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番茄紅素脂質(zhì)體及其制備方法

文檔序號:1094698閱讀:655來源:國知局
專利名稱:番茄紅素脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種藥物的劑型,即番茄紅素脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)
番茄紅素是一種強(qiáng)抗氧化劑,具有猝滅單線態(tài)氧和清除自由基的生理功能,可以預(yù)防多種疾病的發(fā)生,具備很好的應(yīng)用開發(fā)前景。然而由于它是一種脂溶性的類胡羅卜素,在水中不溶解,在光、熱氧的作用下很容易被氧化降解,這就大大限制其在食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域中的應(yīng)用,尤其是作為口服保健品,不利于人體的吸收和利用。脂質(zhì)體是一種由脂質(zhì)雙分子層組成,內(nèi)部為水相的閉合囊泡,大小從幾十納米到幾十微米,在脂質(zhì)體的水相和膜內(nèi)可以包裹多種物質(zhì)。有天然膜成分組成的脂質(zhì)體,其脂質(zhì)體膜的雙層結(jié)構(gòu)原則上與天然細(xì)胞膜一樣,分散在水中時(shí)形成多層囊泡,而且每一層均為脂質(zhì)雙分子層,各層之間被水相隔開,適合于生物體內(nèi)降解。脂質(zhì)體無毒性和無免疫性,作為藥物載體,具有靶向性,臨床使用,可減少藥物劑量,提高吸收效率,降低毒性等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對番茄紅素在實(shí)際應(yīng)用中的局限性和脂質(zhì)體作為藥物載體的優(yōu)點(diǎn),提供的一種番茄紅素的新劑型及其制備方法。
本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體是將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機(jī)溶液,溶液的溶劑為乙醚或二氯甲烷、或三氯甲烷;以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成。其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100,番茄紅素脂質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成,內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡,有效粒徑為0.7±0.05um,最大包封率為52.6%。其制備方法包括以下步驟a、將重量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機(jī)溶劑乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷;b、再溶入番茄紅素得到類脂質(zhì)體,其中番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂的質(zhì)量比為1-5∶10-25∶100,在25-35℃恒溫水浴條件下,以80-140r/min旋轉(zhuǎn),減壓(0.02-0.06Mpa)揮發(fā)有機(jī)溶劑,在瓶壁上形成類脂薄膜;c、充N25-10分鐘,使溶劑完全除去,加入25-30℃水合介質(zhì)含0.05%吐溫80或0.5-1%的五聚甘油酸酯PBS溶液(PH值7.3-7.4),同時(shí)加入直徑為3-4mm的玻璃小珠,旋轉(zhuǎn)洗膜,將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液;d、將脂質(zhì)體混懸液先水浴超聲10-20分鐘,再用探針式超聲分散10-15分鐘,在冷水條件下得番茄紅素脂質(zhì)體,入棕色瓶,充N2密閉、4℃保存。
將上述脂質(zhì)體混懸液,分別用普通生物顯微鏡、透射電鏡進(jìn)行觀察;普通生物顯微鏡觀察,脂質(zhì)體輪廓清晰,呈圓球狀囊形顆粒(見附圖1和附圖2);透射電鏡采用磷鎢負(fù)染法進(jìn)行,脂質(zhì)體呈典型單室,其雙分子膜規(guī)整、均一、連續(xù),呈橢圓形球體(見附圖3)。
取上述脂質(zhì)體,經(jīng)相應(yīng)的水合介質(zhì)稀釋后,用JI-1155型激光散射粒度測定儀測定脂質(zhì)體的粒徑及分布,有效粒徑為0.7±0.05um(見附圖4)。
取0.5ml番茄紅素質(zhì)體于10ml的離心管中,再加入4.5ml相應(yīng)的水合介質(zhì),混勻后離心。離心條件為25℃,3500g,20分鐘,然后再用4000g,10分鐘,棄上清,下部沉淀為脂質(zhì)體沉積,再加入5ml乙酸乙酯溶劑,萃取脂質(zhì)體中的番茄紅素,然后進(jìn)行液相色譜測定,得出脂質(zhì)體中番茄紅素的含量,進(jìn)而計(jì)算出番茄紅素脂質(zhì)體的最大包封率為52.6%。
用差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry,DSC)即DSC曲線(也稱為DSC熱分析相圖)考察本發(fā)明脂質(zhì)體制備方法過程中結(jié)構(gòu)的變化、藥物與脂質(zhì)體的相互作用、表面活性劑對脂質(zhì)體柔性的影響。
單一組分磷脂形成的脂質(zhì)體DSC曲線上可發(fā)現(xiàn)2個(gè)特征不同的吸熱峰。前一吸熱峰峰形平緩且峰面積較小,來源于磷脂分子中極性端的熱運(yùn)動,磷脂Lβ雙層結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)殡pPβ稱為預(yù)相變。磷脂極性區(qū)結(jié)合其他分子特別極性物質(zhì)會顯著影響預(yù)相變。后出現(xiàn)的吸熱峰稱為主相變,峰面積較大,來源于磷脂分子中碳?xì)滏湹娜廴?,結(jié)構(gòu)中含有不飽和鍵會降低主Tm,增加碳鏈長度會提高主Tm,同樣,結(jié)合脂溶性物質(zhì)主要影響主Tm。多組分磷脂形成的脂質(zhì)體與單組分脂質(zhì)體的熱轉(zhuǎn)變特征不相同。從熱分析相圖上可以反映出不同組分在脂質(zhì)雙層中的均一狀態(tài)。如果兩種組分的結(jié)構(gòu)相關(guān)較大,則影響體系的均一性,將會擴(kuò)大相變半峰寬(ΔT1/2),而且使峰形不對稱。如果主Tm消失,說明脂質(zhì)體形成一種介于膠晶態(tài)與液晶態(tài)之間的一種狀態(tài)。當(dāng)脂質(zhì)體膜由兩種以上成分組成時(shí),它們各自有特定的Tm,在一定的Tm環(huán)境下它們可以同時(shí)存在著不同的相(即液晶相及膠晶相)稱之為相分離,脂質(zhì)體中添加不同物質(zhì),可誘導(dǎo)脂膜表面產(chǎn)生區(qū)塊結(jié)構(gòu),如藥物、表面活性劑等有可能影響脂質(zhì)體膜的Tm變化。
以上結(jié)果顯示,本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體呈均一大單室型,有效粒徑0.7±0.05um,最大包封率52.6%。這就大大增加了番茄紅素的水溶性和穩(wěn)定性,提高了藥物的生物利用率。


1、圖1和圖2分別是番茄紅素脂質(zhì)體在生物光學(xué)顯微鏡下放大200倍和400倍的照片,可見脂質(zhì)體輪廓清晰,呈圓球狀囊形顆粒,且在懸液中分布比較均勻。
2、圖3是番茄紅素脂質(zhì)體在透射電鏡下放大20000倍的照片,可見脂質(zhì)體雙分子膜規(guī)整、均一、連續(xù),呈橢圓形微球體。
3、圖4是用激光散射粒度測定儀測試番茄紅素脂質(zhì)體的粒徑分布結(jié)果,由圖中可看出脂質(zhì)體的平均粒徑為1.22um,如果在脂質(zhì)體的制備過程中延長超聲時(shí)間會進(jìn)一步減小脂質(zhì)體的粒徑,以符合應(yīng)用需要。
4、圖5至圖7是番茄紅素脂質(zhì)體各組成物質(zhì)經(jīng)過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。從圖中可看出卵磷脂的預(yù)相變溫度是45.20℃;膽固醇,卵磷脂,番茄紅素的主相變溫度分別為148.65℃、210℃和174.31℃。
5、圖8和圖9分別是空白脂質(zhì)體和番茄紅素脂質(zhì)體經(jīng)過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。如圖所示,在空白脂質(zhì)體(只含有膽固醇、卵磷脂)的DSC曲線上,其主相變溫度為98.96℃,而膽固醇、卵磷脂相變峰消失。提示,膽固醇和卵磷脂的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,二者的結(jié)合致使相變峰有了變化。而在番茄紅素脂質(zhì)體的DSC曲線上,其相變峰只有一個(gè),主相變溫度為99.62℃,說明脂質(zhì)體中由于番茄紅素的加入,磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的變化才導(dǎo)致其相變峰和主相變峰溫度發(fā)生變化。以上證據(jù)充分說明番茄紅素作為脂溶性物質(zhì),與脂質(zhì)體中的磷脂雙分子層發(fā)生了結(jié)合。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1,制備番茄紅素脂質(zhì)體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質(zhì)量比為0.1-0.25∶1)加入一定量的有機(jī)溶劑(乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷,其中番茄紅素在二氯甲烷中溶解度最大)中,優(yōu)選二氯甲烷。待完全溶解后將0.01-0.05g番茄紅素溶入其中,得類脂溶液;半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中,然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在轉(zhuǎn)速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下?lián)]發(fā)有機(jī)溶劑,使卵磷脂等成膜材料在燒瓶上形成均勻類脂薄膜,再向燒瓶中充N25-10min,使溶劑完全除去;向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質(zhì)含0.05%吐溫80或0.5-1%五聚二硬脂酸的PBS(PH=7.3-7.4)溶液,同時(shí)加入直徑3-4mm的玻璃小珠,并在同溫度條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)動洗膜,待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液;再將該脂質(zhì)體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃,工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質(zhì)體大小,然后再用探針式超聲波粉碎機(jī)(240HZ,即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min,減小脂質(zhì)體的粒徑,同時(shí)在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右,即得番茄紅素脂質(zhì)體,置棕色瓶中,充N2,密閉,4℃貯存。
實(shí)施例2,制備番茄紅素脂質(zhì)體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質(zhì)量比為0.1-0.25∶1)加入二氯甲烷。待完全溶解后將0.03g番茄紅素溶入其中,得類脂溶液;半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中,同時(shí)加入直徑為3-4mm的玻璃小珠,然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在轉(zhuǎn)速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下?lián)]發(fā)有機(jī)溶劑,使卵磷脂等成膜材料在燒瓶壁及玻璃小珠上形成均勻類脂薄膜,再向燒瓶中充N25-10min,使溶劑完全除去;向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質(zhì)含0.05%吐溫80或0.5-1%五聚二硬脂酸的PBS(PH=7.3-7.4)溶液,同時(shí)加入直徑3-4mm的玻璃小珠,并在同溫度條件下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀轉(zhuǎn)動洗膜,待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液;再將該脂質(zhì)體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃,工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質(zhì)體大小,然后再用探針式超聲波粉碎機(jī)(240HZ,即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min,減小脂質(zhì)體的粒徑,同時(shí)在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右,即得番茄紅素脂質(zhì)體,置棕色瓶中,充N2,密閉,4℃貯存。
權(quán)利要求
1.番茄紅素脂質(zhì)體,其特征在于將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機(jī)溶液,溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷,以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成,其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100,所說的番茄紅素脂質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成,內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡,有效粒徑為0.7±0.05um,最大包封率為52.6%。
2.-種番茄紅素脂質(zhì)體的制備方法,包括以下步驟a、將質(zhì)量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機(jī)溶劑,溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷;b、再溶入番茄紅素得到類脂質(zhì)體,其中番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的重量比為1-5∶10-25∶100,在25-35℃恒溫水浴條件下,以80-140r/min旋轉(zhuǎn),減壓(0.02-0.06Mpa)揮發(fā)有機(jī)溶劑,在瓶壁上形成類脂薄膜;c、充N2 5-10分鐘,使溶劑完全除去,加入25-30℃水合介質(zhì)含0.05%吐溫80或0.5-1%的五聚二硬脂酸PBS(PH=7.3-7.4)溶液旋轉(zhuǎn)洗膜,將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質(zhì)體混懸液;d、將脂質(zhì)體混懸液用水浴式超聲分散25-30℃,10-20分鐘,再用探針式超聲分散10-15分鐘,在冷水條件下得番茄紅素脂質(zhì)體,入棕色瓶,充N2密閉、4℃保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的番茄紅素脂質(zhì)體,其特征在于所說的有機(jī)溶劑為二氯甲烷,其番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的質(zhì)量比為3∶15∶100。
全文摘要
本發(fā)明是番茄紅素的新劑型,即將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機(jī)溶液,溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷,以旋轉(zhuǎn)薄膜—超聲法制備而成,其原料質(zhì)量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100,本發(fā)明番茄紅素質(zhì)體由脂質(zhì)雙分子層組成,內(nèi)部為水相的閉合大單室囊泡,有效粒徑為0.7±0.05um,最大包封率為52.6%。本發(fā)明番茄紅素脂質(zhì)體無毒性和無免疫原性,具有靶向性,臨床使用可減少藥物劑量,提高吸收效率,降低毒性,大大增加了番茄紅素的溶解度和穩(wěn)定性,提高了生物劑利用率。
文檔編號A61P39/00GK1739524SQ200510012810
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月13日
發(fā)明者常彥忠, 田艷燕, 段相林 申請人:河北師范大學(xué)
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