zhì)溶液是中藥黃酮和皂苷溶液，采用的生物活性物質(zhì)溶液是10％的人體生長(zhǎng)激素溶液，其制備的是一種含有中藥黃酮和皂苷的人體生長(zhǎng)激素包封的無機(jī)鹽納米粒子.獲得一種含有中藥黃酮和皂苷成分的人體生長(zhǎng)激素(hGH)包封的無機(jī)鹽納米粒子。
應(yīng)用中分別進(jìn)行了含有人體生長(zhǎng)激素和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子攜帶人體生長(zhǎng)激素體外釋放的實(shí)驗(yàn)以及通過含有人體生長(zhǎng)激素和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子攜帶人體生長(zhǎng)激素體經(jīng)鼻腔實(shí)施黏膜給藥后，人體生長(zhǎng)激素在血漿中的含量。其中，人體生長(zhǎng)激素體外釋放的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參見圖5；給藥后在血漿中的含量的實(shí)驗(yàn)選擇老鼠，給藥后在血漿中的含量參見圖6。
實(shí)施例2本實(shí)施例按照實(shí)施例1的方法和步驟制備含有中藥黃芪粗提物的HSV-2無機(jī)鹽納米粒子疫苗，它與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于選擇的中藥復(fù)合體的活性物質(zhì)為中藥黃芪粗提物，選擇的生物活性物質(zhì)為HSV-2蛋白質(zhì)。
宿主對(duì)很多性疾病病毒的抵抗力主要依賴與局部的免疫功能，尤其是女性陰道的免疫系統(tǒng)，對(duì)性疾病病原體的入侵起到主要的抵抗功能。因此，在性疾病的免疫和治療中，陰道免疫途徑和陰道給藥途徑成為研究重點(diǎn)。我們將無機(jī)鹽納米粒子與中藥黃芪的粗提物的復(fù)合體按照實(shí)施例1的方法合成后作為HSV-2疫苗的傳遞系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)藥物和疫苗從陰道直接給藥。實(shí)驗(yàn)中，首先進(jìn)行了人體簡(jiǎn)單病毒II型抗原(HSV-2)在體外從納米粒子釋放試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見圖7，然后，我們選擇了老鼠，分成5組，采用下列成分的藥物1、空白；2、中藥黃芪粗提物；3、HSV-2制備成疫苗；4、中藥黃芪中的粗提物和HSV-2蛋白質(zhì)制備成疫苗；5、本發(fā)明制備的含有中藥黃芪粗提物的無機(jī)鹽納米粒子為傳遞系統(tǒng)的HSV-2疫苗。分組分別從陰道直接給藥，進(jìn)行抗HSV-2特異型抗體水平實(shí)驗(yàn)(參見表3)和宿主免疫保護(hù)試驗(yàn)(參見表4)。通過實(shí)驗(yàn)可以看出本發(fā)明能夠提高藥物的局部濃度，從而增加藥效；同時(shí)，提高生殖系統(tǒng)局部免疫力，從而清除入侵的病毒；避免了肝臟對(duì)藥物的代謝作用。通過陰道給藥也可達(dá)到有效地全身治療效果。
表3抗體濃度(ug/ml)

表4臨床癥狀

實(shí)施例3、含有中藥黃芪多糖的無機(jī)鹽納米粒子作為陰道衣原體蛋白質(zhì)抗原肌肉注射免疫的比較實(shí)驗(yàn)本實(shí)施例按照實(shí)施例1的方法和步驟制備含有中藥黃芪多糖活性物質(zhì)的陰道衣原體無機(jī)鹽納米粒子疫苗，它與實(shí)施例1的區(qū)別僅在于選擇的中藥的單體活性物質(zhì)為中藥黃芪多糖活性物質(zhì)，選擇的生物活性物質(zhì)為陰道衣原體蛋白質(zhì)(MOMP)。
我們臨床采用選擇25名陰道衣原體患者，分成5組，采用下列藥物成分的藥物1、空白；2、中藥黃芪多糖；3、陰道衣原體蛋白質(zhì)(MOMP)制備成疫苗；4、中藥黃芪多糖和陰道衣原體蛋白質(zhì)(MOMP)蛋白質(zhì)制備成疫苗；5、本發(fā)明制備的含有中藥黃芪多糖的無機(jī)鹽納米粒子為傳遞系統(tǒng)的陰道衣原體蛋白質(zhì)(MOMP)疫苗，分別從肌肉注射給藥。陰道衣原體蛋白質(zhì)特異型干擾素濃度水平實(shí)驗(yàn)(參見表5)和陰道衣原體蛋白質(zhì)特異型抗體濃度水平實(shí)驗(yàn)(參見表6)。通過實(shí)驗(yàn)可以看出本發(fā)明能夠提高陰道衣原體蛋白質(zhì)的抗原性，從而增加陰道衣原體患者全身免疫力；同時(shí)，提高生殖系統(tǒng)局部免疫力，從而清除入侵的細(xì)菌(參見表7)。通過肌肉注射給藥含有中藥黃芪多糖的無機(jī)鹽納米粒子陰道衣原體蛋白質(zhì)(MOMP)疫苗也可達(dá)到有效地局部治療效果。
表5gamma干擾素濃度(pg/ml)

表6抗體濃度(ug/ml)

表7衣原體濃度(IFU/ml)

本案提供的上述實(shí)施例并非對(duì)本發(fā)明進(jìn)行一種唯一的限制，在實(shí)際應(yīng)用中，尤其是作為載體傳遞生物活性物質(zhì)治療疾病，或作為疫苗佐劑時(shí)，生物活性物質(zhì)應(yīng)該包括蛋白質(zhì)，或脂溶性或水溶性小分子藥物，或多肽類藥物，所述的疫苗是指蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì)，或抗體，或基因遺傳活性物。它們的傳遞方式應(yīng)該包括黏膜給藥或通過系統(tǒng)給藥。所述的黏膜給藥是指鼻黏膜給藥，或陰道給藥，或口腔給藥；所述的系統(tǒng)給藥是指腹腔注射，或靜脈注射，或肌肉注射。
權(quán)利要求
1.一種含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法，其特征在于a)制備包含生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子將0.01～1.0摩爾的鹽溶液、生物活性物質(zhì)溶液、0.01～1.0摩爾的磷酸溶液按1∶1∶1混合后，在4℃下攪拌48小時(shí)，超聲處理15分鐘，在4℃下，8500rpm離心15分鐘，去除含有游離生物活性物質(zhì)溶液的上清液，用去離子水懸浮粒子，在5mg/ml的濃度形成含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子，其大小尺寸為100nm～800nm；b)包封中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)室溫下，將含有生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽粒子、中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)按1∶10∶10混合后，按10mg/ml的濃度懸浮在PH值7.0，0.01摩爾的磷酸緩沖液中，4℃下在搖床上搖動(dòng)2小時(shí)，4℃，8500rpm離心三次，每次15分鐘，獲得含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法，其特征在于獲得的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子貯存于4℃或冷凍干燥后備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法，其特征在于所述的鹽溶液是用去離子水制備的0.01～1.0摩爾的氯化錳，或氯化鎂，或氯化鈣溶液；所述的中藥的活性物質(zhì)是中藥的單體多糖或復(fù)合體的活性物質(zhì)；所述的生物活性物質(zhì)溶液是含有蛋白質(zhì)，或脂溶性的小分子藥物，或水溶性的小分子藥物，或抗體類藥物，或多肽類藥物的溶液，或基因遺傳活性物液體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法，其特征在于所述的中藥的單體多糖活性物質(zhì)是蟲草多糖，或茯苓多糖，或黃芪多糖，或甘草酸，或枸杞多糖；所述的中藥的復(fù)合體活性物質(zhì)是蟲草，或茯苓，或黃芪，或甘草，或枸杞的粗提物。
5.權(quán)利要求1或2所述含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的應(yīng)用，其特征在于作為載體傳遞生物活性物質(zhì)治療疾病，或作為疫苗佐劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的應(yīng)用，其特征在于所述的生物活性物質(zhì)是指蛋白質(zhì)，或脂溶性的小分子藥物，或水溶性的小分子藥物，或多肽類藥物，所述的疫苗是指蛋白質(zhì)，或多肽類物質(zhì)，或抗體，或基因遺傳活性物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的應(yīng)用，其特征在于傳遞生物活性物質(zhì)的方式包括黏膜傳遞或通過系統(tǒng)給藥。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的應(yīng)用，其特征在于所述的黏膜給藥是指鼻黏膜給藥，或陰道給藥，或口腔給藥；所述的系統(tǒng)給藥是指腹腔注射，或靜脈注射，或肌肉注射。
全文摘要
本發(fā)明是一種含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子的制備方法及其應(yīng)用。先制備包含生物活性物質(zhì)的無機(jī)鹽納米粒子；再包封中藥的活性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，獲得含有生物活性物質(zhì)和包封中藥成分的無機(jī)鹽納米粒子。在治療疾病中用它作為載體傳遞生物活性物質(zhì)，或作為疫苗佐劑。優(yōu)點(diǎn)在于由于無機(jī)鹽納米粒子易于粘連，分散率差，理化特性需要改進(jìn)，采用中藥的活性物質(zhì)包裹后可以提高它們的分散率和生物活性物質(zhì)的包封率；中藥中的有效成分還可以使納米粒子從純粹的攜帶體變?yōu)榫哂幸欢ㄉ锕δ艿募{米攜帶體；同時(shí)，形成的納米粒子可以在體內(nèi)生物降解。本發(fā)明的制備的工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品的穩(wěn)定性高，不同批次的批間的差異極小，易于產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號(hào)A61K36/00GK1736366SQ20051004116
公開日2006年2月22日 申請(qǐng)日期2005年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月25日
發(fā)明者江橋, 河清 申請(qǐng)人:江橋, 河清