專利名稱：一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學研究及臨床應用領域，具體涉及一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法。
背景技術：
研究發(fā)現(xiàn)，當人體感染疾病時，血清或體液中含有與疾病有關的病原微生物相關指標、細胞因子，如特異性IgG/IgM抗體、抗原及細胞因子。通過酶聯(lián)免疫測定法、放射免疫測定法、熒光免疫測定法可以測定其含量，有助于對疾病的早期診斷、鑒別、發(fā)現(xiàn)。目前用于臨床實驗室檢查方法有病原微生物的分離鑒定、免疫學診斷、基因學診斷，操作復雜，檢測周期長，DNA擴增的高效性導致假陽性高，免疫學方法包括補體結合法(CF)、間接免疫熒光法(IFA)、免疫粘附法(IAHA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等，但這些方法都不太理想，存在的主要的問題是1、操作麻煩一般只能檢測一種指標，因此需要重復操作，增加工作量；2、檢測周期長要檢測多種病原微生物及細胞因子，就需要進行大量重復工作；3、成本高需要花費大量的人力、物力、財力；4、檢測結果不準確由于實驗條件不統(tǒng)一，批間差大，因此檢測結果不夠準確，限制了臨床應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是要提供一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，以克服現(xiàn)有技術存在的操作麻煩、檢測周期長、成本高和檢測結果不準確的問題。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，依次包括下述步驟①用生物活性物質包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤濕；③加入待測樣品將使蛋白芯片中的活性物質進行特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；④用免疫金試劑對蛋白芯片進行二次結合反應，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對蛋白芯片進行分析、檢測通過檢測蛋白芯片的發(fā)光強度與對照值，得出相應的待測抗原或抗體的含量。
上述方案中，①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的抗體，如抗人IgG/IgM抗體進行反應。該方案適用于檢測血清或體液中各種特異性抗體。
上述方案中，①用抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的抗體。該方案適用于檢測血清或體液中各種抗原。
上述方案中，①用細胞因子單克隆抗體抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的配對單克隆抗體。該方案適用于檢測細胞因子。
上述方案中，第⑤步用蛋白芯片閱讀儀檢測，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式輸入。這樣大大提高芯片閱讀速度、提高了蛋白芯片的準確性。避免手工輸入造成的時間浪費和差錯。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的優(yōu)點是1、該檢測方法簡便快速由于利用蛋白芯片上的數(shù)十種、數(shù)百種抗原或特異性抗體對被測樣品進行檢測，其操作步驟僅需兩步即可完成，在5-10分鐘內即可給出檢測結果；
2、敏感性高可以檢測出待測樣品中極其微量的抗原或抗體的含量；3、特異性強因為是特異性的抗原和抗體反應，因而具有很高的特異性；4、檢測結果準確，可靠性好各項試驗流程易于標準化，一次完成檢測，試驗誤差小，重復性好，可有效保證檢測結果的準確可靠；5、成本低、減輕患者負擔試劑消耗少，設備的重復使用減少，有效降低檢測成本；因此可廣泛應用于臨床檢測及進行研究。
6、適用范圍廣使用本方法可用于人血清或體液中各種疾病相關的特異性抗原或抗體含量的檢測，如各種病原微生物抗原或抗體、各種細胞因子、各種細胞的可溶性表面標記、各種可溶性受體分子等。
具體實施例方式發(fā)明人給出了以下的實施例，但本發(fā)明不限于這些實施例。
實施例1、使用蛋白芯片進行優(yōu)生優(yōu)育病毒十項的檢測①準備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時準備弓形體、風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹I型和單純皰疹II型病毒抗原，然后進行點樣包被，用抗人IgG/IgM標記膠體金，即形成可檢測優(yōu)生優(yōu)育病毒十項的蛋白芯片。
②將上述蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤濕；③加入200μl待測血清進行抗原抗體反應，再逐滴加入洗滌液8滴；④逐滴加入膠體金標記的抗人IgG/IgM8滴，再逐滴加入洗滌液6滴；⑤用蛋白芯片閱讀儀對蛋白芯片進行分析、檢測。
實施例2、使用蛋白芯片進行心肌梗塞標志物的檢測①準備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時準備8種不同特異性的單克隆抗體，然后點樣包被，再用這些配對單克隆抗體分別標記膠體金，即形成可檢測心肌梗塞標志物蛋白芯片。
②將這些蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤濕；③加入200μl待測血清進行抗原抗體反應，再逐滴加入洗滌液8滴，④逐滴加入單克隆抗體分別標記的膠體金8滴，再逐滴加入洗滌液6滴，⑤蛋白芯片閱讀儀對蛋白芯片進行分析、檢測。
實施例3、使用蛋白芯片進行生殖道感染標志物的檢測①準備孔徑為0.45μm的硝酸纖維素膜，同時準備4種不同特異性的羊抗或兔抗多克隆抗體，然后點樣包被，再用這些抗體分別標記膠體金，即形成可檢測心肌梗塞標志物蛋白芯片。
②將這些蛋白芯片去掉包裝，逐滴加洗滌液6滴潤濕；③加入經(jīng)處理過的標本進行抗原抗體反應，再逐滴加入洗滌液8滴，④逐滴加入抗體分別標記的膠體金8滴，再逐滴加入洗滌液6滴，⑤用蛋白芯片閱讀儀檢測，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式，這樣大大提高芯片閱讀速度、提高了蛋白芯片的準確性。
權利要求
1.一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，其特征在于依次包括下述步驟，①用生物活性物質包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤濕；③加入待測樣品將使蛋白芯片中的活性物質進行特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；④用免疫金試劑對蛋白芯片進行二次結合反應，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對蛋白芯片進行分析、檢測通過檢測蛋白芯片的發(fā)光強度與對照值，得出相應的待測抗原或抗體的含量。
2.如權利要求1所述的一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，其特征在于所述步驟①用抗原包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的抗體，如抗人IgG/IgM抗體進行反應。
3.如權利要求1所述的一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，其特征在于所述步驟①用抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的抗體。
4.如權利要求1所述的一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，其特征在于所述步驟①用細胞因子單克隆抗體抗體包被制成蛋白芯片，在第②步中逐滴加入洗滌液，使蛋白芯片表面潤濕，將蛋白芯片與待測樣品混合進行抗原和抗體的特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；在第④步中二次結合反應是指加入經(jīng)膠體金標記過的相應的配對單克隆抗體。
5.如權利要求2或3或4所述的一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，其特征在于所述第⑤步用蛋白芯片閱讀儀檢測，蛋白芯片的各種參數(shù)通過磁卡輸入方式輸入。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物醫(yī)學研究及臨床應用領域，具體涉及一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法。本發(fā)明的目的是要克服現(xiàn)有技術存在的操作麻煩、檢測周期長、成本高和檢測結果不準確的問題。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案是一種對生物活性物質進行蛋白芯片檢測的方法，依次包括下述步驟①用生物活性物質包被制成蛋白芯片；②用洗滌液將蛋白芯片潤濕；③加入待測樣品將使蛋白芯片中的活性物質進行特異性結合，再將蛋白芯片用洗滌液進行洗滌；④用免疫金試劑對蛋白芯片進行二次結合反應，再用洗滌液洗滌；⑤用蛋白芯片閱讀儀對蛋白芯片進行分析、檢測通過檢測蛋白芯片的發(fā)光強度與對照值，得出相應的待測抗原或抗體的含量。
文檔編號G01N21/64GK1996018SQ20051002278
公開日2007年7月11日 申請日期2005年12月31日 優(yōu)先權日2005年12月31日
發(fā)明者馬秦榮, 陶東, 任躍軍, 李治國 申請人:西安聯(lián)爾科技有限公司